פשוט וחוש ריח בדיקה לעכברים בסיוע מחשב

המטרה הכוללת של הניסוי הבא היא לבחון אפליה מולדת של חוש הריח, העדפת חוש הריח או הימנעות ורגישות חוש הריח בעכברים. זה מושג על ידי חשיפת העכבר למושך או מערער חדש, וריח ניטרלי, שהוא מים. בינתיים, מצלמת וידאו מתעדת את הפגישה ההתנהגותית.

לאחר מכן, הסרטון מנותח בתמונה J באמצעות פקודות המאקרו שסופקו כדי לקבל את הזמן המושקע בפרמטרי הריח והמים. התוצאות מראות את ההעדפה או התנהגות ההימנעות מריחות בהשוואה למים בקרב גנוטיפים שונים בהתבסס על ניתוח פוסט הוק בעזרת מחשב. היתרון העיקרי של בדיקת הריח על פני השימוש בזירה ייעודית ובחוש הריח הוא שהיא משתמשת בזירה מוכרת ולכן היא בעלת השלמה מהירה והתקנה פשוטה.

בנוסף, הוא משתמש בחומרה לא יקרה המדגימה את ההליך יהיה עמנואל אברי, על פי סטודנט במעבדה שלי. לניסוי זה, השתמש בעכברים זכרים בני שלושה עד חמישה חודשים, C 57 שחור, שישה עכברים מסוג בר ועכברים טרנסגניים. הדגמה זו משתמשת בשני קווי נוקאאוט ובבקרות של חברי המלטה.

עבור זירות הניסוי, השתמש בכלובי עכברים מעוקרים נקיים עם שלושה סנטימטרים של מצעים. לאחר מכן, הכן את הגדרת המצלמה. מקם אותו 58 סנטימטרים מעל רצפת הכלוב על תושבת חצובה מותאמת אישית.

סמן כמה סימנים על השיש כדי לציין היכן צריך להיות מיקום הכלוב. לתמונה מרכזית, קבעו את המצלמה לצלם סרטון בגודל 320 על 240 פיקסלים בקצב של כ- 15 פריימים לשנייה. כדי להכין את הנבדק יש תרכיזים של כל ריח המאוחסנים בממס במידת האפשר.

למבחן ההעדפה, הכינו תמיסה של 10% משקל לפי נפח של חמאת בוטנים בשמן בוטנים. למבחן ההימנעות, יש תמיסה של 98%לחומצה מתיל בוטירית. לבדיקת הרגישות, אסוף שתן נשי מעכבר מאותו זן יום עד יומיים לפני הבדיקה.

רסנו נקבה עם בטנה מעל רשת הכלוב ואספו טיפות מהשתן שלה לתוך צלחת פלסטיק. אסוף דגימות מכמה נקבות כדי לנרמל. לשונות אינדיבידואלית, משוך את כל הדגימות בשפופרת של 1.5 מיליליטר ואחסן אותה במינוס 20 מעלות צלזיוס.

כדי להתחיל להרגיל את בעלי החיים, הניחו אחד מהם בכלוב נקי ותנו לו לחקור. במשך חמש דקות הסביבה של כלוב הבדיקה צריכה להיות כמו זו של כלוב הבית. חזור על שלב ההתרגלות פעם אחת בכל יום בדיקה, כאשר תקופת ההתרגלות הסתיימה, התחל את ההקלטה ופיפטה 60 מיקרוליטר של ריח נעים.

במקרה זה, חמאת בוטנים על קיר אחד בקיר הנגדי, פיפטה את אותה כמות מים. ניחוח ניטרלי, מרחו את הטיפות כ -10 סנטימטרים במעלה כל קיר. כעת תנו לחיה לחקור במשך שתי דקות, ואז הפסיקו את ההקלטה והחזירו את העכבר לכלוב הביתי שלו.

חזור על התהליך עם כל עכבר לבדיקה. תמיד משתמש בכלובי בדיקה חדשים. שלושה עד חמישה ימים לאחר ביצוע כל בדיקות ההעדפה, בצע את בדיקת ההימנעות באמצעות כלוב בדיקה חדש.

עבור כל עכבר, בצע את בדיקת ההימנעות. בדומה למבחן המשיכה, החליפו רק את הריח הנעים בריח ההימנעות, שהוא שני חומצות מתיל בוטירית. עבור בדיקת הרגישות, ניתן לעשות שימוש חוזר בכלוב אחד בין הניסויים לאותו עכבר.

אז סמנו את צד המים של הכלוב והתכוננו לנקות את הקירות הקצרים בנייר ספוג אתנול 70% בין הניסויים. ביום הניסוי, הכינו ארבעה ריכוזים של השתן עם סדרת הדילול פי עשרה. שימוש במים מזוקקים כפולים כמו מבחן ההימנעות הרגיל כל בעל חיים לכלוב הבדיקה שלו למשך חמש דקות.

לאחר מכן חשוף כל עכבר לשתן בדילול הגבוה ביותר בהתחלה, שהוא אחד עד 10,000. בזמן ההקלטה, יש למרוח את דילול השתן על כלוב הבדיקה ולמרוח מים על הקיר הנגדי. כפי שנעשה לבדיקות אחרות, תנו לחיה לחקור.

במשך שתי דקות. לאחר מכן, העבירו את החיה לכלוב עכברים נקי. לאחר שכל בעלי החיים חוו את הריכוז הנמוך ביותר, נקו את כל דפנות כלוב הבדיקה וחזרו על הבדיקה על כל עכבר באמצעות השתן המרוכז הבא.

המשך בתהליך זה עד לבדיקת השתן הטהור. לאחר איסוף כל הנתונים לניסוי, פתח את הסרטונים בתמונה J להתאמה ועיבוד שפרטיהם מסופקים בפרוטוקול הטקסט באמצעות הפרוטוקולים המתוארים. שני קווי נוקאאוט שונים.

קבוצות B ו-C הושוו לקבוצת ביקורת A.מבחן T של סטודנט לא כיווני עם שונות שווה או לא שווה משווה את הזמן שהושקע בין הריח למים בתוך גנוטיפים. להשוות את ההתנהגות בין גנוטיפים באמצעות inova חד כיווני. שתי קבוצות הניסוי, B ו-C, לא הראו העדפה לריח האטרקטיבי במבחן ההימנעות, התגובה לריח הדוחה של שני חומצות מתיל בוטירית הייתה כצפוי בקבוצות A ו-B, אך קבוצה C לא הראתה התנהגות הימנעות לריח זה.

במבחן הרגישות, סף המשיכה הושג על ידי הפחתת זמן השהות בשתן מזמן השהות במים, השתן המועדף על מים בדילול של 1 עד 1000. בעוד ששתי קבוצות הניסוי, B ו-c היו זקוקים לריכוז גדול פי 100 כדי להראות העדפה. לאחר המאסטר, ניתן לבצע טכניקה זו תוך מספר שעות אם היא מבוצעת כראוי, ואז בעקבות הליך זה, ניתן לבצע שיטות אחרות כמו למידת ריח והכחדה כדי לחקור את פלסטיות הריח ולמידה.