Name: גירוי מבחן העין (EIT) לסיכוני זיהוי כימיקלים עיניים מעצבנים באמצעות אפיתל דגם רקמות כמו-קרנית משוחזר אדם (RHCE) (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-08-23T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 13 s
Description: למדו בדיקת גירוי עין באמצעות מודל רקמה אפיתל כמו-קרנית משוחזר אדם (RhCE). שיטה זו מסווגת חומרים לפי פוטנציאל הגירוי שלהם ללא שימוש בבעלי חיים, תוך הערכת חיות הרקמה בבדיקת MTT.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מבקשים להודות לד&quot;ר ג&#39;ון Harbell לתמיכתו המדעית והזמן שהוקדש לפרויקט EIT. המחברים גם רוצים להודות לBeiersdorf AG (גרמניה), IIVS (ארה&quot;ב), מרי קיי בע&quot;מ (ארה&quot;ב), אבון מוצרים בע&quot;מ (ארה&quot;ב), פרוקטר אנד גמבל / Cosmital (שוויץ), Laboratoire פייר פאבר (צרפת), הרלן מעבדות (בריטניה), וLVMH parfume (צרפת) להשתתפות בMulti-מרכז בינלאומי טרום אימות ואישור במחקרים של מבחן העין גירוי 15.

<ol><li>National Toxicology Program (NTP) Interagency Center for the Evaluation of Alternative Toxicological Methods (NICEATM). <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Request+for+Ocular+Irritancy+Test+Data+From+Human%2C+Rabbit%2C+and+In+Vitro+Studies+Using+Standardized+Testing+Methods%5BTitle%5D)+AND+%22Federal+Register%22%5BJournal%5D)">Request for Ocular Irritancy Test Data From Human, Rabbit, and In Vitro Studies Using Standardized Testing Methods.</a> Federal Register. 72 (109), 31582-31583 (2007).</li>
<li>Regulation (EC) No 1907/2006 of the European Parliament and of the Council of 18 December 2006 concerning the Registration, Evaluation, Authorisation and Restriction of Chemicals (REACH), establishing a European Chemicals Agency, amending Directive 1999/45/EC and repealing Council Regulation (EEC) No 793/93 and Commission Regulation (EC) No 1488/94 as well as Council Directive 76/769/EEC and Commission Directives 91/155/EEC, 93/67/EEC, 93/105/EC and 2000/21/EC. OJ. L396 (49), European Commission. 1-849 (2006).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Globally+Harmonized+System+of+Classification+and+Labelling+of+Chemicals+%28GHS%29%22">Globally Harmonized System of Classification and Labelling of Chemicals (GHS)</a>. , Fifth revised edition, United Nations. New York and Geneva. (2013).</li>
<li>Draize, J. H., Woodard, G., Calvery, H. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+for+the+Study+of+Irritation+and+Toxicity+of+Substances+Applied+Topically+to+the+Skin+and+Mucous+Membranes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharmacol+Exp+Ther+November%22%5BJournal%5D)">Methods for the Study of Irritation and Toxicity of Substances Applied Topically to the Skin and Mucous Membranes.</a> J Pharmacol Exp Ther November. 82, 377-390 (1944).</li>
<li>Adriaens, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retrospective+analysis+of+the+Draize+test+for+serious+eye+damage%2Feye+irritation%3A+importance+of+understanding+the+in+vivo+endpoints+under+UN+GHS%2FEU+CLP+for+the+development+and+evaluation+of+in+vitro+test+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+tox%22%5BJournal%5D)">Retrospective analysis of the Draize test for serious eye damage/eye irritation: importance of understanding the in vivo endpoints under UN GHS/EU CLP for the development and evaluation of in vitro test methods.</a> Arch tox. 88, 701-723 (2014).</li>
<li>Balls, M., Botham, P. A., Bruner, L. H., Spielmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+EC%2FHO+international+validation+study+on+alternatives+to+the+Draize+eye+irritation+test%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol+in+Vitro%22%5BJournal%5D)">The EC/HO international validation study on alternatives to the Draize eye irritation test.</a> Toxicol in Vitro. 9, 871-929 (1995).</li>
<li>Curren, R. D., Harbell, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ocular+safety%3A+a+silent+%28in+vitro%29+success+story%5BTitle%5D)+AND+%22Altern+Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">Ocular safety: a silent (in vitro) success story.</a> Altern Lab Anim. 30, Suppl 2. 69-74 (2002).</li>
<li>Wilhelmus, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Draize+Eye+Test%5BTitle%5D)+AND+%22Survey+of+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">The Draize Eye Test.</a> Survey of Ophthalmology. 45, 493-515 (2001).</li>
<li>Curren, R. D., Harbell, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+alternatives+for+ocular+irritation%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+health+persp%22%5BJournal%5D)">In vitro alternatives for ocular irritation.</a> Environ health persp. 106, 485-492 (1998).</li>
<li>McCain, N. E., Binetti, R. R., Gettings, S. D., Jones, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+ocular+irritation+ranges+of+market-leading+cosmetic+and+personal-care+products+using+an+in+vitro+tissue+equivalent%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicologist%22%5BJournal%5D)">Assessment of ocular irritation ranges of market-leading cosmetic and personal-care products using an in vitro tissue equivalent.</a> Toxicologist. 66, 243(2002).</li>
<li>Niranjan, P., Dang, A. H., January, B. G., Gomez, C., Harbell, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+the+EpiOcular+assay+for+preclinical+qualification+of+formulas+for+human+clinical+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicologist%22%5BJournal%5D)">Use of the EpiOcular assay for preclinical qualification of formulas for human clinical studies.</a> Toxicologist. 96, 249(2007).</li>
<li>Yin, X. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prediction+of+ocular+irritation+potential+of+surfactants-based+formulations+at+different+concentrations+using+the+EpiOcular+model%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicologist%22%5BJournal%5D)">Prediction of ocular irritation potential of surfactants-based formulations at different concentrations using the EpiOcular model.</a> Toxicologist. 108, 378(2009).</li>
<li>Harbell, J., Curren, R. In vitro methods for the prediction of ocular and dermal toxicity. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHarbell%2C+J+%22Handbook+of+Toxicology%22">Handbook of Toxicology</a>. , 2nd Edition, Informa Healthcare. (2001).</li>
<li>Kaluzhny, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+the+EpiOcular%28TM%29+eye+irritation+test+for+hazard+identification+and+labelling+of+eye+irritating+chemicals+in+response+to+the+requirements+of+the+EU+cosmetics+directive+and+REACH+legislation%5BTitle%5D)+AND+%22Altern+Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">Development of the EpiOcular(TM) eye irritation test for hazard identification and labelling of eye irritating chemicals in response to the requirements of the EU cosmetics directive and REACH legislation.</a> Altern Lab Anim. 39, 339-364 (2011).</li>
<li>Pfannenbecker, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cosmetics+Europe+Multi-Laboratory+Pre-Validation+of+the+EpiOcular+Reconstituted+Human+Tissue+Test+Method+for+the+Prediction+of+Eye+Irritation%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol+in+vitro%22%5BJournal%5D)">Cosmetics Europe Multi-Laboratory Pre-Validation of the EpiOcular Reconstituted Human Tissue Test Method for the Prediction of Eye Irritation.</a> Toxicol in vitro. , (2013).</li>
<li>MatTek Corporation. EpiOcular™ Eye Irritation Test (OCL-200-EIT) for the prediction of acute ocular irritation of chemicals for use with Reconstructed Human EpiOcular Model (OCL-200-EIT). Protocol#MK-24-007-0055. , MatTek Corporation. (2014).</li>
<li>Kaluzhny, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((EpiOcular+Eye+Irritation+Test+%28EIT%29+for+Hazard+Identification+and+Labeling+of+Eye+Irritating+Chemicals%3A+Protocol+Optimization+for+Solid+Materials+and+Extended+Shipment+Times%5BTitle%5D)+AND+%22Altern+Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">EpiOcular Eye Irritation Test (EIT) for Hazard Identification and Labeling of Eye Irritating Chemicals: Protocol Optimization for Solid Materials and Extended Shipment Times.</a> Altern Lab Anim. 43 (2), 101-127 (2015).</li>
<li>Kolle, S. N., Kandarova, H., Wareing, B., van Ravenzwaay, B., Landsiedel, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In-house+validation+of+the+EpiOcular%28TM%29+eye+irritation+test+and+its+combination+with+the+bovine+corneal+opacity+and+permeability+test+for+the+assessment+of+ocular+irritation%5BTitle%5D)+AND+%22Altern+Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">In-house validation of the EpiOcular(TM) eye irritation test and its combination with the bovine corneal opacity and permeability test for the assessment of ocular irritation.</a> Altern Lab Anim. 39, 365-387 (2011).</li>
<li>Reconstructed Human Cornea-like Epithelium (RhCE) Test Method for Identifying Chemicals Not Requiring Classification and Labelling for Eye Irritation or Serious Eye Damage. Draft proposal for a new test guideline.. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22OECD+Guideline+for+the+Testing+of+Chemicals%22">OECD Guideline for the Testing of Chemicals</a>. , (2014).</li>
<li>Evaluating the ocular irritation potential of 54 test articles using the EpiOcular Human tissue Construct Model. Toxicol. In Vitro. Blazka, M. E., Harbell, J. 42nd Annual Meeting of the Soc. of Toxicology, Salt Lake City, UT, , (2003).</li>
<li>Kandarova, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+EpiDerm+Test+Protocol+for+the+Upcoming+ECVAM+Validation+Study+on+In+Vitro+Skin+Irritation+Tests+%E2%80%94+An+Assessment+of+the+Performance+of+the+Optimised+Test%5BTitle%5D)+AND+%22Altern+Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">The EpiDerm Test Protocol for the Upcoming ECVAM Validation Study on In Vitro Skin Irritation Tests — An Assessment of the Performance of the Optimised Test.</a> Altern Lab Anim. 33, 351-367 (2005).</li>
</ol>

עמלות פרסום לכתבה זו שולמו על ידי חברת MatTek.

יש לנו הצגתי את מבחן העין גירוי (איור 1) שפותח עבור דגם רקמת EpiOcular. EIT הוא מסוגל להפריד חומרים מגרים עיניות וחומרים מאכלים (קטגוריות GHS 1 ו -2 משולב) מחומרים שאינם דורשים תיוג (GHS אין קטגוריה) עם רמה גבוהה של רגישות וסגוליות 17. EIT כפי שהוצג במסמך זה אינו מפלה בין קטגוריה GHS 1 מקטגוריה 2 כימיקלים. EIT קבל תוקף לסיווג ותיוג של פוטנציאל גירוי העיני של מגוון רחב של כימיקלים, כולל מרכיבים קוסמטיים ותרופות. בשיתוף עם אחרים בבדיקות מבחנה, EIT ישמש כתחליף למבחן גירוי בעיני ארנב in vivo. EIT משתמש בשני פרוטוקולים דומים אך שונים לחומרים נוזליים ומוצקים, המשתנים באורך של חשיפה ותקופות שלאחר החשיפה דגירה (איור 1). נקודת הסיום בשימוש בEITהיא כדאיות רקמות, שנקבעה על ידי assay MTT, אשר שימש בעבר בדגמי תוקף אנושי אפיתל רקמת 20,21. כדי לבצע assay זה, אין צורך בציוד מיוחד מלבד ציוד תרבית תאים סטנדרטי. בשל הרמה הגבוהה של שחזור רקמות לרקמה, n = 2 רקמות במקום בדרך כלל מומלץ n = 3 משמשים. היכולת להשתמש n = 2 רקמות היא היבט קריטי של הפרוטוקול, שכן הוא מאפשר למפעיל מנוסה לעבד שתי רקמות בו זמנית, ובכך לצמצם את השונות של assay שיכול להתעורר כתוצאה מהטיפול של רקמות אדם שונה 14. כמו כן, על ידי השימוש בn = 2 רקמות למאמר בדיקה, IRRITANCY של 10 חומרי בדיקה של אותו מצב פיזי (נוזל או מוצק), יחד עם הבקרות החיוביות ושליליות, ניתן להעריך באמצעות ערכה אחת (24 רקמות). נקודות מפתח אחרות המבטיחות אמין סיווג של חומרי מפרטים לביקורת החיובית substance (כדאיות רקמות ≤50.0%), שחזור בין רקמות כפולות (הבדל &lt;20.0%), וקריאת OD בקרה שלילית (&gt; 0.8 ו&lt; 2.5). בעת ביצוע בדיקת EIT, חשוב לדבוק בפרוטוקול תוקף ולמינון הציע ולוחות זמני שטיפה (לוחות 3 ו -4), מאז סטייה מהפרוטוקול או השינויים בתקופות הדגירה עלולה לגרום לתוצאה שונה. כמו כן, סטיות מרגע 3 שעות לדגירת MTT יגרמו קריאות MTT שונות ועשויות להשפיע על תוצאת assay. מדי פעם, כימי בדיקה יכולה להיות אופטיות או אחרות תכונות שעלולים להפריע לassay כדאיות רקמות MTT או הפחתת גורם MTT. לדוגמא, כימי בדיקה עשויים להפחית באופן ישיר למוצר MTT תגובה כחול-סגול, או עשוי להיות חומר בצבע שסופג אור באותו הטווח כמו formazan MTT (~ 570 ננומטר). עם זאת, כימיקלים מבחן אלה יהיו יחסי ציבורesent בעיה היחיד, אם בזמן של assay MTT, כמות מספקת של החומר עדיין קיימת ב( או נספג על ידי) הרקמה. כדי למנוע הפרעה זו, נהלי שטיפה נרחבים ישולבו פרוטוקול EIT. אם שטיפה אינו מסיר את ת&quot;א ות&quot;א מפריעה להפחתת MTT, יש להשתמש בבקרות נוספות כדי לזהות ונכון עבורו. בקצרה, אם הפחתת MTT הישירה של חומר כימי בדיקת חשד, 50 μl (או 50 מ&quot;ג למוצקים) של הכימיקל בשאלה טופחו במשך 3 שעות עם פתרון MTT עובד בSCC (NC, 50 μl של מים ללא יונים סטרילי, צריך להיות לרוץ במקביל). אם פתרון MTT הופך לכחול-סגול, מאמר המבחן הוא בחזקת צמצמו את MTT. במקרה זה בדיקה פונקציונלית באמצעות פקדי רקמות נהרגו הקפאה צריכה להתבצע כדי להעריך אם חומר הבדיקה מחייב לרקמות ומובילות להפחתת אות MTT שווא. אם יש ירידה ניכרו בMTT החשוף-ת&quot;א שליטת הרקמה נהרגה,(ביחס לכמות ברקמת קיימא מטופל), כדאיות הרקמות הממוצעת של מאמר המבחן חייבת להיות מתוקנת על ידי הפחתת הכדאיות הממוצעת של השליטה נהרגה. EIT טועה בצד של בטיחות, כפי שהודגם על ידי השכיחות הנמוכה של סיווגים שליליים כוזבים 14,15,18. חשוב לציין, שאף אחד מהכימיקלים GHS קטגוריה 1, שהנם מאכל לעין ואשר מייצג את המפגע העיני החמור ביותר, סווגו כלא מעצבן בassay זה 14,15,18,19. לבסוף, אחד היתרונות הגדולים של RHCE בשיטת בדיקת מבחנה היא האפשרות של בדיקת נוזל מסודר וחומרים מוצקים (דבר שאינו אפשרי עם תרבויות דו-ממדיים, שקועות תא). EIT יתרום באופן משמעותי בקביעת פוטנציאל הגירוי העיני של מגוון רחב של חומרים על פי שיטת הסיווג ותיוג של האו&quot;ם GHS. ההחלפה של בעלי חיים כדי לקבוע oרעילות cular הייתה מטרה של מחקר טוקסיקולוגי במשך שנים רבות. שיטת בדיקת EIT השלימה מחקר אימות פורמלי נתמך על ידי EURL ECVAM בשנת 2014 וEIT EpiOcular יושם להנחיות מבחן ה- OECD כOECD TG 492 בשנת 2015.

מוצרים צריך, כגון מוצרי קוסמטיקה, חומרי ניקוי, חומרי ניקוי ביתיים וכוללים מגוון רחב של חומרים כימיים העלולים לגרום לניזק רציני אם הם לפנות לעיניים. לכן, בדיקה של סוכנים אלה לגירוי בעיניים נדרשת על ידי הרשויות הרגולטוריות בארה&quot;ב ובאיחוד האירופי כדי להבטיח את בטיחות צרכן 1. הערכת פוטנציאל הגירוי בעיניים של תערובות וניסוחים גם דרישה לעמידה בREACH (רישום, הערכה, אישור, והגבלה של כימיקלים) חקיקה לתיוג של מרכיבים קוסמטיים תחת קוסמטיקת הנחיית האיחוד האירופי להובלת כימיקלים, ול התיוג של חומרי הדברה ומוצרים ביתיים 2. נכון לעכשיו, סוכנויות רגולציה דורשות הערכת סיכונים עינית באמצעות השיטה המתואמת הגלובלי של סיווג ותיוג של כימיקלים (GHS) 3. GHS מתבסס בעיקר על מבחן הגירוי בעיני דרייז, assay הגירוי בעיניים הנפוץ ביותר שבו חומרים זרים ומילxtures הציג ישירות לתוך שק הלחמית של העין ארנב 4. על פי סיווג GHS, קטגוריה GHS 1 (חומרים מאכלים עיני) מתייחסת לבדיקת כימיקלים שגורמים לפגיעה ראשונית חמורה לרקמות העין או הנזק חמור לעין והראייה שאינה הפיך במלואו בתוך 21 ימים לאחר חשיפת 3.5. GHS קטגוריה 2 מתייחסת לבדיקת כימיקלים שמייצרים שינויים משמעותיים בעיניים כי הם הפיכים לחלוטין בתוך 21 ימים מחשיפה. כימיקלים מבחן שאינם מאכלים או חומרים מגרים מכונים קטגוריה GHS לא. במשך יותר מ -40 שנים, בדיקת עיני ארנב דרייז זכתה לביקורת על החוסר של שחזור, הערכת יתר של תגובות אנושיות, והשימוש בבעלי החיים 5-8. חששות אלה עודדו את הצעות רבות לעידון, צמצום, והחלפת in vivo המבחן 9. הצורך בחלופות שאינן בעלי חיים תוקף התחזק עוד יותרעל ידי אימוץ התיקון השביעי לקוסמטיקת ההוראה, שאסר על השימוש בבעלי החיים בהערכת הבטיחות של מוצרי קוסמטיקה (בשנת 2005) ומרכיבים (בשנת 2009) 2. מאז 1996, מודל הרקמה כמו קרנית-שוחזר כבר בשימוש נרחב על ידי תעשיית הקוסמטיקה להעריך את פוטנציאל הגירוי של חומרי גלם, ניסוחים מבוססי פעילי שטח, ונוסף תערובות המיועדות לשימוש ב, או בקרבת, עין 10-13. שימוש במודל רקמת RHCE מאפשר יישום מקומי ישיר של החומר למבחן על פני השטח הרקמה בצורה מקורית, החייה. בדרך זו, ניתן לבדוק ניסוחים מסיסים שאינם מים מבלי לדלל אותם עם ממסים. בתגובה לשל ECVAM EURL (המעבדה ההפניה איחוד האירופי מרכז האירופי לתיקוף השיטות חלופיות) בקשה לשיטה נרחבת ישימה, פשוטה, וכלכלית מבחן גירוי בעיניים (EIT) אשר מנצל Singlזמן חשיפת דואר, והוא מסוגל להפריד בין חומרים מגרים ומאכלים עיני מחומרים שאינם דורשים תיוג פותח (איור 1) 14. על סמך התוצאות עבור 83 כימיקלים (44 נוזלים ו -39 מוצקים), EIT השיג 95.5 / 68.2 / ו81.8% רגישות / סגוליות ודיוק (SS ו) לנוזלים, 100.0 / 68.4 / ו84.6% SS ולמוצקים, ו97.6 / 68.3 / 83.1% ולאס-אס וכולל. בשינה 2007, בחסות הקוסמטיקה אירופה (לשעבר Colipa) בחסות ECVAM EURL מחקר מראש אימות רבת-מעבדה העריך את הרלוונטיות ואמינות של EIT במטרה להביא אותו לאימות פורמאלית 15. במחקר זה, 298 ניסויים עצמאיים בוצעו בשבע מעבדות עצמאיות. תוצאות המחקר הראו הסכם 99.7% בתחזית עם מקדמים נמוכים של וריאציה בכל המעבדות משתתפות 15. כתוצאה מכך, בשנת 2010 הפרוטוקול EIT נכנס EURL ECVAM רשמיתכנית אימות. מחקר האימות מנוצל 104 כימיקלים מבחן מקודדים, כוללים חומרים אישיים ותערובות כימיות, אשר נתונים התייחסות in vivo (נתונים גירוי בעיני דרייז) היו זמינים. בהתבסס על ההצלחה של עבודה זו, קו מנחה טיוטת מבחן OECD הוגש בשנת 2014. זה צפוי כי EIT יתרום באופן משמעותי לסיווג פוטנציאל לגירוי עיני של מגוון רחב של חומרים על פי שיטת הסיווג ותיוג של האו&quot;ם GHS.

גירוי מבחן העין (eit) לסיכוני זיהוי כימיקלים עיניים מעצבנים באמצעות אפיתל דגם רקמות כמו-קרנית משוחזר אדם (rhce)

Eye Irritation Test (EIT) for Hazard Identification of Eye Irritating Chemicals using Reconstructed Human Cornea-like Epithelial (RhCE) Tissue Model

כדי לעמוד בתיקון השביעי לחקיקת הוראת הקוסמטיקה והאיחוד האירופי REACH של האיחוד האירופי, שיטות חלופיות שאינם בעלי חיים תוקף להערכה אמינה ומדויקת של רעילות עינית באדם יש צורך. כדי לענות על צורך זה, פיתחנו מבחן גירוי בעיניים (EIT) אשר מנצל מודל תלת ממדים משוחזר אדם אפיתל כמו קרנית (RHCE) רקמה המבוסס על תאים אנושיים רגילים. EIT הוא מסוגל להפריד חומרים מגרים עיניות וחומרים מאכלים (קטגוריות GHS 1 ו -2 משולב) ואלה שאינם דורשים תיוג (GHS אין קטגוריה). המבחן מנצל שני פרוטוקולים נפרדים, אחד מיועד לכימיקלים נוזליים ופרוטוקול שני, דומה למאמרי מבחן מוצקים. מודל חיזוי EIT משתמש תקופת יחידה חשיפה (30 דקות לנוזלים, 6 שעות למוצקים) וכדאיות רקמות חתך בודד (60.0% כפי שנקבע על ידי assay MTT). על סמך התוצאות עבור 83 כימיקלים (44 נוזלים ומוצקים 39) EIT השיג 95.5 / 68.2 / 81.8 וsens%itivity / סגוליות ודיוק (SS ו) לנוזלים, 100.0 / 68.4 / 84.6% ואס-אס ולמוצקים, ו97.6 / 68.3 / 83.1% ולאס-אס וכולל. EIT יתרום באופן משמעותי לסיווג הפוטנציאל לגירוי העיני של מגוון רחב של כימיקלים נוזליים ומוצקים, ללא שימוש בבעלי החיים כדי לעמוד בדרישות רגולציה בדיקות. שיטת EpiOcular EIT יושמה בשנת 2015 להנחיות מבחן ה- OECD כTG 492.

פיתחנו מבחן גירוי בעיניים אשר מנצל מודל רקמת האפיתל שלושה כמו קרנית-ממדי משוחזר אנושי (RHCE). המבחן הוא מסוגל להבחין בין גירוי העיני וחומרים מאכלים (קטגוריות GHS 1 ו -2 משולבים) ואלה שאינם דורשים תיוג (GHS אין קטגוריה).

גירוי מבחן העין (EIT) לסיכוני זיהוי כימיקלים עיניים מעצבנים באמצעות אפיתל דגם רקמות כמו-קרנית משוחזר אדם (RHCE)

To comply with the Seventh Amendment to the EU Cosmetics Directive and EU REACH legislation, validated non-animal alternative methods for reliable and ...

המטרה הכללית של בדיקת גירוי העין היא לסווג ולסמן חומרים ותערובות על פי פוטנציאל גירוי העין שלהם. נוהל זה משתמש במודל רקמה תלת-ממדי המשחזר קרנית. עם הגעתם, ערכות הבדיקה עוברות אינקובציה מוקדמת למשך לילה במדיום הבדיקה; למחרת, הרקמות עוברות הידרציה, ולאחר מכן מיושמים באופן טופיקלי הביקרות החיוביות והשליליות והכימיקלים הנבדקים על פני השטח של הרקמות, בשכפולים.לאחר תקופה קבועה של חשיפה, מסירים את הכימיקלים הנבדקים על ידי שטיפה. הרקמות עוברות דגירה לאחר מכן בתווך בדיקה טרי, ולאחר מכן מוערכת הרעילות של הכימיקלים באמצעות בדיקת MTT. בסופו של דבר, ניתן להעריך את פוטנציאל הגירוי של החומרים הנבדקים על ידי השוואת החיוניות היחסית של הרקמות שטופלו בחומר הנבדק לרקמות שטופלו בביקורת שלילית.היתרון המרכזי של טכניקה זו על פני שיטות קיימות, כגון בדיקות גירוי מהירות של עקבות, הוא שאינה כרוכה בשימוש בבעלי חיים במעבדה. היא עושה שימוש במודל רקמה עינית דמוית קרנית השוחלרה במעבדה (in vitro), המורכב מתאי אדם נורמליים. היא ישימה לכל סוגי החומרים והתערובות, ויכולה להבחין בין כימיקלים הגורמים לגירוי עיני או לנזק עיני חמור לבין חומרים שאינם גורמים לכך.חומרים שאינם גורמים לגירוי שאינם דורשים סיווג ותיוג. רקמת אפיתל אנושית משוחזרת דמוית קרנית או epi. Ocular מוכנה בתוך תבניות (inserts) בעלות ממברנה נקבובית שדרכה עוברים החומרי המזינים אל התאים.רקמה משוחזרת יוצרת אפיתל לא קרטיני המדמה את אפיתל הקרנית עם תאים בעלי שכבות הולכות וגדלות אך שאינם קרנפיים. עם קבלת ערכה לאפיתל דמוי קרנית אנושית, יש להמתין עד שהרקמות במכל המשלוח בעל 24 הבארות יגיעו לטמפרטורת החדר. לאחר 15 דקות, פתח את השק המכיל את פלטת הרקמות בעלת 24 הבארות בתנאים סטריליים ובדוק את כל הרקמות לאיתור בועות אוויר בין ה-agros gel לבין התבניות (inserts). חתוך. פתח את הסרט.הסר את הכיסוי באמצעות גזה סטרילית ובדוק את פני הרקמה. לאחר מכן, העבר מנה של 1 mL של תוצאת מדיה מהערכה בטמפרטורה של 37 °C לתוך הבארות של פלטות שש בארות שסומנו מראש. לאחר מכן, השתמש בפינצטה סטרילית כדי לספוג בעדינות את התבניות המכילות את הרקמה על גזה סטרילית לצורך הסרת שאריות של נוזל השילוח, והנח אותן בבארות נפרדות בפלטות שש הבארות.לאחר שעה, החליפו את המצע במילליטר אחד של מצע בדיקה טרי בטמפרטורה של 37 °C, והדגירו את הרקמות בתנאי תרבית סטנדרטיים למשך הלילה. למחרת, טפטפו 20 µL של DPBS נטול סידן ומגנזיום על פני השטח האפיקליים של כל רקמה. אם ה-DPBS אינו מתפשט על פני הרקמות, החזיקו בעדינות את התבנית (insert) בעזרת פינצטה והקישו על הפלטה כדי להבטיח שהסלין מרטיב את כל שטח פני הרקמה.דגרו את הצלחות למשך 30 דקות. לאחר מכן, כדי לטפל ברקמות באמצעות חומרי בדיקה נוזליים, מרחו 50 µL של הבקרה השלילית, הבקרה החיובית וחומרי הבדיקה המתאימים בשכפולים, בהתאם ללוח הזמנים. הקפידו לוודא שהטיפולים מכסים את כל שטחי הרקמה, ולאחר מכן דגרו את התבניות (inserts) למשך 30 דקות כדי לטפל ברקמות באמצעות חומרי בדיקה מוצקים.ראשית, העבירו את התבניות למשטח סטרילי. השאירו את הפלטה מכוסה כדי למנוע זיהום מחלקיקים מוצקים הנישאים באוויר. לאחר מכן, בעזרת כף מפולסת, מרחו באופן טופולוגי 50 milligrams של חומר הבדיקה על הרקמות הכפולות בהתאם ללוח הזמנים, תוך הקפדה שהטיפול יכסה את כל שטח פני הרקמה.לחלופין, ניתן להשתמש במזרק של מיליליטר אחד שמולא מראש וראשו נגזז. כדי להניח את האבקות ישירות על התרבית, לחצו על הבוכנה להחלת האבקה מיד לאחר החלת חומרי הבדיקה המוצקים, החזירו את התבניות לפלטות בעלות שש בארות והדגירו את הרקמות למשך שש שעות כדי לשטוף אותן.לאחר הטיפול, מלאו 3 כוסות כימית של 150 milliliter עבור כל חומר בדיקה ב-100 milliliters של DPBS בסיום דגירת החשיפה. אחזו בשפה העליונה של המבליטים בעזרת פינצטה מעוקלת כדי להוציאם מהבארים. לאחר מכן, בעזרת פינצטה, הרימו שני מבליטים מאותו טיפול על ידי השפות העליונות שלהם ושפכו את חומרי הטיפול על חומר סופג נקי.בשלב הבא, טבלו את התבניות (inserts) לכלי הביקר הראשון המכיל DPBS, ושטפו את הרקמות בתנועת סיבוב מעגלית למשך שתי שניות. לאחר מכן, הרימו את התבניות כך שיהיו מלאות ברובן ב-DPBS ושפכו את הנוזל חזרה לכלי הביקר. חזרו על השטיפה פעמיים נוספות בכלי הביקר הראשון.לאחר מכן, שטפו את התבניות בביקרים השני והשלישי של DPB S שלוש פעמים כל אחת באותו אופן כפי שבוצע בשטיפה האחרונה. סובבו כל תבנית לזווית של כ-45 מעלות כאשר הקצה הפתוח פונה כלפי מטה, והבקיאו את השפה העליונה בחומר סופג כדי לנקז שאריות של DPBS. לאחר מכן, טבלו מיד את הרקמות בחמישה מיליליטר של תווך בדיקה בטמפרטורת החדר.בפלטת 12 בארות שסומנה מראש, ובסיום תקופת הטבילה שלאחר ההשריה, שפכו את מצע הבדיקה וייבשו את התבתיות (inserts) על חומר סופג. לאחר מכן, העבירו את התבתיות לפלטת שש בארות חדשה המכילה 1 ml של מצע בדיקה חמים בכל בארה, והכניסו את הפלטות לאינקובטור כדי להתחיל את בדיקת החיותיות MTT. העבירו את התבתיות לפלטת 24 בארות המכילה 0.3 ml של תמיסת MTT שהוכנה טרי.טפחו על ההכנסות (inserts) עם חומר סופג לפני ההעברה. שחררו בועות אוויר כלשהן שנלכדו מתחת להכנסות והחזירו את הרקמות לאינקובטור לאחר שלוש שעות, כאשר תחתית ההכנסות מונחת על החומר הסופג. לאחר מכן, עבור מיצוי שקוע של פריטי בדיקה נוזליים שאינם חומרי צבע, טבלו את ההכנסות בתוך פלטת 24 בארות מסומנת מראש המכילה 2 mL של תמיסות המיצוי המתאימה לכל בארה, עבור מיצוי לא שקוע של חומרי צבע מוצקים או נוזליים.העבירו את התבניות (inserts) לפלטה של שש בארות המסומנת מראש, המכילה מיליליטר אחד של תמיסת מיצוי לכל בארה. לאחר מכן, אטמו את הפלטות באמצעות טבעת איטום תרמית או פאראפילם כדי למנוע התאיידות, ובצעו מיצוי על שייקר אורביטלי למשך שעתיים עד שלוש שעות בטמפרטורה של החדר, עם ניעור עדין בסיום המיצוי בטבילה. דקרו את הרקמות ולאחר מכן שפכו את הנוזל מכל תבנית חזרה אל הבארה, ואז השליכו את התבניות יחד עם הרקמות.ערבבו את תמיסת התמצית בכל באר והעבירו שתי מנות של 200 microliter מכל דגימה לבארי המתאימים בלוח 96 בארות שסומן מראש, כפי שמוצג בסכימה שבסוף תהליך המיצוי שאינו שקוע. השליכו את המבובות והרקמות ללא דקירה והוסיפו מיליליטר אחד של תמיסת מיצוי לכל אחת. ערבבו היטב את תמיסת המיצוי בבארים והעבירו שתי מנות של 200 microliter מכל דגימה לבארי המתאימים בלוח 96 בארות שסומן מראש, כפי שהודגם זה עתה.לבסוף, קראו את הצפיפות האופטית של הדגימות בספקטרופוטומטר של 96 בארות באורך גל של 570 nanometer ללא שימוש במסנן ייחוס, והזינו את התוצאות לגיליון אלקטרוני כדי לחשב את החיוניות של הרקמות בהתאמה. בצעו תיקונים עקב הפרעה של החומר הנבדק כפי שמתואר בפרוטוקול הטקסט כאן; בניסוי זה מוצגות תוצאות מייצגות של מבחן גירוי עיני שבוצע עם 10 חומרים נבדקים וביקורות שליליות וחיוביות. נצפתה צפיפות אופטית ממוצעת של 1.31 עבור הביקורת השלילית, המקבילה ל-100% חיוניות רקמה, עם חיוניות רקמה יחסית של 31.2% עבור הביקורת החיובית. החומרים הנבדקים 1, 2, 4, 7 ו-8 הראו חיוניות רקמה הגבוהה מ-60%, מה שמסווג חומרים אלו כלא מגרים; החומרים הנבדקים 3, 5, 6, 9 ו-10.מצד שני, נצפתה שונות ברקמות של 60% או פחות, מה שהוביל לסיווגן כחומרים גרמיים לגירוי. ההבדל בחיוניות הרקמות בין דגימות כפולות של רקמות בניסוי זה היה פחות מ-20% עבור כל הפריטים שנבדקו, למעט פריט בדיקה שניים. לפיכך, התוצאות עבור כל פריטי הבדיקה, למעט פריט בדיקה שניים, נחשבו למכשירות מכיוון שעמדו בכל קריטריוני הקבלה של בדיקת גירוי העין.לאחר צפייה בסרטון זה, תגמירו להבין כיצד לבצע את בדיקת ה-DICATION, תוך שימוש במודל רקמה משוחזרת במבחנה הדומה לקרנית אנושית מסוג 4, לצורך סימון זיהוי סכנות של כימיקלים. הליך זה הוטמע בהנחיות בדיקת ה-EOC D כחלק מאסטרטגיית בדיקת השכבות (tier testing strategy).

eye-irritation-test-eit-for-hazard-identification-eye-irritating

Research

JoVE Journal

Bioengineering

הנדסה ביולוגית

בסרטון הזה, אנחנו מדגימים את גירוי בעור EpiDerm הבדיקה (EpiDerm SIT) פיתחו ומאומתים...

במבחנה גירוי בעור מבחן (SIT) באמצעות EpiDerm שחזור האדם עוריות (RHE) דגם

אנו מספקים שיטה לשחזור עבור monolayers culturing ומחוברות של העובר תאים אנושיים אפיתל הפיגמנט ברשתית (hfRPE) תאים התערוכה מורפולוגיה, פיזיולוגיה, קוטביות, וחלבון וביטוי גנים דפוסים של רקמת יליד מבוגר. עבודה זו הורחבה במודל חיה של מחלות עיניים שונות.

מודלים ניסויית לחקר פיזיולוגיה פתופיזיולוגיה פיגמנט רשתית אפיתל

דוח זה מתאר שיטה להניע עין כרונית ניסויית אוטואימונית יבשה בחולדות לואיס באמצעות חיסון עם תחליב של תמצית בלוטת חולדות עכברוש, ovalbumin, adjuvant מלאה של פרוינד, ואחריו הזרקה של תמצית בלוטת דרכי ו ovalbumin לתוך subconjunctiva תת-עורית ו בלוטות דרכי שישה שבועות לאחר מכן.

כרוני אוטואימונית יבש עין עכברוש דגם עם הגדלת זיכרון תאי זיכרון T ב Eyeball רקמות

תפוקה גבוהה קטן מעכבות RNA ההקרנה היא כלי חשוב זה יכול לעזור להבהיר את המנגנונים המולקולריים של פגיעה אפיתל הקרנית כימיים במהירות רבה יותר. במסמך זה, אנו מציגים את הפיתוח ואת האימות של חשיפה מודלים ושיטות להקרנה תפוקה גבוהה של מימן פלואוריד - ו chloropicrin-induced פציעה אפיתל הקרנית.

תפוקה גבוהה SiRNA ואיתור Chloropicrin ופציעות תאים אפיתל הקרנית מימן פלואוריד-Induced

מאמר זה מתאר את ההתפתחות של שיטה לגרום למחלת עיניים חריפה או כרונית בארנבים על ידי הזרקת concanavalin A לכל החלקים של מערכת בלוטת מסלולית לקטמאל. שיטה זו, מעולה לאלה שכבר דיווחו, יוצר מודל מותאם, יציב של עין יבשה מתאים לחקר של סוכני תרופתי.

מודל ארנב של מחלה מימית לקויה עין יבש הנגרמת על ידי Concanavalin זריקה לתוך בלוטות לקטמאל: יישום ללימודי יעילות הסמים

מטרת פרוטוקול זה היא להעריך אם ניסוחים מלאכותיים שונים של קרע יכולים להגן על תאי אפיתל הקרנית האנושיים מפני התייבשות באמצעות מודל במבחנה. לאחר חשיפה לניסוחים מלאכותיים של קרעים והתייבשות, תאי אפיתל הקרנית האנושיים מוערכים לפעילות מטבולית.

ההשפעה של ניסוחים דמעה מלאכותית על הפעילות המטבולית של תאי אפיתל הקרנית האנושית לאחר חשיפה להתייבשות

פרוטוקול זה מתאר שיטה פשוטה לטיפוח אפידרמיס אנושי תלת מימדי מחדש באופן ניתן לשחזור וחזק. בנוסף, הוא מאפיין את הקשר המבני-פונקציה של מודל מחסום האפידרמיס. התגובות הביולוגיות של האפידרמיס האנושי המחודש על גירויים proinflammatory מוצגים גם.

טיפוח אפידרמיס אנושי תלת מימדי משוחזר בקנה מידה גדול

מאמר זה מתאר את ההליכים המשמשים להערכת הרעילות של קרינת UV ורעלים כימיים בקו תאים ראשוני ואימורטלי.

קביעת הרעילות של קרינת UV וכימיקלים על תאי אפיתל ראשוניים ואימורטליים של הקרנית האנושית

כאן, מודלים של בעלי חיים המבוססים על עכבר וארנב מפותחים עבור פגיעה מכנית וכימית של אפיתל הקרנית כדי לסנן טיפולים חדשים ואת המנגנון הבסיסי.

מודלים של בעלי חיים של Ex Vivo ו-In Vivo לפציעות מכניות וכימיות של אפיתל הקרנית

תרבית איברים של קרנית חזיר ex vivo וריפוי פצעי אפיתל מספקים אמצעי חסכוני, אתי, ניתן לשחזור וכמותי לבדיקת רעילות העין של כימיקלים. הם גם מסייעים בהבהרת המנגנונים העומדים בבסיס ויסות אפיתל ותיקון רקמות, ובהערכת טיפולים לטיפול בקרטופתיה סוכרתית ובריפוי פצעים מאוחר.

הערכת רעילות טיפולית וכימית באמצעות קרניות חזיר בתרבית איברים וריפוי פצעי אפיתל

מוצג פרוטוקול שניתן לשחזור להכנה, העשרה ויישום של הידרוג'ל במיקום באור כחול– קישור צולב של ג'לטין–ריבופלבין לתיקון פצעי סטרומל בקרנית בארנבים, כולל שלבים פרוצדורליים לטיפול כירורגי, טרסורפאה חלקית וטיפול לאחר הניתוח.

ייצור ויישום כירורגי של הידרוג'לים ג'לטין–ריבופלבין מועשרים עם קישור פוטופולינקרי לתיקון פצעי קרנית בארנבים

למדו בדיקת גירוי עין באמצעות מודל רקמה אפיתל כמו-קרנית משוחזר אדם (RhCE). שיטה זו מסווגת חומרים לפי פוטנציאל הגירוי שלהם ללא שימוש בבעלי חיים, תוך הערכת חיות הרקמה בבדיקת MTT.

גירוי מבחן העין (EIT) לסיכוני זיהוי כימיקלים עיניים מעצבנים באמצעות אפיתל דגם רקמות כמו-קרנית משוחזר אדם (RHCE)

גלה סרטונים נוספים