Name: הכנת תיאום מאוד נקבובי פולימר ציפויים על מונוליתים פולימר Macroporous להעשרה משופרת של Phosphopeptides (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-07-14T13:30:00.000+00:00
Duration: 10 min 27 s
Description: למד הכנת מונולית פולימרי נקבובי גדול עם ציפוי פולימר תיאום נקבובי קטן להעשרה סלקטיבית של פוספופפטידים. שיטה זו משפרת יעילות הפרדה וקיבולת קשירה בפרוטאומיקה וביוכימיה אנליטית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו בוצעה בבית היציקה המולקולרי, המעבדה הלאומית לורנס ברקלי ונתמכה על ידי משרד המדע, המשרד למדעי האנרגיה הבסיסיים, חטיבת מתקני המשתמש המדעיים של משרד האנרגיה האמריקאי, תחת חוזה מס. DE-AC02–05CH11231. התמיכה הכספית של פ.מ. על ידי מלגת ME-Fulbright ו-A.S. על ידי הוועדה להשכלה גבוהה של פקיסטן זוכות להכרת תודה.

הערה: לפני תחילת, סמן את כל הגיליונות הרלוונטיים חומר נתונים (MSDSs). כמה מהכימיקלים המשמשים בתהליכים סינטטיים ויישום הם רעילים. אנא עקוב אחר כל נהלי הבטיחות המתאימים ולהשתמש בציוד מגן מתאים (חלוקה, מכנסיים באורך מלא, נעליים סגורות הבוהן, משקפיים בטיחות, כפפות). אנא להשתמש בכל ציוד מגן האישי קריוגני בעת טיפול בחנקן נוזלי למדידות ספיחת חנקן (כפפות מבודדים, מגן פנים). 1. נקבובי פולימר מונולית הכנה בפורמט טור גורף ונימים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פולימר מונולית גורפת לאפיון <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לטהר סטירן, divinylbenzene וחומצת methacrylic דרך טור של אלומינה הבסיסית, על מנת להסיר את מעכבי פילמור. מקום 10 גרם של אלומינה הבסיסית במזרק 25 מיליליטר פלסטיק חד פעמי עם תקע של סיבי צמר זכוכית ארוזים בקצה המזרק. לחלחל כ 10 מיליליטר של מונומר דרך העמודה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טען את מונומרים (50 מ&quot;ג סטירן, divinylbenzene מ&quot;ג 100 ו -50 מ&quot;ג חומצת methacrylic) וסוכנים הנקבוביות להרכיב (300 מ&quot;ג ו -300 טולואן isooctane מ&quot;ג) בבקבוקון זכוכית 1 מיליליטר. הוסף את יוזם פילמור, 4 מ&quot;ג של 2,2&#39;-azobisisobutyronitrile (AIBN, 1% ביחס למונומרים). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Homogenize ידי sonication במשך 10 דקות. הסר חמצן מומס במבעבע חנקן הנוזלי באמצעות למשך 10 דקות. חותם את כובע הבקבוקון עם סרט פרפין ולמקם אותו באמבט מים ב 60 מעלות צלזיוס במשך 6 שעות לפלמר התערובת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להתקרר לטמפרטורת חדר ולשבור את הבקבוקון בזהירות. העבר את מונולית הפולימר לאצבעון חילוץ תאית. מניחים את אצבעון החילוץ לתא חילוץ Soxhlet ולהרכיב אותו בבקבוק עגול תחתון המכיל נפח של מתנול, שהוא לפחות שלוש פעמים בנפח של תא החילוץ. להרכיב הקבל לחלקו העליון של תא החילוץ. לבצע חילוץ Soxhlet על ידי הרתחת מתנולבמשך 16 שעות, על מנת להבטיח את הסרת מונומרים unreacted המלאה ונקבוביים להרכיב סוכנים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הלילה יבש בתנור ואקום ב 60 ° C. לאשר את קיומן של קבוצות פונקציונליות קרבוקסיליות לצרף PCP ידי Fourier Transform אינפרא אדום ספקטרוסקופיה (FT-IR). למדוד את שטח פנים על ידי porosimetry ספיחת חנקן. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Functionalization של סיליקה נימים להכנת עמודות מונוליטי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותך 2 מ &#39;של נימי סיליקה התמזגה 100 מיקרומטר id מצופה polyimide. לחבר אותו למזרק זכוכית 0.25-.50 מ&quot;ל ולשטוף את הנימים עם אצטון. הסר את אצטון על ידי שטיפה במי הנימים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> על מנת להפעיל את הציפוי הפנימי של סיליקה הנימים, השתמש משאבת מזרק לזרום פתרון NaOH 0.2 M המימי ברמה של 0.25 μl / דקה למשך 30 דקות. לשטוף עם מים עד לשפכים הוא ניטראליים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להשתמש ברצועות נייר pH כדי לבדוק pH בשפכים. כדי protonate קבוצות silanol של הנימים, לשאוב aqueo 0.2 Mפתרון HCl דרך הנימים ברמה של 0.25 μl / דקה למשך 30 דקות. לשטוף עם מים עד לשפכים הוא ניטראליים. לשטוף עם אתנול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשאוב 20% (w / w) פתרון אתנול של 3 (trimethoxysilyl) methacrylate propyl (pH 5 מותאמים עם חומצה אצטית) בשעה 0.25 μl / דקה לשעה 1. בשלב זה, נימי סיליקה היא פונקציונליות עם קבוצות ויניל כדי לצרף מונולית הפולימר למשטח הפנימי הנימים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף עם אצטון, יבש בזרם חנקן ומשאירים בטמפרטורת חדר למשך הלילה לפני השימוש. חותך את הנימים לחתיכות קצרות של 20 סנטימטרים אורך. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנת עמודות מונוליטי נימים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן תערובת פילמור זהה למונולית פולימר התפזורת (סעיף 1.1) בבקבוקון זכוכית 1 מיליליטר עם מחיצת גומי. להוסיף יוזם 1% AIBN ביחס למונומרים. Homogenize ידי sonication במשך 10 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לטהר את תערובת פילמור עם חנקן על ידי צימוד נימי סיליקה שאינן פונקציונליותלזרם חנקן. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס את נימי זרם חנקן דרך מחיצת הגומי של הבקבוקון ולטבול אותו לתוך תערובת פילמור כך שחנקן בועות באמצעות הנוזל. השאר את כובע הבקבוקון הרופף מעט, כדי למנוע לחץ יתר. לטהר במשך 10 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרם את נימי זרם חנקן מתערובת פילמור לאמיץ של הבקבוקון, ולסגור היטב את המכסה. הכנס נימים פונקציונליות באמצעות המחיצה לתוך תערובת פילמור. עודף הלחץ שנוצר לתוך הנימים באמצעות החנקן מוזרק לתוך אמיץ משאבות תערובת פילמור דרך הנימים פונקציונליות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאסוף כמה טיפות של תערובת פילמור מהשפכים של הנימים על מנת להבטיח כי הוא מלא לחלוטין ולסגור אותו עם מחיצת גומי. קח את הנימים מתוך הבקבוקון מאוד בזהירות ולסגור את הכניסה של הנימים עם מחיצת גומי. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פלמר התמהילture הכלול בנימים באמבט מים ב 60 מעלות צלזיוס במשך 6 שעות. מגניב בטמפרטורת חדר ולחתוך כמה מילימטרים של שני הקצוות של הנימים. הסר מונומרים unreacted וסוכנים נקבוביות ויוצר על ידי שטיפת העמודה עם אצטוניטריל באמצעות משאבת HPLC 3 μl / דקה למשך 30 דקות. בדוק backpressure של טור הנימים. </li></ol></li></ol> 2. צמיחה של הברזל-benzenetrycarboxylate PCP (FeBTC) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צמיחה של MOPH FeBTC על פולימרי מונולית גורפת לאפיון <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טוחנים את מונולית מיובשת בעבר באמצעות מכתש ועלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לטבול באבקת מונולית 100 מ&quot;ג ב 5 מיליליטר של 2 מ&quot;מ FeCl 3 · 6H 2 O באתנול במשך 15 דקות. מסנן אבק באמצעות מסנן ניילון (0.22 מיקרומטר) ולשטוף את האבקה עם אתנול. לטבול את אבקת מונולית ב 5 מיליליטר של חומצת 2 מ&quot;מ 1,3,5-benzenetricarboxylic (BTC) באתנול במשך 15 דקות. מסנן אבק באמצעות מסנן ניילון (0.22 מיקרומטר) ולשטוף את האבקה עם אתנול.</li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מספר חזור על שלב 2 כרצוי. הצמיחה של ציפוי המתכת אורגנית הסופי תוגדר במספר המחזורים מיושמים. בדרך כלל, בין 10 ל 30 מחזורים מבוצעים. לאשר את קיומו של הנקבוביות חדשות על ידי porosimetry ספיחת חנקן. למדוד את כמות אתרי מתכת נוספות על ידי ניתוח טרמוגרווימטריים (TGA). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צמיחה של MOPH FeBTC על עמודת מונוליטי נימים להעשרת phosphopeptides <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות משאבת מזרק. לשטוף את מונולית הנימים עם 2 מ&quot;מ FeCl 3 · 6H 2 O באתנול במשך 15 דקות ב -2 μl / דקה. לשטוף עם אתנול במשך 15 דקות ב -2 μl / דקה. לשטוף את מונולית הנימים עם מ&quot;מ BTC 2 באתנול במשך 15 דקות ב -2 μl / דקה. לשטוף עם אתנול במשך 15 דקות ב -2 μl / דקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלב 1 כרצוי. הצמיחה של ציפוי המתכת אורגנית הסופי תוגדר במספר המחזורים שבוצעו. </li></ol></li></ol> 3. חלבון עיכול ו- Enrichment של Phosphopeptides <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עיכול חלבון <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ממיסים 0.5 מיליליטר של חלב דל שומן ב 1 מיליליטר של מים ולחלק אותו לשברי 200 μl. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעיכול החלבון להוסיף 160 μl M 1 אמוניום ביקרבונט ו -50 μl 45 dithiothreitol מ&quot;מ לכל חלק, על מנת לדבוק אג&quot;ח דיסולפיד. לדגור על 50 מעלות צלזיוס בthermomixer במשך 15 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 50 בהדרגה μl של תמיסה מימית של iodoacetamide 100 מ&quot;מ, ואילו הפתרון התקרר לטמפרטורת חדר. Iodoacetamide ימנע ההיווצרות של אג&quot;ח דיסולפיד החדש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה בחושך במשך 15 דקות בטמפרטורת חדר. הוסף 1 מיליליטר deionized מים. הוסף 2 מיקרוגרם טריפסין ולעכל חלבונים בthermomixer על 37 מעלות צלזיוס במשך 14 שעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לסיים עיכול על ידי החמצה עם 10 μl של 1% חומצת trifluoroacetic, ולמקם אותו בthermomixer במשך 5 דקות בטמפרטורת חדר. אחסן את החלבונים מתעכלים ב -20 מעלות צלזיוס. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העשרת phosphopeptides באמצעות טור MOPH נימים. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף את העמודה עם של 4 100 μl: תערובת 1 של אצטוניטריל המכיל 0.1% חומצת trifluoroacetic במשך 10 דקות בקצב זרימה של μl 1 / דקה. לשאוב את עיכול החלבונים באמצעות הטור ב 2 μl / דקה למשך 30 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף את פפטידים אינם phosphorylated שוב עם 4: 1 תערובת של אצטוניטריל המכיל 0.1% חומצת trifluoroacetic במשך 10 דקות בקצב זרימה של μl 1 / דקה. לשטוף עם מים במשך 10 דקות בקצב זרימה של μl 1 / דקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> phosphopeptides Elute באמצעות פתרון חיץ 250 מ&quot;מ pH 7 פוספט נשאב בμl 1 / דקה במשך 15 דקות. לאסוף את eluent בבקבוקון וdesalt הפתרון באמצעות פרוטוקול סטנדרטי 19. הכן חומצה / מיליליטר 2,5-dihydroxybenzoic 2 מ&quot;ג להשתמש בו כמטריצה ​​לספקטרומטריית desorption / יינון לייזר בסיוע מטריקס הזמן של בריחה ההמונית (MALDI-TOF-MS). נמשך 2 μl של חומצת 2,5-dihydroxybenzoic לקצה לelute phosphopeptides ולזהות אותם ישירות לצלחת MALDI. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נתח את הנקודות על ידי MALDI-TOF-MS ולהתחדש הטור על ידי שטיפה יסודית עם מים ולאחר מכן מתנול. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Li, H., Eddaoudi, M., O’Keeffe, M., Yaghi, O. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Design+and+synthesis+of+an+exceptionally+stable+and+highly+porous+metal-organic+framework%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Design and synthesis of an exceptionally stable and highly porous metal-organic framework.</a> Nature. 402, 276-279 (1999).</li>
<li>Kitagawa, S., Kitaura, R., Noro, S. i <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+porous+coordination+polymers%5BTitle%5D)+AND+%22Angew.+Chem.+Int.+Ed%22%5BJournal%5D)">Functional porous coordination polymers.</a> Angew. Chem. Int. Ed. 43, 2334-2375 (2004).</li>
<li>Furukawa, H., Cordova, K. E., O’Keeffe, M., Yaghi, O. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+chemistry+and+applications+of+metal-organic+frameworks%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">The chemistry and applications of metal-organic frameworks.</a> Science. 341, 974(2013).</li>
<li>Ma, S., Zhou, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gas+storage+in+porous+metal-organic+frameworks+for+clean+energy+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Commun%22%5BJournal%5D)">Gas storage in porous metal-organic frameworks for clean energy applications.</a> Chem. Commun. 46, 44-53 (2010).</li>
<li>Li, J. R., Sculley, J., Zhou, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metal-organic+frameworks+for+separations%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Rev%22%5BJournal%5D)">Metal-organic frameworks for separations.</a> Chem. Rev. 112, 869-932 (2012).</li>
<li>Lee, J., Farha, O. K., Roberts, J., Scheidt, K. A., Nguyen, S. T., Hupp, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metal-organic+framework+materials+as+catalysts%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Soc.+Rev%22%5BJournal%5D)">Metal-organic framework materials as catalysts.</a> Chem. Soc. Rev. 38, 1450-1459 (2009).</li>
<li>Gu, Z. Y., Yang, C. X., Chang, N., Yan, X. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metal-organic+frameworks+for+analytical+chemistry%3A+From+sample+collection+to+chromatographic+separation%5BTitle%5D)+AND+%22Acc.+Chem.+Res%22%5BJournal%5D)">Metal-organic frameworks for analytical chemistry: From sample collection to chromatographic separation.</a> Acc. Chem. Res. 45, 734-745 (2012).</li>
<li>Ahmad, R., Wong-Foy, A. G., Matzger, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microporous+coordination+polymers+as+selective+sorbents+for+liquid+chromatography%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Microporous coordination polymers as selective sorbents for liquid chromatography.</a> Langmuir. 25, 11977-11979 (2009).</li>
<li>Yang, C. X., Yan, X. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metal-organic+framework+MIL-101%28Cr%29+for+high-performance+liquid+chromatographic+separation+of+substituted+aromatics%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Metal-organic framework MIL-101(Cr) for high-performance liquid chromatographic separation of substituted aromatics.</a> Anal. Chem. 83, 7144-7150 (2011).</li>
<li>Fu, Y. Y., Yang, C. X., Yan, X. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Control+of+the+coordination+status+of+the+open+metal+sites+in+metal-organic+frameworks+for+high+performance+separation+of+polar+compounds%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Control of the coordination status of the open metal sites in metal-organic frameworks for high performance separation of polar compounds.</a> Langmuir. 28, 6802-6810 (2012).</li>
<li>Gu, Z. Y., Yan, X. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metal-organic+framework+MIL-101+for+high-resolution+gas-chromatographic+separation+of+xylene+isomers+and+ethylbenzene%5BTitle%5D)+AND+%22Angew.+Chem.+Int.+Ed%22%5BJournal%5D)">Metal-organic framework MIL-101 for high-resolution gas-chromatographic separation of xylene isomers and ethylbenzene.</a> Angew. Chem. Int. Ed. 49, 1477-1480 (2010).</li>
<li>Chang, N., Gu, Z. Y., Yan, X. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zeolitic+imidazolate+framework-8+nanocrystal+coated+capillary+for+molecular+sieving+of+branched+alkanes+from+linear+alkanes+along+with+high-resolution+chromatographic+separation+of+linear+alkanes%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Chem.+Soc%22%5BJournal%5D)">Zeolitic imidazolate framework-8 nanocrystal coated capillary for molecular sieving of branched alkanes from linear alkanes along with high-resolution chromatographic separation of linear alkanes.</a> J. Am. Chem. Soc. 132, 13645-13647 (2010).</li>
<li>Yu, L. Q., Xiong, C. X., Yan, X. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Room+temperature+fabrication+of+post-modified+zeolitic+imidazolate-90+as+stationary+phase+for+open-tubular+capillary+electrochromatography%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.+A%22%5BJournal%5D)">Room temperature fabrication of post-modified zeolitic imidazolate-90 as stationary phase for open-tubular capillary electrochromatography.</a> J. Chromatogr. A. 1343, 188-194 (2014).</li>
<li>Fu, Y. Y., Yang, C. X., Yan, X. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incorporation+of+metal-organic+framework+UiO-66+into+porous+polymer+monoliths+to+enhance+the+liquid+chromatographic+separation+of+small+molecules%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Commun%22%5BJournal%5D)">Incorporation of metal-organic framework UiO-66 into porous polymer monoliths to enhance the liquid chromatographic separation of small molecules.</a> Chem. Commun. 49, 7162-7164 (2013).</li>
<li>Lin, C. L., Lirio, S., Chen, Y. T., Lin, C. H., Huang, H. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+hybrid+metal-organic+framework-polymeric+monolith+for+solid-phase+extraction%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Eur.+J%22%5BJournal%5D)">A novel hybrid metal-organic framework-polymeric monolith for solid-phase extraction.</a> Chem. Eur. J. 20, 3317-3321 (2014).</li>
<li>Svec, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Porous+polymer+monoliths%3A+Amazingly+wide+variety+of+techniques+enabling+their+preparation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.+A%22%5BJournal%5D)">Porous polymer monoliths: Amazingly wide variety of techniques enabling their preparation.</a> J. Chromatogr. A. 1217, 902-924 (2010).</li>
<li>Monolithic HPLC Columns. , Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.phenomenex.com/onyx">http://www.phenomenex.com/onyx</a> (2015).</li>
<li>Bia Separations. , Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.biaseparations.com/">http://www.biaseparations.com/</a> (2015).</li>
<li>Shekhah, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Step-by-step+route+for+the+synthesis+of+metal-organic+frameworks%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Chem.+Soc%22%5BJournal%5D)">Step-by-step route for the synthesis of metal-organic frameworks.</a> J. Am. Chem. Soc. 129, 15118-15119 (2007).</li>
<li>Shekhah, O., Fu, L., Belmabkhout, Y., Cairns, A. J., Giannelis, E. P., Eddaoudi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Successful+implementation+of+the+stepwise+layer-by-layer+growth+of+MOF+thin+films+on+confined+surfaces%3A+mesoporous+silica+foam+as+a+first+case+study%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Commun%22%5BJournal%5D)">Successful implementation of the stepwise layer-by-layer growth of MOF thin films on confined surfaces: mesoporous silica foam as a first case study.</a> Chem. Commun. 48, 11434-11436 (2012).</li>
<li>Saeed, A., Maya, F., Xiao, D. J., Naham-ul-Haq, M., Svec, F., Britt, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+of+a+highly+porous+coordination+polymer+on+a+macroporous+polymer+monolith+support+for+enhanced+immobilized+metal+ion+affinity+chromatographic+enrichment+of+phosphopeptides%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Funct.+Mater%22%5BJournal%5D)">Growth of a highly porous coordination polymer on a macroporous polymer monolith support for enhanced immobilized metal ion affinity chromatographic enrichment of phosphopeptides.</a> Adv. Funct. Mater. 24, 5797-5710 (2014).</li>
<li>Krenkova, J., Lacher, N. A., Svec, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Control+of+selectivity+via+nanochemistry%3A+Monolithic+capillary+column+containing+hydroxyapatite+nanoparticles+for+separation+of+proteins+and+enrichment+of+phosphopeptides%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Control of selectivity via nanochemistry: Monolithic capillary column containing hydroxyapatite nanoparticles for separation of proteins and enrichment of phosphopeptides.</a> Anal. Chem. 82, 8335-8341 (2010).</li>
<li>Jabeen, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Silica-lanthanum+oxide%3A+Pioneer+composite+of+rare-earth+metal+oxide+in+selective+phosphopeptides+enrichment%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Silica-lanthanum oxide: Pioneer composite of rare-earth metal oxide in selective phosphopeptides enrichment.</a> Anal. Chem. 84, 10180-10185 (2012).</li>
<li>Hussain, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functionalized+diamond+nanopowder+for+phosphopeptides+enrichment+from+complex+biological+fluids%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chim.+Acta%22%5BJournal%5D)">Functionalized diamond nanopowder for phosphopeptides enrichment from complex biological fluids.</a> Anal. Chim. Acta. 775, 75-84 (2013).</li>
<li>Aprilita, N. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Poly%28glycidyl+methacrylate%2Fdivinylbenzene%29-IDA-FeIII+in+phosphoproteomics%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Proteom.+Res%22%5BJournal%5D)">Poly(glycidyl methacrylate/divinylbenzene)-IDA-FeIII in phosphoproteomics.</a> J. Proteom. Res. 4, 2312-2319 (2005).</li>
<li>Lo, C. Y., Chen, W. Y., Chen, C. T., Chen, Y. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+enrichment+of+phosphopeptides+from+tryptic+digests+of+proteins+using+iron+oxide+nanocomposites+of+magnetic+particles+coated+with+zirconia+as+the+concentrating+probes%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Proteom.+Res%22%5BJournal%5D)">Rapid enrichment of phosphopeptides from tryptic digests of proteins using iron oxide nanocomposites of magnetic particles coated with zirconia as the concentrating probes.</a> J. Proteom. Res. 6, 887-893 (2007).</li>
<li>Aryal, U. K., Ross, A. R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enrichment+and+analysis+of+phosphopeptides+under+different+experimental+conditions+using+titanium+dioxide+affinity+chromatography+and+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Rapid+Commun.+Mass.+Spectrom%22%5BJournal%5D)">Enrichment and analysis of phosphopeptides under different experimental conditions using titanium dioxide affinity chromatography and mass spectrometry.</a> Rapid Commun. Mass. Spectrom. 24, 219-231 (2010).</li>
<li>Select Iron Affinity Gel Technical Bulletin. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.sigmaaldrich.com/content/dam/sigma-aldrich/docs/Sigma/Bulletin/p9740bul.pdf">https://www.sigmaaldrich.com/content/dam/sigma-aldrich/docs/Sigma/Bulletin/p9740bul.pdf</a> (2015).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

מונולית הפולימר המקורית מכילה קבוצות פונקציונליות קרבוקסיליות מסוגלת להיקשר למתכות. תיאום אתרי מתכת הראשוניים בחומר המקורי, אנו יכולים לגדול ציפוי PCP (איור 1 א), בשילוב מספר אתרי מתכת נוספים בעיצוב רשת microporous. זה הופך את חומרי MOPH הציגו אטרקטיביים לנוהלי מיצוי או לטיהור שבו מינים מתכתיים מעורבים, כגון טכניקת זיקת כרומטוגרפיה מתכת-יון המשותק (IMAC). הנוהל הכללי באמצעות טור נימים להעשרת phosphopeptides מוצג באיור 1. <p class="jove_content...

פולימרים נקבוביים תיאום (PCPs) הם תרכובות המבוססים על תיאום מרכזי מתכת מקושרים על ידי ligands האורגני עם חוזר גופי תיאום הארכה ב 1, 2 או 3 ממדים שיכולים להיות אמורפי או גבישי 1-3. בשנים האחרונות, המעמד הזה של חומרים נקבוביים משך תשומת לב נרחבת בשל הנקבוביות שלהם גבוהות, tunability הכימי הרחב, והיציבות שלהם. PCPs נחקר עבור מגוון של יישומים, כולל אחסון גז, הפרדת גז, וקטליזה 3-6, ומאוד לאחרונה, היישומים אנליטיים הראשונים של PCPs תוארו 7. בגלל PCPs פונקציונלי כימית והנקבובי גבוהים משופר שלהם היו ממוקד לפוטנציאל העצום שלהם לשיפור תהליכי טיהור והפרדות chromatographic, ומספר הדיווחים הנוגעים לנושא זה פורסמו 7-13. עם זאת, הביצועים של PCPs אינם נמצאים כעת בequivaleרמת NT עם חומרי chromatographic קיימים הנראה בשל דיפוזיה מהירה דרך החללים interparticle גדולים במיטות צפופות של מוצקים אלה בשל המורפולוגיות בדרך כלל בצורה לא סדירה שלהם של החלקיקים או הגבישים שלהם. אריזה הופצה באופן בלתי סדיר זה מובילה לביצועים נמוכים מהצפוי, כמו גם backpressures גבוה טור ומורפולוגיה צורת שיא רצויות 14,15. כדי לפתור את הבעיה של דיפוזיה מהירה דרך החללים בין-חלקיקים ובו זמנית לשפר את הביצועים של PCPs עבור יישומים אנליטיים, הפיתוח של חומר היברידי המבוסס על פולימר מונולית macroporous 16 המכיל את PCP על פני השטח של macropores היית רצוי. פסלי פולימר הם עצמאיים, חומרים חד-חתיכה שיכולה לקיים זרימת הסעה דרך הנקבוביות שלהם, מה שהופך אותם אחת החלופות היעילה ביותר לחרוז אריזה וכבר ממוסחרים בהצלחה על ידי מספר ג<html> ompanies 17,18. פסלי פולימר נקבוביים מבוססים בדרך כלל על פילמור של מונומר וcrosslinker בנוכחות porogens, אשר בדרך כלל תערובות בינאריות של ממסים אורגניים. יש חומרים מונוליטי מתקבלים מבנה microglobular וחדירות נקבוביות וזרימה גבוהות. גישה פשוטה לאחד חומרים אלה כדי להכין מונולית פולימר המכילה PCP מבוססת על התוספת הישירה של PCPs כ- מסונתז בתערובת של פילמור מונולית. גישה זו הביאה לPCPs בעיקר נקברה בתוך פיגום פולימרים, ולא להיות פעיל ליישום נוסף של החומר הסופי 14,15. גישה סינתטית שונה יש צורך בבירור כדי, למשל, לפתח סרטים אחידים של PCPs, או מסגרות מתכת אורגנית גבישים (MOFs) שבו רוב הנקבוביות בתוך הגביש נגישים מmacropores של מונולית הפולימר. לא &quot;&gt; בזאת אנו מדווחים פרוטוקול פשוט להכנת חומר מתכת אורגנית היברידי פולימר (MOPH) המבוסס על פולימרי תמיכת macroporous עם קבוצות מתאימות פונקציונליות להתקשרות של PCPs, אשר יכולה להיות מיושמות בקלות כאחד עצמאי מונולית פולימר -piece בפורמט טור עם תכונות אופטימליות ליישומי זרימה דרך. הליך סינתזת הפולימר ואחריו מבוסס פתרון טמפרטורת חדר פשוט &#160; שיטה לגדול ציפוי PCP על פני השטח הפנימיים של הנקבוביות של מונולית 19-20. כדוגמא הראשונה, אנו מתארים את הכנת סרט פולימר תיאום benzenetricarboxylate ברזל (III) (FeBTC) בתוך פולי macroporous מונולית (חומצת סטירן divinylbenzene-methacrylic). שיטה זו יעילה להכנת אבקות בתפזורת כמו גם עמודות נימים והפרוטוקול המתוארים הוא בקלות ישים לPCPs האחר. כדוגמא לפוטנציאל של MOPHs כחומרים פונקציונליים לזרימת throuיישומי GH, אנחנו מוחלים MOPH FeBTC פיתח המכיל ציפוי צפוף של Fe (III) מרכזים להעשיר phosphopeptides מתערובות חלבון מתעכלים ניצול הזיקה המחייבת של phosphopeptides לפה (III). הפרוטוקול פיתח 21 מורכב משלושה חלקים עיקריים: הכנת תמיכת מונולית פולימר אורגני macroporous; צמיחה של ציפוי PCP על פני השטח של הנקבוביות של מונולית; בקשה להעשרת phosphopeptides.

<table><tbody><tr><td>נימים מצופים פולימיד</td><td>Polymicro Technologies</td><td>TSP100375</td><td>100 &mu; תעודת זהות</td></tr><tr><td>3-(trimethoxysilyl) פרופיל מתאקרילט, 98%</td> <td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>440159</td><td></td></tr><tr><td>סטירן, 99%</td> <td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>W323306</td> דיוויניל בנזן <td>בדרגה טכנית</td></tr><tr><td>, 80%</td> חומצה מתאקרילית <td>414565</td><td></td> <td>סיגמא-אולדריץ</td></tr>'<tr><td>, 98%</td> <td>מלינקרודט</td><td>MK150659</td><td></td></tr><tr><td>טולואן, &ge; 99.5%</td> <td>כימיקלים EMD</td><td>MTX0735-6</td><td></td></tr><tr><td>איזואוקטן, &ge; 99.5%</td> <td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>650439</td><td></td></tr><tr><td>2,2'-אזוביסובוטירוניטריל, 98%</td> <td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>441090</td><td></td></tr><tr><td>תחמוצת אלומיניום (אלומינה בסיסית)</td><td>סיגמא-אולדריץ</td>' <td>199443</td><td></td></tr><tr><td>ברזל (III) כלוריד הקסהידרט, 97%</td> <td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>236489</td><td></td></tr><tr><td>1,3,5-בנזנטריקרבוקסילית, 95%</td> <td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>482749</td><td></td></tr><tr><td>אצטוניטריל, &ge; 99.5%</td> <td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>360457</td><td></td></tr><tr><td>אמוניום ביקרבונט, &ge; 99.5%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>9830</td><td></td></tr><tr><td>חומצה טריפלואורואצטית, &ge; 99%</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>302031</td><td></td></tr><tr><td>אתנול, &ge; 99.8%</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>2854</td><td></td></tr><tr><td>יודואצטמיד, &ge; 99%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I1149</td><td></td></tr><tr><td>Dithiothreitol, &ge; 99%</td> <td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>43819</td><td></td></tr><tr><td>נתרן פוספט דיהידרט מונו-בסיסי, &ge; 99%</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>71505</td><td></td></tr><tr><td>נתרן פוספט דיהידרט דו-בסיסי, &ge; 99%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>71643</td><td></td></tr><tr><td>חומצה זרחתית, &ge; 85%</td> <td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>438081</td><td></td></tr><tr><td>חומצה 2,5-דיהידרוקסיבנזואית, &ge; 99%</td> <td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>85707</td><td></td></tr><tr><td>טריפסין</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>T8003</td><td>לבלב בקר</td></tr> <tr><td>ובטא;-קזאין</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>C6905</td><td>חלב בקר</td></tr><tr><td>קצות פיפטה</td><td>ZipTip Merck Millipore</td><td>ZTC18S096</td><td>C18 שרף</td></tr></tbody></table>

הכנת תיאום מאוד נקבובי פולימר ציפויים על מונוליתים פולימר macroporous להעשרה משופרת של phosphopeptides

Preparation of Highly Porous Coordination Polymer Coatings on Macroporous Polymer Monoliths for Enhanced Enrichment of Phosphopeptides

אנו מתארים פרוטוקול להכנת חומרים היברידיים המבוסס על ציפויים פולימריים נקבוביים מאוד על פני השטח הפנימיים של מונוליתים פולימריים מקרו-נקבוביים. הגישה שפותחה מבוססת על הכנת פולימר מקרו-נקבובי המכיל קבוצות פונקציונליות של חומצה קרבוקסילית וצמיחה מבוקרת מבוססת תמיסה שלב אחר שלב של שכבה של פולימר קואורדינציה נקבובי על פני הנקבוביות של מונוליט הפולימר. להכלאה הפולימרית המתכתית-אורגנית המוכנה יש שטח פנים מיקרופורי ספציפי גבוה. כמות אתרי הברזל (III) מוגברת באמצעות תיאום מתכתי-אורגני על פני הנקבוביות של תומך הפולימר הפונקציונלי. הגידול באתרי מתכת קשור למספר האיטרציות של תהליך הציפוי.
תוכנית ההכנה שפותחה מותאמת בקלות לפורמט עמודה נימית. הפולימר הנקבובי הפונקציונלי מוכן כמונוליט נקבובי חד-בלוק עצמאי בתוך הנימים, ומניב מכשיר הפרדת זרימה עם חדירות זרימה מצוינת ולחץ אחורי צנוע. העמודה ההיברידית של פולימר מתכתי-אורגני הראתה ביצועים מצוינים להעשרת פוספופפטידים מחלבונים מעוכלים וזיהויים לאחר מכן באמצעות ספקטרומטריית מסה של זמן טיסה בלייזר בעזרת מטריצה. פרוטוקול הניסוי המוצג הוא רב תכליתי, וניתן ליישם אותו בקלות על תומכים וציפויים פולימריים אורגניים שונים עם שפע של פולימרים קואורדינציה נקבוביים ומסגרות מתכתיות-אורגניות ליישומי טיהור ו/או הפרדה מרובים.

איור סכמטי של צמיחת PCP על פני השטח הנקבובית של מונולית הפולימר האורגנית מוצג באיור 1. בנתון זה, אנו ממחישים ראשוניים פה (III) אטומים שמרו על פני השטח הנקבובית של מונולית הפולימר המקורית המתואמות לקבוצות פונקציונליות קרבוקסיליות . באמצעות הפרוטוקול מתואר יגנד אורגני במסמך נוסף ופה יונים (III) מתווספים אל פני השטח, בעיצוב רשת תיאום נקבובי בתוך מונולית הפולימר. איור 1 מראה גם סכמטי שימוש בעמודת MOPH נימים מוכנה כתמיכת זרימה דרך ל העשרת phosphopeptid...

מוצג הליך להכנת אמצעי הפרדה היברידיים נקבוביים המורכב ממונוליט פולימרי מקרו-נקבובי המצופה פנימית על ידי פולימר קואורדינציה מיקרו-נקבובי בעל שטח פנים גבוה.

הכנת תיאום מאוד נקבובי פולימר ציפויים על מונוליתים פולימר Macroporous להעשרה משופרת של Phosphopeptides

We describe a protocol for the preparation of hybrid materials based on highly porous coordination polymer coatings on the internal surface of macroporous ...

המטרה הכוללת של הניסוי הבא היא להכין חומר תמיכה חדש בעל ביצועים משופרים בסמירה סלקטיבית של פוספו-פפטידים. דבר זה מושג על ידי הכנה נכונה של מונולית קפילרי פולימרי נקבובי בעל קבוצות פונקציונליות מתאימות. ראשית, מין מתכתי מקובע לקבוצות הפונקציונליות של המונולית הפולימרי, מה שהופך את התמיכה לסלקטיבית לסמירה של פוספו-פפטידים.בשלב הבא, ביצוע צמיחה של מספר שכבות של מסגרת מתכת-אורגנית (metal organic framework) באופן מדורג, במטרה להגדיל את מספר אתרי המתכת, ובכך להגביר את הסלקטיביות לפספו-פפטידים. התוצאות מראות סלקטיביות משופרת למיצוי פספו-פפטידים מפירוקי חלבונים, בהתבסס על ספקטרומטריית מסות מסוג MALDI-TOF (matrix assisted laser desorption ionization, time of flight mass spectrometry). העשרה של פפטידים פוספוריליים מתבצעת בדרך כלל באמצעות כרומטוגרפיית זיקה למטאל (metal ion affinity chromatography), המבוצעת על חלקיקי סיליקה קונבנציונליים או על חלקיקי פולימר, הארוזים בעמודה כרומטוגרפית.החומר שלנו משלב את היתרונות של מונולית פולימרית מקרופורוזית, בעלת תכונות הובלת מסה טובות, עם קיבולת הקישור הגבוהה של מסגרת מתכת-אורגנית (metal organic framework). אנו משיגים זאת על ידי גידול רצפי של המסגרת המתכת-אורגנית מפני השטח של המונולית, כך שבסופו של דבר נקבל שכבות מרובות של קווי מתכת הזמינים לאינטראקציה עם האנליט. הדגמה חזותית של הכנת המונולית הפולימרית ושל גידול המסגרת המתכת-אורגנית היא חשובה, שכן קשה מאוד ללמוד אותם. ישנם מספר שלבים חשובים שיש להקפיד עליהם כדי להגיע למונולית בעלת תכונות פני שטח ונקבוביות טובות.لتחילת התהליך, חתכו שני מטרים של קפילרית סיליקה מותכת (fused silica) מצופה פוליאמיד בעלת קוטר פנימי של 100 מיקרון, חברו אותה למזרק זכוכית של 25 מיליליטר ושטפו את הקפילרית באצטון. לאחר מכן, הסירו את האצטון על ידי שטיפת הקפילרית במים. בשלב הבא, הניחו על משאבת המזרקים מזרק זכוכית של 250 מיקרוליטר המלא בתמיסת נתרן הידרוקסיד מימית בריכוז 0.2 מולארי, והזרים את התמימה דרך הקפילרית בקצב של 25 מיקרוליטר לדקה למשך 30 דקות כדי להפעיל את ציפוי הסיליקה הפנימי.לאחר 30 דקות, שטפו את הנימי במים עד שהנזיל היוצא יהיה ניטרלי. השתמשו בניירות pH כדי לוודא שזרימת הנוזל ניטרלית. לאחר מכן, טענו את המזרק במימי hydrogen chloride בריכוז 0.2 molar והזרים את התמיסה דרך הנימי בקצב של 25 microliters לדקה כדי לפרוטונציה של קבוצות ה-ciol; לאחר 30 דקות של זרימה, שטפו שוב את הנימי במים עד שהזרימה תהיה ניטרלית.ברגע שה-pH ניטרלי, שטפו את הנימיים באמצעות מזרק של 250 microliter מלא ב-100% ethanol. לאחר מכן, הזרים תמיסה של 20% של trimethyl propyl methacrylate בתוך ethanol בקצב של 25 microliters לדקה למשך שעה אחת כדי לבצע פונקציונליזציה של הפני השטח עם קבוצות ויניל. לאחר מכן, שטפו את הנימיים באצטון וייבשו אותם בזרם של חנקן.השאירו את הדגימות לנוח בטמפרטורת החדר למשך לילה, ולאחר מכן חתכו אותן למקטעים באורך 20 centimeter. הכינו את תערובת הפולימריזציה במבחנה מזכוכית של one milliliter עם ספטום גומי כפי שמתואר בפרוטוקול הטקסט הנלווה. הוסיפו 1%A IBN ביחס למונומרים כיוזם ובצעו סוניקציה לתערובת למשך 10 דקות.בשלב הבא, חברו קפילרית סיליקה שאינה פונקציונלית לזרם חנקן והחדירו אותה דרך ספטום הגומי אל תוך תערובת הפולימריזציה. שחררו מעט את מכסה הבקבוק והעבירו בועות חנקן באיטיות דרך התערובת במשך 10 דקות. לאחר 10 דקות, הרימו את קפילרית זרם החנקן מתערובת הפולימריזציה אל החלל העליון (headspace) של הבקבוק וסגרו את המכסה היטב.החדירו את אחת הקפילרות הפונקציונליות דרך הספטום אל תוך תערובת הפולימריזציה. השתמשו בעודף הלחץ הנוצר על ידי החנקן כדי לדחוף את תערובת הפולימריזציה מעלה אל תוך הקפילרה הפונקציונלית. אפשרו לכמה טיפות מתערובת הפולימריזציה לזרום מפתח היציאה של הקפילרה כדי להבטיח שהיא מלאה לחלוטין, ולאחר מכן סגרו אותה באמצעות ספטום גומי.הוצאו את הנימיות מהבקבוקון בזהירות רבה וסגרו את פתח הכניסה באמצעות ספטום גומי. הניחו את התערובת שנמצאת בנימיות באמבט מים מחומם בטמפרטורה של 60 °C למשך שש שעות לצורך פולימריזציה. עם הסיום, צננו את הנימיות לטמפרטורת החדר ולאחר מכן גזרו מספר מילימטרים משני קצות הנימיות. לאחר מכן, השתמשו במשאבת HPLC כדי לשטוף את העמודה ב-Acetonitrile בקצב של 4 µL לדקה למשך 30 דקות.פעולה זו תסיר מונומרים שאינם תגובתיים וחומרי עיצוב לקויים. בדקו את הלחץ האחורי של עמודת הנימי. לאחר מכן, שטפו את המונולית הנימית במחזורים עם الريאגנטים המוצגים כאן כדי לגדל את הציפוי המתכתי-אורגני הסופי.עובי הציפוי נקבע על ידי מספר המחזורים שבוצעו. שטפו את הקפילריות בציפוי המתכת האורגני שהוכן באמצעות 100 µL של תערובת ביחס של ארבעה לאחד של acetonide trial ו-0.1% של trior acetic acid מימי.במשך 30 דקות, שטפו שוב את הפפטידים שאינם מפוספורים באמצעות תערובת של acetyl NI trial וחומצה טריפלואוראצטית מימית 0.1% ביחס של ארבעה לאחד, למשך 10 דקות בקצב זרימה של 1 µL לדקה. שטפו במים למשך 10 דקות בקצב זרימה של 1 µL לדקה. אלוטו את הפספו-פפטידים באמצעות תמיסת בופר פוספט 250 µM ב-pH 7 על ידי דחיפתה דרך הנימי בקצב של 1 µL לדקה למשך 15 דקות, אספו את האלואט למבחנה ובצעו התפסלה לתמיסה באמצעות פרוטוקול סטנדרטי.בשלב הבא, הכין תמיסה בריכוז של 2 mg/mL של 2,5-dihydroxybenzoic acid במתנול, וערבב 2 µL מתמיסה זו עם 2 µL מתמיסת הפספו-פפטיד שהוזכרה. בעזרת קצה פיפט, טפטף תערובת זו ישירות על לוחית matrix assisted laser desorption ionization, והמתן עד לייבוש מלא של הנקודה. נתח את הנקודות באמצעות matrix assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry. לבסוף, רגנר את העמודה על ידי שטיפה יסודית במים, ולאחריה במתנול, בקפילריות המודגמות בשכבות מרובות של ברזל זמין.שלוש קבוצות הן אידיאליות לשימוש בכרומטוגרפיית ספיחה של יוני מתכת מקובעים (immobilized metal ion affinity chromatography); מוצגים כאן ספקטרומים שהתקבלו מחלבונים שעברו עיכול לפני ואחרי העשרה, המראים סלקטיביות מרשימה עבור 12 פוספו-פפטידים שונים. ניסויי אפיון מייצגים מספקים מידע בעל ערך על הופעתם של נקבוביות חדשות. כאן מופיעה תמונה של מונולית באבקה גסה לאחר 30 מחזורי פולימר קואורדינציוני נקבובי, המכונים מחזורי PCP, באמצעות מיקרוסקופ אלקטרונים סורק.לאחר 30 מחזורי PCP, נמצא כי רוחב הנקבים בחומר היה קטן מ-3 ננומטרים בקוטר בהשוואה לפולימר הגולמי. להיבריד יש שטח פנים מוגדל עם נקבים קטנים. דבר זה מוביל לעלייה בספיגת חנקן בטווח של לחצים שונים, כפי שנמדד באמצעות ספקטרוסקופיית אינפרא-אדום בטרנספורמציה של פוריה (Fourier transform infrared spectroscopy).ההטמעה הראשונית של הקבוצות הפונקציונליות קרבוקסיליות הייתה גלויה, וכך גם צמיחת הציפוי לאחר 10, 20 ו-30 מחזורי PCP. לבסוף, נעשה שימוש בניתוח תרמו-גרבימטרי למדידת כמות אתרי המתכת הנוספים שהצטברו בכל מחזור. מוצג כאן ניתוח גרבימטרי לאורך טווח טמפרטורות, המאשש את נוכחותם של מספר גדל של אתרי מתכת עם עלייה במספר המחזורים.בעקבות פרוטוקול זה, ניתן לפתח הליך דומה עבור מרכזי מתכת שונים בליגנדים אורגניים, במטרה להשיג הפרדות יעילות של אנליטים שונים בהתבסס על זיקתם למסגרת (framework) מסוימת. אני מאמין שחומרים מרוכבים כמו השלבים שלנו, המשלבים פולימרים מקרו-נקבוביים עם מסגרות מתכת-אורגניות, טומנים בחובם פוטנציאל רב בתחום מדע ההפרדה, כיוון שהם יכולים לשפר משמעותית את הסלקטיביות, את קיבולת הקישור ואת היעילות הכללית של ההפרדות, הן בקנה מידה אנליטי והן בקנה מידה פרפרטיבי.

preparation-highly-porous-coordination-polymer-coatings-on

Research

JoVE Journal

Chemistry

כימיה

השתמשנו פלזמה משופרת שיקוע כימי להפקיד שכבות דקות החל ננומטר ל -100 ננומטר כמה כמה על חלקיקים בגודל ננו של חומרים שונים. אנחנו לחרוט לאחר מכן את חומר הליבה לייצר nanoshells חלולים אשר חדירות נשלטת על ידי עובי הקליפה. אנחנו מאפיינים את החדירות של ציפויים אלו כדי מומסים קטנים להוכיח כי מחסומים אלה יכולים לספק שחרור מתמשך של חומר הליבה על פני כמה ימים.

אנקפסולציה וחדירות מאפיינים של חלקיקים פלזמה polymerized הולו

סרטון זה מדגים העשרה מבוססת טיטניום דו-חמצני של פוספופפטידים המופקים מרקמת הגידול בערמונית. פוספו-פפטידים מועשרים אלה יכולים לשמש ליישומים במורד הזרם, כגון אפיון חלבונים, כדי להבין מסלולי איתות תאיים המעורבים בהתקדמות סרטן הערמונית.

העשרה על בסיס טיטניום דו-חמצני של פוספופפטידים: שיטה לבידוד סלקטיבי של פוספפטידים מספריית הפפטידים:

בסרטון זה ידגים שיטה מהירה, יעילה לmethacrylate פולי (אתילן גליקול), המאפשר polymerizations שרשרת וסינתזת הידרוג'ל. זה ידגים כיצד להציג את פונקציות methacrylamide דומות לפפטידים, שיטות אנליטיות נפוצות פרטים כדי להעריך את יעילות functionalization, לספק הצעות לפתרון בעיות ושינויים מתקדמים, ולהדגים טכניקות אפיון הידרוג'ל טיפוסיות.

Functionalization בסיוע מיקרוגל של פולי (אתילן גליקול) ופפטידים על השרף לשימוש בPolymerizations שרשרת וגיבוש Hydrogel

אנו מדווחים על פרוטוקולים ל"פילמור" סוגים שונים של ננו-חלקיקי מתכת עטופים בפולימר לשרשראות ארוכות של "הומו-" ו"קו-פולימרים".

באמצעות Polystyrene-<em&gt; בלוק</em&gt; -poly (חומצה אקרילית) -coated מתכת חלקיקים כמו מונומרים להומו- ושיתוף פילמור

במאמר זה אנו מתארים את הסינתזה הפנימית של פולימרים מיקרו-נקבוביים מצומדים (CMP) על מצעי הקרבה, ואת פירוק המצע להכנת ננו-ממברנות CMP עצמאיות. בנוסף, נתאר כיצד ניתן להעביר את הננו-ממברנות השבריריות למצעים אחרים.

סינתזה והעברה של אוב Nanomembranes פולימר Microporous Conjugated שכבה אחר שכבה

דבקות תאים היא המפתח לגישות רבות במחקר ביו-חומרים והנדסת רקמות. טכניקה שלב אחר שלב מוצגת באמצעות כימיה רטובה לשינוי פני השטח של הפולימר החשוב PTFE עם פפטידים.

כימיה רטובה פפטיד קיבוע על polytetrafluoroethylene עבור Cell-הדבקה משופרת

הסינתזה של חומרים פעילי שטח פפטיד מבוססי פוליאמין (PPAs) הוא אתגר משמעותי בשל נוכחותם של nitrogens אמין מרובים, אשר דורשת שימוש מושכל של הגנה על קבוצות כדי להסוות את תגובתי פונקציות אלה. בנייר זה, אנו מתארים שיטה נתיישב עבור הכנת אלה סוג חדש של מולקולות וההספק עצמית.

פרוטוקול נתיישב לסינתזה של הרכבה עצמית מבוסס פוליאמין פפטיד חומרים פעילי שטח (PPAs), Biomaterials קשורים

פרוטוקול זה מתאר הליך כדי לחלץ ולהעשיר את phosphopeptides סרטן הערמונית שורות תאים או רקמות עבור ניתוח של phosphoproteome באמצעות פרוטאומיקס מבוססי ספקטרומטר מסה.

העשרה Phosphopeptide בשילוב עם ספקטרומטר מסה ללא תווית כמותיים כדי לחקור את Phosphoproteome סרטן הערמונית

פרוטוקול מפורט מתואר את ההפרדה, זיהוי של אפיון proteoforms דגימות חלבון באמצעות נימי אזור אלקטרופורזה-ספקטרומטריית electrospray יינון-טנדם ספקטרומטר מסה (CZE-ESI-MS/MS). הפרוטוקול יכול לשמש עבור אפיון ברזולוציה גבוהה proteoforms דגימות חלבון וזיהוי בקנה מידה גדול של proteoforms בדגימות פרוטאום מורכבים.

בקנה מידה גדול פרוטאומיקס מלמעלה למטה באמצעות ספקטרומטר מסה של טנדם אלקטרופורזה של אזור נים

פרוטוקול עבור הכנת פוליפוני (pentafluorophenyl אקרילט) (חרוזים סיליקה poly(PFPA)) הושתל מוצג. לאחר מכן, השטח functionalized poly(PFPA) הוא מרותק למיטה עם נוגדנים, בעבר בהצלחה לצורך הקמת מכשול ההפרדה חלבון באמצעות immunoprecipitation.

הכנת חרוזים2 Poly(pentafluorophenyl acrylate) Functionalized SiO לטיהור חלבון

פרוטוקול מוצג לסינתזה של תרופות מקודד מידע ועבור הרכבה עצמית מכוונת של הפטואידים האלה לתוך סולמות מולקולריים באמצעות אמינים ו-aldehydes כזוגות דינמיים בעלי הקשר הדינמי, לואיס חומצי נדיר-אדמה triflates מתכת כריאגנטים רב תפקידים.

סינתזה של מידע-מיסב פטואידים והרכבה עצמית בימוי דינמי

למד הכנת מונולית פולימרי נקבובי גדול עם ציפוי פולימר תיאום נקבובי קטן להעשרה סלקטיבית של פוספופפטידים. שיטה זו משפרת יעילות הפרדה וקיבולת קשירה בפרוטאומיקה וביוכימיה אנליטית.

הכנת תיאום מאוד נקבובי פולימר ציפויים על מונוליתים פולימר Macroporous להעשרה משופרת של Phosphopeptides

גלה סרטונים נוספים