Name: בידוד תא Kupffer לNanoparticle בדיקת רעילות (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-08-18T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 49 s
Description: חקור בידוד תאי Kupffer מכבד עכברים לבדיקת רעילות ננו-חלקיקים. שיטה זו משלבת הדמיית כבד, סריקה צפיפותית וציטומטריית זרימה לקבלת תרביות טהורות לניסויים רעילות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי תוכנית רשת מארי-קירי של האיחוד האירופי FP7-ITN RADDEL. MB ו-KAJ מבקשים להודות לג'ו ורגס ורוי סרה מאיה על עזרתם והצעותיהם לאורך אופטימיזציה של בידוד תאי קופפר.

<ol><li>Hoffmann, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Performance+of+novel+kidney+biomarkers+in+preclinical+toxicity+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol+Sci%22%5BJournal%5D)">Performance of novel kidney biomarkers in preclinical toxicity studies.</a> Toxicol Sci. 116 (1), 8-22 (2010).</li>
<li>Nel, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanomaterial+Toxicity+Testing+in+the+21st+Century%3A+Use+of+a+Predictive+Toxicological+Approach+and+High-Throughput+Screening%5BTitle%5D)+AND+%22Accounts+of+Chemical+Research%22%5BJournal%5D)">Nanomaterial Toxicity Testing in the 21st Century: Use of a Predictive Toxicological Approach and High-Throughput Screening.</a> Accounts of Chemical Research. 46 (3), 607-621 (2013).</li>
<li>Bregoli, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toxicity+of+antimony+trioxide+nanoparticles+on+human+hematopoietic+progenitor+cells+and+comparison+to+cell+lines%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicology%22%5BJournal%5D)">Toxicity of antimony trioxide nanoparticles on human hematopoietic progenitor cells and comparison to cell lines.</a> Toxicology. 262 (2), 121-129 (2009).</li>
<li>Yamasaki, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genomic+Aberrations+and+Cellular+Heterogeneity+in+SV40-Immortalized+Human+Corneal+Epithelial+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology%2C+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Genomic Aberrations and Cellular Heterogeneity in SV40-Immortalized Human Corneal Epithelial Cells.</a> Investigative Ophthalmology, & Visual Science. 50 (2), 604-613 (2009).</li>
<li>Motoyoshi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Megalin+contributes+to+the+early+injury+of+proximal+tubule+cells+during+nonselective+proteinuria%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+International%22%5BJournal%5D)">Megalin contributes to the early injury of proximal tubule cells during nonselective proteinuria.</a> Kidney International. 74 (10), 1262-1269 (1038).</li>
<li>Prozialeck, W. C., Edwards, J. R., Lamar, P. C., Smith, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+barrier+characteristics+and+expression+of+cell+adhesion+molecules+in+proximal+tubule-derived+cell+lines+commonly+used+for+in+vitro+toxicity+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicology+in+Vitro%22%5BJournal%5D)">Epithelial barrier characteristics and expression of cell adhesion molecules in proximal tubule-derived cell lines commonly used for in vitro toxicity studies.</a> Toxicology in Vitro. 20 (6), 942-953 (2006).</li>
<li>Chamberlain, L. M., Godek, M. L., Gonzalez-Juarrero, M., Grainger, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenotypic+non-equivalence+of+murine+%28monocyte-%29+macrophage+cells+in+biomaterial+and+inflammatory+models%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Mater+Res+A%22%5BJournal%5D)">Phenotypic non-equivalence of murine (monocyte-) macrophage cells in biomaterial and inflammatory models.</a> J Biomed Mater Res A. 88 (4), 858-871 (2009).</li>
<li>Kermanizadeh, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+Kupffer+cells+in+the+hepatic+response+to+silver+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22Nanotoxicology%22%5BJournal%5D)">The role of Kupffer cells in the hepatic response to silver nanoparticles.</a> Nanotoxicology. , (2013).</li>
<li>Fischer, H. C., Hauck, T. S., Gomez-Aristizabal, A., Chan, W. C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exploring+Primary+Liver+Macrophages+for+Studying+Quantum+Dot+Interactions+with+Biological+Systems%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Materials%22%5BJournal%5D)">Exploring Primary Liver Macrophages for Studying Quantum Dot Interactions with Biological Systems.</a> Advanced Materials. 22 (23), 2520-2524 (2010).</li>
<li>Wan, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((M2+Kupffer+Cells+Promote+M1+Kupffer+Cell+Apoptosis%3A+A+Protective+Mechanism+Against+Alcoholic+and+Nonalcoholic+Fatty+Liver+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">M2 Kupffer Cells Promote M1 Kupffer Cell Apoptosis: A Protective Mechanism Against Alcoholic and Nonalcoholic Fatty Liver Disease.</a> Hepatology. 59 (1), 130-142 (2014).</li>
<li>Matsuoka, M., Tsukamoto, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stimulation+of+hepatic+lipocyte+collagen+production+by+Kupffer+cell-derived+transforming+growth+factor+%CE%B2%3A+Implication+for+a+pathogenetic+role+in+alcoholic+liver+fibrogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Stimulation of hepatic lipocyte collagen production by Kupffer cell-derived transforming growth factor β: Implication for a pathogenetic role in alcoholic liver fibrogenesis.</a> Hepatology. 11 (4), 599-605 (1990).</li>
<li>Polakos, N. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kupffer+Cell-Dependent+Hepatitis+Occurs+during+Influenza+Infection%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Kupffer Cell-Dependent Hepatitis Occurs during Influenza Infection.</a> The American Journal of Pathology. 168 (4), 1169-1178 (2006).</li>
<li>Tanner, A., Keyhani, A., Reiner, R., Holdstock, G., Wright, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteolytic+enzymes+released+by+liver+macrophages+may+promote+hepatic+injury+in+a+rat+model+of+hepatic+damage%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Proteolytic enzymes released by liver macrophages may promote hepatic injury in a rat model of hepatic damage.</a> Gastroenterology. 80 (4), 647-654 (1981).</li>
<li>Knittel, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+patterns+of+matrix+metalloproteinases+and+their+inhibitors+in+parenchymal+and+non-parenchymal+cells+of+rat+liver%3A+regulation+by+TNF-%CE%B1+and+TGF-%CE%B21%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Hepatology%22%5BJournal%5D)">Expression patterns of matrix metalloproteinases and their inhibitors in parenchymal and non-parenchymal cells of rat liver: regulation by TNF-α and TGF-β1.</a> Journal of Hepatology. 30 (1), 48-60 (1999).</li>
<li>Branster, M. V., Morton, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+Intact+Liver+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Isolation of Intact Liver Cells.</a> Nature. 180 (4597), 1283-1284 (1038).</li>
<li>Smedsrød, B., Pertoft, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+pure+hepatocytes+and+reticuloendothelial+cells+in+high+yield+from+a+single+rat+liver+by+means+of+Percoll+centrifugation+and+selective+adherence%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Leukocyte+Biology%22%5BJournal%5D)">Preparation of pure hepatocytes and reticuloendothelial cells in high yield from a single rat liver by means of Percoll centrifugation and selective adherence.</a> Journal of Leukocyte Biology. 38 (2), 213-230 (1985).</li>
<li>Morin, O., Patry, P., Lafleur, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterogeneity+of+endothelial+cells+of+adult+rat+liver+as+resolved+by+sedimentation+velocity+and+flow+cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">Heterogeneity of endothelial cells of adult rat liver as resolved by sedimentation velocity and flow cytometry.</a> J Cell Physiol. 119 (3), 327-334 (1984).</li>
<li>Miller, S. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purification+of+cells+from+livers+of+carcinogen-treated+rats+by+free-flow+electrophoresis%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Purification of cells from livers of carcinogen-treated rats by free-flow electrophoresis.</a> Cancer Res. 43 (9), 4176-4179 (1983).</li>
<li>Firme, C. P., Bandaru, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toxicity+issues+in+the+application+of+carbon+nanotubes+to+biological+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">Toxicity issues in the application of carbon nanotubes to biological systems.</a> Nanomedicine. 6 (2), 245-256 (2010).</li>
<li>Ali-Boucetta, H., Al-Jamal, K. T., Kostarelos, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytotoxic+assessment+of+carbon+nanotube+interaction+with+cell+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Cytotoxic assessment of carbon nanotube interaction with cell cultures.</a> Methods in Molecular Biology. 726, 299-312 (2011).</li>
<li>Wang, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+and+correcting+for+carbon+nanotube+interferences+with+a+commercial+LDH+cytotoxicity+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicology%22%5BJournal%5D)">Understanding and correcting for carbon nanotube interferences with a commercial LDH cytotoxicity assay.</a> Toxicology. 299 (2-3), 99-111 (2012).</li>
<li>Wang, J. T. -W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnetically+Decorated+Multiwalled+Carbon+Nanotubes+as+Dual+MRI+and+SPECT+Contrast+Agents%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Functional+Materials%22%5BJournal%5D)">Magnetically Decorated Multiwalled Carbon Nanotubes as Dual MRI and SPECT Contrast Agents.</a> Advanced Functional Materials. 24 (13), 1880-1894 (2014).</li>
<li>Li, P. Z., Li, J. Z., Li, M., Gong, J. P., He, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+efficient+method+to+isolate+and+culture+mouse+Kupffer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Lett%22%5BJournal%5D)">An efficient method to isolate and culture mouse Kupffer cells.</a> Immunol Lett. 158 (1-2), 52-56 (2014).</li>
<li>Froh, M., Konno, A., Thurman, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+liver+Kupffer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Isolation of liver Kupffer cells.</a> Curr Protoc Toxicol. Chapter 14, Unit14 14(2003).</li>
</ol>

המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים פיננסיים מתחרים.

השלבים הבאים הם קריטיים להשגת תשואה גבוהה וכדאיות גבוהה של תאי Kupffer. יש להשתמש בתנאי אספטי להגביל את הסיכון של זיהום חיידקים ופטריות. כל המכשירים צריכים להיות מעוקרים לפני השימוש. ריאגנטים צריכים להיות מוכנים טריים לפני ביצוע הליך הבידוד. הבחירה של IV collagenase, עם פעילות tryptic נמוכה, היא חיונית. יש לי המון שונה מאותו הספק פעילות האנזימטית שונה והם ייתכן שיהיו הצורך בהשוואה תחילה כדי לבחור את המנה המתאימה ...

תחום מחקר nanotoxicology מטרה לאפיין את ההשפעה הביולוגית של חלקיקים. מחקרים רעילים המבוססים על חקירות בvivo להישאר השיטות מדויקות ביותר. עם זאת, השימוש בם מוגבל על ידי דרישות עלות, העבודה וזמנם 1. כחלופות, במבחנה מבחני היו בשימוש בגלל פשטותם ואת האפשרות של פיתוח תפוקה גבוהה בפלטפורמות בדיקת מבחנה 2 - כך מאריכים את מספר התנאים שנבדקו. רוב מחקרי nanotoxicological מבוצעים באמצעות במבחני מבחנה עם שורות תאים הונצחו. עם זאת, קיימים חששות לגבי הניפוח של ממצאי ניסויים אלה להשפעות רעילות in vivo 3. ואכן, את המאפיינים של שורות תאים הנציחו יכולים להיות שונים באופן משמעותי מרקמות שנלקחו מ, למשל שינוי גנטי 4, הידרדרות של תכונות מורפולוגיות מפתח5, אובדן הקוטביות סלולרית 6 ושינויים פונקציונליים כגון הרגולציה של מתווכים דלקתיים 7. תאי Kupffer הם אוכלוסיית מקרופאג הנפוצה ביותר בגוף והם ישירות במגע עם דם על ידי המצפה את הקיר של sinusoids כבד. כחלק ממערכת reticulo-אנדותל (RES), מקרופאגים אלה הם אחראים ללכידתו של מחזור חלקיקים ולכן, מהווה מודל מתאים ביותר ללמוד רעילות ננו-חלקיקים. בvivo 8 ובמבחנה 9 מחקרים של תגובות דלקתיות הקשורים בתאי Kupffer נחשפו לחלקיקים כבר פורסם במקומות אחרים. תאי Kupffer גם היו מעורבים בפתוגנזה של מחלות כבד כגון מחלת כבד אלכוהול 10, סיסטיק הכבד 11 או צהבת נגיפית 12. נמסר כי תאי Kupffer מבודדים לספק תובנה שימושי לתאר inv מנגנונים התאיolved בהפרעת כבד 13,14. כמה שיטות כבר דיווחו לבודד ולטהר תאי Kupffer. בידוד תא יכול לנבוע מניתוק מכאני או אנזימטי 15. עיכול collagenase מראה את היתרון של שמירה על השלמות התפקודית של תאי Kupffer, בעוד שהוביל לתשואת תא הגבוה Kupffer 16. גישות ניסיוניות רבות, שונות במורכבות ועלויות, כבר משמשת להפרדה בין תאי Kupffer מאוכלוסיות תאי כבד אחרים. לדוגמא, טוהר תא Kupffer יכול להיות מושגת על ידי immunoaffinity 17, זרימת אלקטרופורזה 18, הדבקה סלקטיבית 16 או על ידי טכניקות צנטריפוגלי 16, שבחרו תאים בהתאם לגודל וצפיפותם. ניתן לבחור שילוב של שיטות אלה כדי להגדיל את טוהר של האוכלוסייה 16. אין הסכמה על השיטה האידיאלית לבידוד תא Kupffer, כפי שבעיקר תלויה בציוד היישום וזמיןלא. עם זאת, במקרה של בדיקת רעילות ננו-חלקיקים, הפשטות והתשואה גבוהה של הטכניקה הקשורים לשימור התפקודי של תאי Kupffer נראים מתאים ביותר עבור יישום זה. שיטת בידוד תא Kupffer דיווחה כאן מבוססת על שיטת זלוף 2-צעד אחריו טיהור על שיפוע צפיפות. השיטה הייתה שונה מהפרוטוקול המקורי שפותח על ידי אל Smedsrød et. 16 מיועדים לבידוד תא כבד חולדה. רוב המחקרים שדווחו ותיארו את הבידוד של תאי Kupffer מכבדי חולדה. בזאת, אנו מתארים שיטה לבודד תאי Kupffer מהכבד עכבר, בתשואה גבוהה וטוהר. השימוש בעכברים מפחיתים את עלות הניסוי ומאפשר העיבוד של כמה כבדים להשיג כמויות גדולות של תאי Kupffer לבדיקת רעילות ננו-חלקיקים. בפרוטוקול הבא, תאי Kupffer הודגרו עם צינורות פחמן פונקציונליות (ו </em&gt; -CNTs). התכונות פיסיקלי הכימיות הייחודיות של צינוריות - כלומר גבוה אורך יחס קוטר ושטח פנים גדול, עשו מועמדים מעניינים צינוריות כוקטורים למטרות טיפול ואבחון. עם זאת, חששות הועלו בנוגע לרעילות של צינוריות 19, ופיתוח מוצרים החדשים בבדיקות מבחנה שמטרתו להגביר את ההבנה של השפעה ביולוגית CNT. רעילות בתא Kupffer קשורה עם חוסר השלמות מבנית של קרום התא. זו נמדדת על ידי האובדן של LDH אנזים cytoplasmic מהתא לsupernatant. העיקרון של שיטה זו, ולכן, הוא להסיר את כל LDH שוחרר ולמדוד את מה שנותר בתאים 20. הדבר נעשה בהעדפה למדידת LDH שוחרר בsupernatant בגלל הנוכחות של צינוריות בsupernatant מפריעה assay 21. אנו מציעים את השימוש בmetho בידוד תא Kupffer זה פשוט וחסכוניד לבודד את המספר גבוה של תאי Kupffer פונקציונליים. זה מאפשר ההקרנה של רעילות של מגוון רחב של חלקיקים, במודל מקרופאג עיקרי רלוונטי.

<table><tbody><tr><td>Euthatal (נתרן פנטוברביטלי)</td><td>עכברי Merial</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CD1</td><td>צ'ארלס ריבר&nbsp; &nbsp;</td><td>-</td><td>משקל העכבר צריך לנוע בין 35 ל-45 גרם. אנו ממליצים להשתמש בעכברי CD1 זכרים מכיוון שמשקלם עולה במהירות (למשל עכבר CD1 זכר בן 7 שבועות עולה על 35 גרם במשקל). כמו כן, מומלץ ליצור קשר עם ספק בעלי החיים מראש כדי להסדיר משלוח של בעלי חיים מבוגרים. לחלופין, בעלי חיים יכולים להיות בבית כדי להגיע למשקל הרצוי.</td></tr><tr><td>HBSS (Ca2+ ו-Mg2+ free, עם ביקרבונט)&nbsp; &nbsp;</td><td>טכנולוגיות חיים&nbsp; &nbsp;</td><td>14175-053</td><td>HBSS חייב להיות&nbsp; Ca2+ חינם.&nbsp;</td></tr><tr><td>אתילן גליקול, חומצה טטראצטית (EGTA), מלח טטרסודיום&nbsp;</td><td>סיגמא-אולדריץ'&nbsp; &nbsp;</td><td>E8145&nbsp; &nbsp;</td><td>ניתן להשתמש גם ב-EDTA, אך ל-EGTA יש את היתרון של כלאטינג Ca2+ selectively.&nbsp;</td></tr><tr><td>HEPES (1 מ')&nbsp;</td><td>טכנולוגיות חיים&nbsp; &nbsp;</td><td>ברקוד 15630-056&nbsp;</td><td>100 מ"ל&nbsp;</td></tr><tr><td>קולגנאז מסוג IV&nbsp;</td><td>וורת'ינגטון&nbsp;</td><td>CSL-4&nbsp;</td><td>מומלץ לבדוק קבוצות שונות של קולגנאז או לפחות לציין לספק שהמוצר צריך להיות מתאים לבידוד תאי כבד.</td></tr><tr><td>&nbsp; גלוקוז נמוך DMEM&nbsp;</td><td>סיגמא-אולדריץ'&nbsp; &nbsp;</td><td>D5523&nbsp;</td><td>500 מ"ל&nbsp;</td></tr><tr><td>RPMI (עם נתרן פירובט וגלוטמקס)&nbsp;</td><td>טכנולוגיות חיים&nbsp; &nbsp;</td><td>12633-012&nbsp;</td><td>500 מ"ל</td></tr><tr><td>פניצילין/סטפטומיצין&nbsp;</td><td>טכנולוגיות חיים&nbsp; &nbsp;</td><td>15140-122</td><td>100 מ"ל</td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי&nbsp;</td><td>קישור ראשון&nbsp; &nbsp;</td><td>60-00-850&nbsp;</td><td>500 מ"ל&nbsp;</td></tr><tr><td>תמיסת טריפאן כחולה&nbsp;</td><td>סיגמא-אולדריץ'&nbsp;</td><td>T8154&nbsp;</td><td>100 מ"ל&nbsp;</td></tr><tr><td>תמיסת חלקיקי סיליקה מצופה (Percoll)</td><td>GE Healtcare&nbsp; &nbsp;</td><td>17-0891-02&nbsp;</td><td>Percoll&reg; יציב מאוד וניתן לשמור אותו מספר שנים&nbsp;</td></tr><tr><td>1x מי מלח חוצץ פוספט&nbsp; &nbsp;</td><td>טכנולוגיות חיים&nbsp; &nbsp;</td><td>10010-023</td><td>500 מ"ל&nbsp;</td></tr><tr><td>10x פוספט חוצץ מלח&nbsp; &nbsp;</td><td>טכנולוגיות חיים&nbsp; &nbsp;</td><td>70011-036</td><td>500 מ"ל</td></tr><tr><td>דימתיל סולפוקסיד&nbsp;</td><td>פישר&nbsp;</td><td>D/4120/PB08&nbsp;</td><td>500 מ"ל&nbsp;</td></tr><tr><td>ערכת LDH (CytoTox 96)&nbsp;</td><td>פרומגה&nbsp;</td><td>G1781&nbsp;</td><td>שמור על ההגנה מפני אור&nbsp;</td></tr><tr><td>DMEM פנול ללא אדום</td><td>Life Technologies&nbsp; &nbsp;</td><td>ברקוד 31053-028&nbsp;</td><td>500 מ"ל&nbsp;</td></tr><tr><td>נוגדן F4/80 (Alexa 488)</td><td>AbD Serotec</td><td>MCA497A488</td><td>אין לדלל, בשימוש מסודר לזרימה ציטומטריית</td></tr><tr><td>חרוזים פלואורסצנטיים</td><td>Sigma</td><td>L2778</td><td>חרוזי לטקס, פוליסטירן שונה באמין, אדום פלואורסצנטי. 1 מ"ל</td></tr><tr><td>שם חברת החומרים</td><td>&nbsp;</td><td>מק"ט&nbsp;</td><td>הערות/תיאור&nbsp;</td></tr><tr><td>סט איסוף דם פרפר (צינורות באורך 23 גרם/305 מ"מ)&nbsp; &nbsp;</td><td>BD&nbsp;</td><td></td><td></td>367288</tr><tr><td>מסנני מזרק (0.22 &mu; m שפה כחולה)&nbsp;</td><td>מיניסארט&nbsp;</td><td>16534-K&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>שפופרות צנטריפוגה (50 מ"ל פקק כחול)&nbsp;</td><td>BD Biosciences, Falcon&nbsp;</td><td>35 2070&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>צלחת פטרי (90 x 15 מ"מ)&nbsp;</td><td>תרמו פישר סיינטיפיק&nbsp; &nbsp;</td><td>BSN 101VR20&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>100 &mu; מסננת תאים M&nbsp; &nbsp;</td><td>BD&nbsp; &nbsp;</td><td>352360</td><td></td></tr><tr><td>משאבה פריסטלטית&nbsp;</td><td>ווטסון מרלו&nbsp;</td><td>מד"ב 300&nbsp; &nbsp;</td><td>יש לשטוף את הצינורות לפני ואחרי כל שימוש עם PBS סטרילי ו-70% אתנול.</td></tr><tr><td>צלחות 24 בארות</td><td>קורנינג&nbsp; &nbsp;</td><td>3526</td><td></td></tr><tr><td>צלחות 96 בארות&nbsp;</td><td>קורנינג&nbsp; &nbsp;</td><td>3595</td><td></td></tr><tr><td>צנטריפוגה&nbsp;</td><td>Eppendorf</td><td>5810R</td><td></td></tr><tr><td>קורא צלחות</td><td>BMG Labtech</td><td>FLUOstar מלקחיים אומגה</td><td></td></tr><tr><td>Serrefine</td><td>Hammacher GmbH&nbsp;</td><td>Art. Nr. HSE 004-35 / Cat. Nr. 221-0051</td><td>מלקחיים serrefine מאפשרים להדק את הכלי המכוסה במחט 23 G ללא צורך להחזיק את המלקחיים במהלך הליך הזילוף. כתובת אתר: (http://www.hammacher.de/Laboratory-Products/Clamps-forceps/Serrefines/HSE-004-35-Serrefine::25126.html)&nbsp;</td></tr><tr><td>שפופרות ציטומטריית זרימה</td><td>BD Biosciences, Falcon&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>352052 צינורות מיקרוצנטריפוגה (1.5 מ"ל)</td><td>Elkay</td><td>&nbsp; 000-MICR-150</td><td></td></tr><tr><td>מגרד תאים</td><td>BD Biosciences, Falcon</td><td>353086</td><td>חתוך את גפיים הלהב עם מספריים כדי לגרד תאים בצלחות של 24 בארות.</td></tr><tr><td>שם חברת הריאגנט&</td><td>nbsp;</td><td>מק"ט&nbsp;</td><td>הערות/תיאור&nbsp;</td></tr><tr><td>&nbsp; תמיסת EGTA (חומצה טטראצטית אתילן גליקול)/HBSS (תמיסת המלח המאוזנת של האנק)&nbsp;</td><td></td><td></td><td>HBSS המכיל 0.5 מ"מ EGTA ו-25 מ"מ HEPES. התאם את ה-pH ל-7.4. הכינו 50 מ"ל לכל כבד להזעה.&nbsp; &nbsp;</td></tr><tr><td>תמיסת קולגנאז&nbsp;</td><td></td><td></td><td>DMEM דל גלוקוז המכיל קולגנאז מסוג IV ב-100 UI/ml, 15 מ"מ HEPES ו-1% פניקלין/סטרפטמיצין (v/v). התאם את ה-pH ל-7.4. הכינו 100 מ"ל לכל כבד להחלפה. לאחר הוספת הקולגנאז, מומלץ לחמם את התמיסה למשך 30 דקות לפני השימוש. זה מאפשר לפעילות הקולגנאז להיות אופטימלית.</td></tr><tr><td>מדיום בידוד תאים של קופפר&nbsp;</td><td></td><td></td><td>RPMI מכיל, 1% חומצות אמינו לא חיוניות (v/v), 1% גלוטמקס&reg; (v/v) ו-1% פניקלין/סטרפטומיצין (v/v). הכינו לפחות 100 מ"ל ל-1-3 כבדים.&nbsp; &nbsp;</td></tr><tr><td>מדיום תרבית תאים של קופפר&nbsp;</td><td></td><td></td><td>RPMI מכיל 10% סרום בקר עוברי, 1% חומצות אמינו לא חיוניות (v/v), 1% גלוטמקס&reg; (v/v) ו-1% פניקלין/סטרפטמיצין (v/v). הכינו לפחות 100 מ"ל ל-1-3 כבדים.&nbsp; &nbsp;</td></tr><tr><td>SIP (תמיסה של חלקיקי סיליקה מצופים איזוטוניים)</td><td></td><td></td><td>מערבבים 1.7 מ"ל של 10x מי מלח חוצצים פוספט עם 15.3 מ"ל Percoll&reg; לקבלת 17 מ"ל SIP.</td></tr><tr><td>25% תמיסת SIP&nbsp;</td><td></td><td></td><td>מערבבים 5 מ"ל SIP עם 15 מ"ל של 1x מי מלח פוספט חומציים&nbsp; &nbsp;</td></tr><tr><td>50% תמיסת SIP&nbsp;</td><td></td><td></td><td>מערבבים 10 מ"ל SIP עם 10 מ"ל של 1x מי מלח חוצץ פוספט&nbsp;</td></tr><tr><td>Lysis Buffer</td><td></td><td></td><td>DMEM Media עם 0.9% Triton X-100</td></tr><tr><td>PBS/BSA תמיסת</td><td></td><td></td><td>הכן פוספט טרי חוצץ מלוח pH 7.4 עם 1% אלבומין סרום בקר.&nbsp;</td></tr></tbody></table>

בידוד תא kupffer לnanoparticle בדיקת רעילות

Kupffer Cell Isolation for Nanoparticle Toxicity Testing

רוב הגדול של מחקרי nanotoxicological במבחנה השתמשו שורות תאים הונצחו למעשיות שלהם. עם זאת, תוצאות מבדיקת רעילות ננו-חלקיקים בשורות תאים הונצחו או תאים ראשוניים הראו פערים, המדגישות את הצורך להרחיב את השימוש בתאים ראשוניים למבחנים במבחנה. פרוטוקול זה מתאר את הבידוד של מקרופאגים כבד עכבר, תאי Kupffer בשם, ושימוש בם כדי ללמוד רעילות ננו-חלקיקים. תאי Kupffer הם אוכלוסיית מקרופאג הנפוצה ביותר בגוף ומהווים חלק ממערכת reticulo-אנדותל (RES), אחראית ללכידתו של מחזור חלקיקים. שיטת בידוד תא Kupffer דיווחה כאן מבוססת על שיטת זלוף 2-צעד אחריו טיהור על שיפוע צפיפות. השיטה, המבוססת על מערכת עיכול collagenase וצנטריפוגה צפיפות, מותאמת הפרוטוקול המקורי שפותח על ידי אל Smedsrød et. מיועד לisolatio תא כבד החולדהn ומספק תשואה גבוהה (עד 14 x 10 6 תאים לכל עכבר) וטוהר גבוה (&gt; 95%) של תאי Kupffer. שיטת בידוד זה אינה דורשת ציוד מתוחכם או יקר ולכן מייצגת פשרה אידיאלית בין מורכבות ותשואת תא. השימוש בעכברים כבדים יותר (35-45 גר &#39;) משפר את התשואה של שיטת הבידוד אלא גם מקל להפליא ההליך של cannulation וריד שער. הרעילות של צינורות פחמן פונקציונליות ו -CNTs נמדדה במודל זה על ידי assay LDH שונה. שיטה זו מעריכה כדאיות תא על ידי מדידת חוסר השלמות המבנית של קרום תא Kupffer לאחר דגירה עם -CNTs F. רעילות הנגרמת על ידי -CNTs F ניתן למדוד באופן עקבי באמצעות assay זה, מדגיש כי תאי Kupffer מבודדים שימושיים לבדיקת רעילות ננו-חלקיקים. ההבנה הכוללת של nanotoxicology יכולה להפיק תועלת ממודלים כאלה, מה שהופכת את בחירת ננו-חלקיקים ליותר אפי תרגום קלינימספיק.

מספר תאי parenchymal שאינם מטוהרים היה עקבי ונע בין 8 ל 14 x 10 6 תאים לכל עכבר (17 בידודים בוצעו). כל בידוד עכבר היה מספיק לצלחת 16-28 בארות. תא כדאיות ידי צביעת trypan הכחולה הראתה תא כדאיות ~ 95%. תאי Kupffer הראו צורה עגולה בתוך 30 דקות של דגירה על 37 מעלות צלזיוס, הקשורים למורפולוגיה חסיד שלמה שלהם (איור 4 א). ב 4 שעות של דגירה ולאחר מכן, תאים להתפשט וצבירי תאים התחילו ליצור. תאי ...

מקרופאגים בכבד, הנקראים תאי קופפר, אחראים ללכידת ננו-חלקיקים במחזור הדם. אנו מתארים כאן שיטה, של טוהר תאים ותפוקה גבוהים, לבידוד תאי קופפר. בדיקת ה-LDH המותאמת משמשת כאן למדידת הרעילות הנגרמת על ידי ננו-צינורות פחמן בתאי קופפר.

בידוד תא Kupffer לNanoparticle בדיקת רעילות

The large majority of in vitro nanotoxicological studies have used immortalized cell lines for their practicality. However, results from nanoparticle ...

המטרה הכללית של הניסוי הבא היא לבודד ולטהר תאי קופר (Kupffer cells) מעכבר בכמות גדולה כדי לחקור רעילות של ננו-חלקיקים. מטרה זו מושגת על ידי פרפוזיה של כבדי עכבר עם תמיסת H-B-S-S-E-G-T-A ותמיסת קולגן, כדי לערוך עיכול עדין של רקמת הכבד. לאחר מכן, תאי הכבד מטהרים באמצעות סבב צנטריפוגה לפי צפיפות והדבקה סלקטיבית כדי לקבל תרבית של תאי קופר מטהרים.לאחר מכן, מבוצע ניתוח באמצעות ציטומטריית זרימה כדי לאשר את הטוהר ואת התכונות החומציות של תאי ה-cup. התוצאות המתקבלות מראות כי ניתן למדוד את הרעילות של ננו-צינורות פחמן פונקציונליים בתאי cup. על בסיס ה-L-D-H-S-A המודע, הדבר תומך בכך שניתן ליישם מודל זה לבדיקת רעילות של ננו-חלקיקים.השיטה שביעדנו להדגים לכם היום יכולה לסייע במתן תשובות לשאלות מפתח בתחום הננו-רעילות, כגון הערכת הרעילות של נשאי תרופות שפותחו לאחרונה; דבר זה חשוב במיוחד מכיוון שרוב קווי התאים המונחלים שנעשה בהם שימוש מראים תכונות השונות באופן משמעותי מהרקמות מהן הם הופקו. הדגמה חזותית של שיטה זו היא קריטית. אם השיטה תבוצע בהצלחה, היא תוביל להשגת תבואה גבוהה וטוהר של תאי ke, אשר יוכלו לשמש לאחר מכן כמודל לסריקת מגוון של ננו-חלקיקים לבדיקת רעילות זו.לאחר הכנה רעננה של כל הרכיבים המפורטים בטבלת החומרים והריאגנטים המצורפת לפרוטוקול הטקסט, חממו את תמיסת ה-E-G-T-A-H-B-S-S ואת תמיסת הקולגנאז בטמפרטורה של 40 °C למשך 30 דקות, והשתמשו ב-70% ethanol לשטיפת הפקעת הגמישה של המשאבה. לאחר מכן, שפכו 40 milliliters של תמיסת E-G-T-A-H-B-S-S לתוך מבחנת צנטריפוגה טבולה באמבט מים, והשתמשו בתמיסת ה-E-G-T-A-H-B-S-S המחוממת מראש לשטיפת הפקעת הגמישה של המשאבה. לאחר ביצוע המתנס (euthanasia) לעכבר CD one, בהתאם לפרוטוקול הטקסט, גלחו את שערות הבטן והשתמשו ב-70% ethanol לחיטוי פני הבטן.אשרו את ההרדמה באמצעות צביטה של בהונות הרגליים. חתכו דרך חלל הבטן וחשפו את הווריד הפורטלי ואת הווריד הנבוב התחתון (inferior vena cava) על ידי הזזת המעי לצד שמאל של הבטן. הפעילו את המשאבה במהירות של 1 עד 3 milliliters per minute עם תמיסת E-G-T-A-H-B-S-S, ובאמצעות מחט פרפר במידה 23 gauge קנולו את הווריד הפורטלי; סגרו בתפס את הקטע המקנול של הווריד הפורטלי ולאחר מכן הצמידו את תפס הסינוס לפני השטח של בטן העכבר הפתוחה.הכבד צריך להפוך לחיוור בתוך 30 השניות הראשונות של הפרפוזיה; חתכו במהירות את החלק התחתון של الوريد המזהה התחתון (inferior vena cava) כדי למנוע הצטברות של לחץ עודף בכבד, והעלו את קצב הזרימה בהדרגה ל-7 ml/min במהלך הדקה הראשונה של הפרפוזיה. כאשר נותרים פחות מ-5 ml של תמיסת E-G-T-A-H-B-S-S במבחנת הצנטריפוגה, הוסיפו 40 עד 50 ml של תמיסת קולגן א', ולאחר מכן העלו את קצב הזרימה בהדרגה ל-10 ml/min במשך 30 שניות.גרמו לכבד להתנפח על ידי הפעלת לחץ תקופתית על הוריד הנבוב התחתון (inferior vena cava) באמצעות פינצטה במרווחי זמן של 10 עד 30 שניות. פעולה זו תשפר את הדיסוציאציה של התאים ותקצר את זמן הפרפוזיה עם הקולגנאז. כאשר נותרים פחות מ-10 milliliters של תמיסת קולגנאז בתוך מבחנה הצנטריפוגה, הוסיפו למבחנה 40 עד 50 milliliters נוספים של תמיסת קולגנאז שחוממה מראש.לאחר שפורפפו 70 עד 80 מיליליטר, השתמשו בפינצטה כדי להפעיל לחץ קל על פני השטח. סימן של שקיעה מעיד על כך שתאי הכבד התנתקו. הוציאו את הכבד מחלל הבטן כיחידה אחת והניחו אותו במבחנת צנטריפוגה המכילה 20 עד 30 מיליליטר של מצע לבידוד תאים.שמרו את תאי הכבד על קרח למשך עד שלוש שעות, ואיחדו עד שלושה כבדים לצורך טיהור כדי להפיק כמות מספקת של תאים. הניחו כבד מבושש אחד בתוך צלחת פטרי עם 15 מיליליטר של מצע לבידוד תאי כבד, והשתמשו במספריים או בפינצטה. קרעו את קפסולת גליסון ושחררו את כל תאי הכבד אל תוך המצע.סננו את התמיסה דרך מסננת תאים של 100 מיקרומטר אל תוך מבחנה לצנטריפוגה. לאחר מכן, סבבו את תרחיף התאים בצנטריפוגה ב-50 g בטמפרטורה של ארבעה מעלות צלזיוס למשך שתי דקות. תאי הפארנכימה יימצאו במשקע ותאים שאינם פאראנכימליים יימצאו בנוזל העליון.אספו את הנוזל העליון (supernatant) לשפופרת צנטריפוגה נקייה וסובבו בצנטריפוגה במהירות של 50 gs למשך שתי דקות. חזרו על הפעולה עד להשלמת ארבעה העברות וסבבים. לאחר מכן, בצעו צנטריפוגה.את העלי-מיה (supernatant) ב-1,350 GS למשך 15 דקות. כדי לשקיע את התאים הבלתי-פארנכימליים, השליכו את העלי-מיה והשעיקו שוב את המשקע ב-10 milliliters של מצע לבידוד תאי Kupffer, הוסיפו את תמיסת התאים הבלתי-פארנכימליים למדרג איזוטוני לא רציף של 25-50% SIP שהוכן מראש לפי הפרוטוקול הכתוב, וסבבו בצנטריפוגה ב-850 GS למשך 15 דקות ללא האצה או בלימה. באמצעות פיפטה סרולוגית של 10 milliliter, שאבו כ-12 milliliters של פראקציית תאי Kupffer המרוכזת, הנראית עכורה בתוך פראקציית ה-25% SIP, סמוך לממשק ה-25-50% SIP.העבירו את התאים לפקעת צנטריפוגה המכילה 35 עד 40 מיליליטר של מצע לבידוד תאים, ערבבו בעדינות ולאחר מכן צנטריפיגו ב-1,350 g ובטמפרטורה של ארבע מעלות צלזיוס כדי לשקע את התאים. השליכו את הנוזל העליון והשתמשו ב-5 עד 10 מיליליטר של מצע מחומם מראש כדי לסבב את התאים. ספרו את התאים באמצעות המוציטומטר והשתמשו בצביעת Trypan blue למדידת החיוניות. פזרו את התאים הלא-פארנכימליים המבודדים בלוחיות 24 בארות בצפיפות של 5×10⁵ תאים לבערה.דגרו את התאים בטמפרטורה של 37 °C ו-5% carbon dioxide למשך 30 דקות. לאחר מכן, הסירו בעדינות את המצע. השתמשו ב-HBSS שחומם מראש כדי לשטוף את התאים והחליפו אותו ב-500 µL לבאור של מצע תרבית תאים טרי שחומם מראש.החזירו את התאים לטמפרטורה של 37 °C למשך ארבע שעות לפחות כדי לאפשר לתאים להיחרב לפני הטיפול בחלקיקי ננו. לאחר אפיון הניקיון והפעילות הפגוציטית של תאי ה-C for ודגירה עם ננו-צינוריות פחמן פונקציונליות (fcts) כפי שמתואר בפרוטוקול הכתוב, השליכו את העליון והוסיפו 200 µL לבאבור של לysis buffer לכל באר. דגרו בטמפרטורה של 37 °C למשך 30 עד 60 דקות, בצעו פיפטינג נמרץ ואספו את תאי ה-C for שעברו ליזיס לתוך מבחנות מיקרו-צנטריפוגה.לאחר מכן, סבבו בצנטריפוגה ב-20,000 GS למשך 10 דקות כדי להשקיע את ה-fcn ts שנספגו על ידי התאים יחד עם שיירי התאים. אספו את הנוזל העליון לשפופרות מיקרו-צנטריפוגה ואחסנו אותו בטמפרטורה של 20- מעלות צלזיוס. לחלופין, העבירו 50 µL לפלטה בעלת 96 בארות והוסיפו נפח שווה של תמיסת תערובת סבסטרט מהערכה של lactate dehydrogenase.כלול שלש פעמים בארות ריקות המכילות 50 µL של תמיסת ליסיס ו-50 µL של תמיסת תערובת סובסטרט. לאחר מכן, כסה את הפלטה והדגר בטמפרטורת החדר למשך 15 דקות לפני הוספה של 50 µL של תמיסת עצירה. לבסוף, קרא את הבליעה באורך גל של 490 nm באמצעות קורא מיקרופלטות והשתמש בנוסחה הבאה כדי לחשב את אחוז חיוניות התאים.איור זה ממחיש כי מספר התאים הלא-פארנכימליים המופקים נע בין שמונה ל-14 כפול 10⁶ תאים לעכבר. צביעה בכחול הראתה חיוניות תאית של כ-95%. תאים הדבקו למצע ואימצו צורה עגולה תוך 30 דקות של דגירה, ולאחר ארבע שעות התאים התפשטו וצמדים החלו להיווצר, כפי שניתן לראות כאן.התאים נצבעו עם נוגדן F4/80 כדי להוכיח את טהרת התאים, שנמדדה מעל 95% באמצעות ציטומטריית זרימה. בנוסף, לאחר 12 שעות תרבית, ניתוח ציטומטריית זרימה הראה כי 85% מהתאים היו בעלי פעילות פגוציטית, כפי שניתן לראות מיכולתם לקלוט חרוזי פלואורסצנציה בגודל 1 µm. עם זאת, מספר זה ירד לאחר 72 שעות תרבית, כאשר רק 40% מהתאים היו פגוציטיים, כפי שמוצג כאן.לתאים שדגרו עם ננו-צינוריות פחמן פונקציונליות למשך 24 ו-72 שעות הייתה מורפולוגיה דומה לזו של תאים נאיביים. בניגוד לכך, תאים שדגרו עם 10% DMSO, ששימש כביקורת חיובית, הראו מורפולוגיה נמקית; לאחר ניתוח של בדיקת LDH משופרת, תאים שטופלו ב-10% DMSO למשך 24 ו-72 שעות הראו רעילות גבוהה בהשוואה. fcts גרמו להפחתה קלה אך משמעותית בחיוניות התאים רק כאשר התאים נחשפו ל-50 µg/mL למשך 72 שעות. באמצעות שיטה זו, ניתן לבחון SC אחרים מבוססי תאים וכל סוגי הננו-חלקיקים תוך שימוש בתאי ke מבודדים.דבר זה מאפשר איסוף נתונים מהימנים תוך מזעור השימוש בבעלי חיים. אנו מקווים כי טכניקה זו תוכל לסלול את הדרך עבור חוקרים בתחום הננו-פסיכולוגיה לבחינת הבטיחות של נשאי ננו רבים ומבטיחים שפותחים יותר ויותר.

kupffer-cell-isolation-for-nanoparticle-toxicity-testing

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

שיטה חדשנית להשיג מקרופאגים מתרבות העיקרי של תאים בכבד חולדה מתואר. שיטה זו מנצלת את ריבוי של מקרופאגים בתרבות, ואחריו רעד של צלוחיות תרבות וטיהור על ידי התקשרות סלקטיבית מנות פלסטיק. טכניקה זו יעילה מספק מקרופאגים הכבד ללא ציוד מיומנויות מורכבות.

שיטה פשוטה ויעילה על מנת לבודד המקרופאגים מתרבויות ראשי מעורבות של תאים בכבד למבוגרים

במסמך זה אנו מתארים פרוטוקולים קצירת מקרופאגים מכתשיים Murine, אשר תושבי תאים חיסוניים מולדים בריאה, ובדיקת ההפעלה שלהם כתגובה לתרבות בשיתוף עם חלקיקים polyanhydride.

הפעלת נייד קציר המקרופאגים מכתשיים Murine והערכת בהשפעת חלקיקים Polyanhydride

בסרטון זה אנו מדגימים את הבידוד של תאי קופפר או מקרופאגים בכבד מהכבד של העכבר. הכבד מחורר בתמיסת עיכול ואחריה הפרדה הדרגתית של צפיפות. תאי קופפר הדבקים המבודדים יכולים לשמש לניתוח נוסף.

בידוד ותרבית של תאי קופפר עכבר

סרטון זה מדגים בידוד של לימפוציטים, כולל תאי הרג טבעיים או תאי NK, מרקמת כבד אנושית לצורך התרחבות סלקטיבית. עיכול אנזימטי ומכני, ואחריו הפרדת שיפוע צפיפות, מקדם בידוד לימפוציטים, כולל תאי NK. הלימפוציטים שנאספו יכולים לשמש עוד יותר להרחבה סלקטיבית של תאי NK.

בידוד תאי הרג טבעי מרקמת הכבד להרחבה סלקטיבית

ניתוח של אינטראקציה nanoparticle עם אוכלוסיות מוגדרות של תאי מערכת החיסון על ידי cytometry זרימה.

איתור של פלורסנט אינטראקציות Nanoparticle עם אוכלוסיות ראשוניות של תא חיסון על ידי זרימת cytometry

ייצור מי דימום (PBW) טופלו בננו-חלקיקי תחמוצת נחושתיות (CuO-NPs) והרעילות התאית הוערכה בתאים אנושיים מתורבתים. מטרת פרוטוקול זה הייתה לשלב את הדגימה הסביבתית המקומית בפורמט תרבית תאים המעריכה את השינויים ברעילות עקב טיפול ב-CuO-NP.

הסרת יסודות קורט ידי Cupric תחמוצת חלקיקים מאורניום<em&gt; באתר</em&gt; שחזור Bleed מים והשפעתה על כדאיויות תא

מתוארת טכניקה לבידוד הפטוציטים אנושיים ותאי כבד לא פרנכימליים מאותו תורם. סוגי תאי הכבד השונים בונים את הבסיס למודלים תפקודיים של כבד והנדסת רקמות. שיטה חדשה זו שואפת לבודד תאי כבד בתפוקה גבוהה ובכדאיות.

פרוטוקול הבידוד של hepatocytes האדם הראשי הקביל סרן אוכלוסיות של תאים בכבד ללא parenchymal

מיקרוגליה (תאים חיסוניים של המוח), משמשים כחיישן ביולוגי חלופי כדי לקבוע כיצד ננו-חלקיקים משפיעים על רעילות עצבית. אנו מתארים סדרה של ניסויים שנועדו לבחון את תגובת המיקרוגליה לננו-חלקיקים וחשיפה של נוירונים היפותלמוסיים לסופרנטנט ממיקרוגליה מופעלת כדי לקבוע רעילות עצבית.

Microglia בתור biosensor סרוגייט לקביעת Nanoparticle neurotoxicity

הליך זה הוקם כדי לשמש לפיתוח תרבויות חזה 3D מתקדמות במבחנה, אשר יכול לספק הערכה רלוונטית יותר מבחינה פיזיולוגית של הסיכונים genotoxic הקשורים חשיפות ננו חומריים על פני משטרי מינון חריפה או ארוכת טווח, חוזרים ונשנים.

דגמי כבד תלת-ממדיים מתקדמים לבדיקות גנוטוקסיות במבחנה בעקבות חשיפה ננו-חומרית לטווח ארוך

מאמר זה נועד לספק פרוטוקול לבידוד ותרבות של פיברובלסטים הקשורים לסרטן ראשוני ממודל מורין סינגני של סרטן שד טריפל שלילי ויישומה למחקר פרה-אקליני של חלקיקים חדשניים שנועדו למקד את המיקרו-סביבה של הגידול.

בידוד של פיברובלסטים הקשורים לסרטן ראשוני ממודל מורין סינגני של סרטן השד לחקר חלקיקים ממוקדים

כאן אנו מציגים שיטה לא גנטית ליצירת ספרואידים אוטולוגיים אנושיים בכבד באמצעות תאים חד-גרעיניים שבודדו מדם היקפי במצב יציב.

ספרואידים של כבד אנושי מדם היקפי למחקרי מחלות כבד

חקור בידוד תאי Kupffer מכבד עכברים לבדיקת רעילות ננו-חלקיקים. שיטה זו משלבת הדמיית כבד, סריקה צפיפותית וציטומטריית זרימה לקבלת תרביות טהורות לניסויים רעילות.

בידוד תא Kupffer לNanoparticle בדיקת רעילות

גלה סרטונים נוספים