Name: מטופל כמו Orthotopic syngeneic עכבר הדגם של Hepatocellular Carcinoma גרורה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-10-24T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 6 s
Description: למדו להקים מודל אורתוטופי סינגני בעכברים לחקר גרורות של קרצינומה הפטוצלולרית. שיטה זו מאפשרת חקירת תפקיד מערכת החיסון בהתקדמות הגידול והמלצה לשימוש נרחב במחקר סרטן.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

ברצוננו להודות לפסקל דובואה על הגהה של המאמר. המחברים רוצים להודות גם לצוות מתקן החיות במכללת האנטר של אוניברסיטת העיר ניו יורק. עבודה זו נתמכה על ידי מענק NIH RCMI להאנטר קולג'.

הצהרת אתיקה כל המחקרים בבעלי החיים אושרו על ידי הוועדה המוסדית הטיפול בבעלי חיים והשימוש (IACUC) של האנטר קולג &#39;של האוניברסיטה של ​​העיר ניו יורק. הערה: שמונה עכברי BALB / ג שמשו בהליך ניסיוני זו. חמישה עכברים / ג BALB הושתלו עם 5 X 10 6 תאי קרצינומה hepatocellular BNL 1ME A.7R.1 עכבר כדי לייצר גידולים הראשוניים. שלושה עכברי BALB / ג ללא השתלות שמשו כקבוצת ביקורת. BNL 1ME A.7R.1 היא שורת תאי קרצינומה עכברית hepatocellular שנגזרה על ידי שינוי כימי משורת תאי hepatocyte שאינו סרטנית בעכברי BNL CL.2. BNL 1ME A.7R.1 התקבל מהסוג האמריקאי תרבות האוסף (ATCC). 1. טרום ניתוח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא עכברים שלכל ניתוחי ההישרדות בריאים. כדי להבטיח שעכברים בריאים, לבדוק סימנים של התייבשות על ידי האהלה של העור. אין להשתמש בעכברים עם כל ראיה של מחלה או דאיסטרס בניסויים אלה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשקול עכברים כדי לוודא שהם לא בתת משקל. ודא שהמשקל הוא לפחות 16-20 גרם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן 5 × תאי HCC עכבר 10 6 BNL 1ME A.7R.1 להשתלה לעכבר: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תקשורת לשאוב מ- 10 מיליליטר 60% - 70% צלחת תרבית תאים ומחוברות של תאי HCC עכבר A.7R.1 BNL 1ME. לשטוף פעמיים עם 5 מיליליטר PBS. הוסף 2 מיליליטר של טריפסין לצלחת ולדגור על 37 מעלות צלזיוס חממת humidified עם האוויר ו 5% CO 2 למשך 5 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בהמשך לכך, פיפטה 10 μl trypsinized תאים לתוך hemocytometer ידני לספירת תאים תחת מיקרוסקופ בהגדלה של 10X. לספור את המספר הכולל של תאים הנמצאים בארבעה הריבועים הפינתיים הגדולים ולהכפיל את הגורם לדילול במספר הכולל של תאים. לאחר מכן, לחלק במספר הריבועים נספרו ולהכפיל ב -10 6 לריכוז התאים (תאים למ&quot;ל). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש בחישוב, לאסוף 5 מיליון תאים לכל עכבר בסטרילי1.5 מיליליטר צינורות microcentrifuge. תווית 1.5 מיליליטר צינורות microcentrifuge. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Resuspend 5 × 10 6 תאי BNL 1ME A.7R.1 עכבר HCC בשל נאגר מלוח פוספט 100 μl (PBS). לשמור על תאים אלה על קרח עד השתלה בניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבצע פעולות הנדרשות להכנת עכברים לניתוח כגון אינדוקציה הרדמה ושיער גזיר מציוד וחומרי סטרילי כדי למנוע זיהום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגרום להרדמה כללית בעכברים על ידי שאיפה של isoflurane באמצעות מכשיר אדים isoflurane יחד עם חמצן בקצב זרימה מתמיד של ריכוז 1 ליטר לדקה (כ. 2.1%). הערה: מערכת היא עצמאית, וכוללת מאדה דיוק, אספקת חמצן ופחם מיכל שצמוד למעגל נשימה הדרוש להדחת גז / הרדמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא שהרדמה היא נאותה כדי למנוע את החיה מעובר כאב במהלך הניתוח. בצע הבוהן קמצוץ ולצפות בבעלי חיים לאי-responתאוות כדי לאשר הרדמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באותו זמן, לעבור את קו השסתום, חותם לתיבה ופתוח לחרטום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע שהעכבר הוא מורדם, למרוח כמות קטנה של משחת עיניים לקרניות כאמצעי מניעה מייבוש והנזק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בהמשך לכך, להעביר את בעלי החיים לאזור ההכנה, עם החרטום ממוקם כראוי ומחובר (להרדמת תחזוקה). הכן את האתר של החתך הניתוחי לניתוח על ידי הסרת שיער באזור הכנה זו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא שהאזור של ניתוח הוא במיקום ללא כל הפעילות אחרת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא שמשטח העבודה יציב ומחוטא כראוי, לא הוכתם ולפני הניתוח ללא עומס. מניחים פיסת פשתן או מגש כירורגית על זה סטרילי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא שהשדה האופרטיבי הוא זמין רק אנשי ביצוע הניתוח. ודא שחדר הניתוח הוא ניקה ושטף עם חומר ניקוי מתאים וריסס עם disinfe מתאיםctant. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לוודא שהוא גם ממוקם במרחק של דלתות וחלונות כזרמי אוויר יכול להתפשט אבק מוביל לזיהום של האתר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבצע את ניתוח ההישרדות עם מכשירים סטריליים. כך או לספוג מכשירים בחומר חיטוי בהתאם להמלצתו של היצרן או החיטוי. השתמש בחומרים מתכלים בסיסיים סטרילי כי הם מוכנים לשימוש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מכשירים נפרדים לפי פונקציה כדי למנוע זיהום של אזורים סטריליים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגלח כ 1 אינץ &#39;סביב האתר של חתך (חתך קו האמצע) כדי לגשת לכבד של בעלי החיים. להסיר את השיער מבעלי החיים מהמקום של ניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר גילוח, לשפשף את האזור עם סבון חיטוי (לשפשף בטאדין כירורגית) ולשטוף את חומר החיטוי העודף משם עם פתרון PBS סטרילי. בצע את זה כמה פעמים, בתהליך שנמשך כ לשפשף כל 5 דקות. הסר והושלך כפפות משומשות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר מכן, לשנות לביגוד מגן כגון surgicשמלת אל, ראש לשפשף, ופניו מסכה. בשלב הבא, לטהר את הידיים עם פתרון לשפשף נכון לפני שתרכיב את כפפות מנתחים. הערה: זה הוא צעד הכרחי כדי למנוע שפיכה ומזהם את האתר כירורגית עם מזהמים פוטנציאליים. </li></ol> 2. ניתוח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לספק מקור חום חיצוני לחום לאורך כל התקופה של הרדמה. בעלי החיים עלולים להיתקל כמה היפותרמיה בגלל הרדמה גורמת להפרעות בויסות החום; לכן, לשמור על טמפרטורת הגוף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את העכבר על גבה לאורך כל הניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תקן את הגפיים קדמי, גפיים אחוריות והזנב של העכבר על שולחן הניתוחים עם חתיכות של קלטות כירורגית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעשות חתך קו ישר באופן מיידי נחותים xyphisternum. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש במפשק כירורגי שמירה עצמית סטרילי לחשוף את הכבד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עם מזרק שמחט 20G, לאט ובזהירות להזריק של PBS 100 μl המכיל 5 × 10 6 BNL 1ME A.7R.1תאי העכבר HCC לאונה הימנית של הכבד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר הסרת המחט, תחול מקלון צמר גפן סטרילי דקות לפחות 1 לעצור כל דימום פוטנציאלי עקב גבוה כלי דם של הכבד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגור את הרקמה התת עורית עם תפר נספג ואחרי סגירת עור באמצעות קליפים כירורגית. בהמשך לכך, לנקות את הפצע שוב עם לשפשף בבטאדין. הערה: הפעולה זו תבטיח את סגירת פצע הניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תת עורי לתת למלח רגיל 100 μl. </li></ol> 3. לאחר ניתוח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מייד לאחר ניתוח, להעביר את העכבר לכלוב נקי עם כרטיס זיהוי שלאחר ניתוח להודיע ​​מטפלים של מצב העכבר. לספק מזון ומים. הערה: מניסיוננו, עכבר שזה עתה עבר ניתוח יעלה בגורלם הטוב ביותר אם שוכנו לבד עם אוכל ומים רטובים לתקופה שלאחר הניתוח 24 שעות הראשונית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמור חמים לבעלי החיים עם מנורת חום שיוצר חום לא מצוין 38 מעלות צלזיוס. Use מדחום למדידת הטמפרטורה עד העכבר התאושש לחלוטין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בית החיה בכלוב רצוי עם מצעי נייר כדי להבטיח נוחות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר התאוששות ראשונית, לפקח על בעלי החיים לסימנים של אי נוחות, דימום, כאב ומצוקה. תן עצירות (0.05 -0.1 מ&quot;ג / קילוגרם) כדי להקל על כאב. באופן הדוק לפקח על הפעילות, ההתנהגות ומראה, כמו גם מים וצריכת מזון לכ 2 שעות. אם אמבולטורי, להעביר את בעלי החיים בחזרה לאזור לדיור רגיל רגיל של עכברים וימשיך לעקוב במרווחים של 6-12 שעות שללאחר ניתוח 24 שעות. לבצע בדיקת משקל אם תרצה בכך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עם זאת, אם בעל החיים הוא שיש בעיות מחלים, לנקוט בפעולות טיפול תומך מתאימות. אם עכברים אינם מסוגלים לשחזר, הומני להרדים עכברים באמצעות CO 2 מחנק ונקע בצוואר הרחם. פעל לפי הנחיות מוסדיות מאושרות להמתת חסד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר ניתוח, לבדוק ראיות קליניות של HCC שהיא בדרך כלל observabהפחתה משמעותית כle בציון מצב גוף. הערה: בשלב זה, גידול ראשוני סביר שפותח בכבד ובפיקדונות גרורתי שסביר להניח שפותחו בריאות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשלב זה, להקריב את כל העכברים (ניסיון ושליטה) מעורבים בניסוי על ידי המתת חסד הומנית. להכפיף את העכברים למחנק פחמן דו חמצני: לשחרר באיטיות פחמן דו חמצני לתוך התא על פני תקופה של 5 -10 דקות. זה יגרום דום נשימה. </li></ol>

<ol><li>Sheng, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Capture%2C+release+and+culture+of+circulating+tumor+cells+from+pancreatic+cancer+patients+using+an+enhanced+mixing+chip%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+on+a+Chip%22%5BJournal%5D)">Capture, release and culture of circulating tumor cells from pancreatic cancer patients using an enhanced mixing chip.</a> Lab on a Chip. 14, 89-98 (2014).</li>
<li>Ogunwobi, O. O., Liu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+and+prognostic+importance+of+epithelial-mesenchymal+transition+in+liver+cancers%3A+insights+from+experimental+models%5BTitle%5D)+AND+%22Critical+Reviews+in+Oncology%2FHematology%22%5BJournal%5D)">Therapeutic and prognostic importance of epithelial-mesenchymal transition in liver cancers: insights from experimental models.</a> Critical Reviews in Oncology/Hematology. 83, 319-328 (2012).</li>
<li>Ogunwobi, O. O., Puszyk, W., Dong, H. J., Liu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epigenetic+upregulation+of+HGF+and+c-Met+drives+metastasis+in+hepatocellular+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Epigenetic upregulation of HGF and c-Met drives metastasis in hepatocellular carcinoma.</a> PloS One. 8, e63765(2013).</li>
<li>Ogunwobi, O. O., Liu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatocyte+growth+factor+upregulation+promotes+carcinogenesis+and+epithelial-mesenchymal+transition+in+hepatocellular+carcinoma+via+Akt+and+COX-2+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+and+Experimental+Metastasis%22%5BJournal%5D)">Hepatocyte growth factor upregulation promotes carcinogenesis and epithelial-mesenchymal transition in hepatocellular carcinoma via Akt and COX-2 pathways.</a> Clinical and Experimental Metastasis. 28, 721-731 (2011).</li>
<li>Fujiwara, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+animal+model+for+in+vivo+study+of+liver+cancer+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Gastroenterology+%3A+WJG%22%5BJournal%5D)">A novel animal model for in vivo study of liver cancer metastasis.</a> World Journal of Gastroenterology : WJG. 18, 3875-3882 (2012).</li>
<li>Wirtz, D., Konstantopoulos, K., Searson, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+physics+of+cancer%3A+the+role+of+physical+interactions+and+mechanical+forces+in+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Cancer%22%5BJournal%5D)">The physics of cancer: the role of physical interactions and mechanical forces in metastasis.</a> Nature Reviews Cancer. 11, 512-522 (2011).</li>
<li>Heindryckx, F., Colle, I., Van Vlierberghe, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+mouse+models+for+hepatocellular+carcinoma+research%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Experimental+Pathology%22%5BJournal%5D)">Experimental mouse models for hepatocellular carcinoma research.</a> International Journal of Experimental Pathology. 90, 367-386 (2009).</li>
<li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+in+vivo+mouse+model+of+metastatic+human+thyroid+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Thyroid+Official+Journal+of+the+American+Thyroid+Association%22%5BJournal%5D)">An in vivo mouse model of metastatic human thyroid cancer.</a> Thyroid Official Journal of the American Thyroid Association. 24, 695-704 (2014).</li>
<li>Menezes, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetically+engineered+mice+as+experimental+tools+to+dissect+the+critical+events+in+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Genetically engineered mice as experimental tools to dissect the critical events in breast cancer.</a> Advances in Cancer Research. 121, 331-382 (2014).</li>
<li>Ogunwobi, O. O., Wang, T., Zhang, L., Liu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cyclooxygenase-2+and+Akt+mediate+multiple+growth-factor-induced+epithelial-mesenchymal+transition+in+human+hepatocellular+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Gastroenterology+and+Hepatology%22%5BJournal%5D)">Cyclooxygenase-2 and Akt mediate multiple growth-factor-induced epithelial-mesenchymal transition in human hepatocellular carcinoma.</a> Journal of Gastroenterology and Hepatology. 27, 566-578 (2012).</li>
<li>Hanahan, D., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+hallmarks+of+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">The hallmarks of cancer.</a> Cell. 100, 57-70 (2000).</li>
<li>Chambers, A. F., Groom, A. C., MacDonald, I. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissemination+and+growth+of+cancer+cells+in+metastatic+sites%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Cancer%22%5BJournal%5D)">Dissemination and growth of cancer cells in metastatic sites.</a> Nature Reviews Cancer. 2, 563-572 (2002).</li>
<li>Kim, M. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+self-seeding+by+circulating+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Tumor self-seeding by circulating cancer cells.</a> Cell. 139, 1315-1326 (2009).</li>
<li>Stolpe, A., Pantel, K., Sleijfer, S., Terstappen, L. W., den Toonder, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circulating+tumor+cell+isolation+and+diagnostics%3A+toward+routine+clinical+use%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Circulating tumor cell isolation and diagnostics: toward routine clinical use.</a> Cancer Research. 71, 5955-5960 (2011).</li>
<li>Saad, F., Pantel, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+current+role+of+circulating+tumor+cells+in+the+diagnosis+and+management+of+bone+metastases+in+advanced+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Future+Oncology%22%5BJournal%5D)">The current role of circulating tumor cells in the diagnosis and management of bone metastases in advanced prostate cancer.</a> Future Oncology. 8, 321-331 (2012).</li>
</ol>

המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים פיננסיים מתחרים.

במאמר זה תיאור מעמיק של השיטה הוא נתון שלאחרונה דווח על ידי Ogunwobi ועמיתים של ההקמה המוצלחת של מודל עכבר syngeneic orthotopic של גרורות HCC (איור 2) 3. שיעור המיצוי של גידולים להליך זה הוא בדרך כלל גבוה. יש לנו שנצפה קודם לכן שיעור מיצוי גידול של 100% 3. עם זאת, השיעור המיצוי יכול להיות משתנה בהתאם לסמכותו של החוקר. בניסוי האחרון שבוצע על ידי סטודנט לתואר שני חדש תחת הדרכה, שיעור מיצוי הגידול היה נמוך כמו 40%. למרות שרוב הניסויים הסתיימו ב ...

קרצינומה של הכבד (HCC) היא אחד מסוגי הסרטן הקטלניים ביותר, עם פרוגנוזה גרועה ותוחלת חיים נמוכה. כמעט כל מקרי המוות הקשורים לסרטן נובעים מהתפשטות גרורתית של המחלה מהאיבר המקורי לאיברים מרוחקים נוספים2-6. התקדמות HCC היא תהליך מורכב. לכן, היכולת למדל את המיקרו-סביבה של הגידול הנמצאת באופן טבעי ב-HCC גרורתי במודלים של בעלי חיים יכולה להתגלות כדרך מוצלחת ושימושית לחשוף מנגנונים רלוונטיים בבני אדם. 7למרבה הצער, המנגנונים של גרורות סרטניות עדיין לא ברורים ברובם. לכן, יש צורך בהקמת מודלים בבעלי חיים שיאפשרו לנו להבהיר את המנגנונים המולקולריים הבסיסיים של גרורות של סרטן כגון HCC3,5.
מערכות מודל עכברים הן גישה שימושית מאוד לתיחום מנגנונים והערכת אסטרטגיות חדשות לטיפול בסרטן אנושי גרורתי5,8. מערכות המודלים השונות של העכברים הקיימות כיום הן עדות למאמצי החוקרים לתאר נכון את מורכבות המחלה5,8,9.
Ogunwobi ועמיתיו השתמשו לאחרונה בגישה כירורגית הישרדות כדי להדגים הקמת מודל עכבר סינגני אורתוטופי חדש לחקר גרורות ב-HCC3. עבודתם ביססה מודל עכבר "דמוי מטופל" המסכם תכונות של HCCs אגרסיביים וגרורתיים3. הם הראו עוד כי ניתן להשתמש במערכת מודל עכברים זו כדי לחקור את הביולוגיה של תאי גידול במחזור הדם, וכי זה טומן בחובו פוטנציאל להשגת תובנות חדשות לגבי המנגנונים של גרורות סרטניות3.
מטרת מאמר זה היא לתאר בפירוט את המתודולוגיה המשמשת לביסוס מודל עכבר סינגני אורתוטופי "דמוי מטופל" זה של גרורות HCC3. המתודולוגיה כיצד להשתיל תאי HCC של עכבר BNL 1ME A.7R.1 ישירות לתוך הכבד (איבר המוצא) של זן עכבר המעבדה המוכשר החיסוני מסוג פרא, BALB/c3 באמצעות ניתוח הישרדות. בניגוד למודלים אחרים של גידול קסנוגרפט בעכברים שבהם מושתלים תאי גידול אנושיים בעכברים חסרי חיסון, מערכת זו היא סינגנית ולכן מתאימה לחקר תפקידה של מערכת החיסון בגרורות גידול3,5,8. גישה זו ככל הנראה תזכה לשימוש נרחב לחקר מנגנוני הגרורות בסרטן איברים מוצקים.

<table><tbody><tr><td>פינצטה מיקרו ניתוח&nbsp;</td><td>Roboz</td> <td>(RS-5040)</td> <td>קצה 0.20 x 0.12 מ"מ</td></tr><tr><td>Graefe מיקרו חיתוך מלקחיים, קצה מעוקל משונן</td><td>Roboz</td> <td>(RS-5111)</td> <td>1 X 2 שיניים, רוחב קצה מעוקל 0.6 מ"מ</td></tr><tr><td>מיקרו מפסק-אגריקולה (3 על 3 שיניים)</td> <td>Roboz</td> <td>(RS-6501)</td> <td>קהה 3 X 3 שיניים, עומק 4 מ"מ, מפוזר 25 מ"מ</td></tr><tr><td>מיקרו מפסק-גולדשטיין (3 על 3 שיניים)</td> <td>Roboz</td> <td>(RS-6503)</td><td>קהה, 3 X 3 שיניים, עומק 4 מ"מ, מפוזר 19 מ"מ</td></tr><tr><td>קליפר ג'יימסון (מודד גידולים)</td><td>Roboz</td><td>(RS-6466)</td><td>סולם 80 מ"מ/3 אינץ', מצופה כרום&nbsp;</td></tr><tr><td>מספריים מיקרו חיתוך, מספריים טבעתיים גדולים,</td><td>רובוז</td> ישר וחד <td>(RS-5852)</td><td>להבים 23 מ"מ, אורך 4 אינץ', שוקיים שטוחות וטבעות גדולות</td></tr><tr><td>אזמל עם להבים, להליכי ניתוח עדינים</td><td>Roboz</td><td>(RS-9861-36)</td><td></td></tr><tr><td>ידית אזמל&nbsp;</td><td>Roboz</td> <td>(RS-9884)</td> <td>מוצק</td></tr><tr><td>Littauer תפר Sissors</td><td>Roboz</td> <td>(RS-7074)</td> <td>אורך 4.5 אינץ'</td></tr><tr><td>מחזיק מחט חום, לקשירת תפרים קלה</td><td>Roboz</td> <td>(RS-7960)</td> <td>לסת קמורה, שיניים עדינים</td></tr><tr><td>רפלקס 7 מ"מ תפסי פצע עם רפלקס 7 קליפ אפליקציה</td><td>Roboz</td> <td>(RS-9262)</td> <td>שיטה חלופית בטוחה ומאובטחת לסגירת פצע</td></tr><tr><td>מגש מכשירים ומכסה</td><td>Roboz</td><td>RT-1350S</td><td></td></tr><tr><td>מיני קוצץ עם להב ניתן להסרה</td><td></td> <td>Roboz (RS-5903)</td><td></td></tr> <tr><td>Germinator 500 (The Germ Terminator) סטריליזטור יבש</td><td>Roboz</td><td>Ds-400, DS-401, DS-501</td><td>לטיהור מהיר של מכשירי חיתוך מיקרו. &nbsp; מכשירים מטהרים תוך 15 שניות&nbsp;</td></tr><tr><td>מחטי מיקרו-הזרקה</td><td>VWR</td><td>BD305125</td><td>מחט 25G</td></tr></tbody></table>

&quot;מטופל כמו&quot; orthotopic syngeneic עכבר הדגם של hepatocellular carcinoma גרורה

A "Patient-Like" Orthotopic Syngeneic Mouse Model of Hepatocellular Carcinoma Metastasis

רוב מקרי המוות הקשורים לסרטן נגרמים על ידי גרורות של הסרטן ולא על ידי הגידול הראשוני עצמו. עם זאת, המנגנונים הבסיסיים של גרורות סרטניות עדיין אינם ברורים. מודלים של בעלי חיים חיוניים להבהרת המנגנונים ולהערכת אסטרטגיות חדשות לטיפול בסרטן גרורתי. כאן, ניתן תיאור מעמיק של מודל עכבר סינגני אורתוטופי "דמוי מטופל" לחקר מנגנוני הגרורות של גידולי איברים מוצקים. מתוארת השתלה כירורגית הישרדות של תאי קרצינומה הפטו-תאית של עכבר BNL 1ME A.7R.1 ישירות לכבד (איבר המוצא) של זן עכבר המעבדה המוכשר החיסוני המולד, BALB/c. ההצלחה והשחזור של מתודולוגיה זו ממליצה עליה לשימוש נרחב בהבהרת המנגנונים הביולוגיים של גרורות סרטן איברים מוצקים.

הכבדים של עכברים / ג BALB הושתלו עם 5 × 10 6 תאי HCC עכבר BNL 1ME A.7R.1. ראיות קליניות של פיתוח HCC הייתה נצפות 63 ימים שלאחר ניתוח. כתוצאה מכך, עכברים מורדמים אנושי. נתיחה לאחר המוות בוצעה בעכברים מורדמים. הריאות והכבד היו כריתה ובדיקת ברוטו זהירה בוצעה לזהות גידולים מקרוסקופית. בעכבר אחד, גידול שטחי נצפה על פני השטח של הכבד עם כמה קובץ מצורף לקיר הבטן (איור 1 א). בעכבר שני, כבד באופן חריג למראה נצפה. החריגות בצורה חזקות מאוד נראית כמו גידול שטחי <str...

ההתפשטות הגרורה של הסרטן היא הסיבה העיקרית למוות הקשורים לסרטן. אנו מספקים תיאור מעמיק של מתודולוגיה ניתוח ההישרדות שלנו להקמת מערכת &quot;חולה-כמו&quot; orthotopic מודל עכבר syngeneic לחקר המנגנונים של גרורות בגידולים מוצקים איבר.

&quot;מטופל כמו&quot; Orthotopic syngeneic עכבר הדגם של Hepatocellular Carcinoma גרורה

The majority of cancer-related deaths are caused by the metastasis of the cancer rather than the primary tumor itself. Yet, the underlying mechanisms of ...

המטרה הכללית של פרוצדורה זו היא להקים מערכת מודל של עכברים סינגנאיים אורתוטופיים דמויי-חולה, לצורך חקר מנגנוני הגסטזיס בקרצינומה של התאים הכבדיים (hepatocellular carcinoma). דבר זה מושג תחילה על ידי הכנת תאי קרצינומה של התאים הכבדיים מעכברים להשתלה. בשלב השני, פותח בטנו של בעל חיים סינגנאי מקבל, והתאים מוזרקים בזהירות לאונה הימנית של הכבד.בסופו של דבר, ההצלחה והיכולת לשחזר את המתודולוגיה זו ממליצות על שימוש נרחב בה להבנת המנגנונים הביולוגיים של גרורות של קרצינומה של התאים הכבדיים (hepatocellular carcinoma). היתרון העיקרי של טכניקה זו על פני טכניקות קיימות, כגון מודלים של גידולים זנוגרפטיים בעכברים, הוא שמערכת מודל הגידול הסינגנית שלנו מאפשרת לחקור את תפקידה של התגובה החיסונית בגרורות הגידול. את ההליך הזה תדגים עבורי מישל נאדו, סטודנטית לתואר ראשון מהמעבדה שלנו. כדי להכין את התאים להשתלה, התחילו בשטיפה של תרבית של תאי קרצינומה של התאים הכבדיים בהסמיכות של 60% עד 70% פעמיים עם 5 mL של PBS.דגרו את תרבית התאים עם שני מיליליטר של trypsin ב-37 °C. לאחר חמש דקות, ספרו את התאים ודללו אותם לריכוז של 5×10⁵ תאים למיליליטר של PBS. לאחר מכן, העבירו מנות של 100 µL של תאים לתוך מבחנה מיקרו-צנטריפוגה סטרילית של 1.5 מיליליטר עבור כל עכבר, והניחו את התאים על קרח.לפני תחילת ההליך הכירורגי, ודאו את רמת ההרדמה התקינה באמצעות צביטה בבוהן. לאחר מכן, מרחו משחה בעיניו של עכבר bsy אדם בריא השוקל 16 עד 20 גרם, וגלחו שטח של כאינץ' אחד סביב קו האמצע של בטנו של בעל החיים. לאחר מכן, לבשו זוג כפפות לטקס ושטפו את העור החשוף מספר פעמים עם קרצוף מחטא עם סבון, ולאחריו שטיפה ב-PBS סטרילי למשך כחמש דקות.לאחר הכנת העור, יש להסיר את הכפפות וללבוש את ציוד המיגון האישי המתאים. ספקו מקור חום חיצוני כדי למנוע היפותרמיה כתוצאה מההרדמה במהלך הפרוצדורה, ולאחר מכן הצמידו סרט הדבקה כירורגי לגפיים ולזנב של בעל החיים כדי לקבע את העכבר במצב שכיבה על הגב (supine). לאחר מכן, בצעו חתך ישר מיד מתחת לעצם החזה (xiphos sternum), והשתמשו במרחיב כירורגי סטרילי בעל קיבוע עצמי כדי לפתוח את חלל הבטן.כאשר הכבד גלוי, שאבו מנה אחת של תאים למזרק של 1 מיליליטר המצויד במחט gauge 20, והזריקו לאט ובזהירות את כל 100 µL של תאי ה-hepatocellular carcinoma לאונה הימנית של הכבד. לאחר הוצאת המחט, הניחו מקלון צמר סטרילי למשך דקה אחת לפחות כדי לעצור כל דימום. לאחר מכן, השתמשו בתפר ספיג לסגירת הרקמה התת-עורית, ולאחר מכן סגרו את העור.באמצעות תפסים כירורגיים, נקה את הפצע שפשוף נוסף של חומר חיטוי, והזרק תת-עורית 100 µL של סליין נורמלי. לאחר מכן, מיד לאחר הניתוח, העבר את העכבר לכלוב נקי ללא בני לווים ועם מצע נייר למשך 24 שעות לפחות. לכבדי עכברי BSY אלו הושתלו חמש פעמים 10⁶ תאי סרטן של תאי כבד מעכבר ME.A כפי שהודגם זה עתה.ראיות קליניות להתפתחות של hepatocellular carcinoma נצפו לאחר 63 ימים, כפי שמודגש על ידי החץ בעכבר אחד. גידול שטחי נצפה על פני הכבד עם היצמדות מסוימת לדופן הבטן. הריאות של עכבר זה הראו מורפולוגיה לא תקינה, וכן אזורים של נמק המלווה בדימומים נראים לעין.בעכבר שני, הכבד נראה לא תקין מבחינה מאקרוסקופית, כאשר חריגה זו דמתה מאוד לגידול שטחי כפי שצפינו בביקורת. עכברים שלא עברו השתלה לא פיתחו גידולים neither בכבד ו-neither בריאות. לאחר שליטתו, מודל עכברים סינגנאי אורתוטופי זה יכול לספק פלטפורמה טובה להבנת המנגנונים הביולוגיים של גרורות ושל hepatocellular carcinoma.

a-patient-like-orthotopic-syngeneic-mouse-model-hepatocellular

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

שתי טכניקות שניתן להשתמש בהם כדי לבסס את המודל הזה: הזרקה של השעיה תא סרטני בקיר cecal או השתלה של פיסת גידול תת עורי על cecum. מודל זה שימושי לחקר התפתחות טבעית של סרטן המעי הגס בדיקות סוכני טיפולית חדשה נגד סרטן המעי הגס.

עכבר דגם orthotopic של סרטן המעי הגס

xenografts גידול האנושי בעכברים עם מערכת חיסון חלשים הם כלים רבי ערך כדי ללמוד ביולוגיה בסרטן. פרוטוקולים ספציפיים כדי ליצור xenografts תת עורי וintrahepatic מתאי אנושיים hepatocellular קרצינומה או שברי גידול מתוארים. התחדשות כבד הנגרמת על ידי כריתה חלקית בעכברי נמען מוצגת כאסטרטגיה כדי להקל על קליטתם intrahepatic.

דור של תת עורי וintrahepatic אדם xenografts קרצינומה hepatocellular בעכברים עם מערכת חיסון חלשים

מודל פרה קליני, עכברי של גרורות בכבד מבוצע באמצעות טכניקת הזרקת hemispleen.

דגם Murine פרה של גרורות כבדית

מודל גידול ראשוני orthotopic סרטן השד סר כירורגית של גידול ראשוני כדי להאריך את חיי עכבר כדי ליצור גרורות ספונטניות מתוארים. גידול הגידול ולהתפתחותו מנוטר לכמת ידי דימות פלואורסצנטי בלוציפראז.

במודל עכבר orthotopic של שד ספונטני סרטן גרור

סרטן הערמונית הוא הגורם השני בשכיחותו למקרי מוות הקשורים לסרטן בארצות הברית. מודל סרטן אורתוטופי מספק גישה שימושית להבנת הביולוגיה של סרטן הערמונית ולהערכת היעילות של משטרי טיפול. פרוטוקול זה מתאר את השלבים המפורטים הדרושים להקמת מודל עכבר אורתוטופי לסרטן הערמונית.

דגם Murine Orthotopic פרה-קליני של סרטן ערמונית האדם

יישום מודל orthotopic של קרצינומה של תאי כליה בעכברים עם מערכת חיסון תקינים מקנה החוקר מערכת קלינית רלוונטית המוגדרת על ידי הנוכחות של גרורות גידול ריאות כליות עיקריות באותה החיה. מערכת זו יכולה לשמש כדי preclinically לבדוק מגוון של טיפולים in vivo.

קרצינומה תא syngeneic עכבר הדגם של גרורתי כליות עבור הערכה כמותית אורך ורוחב של טיפולים פרה-קליניים

כאן, אנו מתארים את ההתפתחות של מודל מורטין רלוונטי קלינית של סרטן הכבד לכידה של תכונות החיסונית אופייני של סרטן hepatocellular (HCC).

מודל העכבר המושרה של הפאציט הנגרמת על ידי מדגם של סרטן הפטאותאי העולה בקביעת דלקת הכבד פיברוזיס

אורתופון האדם גרורות הכבד uveal מלנומה מבע מודלים העכבר נוצרו באמצעות שיטות כירורגי אורתוקפית עם קטע הגידול המטופל נגזר וטכניקות הזרקת מחט עם הגוף האנושי תרבותי שורות מלנומה.

הדור של מלנומה האדם Uveal האנושי פלטפורמת Xהשתל בעכברים חיסוני

כאן, אנו מציגים פרוטוקול ליצירת קסנושתרים אורתוטופיים של קרצינומה הפטוצלולרית עם ובלי קשירת עורק הכבד ומבצעים הדמיית טומוגרפיה לא פולשנית של פליטת פוזיטרונים (PET) של היפוקסיה גידולית באמצעות [18 F]Fluoromisonidazole ([18 F]FMISO) ו- [18 F]Fluorodeoxyglucose ([18F]FDG).

הדמיית PET/MR לא פולשנית במודל עכבר אורתוטופי של קרצינומה הפטוצלולרית

אלושתלים אורתוטופיים סינגניים של אדנוקרצינומה צינורית הלבלב (PDAC) משחזרים את הביולוגיה, הפנוטיפים והתגובות הטיפוליות של תת-סוגי מחלות. בשל התקדמות הגידול המהירה והניתנת לשחזור, הם נמצאים בשימוש נרחב במחקרים פרה-קליניים. כאן, אנו מראים שיטות עבודה נפוצות ליצירת מודלים אלה, הזרקת תרביות PDAC מורין סינגני לתוך הלבלב.

Syngeneic Mouse Orthotopic Allografts למודל סרטן הלבלב

למדו להקים מודל אורתוטופי סינגני בעכברים לחקר גרורות של קרצינומה הפטוצלולרית. שיטה זו מאפשרת חקירת תפקיד מערכת החיסון בהתקדמות הגידול והמלצה לשימוש נרחב במחקר סרטן.

"מטופל כמו" Orthotopic syngeneic עכבר הדגם של Hepatocellular Carcinoma גרורה

גלה סרטונים נוספים