Name: בידוד של לויקוציטים מרקמות Murine בממשק האם והעובר (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-05-21T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 51 s
Description: למדו לבודד לויקוציטים מרקמות ממשק האם והעובר בעכברים באמצעות פירוק מכני ועיכול אנזימטי. שיטה זו שומרת על סמני שטח תאיים ומאפשרת אימונופנוטיפינג ומיון תאים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

NGL נתמכה על ידי Perinatal אוניברסיטת היוזמה ויין מדינה באימהי, Perinatal ובריאות ילד. אנו בתודה להכיר מורין McGerty ואיימי א Furcron (אוניברסיטת ויין סטייט) לקריאה הביקורתית שלהם של כתב היד.

המחברים לחשוף אין ניגודי אינטרסים.

איסוף נתונים עקביים שמתעד את מאפייני השפע ופנוטיפי של לויקוציטים מסתנן בממשק אימהי-העוברי הוא חיוני להבנת הפתוגנזה של סיבוכים הקשורים להריון. כמה טכניקות תוארו המאפשרות הבידוד של חדירה לויקוציטים מהרקמות עכברי בממשק האימהי-עוברי במהלך הריון 31,38,39,43-46. עם זאת, כל טכניקה היא שונה, שימושים שונים אנזימים או שילובי אנזים, דורש פעמים ניתוק שונות, אינו מציין כמויות של רקמה, והכי חשוב, לא תמיד לציין את הכדאיות של התאים המבודדים. הפרוטוקול המתואר במסמך זה מאפשר הבידוד של חד...

סובלנות חיסונית בהריון היא תקופה בה שינויים ייחודיים להתרחש בתוך המערכת החיסונית של האם. שינויים אלו מאפשרים לאם לעובר תסבול, שתל למחצה אלוגנאית 1. העובר מבטא מורכב histocompatibility גדול אבהי (MHC) אנטיגנים 2, ותאים עובריים כבר נמצאו במחזור הדם האימהי 3; עם זאת, העובר לא נדחה 4,5. חידה זה לא מובן לחלוטין. ההשערה האחרונה קובע כי סובלנות אימהית-עוברית נוצר במהלך משגל והפרית 6,7 ומתוחזק כדי לקיים הריון טווח מלא 8-10. פירוט של סובלנות אימהית-עוברי זה נחשב מנגנון של מחלה במהלך הריון 10-16 המוקדם ומאוחר שלבים. סובלנות האם ועובר כרוך בהשתתפות תת-אוכלוסיות לויקוציטים שונות, כוללים תאי T (תאי T רגולטורים, תאי Th1, תאי Th2, ותאי TH17), מקrophages, נויטרופילים, תאי פיטום, תאי NK, ותאי NKT, תאים דנדריטים, ותאי B, ששינוי בצפיפות ולוקליזציה במהלך הריון 15,17-19. סובלנות האם ועובר מועשרת בממשק אימהי-העוברי 20 - האתר אנטומיים בי המערכת החיסונית של האם אינטראקציה עם אנטיגנים העובריים 20,21. הממשק אימהי-העוברי נוצר במהלך placentation כאשר תאי trophoblast extravillous העובריים לפלוש רירית רחם 22-24. בצד העוברי של ממשק זה, הקרומים המקיפים את העובר ליצור משטח אפיתל מיוחד בתוך השליה, ותאי syncytiotrophoblast לשלוט בבורסה התזונתית באמצעות המגע הישיר שלהם עם דם אימהי 22. בצד האימהי של הממשק, decidua מגייס בריכת הטרוגנית של לויקוציטים שבעכברים כ -30% עד 50% מכל תאי decidual. בנוסף להשתתפותם בmaternסובלנות חיסונית אל, תאים אלה הם תורמים מרכזיים לתהליכים שונים במהלך הריון, למשל., שליה ההגנה על מערכת הרבייה מזיהומים, הפריה, השרשת עובר 7,25, אנגיוגנזה decidual 26, שיפוץ כלי דם 24,27, פלישת trophoblast 28, פיתוח 24,25, וסופו של דבר, עבודה ומסירה 15,17. לכן, המחקר של לויקוציטים המעורב בסובלנות אימהית-עוברית הוא חיוני להבהרת פתוגנזה של סיבוכים הקשורים להריון. בעוד שהשימוש באימונוהיסטוכימיה וimmunofluorescence יצר נתונים להדמיה הישירה והלוקליזציה של רחם, decidual, או כדוריות דם לבנות שליה 29,30, cytometry זרימת הניתוח חשף נוסף תת ספציפי של לויקוציטים בכל אחד מרקמות אלה 31,32. בנוסף, cytometry זרימה נעשה שימוש כדי לקבוע את הצפיפות וחלקם של מאטרסופי-עוברי ממשק לויקוציטים 33 וביטוי רמות של חלבונים תאיים ו תאיים 8-10,34. ניתוח תזרים cytometric של לויקוציטים בממשק אימהי-העוברי דורש השעיה תא בודד. כדי לבודד לויקוציטים מסתנן מdecidual, הרחם, ורקמות שליה, שתי שיטות של ניתוק רקמה שימשו: מכאנית והאנזימטית. שני השיטות לאפשר את ההפרדה של לויקוציטים הסתנן מהמטריצה ​​תאית (ECM) של רקמות אלה. ניתוק רקמה אנזימתי עדיף על ניתוק רקמה מכאני שכן היא מאפשרת תשואה גבוהה יותר של כדוריות דם לבנות עם הנזק קשור-כוח גזירה פחות 35. כתוצאה מכך, ניתוק רקמה מכאני דורש איגום רקמות 36, אשר עשוי להגדיל את השונות וההטרוגניות של הדגימות. עם זאת, ניתוק מכאני עשוי להיות הבחירה כאשר אנטיגן של עניין ניתן לשנות על ידי ניתוק האנזימטית או כאשר פונקציונלי של התאים של צורך העניין לשימור (לדוגמא., רעיל של תאי NK) 35. השימוש בproteolysis עם אנזימים ספציפיים לבזות ECM מבטל את התשואות נמוכות שנצפו עם ניתוק מכאני. מספר מחקרים דיווחו על השימוש בטריפסין 32, collagenase 37, 31 DNase, dispase 38, וקוקטיילים מסחריים של אנזימים שונים 32,39. עם זאת, הטבע והריכוז של אנזימים שונים ואת משך הזמן של עיכול חייב להיות מוגדר בקפדנות ומאומתים על מנת להבטיח שמירה על שלמותו של אפיטופים אנטיגני פני תא הנדרשים לimmunophenotyping. מבני המשטח שונים באופן דיפרנציאלי רגישים להרס על ידי אנזימים שונים, עם כמה אנזימים, כגון טריפסין, להיות ידוע לשמצה בהפשטת epitopes משטח יקוציט מוכרת על ידי רבים נוגדנים חד-שבטיים. הציג במסמך זה הוא שיטה באמצעות proteolytIC וקוקטייל האנזימטית collagenolytic, נקרא Accutase. פתרון האנזימטית זה עדין מספיק ועדיין יעיל במתנער רקמות עכברי בממשק האימהי-עוברי, ואינו דורש תוספת של חומרים כימיים מתנערים אחרים או סרום לסיים את תגובת הניתוק. יתר על כן, הוא מוכן לשימוש כפי שסופק ו, למרות שהזמן של ניתוק צריך להיות מאומת, זה יותר חזק מאשר האנזימים הנ&quot;ל 40,41. הניצול של שילוב של שני הסוגים של רקמות disaggregation משפר את האיכות וכמות התאים שהושגו; כך, מספר מחקרים יישמו את השימוש בשילוב של ניתוק מכאני והאנזימטית עם תוצאות משביעות רצון 31,32,37. הפרוטוקול המתואר במסמך זה הוקם ומאומתים במעבדה שלנו; היא משתמשת בשילוב של ניתוק מכאני עדין ואחריו disaggregation האנזימטית חזק. פרוטוקול זה מאפשר מחקר והבידוד נוסף שללויקוציטים מסתנן ברקמות עכברית בממשק האימהי-עוברי (רחם, decidua, ושליה). הפרוטוקול הבא גם שומר על השלמות של סמנים פני תא ותשואות מספיק תאי קיימא עבור יישומים במורד הזרם כפי שהודגם על ידי ניתוח התזרים cytometric. לבסוף, פרוטוקול זה שומר על העקביות של תא הכנה לניתוח והשוואה של רקמות עכברי שונות המרכיבות את הממשק אימהי-עוברי.

<table><tbody><tr><td colspan="4">Magentic Cell Separation</td></tr><tr><td>MS Columns</td><td>Militenyi Biotec</td><td>130-042-201</td><td></td></tr><tr><td>מפריד תאים</td><td>Militenyi Biotec</td><td>130-042-102</td><td></td></tr><tr><td>30 &mu; m מסנני הפרדה מוקדמת</td><td>Militenyi Biotec</td><td>130-041-407</td><td></td></tr><tr><td>Multistand</td><td>Militenyi Biotec</td><td>130-042-303</td><td></td></tr><tr><td>צינורות חרוטיים 15 מ"ל</td><td>Thermo Fisher</td><td>339650</td><td></td></tr><tr><td>MACS Buffer</td><td>Militenyi Biotec</td><td>Laboratory</td> <td>Preparation (0.5% אלבומין בסרום בקר, 2mM EDTA ו-1x PBS, pH 7.2)<</td></tr><tr>td colspan="4"><חזק>ריאגנטים</חזק></td></tr><tr><td>תמיסה אנזימטית Accutase</td><td>Life Technologies</td><td>A11105-01</td><td></td></tr><tr><td>Anti-mouse CD16/CD32</td><td>BD Biosciences</td><td>533142</td><td></td></tr><tr><td>נוגדנים חוץ-תאיים נגד עכבר</td><td>BD Bioscences/eBiosciences</td><td></td><td>טבלה 1</חזק></td></tr><tr><td>נתרן אזיד</td><td>פישר</td><td>S227-500</td><td></td></tr><tr><td>אלבומין בסרום בקר (BSA)</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>A7906-100G</td><td></td></tr><tr><td>צבע חי/מת חי</td> Life <td>Technologies</td><td>L23105</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת חיץ קיבוע</td><td>BD Biosciences</td><td>558049</td><td></td></tr><tr><td>FACS Buffer</td><td>BD Biosciences</td><td>הכנה למעבדה</td><td>0.1% BSA, 0.05% נתרן אזיד, 1x PBS, pH 7.4</td></tr><tr><td>תמיסה כחולה טריפן 0.4%</td> <td>BIO-RAD</td><td>145-0013</td><td></td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי (FBS)</td><td>Life Technologies</td><td>16000-044</td><td></td></tr><tr><td colspan="4"><חזק>מכשירים נוספים</חזק></td></tr><tr><td>אינקובטור עם שייקר</td><td>Thermo Scientific</td><td>MaxQ 4450</td><td></td></tr><tr><td>Flow cytometer</td><td>BD LSRFortessa</td> צנטריפוגה <td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>Thermo Scientific</td><td>Legend LXTR</td><td></td></tr><tr><td>מעבדת</td> מערכת <td></td><td></td><td>ואקום</td> נבנתה</tr><tr><td>חממה</td><td>Thermo Scientific</td><td>Incubator 3307</td><td></td></tr><tr><td>אמבט מים</td><td>מונה תאים 51221035</td><td></td><td></td>מדויק</tr><tr><td></td><td>BIO-RAD</td><td>TC20 מונה</td><td></td>תאים אוטומטי</tr><tr><td>מיקרוסקופים אופטיים ופלואורסצנטיים</td><td>Zeiss ו-Olympus</td><td>Zeiss LSM780 ו-Olympus CKX41</td><td></td></tr></tbody></table>

בידוד של לויקוציטים מרקמות murine בממשק האם והעובר

Isolation of Leukocytes from the Murine Tissues at the Maternal-Fetal Interface

סובלנות חיסונית בהריון דורשת שהמערכת החיסונית של האם עוברת שינויים ייחודיים במטרה לקבל ולטפח את העובר המתפתח. סובלנות זה הוא שיזמה במהלך משגל, הוקמה במהלך הפריה וההשתלה, ונשמרה לאורך הריון. מתווכים תאיים ומולקולריים פעילים של סובלנות אימהית-עוברית מועשרים באתר של קשר בין רקמות עובריות ואימהיות, הידוע בממשק האימהי-עוברי, הכולל את השליה ורחם ורקמות decidual. ממשק זה מורכב מתאי סטרומה ולויקוציטים הסתננות, ומאפייני השפע ופנוטיפי לשנות במהלך ההריון. לויקוציטים מסתנן בממשק האימהי-עוברי כולל נויטרופילים, מקרופאגים, תאים דנדריטים, תאי פיטום, תאי T, תאי B, תאי NK, ותאי NKT שיחד יוצרים מיקרו-הסביבה המקומית המקיימת הריון. חוסר איזון בין תאים אלה או כל inappropשינוי riate בפנוטיפים שלהם נחשב למנגנון של מחלה בהריון. לכן, המחקר של לויקוציטים שלהסתנן הממשק אימהי-העוברי הוא חיוני על מנת להבהיר את מנגנוני החיסון שיובילו לסיבוכים הקשורים להריון. תאר במסמך זה הוא פרוטוקול שמשתמש בשילוב של ניתוק מכאני העדין ואחריו disaggregation האנזימטית חזק עם מפרקי חלבונים וקוקטייל האנזימטית collagenolytic לבודד את כדוריות דם לבנות שחדרו מהרקמות עכברי בממשק אימהי-העוברי. פרוטוקול זה מאפשר הבידוד של מספרים גבוהים של כדוריות דם לבנות קיימא (&gt; 70%) עם מאפייני אנטיגני ופונקציונליים מספיק שימור. אז יכולים להיות מנותח על ידי כדוריות דם לבנות מבודדים כמה טכניקות, כולל immunophenotyping, מיון תא, הדמיה, immunoblotting, ביטוי mRNA, תרבית תאים, ובמבחני מבחנה פונקציונליים כגון תגובות מעורבות לויקוציטים, הפצה, או מבחני רעילים.

הנתיחה של רקמות עכברי מהממשק האימהי-העוברי מוצגת באיור 1; הליך זה כולל פתיחת חלל הצפק (איור 1 א &#39;, ב&#39;), קרן הרחם (איור 1 ג) כוללים אתרי ההשתלה (1D איור), והאוסף של רקמות הרחם (איור 1E), שליה (איור 1F), ורקמות decidual (איור 1G) בשעה 16.5 DPC. איור 2 מציג את המורפולוגיה של מקרופאגים המבודדים (F4 / 80 +) שנאספו מרקמות decidual ורחם ב16.5 DPC...

המתואר כאן הוא פרוטוקול לבידוד וניתוח הלויקוציטים החודרים של רקמות בממשק האם-עובר (רחם, דצידואה ושליה) של עכברים. פרוטוקול זה שומר על שלמותם של רוב סמני פני התא ומניב מספיק תאים ברי קיימא ליישומים במורד הזרם, כולל ניתוח זרימה ציטומטרית.

בידוד של לויקוציטים מרקמות Murine בממשק האם והעובר

Immune tolerance in pregnancy requires that the immune system of the mother undergoes distinctive changes in order to accept and nurture the developing ...

המטרה הכוללת של פרוצדורה זו היא לבודד את הלוקוציטים המסתננים של הממשק העוברי-אימי בעכבר. דבר זה מושג תחילה על ידי קצירת הרחם, השליה וה-eua. הרקמות מפורקות באמצעות דיסוציאציה מכנית בתוך תמיסה אנזימטית, ולאחריה עיכול אנזימטי.מתלה התאים שהתקבל מסונן ונשטף, ובשלב זה מופרדים תאי החסון הרלוונטיים משאריות תאים, כגון תאים שאינם חיוניים, באמצעות מדרג של fetal bovine serum. בסופו של דבר, ניתן להשתמש בלויקוציטים המבודדים לתרבית תאים לצורך אימונופנוטיפציה או למיון תאים. הרעיון לשיטה זו עלה לראשונה כאשר ניסינו לבסס פרוטוקול לבידוד לויקוציטים מממשק העובר והאם, והבנו כי השיטות שפורסמו לא אפשרו את בידודם של תאי החסון הנדירים שמעניינים אותנו.הדגמה של הפרוצדורה תבוצע על ידי Mile El Sanchez Rodriguez ו-Marcina Hernandez, עמיתי מחקר מהמעבדה שלי. כדי לאסוף רקמות מממשק העובר והאם, התחילו בשימוש במספריים כירורגיים סטריליים כדי להסיר לחלוטין את החלק התחתון של העור ורקמת השריר בבטן. לאחר מכן, השתמשו בפינצטה כדי להזיז הצידה את כל שאר האיברים עד שהרחם והשחלות יהיו גלויים. לאחר מכן, הוציאו את הרחם אל מחוץ לחלל הפריטונאום.אתרו את השחלאים הממוקמים דיסטלית ל-UCT ולחיבור בין הרחם לחסון (utero tubal junction) של כל קרן רחם. לאחר מכן, בצעו חתך בחיבור בין הרחם לחסון כדי להפריד את הקרניים מהמסנטריום המכיל את כלי הדם של הרחם. בצעו כריתה בגבאי הרחם (cervix) כדי להפריד את קרני הרחם מחלל הפריטונאום.לאחר מכן, השתמש במספריים כירורגיים כדי לבצע חתך בין צוואר הרחם לבין החלק התחתון של קרני הרחם, תוך השארת חלק מצוואר הרחם מחובר כדי למנוע את פתיחת קרן הרחם. טבול את קרני הרחם ואת צוואר הרחם בצלחת פטרי גדולה מלאה ב-10 עד 15 milliliters של PBS כדי להמיץ את אתרי ההשתבצות. הסר שאריות שומן מהרקמות.לאחר מכן, החזיקו את הקרניים במקומן בעזרת הפינצטה. בצעו חיתוך רוחבי דרך אזור בין השתלים כדי להסיר את אחד מאתרי ההשתלה מהרחם. כעת, החזיקו את האתר במקומו ובצעו חתך קטן בדופן הרחם הסמוך לרקמות השילייה והשאריות.גזרו מסביב להיקף השילייה והדסידואה עד שהרקמות יופרדו הן מדופן הרחם והן מממברנת הכוריון. לאחר מכן, העבירו את השילייה ואת רקמות הדסידואה הצמודות אליה לצלוחית פטרי נקייה המכילה 3-5 milliliters של PBS. העבירו את העובר לצלוחית פטרי נוספת עם PBS והשתמשו בפינצטה בעלת קצה דק כדי לקלף בעדינות את רקמת הדסידואה הלבנה-אפורה מפני השילייה.יש להקפיד על שמירת השלמות של רקמות השילייה ושל ה-ECI. יש לחלק את רקמות השילייה וה-ECI לשתי צלחיות פטרי נפרדות ומסומנות, הממולאות ב-PBS. לאחר מכן, יש להשתמש בפינצטה בעלת חוד עדין כדי להסיר בעדינות את דופן הרחם של הקרומיון והאלנטואון, ולהניח רקמות רחם אלו בצלחית פטרי חדשה הממולאת ב-PBS לצורך דיסוציאציה מכנית של הרקמות.בשלב הבא, העבירו 100 עד 150 מיליגרם של רקמות הדיסקוס הרחמי והשליה לשני מבחנות קוניות בנפח 2 מיליליטר המסומנות בנפרד. הוסיפו 500 µL של תמיסת אנזימים קרה מסוג 1 לכל מבחנה. לאחר מכן, השתמשו במספריים סטריליים כדי לפרק מכנית כל אחת מהרקמות למשך לא יותר משתי דקות עד לקבלת תרחיפים.פתח מראה חלבי. הוסף 500 µL נוספים של תמיסה אנזימטית קרה לכל מבחנה, והנח את המבחנות על קרח. לאחר מכן, דגור את כל הרקמות בטמפרטורה של 37 °C עם ערבול אורביטלי עדין ב-80 RPM, והנח את המבחנות על קרח לאחר 30 עד 35 דקות כדי להפסיק את העיכול.כעת סננו כל תערובת רקמה דרך מסננת של 100 micron אל תוך מבחנות קוניות של 50 milliliter המסומנות באופן אינדיבידואלי, ושטפו כל מבחנה של two milliliter ואת המסננת שתיים עד שלוש פעמים עם 20 milliliters של PBS כדי לאסוף את כל התאים. כאשר כל התאים סוננו, הריצו אותם בצנטריפוגה ושאבו בזהירות את ה-SUP natin מבלי להפריע למשקעים. השביו בעדינות את הלוקוציטים ותאי הסטרומה שבודדו ב-one milliliter של תוצר תרבית RPMI, ללא שימוש בוורטקס.לאחר מכן, עבור כל רקמה, הוסף 500 microliters של סרום עגל עוברי (fetal bovine serum) לשפופרת פוליסטירן של חמישה milliliters והנח באיטיות את תגלי התאים מעל הסרום. לבסוף, כאשר כל התאים הונחו, צנטריפוג את התאים ברצף ושאב את הנוזל העליון (supernatant) מבלי לגעת במשקעי התאים. בתמונות אלו מוצגת המורפולוגיה של מקרופגים חיוביים ל-F4/80 שבודדו מרקמות דסידואה (decidua) ומרקמות רחם.ביום ה-16.5 לאחר ההמהאור (coum) מוצגים תאים מרקמות הממשק האימהיות והעובריות. אלו מראים חיוניות של יותר מ-70% לאחר בידוד בשיטה זו, ומכילים אוכלוסיות של נויטרופילים, מקרופאגים, תאי T, תאי NK ותאים דנדריטיים, עם פרופורציה גבוהה של מקרופאגים המבטאים CD 11 C. תתי-אוכלוסיות של לוקוציטים שבודדו מרקמות בממשק האימהי-עוברי. כמו כן, נכללים תאי B ותאי T חיוביים ל-CD 4, תאי T חיוביים ל-CD 8, ותאי T חיוביים ל-CD 3 ושליליים ל-CD 4 ו-CD 8, כפי שנראה בתרשים צפיפות זה.במהלך ביצוע פרוצדורה זו, חשוב לזכור לשמור את הרקמות ואת תערובת האנזימים על קרח, לקבוע את הטמפרטורה הנכונה באינקובטור, ולהימנע מטיפול יתר ברקמות במהלך העיכול לאחר ביצוע הפרוצדורה. ניתן לבצע שיטות נוספות כגון אימונופנוטיפיקציה, תרביות תאים, מיון תאים ובידוד D-N-A ו-R-N-A. לאחר צפייה בסרטון זה, תהיה לכם הבנה טובה לגבי האופן שבו מבודדים לוקוציטים חודרניים בממשק העוברי-אימהי, הרחם והשליה.

isolation-leukocytes-from-murine-tissues-at-maternal-fetal

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

שיטה מהירה להשיג leukocytes חדירה מהמוח Murine מתואר. שיטה זו מנצלת שיפוע Percoll רציפה שיפוע Ficoll רציפה כדי לבחור ולטהר את שכבת ליקוציט מועשר. Leukocytes מבודד ואז עלול להיות מאופיין על ידי מדידות זרימת cytometric.

בידוד של המוח, שחדר Leukocytes

דרך יעילה לבודד את הלימפוציטים מדרכי מין עכבר מתוארת. שיטה זו מנצלת עיכול אנזים והפרדת השיפוע Percoll לאפשר בידוד יעיל. טכניקה זו היא גם להתאמה לשימוש במינים...

בידוד של לימפוציטים מעכבר גניטלי חוברות רירית

בסרטון זה, אנו מדגימים את הבידוד של לויקוציטים בכבד מכבד עכבר על ידי זילוח מאולץ.

בידוד של לויקוציטים בכבד שוליים מכבד עכבר

מפתח אחד לחקירה מוצלחת של הביולוגיה microglial הוא שימור immunofunction microglial vivo לשעבר במנותק מרקמת מערכת העצבים המרכזית. בידוד מיקרוגליה דרך תוצאות רועדות סיבוביות בתרביות תאים טהורות וimmunofunctional מאוד כפי שהוערך על ידי הדמיה ניאון, immunocytochemistry, והפעלת מיקרוגליה הבאות ELISA עם lipopolysaccharide מעודדי דלקת הגירויים (LPS) ופאם 3 צסק"א 4 (פאם).

בידוד של קליפת המוח Microglia עם immunophenotype משומר ופונקציונאלי מילודי Murine

מתואר כאן פרוטוקול לבידוד ומחקר נוסף של הלויקוציטים החודרים של ה-decidua basalis ו-decidua parietalis - הממשק האם-עובר האנושי. פרוטוקול זה שומר על שלמות סמני פני התא ומניב מספיק תאים ברי קיימא ליישומים במורד הזרם, כפי שהוכח על ידי ניתוח זרימה ציטומטרית.

בידוד של לויקוציטים מממשק האדם-האימהי העוברי

גזע אבות היווצרות הדם תאים (HSPC) נובעים מתאי אנדותל מיוחדים (hemogenic) במהלך הפיתוח, עדיין מעט מאוד ידוע על התהליך שבו כמה תאי אנדותל לציין להפוך להרכיב דם. אנו מדגימים שיטה המבוססת זרימת cytometry המאפשרת בידוד סימולטני של תאי hemogenic האנדותל HSPC מרקמות עובריות בעכברים.

בידוד של Murine העוברי Hemogenic לתאי אנדותל

כאן נתאר פרוטוקול מפורט על הבידוד של לימפוציטים האתרים אינדוקטיבית כולל בלוטות לימפה mesenteric המנקזים ותיקונים של פייה רקמת הלימפה הקשורים הבטן, ואת האתרים אפקטור כולל את פרופריה. מוסקולריס ו אפיתל המעי של המערכת החיסונית קטנים במעיים.

לימפוציטים בידוד מן העכבר קטן המעי המערכת החיסונית

פרוטוקול זה מדגים שיטת הבידוד של תאים אנושיים decidual הראשית שנאסף בקרום עוברי של המונח placentae אשר יכול לשמש למגוון רחב של יישומים (קרי immunocytochemistry, cytometry זרימה, וכו ') מכוון ללמוד את התפקיד של אוכלוסיות תאים שונים בסיבוכים בהריון.

בידוד של ראשי תאים Decidual האנושי בקרום עוברי של המונח Placentae

זוהי שיטה לבודד תאי לימפה הרחם מעכברים בהריון ולא בהריון. שיטה זו יכולה לשמש עבור יישומים במורד הזרם מרובים כגון פנוטיפינג FACS, מיון תאים, בדיקות פונקציונליות, RNA-seq, ופרוטומיקה. הפרוטוקול כאן מדגים כיצד פנוטיפ קבוצה 1 תאי לימפה מולדים הרחם על ידי ציטומטריית זרימה.

בידוד של תאי לימפה מולדים ברחם לניתוח על ידי ציטומטריית זרימה

פרוטוקול זה מפרט את הבידוד של אוכלוסיות חיסוניות ולא מחוסנות מריאות העכבר במצב יציב ובעקבות זיהום בשפעת. הוא גם מספק אסטרטגיות שער לזיהוי תת-קבוצות של תאים אפיתל ומיאלואידים.

בידוד אוכלוסיות תאים מיאלואידיים ואפיתל חיים מריאת העכבר

למדו לבודד לויקוציטים מרקמות ממשק האם והעובר בעכברים באמצעות פירוק מכני ועיכול אנזימטי. שיטה זו שומרת על סמני שטח תאיים ומאפשרת אימונופנוטיפינג ומיון תאים.

בידוד של לויקוציטים מרקמות Murine בממשק האם והעובר

גלה סרטונים נוספים