Name: פוטודינמי תרפיה עם Blended ניצוח פולימר / פולרן Nanoparticle פוטוסנסיטייסרים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-10-28T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 45 s
Description: חקור שיטת ייצור ננו-חלקיקי פולימר מוליכים מעורבבים עם פולרן לטיפול פוטודינמי בסרטן. השיטה מייצרת חומרים רגישים לאור לטיפול יעיל בתאי סרטן שחלתיים תוקפניים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מודים בהכרת תודה לקרן הלאומית למדע (NSF) על תמיכתה הכספית בעבודה זו באמצעות פרס CAREER (CBET-0746210) ובאמצעות פרס CBET-1159500. ברצוננו להודות לד"ר טורקסון (מרכז הסרטן של אוניברסיטת הוואי) ולד"ר אלטומאר (אוניברסיטת המכללה לרפואה של מרכז פלורידה) על הסיוע בתרבית תאים.

<ol><li>Dolmans, D., Fukumura, D., Jain, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photodynamic+therapy+for+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Photodynamic therapy for cancer.</a> Nat Rev Cancer. 3 (5), 380-387 (2003).</li>
<li>Dougherty, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photodynamic+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Natl+Cancer+Inst%22%5BJournal%5D)">Photodynamic therapy.</a> J Natl Cancer Inst. 90 (12), 889-905 (1998).</li>
<li>Ferrari, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+nanotechnology%3A+Opportunities+and+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Cancer nanotechnology: Opportunities and challenges.</a> Nat Rev Cancer. 5 (3), 161-171 (2005).</li>
<li>Oleinick, N. L., Morris, R. L., Belichenko, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+apoptosis+in+response+to+photodynamic+therapy%3A+what%2C+where%2C+why%2C+and+how%5BTitle%5D)+AND+%22Photochem+Photobiol+Sci%22%5BJournal%5D)">The role of apoptosis in response to photodynamic therapy: what, where, why, and how.</a> Photochem Photobiol Sci. 1 (1), 1-21 (2002).</li>
<li>Ormond, A., Freeman, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dye+Sensitizers+for+Photodynamic+Therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Materials%22%5BJournal%5D)">Dye Sensitizers for Photodynamic Therapy.</a> Materials. 6 (3), 817-840 (2013).</li>
<li>Pass, H. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photodynamic+Therapy+in+Oncology+-+Mechanisms+and+Clinical+Use%5BTitle%5D)+AND+%22J+Natl+Cancer+Inst%22%5BJournal%5D)">Photodynamic Therapy in Oncology - Mechanisms and Clinical Use.</a> J Natl Cancer Inst. 85 (6), 443-456 (1993).</li>
<li>Sariciftci, N. S., Smilowitz, L., Heeger, A. J., Wudl, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photoinduced+electron+transfer+from+a+conducting+polymer+to+buckminsterfullerene%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Photoinduced electron transfer from a conducting polymer to buckminsterfullerene.</a> Science. 258 (5087), 1474-1476 (1992).</li>
<li>Sperandio, F. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photoinduced+electron-transfer+mechanisms+for+radical-enhanced+photodynamic+therapy+mediated+by+water-soluble+decacationic+C-70+and+C84O2+Fullerene+Derivatives%5BTitle%5D)+AND+%22Nanomed-Nanotechnol%22%5BJournal%5D)">Photoinduced electron-transfer mechanisms for radical-enhanced photodynamic therapy mediated by water-soluble decacationic C-70 and C84O2 Fullerene Derivatives.</a> Nanomed-Nanotechnol. 9 (4), 570-579 (2013).</li>
<li>Fan, J. Q., Fang, G., Zeng, F., Wang, X. D., Wu, S. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Water-Dispersible+Fullerene+Aggregates+as+a+Targeted+Anticancer+Prodrug+with+both+Chemo-+and+Photodynamic+Therapeutic+Actions%5BTitle%5D)+AND+%22Small%22%5BJournal%5D)">Water-Dispersible Fullerene Aggregates as a Targeted Anticancer Prodrug with both Chemo- and Photodynamic Therapeutic Actions.</a> Small. 9 (4), 613-621 (2013).</li>
<li>Grynyuk, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photoexcited+fullerene+C-60+disturbs+prooxidant-antioxidant+balance+in+leukemic+L1210+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Materialwiss+Werkstofftech%22%5BJournal%5D)">Photoexcited fullerene C-60 disturbs prooxidant-antioxidant balance in leukemic L1210 cells.</a> Materialwiss Werkstofftech. 44 (2-3), 139-143 (2013).</li>
<li>Liu, X. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Separately+doped+upconversion-C-60+nanoplatform+for+NIR+imaging-guided+photodynamic+therapy+of+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Chem+Commun%22%5BJournal%5D)">Separately doped upconversion-C-60 nanoplatform for NIR imaging-guided photodynamic therapy of cancer cells.</a> Chem Commun. 49 (31), 3224-3226 (2013).</li>
<li>Trpkovic, A., Todorovic-Markovic, B., Trajkovic, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toxicity+of+pristine+versus+functionalized+fullerenes%3A+mechanisms+of+cell+damage+and+the+role+of+oxidative+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Toxicity of pristine versus functionalized fullerenes: mechanisms of cell damage and the role of oxidative stress.</a> Arch Toxicol. 86 (12), 1809-1827 (2012).</li>
<li>Chen, Z. Y., MA, L. J., Liu, Y., Chen, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Applications+of+Functionalized+Fullerenes+in+Tumor+Theranostics%5BTitle%5D)+AND+%22Theranostics%22%5BJournal%5D)">Applications of Functionalized Fullerenes in Tumor Theranostics.</a> Theranostics. 2 (3), 238-250 (2012).</li>
<li>Park, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bulk+heterojunction+solar+cells+with+internal+quantum+efficiency+approaching+100%25%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Photonics%22%5BJournal%5D)">Bulk heterojunction solar cells with internal quantum efficiency approaching 100%.</a> Nat Photonics. 3 (5), 297-302 (2009).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

כדי להשיג ספיגת ננו-חלקיקים היה צורך לשמור על כמה צעדים קריטיים בזמן בודה חלקיקים. פתרון 10 -6 M MEH-PPV (מעורבב עם PCBM% 50 WT) בTHF היה מוכן להזריק לתוך המים DI, כפי שציין כי הריכוז של פתרון זה משחק תפקיד חשוב בקביעת הגודל של חלקיקים שנוצר. ריכוז נבדק על ידי ספקטרוסקופיה UV מול. שים לב כי בשלב פרוטוקול 2.1.3 היה צורך לדלל את פתרון MEH-PPV תחילה מוכן (פתרון מניות MEH-PPV חי) הראשון לפני נטילת UV מול ספקטרה מאז הפתרון הזה יש הספיגה גדולה בהרבה מ1. המהירות של הזרקה גם מש...

בפוטודינמי תרפים פוטוסנסיטייסרים (PDT) מנוהלים למקד רקמות, ובחשיפה לאור הפוטוסנסיטייזר יוצר מינים תגובתי חמצן (ROS). מיני ROS כגון חמצן וסופראוקסיד גופייה יכולים לגרום ללחץ חמצוני ונזק מבני לאחר תאים ורקמות 1-4. בשל קלויות יישום שיטה זו נחקרה באופן פעיל וניסויים קליניים התרחשו 5,6. עם זאת, סוגיות מהותיות כגון רעילות אפלה של הרגישות ל, רגישות מטופל לאור (עקב החלוקה הלא סלקטיבי של sensitizer), והידרופוביות של הרגישות ל( מה שמוביל לזמינות ביולוגית מופחתת ורעילות אקוטית פוטנציאלית) יישארו. כאן אנו מדווחים על שיטה לייצור וב- המבחנה הערכה של ניהול חלקיקי פולימר מעורבב עם פולרן כפוטוסנסיטייסרים הדור הבא לPDT. חלקיקים נוצרים על ידי צבירה עצמית שלהפולימר מוליכים למחצה MEH-PPV (פולי [2-methoxy-5 (2-ethylhexyloxy) -1,4-phenylenevinylene]) עם PCBM פולרן (פניל-C 61 תיל אסטר חומצת -butyric) כאשר חומרים אלה מומסים בתואמים ממס מוזרקים במהירות לתוך ממס שאינו תואם (איור 1 א). הבחירה של MEH-PPV כפולימר המארח מונעת על ידי מקדם ההכחדה הגבוהה שלה שמוביל לשיעורים גבוהים של היווצרות שלישייה, וגם העברת מטען ואנרגיה יעילה וultrafast לPCBM פולרן 7. מאפיינים אלה הם אידיאליים עבור רגישות של חמצן גופייה והיווצרות סופראוקסיד בPDT. פולרן יש למעשה יושם בPDT בשתי הצורה המולקולרית וננו-חלקיקים 8-13. עם זאת, רעיל חמור שהקשה על התפתחות נוספת 12. כאן אנו מראים כי מתמצתים את פולרן במטריצת שורה של MEH-PPV להניב תוצאות חלקיקי MEH-PPV / PCBM מרוכבים בחומר רגיש PDT שזה לא רעיל לתאים באופן מהותי, תערוכות סגוליות לתאי סרטן בשל גודל ננו-חלקיקים ותשלום פני השטח, ותשואות טיפול PDT יעיל במינונים נמוכים אור בשל מאפייני photophysical האמורים.

<table><tbody><tr><td>פולי [2-מתוקסי-5-(2-אתיל-הקסילוקסי)-1,4-פנילנווינילן] (MEH-PPV)</td><td>סיגמא איידריך</td><td>536512-1G</td><td>ממוצע Mn&nbsp; 150,000-250,000</td></tr><tr><td>[6,6]-פניל C61&nbsp; חומצה בוטירית מתיל אסטר (PCBM)</td><td>סיגמא איידריך</td><td>684449-500MG</td>><td>99.5%</td></tr> <tr><td>טטרהידרופוראן (THF)</td><td>EMD</td><td>TX0284-6</td><td>מזרק דריזולב</td></tr><tr><td>1 מ"ל</td><td>החברה המדעית הלאומית</td><td>37510-1</td><td>לסינון תמיסת MEH-PPV</td></tr><tr><td>מסנן מזרק</td><td>VWR</td><td>28145-495</td><td>25 מ"מ, 0.2 ומיקרו; m, מזרק PTFE</td></tr><tr><td>1 מ"ל</td><td>חברת המילטון</td><td>81320</td><td>להזרקת תמיסת MEH-PPV למים לייצור ננו-חלקיקים</td></tr><tr><td>השינוי של Dulbecco של Eagle's Medium/Ham's F-12 50/50 Mix (DMEM)</td><td>Corning (VWR)</td><td>45000-350</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת המלח המאוזנת של האנק ללא פנול אדום (HBSS)איכות</td> <td>ביולוגית (VWR)</td><td>10128-740</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת מלח עם חוצץ פוספט של Dulbecco, 1x ללא סידן ומגנזיום (DPBS)</td><td>קורנינג (VWR)</td><td>45000-436</td><td></td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי, רגיל (מומת בחום) (FBS)</td><td>קורנינג (VWR)</td><td>45000-736</td><td></td></tr><tr><td>טריפסין EDTA 1x 0.25%</td> <td>קורנינג (VWR)</td><td>45000-664</td><td>טריפסין/2.21 מ"מ EDTA ב-HBSS ללא נתרן ביקרבונט, סידן ומגנזיום נגיף הפרוו חזירי נבדק</td></tr><tr><td>16% פרפורמלדהיד</td><td>מדעי מיקרוסקופיה אלקטרונית&nbsp;</td><td>15710</td><td>16% פרפורמלדהיד מדולל ל-4% על ידי הוספת PBS</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>&nbsp; פיפטות ביוטיום VWR</td><td>89139-054</td><td>פיפטות כתם גרעיני</td></tr><tr><td>5 מ"ל</td><td>VWR</td><td>82050-478</td><td></td></tr><tr><td>75 ס"מ2 בקבוק תרבית</td><td>VWR</td><td>82050-856</td><td>לתרבית תאים</td></tr><tr><td>צלחות 96 בארות</td><td>VWR</td><td>82050-771</td><td>לבדיקות MTT</td></tr><tr><td>צלחות תרבית רקמות עם פתחי אוורור</td><td>Greiner Bio-One (VWR)</td> <td>82050-538</td><td></td></tr><tr><td>Propidium iodide</td><td>בדיקות מולקולריות</td><td>P3566</td><td></td></tr><tr><td>Annexin V FITC</td><td>Invitrogen</td><td>A13199</td><td>צבע לאפופטוזיס</td></tr><tr><td>Celltiter 96 non-R 1000</td><td>astests Promega (VWR)</td><td><a href="https://www.vwrsp.com/catalog/product/index.cgi?catalog_number=PAG4000">PAG4000</a></td><td>MTT</td></tr><tr><td>CellROX Green Reagent, לזיהוי מתח חמצוני</td><td>Invitrogen</td><td>C10444</td><td>עבור ROS זיהוי</td></tr><tr><td>ספקטרומטר UV-vis</td><td>Agilent 8453</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ספקטרומטר פלואורסצנטי</td><td>NanoLog HoribaJobin Yvon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PD2000DLS פיזור אור דינמי</td><td>, חממת גלאי</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>דיוק NuAir DH מיקרוסקופ קונפוקלי זרימה</td><td></td><td></td>אוטומטית</tr><tr><td></td><td>Zeiss Axioskop2</td><td></td><td>63X טבילת שמן עדשת אובייקט</td></tr><tr><td>מיקרוסקופ אפילומינסנציה</td><td>אולימפוס IX71</td><td></td><td>60X טבילה במים עדשה אובייקטיבית, אנדור זילה מצלמת sCMOS</td></tr><tr><td>סימולטור סולארי</td><td>ניופורט 67005 אוריאל מכשירים</td><td></td><td></td></tr><tr><td>התייחסות תא סולארי</td><td>אוריאל&nbsp;</td><td></td><td>תקני VLSI משולבים</td></tr><tr><td>קורא מיקרו-פלטות</td><td>BioTek Ex808</td><td></td><td></td></tr><tr><td>המוציטומטר</td><td>Hausser השותפות המדעית</td><td>3200</td><td>לספירת תאים</td></tr></tbody></table>

פוטודינמי תרפיה עם blended ניצוח פולימר / פולרן nanoparticle פוטוסנסיטייסרים

Photodynamic Therapy with Blended Conducting Polymer/Fullerene Nanoparticle Photosensitizers

במאמר זה מדווחת שיטה לייצור והערכה חוץ גופית הניתנת לשחזור של ננו-חלקיקים פולימריים מוליכים מעורבבים עם פולרן כרגישים לאור מהדור הבא לטיפול פוטודינמי (PDT). הננו-חלקיקים נוצרים על ידי אינטראקציה הידרופובית של הפולימר המוליך למחצה MEH-PPV (poly[2-methoxy-5-(2-ethylhexyloxy)-1,4-phenylenevinylene]) עם ה-PCBM הפולרן (phenyl-C61-butyric acid methyl ester) בנוכחות ממס שאינו תואם. ל-MEH-PPV מקדם הכחדה גבוה שמוביל לשיעורים גבוהים של היווצרות שלישייה, והעברת מטען ואנרגיה יעילה ל-PCB הפולרני. התהליכים האחרונים משפרים את היעילות של מערכת ה-PDT באמצעות היווצרות שלישייה ורדיקלית בסיוע פולרן, והשבתה מהירה במיוחד של MEH-PPV נרגש. התוצאות המדווחות כאן מראות כי מערכת רגישות PDT ננו-חלקיקים זו יעילה ביותר ומראה ספציפיות בלתי צפויה לשורות תאים סרטניים.

ספיגה ורעילה פנימי של חלקיקים חלקיקי MEH-PPV / PCBM מעורבב 50% WT הודגרו עם TE 71, מד&quot;א MB-231, A549 ושורות תאי OVCAR3. רמת מיזוג PCBM נבחרה כPCBM% 50 WT, אשר הוכח לספק תכונות תשלום והעברת אנרגיה אידיאלית בין פולימרים ופולרנים 14 מצומדות. תמונות הקרינה של ספיגת ננו-חלקיקים מוצגות באיור 1. תאים הודגרו במשך 24 שעות עם חלקיקים על מנת להבטיח ספיגת ננו-חלקיקים. תאים אז תוקנו עם parafor...

פרוטוקול זה מתאר שיטה לייצור ננו-חלקיקים פולימריים מוליכים מעורבבים עם פולרן. ננו-חלקיקים אלה נחקרו על השימוש הפוטנציאלי שלהם כרגישים לאור מהדור הבא לטיפול פוטודינמי (PDT).

פוטודינמי תרפיה עם Blended ניצוח פולימר / פולרן Nanoparticle פוטוסנסיטייסרים

In this article a method for the fabrication and reproducible in-vitro evaluation of conducting polymer nanoparticles blended with fullerene as the next ...

המטרה הכללית של הניסוי הבא היא לפתח פוטו-סנסיטיזטור (photosensitizer) מהדור הבא עבור יישומים של טיפול פוטודינמי, או PDT, בטיפול בסרטן. מטרה זו מושגת על ידי התאמת שיטת ייצור באמצעות שיקוע ליצירת ננו-חלקיקים של פולימר מוליך הניתנים לפיזור במים. כשלב שני, מדגרירים את הננו-חלקיקים עם תאי סרטן in vitro, ולאחר מכן מטפלים באור כדי לייצר מיני חמצן רהאקטיביים, או ROS, שהם הרדיקלים הפעילים הלוקחים חלק ב-PDT.יעילות הטיפול הבאה מוערכת באמצעות בדיקות כמותיות ודימות איכותני כדי לקבוע את החלקים של תאים חיים לעומת TED באוכלוסיית התאים. התוצאות מראות כי סרטנים אגרסיביים כגון סרטן השחלה, המודגמים כאן על ידי OAR three, קולטים בכמות רבה את הפוטו-סנסיטיזר הננו-חלקיקי שדווח בעבודה זו, וכי טיפול ה-PDT יעיל ביותר in vitro. במקרה זה, יעילות ה-PDT נמצאת במתאם ישיר עם כמות הננו-חלקיקים שנקלטו על ידי קווי התאים השונים.היתרון העיקרי של טכניקה זו על פני שיטות קיימות כגון כימותרפיה, רדיותרפיה וניתוח, הוא שניתן לכוון את הטיפול באופן ספציפי לאתר המחלה כדי להפחית את תופעות הלוואי. החומר הפעיל שנעשה בו שימוש אינו מראה ציטוטוקסיות in vitro, ופיתוח עתידי יהפוך את מערכת הננו-חומרים לספציפית יותר לאתר ה-tDCS. התחילו הליך זה בתרבית של שורות תאים ובהכנת תמיסת המלאי של M-E-H-P-P-V כפי שמתואר בפרוטוקול הכתוב. הוסיפו 50 µL של תמיסת מלאי M-E-H-P-P-V לא מדוללת לתוך שלושה מיליליטר של TETRAHEDRAN או THF.סמן תמיסה זו כתמיסת אם מדוללת של M-E-H-P-P-V, העבר אותה לקוורץ Q-vet של סנטימטר אחד ומדוד את הבליעה באורך גל של 495 ננומטר באמצעות ספקטרוסקופיית UV-Vis. אם הבליעה של תמיסת האם המדוללת של M-E-H-P-P-V גבוהה מ-0.17, דלל את תמיסת האם הבלתי-מדוללת של M-E-H-P-P-V על ידי הוספת THF נוסף, מילליטר אחד בכל פעם, עד שהבליעה הנמדדת ב-495 ננומטר תהיה בטווח של 0.13 עד 0.17. לאחר מכן, הכן את הננו-חלקיקים בשיטת שיקוע על ידי העברת מילליטר אחד של תמיסת M-E-H-P-P-V-P-C-B-M מעורבבת למזרק של מילליטר אחד עם מחט המחוברת אליו. במהירות.הזריקו מיליליטר אחד של תמיסת ה-M-E-H-P-P-V-P-C-V-M המעורבבת לתוך ארבעה מיליליטרים של מים דה-יוניים תוך ערבוב ב-1200 RPM; יש להפסיק את הערבוב מיד לאחר ההזרקה. השתמשו בננו-חלקיקים אלו ללא עיבוד נוסף לביצוע PDT על תאים שדגרו עם ננו-חלקיקים. ראשית, סמנו סט של פלטות 96 בארות כפי שמוצג בפרוטוקול הטקסט.לאחר מכן, קצרו את התאים מבקבוקי התרבית על ידי הסרת המצע ושטיפת התאים פעמיים עם תמיסת סליין פוספטית מאובחנת (DPBS), ולאחר מכן דגרו את התאים עם 0.05% trypsin למשך 10 דקות. הוסיפו שני מיליליטר של DMEM (modified eagle medium) המועשר ב-10% fetal bovine serum לתמיסת התאים שהתקבלה. ערבבו את התמיסה כראוי כדי להפריד מקבצי תאים לתאים בודדים. קחו 100 microliters של תמיסתו התאים והוסיפו ל-900 microliters של DMEM המועשר ב-10% FBS; ערבבו היטב והניחו 10 microliters מתמיסה זו על המוסימטר (hemocytometer).ספרו את התאים באמצעות המוסימטר (hemo cytometer) והתאימו את ריכוז תרחיף התאים ל-50,000 תאים למיליליטר. לאחר מכן, זרעו את פלטת 96 הבארות על ידי הוספה של 50 µL של תמיסת התאים לכל בארה, כך שייזרעו 2,500 תאים לכל בארה. לאחר מכן, הכינו ריכוזים שונים של ננו-חלקיקים על ידי הוספת 2100 ו-180 µL של תרחיף הננו-חלקיקים שהוכן לתוך DMEM, כדי להגיע לנפח סופי של שני מיליליטרים.לאחר 24 שעות, שטפו את הבארות באמצעות X-D-P-B-S אחד והוסיפו לבארות 50 microliters של ריכוזים עולים של ננו-חלקיקים. עבור כל שורת תאים קיימות משכפולים (triplicates) עבור כל ריכוז של ננו-חלקיקים. 24 שעות לאחר הוספת הננו-חלקיקים.שטפו את התאים ב-one X-D-P-B-S והוסיפו 50 µL של תמיסת מלח מאוזנת של הנקס (Hank's balanced salt solution) או HBSS לכל באר; כדי להקרין את התאים, חממו את נורת הסימולטור הסולארי למשך 15 דקות. הניחו מסנן UV לפני הנורה כדי לסנן את אור ה-UV. כיילו את הנורה באמצעות תא סולארי של ייחוס על ידי כיוון הספק הנורה כדי להשיג עוצמה של 0.5 sun על פני השטח של פלטת 96 הבארים כאן.מצב זה הושג באמצעות אספקת הספק של 218 watts למנורה. מקמו את פלטת 96 הבארים תחת המנורה כאשר המכסה פתוח והקרינו את התאים למשך 60 דקות, דבר שיוביל למינון אור של 180 joules לסנטימטר רבוע לאחר הקרינה. החליפו את ה-HBSS ב-50 µL של DMEM, בתוספת 10% FBS, והדגירו את הפלטות לפרקי הזמן הרלוונטיים לאחר הטיפול הפוטודינמי.לאחר כל פרק זמן, מדדו את חיוניות התאים על ידי הוספת 10 µL של MTT לבאר. דגרו את הפלטה למשך ארבע שעות כדי לאפשר להיווצרות הגבישים. לאחר מכן, הוסיפו 50 µL של תמיסת המסה לבארות ודגרו את הפלטה למשך שש שעות.כדי להמיס את הגבישים של הפורס. מדדו את חיוניות התאים על ידי רישום הבליעה באורך גל של 570 ננומטר באמצעות קורא מיקרופלטה כדי למדוד את הרעילות התאית העצמית של הננוחלקיקים. קראו את הפלטה בעלת 96 הבארים ללא החלת PDT עליה כדי למדוד את הספיגה של הננוחלקיקים.זיהוי ROS שנוצרו לאחר PDT וזיהוי אפופטוזיס ונמק לאחר PDT. ראשית, הדליקו את נורות המיקרוסקופ ואת הלייזר 30 דקות לפני הדימות. הניחו את צלחת הפטרי המכילה את התאים המקובעים עלבמת המיקרוסקופ.אסוף את הפלואורסצנציה מהננו-חלקיקים. רכיב הגילוי של RROS הוא propidium iodide. בצע הוספה (overlay) של תמונות הניגודיות של הפאזה ותמונות הפלואורסצנציה בתוכנת Image J. מוצגים כאן תוצאות מייצגות מהתוכנה לאחר דגירה של ננו-חלקיקים עם קווי תאים שונים.קו התאים Ocar three מראה את הספיגה הגבוהה ביותר, ואחריו 5 49 ו-MDA MB 2 31. TE 71 אינו מראה פלואורסצנציה של ננו-חלקיקים. מדידות חיות התאים בקווי תאים אלה כאשר הם נשמרים בחושך מוצגות בגרפי העמודות כאן.כמעט ולא נצפתה מוות של תאים עד ל-96 שעות באף אחד מקווי התאים. היווצרות ה-ROS שזוהתה באמצעות ריאגנט לזיהוי ROS מוצגת כאן עבור שלושה קווי תאים. בדגימת ביקורת זו.אין פלואורסצנציה ירוקה כיוון שאין ננו-חלקיקים ולא ניתן מנת אור. עם זאת, כאשר ניתן לתאים הן את מנת הננו-חלקיקים והן את מנת האור מיד לאחר PDT, ניתן לראות פלואורסצנציה ירוקה בהירה מרכיב הגילוי של R os. חיוניות התאים לאחר DT מוצגת כאן בגרף עמודות עבור מינונים שונים של ננו-חלקיקים.תוצאות ניסוי הצביעה הכפולה למות תאים (live dead double staining) מוצגות כאן, שבהן שורת התאים car three עוברת נמק במינון אור גבוה, בעוד שבמינוני אור נמוכים, התאים עוברים מוות אפופטוטי. לאחר צפייה בסרטון זה, תהיה בידיכם הבנה טובה של האופן שבו מייצרים ננו-חלקיקים של פולימרים מוליכים מורכבים עבור יישומים של טיפולים במחלות המבוססים על תרפיה פוטודינמית.

photodynamic-therapy-with-blended-conducting-polymerfullerene

Research

JoVE Journal

Chemistry

כימיה

טיפול פוטודינמי (PDT) הוא שיטה לא פולשנית ולא ניתוחית לטיפול בסרטן ריאות. פוטוסנסיטיזרים מצטברים באופן סלקטיבי ברקמת הגידול ומובילים למוות תאי הגידול בנוכחות חמצן ואורך גל תקין של אור. בסרטון פרוטוקול זה, שיטה מבוססת PDT משמשת להערכת הפוטנציאל הפוטוטוקסי של פוטוסנסיטיזר פוטנציאלי בתאי סרטן ריאות.

בדיקת פוטוטוקסיות חוץ גופית: שיטה מבוססת PDT להערכת הפוטנציאל הפוטוטוקסי של פוטוסנסיטיזר בתאי סרטן ריאות

מולקולות צבע אורגניות וננו-חלקיקים הממירים חומצה אולאית אינם מסיסים במים. פרוטוקול זה מתאר שיטת 'הכנס והפעל' המאפשרת העברה של מולקולות צבע אורגניות והמרת חלקיקים מהממס ההידרופובי הראשוני שלהם למים.

שיטה &#39;הכנס והפעל&#39; ליצירת Nanoassemblies מים מסיסות המכיל פולימר amphiphilic, צבעים אורגניים וupconverting חלקיקים

מתוארת שיטה לגירוי פעילות חשמלית של תרביות תאים במבחנה עם אור נראה, המבוססת על שימוש בפולימרים אורגניים מוליכים למחצה.

שליטה אופטית של תאי חיים פעילות חשמלית על ידי פולימרים מצומדות

פרוטוקול מוצג לסינתזה והכנה של ננו-חלקיקים המורכבים מפולימרים אלקטרואקטיביים.

מאפייני electroactive פולימר החלקיקים מציגים photothermal

טיפול פוטודינמי (PDT) הוא בחירה חלופית לטיפול בסרטן ריאות. כדי להגביר את ההשפעה הטיפולית של PDT, פותחו ננו-חלקיקים ממוקדי סרטן ריאות בשילוב עם כימותרפיה. הן במבחנה והן ב-vivo הוערכו יעילות אנטי-סרטנית של PDT עם ננו-חלקיקים מוכנים.

יעילות אנטי סרטנית של טיפול פוטודינמי עם ריאות חלקיקים סרטן ממוקד

טיפול פוטודינמי (PDT) היא הליך רפואי הכרוך דגירה של אפלייד exogenously פוטוסנסיטייזר (PS) ואחריו photoactivation אור גלוי כדי לגרום אפופטוזיס. אנו מציגים במבחנה PDT פרוטוקול שנועדו לדמות PDT בהם ניתן ללמוד הבדלים PS הדגירה ופרמטרים טיפול קל.

גישה במבחנה טיפול פוטודינמי

השכיחות הגוברת של קנדידה אלביקנס עמידים לתרופות היא בעיה בריאותית חמורה ברחבי העולם. טיפול פוטודינמי אנטי-מיקרוביאלי (aPDT) עשוי להציע אסטרטגיה למאבק בזיהומים פטרייתיים עמידים לתרופות. הפרוטוקול הנוכחי מתאר את יעילות ה-aPDT בתיווך בנגל רוז על זן C. albicans עמיד בפני multidrug במבחנה.

טיפול פוטודינמי בתיווך רוז בנגל לעיכוב קנדידה אלביקנס

כאן אנו מתארים מכשיר חדשני, פשוט ובעלות נמוכה לביצוע מוצלח של מבחני טיפול פוטודינמי במבחנה (PDT) תוך שימוש בתרבית תאי HeLa דו-ממדית וורטפורפין כפוטוסנסיטייזר.

מכשיר טיפול פוטודינמי מבוסס דיודה פולטת אור הבנוי בתוך הבית להגברת ציטוטוקסיות של חוליות במודל תרבית תאים דו-ממדית

פרוטוקול זה מתאר את הייצור והאפיון של ננו-הרכבה של פרו-תרופות-צבע. המתודולוגיה לשחרור תרופות מהננו-חלקיקים על ידי פירוק המופעל על ידי אור, כולל מערך קרינת האור, מתוארת במפורש. התרופות ששוחררו מהננו-חלקיקים בעקבות הקרנת אור הפגינו השפעות מצוינות נגד התפשטות על תאי גידול במעי הגס האנושי.

הכנת Facile ופוטואקטיבציה של ננו-מכלולים של Prodrug-Dye

מאמר זה מציג את הפרוטוקול להכנת פנטומים של רקמת גידול המשכפלים תכונות אופטיות לטיפול פוטותרמי פלזמוני. הוא מפרט הכנת פנטום, הערכות פוטותרמיות ואימות המודל המספרי שפותח המבוסס על מדידות טמפרטורה פוטותרמיות להערכת פרמטרים טיפוליים, ומציע אלטרנטיבה אתית וחסכונית למחקרי in vivo לבדיקות ראשוניות.

טיפול בסרטן פוטותרמי פלזמוני: פנטומים המחקים רקמת גידול משובצים בננו-חלקיקים להמחשת התפלגות טמפרטורה פוטותרמית

חקור שיטת ייצור ננו-חלקיקי פולימר מוליכים מעורבבים עם פולרן לטיפול פוטודינמי בסרטן. השיטה מייצרת חומרים רגישים לאור לטיפול יעיל בתאי סרטן שחלתיים תוקפניים.

פוטודינמי תרפיה עם Blended ניצוח פולימר / פולרן Nanoparticle פוטוסנסיטייסרים

גלה סרטונים נוספים