Name: פשוט וחוש ריח בדיקה לעכברים בסיוע מחשב (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-06-15T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 40 s
Description: למדו שיטה פשוטה לבדיקת חוש הריח בעכברים באמצעות ניתוח וידאו ממוחשב. השיטה מאפשרת הערכת העדפות, הימנעות ורגישות לריחות חדשים בסביבה מוכרת לבעלי החיים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו ממומנת על ידי הקרן הלאומית השוויצרית (31_138429) וקרן סינפסיס לתמיכה במחקר על מחלת האלצהיימר.

כל הליכי בעלי החיים הנן בהתאם להנחיית האיחוד האירופי 2010/63 / האיחוד האירופי על ההגנה על בעלי החיים המשמשים למטרות מדעיות ואושרו על ידי הוועדה המקומית טיפול בבעלי חיים (קנטון פריבורג, שוויץ). 1. הכנת בעלי החיים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חיות ניסוי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבצע ניסויים בסוג מבוגר זכר פראי ועכברים הטרנסגניים (C57BL / 6 רקע) של 3-5 חודשים של גיל. שלוש הקבוצות של עכברים מתאימות לבקרות littermate הסוג בר (קבוצה, Jagged1 flox / flox 19) ושני קווים מותנים KO עכבר (הקבוצה B, ו- C Jagged1ncKO, Jagged1gcKO). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכברי בית בתנאי מעבדה סטנדרטיים בחדר מאוורר, עם מחזור כהה / אור מבוקר 12 שעות ומספקים כרצונך מודעת מזון ומים. </li></ol></li></ol> 2. הגדרת ניסוי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זירת ניסוי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לזירת הניסוי, להשתמש בעכבר בכלוב מעוקר נקי (אורך סנטימטר 36 x 2גובה 0.5 סנטימטרים רוחב X 13.5 סנטימטרים) (איור 1 א). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הקצאה כל עכבר לכלוב ממוספר עם מצעים טריים, 3 סנטימטר. אם כלובי שימוש חוזרים, כמו במבחן רגישות הריח, לנקוט בצעדים הבאים כדי למנוע זיהום צולב בין ריחות ועכברים. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סמן את צד המים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נקה את הקירות צרים של הכלובים עם שני מסמכי הרקמה ריססו עם 70% אתנול, אחד לכל צד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להיערם כלובים לפי גנוטיפ של העכברים ולאחסן באופן זמני מתחת למכסת מנוע למינרית. </li></ol></li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מצלמה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הר מצלמה על חצובה מותאמת אישית במטרה על 58 סנטימטר מהחלק התחתון של הכלוב (איור 1 א). לתקן את המיקום של חצובה והכלוב ולתחום עם סימנים כדי לאפשר למצלמה כדי להיות מרוכזת בחלק העליון של הכלוב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קלטת קטעים וידאו ב 320 פיקסלים x 240 פיקסלים, 15.08 פריימים לשניה כקבצי MOV. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ריחות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Resuspend scenTS, כאשר הצביעו, בממס שבו הם מסיסים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחמאת הבוטנים שימוש מבחן העדפה. Resuspend חמאת הבוטנים בשמן בוטנים (10% w / v). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשימוש במבחן הימנעות חומצת 2-Methylbutyric (2-MB) טהורה (98%). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבדיקת הרגישות, להשתמש בשתן נקבה מאותו המושבה העכבר והרקע (C57BL / 6). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנוחיות לאסוף את השתן 1-2 ימים לפני בדיקת חוש הריח. לרסן והחזק את העכבר מתחת למכסת המנוע עם הבטן שלה מעל לרשת הכלוב. תחת רשת כלוב מקום בצלחת פטרי פלסטיק כדי לאסוף את הטיפות של שתן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאסוף את השתן מכל נשים בצינור 1.5 מ&quot;ל ומערבבים את כל דגימות השתן לנרמל לשונות בין בעלי החיים. חנות ב -20 ° C עד שימוש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביום של הניסוי, להפשיר את השתן ולבצע 4 דילולים במים מזוקקים פעמיים בגורם לדילול של 10 (01:10, 1: 100; 1: 1,000; 1: 10,000). </li></ol></li></ol></li></ol>3. בדיקת חוש הריח הערה: בריחות זה פרוטוקול שנבחרו במכוון שנתפסים כמשיכה חזקה (חמאת בוטנים ושתן נקבה) או דוחה חזק (חומצת 2-MB) 15. חשוב לבצע את ההעדפה ומבחני רגישות לריחות נעימים לפני בדיקת ההימנעות כדי לשלול את האפשרות של התערבות בהתנהגות חוש הריח. עם זאת, למען הפשטות, בנייר, מבחן העדפה והימנעות זו תהיה גם תאר במבחן את התפיסה. כל מפגש מתחיל בהתנהגות שלב התרגלות. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שלב התרגלות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את החיה בכלוב שהוקצה הנקי ולתת לו לחקור במשך 5 דקות (איור 1). כיוון שהסביבה של הכלוב הניסיוני מוכרת לכלוב בבית, זמן קצר זה מספיק כדי לאפשר להתרגלות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם בדיקת הרגישות הושלמה ביום אחד, לבצע הרגלה רק פעם אחת לפני האפליקציותn של הריח המדולל הגבוה ביותר. אם בדיקת הרגישות מתבצעת בימים שונים, בכל יום יש צורך בשלב התרגלות על כלוב נקי חדש. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מבחן תפיסה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחרי ההתרגלות, להפעיל את המצלמה ופיפטה מייד 60 μl של הריח נעים (חמאת בוטנים) ו -60 μl של ריח הניטרלי (מי ברז) על הקירות נגדיים של הכלוב בכ -10 סנטימטר מהחלק התחתון (איור 1 ג). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בואו העכבר לחקור את הריחות למשך 2 דקות (1D איור). לאחר מכן, כבה את המצלמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשלב זה, להמשיך במתחיל את העכבר הבא מהשלב ההתרגלות. בצע את בדיקת ההימנעות בדיוק באותו אופן על ידי יישום 60 μl של הריח הדוחה (חומצת 2-MB) ו -60 μl של מים. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מבחן רגישות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להעריך את סף המשיכה של עכברי זכרים להגדלת ריכוזים של שתן נקבה לפי הסדר הבא: 1: 10,000; 1: 1,000; 1: 100; 1:10 ושתן טהור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחרי ההתרגלות, לחשוף כל עכבר לדילול הגבוה ביותר pipetted על ידי הנסיין כפי שתואר לעיל ב3.2.1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רשום את התנהגות הגישוש של שתן לעומת מים, בתוך מסגרת זמן 2 דקות במצלמת וידאו. אחרי כל שנתוני העכברים נבדקים לדילול הגבוה ביותר (1: 10,000), לחשוף לריכוז גבוה יותר של שתן, כפי שצוין לעיל. </li></ol></li></ol> 4. הודעה-הוק ניתוח נתונים הערה: כל הבדיקות התנהגותיות תיארו מעובדות פוסט הוק ביצוע הוראות ניתוח נתונים. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתח MOV קבצים בImageJ למערכות Windows <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התקנה מהירה זמן עבור Java תוך שימוש בהגדרות המותאמות אישית מhttp://www.apple.com/quicktime/download. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התקן את תוסף הזמן המהיר מאתר ImageJ (http://rsb.info.nih.gov/ij/plugins/qt-capture.html). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לייבא QTJava.zip (C: Program Files QuickTime QTSystem) לextens הספרייהיון של ImageJ (.ImageJ JRE lib שלוחה). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עותק גם QTJava.zip בתיקיית התוספים ושנה את שמו כQTJava.jar. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התקן את ששת התסריטים מצורפים בתיקיית מאקרו (ImageJ plugins מאקרו). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ImageJ הפתוח ולקמפל ולהריץ את תוסף הזמן המהיר, לאחר מכן קרוב ImageJ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתח מחדש ImageJ ולפתוח את קובץ MOV באמצעות קובץ&gt; יבוא&gt; באמצעות זמן מהיר. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התאמת וידאו <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע שקובץ הווידאו נפתח בImageJ, לחתוך את הווידאו על מנת לקבל חקר 2 דקות קבועות מרגע שהנסיין יש pipetted odorants לתוך הכלוב (T0). זהה את המסגרת המתאימה לT0 ולהסיר את המסגרות הקודמות באמצעות מרווחים של 1 (תמונת ImageJ מסיר ערימות ToolsSlice). השתמש באותה פקודה למחוק את כל המסגרות עולות חקר 2 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא כי הכלוב הוא מרוכז ואם יש צורך להשתמש התמונה&gt; Transform&gt; הפקודה סובב כדי ליישר אותו. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רְאֵהעיבוד o הערה: עיבוד וידאו הוא באופן מלא בסיוע מחשב ומשתמש בפקודות פקודות מאקרו מלוות מאמר זה. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להגביל את האזור על הכלוב של x 218 פיקסלים בגודל 127 פיקסלים להפעיל את המאקרו שלב 1 מ&gt; מאקרו פקודת Plugin&gt; הפעלה. הזז את המלבן הקבוע מעל הכלוב (איור 2, שלב 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חתוך את האזור של הכלוב באזור של העניין (ROI) באמצעות מאקרו שלב 2 (איור 2, שלב 2). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש מאקרו שלב 3 כדי לחלץ את תמונת העכבר מן הרקע על ידי הקצאת אות סף, despeckling וסינון שונות האות. ערכי הפלט בעלילת ציר Z מציינים את הערכים האפורים הממוצעים, המתאימים לעוצמת צל העכבר נע בתוך את ההחזר על ההשקעה של &quot;קאמרי מים&quot; במהלך חקירת 2 דקות. העתק את התוצאות לגיליון עבודה בשם פי את ההחזר על ההשקעה בקובץ גיליון אלקטרוני (איור 2, שלב 3). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש מאקרו שלב 4 ללחלץ את הערכים האפורים הממוצעים של העכבר בהחזר על ההשקעה &quot;קאמרי ריח&quot;. העתק את התוצאות לגיליון עבודה בשם פי את ההחזר על ההשקעה באותו קובץ גיליון אלקטרוני כמו ב4.3.3 (איור 2, שלב 4). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להגביל את הניתוח של תנועת העכבר ב&quot; היקף המים &quot;החזר על השקעה נוספת להשתמש במאקרו שלב 5. העתק את התוצאה על גיליון העבודה בשם פי את ההחזר על ההשקעה באותו קובץ גיליון אלקטרוני כמו ב4.3.3 (איור 2, שלב 5). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להגביל את הניתוח של תנועת העכבר ב&quot; היקף הריח &quot;החזר על ההשקעה להשתמש במאקרו שלב 6. העתק את התוצאה על גיליון העבודה בשם פי קובץ הגיליון האלקטרוני החזר השקעה כמו ב4.3.3 (איור 2, שלב 6). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעבד את כל קטעי הווידאו ולבדוק עקביות במספר המסגרות לבעלי חיים. כאן, להקליט את כל בעלי החיים ל1,810 מסגרות המתאימות לפגישת חקר 2 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לכל חיה ולכל סוג ROI מסגרות עם VA האפור הממוצעlues גדול יותר מאשר 0. לחלק את מספר המסגרות על ידי הערכים מקבילים לשנייה 1 ולקבל את שניות בילו בכל החזר על השקעה. </li></ol></li></ol> 5. ניתוח סטטיסטי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור כל בדיקה לוודא הומוגניות של שונות בתוך קבוצות / גנוטיפים על ידי הבדיקה של ברטלט באמצעות הנוסחא נגיש בhttp://www.real-statistics.com/one-way-analysis-of-variance-anova/homogeneity-variances/. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במבחן המשיכה והימנעות, לבצע השוואות בין הפעמים בילו במים לעומת ריח בתוך קבוצה אחת באמצעות מבחן t של סטודנט שאינו-כיווני בהנחת סטיות שווה או לא שווה בהתאם לתוצאות של הבדיקה של ברטלט. השווה את הזמנים בילו עם ריחות מופחתים לפי הזמן בילה במים בין גנוטיפים על ידי כיוון אחד ANOVA עם מבחן פוסט הוק-של Bonferroni. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בבדיקת הרגישות לנתח השוואות של הזמן בילה עם ריח מופחתים הזמן בילו עם water בין קבוצות בדילולים ספציפיים של שתן על ידי כיוון אחד ANOVA עם מבחן פוסט הוק-של Bonferroni. השווה את הרגישות בין קבוצות לריכוזי ריח גדלו ב 2-Way ANOVA עם חזרות עם מבחן פוסט הוק-של Bonferroni. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אינטראקציה בין גנוטיפים וטיפולים במבחן המשיכה והימנעות נחקרות על ידי 2-way ANOVA עם מבחן פוסט הוק-של Bonferroni. </li></ol>

<ol><li>Doty, R. L., Kamath, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influences+of+age+on+olfaction%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Cognitive+Science%22%5BJournal%5D)">The influences of age on olfaction: a review.</a> Cognitive Science. 5, 20(2014).</li>
<li>Mesholam, R. I., Moberg, P. J., Mahr, R. N., Doty, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfaction+in+neurodegenerative+disease%3A+a+meta-analysis+of+olfactory+functioning+in+Alzheimer%E2%80%99s+and+Parkinson%E2%80%99s+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Neurology%22%5BJournal%5D)">Olfaction in neurodegenerative disease: a meta-analysis of olfactory functioning in Alzheimer’s and Parkinson’s diseases.</a> Archives of Neurology. 55 (1), 84-90 (1998).</li>
<li>Moberg, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+Dysfunction+in+Schizophrenia%3A+A+Qualitative+and+Quantitative+Review%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropsychopharmacology%22%5BJournal%5D)">Olfactory Dysfunction in Schizophrenia: A Qualitative and Quantitative Review.</a> Neuropsychopharmacology. 21 (3), 325-340 (1999).</li>
<li>Kovács, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+olfactory+dysfunction+in+aging+and+neurodegenerative+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Ageing+Research+Reviews%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of olfactory dysfunction in aging and neurodegenerative disorders.</a> Ageing Research Reviews. 3 (2), 215-232 (2004).</li>
<li>Barrios, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfaction+and+neurodegeneration+in+HD%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroreport%22%5BJournal%5D)">Olfaction and neurodegeneration in HD.</a> Neuroreport. 18 (1), 73-76 (2007).</li>
<li>Doty, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfaction+in+Parkinson%E2%80%99s+disease+and+related+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiology+of+Disease%22%5BJournal%5D)">Olfaction in Parkinson’s disease and related disorders.</a> Neurobiology of Disease. 46 (3), 527-552 (2012).</li>
<li>Doty, R. L., Shaman, P., Dann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+the+University+of+Pennsylvania+Smell+Identification+Test%3A+a+standardized+microencapsulated+test+of+olfactory+function%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology+%26+Behavior%22%5BJournal%5D)">Development of the University of Pennsylvania Smell Identification Test: a standardized microencapsulated test of olfactory function.</a> Physiology & Behavior. 32 (3), 489-502 (1984).</li>
<li>Devanand, D. p, et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+Deficits+in+Patients+With+Mild+Cognitive+Impairment+Predict+Alzheimer%E2%80%99s+Disease+at+Follow-Up%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Olfactory Deficits in Patients With Mild Cognitive Impairment Predict Alzheimer’s Disease at Follow-Up.</a> American Journal of Psychiatry. 157 (9), 1399-1405 (2000).</li>
<li>Conti, M. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Odor+Identification+Deficit+Predicts+Clinical+Conversion+from+Mild+Cognitive+Impairment+to+Dementia+Due+to+Alzheimer%E2%80%99s+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Clinical+Neuropsychology%22%5BJournal%5D)">Odor Identification Deficit Predicts Clinical Conversion from Mild Cognitive Impairment to Dementia Due to Alzheimer’s Disease.</a> Archives of Clinical Neuropsychology. 28 (5), 391-399 (2013).</li>
<li>Keller, A., Vosshall, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Better+Smelling+Through+Genetics%3A+Mammalian+Odor+Perception%5BTitle%5D)+AND+%22Current+opinion+in+neurobiology%22%5BJournal%5D)">Better Smelling Through Genetics: Mammalian Odor Perception.</a> Current opinion in neurobiology. 18 (4), 364-369 (2008).</li>
<li>Brai, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Notch1+activity+in+the+olfactory+bulb+is+odour-dependent+and+contributes+to+olfactory+behaviour%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Notch1 activity in the olfactory bulb is odour-dependent and contributes to olfactory behaviour.</a> European Journal of Neuroscience. 40 (10), 3436-3449 (2014).</li>
<li>Larson, J., Hoffman, J. S., Guidotti, A., Costa, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+discrimination+learning+deficit+in+heterozygous+reeler+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Olfactory discrimination learning deficit in heterozygous reeler mice.</a> Brain Research. 971 (1), 40-46 (2003).</li>
<li>Alonso, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+Discrimination+Learning+Increases+the+Survival+of+Adult-Born+Neurons+in+the+Olfactory+Bulb%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Olfactory Discrimination Learning Increases the Survival of Adult-Born Neurons in the Olfactory Bulb.</a> The Journal of Neuroscience. 26 (41), 10508-10513 (2006).</li>
<li>Wesson, D. W., Keller, M., Douhard, Q., Baum, M. J., Bakker, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+urinary+odor+discrimination+in+female+aromatase+knockout+%28ArKO%29+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Hormones+and+behavior%22%5BJournal%5D)">Enhanced urinary odor discrimination in female aromatase knockout (ArKO) mice.</a> Hormones and behavior. 49 (5), 580-586 (2006).</li>
<li>Kobayakawa, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Innate+versus+learned+odour+processing+in+the+mouse+olfactory+bulb%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Innate versus learned odour processing in the mouse olfactory bulb.</a> Nature. 450 (7169), 503-508 (2007).</li>
<li>Witt, R. M., Galligan, M. R., Despinoy, J., Segal, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+Behavioral+Testing+in+the+Adult+Mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments+JoVE%22%5BJournal%5D)">Olfactory Behavioral Testing in the Adult Mouse.</a> Journal of Visualized Experiments JoVE. (23), (2009).</li>
<li>Lee, A. W., Emsley, J. G., Brown, R. E., Hagg, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Marked+differences+in+olfactory+sensitivity+and+apparent+speed+of+forebrain+neuroblast+migration+in+three+inbred+strains+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Marked differences in olfactory sensitivity and apparent speed of forebrain neuroblast migration in three inbred strains of mice.</a> Neuroscience. 118 (1), 263-270 (2003).</li>
<li>Page, D. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Computerized+assessment+of+social+approach+behavior+in+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Behavioral+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Computerized assessment of social approach behavior in mouse.</a> Frontiers in Behavioral Neuroscience. 3, 48(2009).</li>
<li>Nyfeler, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Jagged1+signals+in+the+postnatal+subventricular+zone+are+required+for+neural+stem+cell+self-renewal%5BTitle%5D)+AND+%22Embo+J%22%5BJournal%5D)">Jagged1 signals in the postnatal subventricular zone are required for neural stem cell self-renewal.</a> Embo J. 24 (19), Available from:
	
 <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?cmd=Retrieve&db=PubMed&dopt=Citation&list_uids=16163386"">http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?cmd=Retrieve&db=PubMed&dopt=Citation&list_uids=16163386"</a> 3504-3515 (2005).</li>
<li>Tong, M. T., Peace, S. T., Cleland, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Properties+and+mechanisms+of+olfactory+learning+and+memory%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Behavioral+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Properties and mechanisms of olfactory learning and memory.</a> Frontiers in Behavioral Neuroscience. 8, (2014).</li>
<li>Steinlechner, S. Chapter 2.12 - Biological Rhythms of the Mouse. The Laboratory Mouse (Second Edition). , Available from:
 
 <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/B9780123820082000179">http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/B9780123820082000179</a> 383-407 (2012).</li>
<li>Corthell, J., Stathopoulos, A., Watson, C., Bertram, R., Trombley, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+Bulb+Monoamine+Concentrations+Vary+with+Time+of+Day%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Olfactory Bulb Monoamine Concentrations Vary with Time of Day.</a> Neuroscience. 247, 234-241 (2013).</li>
<li>Lehmkuhl, A. M., Dirr, E. R., Fleming, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+assays+for+mouse+models+of+neurodegenerative+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Olfactory assays for mouse models of neurodegenerative disease.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (90), e51804(2014).</li>
</ol>

אין ניגוד אינטרסים.

הבדיקות המוצעות בפרוטוקול זה מאפשרים להעריך היבטים שונים של התנהגות חוש הריח מולדת בעכברים: תפיסה לריחות, אפליה בין ריחות לעומת מים ורגישות לריחות. פרוטוקול זה יכול להיות מיושם על כל ריח על פי ההעדפה והיקף הימנעות מוצגת 15 בעבר. מאז הפרוטוקול מבוסס על פעילות גישוש חשוב שהעכברים לא להציג כל ירידת ערך רכב או חרדה שעשויה להשפיע על התנועה שלהם ולהפריע לחקר חוש הריח. הבדיקות המתוארות מיועדות לעכברי זכרים בוגרים אולם הם יכולים להיות מותאמים גם לחקור olfaction בנשים בוגרות או ...

Olfaction הוא אחת מהפונקציות החושיות המפותחות והחשובות ביותר ביונקים. כל ירידת ערך בפעילות חוש הריח עלולה להשפיע על צריכת מזון, התנהגות חברתית ו, במקרה הגרוע ביותר, אפילו הישרדות. בבני אדם, הידרדרות חוש הריח הוא גיל תלוי 1 ונחשב למנבא חזק של הפרעות נוירולוגיות 2-6. מבחן זיהוי הריח שפותח על ידי אוניברסיטת פנסילבניה מייצג כיום אחד המבחנים הנפוצים ביותר, לא פולשנית וכימות, האבחון שיכול להעריך גירעונות נוירולוגיות מוקדם 7 ולחזות בהסתברות גבוהה את ההתקדמות של דימנציה 8,9. הנגישות של מערכת חוש הריח וחוש ריח של הגדולה במכרסמים, עוררה שורה אינטנסיבית של מחקר העוסקת במנגנוני פונקציות חוש הריח בסיסי 10. הראינו הפסד של פונקציה של recept האיתות בעבראו Notch1 משפיע הימנעות חוש הריח 11. בפרוטוקול זה אנו משתמשים בעכברים חסרי יגנד האיתות, Jagged1, בנוירונים או גליה ללמוד ביצועי חוש הריח. לחוש ריח מולדים מוגדר על ידי שלושה פרמטרים כתפיסה, אפליה בין ריחות ורגישות חוש הריח 4. בדיקת חוש הריח במכרסמים יכולה להיעשות במגוון דרכים וכמה מחקרים התנהגותיים לעשות שימוש olfactometers, המספק את הריח לבעלי החיים בריכוזי אדים ספציפיים ובמסגרת זמן מדויקת 12 - 14. עם זאת, מכשור זה הוא יקר ועשוי להיות זמין רק במתקנים מיוחדים. בעבודה שלנו, אנו מספקים פרוטוקול פשוט, מהיר ושחזור חוש הריח בדיקה, אשר מתבצע באמצעות ריחות נדיפים. הבדיקות מתוארות תפיסת אמצעי לattractant או ריח דוחה ולהעריך את האפליה בין הריח ו11,15,16 מים. שימוש באותה ההגדרה, wדואר גם יכול למדוד את הרגישות לריח בריכוזים שונים 16,17. פוסט-הוק העיבוד בעזרת מחשב הווידאו, בהשראת עבודתו של פייג &#39;ועמיתי 18, מספק תוצאות משוחדת ללא הצורך של מסנוור ניסיוני ומאפשר לאדם אחד לבצע את הניסוי כולו. פרוטוקול זה נועד לספק נקודת התחלה ללימוד התנהגות חוש הריח בעכברים.

<table><tbody><tr><td>כלוב עכברים</td><td>איטלפלסט (איטליה)</td><td>1144B</td><td>אורך 36 ס"מ x 20.5 ס"מ רוחב x 13.5 ס"מ</td></tr><tr><td>גובה מצעי עץ סדוקים</td><td>עבד (אוסטריה)</td><td>LTE E-001</td><td>גובה 3 ס"מ</td></tr><tr><td>חמאת בוטנים</td><td>מיגרוס (שוויץ)</td><td>NA</td><td>1:10</td></tr><tr><td>2-מתילבוטיריק</td><td>סיגמא אולדריץ' (שוויץ)</td><td>W269514</td><td></td></tr><tr><td>שתן נשי טהור מנקבות פוריות מאותו זן עכבר</td> מצלמה <td></td><td>מסדרת דילול</td> <td>NA</td></tr><tr><td></td><td>NA אולימפוס (ארה"ב)</td><td>Camedia C-8080</td><td>קבצי MOV</td></tr><tr><td>Quicktime עבור Java (Windows)</td><td>Apple (USA)</td><td></td><td>תוסף וידאו NA להמחשת קבצי MOV</td></tr><tr><td>ImageJ עבור Windows</td><td>NIH (ארה"ב)</td><td>NA</td><td>עיבוד/ניתוח וידאו</td></tr></tbody></table>

פשוט וחוש ריח בדיקה לעכברים בסיוע מחשב

Simple and Computer-assisted Olfactory Testing for Mice

Olfaction הוא שמור ביותר בין מינים, ודורש לרבייה והישרדות. בבני אדם, לחוש ריח הוא גם אחד מהחושים שמושפעים עם הזדקנות והוא מנבא חזק של מחלות ניווניות. לפיכך, בדיקת חוש ריח משמשת כשיטת אבחון לא פולשני לאתר גירעונות נוירולוגיות בשלב מוקדם. כדי להבין את מנגנוני רגישות רשת חוש הריח, חוש הריח מחקר במכרסמים צבר תאוצה בעשור האחרון. כאן, אנו מציגים שיטה פשוטה מאוד, זמן יעילה ושחזור בדיקת חוש הריח של תפיסה מולדת ריח ורגישות בעכברים ללא הצורך של כל הגבלת מזון או מים לפני. הבדיקות מבוצעות בסביבה מוכרת לעכברים, דורש רק ריחות ומושב 2 דקות של חשיפת odorant. הניתוח מתבצע, פוסט הוק-, באמצעות פקודות בעזרת מחשב על ImageJ ויכול להיות, ולכן, ביצע מתחילתו ועד סופו על ידי חוקר אחד. פרוטוקול זה אינו דורש כל חומרה או התקנה מיוחדת ומצוין לכל מעבדה מעוניינת בבדיקת תפיסה ורגישות חוש הריח.

הבדיקה מודדת את תפיסת המשיכה לחמאת בוטנים והימנעות לחומצת 2-MB. שלוש קבוצות של עכברים שנבדקו ואת משך הזמן ב&quot; היקף הריח &quot;הם לכמת בהשוואה למים. במבחן ההעדפה, קבוצת הביקורת מציגה העדפה משמעותית לריח בהשוואה למים (t 8 = 2.52, p &lt;0.05). מצד השני, קבוצת B לא מראה שום משיכה משמעותית לחמאת בוטנים ומבלה זמן רב יותר עם ​​המים (t 6 = 3.22, p &lt;0.05). לפיכך, הוא מתנהג בצורה שונה מקבוצת הביקורת (F = 26.39 1,7, p &lt;0.005). בנוסף, קבוצת C לא מראה...

אנו מציגים מבחן ריח פשוט ובלתי מוטה בעכברים. עם פרוטוקול זה ניתן להעריך אפליה, העדפה, הימנעות ורגישות לריח חדש בהשוואה למים במפגשים התנהגותיים בודדים. שיטה זו מיועדת לנסיין יחיד והניתוח מבוסס על עיבוד וידאו בעזרת מחשב.

Olfaction is highly conserved among species and is required for reproduction and survival.
In humans, olfaction is also one of the senses that is affected ...

המטרה הכללית של הניסוי הבא היא לבחון אפליה ריחנית מולדת, העדפה ריחנית, הימנעות או רגישות ריחנית בעכברים. דבר זה מושג על ידי חשיפת העכבר למשיך או דוחה חדש, ולריח ניטרלי, שהוא מים. במקביל, מצלמת וידאו מקליטה את המפגש ההתנהגותי.בשלב הבא, הסרטון מנותח בתוכנת Image J באמצעות המקרוס המסופקים כדי לקבל את הזמן שהושקע בפרמטרים של ריח ומים. התוצאות מראות התנהגות של העדפה או הימנעות מריחות בהשוואה למים בקרב גנוטיפים שונים, בהתבסס על ניתוח ממוחשב לאחר הבדיקה (post hoc). היתרון המרכזי של בדיקת חוש הריח זו על פני שימוש בזירה ייעודית ובמערכת ריח הוא השימוש בזירה מוכרת, ולכן היא מאפשרת ביצוע מהיר והקמה פשוטה.בנוסף, נעשה שימוש בחומרה זולה. את הפרוצדורה ידגים Emmanuel Abry, סטודנט במעבדה שלי. לניסוי זה, השתמשו בעכברים זכרים בני שלושה עד חמישה חודשים, מסוג C 57 black, כולל עכברי wild type ועכברים טרנסגניים. הדגמה זו משתמשת בשני קווי knockout ובביקורות litter mate.עבור זירות הניסוי, השתמשו בכלובים סטריליים ונקיים לעכברים עם שכבת מצע בעובי של שלושה סנטימטרים. לאחר מכן, הכינו את מערך המצלמה. מקמו אותה בגובה של 58 סנטימטרים מעל רצפת הכלוב על גבי מעמד חצובה מותאם אישית.סמנו סימונים על המשטח כדי להגדיר את מיקומו של הכלוב. לצורך קבלת תמונה מרכזית, הגדירו את המצלמה להקלטת וידאו ברזולוציה של 320 על 240 פיקסלים בקצב של כ-15 פריימים לשנייה. להכנת הבדיקה, השתמשו בתרכיזים של כל ריח המאוחסנים בממס במידת האפשר.עבור מבחן ההעדפה, הכין תמיסה של 10% משקל לנפח של חמאת בוטנים בשמן בוטנים. עבור מבחן ההימנעות, השתמש בתמיסה של 98% של חומצה מתיל בוטית. עבור מבחן הרגישות, אסוף שתן מנקבת מאותה זן עכבר יום עד יומיים לפני הבדיקה.יש לקבע נקבה כך שבטנה תהיה מעל רשת הכלוב ולאסוף טיפות משתן לתוך צלחת פלסטיק. יש לאסוף דגימות ממספר נקבות לצורך נורמליזציה. בשל שונות בין-פרטית, יש לאחד את כל הדגימות לשפופרת של 1.5 milliliter ולאחסנה בטמפרטורה של minus 20 degrees Celsius.כדי להתחיל בהרגלת בעלי החיים, מקמו בעל חיים אחד בכלוב נקי והניחו לו לחקור את הסביבה. למשך חמש דקות, הסביבה בכלוב הבדיקה צריכה להיות דומה לזו של כלוב הבית. חזרו על שלב ההרגלה פעם אחת בכל יום בדיקה; עם סיום תקופת ההרגלה, התחילו בהקלטה וטפטפו 60 µL של ריח נעים.במקרה זה, מרחו חמאת בוטנים על קיר אחד, ועל הקיר ממול, טפטפו כמות שווה של מים. זהו ריח ניטרלי; יש להניח את הטיפות בגובה של כ-10 סנטימטרים על כל אחד מהקירות. כעת אפשרו לבעל החיים לחקור את הסביבה במשך שתי דקות, ולאחר מכן הפסיקו את ההקלטה והחזירו את העכבר לכלוב המגורים שלו.חזור על התהליך עם כל עכבר שייבדק, תוך שימוש בכלים חדשים בכל פעם. שלושה עד חמישה ימים לאחר ביצוע כל מבחני ההעדפה, בצע את מבחן ההימנעות באמצעות כלוב בדיקה חדש.עבור כל עכבר, בצע את מבחן ההימנעות. בדומה למבחן המשיכה, החלף רק את הריח הנעים בריח ההימנעות, שהוא two methyl butyric acid. עבור מבחן הרגישות, ניתן להשתמש שוב בכלוב אחד בין ניסויים עבור אותו עכבר.סמנו את צד המים של הכלוב והכינו נייר ספוג ב-70% ethanol לניקוי הדפנות הקצרות בין הניסויים. ביום הניסוי, הכינו ארבעה ריכוזים של השתן באמצעות סדרת דילול של פי עשרה. באמצעות מים מזוקקים פעמיים, בדומה למבחן ההימנעות, הרגילו כל חיה לכלוב הבדיקה שלה למשך חמש דקות.לאחר מכן, חשפו כל עכבר תחילה לשתן בדילול הגבוה ביותר, שהוא 1 ל-10,000. בזמן ההקלטה, מרחו את השתן המדולל על כלוב הבדיקה ומרחו מים על הקיר הנגדי. כפי שנעשה בבדיקות אחרות, אפשרו לבעל החיים לחקור את הסביבה.במשך שתי דקות. לאחר מכן, העבירו את החיה לכלוב עכברים נקי. לאחר שכל החיות נחשפו לריכוז הנמוך ביותר, נקו את כל דפנות כלוב הבדיקה וחזרו על הבדיקה בכל עכבר באמצעות השתן בריכוז הגבוה הבא.המשך בתהליך זה עד לבדיקת השתן הטהור. לאחר איסוף כל הנתונים עבור ניסוי, פתח את הסרטונים ב-Image J לצורך כיוון ועיבוד, שפרטיה מסופקים בטקסט של הפרוטוקול בהתאם לשיטות המתוארות. שני קווי knockout שונים.קבוצות B ו-C הושוו לקבוצת הביקורת A שהוכנה משבב. מבחן t של Student לא מכוון, עם שונות שווה או לא שווה, משווה את הזמן שהושקע בין הריח למים בתוך הגנוטיפים. השווה את ההתנהגות בין הגנוטיפים באמצעות ANOVA חד-כיווני. שתי הקבוצות הניסיוניות, B ו-C, לא הראו העדפה לריח המושך. במבחן ההימנעות, התגובה כלפי ריח ה-two methyl butyric acid הדוחה הייתה כמצופה עבור קבוצות A ו-B, אך קבוצה C לא הראתה התנהגות הימנעות מריח זה.בבדיקת הרגישות, סף המשיכה התקבל על ידי חיסור הזמן שהושלם עם מים מהזמן שהושלם עם שתן, כאשר העדפה לשתן על פני מים נצפתה בדילול של 1 ל-1000. לעומת זאת, שתי הקבוצות הניסיוניות, B ו-c, נזקקו לריכוז גבוה פי 100 כדי להפגין העדפה. לאחר השליטה בטכניקה, ניתן לבצע אותה תוך מספר שעות אם היא מבוצעת כראוי; לאחר מכן, ובהמשך לנהל זה, ניתן לבצע שיטות אחרות כמו למידה ואבדה של תגובה ריחית (olfactory extinction) כדי לחקור פלסטיות ולמידה ריחית.

simple-and-computer-assisted-olfactory-testing-for-mice

Research

JoVE Journal

Behavior

התנהגות

יסוד, המאפיינים הייחודיים של המערכת עדיין מכרסם הריח הובילו מחקר הגוברת בקרב ביולוגים. הערכה פשוטה יחסית של תפקידה הוא צריך גם אז. כאן אנו מתארים בדיקות רגישות לאפיון של רגישות העכבר העדפה הריח ו.

בדיקה התנהגותית חוש הריח של העכבר למבוגרים

ליקוי בתפקוד הריח הוא מאפיין שכיח בהפרעות ניווניות רבות כולל מחלות פרקינסון, אלצהיימר והנטינגטון. במאמר הנוכחי אנו מתארים קבוצה של מבחנים להערכת הבחנה וזיהוי חוש הריח בעכברים שניתן להשתמש בהם כדי למדוד יכולות ריח במודלים של עכברים של מחלות ניווניות.

מבחני חוש הריח למודלי עכבר של ניווניות מחלות

כתב יד זה מתאר פרוטוקול לבחינת מערכת הריח של מכרסמים. מבחן ההתרגלות/אי-השבתה של חוש הריח יאפשר לחוקרים לקבוע אם עכבר מתרגל לריח המוצג שוב ושוב והאם העכבר מפגין חוסר התרגלות כאשר מוצג לו ריח חדש.

בדיקה לריח אפליה והרגלה בעכברים

הפרעות קוגניטיביות בשינוי קשב הן מאפיין ליבה של מחלות פסיכיאטריות רבות. כאן, אנו מציגים את הפיתוח של מערכת אוטומטית חדשה למחקר יעיל של יכולות שינוי קשב, תפקודים ניהוליים ויכולות קוגניטיביות אחרות בעכברים עם תוקף תרגומי גבוה למחקרים בבני אדם.

אופרנטית התוך / Set-משמרת Extra-ממדית המשימה לעכברים

כאן, אנחנו מאמנים עכברים בפעילות associative learning כדי לבדוק את ריח אפליה. פרוטוקול זה מאפשר גם במחקרים על למידה-induced שינויים מבניים במוח.

מבחן אובייקטיבי, לשחזור של למידה חוש הריח ואפליה בעכברים

מאמר זה מספק תיאור מפורט של פרוטוקול הטיית שיפוט עכברים חדשני. כמו כן, מוכחות עדויות לרגישותה של משימת חפירת חוש הריח למצב רגשי, ותועלתה נדונה בתחומי מחקר מגוונים.

הערכה של הטיית שיפוט עכברים באמצעות משימת חפירת חוש הריח

מאמר זה מספק תיאור מפורט של מבחן המזון הקבור וניסוי אפליית ריח חברתי כדי להעריך את ההשפעות של חשיפה למזהמים סביבתיים בשאיפה על תפקוד חוש הריח בעכברים.

חקר ההשפעות של מזהמים סביבתיים בשאיפה על תפקוד חוש הריח בעכברים

פרוטוקול זה מתאר בניית אולפקטומטר לניסויי התנהגות חוש הריח. הוראות שלב אחר שלב, יחד עם תמונות, ניתנות על מנת להבטיח בנייה מוצלחת של האולפקטומטר. מידע לפתרון בעיות שנתקלו בהן במהלך התהליך כלול גם כן.

בניית אולפקטומטר לחקר התנהגות חוש הריח של מכרסמים

כאן, אנו מציגים פרוטוקול של בדיקת העדפת ריח המאפשר להעריך הטיות ריח שליליות כלפי גירוי ריח מעורר תיאבון ומרתיע כאחד במודלים של דיכאון בעכברים.

מבחן העדפת ריח למדידת הטיות הדוניות של חוש הריח במודלים של דיכאון בעכברים

מאמר זה מציג פרוטוקול לבדיקת אוויר קונטקסטואלי ורמז פחד באמצעות מערכת ניתוח וידאו על מנת להעריך פחד למידה וזיכרון בעכברים.

אוויר מבחן הקשר ורמז פחד באמצעות מערכת ניתוח וידאו בעכברים

למדו שיטה פשוטה לבדיקת חוש הריח בעכברים באמצעות ניתוח וידאו ממוחשב. השיטה מאפשרת הערכת העדפות, הימנעות ורגישות לריחות חדשים בסביבה מוכרת לבעלי החיים.

פשוט וחוש ריח בדיקה לעכברים בסיוע מחשב

גלה סרטונים נוספים