Name: הכנה ואפיון של פרט ורב-סמים נטענים בפח פיזי Micelles פולימרית (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-08-28T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 32 s
Description: למד הכנה ואפיון של מיצלות פולימריות טעונות תרופות בשיטת יציקת ממס. שיטה זו מאפשרת ייצור מהיר ויציב של מערכות משלוח תרופות לטיפול במחלות שונות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

מחקר זה נתמך על ידי מענק מתוכנית פרס המחקר של הפקולטה החדשה לרוקחות של AACP, מענק החוקר החדש של קרן המחקר הרפואי של אורגון, קרן הסטארט-אפ של אוניברסיטת אורגון, וקרן הסטארט-אפ של אוניברסיטת פסיפיק, בית הספר לרוקחות.

1. הכנת Micelles הטעון פרט ורב-תרופה על ידי שיטת יציקת ממס <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשקול את מ&quot;ג DTX 1 מ&quot;ג או EVR 1 או שני תרופות בכל 1 מ&quot;ג למיצלות התרופה הכפולה (DDM). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשקול את 15 מ&quot;ג של PEG 2000 - ב -PLA 1800 או PEG 4000 - ב -PLA 2200 טוב לאו בודד או DDM. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ממיסים את התרופה / תרופות והפולימר ב 0.5 מיליליטר של אצטוניטריל ומקום בבקבוק עגול תחתון 5 מיליליטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טופס סרט פולימר תרופה המופצת דק על ידי מתאדה תרופת הפתרון (ים) -polymer אצטוניטריל תחת לחץ מופחת באמצעות מאייד סיבובי. הגדר את המאייד הסיבובי 100 סל&quot;ד, טמפרטורת מים באמבטיה של 40 o C ולחץ ואקום של 260 mbar דקות 5 ואחריו ירידה ל -100 mbar 3 דקות יותר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רעננות סרט סמים-פולימר עם 0.5 מיליליטר של מים ללא יונים ב 50 o C ועדינות לנער את הבקבוק כדי ליצור את מיצלות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סנן את התוצאהing פתרון micellar דרך מסנן ניילון 0.2 מיקרומטר כדי להסיר כל תרופה בלתי מומס או מזהמים לתוך צינור 1.5 מיליליטר צנטריפוגות. </li></ol> 2. הערכה של טעינת סמים ויציבות בMicelles שימוש ההפוך-השלב High Performance Liquid Chromatography (RP-HPLC) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביצוע ניתוח RP-HPLC עם טור C8 equilibriated ב 40 מעלות צלזיוס במצב isocratic עם שלב נייד של אצטוניטריל / מים (62/38) המכיל 0.1% חומצה זרחתית ומתנול 1% בקצב זרימה של 1 מיליליטר / דקה ו הזרקת נפח של 10 μl. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לדלל מיצלות מוכנה טרי (סעיף 1) 1: 100 בשלב נייד לפני הניתוח על ידי RP-HPLC לקבוע טעינת תרופה ראשונית. מיצלות החנות חי בודדת וDDM בטמפרטורת חדר (C 25 O) במשך 48 שעות ולהכין 1 טרי: 100 דגימות מדוללות בשלב נייד כדי להעריך מחדש על ידי RP-HPLC ולקבוע סמים יציבות (ים) במיצלות מעל 24 שעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צג פסגות DTX וEVR ב227 ו -279 בהתאמה ננומטרעם זמני שמירה של 1.7 ו -5.7 בהתאמה דקות. לבצע את כל המדידות בשלושה עותקים. נתוני הווה כטעינה ממוצע ± SD סמים. </li></ol> 3. הערכה של גודל החלקיקים micelle ידי דינמי פיזור אור (DLS) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לדלל מיצלות מוכנה טרי (כמתואר בסעיף 1) במים ללא יונים ביחס של 1:20 להניב ריכוז פולימר סופי של 1.5 מ&quot;ג / מיליליטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מדוד את עוצמת הלייזר הוא Ne-(633 ננומטר) ב173 מעלות כדי לקבוע פיזור. לבצע את כל המדידות של 25 מעלות צלזיוס הבאות מראש איזון למשך 2 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבצע את כל המדידות בשלושה עותקים. נתוני הווה כגודל ± SD הממוצע Z-ממוצע יחד עם מדד polydispersity (PDI) של ההפצה. </li></ol> 4. הערכת במבחנה שחרור תרופה מMicelles הפרט וDDM <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן מיצלות וDDM בודדים כפי שתואר בסעיף 1. טען 2.5 מיליליטר של מיצלות לקלטת 3 מיליליטר דיאליזה עםלחתוך את משקל מולקולרי (MWCO) של 7,000 g / mol. הערה: זה MWCO נבחר כדי לאפשר את התרופה ללא תשלום (ים) יחד עם מולקולות פולימר בלתי-משויכות לפזר בחופשיות מתוך הקלטת ובכך להבטיח תנאי כיור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את הקלטות ב2.5 L של 10 מ&quot;מ 7.4 חיץ pH פוספט (שהוכן על ידי דילול פתרון מ&quot;מ מניית 200) ולשנות את החיץ כל 3 שעות כדי להבטיח תנאי כיור. לשמור על הטמפרטורה של המאגר על 37 מעלות צלזיוס לאורך כל תקופת הניסוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ב 0, 0.5, 1, 2, 3, 6, 9, 12, 24, ו -48 שעות, לסגת 150 μl של הפתרון בקלטות ולהחליף עם 150 μl של חיץ טרי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנתח דגימות באמצעות RP-HPLC כפי שנקבע בסעיף 2 כדי לקבוע את ריכוז התרופה. עקומה-להתאים את נתוני שחרור תרופה (ים) המבוססים על מודל דיפוזיה פשוט עם עמותת מעריכי שלב אחד באמצעות תוכנת stastitical. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשב את הזמן הדרוש כדי להגיע ל -50% משחרור תרופה (t 1/2) של דוארתרופת אח במיצלות או DDM הפרטניים המבוסס על העקומה ההולמת. לבצע את כל המדידות ברביעייה. </li></ol>

<ol><li>Yokoyama, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polymeric+micelles+as+a+new+drug+carrier+system+and+their+required+considerations+for+clinical+trials%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opin+Drug+Deliv%22%5BJournal%5D)">Polymeric micelles as a new drug carrier system and their required considerations for clinical trials.</a> Expert Opin Drug Deliv. 7, 145-158 (2010).</li>
<li>Shin, H. C., Alani, A. W., Rao, D. A., Rockich, N. C., Kwon, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-drug+loaded+polymeric+micelles+for+simultaneous+delivery+of+poorly+soluble+anticancer+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22J+Control+Release%22%5BJournal%5D)">Multi-drug loaded polymeric micelles for simultaneous delivery of poorly soluble anticancer drugs.</a> J Control Release. 140, 294-300 (2009).</li>
<li>Adams, M. L., Lavasanifar, A., Kwon, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amphiphilic+block+copolymers+for+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharm+Sci%22%5BJournal%5D)">Amphiphilic block copolymers for drug delivery.</a> J Pharm Sci. 92, 1343-1355 (2003).</li>
<li>Oerlemans, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polymeric+micelles+in+anticancer+therapy%3A+targeting%2C+imaging+and+triggered+release%5BTitle%5D)+AND+%22Pharm+Res%22%5BJournal%5D)">Polymeric micelles in anticancer therapy: targeting, imaging and triggered release.</a> Pharm Res. 27, 2569-2589 (2010).</li>
<li>Shin, H. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+3-in-1+polymeric+micelle+nanocontainer+for+poorly+water-soluble+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Pharm%22%5BJournal%5D)">A 3-in-1 polymeric micelle nanocontainer for poorly water-soluble drugs.</a> Mol Pharm. 8, 1257-1265 (2011).</li>
<li>Hasenstein, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antitumor+activity+of+Triolimus%3A+a+novel+multidrug-loaded+micelle+containing+Paclitaxel+Rapamycin%2C+and+17-AAG%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cancer+Ther%22%5BJournal%5D)">Antitumor activity of Triolimus: a novel multidrug-loaded micelle containing Paclitaxel Rapamycin, and 17-AAG.</a> Mol Cancer Ther. 11, 2233-2242 (2012).</li>
<li>Mazzaferro, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bivalent+sequential+binding+of+docetaxel+to+methyl-beta-cyclodextrin%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Pharm%22%5BJournal%5D)">Bivalent sequential binding of docetaxel to methyl-beta-cyclodextrin.</a> Int J Pharm. 416, 171-180 (2011).</li>
<li>Iwase, Y., Maitani, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+and+in+vivo+evaluation+of+liposomal+everolimus+for+lung+carcinoma+and+thyroid+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Pharm+Bull%22%5BJournal%5D)">Preparation and in vivo evaluation of liposomal everolimus for lung carcinoma and thyroid carcinoma.</a> Biol Pharm Bull. 35, 975-979 (2012).</li>
<li>Mishra, G. P., Doddapaneni, B. S., Nguyen, D., Alani, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antiangiogenic+effect+of+docetaxel+and+everolimus+as+individual+and+dual-drug-loaded+micellar+nanocarriers%5BTitle%5D)+AND+%22Pharm+Res%22%5BJournal%5D)">Antiangiogenic effect of docetaxel and everolimus as individual and dual-drug-loaded micellar nanocarriers.</a> Pharm Res. 31, 660-669 (2014).</li>
<li>Xu, W., Ling, P., Zhang, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polymeric+micelles%2C+a+promising+drug+delivery+system+to+enhance+bioavailability+of+poorly+water-soluble+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22J+Drug+Deliv%22%5BJournal%5D)">Polymeric micelles, a promising drug delivery system to enhance bioavailability of poorly water-soluble drugs.</a> J Drug Deliv. 2013, 340315(2013).</li>
<li>Lavasanifar, A., Samuel, J., Kwon, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Poly%28ethylene+oxide%29-block-poly%28L-amino+acid%29+micelles+for+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Drug+Deliv+Rev%22%5BJournal%5D)">Poly(ethylene oxide)-block-poly(L-amino acid) micelles for drug delivery.</a> Adv Drug Deliv Rev. 54, 169-190 (2002).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

השימוש במיצלות פולימריות להעברת תרופות ממשיך להתרחב בשל הרבגוניות שלהן ויכולתן לספק תרופות הידרופוביות למצבי מחלה שונים. לכן, הטכניקות הדרושות להכנה ואפיון של ניסוחים אלה לפני השימוש בתרבית תאים או בבעלי חיים הן צעד ראשון קריטי לקביעת הזיווג הטוב ביותר בין התרופה לפולימר. PEG-b-PLA הם קופולימרים בלוק אמפיפיליים מצוינים למטרות אספקת תרופות. עם זאת, אורך הבלוק של החלקים ההידרופיליים וההידרופוביים ממלא תפקיד חשוב באנקפסולציה וביציבות של תרופות והם ספציפיים לתרופות שנבחרו לשלב. לכן, ייתכן שיהיה צורך במחקרים ראשו...

קופולימרים לחסום amphiphilic עם מבנה חוזר מורכבים מתחומים הידרופילי והידרופובי יכולים באופן ספונטני עצמיים להרכיב-כדי ליצור שלושה מכלולי macromolecular ממדיים הידוע במיצלות פולימרים. יש מבנים אלה ליבה הידרופובי פנימית מוקפות פגז הידרופילי. יש הליבה הידרופובי היכולת לשלב תרופות הידרופובי או על ידי לכידה פיזית באמצעות אינטראקציות הידרופוביות או על ידי נטיה כימית לשדרת הפולימר. 1 יתרונות רבים קיימים לשימוש בקופולימרים לחסום אלה כדי ליצור מיצלות עבור משלוח סמים. אלה כוללים שילוב של תרופות מסיסים היטב, שיפור הפרמקוקינטיקה של התרופות משולבות, והתאמה ביולוגיות ו / או פריקות ביולוגית של הפולימרים גורם להם חלופי בטוח solubilizers הקונבנציונלי. 2 יתרון נוסף של שימוש במיצלות פולימרים הוא גודל החלקיקים קולואידים, בין 15 150 3 ננומטר, מה שהופך אותם אטרקטיביים לרשות פלסטיניתמשלוח renteral. לכן, ב -20 השנים האחרונות מיצלות פולימרים צמחה כמערכות אספקת סמים ברות-קיימא עבור תרופות מסיסים במים בצורה גרועה במיוחד לטיפול בסרטן. 3,4 כרגע יש חמישה ניסוחים micellar פולימרים לטיפול בסרטן בניסויים קליניים. 4 ארבעה של מיצלות בניסויים הקליניים קופולימרים diblock מבוססות PEG בעוד האחרון הוא קופולימר triblock מכיל polyethyleneoxide. הגודל של מיצלות אלה נע בין 20 ננומטר ל -85 ננומטר. היתרון של שימוש בפולימרים מבוססים PEG הוא ההתאמה הביולוגית שלהם ובהתאם לבלוק השני יכול להיות גם מתכלה. לאחרונה מערכות אספקת הסמים חדשות המבוסס על חומצת -polylactic בלוק polyethyleneglycol- (PEG- ב -PLA) מיצלות פולימרים פותחו עבור המשלוח המקביל של תרופות נגד סרטן מרובים. מיצלות PEG- B- PLA שניהם ביולוגית ומתכלה. רב-סמים אלה מיצלות העמוסה הראו כעיכוב ynergistic של דגמי סוגי הסרטן שונים במבחנת in vivo 2,5,6 ובכושר לפרדיגמה הנוכחית של ניצול תרופות מרובות בכימותרפיה כדי למנוע התנגדות והוריד רעילות. לכן, יש עניין רב בהכנה ואפיון מערכות אספקת הסמים micellar אלה לשימוש בסרטן ומצבי מחלה אחרים. בעבודה שלהלן שהתווינו תהליך צעד-אחר-צעד שיכולה להיות מוכן מיצלות כזה ומאופיין לפני הערכתם במצבי מחלה של עניין. לצורך העבודה זו שני סוכנים אנטי-סרטניים גרוע מסיסים, docetaxel (DTX) וeverolimus (EVR) נבחרו. DTX וEVR שניהם תרכובות מסיסים במים בצורה גרועה עם solubilities מים פנימי וב1.9 9.6 מיקרוגרם / מיליליטר בהתאמה. 7,8 שני פולימרים -PLA ב PEG- עם משקולות מולקולריות שונות ששימשו בפרוטוקול זה כאבני בניין לפולימרים שגובשו מיצלות,פולימרים אלו PEG 2000 - ב -PLA 1,800 (3,800 Da) וPEG 4000 - ב -PLA 2,200 (6,200 Da). מיצלות -PLA ב PEG- לכן יכולה לספק פלטפורמה ייחודית כnanocarrier לDTX וEVR בנפרד ובשילוב. ריאגנטים / חומרים והציוד הדרושים להכנה ולאפיין מיצלות אלה מוצגות בטבלה 1.

<table><tbody><tr><td>ניתן לציין את PEG2000-b-PLA1800</td><td>Advanced Polymer Materials, Inc</td><td>6-01- PLA/2000</td><td>PLA MW בהזמנת</td></tr><tr><td>PEG4000-b-PLA2200</td><td>Advanced Polymer Materials, Inc</td><td>6-01- PLA/4000</td><td>PLA MW ניתן לציין בהזמנת</td></tr><tr><td>Docetaxel</td><td>LC Laboratories</td><td>D-1000</td><td>100 מ"ג</td></tr><tr><td>Everolimus</td><td>LC Laboratories</td><td>E-4040</td><td>100 מ"ג</td></tr><tr><td>אצטוניטריל</td><td>EMD/VWR</td><td>EM-AX0145-1</td><td>HPLC כיתה; 4 ליטר</td></tr><tr><td>בקבוק תחתון עגול&nbsp;</td><td>Glassco/VWR</td><td>89426-496</td><td>5 מ"ל</td></tr><tr><td>RV 10 מאיידים סיבוביים בקרה</td><td>IKA Works</td><td>8025001</td><td>מאייד רוטו</td></tr><tr><td>Shimadzhu HPLC עם גלאי DAD</td><td>Shimadzhu</td><td></td><td>RP-HPLC</td></tr><tr><td>קלטת דיאליזה שקופית ליזר MWCO 7000</td><td>Thermo Scientific, Inc</td><td>66370</td><td>3 מ"ל</td></tr><tr><td>מאגר פוספט pH 7.4, 200 מ"מ</td><td>VWR</td><td>100190-870</td><td>500 מ"ל</td></tr><tr><td>Malvern NanoZS</td><td>Malvern Instruments, בריטניה</td><td></td><td>DLS</td></tr><tr><td>מסנן ניילון</td><td>Acrodisc / VWR</td><td>28143-242</td><td>13 מ"מ; 0.2 ומיקרו; M</td></tr><tr><td>חומצה זרחתית, NF</td><td>Spectrum Chemical/VWR</td><td>700000-626</td><td>100 מ"ל</td></tr><tr><td>GraphPad Prism</td><td><a href="http://www.graphpad.com/">www.graphpad.com</a></td><td></td><td>Analysis Software</td></tr><tr><td>Zorbax SB-C8 מחסנית ברזולוציה מהירה&nbsp;</td><td>אג'ילנט טכנולוגיות</td><td>866953-906</td><td>4.6 ופעמים; 75 מ"מ, 3.5 ו-#956; מ</td></tr></tbody></table>

הכנה ואפיון של פרט ורב-סמים נטענים בפח פיזי micelles פולימרית

Preparation and Characterization of Individual and Multi-drug Loaded Physically Entrapped Polymeric Micelles

קופולימרים לחסום amphiphilic כמו חומצת -polylactic בלוק polyethyleneglycol- (PEG- B- PLA) יכולים עצמי להרכיב למיצלות מעל ריכוז micellar הקריטי שלהם ויוצרת ליבות הידרופובי מוקפות פגזים הידרופילי בסביבות מימיות. הליבה של מיצלות אלה יכול להיות מנוצל כדי לטעון תרופות הידרופובי, גרועה מסיסה במים כמו docetaxel (DTX) וeverolimus (EVR). אפיון שיטתי של יכולות מבנה micelle וטעינת תרופה חשוב לפני במבחנה ובמחקרי vivo יכול להתנהל. המטרה של הפרוטוקול המתואר במסמך זה היא לספק את הצעדים הדרושים כדי להשיג אפיון מוצרי micellar סטנדרטיים. יש לי DTX וEVR solubilities הפנימי של 1.9 ו -9.6 מיקרוגרם / מיליליטר בהתאמה ניתן להשיג הכנת מיצלות אלה באמצעות יציקת ממס המגדילה את המסיסות המימית של DTX וEVR ל1.86 ו1.85 מ&quot;ג / מיליליטר, בהתאמה. יציבות בסמים במיצלות evaluated בטמפרטורת חדר במשך 48 שעות עולה כי 97% או יותר מהתרופות נשמרים בפתרון. גודל micelle הוערך באמצעות פיזור אור דינאמי והצביע על כך שהגודל של מיצלות אלה היה מתחת ל -50 ננומטר ותלויים במשקל המולקולרי של הפולימר. שחרור תרופה ממיצלות הוערך באמצעות דיאליזה בתנאי כיור ב- pH 7.4 ב 37 מעלות צלזיוס במשך 48 שעות. תוצאות ראויים עקומה מצביעות על כך ששחרור תרופה מונע על ידי תהליך הזמנה ראשון מצביע על כך שהוא מונע דיפוזיה.

DTX בודד או מיצלות EVR וDTX וEVR DDM בPEG- ב -PLA מיצלות מנוסחות בהצלחה בשני PEG 4000 - ב -PLA 2,200 או PEG 2000 - ב -PLA 1,800 (איור 1). DTX, EVR, וDDM הראו יציבות דומה בPEG 4000 - ב -PLA 2,200 או PEG 2000 - ב -PLA 1,800 מעל 48 שעות (איור 2). טעינה...

מטרת פרוטוקול זה היא לתאר את ההכנה והאפיון של תרופות כלואות פיזית ומסיסות במים במערכות אספקת תרופות מיסלריות המורכבות מקופולימרים בלוק אמפיפילי.

הכנה ואפיון של פרט ורב-סמים נטענים בפח פיזי Micelles פולימרית

Amphiphilic block copolymers like polyethyleneglycol-block-polylactic acid (PEG-b-PLA) can self-assemble into micelles above their critical micellar ...

המטרה הכללית של הניסוי הבא היא לתאר תהליך שלב-אחר-שלב להכנה ואפיון של תאים טעונים בתרופה לפני הערכתם במצבי מחלה רלוונטיים. זאת מושג על ידי הכנת תאי ה-My בשיטת יציקת ממס (solvent casting) כדי לייצר תאי my הניתנים לשחזור עבור המחקר. כשלב שני, מוערכות יציבות הטעינה והגודל של תאי ה-my, מה שקובע את יכולתם של תאי ה-my לטעון ולשמר ריכוזים רלוונטיים קלינית.בשלב הבא, נקבע קצב שחרור התרופה מהתאי השריר (My cells) כדי להבטיח שלתאים אלו מאפייני שחרור מתאימים in vitro לפני הערכת היציבות in vivo. התוצאות מראות כי תאי שריר יציבים שנוצרו באופן הדיר שחזור יכולים לספק פלטפורמה לקידום הובלת תרופות במצבי מחלה שונים, בהתבסס על טכניקות ההערכה המוצגות כאן. היתרון המרכזי של טכניקה זו על פני שיטות קיימות, כגון שיטות טעינת שיווי משקל או שיטות דיאליזה, הוא שניתן להכין את המיוזינים במהירות רבה יותר, עם טעינת תרופה וגודל בעלי שחזוריות.ההשלכות של טכניקה זו משתרעות לעבר טיפול או אבחון של מצבי מחלה שונים, מכיוון שתרופות בננו-קנה מידה מציעות הזדמנויות מעבר לצורות קונבנציונליות. באופן כללי, אנשים שרק מתחילים עשויים להתקשות עם טכניקות אלו למרות שהן פשוטות, שכן עדיין עליכם לבצע את מחקרי השחרור, ולא ניתן להעריך באמת את אפקט הburst. את הפרוצדורות הללו ידגימו Shaman Duke, סטודנט לדוקטורט שלי, ו-Deepa, שותפית למחקר. ראשית, שקלו 1 mg של DTX, 1 mg של EVR ו-15 mg של Peg 4,000 block PLA 2200 עבור המיסלים של תרופה כפולה או DDM. לאחר השקילה, המיסו את התרופות ואת הפולימר ב-0.5 mL של aceto nitrile, ולאחר מכן העבירו את התמיסה לבקבוק תחתית עגולה בנפח של 5 mL. צרו סרט פולימר דק עם תרופה מפוזרת על ידי אידוי של תמיסת התרופה-פולימר-aceto תחת לחץ מופחת באמצעות מאיד סיבבי.לאחר מכן, בצעו רהידרטציה לסרט הפולימר התרופתי בעזרת 0.5 milliliters של מים דיוניים שחוממו מראש ל-50 °C, ונערו בעדינות את הבקבוק באמבט מים בטמפרטורה של 50 °C ליצירת המיצלאות. העבירו את התמיסה לשפופרת צנטריפוגה וסובבו במהירות של 7,200 ×g למשך שלוש דקות. שאבו את התמיסה בעזרת מחט וסננו את תמיסת המיצלאות שהתקבלה אל תוך שפופרת צנטריפוגה חדשה בנפח 1.5 milliliters, באמצעות מסנן ניילון של 0.2 micron, כדי להסיר שאריות תרופה שלא נמסו או זיהומים. בשלב זה, בצעו ניתוח HPLC פאזה הפוכה עם עמודת C8 שהוזנה בטמפרטורה של 40 °C במצב איזוקרטי עם פאזה ניידת של אצטוניטריל ומים. דללו את המיצלאות שהוכנו זה עתה באצטוניטריל ביחס של 1:100 לפני הניתוח ב-HPLC פאזה הפוכה, כדי לקבוע את העמסת התרופה הראשונית.לאחר אחסון התאים הבלתי מדוללים בטמפרטורת החדר למשך 48 שעות, הכן דגימות מדוללות טריות להערכה חוזרת באמצעות HPLC פאזה הפוכה, כדי לקבוע את יציבות התרופה בתאים לאורך 48 שעות. נטר את שיאי ה-DTX וה-DVR באורכי גל של 227 ו-279 ננומטר, עם זמני התמסכיות של 1.7 ו-5.7 דקות בהתאמה. הצג את הנתונים כממוצע פלוס או מינוס סטיית תקן של טעינת התרופה.בשלב הבא, דללו את התאים שהוכנו זה עתה ואת המים דה-יוניים ביחס של 1:20 עד לריכוז פולימר סופי של 1.5 mg/mL. העבירו את התמיסה לביーカー עבור מדידת פיזור אור דינמי. מדדו את עוצמת לייזר הליום-ניאון בזווית של 173 מעלות כדי לקבוע את הפיזור.הציגו את הנתונים כממוצע גודל Z פלוס או מינוס סטיית תקן, יחד עם מדד הפולי-דיספרסיות או ה-PDI של ההתפלגות. לאחר הכנת DDM כפי שתואר קודם לכן, העמיסו 2.5 milliliters של התאים שלי לתוך קסטת דיאליזה בנפח של שלושה milliliters עם סף הפרדה של 7,000 grams per mole. הניחו את הקסטה בתוך 2.5 liters של phosphate buffer בריכוז 10 millimolar ו-pH 7.4 במהלך המרווחים הבאים.שאבו 150 µL מהתמיסה והחליפו ב-150 µL של בופר טרי. החליפו את הבופר מדי שלוש שעות כדי להבטיח תנאי סנכרון. נתחו את הדגימות באמצעות HPLC בפאזה הפוכה כדי לקבוע את עקומת ריכוז התרופה.בצע התאמה של נתוני שחרור התרופה על בסיס מודל דיפוזיה פשוט עם התאגות אקספוננציאלית חד-פאזית באמצעות התוכנה הסטטיסטית D-T-X-E-V-R, וה-DDM הראה יציבות דומה ב-PEG 2000 block PLA 1800 או ב-PEG 2000 block PLA 2200 לאורך 48 שעות. בכל המקרים, התאים שלי שמרו על 97% או יותר מהטעינה הראשונית לאחר 48 שעות בטמפרטורת החדר. בהתבסס על תוצאות פיזור האור הדינמי, כל התאים שלי הראו התפלגות חד-מודאלית עם ערכי PDI הנמוכים מ-0.2.על סמך הנתונים, שחרור DTX מתאי שריר בודדים ומ-DDM היה כ-60% לאורך 48 שעות. שחרור EVR מתאי שריר בודדים ומ-DDM היה 60% ו-50% בהתאמה. הזמן הדרוש לשחרור של 50% מהתרופה מתאי שריר בודדים ומ-DDM ונתוני הטיב של ההתאמה (goodness of fit) מוצגים כאן.איכות התאמת העקומות עבור כל התאים שלי למעט EVR בודד היא מעל 0.950, מה שאומר שההנחה של שחרור מסדר ראשון היא קירוב טוב להסבר של שחרור התרופה מתאים בודדים שלי ומ-DDM. לאחר שהטכניקות הללו נשלטות, ניתן לבצע אותן באופן שגרתי על ספרייה של תרופות ופולימרים כפי שנעשה בתאים שלי בתוך פרק זמן של שעות עד שבוע. בעת ביצוע הליך זה, חשוב לזכור לאפיין באופן מלא את התאים שלי לפני הגישה לתרבית התאים או למודלים החייתיים בעקבות הליכים אלו. ניתן להעריך או לאפיין גם מערכות הובלה אחרות, כגון מערכות הובלה ליפוזומליות, כדי לענות על השאלה לגבי תפקידה של מערכת הובלת התרופות ביעילות הטיפול.לאחר צפייה בסרטון זה, תהיה לכם הבנה טובה לגבי אופן ההכנה ואפיון טעינת התרופות בתאים לפני הערכתם במצב מחלה הרלוונטי.

preparation-characterization-individual-multi-drug-loaded-physically

Research

JoVE Journal

Chemistry

כימיה

מאמר זה מתאר שיטה nanoprecipitation לסנתז פולימר מבוסס חלקיקים באמצעות diblock שיתוף פולימרים. אנו נדון את הסינתזה של diblock שיתוף פולימרים, הטכניקה nanoprecipitation, יישומים פוטנציאליים.

גיבוש חלקיקים פולימריים Diblock באמצעות טכניקה Nanoprecipitation

פרוטוקול עבור ההכנה והאפיון של סמי פרו דוקסורוביצין lipophilic טעון 1,2-distearoyl- SN -glycero-3-phosphoethanolamine- N - [אמינו (פוליאתילן גליקול) -2000] (DSPE-PEG) מיצלות מתוארת.

הכנה ואפיון של דוקסורוביצין lipophilic Micelles פרו-סמים

השלבים העיקריים של החיים פילמור anionic של אתר פניל glycidyl (PheGE) על גליקול methoxy-פוליאתילן (-PPheGE ב mPEG-) מתוארים. מיצלות קופולימר לחסום שתעוררנה (BCMs) היו עמוסות דוקסורוביצין 14% (% wt) ו לשחרור מושהה של תרופה מעל 4 ימים בתנאים רלוונטיים מבחינה פיזיולוגית הושגו.

Anionic פילמור של קופולימר amphiphilic עבור הכנת Micelles קופולימר בלוק מיוצב על ידי אינטראקציות הנחת π-π

כדי לספק תרופות לסרטן לאתרי גידול עם ספציפיות גבוהה ותופעות לוואי מופחתות, נדרשות שיטות חדשות המבוססות על ננו-חלקיקים. כאן, אנו מתארים מיצלות צולבות דיסולפיד שניתן להכין בקלות על ידי חמצון בתיווך מי חמצן ומסוגלות להתנתק ביעילות בסביבת גידול מפחיתה כדי לשחרר מטענים.

גישה קלילה ויעילה לייצור ההפיך דיסולפיד צולב Micelles

מחקר זה מתאר לחות קלאסית באמצעות שיטת הסרט דק השומנים לקראת nanoliposome סוימים ואחריו ננו-חלקיק אפיון. 47 kDa-hydrophilic וחלבון כדורי, טארין, הוא כיום בהצלחה כאסטרטגיה כדי לשפר את היציבות, להימנע הרשאה מהירה, ולקדם שחרור מבוקר. ניתן להתאים את השיטה לעטיפת מולקולות הידרופובי.

הכנה ואפיון ננו-פוטזומים לצורך מלכודת הידרופיזיאליות של חלבונים ביולוגיים

אנו מספקים פרוטוקולים ונתונים מייצגים עבור עיצוב, הרכבה, ואפיון מיקרו מורכבות מורכבים, חלקיקים ליבה פגז שנוצרו על ידי פוליאלקטרוליטים וטעונה הידרופילי מחויב לחסום הסופולימרים.

הרכבה ואפיון של מטלות מורכבות פוליאלקטרוליט

אורגני חיבור פפטיד שיישונים (PTAs) הוא superfamily של peptidomimetics שכולל, אך אינם מוגבלים לפפטידים, peptoids ופפטידים מפוגלים-N. כאן אנו מתארים שיטה סינתטית המשלבת את שניהם מפוצלת וברכה ואסטרטגיות תת מונומר לסנתז ספרייה חד מתחם אחד אגל PTAs.

סינתזה מפוצלת וברכה ואפיון של הספרייה אמידה השלישון פפטיד

סינתזה, הפעלה, ואפיון של חומרי מסגרת מתכת אורגנית במכוון נועדו הוא מאתגרת, במיוחד כאשר אבני בניין הוא הפולימורפים לא תואמים או לא רצויים הם העדיפו thermodynamically על צורות הרצויות. אנו מתארים כיצד יישומים של שער סייע ממס מקשר, עקיפה X-ray אבקה בנימים והפעלה באמצעות CO 2 ייבוש סופר קריטי, יכולים לתת מענה לחלק מהאתגרים האלה.

מסגרות סינתזה ואפיון של פונקציונליות מתכת אורגנית

מטרת פרוטוקול זה היא לשלב SDF-1α, גורם ביות של תאי גזע, בננו-חלקיקי דקסטרן סולפט-צ'יטוזן.  החלקיקים המתקבלים נמדדים לפי גודלם ופוטנציאל הזטה שלהם, כמו גם התוכן, הפעילות וקצב השחרור במבחנה של SDF-1α מהננו-חלקיקים.

הכנה ואפיון של SDF-1α-Chitosan-Dextran סולפט חלקיקים

מתואר פרוטוקול לסינתזה ואפיון של קולואידים המצופים בחלקים סופרמולקולריים. קולואידים על-מולקולריים אלה עוברים הרכבה עצמית עם הפעלת קשרי המימן בין המולקולות המעוגנות על פני השטח על ידי אור UV.

סינתזה ואפיון של קולואידים מולקולריים

למד הכנה ואפיון של מיצלות פולימריות טעונות תרופות בשיטת יציקת ממס. שיטה זו מאפשרת ייצור מהיר ויציב של מערכות משלוח תרופות לטיפול במחלות שונות.

הכנה ואפיון של פרט ורב-סמים נטענים בפח פיזי Micelles פולימרית

גלה סרטונים נוספים