שיטה להשתקה מרחוק עצבית פעילות במכרסמים בשלבים בדידים של למידה

מטרת ההליך הזה היא להשתיק באופן זמני ומרחוק את הפעילות העצבית באזורי מוח נפרדים בזמן שבעלי חיים עוסקים במשימות למידה וזיכרון. זה מושג על ידי טעינת ה-a V המכיל קולטן מעצב ומדווח למזרק לעירוי. השלב השני הוא להחדיר V לאזור העניין במוח החולדה.

לאחר מכן, תרופת המעצבים האינרטית ביולוגית קלוזפין ותחמוצת מוכנה ומוזרקת באופן סיסטמי לחולדה. השלב האחרון הוא ביצוע בדיקות התנהגותיות באמצעות פרדיגמת התניה מוקדמת חושית. בסופו של דבר, מיקרוסקופיה אימונופלואורסצנטית על רקמת המוח של החולדה משמשת לאימות מיקום הקולטן המעצב.

שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום מדעי המוח ההתנהגותיים, כולל אך לא רק ויסות מוטיבציה, קשב ולמידה וזיכרון ודא שכל אמצעי הזהירות המוסדיים לעבודה עם נגיפים הקשורים לאדנו מבוצעים לאורך כל הנגיף המשמש בסרטון זה מסווג כתרכובת ברמת בטיחות ביולוגית אחת. הכינו תמיסת אקונומיקה של 10%. טיהור מקום פסולת, בגה המכילה תמיסת אקונומיקה ומזרק סטרילי של 10 מיקרוליטר.

בסביבת העבודה, הנח את צינור המיקרו צנטריפוגה המכיל כמות של a V לתוך סגן ספסל סטנדרטי Load, מזרק של 10 מיקרוליטר עם לפחות ארבעה מיקרוליטר של A v. ודא שאין בועות אוויר בארבעת המיקרוליטרים של תמיסת a v. במזרק, השלך את צינור הנגיף הריק בכוס המכילה 10% אקונומיקה.

הוסף 10% אקונומיקה נוספת למיכל הפסולת, ואפשר לפסולת לשבת במשך 30 דקות לפני השלכת הפסולת הנוזלית המטוהרת כמפורט בהנחיות המוסד. הכן את אזור הניתוח על ידי הנחת נייר ספסל סופג מתחת למנגנון הסטריאוטקסי ועל חלל סמוך המיועד כאזור ייעודי לטיפול בנגיפים. לאחר השראת ההרדמה היה 3% איזוף, פלואור וחמצן בקצב של ליטר אחד לדקה.

גילח את הפרווה מבין העיניים עד מעט מאחורי האוזניים. לאחר הגילוח, בסס את החולדה בחזרה בתא האינדוקציה למשך שלוש דקות כשהחולדה מאובטחת במנגנון סטריאוטקסי. כסו את העיניים במשחת עיניים והכינו את מקום החתך על ידי ניקוי עם בטאדין.

לאחר ביצוע חתך של 2.4 ס"מ בקו האמצע של העור, מעל הגולגולת, החל משני מילימטר לעיניים, יש למשוך את העור כדי לחשוף את הגולגולת ולאחר מכן לנקות רקמה קרומית מהגולגולת עד ש-bgma ו-lambda נראים בבירור. לאחר שווידאתם שהגולגולת שטוחה, מקם את המקדחה ב-bgma, אפס את הקואורדינטות ולאחר מכן העבר את המקדחה לקואורדינטות האחוריות המדיאליות, הרוחביות והקדמיות הרצויות. קדחו חור באמצעות מקדח 0.9, 0.7 או 0.5 מילימטר.

הגדר את משאבת העירוי לספק את הנגיף בקצב של 0.2 מיקרוליטר לדקה. La המזרק לזרוע העירוי של המכשיר הסטריאוטקסי ולהוריד את המזרק לקואורדינטה הרצויה. השתמש במשאבה כדי לספק את הכמות הרצויה של הנגיף לאחר השלמת אספקת הווירוסים.

השאירו את המזרק במקומו למשך 10 דקות כדי למנוע זרימה חוזרת לתוך המחט, הרם לאט את המזרק בקצב של כחמישה מילימטרים לדקה. לאחר מכן עברו לקואורדינטה הבאה וחזרו על ההליך עד שכל הקואורדינטות יוחדרו ל-v. לאחר סגירת הפצע ומתן משככי כאבים לאחר הניתוח על פי הפרוטוקול המאושר, הכניסו את החולדה לכלוב נקי עם מצעים, מכסה ושילוט מתאים.

כאשר החולדה מתאוששת לחלוטין מההרדמה, החזירו אותה לחדר הדיור. אפשר שלושה שבועות או יותר לפני תחילת הבדיקות ההתנהגותיות כדי להבטיח ביטוי הולם של הקולטן המעצב. איור זה מציג את שלושת השלבים של פרדיגמת ההתניה המוקדמת החושית, שלב ההתניה המוקדמת, שלב ההתניה ושלב הבדיקה.

תרופת המעצב, קלוזפין ותחמוצת או CNO משמשת להשתקת פעילות עצבית על ידי הפעלת קולטן העיצוב, ניתן להזריק CNO לפני כל שלב של הבדיקה. כאן, CNO מוזרק 30 דקות לפני כל אחד ממפגשי ההתניה המוקדמת. לאחר הכנת תמיסה טרייה של מיליגרם אחד למיליליטר של קלוזפין ותחמוצת, על פי ההוראות בחלק הכתוב של הפרוטוקול, יש להזריק את ה-CNO תוך-צפקי במינון של מיליגרם אחד לק"ג 30 דקות לפני הבדיקה ההתנהגותית.

הפעל את קוד המחשב עבור ההפעלה ההתנהגותית המתאימה. לאחר שחלפו 30 דקות, הניחו את החולדות בתאי הבדיקה והתחילו את הראשון מבין 4 מפגשי התניה מוקדמת של 64 דקות על ידי הצגת 12 ניסויים מעורבים המורכבים ממתן גירויים שמיעתיים וחזותיים. בשישה מהניסויים הציגו צליל של גירוי התנאי המקדים למשך 10 שניות, ומיד לאחר מכן הצגה של גירוי האור המהבהב במשך חמש שניות בששת הניסויים האחרים.

הציגו את הרעש הלבן, הגירוי הלא משודר בלבד למשך 10 שניות. לאחר השלמת שלב ההתניה המוקדמת, התחל את מפגשי ההתנייה, שייערכו על פני חמישה ימים רצופים. הציגו לחולדות שמונה ניסויים המורכבים מהעברת הגירוי החזותי, האור המהבהב למשך חמש שניות ומיד אחריו משלוח של 2 כדורי מזון של 45 מיליגרם.

זמן זה כולל מרווחי זמן בין ניסויים שמתארכים שבע דקות לאחר השלמת מפגשי ההתניות. בצעו את מפגש הבדיקה היחיד של 78 דקות על ידי הצגת 12 ניסויים מעורבים המורכבים מהעברת הגירויים השמיעתיים בלבד. בשישה מהמבחנים.

הציגו את גירוי הטון, גירוי התנאי המקדים בלבד למשך 10 שניות. בששת הניסויים האחרים, הציגו את הרעש הלבן, הגירוי הלא מזווג בלבד למשך 10 שניות. עם סיום המשימה ההתנהגותית, הוציאו מיד את החולדות מהתאים והחזירו אותן למושבת החיות.

נתח את הנתונים משלב ההתניה והבדיקה על פי ההוראות המפורטות בחלק הכתוב של הפרוטוקול. לאחר ביצוע אימונוהיסטוכימיה המכוונת כנגד המדווח המתויג או החלבון המדווח, בדוק את קטעי הכתמים במיקרוסקופיה כדי לוודא את המיקום והביטוי של הקולטן המעצב ו/או המדווח כצפוי חולדות הביקורת והניסוי למדו באופן דומה את הקשר הפבלובי בין גירוי האור המהבהב למזון. במהלך מפגשי ההתניות.

במפגשים, לשתי הקבוצות הייתה גם מוטיבציה להשיג תגמול מזון במהלך מפגש ההתנייה. לעומת זאת, במהלך מפגש הבדיקה הקריטי, חולדות הניסוי לא הצליחו להבחין בין גירוי שמיעתי מותנה מראש לגירוי שמיעתי לא משודר, בעוד שחולדות ביקורת הראו התנהגות גדולה יותר של מזון בתגובה להצגות של גירוי התנאי המקדים. לפיכך, חולדות ביקורת אך לא ניסויים הראו את אפקט ההתניה החושית המוקדמת.

תמונה זו מציגה אימות היסטולוגי של מיקום עירוי a v לאזור העניין במוח המכרסם לאחר התפתחותו. טכניקה זו סללה את הדרך לחוקרים בתחום מדעי המוח לחקור את התרומות של אזורים ספציפיים במוח ו/או סוגי תאים להתנהגות מורכבת in vivo.