דגם שבץ טרומבוטיים בהתבסס על היפוקסיה-איסכמיה מוחית חולפת

המטרה הכללית של הליך זה היא לבסס מודל פשוט לשבץ תרומבואי עם אוטם מוחי יציב ולהעריך את ההשפעות המגנות של טיפול במפעיל פלסמינוגן רקומתי, או TPA. ראשית, הודגאת השראת היפוקסיה-איסכמיה מוחית חולפת, או THI, באמצעות קשירה כפולה של העורק התהומי המשותף הימני, או RCCA, וחשיפת בעל החיים הקשור לתנאי היפוקסיה להשראת תרומבוזה. לאחר 30 דקות של תנאי היפוקסיה, שני הקשרים שעל העורק התהומי משוחררים.

בשלב האחרון, מוצגים מתן הטיפול ב-TPA והערכת השפעותיו. לחלופין, ניתן לבחון הקלטה בזמן אמת של זרימת הדם המוחית, היווצרות התרומבוזה ומידת חסימת כלי הדם. פרוטוקול זה מאפשר להשרות שבץ תרומבוטי בעכברים בוגרים תוך שימוש במערכת הקרישה העצמית שלהם.

אנו מעוניינים להשתמש במודל זה כדי לחקור כיצד המוח מווסת את זרימת הדם שלו תחת תנאי היפותסיה ואיסכמיה. כמו כן, נשתמש בו כדי לבחון כיצד ניתן לשפר טיפולים תרומבוטיים. הדגמה חזותית של שיטה זו היא קריטית, שכן עשוי להיות קשה לשמור על טמפרטורת גוף נכונה ועל נשימה חלקה במהלך הזרקה למוח.

שלבי ההשראה לפחות 15 דקות לפני תחילת הפרוצדורה. הניחו את מצע הניתוח על משטח חימום, הגדירו טמפרטורה של 37 degrees Celsius והניחו על המצע גליל לצוואר העשוי מגוף של מזרק של three milliliter. הגדירו את מערכת ההיפוקסיה להגשת 2% isof fluorine ב-7.5% oxygen מאוזן על ידי 92.5% nitrogen, וכוונו את בקרי הטמפרטורה.

הנח עכבר זכר מגזע C 57 black six, בן 10 עד 13 שבועות ושוקלו 22 עד 30 גרם, על מיטת הניתוח. לאחר וידוא ההרדמה באמצעות צביטה של בהונות הרגל, מרח משחה על עיני החיה. קרב את ארבע הגפיים לאורך הצוואר, גלגל אותן והדבק אותן באמצעות סרט דביק רפואי.

לאחר מכן, הסר באמצעות קרם להסרת שיער את הפרווה מעורף החיה ונקה את אזור הניתוח. כעת, העבר את שולחן הניתוח תחת מיקרוסקופ דיסקציה ובצע חתך צווארי ימני באורך 0.5 סנטימטר בעור לאורך קו האמצע. בעזרת פינצטה עדינה, הרחק את הקנה והשרירים כדי לחשוף את העורקי השותף הפנימי הימני (right common carotid artery), והנח שתי תפרים מmsilk 5-0 חתוכים מראש מתחת לעורק.

הקפידו להפריד בין העורק הקרוטידי לבין עצב הוואגוס; קשרו שתי תפרים של משי 5-0 שניתן לשחרר אותם ב-RCCA. לאחר מכן, השתמשו בתפרים של מונופילמנט ניילון 4-0 כדי לסגור את העור והעבירו במהירות את העכבר למערכת ההיפוקסיה. הניחו את מסיכת הפנים על אפו ופיו של בעל החיים ואת הגשש הרקטלי כדי ששמירה על טמפרטורת גוף של 37.5 °C תובטח לאורך כל אספקת ההיפוקסיה.

כוון את מנורות החום לאחר 30 דקות. העבר את העכבר בחזרה למיטת הניתוח ושחרר את שתי התפרים. לאחר מכן, סגור את הפצע באמצעות דבק רקמות והחזר את העכבר לכלובו, תוך ניטור בעל החיים עד להחלמתו המלאה.

לחלופין, ניתן להשתמש בדימיון ניגודיות של נקטי לייזר (laser speckle contrast imaging) כדי לבחון את זרימת הדם המוחית במהלך ולאחר היפוקסיה-איסכמיה. מקמו את בעל החיים במנח שכיבה על הבטן. לאחר מכן, פתחו את הקרקפת באמצעות חתך קו אמצע באורך של סנטימטר אחד כדי לחשוף את הגולגולת, אך מבלי לפתוח אותה.

לאחר מכן, העבירו מיד את החיה למדמה זרימת הדם והתחילו בהקלטת זרימת הדם המוחיים. צפו בתמונות זרימת הדם המוחיים בהתאם להוראות היצרן באמצעות תוכנת ה-FLPI כדי לנתח את האזורים הנבחרים בזמן אמת. כדי להעריך את השפעות הטיפול ב-TPA, מזריקו לחיות תוך-ורידית דרך וריד הזנב במועד המתאים, לאחר חסימה חד-צדדית זמנית של העורק הגרוני והיפוקסיה.

לאחר מכן, כמת את נפח האינפקט באמצעות TTC in vivo כ-24 שעות לאחר האיסכמיה ההיפוקסית המוחית החולפת. למחרת, השתמש במכשיר vibram כדי להוציא חתכים בעובי של מילימטר אחד. לבסוף, השג סדרה של ארבע תמונות של חתכי מוח באמצעות מיקרוסקופיה דיגיטלית, והשתמש בתוכנת דימות מתאימה כדי לכמת את נפח האינפקט כיחס בין שטח האינפקט הלבן לבין השטח של ההמיספירה הקונטרלטרלית שאינה פגועה.

עבור הליך זה, ניתן להשתמש בשיטות תרומבוליזה אחרות כדי להעריך את השפעותיהן ואת הפוטנציאל הקליני שלהן. טכניקה זו סללה את הדרך עבור חוקרים בתחום השבץ האיסכמי לבחון טיפול תרומבוליטי במוח.