Name: Microdilution שיטת ההפניה מרק לDalbavancin במבחנה בדיקה של רגישות חיידקים שגדלות אירובי (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-09-09T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 28 s
Description: למדו את שיטת המיקרודילושן בנוזל לבדיקת רגישות חיידקים גראם-חיוביים לדלבוונצין. הפרוטוקול כולל הכנת תמיסות מניות ב-DMSO ושימוש בברוט מולר הינטון מתוסף בפוליסורבט 80.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה קודמת בנוגע לבדיקת רגישות של dalbavancin הייתה בעלת ערך בפיתוח שיטות סטנדרטיות והכרה על עבודה זו ניתנת למעבדות JMI, רוברט רני ובת' גולדשטיין.

הערה: עיין במסמכי CLSI M7-A10 וM100-S25 ו / או ISO / FDIS 20,776-1 לפרטים מלאים של שיטת microdilution מרק ההתייחסות לרגישות מיקרוביאלית 2, 3, 4 שיטות ההתייחסות לאפשר לאפשרויות בחלק מ. נהלים ספציפיים לייצור הכנת הבידוד ופנל MIC כדי להשיג את אותה תוצאה סופית. השיטה המפורטת כאן מתייחסת לסוכן, dalbavancin אחד מיקרוביאלית, וחלק מהצעדים מייצג את אחד עלול להיות כמה דרכים הליך ההתייחסות ניתן לעשות. אמצעי בטיחות מתאימה (בקנה אחד עם רמת בטיחות ביולוגית 2) צריך להיות מנוצל 10. פורמט פנל MIC משמש לצורך פרסום וידאו זה מוצג בטבלה 1. 1. חנות Dalbavancin אבקה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עם קבלת אבקת dalbavancin הכיתה אבחון, חנות ב -20 מעלות צלסיוס בסביבה מיובשת בהקפאת הפשרה שאינה. לפני השימוש, האבקה צריכה לאזן ללהגיע RT לפני הפתיחה. </li></ol> 2. הכן דילולי MIC לוח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן פתרון מניות לא נעלה על 1,600 מיקרוגרם / מיליליטר של dalbavancin בDMSO המסודר (הטהור) בצינורות זכוכית או פלסטיק סטרילי, ולהשתמש באותו היום של הכנה או חנות ב -20 לC -60 o או מתחת לשימוש עתידי ב מקפיא ההפשרה אינה. קח בחשבון את העוצמה של dalbavancin כאמור בתיעוד קיבל עם האבקה, כאשר במשקל האבקה (ראה המשוואה 1 לדוגמא 800 מיקרוגרם / הכנת מניית מיליליטר). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לדלל את מניות הדילול דומה לתכנית כפי שמוצג בטור 1 (&quot;ריכוז מקור&quot;) בטבלה 2 עם DMSO המסודר בצינורות זכוכית או פלסטיק סטרילי. השתמש pipet אחד למדידת diluent וpipet אחר להוספת מניית dalbavancin הראשונית לצינור הראשון. לכל ריכוז מניית dalbavancin לאחר מכן להשתמש pipet חדש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן concent לוח MIC הסופי 100Xדילולים מנה (ריכוזי ביניים) עם DMSO המסודר. כפי שמוצג בעמודים 2-4 בטבלה 2, לשלב כרכים מתאימים של מקור וDMSO כדי להשיג ריכוז ביניים רצוי (כרכים לשמש יהיו תלוי במספר פנלי MIC להתבצע). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן 0.004% P80: הכן פתרון מניות עובד טרי של P80 2% על ידי הוספת P80 0.1 מיליליטר ל -4.9 מיליליטר DH 2 א &#39; לעקר על ידי עובר דרך פתרון סינון ושימוש 0.22 מיקרון באותו היום של הכנה. הכן 0.004% diluent P80 על ידי הפיכת 1: P80 500 דילול של 2% (לדוגמא, 0.3 מיליליטר של 2% P80 ל149.7 מיליליטר של CAMHB). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בהמשך לדלל את ריכוזי ביניים מוכנים בשלב 2.2 1: 100 במרק קטיון הותאם מולר הינטון (CAMHB) בתוספת 0.004% (V / V) polysorbate-80 (P-80) P-80 ו / או LHB (לסטרפטוקוקוס) הוסיפה בכפול הריכוז הסופי כי תוספת של הבידוד (שלב 4.3) תגרום לדילול 1: 2. ראו עמודים 6 ו -7 בטבלה 2 </stRong&gt;. </li></ol> 3. להכין פנלי MIC <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לוותר 50 μl של כל פתרון dalbavancin מוכן בשלב 2.3 לתוך בארות מתאימות של לוח MIC וכולל תקשורת רק באחד היטב (שליטת צמיחה גם). Pipet רב ערוצית עם טיפים סטרילי יכול לשמש לצעד זה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בלוחות מייד או לאטום עם סרט פלסטיק, מקום בשקיות ניילון ומניח מייד במקפיא שאינו הפשרה ב- 20 ≤ o C (רצוי ב- 60 ≤ o C) עד צורך. אם לוחות קפוא משמשים, להסיר חותמות ולמקם את הלוחות בודדים במעבדת ספסל במשך 15-30 דקות (עד שהתוכן גם הם הפשירו) לפני שתמשיכו לחיסון פנל. </li></ol> 4. לחסן פנלי MIC, בצע ספירת טהרה ומושבת ההתקנה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחר כמה מושבות מבודדות היטב מאגר דם 18-24 שעות או צלחת אגר הלא סלקטיבי אחר. לגעת בחלק העליון של כל מושבה עם לולאה סטרילית או מטלית והעברה לCAMHB מיליליטר 1-5 או שלאלין עד העכירות הוא שווה ערך לסטנדרטי מק &#39;פרלנד 0.5. להעריך עכירות על ידי השוואה ויזואלית למק &#39;פרלנד 0.5 או עם מכשיר photometric. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בתוך 15-30 דקות של הכנה, לדלל את הבידוד 1: 100 בCAMHB (10 מיליליטר לCAMHB 100 μl). עבור רוב החיידקים שנבדקו נגד dalbavancin, למעט ס pneumoniae, דילול זה יספק ריכוז גם סופי של 5 x 10 5 CFU / מיליליטר (טווח מקובל הוא 2-8 x 10 5 CFU / ml). לס pneumoniae, ריכוז חיידקים המבוסס על השוואה של עכירות למק &#39;פרלנד 0.5 הוא בדרך כלל הרבה פחות, ולכן, לדלל את הבידוד 01:25 (400 μl לתוך 10 מיליליטר CAMHB + 10% + LHB). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בתוך 15 דקות לאחר הכנת הבידוד, להעביר 50 μl של הבידוד הסופי היטב כל אחד (עם חריג של שליטת העקרות גם) של לוח MIC מוכן בשלב 3. pipet רב ערוצית באמצעות טיפים סטרילי יכול לשמש לצעד זה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבצע בדיקת טוהרעל ידי העברה והפצת aliquot 1-10 μl משליטת הצמיחה החיובית גם באמצעות לולאה סטרילי לאגר סלקטיבי (לדוגמא, אגר סויה trypticase עם 5% דם כבשים). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספירת מושבה התקנה על ידי הסרת 10 μl משליטת הצמיחה היטב עם pipet ערוץ אחד וקצה סטרילי ולהעביר 10 מיליליטר של תמיסת מלח (1: 1,000 דילול). לערבב ולהעביר עם pipet ערוץ אחד וקצה סטרילי 100 μl למדיום מתאים, לא סלקטיבי אגר (למשל, אגר trypticase סויה עם 5% דם כבשים) ומשתרע על פני השטח אגר כל עם לולאת סטרילי, חוזר פעמיים בכיוונים שונים כדי להבטיח חלוקה שווה של הבידוד (דילול 1:10). </li></ol> 5. פנלי דגירה MIC, מושבה רוזן וצלחות טוהר <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאטום כל פנל או ערימת MIC של לא יותר מ 4 פנלים בשקית ניילון, עם סרט פלסטי או עם כיסוי פלסטיק צמוד לפני דוגרים. לחלופין, למקם את פנל MIC ריק על top של ערימה של לא יותר מ 4 פנלי MIC, למקם מגבת נייר לחה במכל פלסטיק, לוחות MIC המקום במכל הפלסטיק ומכל קרוב מאובטח עם מכסה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה לוחות MIC בחממת אוויר סביבה ב 35 ° C ± 2 מעלות צלזיוס במשך 16-20 שעות (staphylococci וenterococci) ו20-24 שעות (סטרפטוקוקוס) בתוך 30 דקות של חיסון. דגירה ספירת המושבה וצלחות טוהר תחת אותם תנאים מלבד סטרפטוקוקוס דגירה ב5% CO 2 באינקובטור. </li></ol> 6. קראו MIC ומושבת רוזן צלחות; בדוק פלייט טוהר <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קראו MIC כריכוז הנמוך ביותר שמעכב צמיחת חיידקים בבארות כפי שזוהה על ידי בעין בלתי מזוינת לחלוטין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספירת מושבות על צלחת ספירת מושבה. הכפל כל מושבה על ידי גורם דילול (1: 10,000) (לדוגמא, 50 מושבות היא שווה ערך ל 5 x 10 5 CFU / ml). טווח מקובל הוא 20-80 מושבות (2-8 x 10 5 CFU / ml) ומשמש כapproקו מנחה ximate. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדוק צלחת טוהר. אם כל המושבות דומות למושבות משמשות בשלב 4.1, ולאחר מכן את הבידוד יכול להיחשב טהור. אם יש מושבות אחרות בהווה, אז יש פוטנציאל לזיהום להיות נוכח בלוח MIC והבדיקה יש לחזור. </li></ol> תוצאות בקרת איכות 7. בדוק. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עיין בטבלה 3 לטווחים צפויים של זני בקרת איכות CLSI. לדווח רק תוצאות של בדיקה מבודדת אם תוצאות MIC dalbavancin לאורגניזם בקרת איכות (ים) נמצאות בטווח הצפוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם MIC של ≥0.25 מיקרוגרם / מיליליטר מתקבל לכל ס קליני aureus לבודד, לחזור על בדיקות MIC dalbavancin ו / או לשלוח למעבדה התייחסות לאימות. </li></ol>

<ol><li>Boucher, H. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Once-weekly+dalbavancin+versus+daily+conventional+therapy+for+skin+infection%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+journal+of+medicine%22%5BJournal%5D)">Once-weekly dalbavancin versus daily conventional therapy for skin infection.</a> The New England journal of medicine. 370, 2169-2179 (2014).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22M07-A10.+Methods+for+Dilution+Antimicrobial+Tests+for+Bacteria+that+Grow+Aerobically.%3A+Approved+Standard%22">M07-A10. Methods for Dilution Antimicrobial Tests for Bacteria that Grow Aerobically.: Approved Standard</a>. , Tenth Edition, Clinical and Laboratory Standards Institute. Wayne, PA. (2015).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22M100-S25.+Performance+Standards+for+Antimicrobial+Susceptibility+Testing%3B+Twenty-Fifth+Informational+Supplement%22">M100-S25. Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing; Twenty-Fifth Informational Supplement</a>. , Clinical and Laboratory Standards Institute. Wayne, PA. (2015).</li>
<li><a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+laboratory+testing+and+in+vitro+diagnostic+test+systems+--+Susceptibility+testing+of+infectious+agents+and+evaluation+of+performance+of+antimicrobial+susceptibility+test+devices+--+Part+1%3A+Reference+method+for+testing+the+in+vitro+activity+of+antimicrobial+agents+against+rapidly+growing+aerobic+bacteria+involved+in+infectious+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22ISO%2FFDIS%22%5BJournal%5D)">Clinical laboratory testing and in vitro diagnostic test systems -- Susceptibility testing of infectious agents and evaluation of performance of antimicrobial susceptibility test devices -- Part 1: Reference method for testing the in vitro activity of antimicrobial agents against rapidly growing aerobic bacteria involved in infectious diseases.</a> ISO/FDIS. 20776-1, International Organization for Standardization. (2006).</li>
<li>Jones, R. N., Farrell, D. J., Flamm, R. K., Sader, H. S., Dunne, M. W., Mendes, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surrogate+analysis+of+vancomycin+to+predict+susceptible+categorization+of+dalbavancin%5BTitle%5D)+AND+%22Diagn+Microbiol+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Surrogate analysis of vancomycin to predict susceptible categorization of dalbavancin.</a> Diagn Microbiol Infect Dis. , (2015).</li>
<li>Turnidge, J., Paterson, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Setting+and+revising+antibacterial+susceptibility+breakpoints%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+microbiology+reviews%22%5BJournal%5D)">Setting and revising antibacterial susceptibility breakpoints.</a> Clinical microbiology reviews. 20, 391-408 (2007).</li>
<li>Rennie, R. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+influencing+broth+microdilution+antimicrobial+susceptibility+test+results+for+dalbavancin%2C+a+new+glycopeptide+agent%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+clinical+microbiology%22%5BJournal%5D)">Factors influencing broth microdilution antimicrobial susceptibility test results for dalbavancin, a new glycopeptide agent.</a> Journal of clinical microbiology. 45, 3151-3154 (2007).</li>
<li>Arhin, F. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+polysorbate+80+on+oritavancin+binding+to+plastic+surfaces%3A+implications+for+susceptibility+testing%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrobial+agents+and+chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Effect of polysorbate 80 on oritavancin binding to plastic surfaces: implications for susceptibility testing.</a> Antimicrobial agents and chemotherapy. 52, 1597-1603 (2008).</li>
<li>Farrell, D. J., Mendes, R. E., Rhomberg, P. R., Jones, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Revised+reference+broth+microdilution+method+for+testing+telavancin%3A+effect+on+MIC+results+and+correlation+with+other+testing+methodologies%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrobial+agents+and+chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Revised reference broth microdilution method for testing telavancin: effect on MIC results and correlation with other testing methodologies.</a> Antimicrobial agents and chemotherapy. 58, 5547-5551 (2014).</li>
<li>Ribbon Panel, B. lue <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guidelines+for+Safe+Work+Practices+in+Human+and+Animal+Medical+Diagnostic+Laboratories%5BTitle%5D)+AND+%22MMWR+Supplements%22%5BJournal%5D)">Guidelines for Safe Work Practices in Human and Animal Medical Diagnostic Laboratories.</a> MMWR Supplements. 61 (01), 1-101 (2012).</li>
<li>Anderegg, T. R., Biedenbach, D. J., Jones, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Initial+quality+control+evaluations+for+susceptibility+testing+of+Dalbavancin+%28BI397%29%2C+an+investigational+glycopeptide+with+potent+gram-positive+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+clinical+microbiology%22%5BJournal%5D)">Initial quality control evaluations for susceptibility testing of Dalbavancin (BI397), an investigational glycopeptide with potent gram-positive activity.</a> Journal of clinical microbiology. 41, 2795-2796 (2003).</li>
<li>Koeth, L. M., Windau, A. R., Goldstein, B. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+Broth+Microdilution+and+Agar+Dilution+Dalbavancin+and+Vancomycin+MIC+Results+for+42+Aerobic+Gram-positive+Bacteria.+Poster+132%5BTitle%5D)+AND+%22ASM%22%5BJournal%5D)">Comparison of Broth Microdilution and Agar Dilution Dalbavancin and Vancomycin MIC Results for 42 Aerobic Gram-positive Bacteria. Poster 132.</a> ASM. , San Francisco, CA. (2012).</li>
<li>Fritsche, T. R., Rennie, R. P., Goldstein, B. P., Jones, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+dalbavancin+MIC+values+determined+by+Etest+%28AB+BIODISK%29+and+reference+dilution+methods+using+gram-positive+organisms%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+clinical+microbiology%22%5BJournal%5D)">Comparison of dalbavancin MIC values determined by Etest (AB BIODISK) and reference dilution methods using gram-positive organisms.</a> Journal of clinical microbiology. 44, 2988-2990 (2006).</li>
<li>Mushtaq, S., Warner, M., Johnson, A. P., Livermore, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activity+of+dalbavancin+against+staphylococci+and+streptococci%2C+assessed+by+BSAC+and+NCCLS+agar+dilution+methods%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+antimicrobial+chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Activity of dalbavancin against staphylococci and streptococci, assessed by BSAC and NCCLS agar dilution methods.</a> The Journal of antimicrobial chemotherapy. 54, 617-620 (2004).</li>
<li>Jones, R. N., Flamm, R. K., Sader, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surveillance+of+dalbavancin+potency+and+spectrum+in+the+United+States+%282012%29%5BTitle%5D)+AND+%22Diagnostic+microbiology+and+infectious+disease%22%5BJournal%5D)">Surveillance of dalbavancin potency and spectrum in the United States (2012).</a> Diagnostic microbiology and infectious disease. 76, 122-123 (2013).</li>
</ol>

סנדרה מק&#39;קרדי הנו עובד Therapeutics Durata; מומחי מעבדה, Inc, מעסיק של לורה Koeth וJeanna פישר, היה חוזה על ידי Therapeutics Durata להכין את כתב היד. עמלות פרסום לכתבה זו שולמו על ידי מומחי מעבדה, Inc.

פרטי השיטה הבאות מוצגים לשיקולים נוספים בעת הכנה לבדיקת MIC dalbavancin. העיצוב של לוח MIC יהיה תלוי במספר סוכני מיקרוביאלית להיבדק (כלומר., Dalbavancin לבד או סוכנים מרובים) והמינים של חיידקים להיבדק. ריכוזי dalbavancin צריכים להקיף את נקודות העצירה הפרשניות לכל מיני החיידקים שנבדקו ואת כל הטווח של דילולים צפויים לפחות אחד זן QC. סדרת דילול מיקרוביאלית יכולה להיות מאורגנת בשורות או עמודות בהתאם למספר סוכני מיקרוביאלית ו / או מבודד / צלחת ושיטה של ​​חיסון. הנפח של אבקת מרק dalbavancin וצריך להיות מחושב כדי להבטיח שכמויות אופטימליות מיוצרות והפסולת היא מינימאלית. לדוגמא בשימוש בפרסום זה, כרכים מבוססים על הכנת שני פנלי MIC. מרק מילר הינטון קטיון הותאם צריך להיות מוכן וautoclaved לפי אדםההוראות ועקרות של התקשורת של ufacturer מאומתים. לוחות MIC יכולים להתבצע ומשמשים באותו יום של הכנה או שהם יכולים להיבדק עם אורגניזמים בקרת האיכות מתאימים ולוחות תוקף מאוחסנים קפוא לשימוש עתידי. חשוב להשתמש בטכניקות סטרילי לאורך כל ההליך. אין קריטריונים נוקשים לאימות של ריכוז הבידוד עם ספירת מושבה. ספירת מושבה יכולה להיבדק בתחילה לכל מינים נבדקו ו / או מעת לעת כדי לאמת את צעד הדילול מתבצע בשלב 4.2. חשוב שהתוקף של תקן מק &#39;פרלנד 0.5 גם בדק באופן שיגרתי עם E. coli ATCC 25922 באמצעות הליך דומה לצעד 4.5. אם התוצאות אינן שווה ערך ל1-2 x 10 8 CFU / ml, יש לקבל סטנדרטי מק &#39;פרלנד 0.5 חדש. אם ספירת המושבה מבארות MIC נמצא מחוץ לטווח המקובל (2-8 10 5 CFU תוצאות x / מיליליטר וMIC לבודד הקליני (ים) משתנות מהדואר צפוי התפלגות נורמלית (לדוגמא. 0.03-.12 UG / מיליליטר לS. aureus) ו / או תוצאות MIC לבודד בקרת איכות (ים) נמצאות מחוץ לטווח צפוי, בדיקות אימות היא הכרחיות ושינוי שיטה עשוי להיות מוצדקים. הוא הציע כי 0.5 סטנדרטי מק &#39;פרלנד תוקף משמש לחזור על ספירת המושבה (ים), ואם תוצאות הן שוב מחוץ לתוצאות צפויות, דילול הבידוד כפי שבוצע בשלב 4.2 צריך להיות בהתאם וMIC חוזר ונשנה. שים לב שבדיקת טוהר היא הכרחית גם אם ספירת מושבה מתבצעת כי הליך ספירת המושבה משתמש נפח מדולל שלא בהכרח לזהות ריכוזים נמוכים של אורגניזמים מזהמים. לבדיקת MIC להיחשב חוקית, צמיחה מקובלת חייבת להתרחש בשליטת הצמיחה גם. עבור רוב החיידקים שייבחנו נגד dalbavancin (כלומר., Staphylococci, סטרפטוקוקוס וenterococci, צמיחה שנראה כמו כפתור (בדרך כלל&gt; 2 מ&quot;מ) ופחות frequently, צמיחה עשויה להופיע כעכירות בבאר. בניגוד לכמה סוכני מיקרוביאלית שעשויה להפגין נגררים השפעת הריכוזים להגדיל, נקודות קצה dalbavancin מוגדרות בדרך כלל היטב. ישנם מכשירים שונים שנועדו להקל על הצפייה בדיקות microdilution הקריאה, אשר עשוי לשמש לקריאת צלחות המכילות dalbavancin כל עוד אין פשרה ביכולת להבחין בצמיחת הבארות. השלבים הקריטיים בפרוטוקול הקשורות לחלקים של ההליך שאינם קשורים למסיסות של dalbavancin ותוספת של P80. חשוב שאת הריכוז המרבי של dalbavancin משמש הוא לא יותר מ -1,600 / מיקרוגרם מיליליטר, DMSO המשמש כממס וכי ריכוזי ביניים ערוכים DMSO לפני ביצוע דילולים המרק כך שהריכוז הסופי של DMSO בMIC פנל הבארות אינן עולים על 1%. DMSO הוא hygroscopic ולכן, השימוש בבקבוקים ישנים יותר של DMSO היה consideratיון ביחס למסיסות dalbavancin. עם זאת, בעוד שמחקר BMD קטן עם זני בקרת האיכות הוכיח את זה לא כדי להיות משתנה חשוב (ראה סעיף תוצאות), זה תרגול טוב להשתמש בבקבוקים חדשים או שנפתחו לאחרונה של DMSO. כמו כן, חשוב שP80 מתווסף המרק בשלב האחרון של הכנת דילול תרופה והוא בריכוז סופי של 0.002% בMIC כן. הליך BMD כלול כאן מנצל הכנת לוחות MIC באמצעות 50 μl / גם בdalbavancin ו- P-80 ריכוזים שתי פעמים הריכוז הסופי ותוספת של הבידוד עם 50 μl / כל כך טוב שנפח סופי / גם הוא 100 μl. שיטה זו מאפשרת לפורמט פנל MIC אחד להיות מיוצר לבדיקה של שני ס aureus וס pneumoniae כי דם סוס lysed ניתן להוסיף לבידוד. שיטות אלטרנטיביות להכנת לוחות MIC באמצעות 100 μl / גם עם תוספת של עד 10 μl / גם מתוארות בנהלי CLSI ו- ISO. נקודת העצירה רגישה dalbavancin לס aureus הוא ≤0.12 מיקרוגרם / מיליליטר (עלון FDA). כפי שמוצג במעקב האחרון, רוב מבודדים מעוכבים על ידי dalbavancin ברמות של 0.06 מיקרוגרם / מיליליטר 15. עם נקודת עצירה רגישה קרוב לMIC מודאלית, כל שינוי בMIC כתוצאה מהבדלים בשיטה יכול להשפיע על שיעורי רגישות. בגלל הליך BMD לdalbavancin כולל כמה שלבים ייחודיים (במיוחד, השימוש בDMSO בהכנת מניות ודילולי תרופת ביניים וP80 0.002% בMIC טוב, זה הכרחי כי השיטה המיושמת בדיוק. האורגניזם S. aureus QC (ATCC 29,213) עם MIC מודאלי dalbavancin מאוד ברור של 0.06 מיליליטר מיקרוגרם /, היה אינדיקטור טוב של וריאציה שיטה ויש להשתמש באופן שיגרתי כדי לאמת את שיטת BMD. אם תוצאות MIC הן עם הטווח הצפוי של .03-.12 מיקרוגרם / מיליליטר, אך במגמה לאו נמוך או HIGצד שעות של טווח זה, אימות נוספת של השיטה היא מוצדקת. התוספת של P80 0.002% מומלצת לכל היצורים גרם-חיובי רלוונטי (staphylococcci, enterococci, וסטרפטוקוקוס.) עם זאת, ראוי לציין כי זה כבר הראה כי lysed דם סוס פועל בדומה לP-80 ביחס לה אנטי-מחייב יכולת וכי התוספת של P-80 לCAMHB + LHB אין כל השפעה נוספת על תוצאות MIC סטרפטוקוקוס dalbavancin. אין כרגע שיטת דיפוזיה דיסק לdalbavancin בדיקות ובגלל עניי המתאם של BMD ותוצאות הספירה, בדיקת רגישות של dalbavancin בשיטת הספירה אינו מומלצת 12, 14. שיטת BMD צריכה לשמש להערכה העתידית של רגישות dalbavancin וכתקן זהב לפיתוח בדיקות רגישות מיקרוביאלית מסחריות.

Dalbavancin הוא lipoglycopeptide חצי סינטטי שאושר על ידי ה- FDA מאי 2014 לטיפול בדלקות עור ומבנה עור חיידקים חריפים הנגרמות על ידי אורגניזמים גרם-חיובי 1. המטרה העיקרית של שיטה זו מפרטת בפורמט וידאו היא לספק הדרכה ברורה למדענים במעבדה ומחקרים הקליניים לבדיקה ודיווח של תוצאות רגישות dalbavancin מדויקות ושחזור. הנחישות של סוכן מיקרוביאלית MIC בשיטות מסחריות מבוצעת באופן שגרתי במעבדות קליניות להערכת הפעילות במבחנה של סוכן נגד חיידקים פתוגניים. השיטה המתוארת כאן היא שיטת microdilution מרק כפי שהומלץ על ידי CLSI וISO 2,3,4. מאז dalbavancin שיטות רגישות מסחריות אינן זמינות כעת (בזמן של פרסום זה) ודיפוזיה דיסק ושיטות דילול אגר אינם מומלצים F כרגעאו dalbavancin, שיטות דילול מרק התייחסות הן האפשרויות הזמינות הנוכחיות 12,14. כשיטת התייחסות זו היא לא מסחרית וFDA פינה במבחנה שיטת אבחון, מעבדות קליניות בארה&quot;ב המשתמשת בהליך זה לבדיקת מטופל חייב לציית לדרישות הרגולטוריות לבדיקת מעבדה פיתחה (LDT). זה צפוי כי ככל שעולה שימוש dalbavancin, תהיה יותר מעבדות צורך לבדוק מתחם זה. בדיקות Vancomycin כתחליף לקביעת רגישות dalbavancin של ס aureus אומת 5. עם זאת, dalbavancin עשוי להיות פעיל נגד ס ביניים vancomycin aureus (ויזה) ולכן, רופאים יכולים לבקש תוצאות MIC dalbavancin. בנוסף, תוצאות MIC למיני חיידקים אחרים ניתן לבקש. נקודת העצירה רגישה FDA לdalbavancin נגד ס aureus כבר נקבע ב≤0.12 מיקרוגרם / מיליליטר. ה- FDA הוקצה רק susceptiהקטגוריה ble בגלל המחסור בנתונים על בידודים עמידים. הפצת MIC הנורמלית בין הסוג בר ס aureus המבודד הוא בין 0.03-.12 מיקרוגרם / מיליליטר, עם MIC מודאלי ברור של 0.06 מיקרוגרם / מיליליטר. וריאציה קלה בתוצאות MIC בשל הבדל בשיטה, בנוסף לוריאצית BMD הטבועה של ± אחד דילול, עלולה להיות השפעה משמעותית על שיעורי הרגישות. 6 דומים לסוכני lipoglycopeptide אחרים, בדיקת רגישות dalbavancin יכולה להיות מאתגרות כתוצאה של מסיסות והגודל גדול יחסית של המולקולה ומאפייניה מחייבים 7,8,9. שיטת BMD ההתייחסות המתוארת כאן כוללת שני צעדים ספציפיים שהנם ייחודיים לסוכנים מסיסים ו / או סוכני lipoglycopeptide: (1) השימוש בDMSO להכנת פתרונות מניות ו( 2) תוספת של 0.002% P-80 בלוח MIC הסופי דילולים. המטרה של פרסום וידאו זה היא לספק בהירות לשיטת BMD dalbavancin ולspecifically להתמקד בצעדים מפתח אלה, כדי להבטיח תוצאות MIC מדויקות ושחזור.

<table><tbody><tr><td>Dalbavancin</td><td>Metrics, Inc.</td><td>גרינוויל, קרוליינה הצפונית</td><td>BI-397</td></tr><tr><td>Vancomycin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>סנט לואיס, MO</td><td>C5793</td></tr><tr><td>Cation מותאם מולר הינטון מרק</td><td>בקטון דיקינסון</td><td>ספארקס, MD</td><td>212322</td></tr><tr><td>דם סוס ליזה</td><td>קליבלנד סיינטיפיק</td><td>אמבט, OH</td><td></td></tr><tr><td>מינון משאבה פריסטלטית</td><td>Integra Biosciences</td><td>הדסון, NH</td><td></td></tr><tr><td>פיפט רב ערוצי (Viaflo II)</td><td>Integra</td><td>Hudson, NH</td><td>4164</td></tr><tr><td>12 ערוצים פיפט (מטריקס)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>Waltham, MA</td><td></td></tr><tr><td>Single channelpPipets (Ovation 10 &micro; l - 100 ומיקרו; l)</td> <td>VistaLab</td><td>Brewster, NY</td><td></td></tr><tr><td>96 באר מיקרופלייט</td><td>גריינר ביו-אחד</td><td>מונרו, NC</td><td>650161</td></tr><tr><td>50 מ"ל צינורות צנטריפוגה תחתונה חרוטית שטוחה</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>Waltham, MA</td><td></td></tr><tr><td>16x125 מ"מ צינורות זכוכית חד פעמיים</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>Waltham, MA</td><td></td></tr><tr><td>12x17 מ"מ מכסה הצמד, צינורות פוליסטירן</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>Waltham, MA</td><td></td></tr><tr><td>צינורות צנטריפוגה 16 מ"ל</td><td>BioExpress</td><td>Kaysville, UT</td><td>C-3394-2</td></tr><tr><td>מאגרי ריאגנטים</td><td>Integra Biosciences</td><td>Hudson, NH</td><td>4312</td></tr><tr><td>סטרילולאות חד פעמיות (1 ומיקרו; l & 10 ומיקרו; l)</td> <td>Biologix</td><td>Lenexa, KA</td><td>65-0001,65-0010</td></tr><tr><td>אגר סויה טריפטי + 5% דם כבשים</td><td>Becton Dickinson</td><td>Sparks, MD</td><td></td></tr><tr><td>Incubator (סביבה)</td> <td>Sanyo</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Incubator (5% CO2)</td> <td>Sanyo</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Analytical Balance&nbsp;</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>Waltham, MA</td><td></td></tr><tr><td>כפפות</td><td>קימברלי-קלארק</td><td></td><td>52817</td></tr><tr><td>מעילי מעבדה</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

microdilution שיטת ההפניה מרק לdalbavancin<em&gt; במבחנה</em&gt; בדיקה של רגישות חיידקים שגדלות אירובי

A Reference Broth Microdilution Method for Dalbavancin In Vitro Susceptibility Testing of Bacteria that Grow Aerobically

בדיקת רגישות מיקרוביאלית (AST) מתבצעת על מנת להעריך את הפעילות במבחנה של סוכני מיקרוביאלית נגד חיידקים שונים. תוצאות AST, שבאות לידי ביטוי כריכוזים מעכבים מינימליים (מיקרופונים) משמשות במחקר לפיתוח ולניטור מיקרוביאלית של פיתוח עמידות ובהגדרה הקלינית להדרכת טיפול אנטיביוטיה. Dalbavancin הוא סוכן מיקרוביאלית lipoglycopeptide חצי סינטטי שאושר מאי 2014 על ידי מנהל המזון והתרופות אמריקניות (FDA) לטיפול בדלקות עור ומבנה עור חיידקים חריפים הנגרמות על ידי אורגניזמים גרם-חיוביים. היתרון של dalbavancin על טיפולים אנטי-staphylococcal הנוכחיים הוא זמן מחצית החיים הארוכים שלה, המאפשר למינון של פעם בשבוע. יש Dalbavancin פעילות נגד Staphylococcus aureus (כולל שני וmethicillin-רגיש S. aureus [MSSA] methicillin-resistant S. aureus [MRSA]) staphylococci, coagulase-שלילי, <em&gt; Streptococcus pneumoniae, קבוצת סטרפטוקוקוס anginosus, סטרפטוקוקוס β-המוליטית וenterococci רגיש vancomycin. בדומה לסוכנים אחרים האחרונים lipoglycopeptide, אופטימיזציה של שיטות בדיקת רגישות CLSI ומרק ISO כולל את השימוש של sulfoxide דימתיל (DMSO) כממס בעת הכנת פתרונות מניות וpolysorbate 80 (P80) כדי להקל על דבקותו של הסוכן לפלסטיק. לפני המחקרים הקליניים ובפיתוח הראשוני של dalbavancin, מחקרי רגישות לא בוצעו תוך השימוש בP-80 ותוצאות MIC נטו להיות גבוה פי 2-4 ובאופן דומה הגבוה MIC תוצאות שהושגו עם שיטת רגישות הדילול אגר. Dalbavancin נכלל לראשונה בשולחנות מתודולוגיה microdilution מרק CLSI בשנת 2005 ותוקן בשנת 2006 כדי להבהיר שימוש בDMSO ו- P-80. Microdilution מרק ההליך (BMD) מוצג כאן הוא ספציפי לdalbavancin והנו בהתאם לשיטות CLSI ו- ISO, עם פירוט וfoc צעד-אחר-צעדשלנו בשלבים הקריטיים הוסיף לבהירות.

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לקביעת רגישות לדלבנצין של חיידקים גראם-חיוביים רלוונטיים מבחינה קלינית באמצעות מתודולוגיית ייחוס של מיקרו-דילול מרק.

Microdilution שיטת ההפניה מרק לDalbavancin<em&gt; במבחנה</em&gt; בדיקה של רגישות חיידקים שגדלות אירובי

Antimicrobial susceptibility testing (AST) is performed to assess the in vitro activity of antimicrobial agents against various bacteria. The AST results, ...

המטרה הכללית של הפרוצדורה הבאה היא לקבוע את הריכוז המעכב המינימלי (MIC) עבור dalbavancin. לשם כך, נעשה שימוש בשיטת הדילול המיקרובי במיציר (broth micro dilution), תוך התמקדות בשלבים מרכזיים הייחודיים ל-dalbavancin. תמיסות המלאי והדילול הביניים של dalbavancin הוכנו ב-DMSO, והדילולים הסופיים הוכנו במיציר Mueller Hinton עם התאמת קטיונים ותוספת של polysorbate.את הדילוציות מעבירים לפלטת 96 בארות ומזריעים אותן בסספנסיה סטנדרטית של חיידקים. הפלטה מדגרה לאחר מכן למשך 16 עד 24 שעות ונבדקת כדי לקבוע את הכמות המינימלית של dalbavancin הנדרשת לעיכוב הצמיחה החיידקית. הקפדה על שיטה סטנדרטית זו תבטיח תוצאות עקביות הן עם בידודים קליניים והן, כפי שמוצג כאן, עם בידודים לבקרת איכות. Dalbavancin הוא סוכן אנטימיקרוביאלי מסוג ליפוגליקופפטיד חצי-סינתטי שאושר במאי 2014 על ידי ה-FDA לטיפול בזיהומים חיידקיים חריפים של העור ומבני העור הנגרמים על ידי אורגניזמים גרם-חיוביים.שיטה זו מתארת את שיטת המדלול המיקרוסקופי בבסיס ציר סטנדרטית לבדיקת רגישות ל-dassin, הכוללת שימוש ב-DMSO להכנת תמיסות סטוק ב-polysorbate 80 כדי להפחית את היצמדות החומר לפלסטיק. הדגמה חזותית של שיטה זו היא מועילה, כיוון ששלבי הכנת תמיסות הסטוק והלוח של ה-MIC אינם טיפוסיים בהשוואה לרוב הסוכנים האנטימיקרוביאליים. שלבים אלו ייחודיים לסוכני lipo Glycopeptide וחשוב להקפיד עליהם על מנת להשיג תוצאות MIC מדויקות ועקביות.את הפרוצדורה תדגים ג'ינה פישר, מדענית מחקר מהמעבדה שלי. אנא שימו לב כי יש לנקוט באמצעי בטיחות מתאימים התואמים לרמת ביו-בטיחות 2 בעת ביצוע הפרוצדורה הבאה. התחילו בשקילת הכמות המתאימה של dalbavancin להכנת תמיסת מלאי בריכוז של 800 µg/mL.הוסף את הכמות המתאימה של NEAT DMSO לשפופרת זכוכית או פלסטיק סטרילית, לאחר מכן העבר את האבקה לשפופרת וערבב באמצעות וורטקס. בשלב הבא, באמצעות תמיסת המלאי של DALBAVANCIN בריכוז 800 µg/mL, הכן ריכוזים של 100 x מהריכוז הסופי בצלחת MIC כפי שמוצג בעמודות אחת עד ארבע. אלו מכונים הריכוזים הביניים.הנפח הכולל שיוכן יהיה תלוי במספר פנלי ה-MIC. לבסוף, דללו את הריכוזים הביניים ביחס של 1:100 בתוך ציר Mueller Hinten ללא התאמת קטיונים, הידוע גם כ-C-A-M-H-B, המועשר ב-0.004%P 80. ריכוז העבודה המתקבל של DALBAVANCIN ו-P 80 הוא כפול מהריכוז הסופי.מכיוון שהוספת האינוקולום תגרום לדילול של פי אחד עד שניים, השתמש בפפיטה רב-ערוצית עם טיפים סטריליים כדי לחלק 50 µL מכל דילול של dalbavancin לבארים המתאימות בלוח מיקרו-דילול סטרילי של 96 בארות. פורמט לוח ה-MIC מאפשר לבחון שמונה אינוקולומים ללוח. אם לא יעשה שימוש בלוחות באופן מיידי, יש לאטום אותם בעזרת סרט פלסטיק, להניחם בשקיות פלסטיק ולאחסנם במקפיא ללא הפשרה בטמפרטורה של לפחות 60°C- עד למועד השימוש.בהדגמה זו, תבוצע הזרעה של צלחת שהוכנה טרי. כדי להכין את התרבית להזרעה (inoculum), יש לבחור מספר מושבות מבודדות היטב מבינונית דם (blood agar) שנרקבה למשך 18 עד 24 שעות או מכל צלחת אגר לא סלקטיבית אחרת. כאן, נעשה שימוש בזנקי בקרת איכות של s aria ו-EPHI callous.געו בראש כל מושבה באמצעות מקלון סטרילי והעבירו חלק ממנה למבחנה המכילה 1 עד 5 milliliters של C-A-M-H-B או תמיסת סליין. המשיכו בהעברה עד שהעכירות תתאם לתקן 0.5 McFarland בתוך 15 עד 30 דקות מההכנה, דללו את האינוקולום ביחס של 1 ל-100 ב-C-A-M-H-B כדי להגיע לריכוז סופי של 5 × 10⁵ CFU ל-milliliter. הטווח המקובל הוא 2 עד 8 × 10⁵ CFU ל-milliliter.העבירו באופן מיידי, באמצעות פיפט רב-ערוצי עם טיפים סטריליים, 50 µL מהאינוקולום הסופי לכל באער מתאים בלוח ה-MIC כאן. ארבע שורות מוחדרות עם כל אחד משני הבידודים, לסך של ארבע חזרות לכל בידוד. לאחר מכן, כדי לבצע בדיקת טוהר, השתמשו בפיפט כדי להעביר 1 עד 10 µL מהתמיסה בביקרת הצמיחה החיובית למצע אגר לא-סלקטיבי, כגון try decay's soy agar עם 5% sheep blood.השתמש בלופ סטרילי כדי לפרוס את התמיסה על פני השטח של הצלחת. סובב את הצלחת ב-90 מעלות ובצע ריסוס נוסף כדי להבטיח שהאינוקולום מפזר באופן אחיד. כסה את הצלחת והנח אותה בצד.כהכנה לספירת מושבות, השתמש בפפיטה בערוץ בודד כדי להעביר 10 µL מהתמיסה בבאר בקרת הגדילה לתוך 10 mL של תמיסת סלין, ולאחר מכן העבר 100 µL למצע גידול לא סלקטיבי מתאים, כגון try toay soy agar עם 5% sheep blood; באמצעות לולאה סטרילית, פזר את התמיסה על פני כל שטח המצע. חזור על תהליך זה פעמיים בכיוונים שונים כדי להבטיח פיזור אחיד של האינוקולום. לאחר מכן, ערם עד ארבעה לוחות MIC בתוך מכל פלסטיק, תוך וידוא כי הלוח העליון אטום היטב באמצעות מכסה.לאחר מכן, הניחו מגבת נייר לחה בתוך המכל הפלסטי וסגרו אותו היטב עם המכסה בתוך 30 דקות מההזרקה. דגרו את פנלי ה-MIC, את צלחת ספירת המושבות ואת צלחת בדיקת הטוהר באינקובטור לאוויר סביבתי בטמפרטורה של 35 פלוס או מינוס שתי מעלות צלזיוס למשך 16 עד 20 שעות. למחרת, קבעו את הריכוז העכבני המינימלי כריכוז הנמוך ביותר המעכב לחלוטין את הצמיחה הבקטריאנית בבארות, כפי שניתן לזהות בעין בלתי מזוינת.קבעו את מספר המושבות בצלחת לספירת מושבות. הכפילו את המספר שנספר במקדם הדילול. לדוגמה, 50 מושבות כפול מקדם דילול של 10,000 שווה ל-5 כפול 10 בחזקת 5 CFU למיליליטר.טווח מקובל הוא 20 עד 80 מושבות, ששווה ל-2 עד 8 כפול 10 בחזקת 5 יחידות יוצרות מושבות למל'. ריכוז האינוקולום הוא משתנה חשוב לבקרת בדיקת הרגישות על מנת להשיג תוצאות מדויקות. לבסוף, יש לבדוק את צלחת הניקיון.אם כל המושבות דומות למושבות ששימשו כאינוקולום, ניתן להחשיב את התרבית כטהורה. אם קיימות מושבות אחרות, קיים פוטנציאל לנוכחות של זיהום בלוח ה-MIC ויש לחזור על הבדיקה. DAL bevans, תוצאות ה-MIC הושוו לאלו שהתקבלו באמצעות שיטת הדילול במוצק (agri dilution) כפי שמוצג כאן.תוצאות ה-MIC בשיטת הדיפוזיה על מצע מוצק (Agri) עבור Dal bevans גבוהות בדרך כלל פי שניים עד שמונה מאלו של שיטת הדילול במידיום נוזלי (broth). תוצאות MIC של מיקרו-דילול. זאת בניגוד לתוצאות עבור vancomycin, שהן דומות בשיטות הדילול בנוזל ובדיפוזיה על מצע מוצק.לפיכך, דילול באגר אינו מומלץ לבדיקת ציר דאלבבנסין (dalbavancin). תוצאות ה-MIC בדילול מיקרוביאלי עבור בקרת איכות צריכות להיות בטווחים הצפויים כפי שמוצג כאן. מיקרואורגניזם בקרת האיכות SS, ATCC 29213, עם MIC מודאלי ברור מאוד של 0.06 micrograms per milliliter, היווה אינדיקטור טוב לשונות בשיטה.אם התוצאות שהתקבלו נמצאות מחוץ לטווחים הצפויים עבור אורגניזמי בקרת האיכות, או במגמה לכיוון הקצה הנמוך או הגבוה של הטווח, יש לבצע תיקוף נוסף של השיטה. בנוסף לתיקוף השיטה באמצעות אורגניזמי בקרת איכות ל-dalbavancin, נתונים של MIC מתוכניות מעקב אנטימיקרוביאליות אזוריות יכולים לספק בסיס לתוצאות ה-MIC הצפויות בסביבת המעבדה הקלינית; כפי שמוצג כאן, תוצאות ה-MIC של Dal b Anson עבור בידודים שנאספו באירופה ובארה"ב בין 2011 ל-2013 היו נמוכות מ-0.25 µg/mL עבור 99.9% של SIUs ו-100% של streptococci. על סמך נתוני מעקב אלו, ניכר כי תוצאות MIC של dalbavancin עבור staphylococci ו-streptococci הגבוהות מ-0.12 µg/mL הן נדירות.אם נצפו ערכים גבוהים יותר, יש לחזור על הבדיקה ו/או לשלוח אותה למעבדה ייחוס לצורך תיקוף. הכנת דילול מלאי ב-DMSO והוספת P 80 לדילול המצע בריכוז של 0.002% בבאר ה-MIC הסופית הם השלבים הקריטיים להשגת תוצאות MIC מדויקות וניתנות לשחזור עבור dalbavancin. כहमבכלל, ובמיוחד בתחום זה של פיתוח עמידות חיידקית, תוצאות מדויקות של רגישות לאנטימיקרוביאליים הן קריטיות לבחירת הטיפול המתאים על ידי הקלינאי.

a-reference-broth-microdilution-method-for-dalbavancin-vitro

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

בדיקות רגישות Antimicrobial של Mycobacterium tuberculosis מאתגרת אך קריטי עבור הטיפול בחולה. מתכונת זו צלחת microtiter מציע בדיקה של 12 תרופות antimycobacterial ומספק ריכוז מעכבות המינימלי (MIC) ערכים, אשר יסייע הטיפול המתאים.

רגישות בדיקת Antimicrobial של קומפלקס שחפת Mycobacterium עבור תרופות הקו הראשון והשני על ידי דילול מרק בפורמט פלייט microtiter

בדיקות אבחון רגישות מיקרוביאלית הנוכחי מסתמך על צמיחה של planktonic מבודד ב מזין, עשיר תנאים אירוביים. כאן, אנו מעסיקים בינוני חלופה כיח מלאכותית ללמוד הרגישות מיקרוביאלית של Pseudomonas aeruginosa biofilms תחת שני תנאים אירוביים ו microaerophilic נציג נוסף של הריאה סיסטיק פיברוזיס.

שימוש בינוני כיח מלאכותית לבדיקת יעילות אנטיביוטי נגד<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em&gt; בתנאי רלוונטיים יותר ריאות סיסטיק פיברוזיס

מקור: Koeth, L. M., et. al., A Reference Broth Microdilution Method for Dalbavancin In Vitro Susceptibility Testing של חיידקים הגדלים באופן אירובי. J. Vis. Exp. (2015).סרטון זה מדגים את שיטת מיקרו-דילול המרק לקביעת הריכוז המעכב המינימלי (MIC) של אנטיביוטיקה ליפוגליקופפטיד כנגד חיידקים גראם חיוביים. הוא מכסה בידוד מושבות חיידקים, דילול, חיסון בארות מיקרו-צלחת עם ריכוזי אנטיביוטיקה משתנים, ואימות טוהר התרבית וספירת התאים. הסרטון גם מסביר כיצד קשירת אנטיביוטיקה משבשת את סינתזת דופן התא, מה שמוביל...

שיטת מיקרו-דילול מרק לבדיקת רגישות לאנטיביוטיקה של חיידקים גראם חיוביים

סרטון זה מדגים שיטה מבוססת צלחת מיקרוטיטר לקביעת הריכוז המעכב המינימלי (MIC) של אנטיביוטיקה לבדיקה נגד חיידקים. עם הוספת תרחיף של הפתוגן החיידקי Pseudomonas aeruginosa לצלחת מיקרוטיטר המכילה דילולים סדרתיים של אנטיביוטיקה לבדיקה, ומעכב ייצור פיומלנין על ידי החיידקים, נמדדת הצפיפות האופטית של הבארות כדי לחשב את הריכוז המעכב המינימלי של האנטיביוטיקה, ואת ההשפעה של מעכב ייצור פיומלנין על הרגישות לאנטיביוטיקה של החיידקים.

שיטת צלחת מיקרוטיטר להערכת הריכוז המעכב המינימלי של אנטיביוטיקה

סרטון זה מדגים בדיקת מבחנה לסינון תרכובות אנטי פטרייתיות באמצעות בדיקת מיקרודילוציה של מרק. תרכובות הבדיקה מדוללות באופן סדרתי בצלחת מיקרוטיטר ומודגרות עם חיסון פטרייתי. לאחר הדגירה, הצלחת נבדקת עבור בארות ללא צמיחה פטרייתית נראית לעין כדי להעריך את הפוטנציאל האנטי פטרייתי של תרכובות הבדיקה ואת הריכוז המעכב המינימלי שלהם (MIC).

בדיקת מיקרודילוציה במבחנה של מרק להקרנה של תרכובות אנטי פטרייתיות

ה-charcoal agar resazurin assay (CARA) היא שיטה כמותית למחצה, תפוקה בינונית להערכת הפעילות של סוכני בדיקה כנגד מיקובקטריות המשכפלות, אינן משתכפלות או שניהם.  ה-CARA מאפשר הערכה מהירה של פעילות תלוית זמן וריכוז ומזהה פרמטרים שיש לעקוב אחריהם על ידי מבחני יחידת יצירת מושבה (CFU).

ויזואליזציה של Assay Resazurin פחם אגר עבור וכמותיות, ספירת בינוני תפוקה של Mycobacteria

שיטת microdilution מרק קל וישימה לסינון תרכובות פטריות ותמציות.

מרק Microdilution במבחנה הקרנה: שיטה קלה ומהירה כדי לזהות תרכובות חדשות נגד פטריות

פרוטוקול זה מציג בדיקת רגישות אנטי-מיקרוביאלית מהירה (AST) תוך 2.5 שעות על ידי הדמיית פיזור ראמן מגורה בתא יחיד של חילוף החומרים של D2O. שיטה זו חלה על חיידקים בשתן או בסביבת דם שלמה, שהיא טרנספורמטיבית עבור AST פנוטיפי מהיר של תא יחיד במרפאה.

בדיקת רגישות אנטי-מיקרוביאלית מהירה על ידי הדמיה מגורה של פיזור ראמאן של שילוב דאוטריום בחיידק יחיד

כאן אנו מציגים פרוטוקול לזיהוי מועמדים פוטנציאליים לתרופות נגד שחפת באמצעות סקר פנוטיפי, הכולל סינתזה כימית של תרכובת 4-אמינוקווינולין, קביעת ריכוז המעכב המינימלי שלה נגד מיקובקטריום טוברקולוזיס, והערכת הציטוטוקסיות שלה בקווי תאים יונקים.

זיהוי מועמדים פוטנציאליים לאנטי-שחפת: מדריך שלב אחר שלב לסינתזה, קביעת MIC והערכת ציטוטוקסיות בתאי יונקים

אנו מתארים שיטה פשוטה, מהירה וחזקה...

96 microtiter ובכן פלייט מבוססי שיטה ליצירת ניטור ובדיקה של רגישות נגד פטריות קנדידה אלביקנס Biofilms

למדו את שיטת המיקרודילושן בנוזל לבדיקת רגישות חיידקים גראם-חיוביים לדלבוונצין. הפרוטוקול כולל הכנת תמיסות מניות ב-DMSO ושימוש בברוט מולר הינטון מתוסף בפוליסורבט 80.

Microdilution שיטת ההפניה מרק לDalbavancin

גלה סרטונים נוספים