"מטופל כמו" Orthotopic syngeneic עכבר הדגם של Hepatocellular Carcinoma גרורה

ההתפשטות הגרורה של הסרטן היא הסיבה העיקרית למוות הקשורים לסרטן. אנו מספקים תיאור מעמיק של מתודולוגיה ניתוח ההישרדות שלנו להקמת מערכת "חולה-כמו" orthotopic מודל עכבר syngeneic לחקר המנגנונים של גרורות בגידולים מוצקים איבר.

המטרה הכוללת של הליך זה היא להקים מערכת מודל עכבר אורתוטופית כמו Orthotopic Syngeneic לחקר מנגנוני הגרורות בקרצינומה של הכבד. זה מושג על ידי הכנה ראשונה של תאי קרצינומה של הכבד של עכבר להשתלה. בשלב השני, הבטן של בעל חיים סינגני נמען נפתחת והתאים מוזרקים בזהירות לאונה הימנית של הכבד.

בסופו של דבר, ההצלחה והשחזור של מתודולוגיה זו ממליצה עליה לשימוש נרחב בהבהרת המנגנונים הביולוגיים של גרורות קרצינומה של הכבד. היתרון העיקרי של טכניקה זו על פני טכניקות קיימות כמו מודלים של גידול קסנוגרפט בעכברים, הוא שמערכת מודל הגידול הגנטי שלנו מאפשרת לחקור את תפקיד התגובה החיסונית בגרורות הגידול. תדגים את ההליך הזה איתי מישל נאדו, סטודנטית לתואר ראשון מהמעבדה שלנו כדי להכין את התאים להשתלה התחל בשטיפת תרבית משולבת של 60 עד 70% של תאי קרצינומה הפטו-תאית פעמיים עם חמישה מיליליטר של PBS.

דגרו על תרבית התאים עם שני מיליליטר טריפסין בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס. לאחר חמש דקות, ספרו את התאים ודללו אותם בחמש פעמים 10 עד חמישית תאים למיליליטר של PBS. לאחר מכן, העבירו 100 מיקרוליטר של התאים לצינור מיקרו צנטריפוגה סטרילי אחד של 1.5 מיליליטר לכל עכבר, והניחו את התאים על קרח.

לפני תחילת ההליך הכירורגי, אשר את רמת ההרדמה הנכונה בבוהן. קמצוץ, מרחו משחה על עיניו של עכבר בוגר בריא במשקל 16 עד 20 גרם והתגלחו באזור של כסנטימטר אחד סביב קו האמצע של בטן החיה. לאחר מכן יש ללבוש זוג כפפות לטקס ולשטוף את העור החשוף מספר פעמים עם קרצוף חומר חיטוי עם סבון, ולאחר מכן שטיפה סטרילית של PBS למשך כחמש דקות.

לאחר הכנת העור, השליכו את הכפפות ולבשו את ציוד המגן האישי המתאים. ספק מקור חום חיצוני למניעת היפותרמיה הרדמה במהלך ההליך, ולאחר מכן הנח סרט כירורגי על החיה, הגפיים והזנב כדי לקבע את העכבר במצב שכיבה. לאחר מכן, בצע חתך ישר נחות מיד מעצם החזה של קסיפוס, והשתמש במחזיר כירורגי סטרילי לשמירה עצמית כדי לפתוח את הבטן.

כאשר הכבד נראה, שאפו כמות אחת של תאים למזרק של מיליליטר אחד המצויד במחט בגודל 20, והזריקו לאט ובזהירות את כל 100 המיקרוליטרים של תאי קרצינומה הכבד לאונה הימנית של הכבד. לאחר הסרת המחט, יש למרוח צמר גפן סטרילי למשך דקה אחת לפחות כדי לעצור כל דימום. לאחר מכן השתמש בתפר נספג כדי לסגור את הרקמה התת עורית, ולאחר מכן לסגור את העור.

בעזרת קליפסים כירורגיים יש לנקות את הפצע עם קרצוף חיטוי אחר ובאופן תת עורי לתת 100 מיקרוליטר של מי מלח רגילים. לאחר מכן, מיד לאחר הניתוח, העבירו את העכבר לכלוב נקי ללא מלווים ועם מצעי נייר למשך 24 שעות לפחות. כבדי עכבר BSY אלה הושתלו עם חמש פעמים 10 עד שש ME אחד. תאי קרצינומה הפטו-תאית של עכבר כפי שהודגם זה עתה.

עדויות קליניות קליניות להתפתחות קרצינומה של הכבד נצפו 63 ימים לאחר מכן כפי שצוין על ידי החץ בעכבר אחד. גידול שטחי נצפה על פני הכבד עם חיבור מסוים לדופן הבטן. הריאות של עכבר זה הראו מורפולוגיה לא תקינה כמו גם אזורים של נמק מדמם גלוי.

בעכבר שני, הכבד נראה חריג בעליל עם החריגה הדומה מאוד לגידול שטחי כצפוי. עכברים שלא הושתלו לא פיתחו גידולים לא בכבד ולא בריאות. לאחר שליטה, מודל עכבר גנטי אורתוטופי זה יכול לספק פלטפורמה טובה להבהרת המנגנונים הביולוגיים של גרורות וקרצינומה של הכבד.