Name: דור וניתוח כמותי של תדר נמוך פעמו אולטראסאונד כדי לקבוע את הרגישות של סוניק שלא טופלו ותאים שטופלו neoplastic (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-07-22T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 5 s
Description: למדו להעריך את יעילות האולטראסאונד בתדר נמוך בפגיעה בתאי לוקמיה אנושיים, עם או בלי סוכן מסיר כולסטרול. השיטה משלבת ספירת תאים אוטומטית ומבחן XTT להערכת פגיעה ופעילות מיטוכונדריאלית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים רוצים להודות לצוות הסדנה של המחלקה לפיזיקה באוניברסיטת סירקיוז על הסיוע החדשני שלהם בעניינים הקשורים לתכנון המערכת שלנו.

1. תא ניקוי מערכת Sonifier <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נקה את האיחוד בין כלורופורם הקרן וממיר באמצעות ספוגית וכותנה. החל נפט אור או שמן מינרלים לאשכולות של הצופר וממיר כדי להסיר הצטברות של שבבי מתכת, חלודה, או חמצון נוסף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש כלורופורם כדי להסיר את השמן וכל מזהמים אחרים מברית לאחר שנגב את החוטים עם שמן. </li></ol> 2. הרכבת התא Sonifier והגדרת המערכת <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חבר מחדש את הקרן לממיר. למומנט המערכת כראוי, להסיר את ממיר התאסף וקרן ממכלול הכוס על ידי משיכת הקרן מתוך תחתית הכוס (איור 2 א). מניחים ברגים חריץ בתוך אחד משלושת החורים הקטנים בחלק העליון של ממיר (איור 2). לאחר מכן, מקם מצוידים ברגל של עורב אינץ &#39;וחצי בחלק מחוררת של הקרן (איור 2) מומנט-מפתח ברגים. להדק ביםtandard כיוון השעון עד מטר המומנט קורא 54.23 N. מ &#39;(איור 2 ג), המומנט המומלץ על ידי היצרן 16. התאם את ממיר התהדק וקרן חזרה לכוס, והר הקרן וממיר לעמדת טבעת בתנוחה זקופה. חבר מחדש את ממיר לאספקת החשמל לפני הגדרת המערכת למינון דופק ניסיוני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדר את המערכת למינון דופק באמצעות 1 שניות של sonication עם 1 שניות בין פולסים. מודלים מינון שונים עשויים לשמש לתנאי ניסוי אחרים. משתנים רבים, כגון נפח מים וקוטר קרן פוטנציאלי ידרשו שינויים במינון זה. שימוש בסוגים הנ&quot;ל מדגם תא, הנפח, וריכוז, הנתונים ותצפיות אמפיריים הובילו לגיבוש משטר מינון זה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התאמת המערכת למשרעת הרצויה. בפרוטוקול זה, להשתמש 33% ו -50% משרעת כדי למנוע הרס תא שלם, אשר יהפוך את היעילות של sonosensitizers קשה או בלתי אפשרי לאמוד. הערה: במחקר זה אמפליטודות מושווה. </li></ol> 3. הערכת עצמת מערכת ופונקציה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החזק את מד cavitation 1.5 סנטימטר, שהיא הרמה של sonication המדגם. שים לב לקריאות להעריך כי המערכת פועלת בעצמה צפויה. שימוש ברמות המערכת והמים הנוכחיות, מצפה בין 100-110 W / 2 סנטימטר למשרעת של 33% ו115-125 W / 2 סנטימטר למשרעת של 50%. שים לב לקריאות מונה cavitation מתצוגת המטר המייצגת אנרגיית cavitation בסנטימטרי W / 2 באופן ישיר. קח הקריאות הללו על פני השטח של המים, ולהבטיח שאין בועות נמצאות בפרצוף של חללית מטרים. הערה: חשוב לציין כי הליכים אלה נעשים ללא הכובע לגישה מעל הצופר. הם לא צריכים להיות חוזרים ונשנים אחרי כל sonication. במקום זאת, הם צריכים להתבצע רק לאחר הניקוי, הרכבה, והקמת המערכת. </li&gt; <li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את hydrophone בבקבוקון המכיל מדגם 12.5 מיליליטר של מים כדי לטבול את חיישן hydrophone מלא. להשעות את hydrophone באמצעות דוכן הטבעת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צרף את hydrophone לקלט של אוסצילוסקופ כדי להעריך מאפייני צורת גל. בדוק את אוסצילוסקופ לגל סינוס ברור, כמו גלים חריגים יכולים לשנות את התדר של המערכת מהמפרט של היצרן. שני מטר cavitation ואוסצילוסקופ לתת קריאת תדר, אלא רק את אוסצילוסקופ יציג גלים חריגים שמעידים על מערכת פגומה או לא תקינה הרכבה. </li></ol> 4. הכנת תאים ובינוני <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את המדיום באמצעות 240 מיליליטר בינוני של Dubecco (IMDM) השתנה של Iscove ו -50 מיליליטר בסרום שור עוברי. לא להפשיר בסרום שור עוברי באמבט מים חם, עם עלייה מהירה בטמפרטורה יכולה להוביל לפשרה ביציבות בסרום. לשלב 240 μl גנטמיצין 50 מ&quot;ג / מיליליטר ו -5 מיליליטר פניצילין/ סטרפטומיצין 100x בבקבוק תרבות סטנדרטי, ולהוסיף לבינוני. אחסן הבינוני על 4 מעלות צלזיוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תאי הזרע U937 ב ~ 4 x 10 4 תאים / מיליליטר בבקבוק 25 סנטימטר 2 באמצעות המדיום מוכן. להעריך תאים לריכוז ויכולת קיום באמצעות דלפק תא TC20 וtrypan הדרה כחולה על ידי הצבת 15-20 μl של תאים וtrypan כחול 15-20 μl לתוך צינור מיקרו צנטריפוגות וערבוב את התוכן. μl Pipette15-20 של תערובת זו לשקופית דגימת TC20, וליזום ספירה על ידי הצבת את השקופית לדלפק תא TC20. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה תאים ב 37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2, ולבדוק כדאיות תא באמצעות הרחקת trypan כחולה ודלפק תא TC20. כאשר התאים בריכוז מתאים ו / או טופלו בsonosensitizers למסגרת זמן מתאים, העברה 3 מיליליטר של תאים מהבקבוק התרבות לבקבוקון נצנץ זכוכית 20 מיליליטר. בפרוטוקול זה, לגדל תאי U937 במשך 48 שעות, ולאחר מכן לטפל עם 0.5, 1,או 5 מ&quot;מ MeβCD למשך 30 דקות לרוקן מספיק הכולסטרול של תאים לפני sonication. </li></ol> 5. תא Sonication <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגה deionized, מים מזוקקים באמצעות ואקום ובקבוק בוכנר. העבר את המים לכוס הקרן, ולמלא עד לרמה של 15 מ&quot;מ מעל החלק העליון של הקרן. תהליך sonication גורם סילוק גזים נוספים של המים לתקופה של כמה דקות, ויכול להוביל לחוסר עקביות במהלך הניסוי אם המערכת לא תפעל לפני לטעום sonication. לכן, להפעיל את המערכת ל~ 7 דקות לפני לטעום sonication. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צרף את בקבוקון הנצנץ המכיל את התאים למכשיר החזקה. לאחר מכן, חבר את מכשיר האחזקה לחלק העליון של קרן הכוס ולהגדיר לגובה של 15 מ&quot;מ מהחלק העליון של הקרן (על פני המים באמצעות מנגנון הזזה). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התאים בדרך כלל sonicated באמצעות שלושה 1 פולסים שניות של אולטרסאונד, עם 1 שניות מרווח בין כל אחד מאלה קטניות. לזהפרוטוקול, תאי sonicate ב 33% ומשרעת 50% באמצעות מינון הדופק הנ&quot;ל. </li></ol> 6. הערכת תאים לניזק לאחר sonication <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להעריך את התאים הושעו לנזק וכדאיות באמצעות trypan כחול ודלפק תא TC20. בנוסף, לנתח את המדגם באמצעות דלפק Z2. לניתוח דלפק Z2, פיפטה השעיה תא 100 μl למלוח 20 מיליליטר איזוטוני (200: 1 יחס). לפני הניתוח, לשטוף את הצמצם של מנתח חלקיקי Z2 לפחות פעמיים באמצעות מלוח איזוטוני. מניחים את מדגם Z2 בבעל הדלפק, ולהעלות את הפלטפורמה לצמצם לפני ביצוע ספירה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לרכוש נתונים מדלפקי TC20 וZ2 באמצעות תוכנה המסופקת על ידי היצרן. לנתח נתונים אלה לנזק לתאים, כדאיות, ויצירת פסולת הסלולר מsonication. </li></ol> 7. XTT Assay לקביעת כדאיויות תא ומיטוכונדריאלי הפעילות של U937 טופל וTHP1 תאים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> PRIOr למבחני XTT, לגדול U937 וTHP1 תאים באותם תנאים. Pretreat תאים עם אותו טווח הריכוז של MeβCD למשך 30 דקות לפני sonication. השתמש באותם הפרמטרים אולטרסאונד כמו קודם, אלא שתאים עכשיו sonicated באמצעות מגוון של 1-3 אחד פולסים שניות במרווחים של שניות אחד לפתח מגוון של נזק לערכת XTT להעריך. הערה: רבים מהפעולות הבאות לקוחים ישירות מהמדריך לערכת XTT וחוזרים על עצמם רק לנוחיות של מעבדות מעוניינות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> איסוף תאים על ידי צנטריפוגה XG 200 במשך 10 דקות. גלולה תא גלולה במדיום הגידול שתוארה קודם לכן. תאי Resuspend ב ~ 1 x 10 5 תאים / מיליליטר. תאי זרע U937 בכל טוב 100 μl לצלחת microtiter 96-גם שטוחות תחתונה בשלושת עותקים, ולאחר מכן לחזור לTHP1 תאים באמצעות צלחת 96-היטב נפרדת. כולל 3 בארות שליטה המכילות מדיום גידול להשלים לבד כמו קריאות ספיגה ריקה 100 μl. לאחר מכן, דגירה הצלחות המחוסנות עבור 24 שעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להפשיר שני aliquots של מגיב XTT ומגיב הפעלה על 37 מעלות צלזיוס לפני השימוש. aliquots מערבולת בעדינות עד פתרונות ברורים מתקבלים. להוסיף 0.1 מיליליטר של מגיב ההפעלה 5.0 מיליליטר של מגיב XTT, המהווה פתרון XTT הופעל מספיק עבור assay צלחת microtiter 96-גם אחד. חזור על התהליך עבור הצלחת אחרת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 50 μl של הפתרון מופעל-XTT היטב כל אחד. להחזיר את הצלחת לתרבות תא חממת CO 2 לשעה 2. לנער את הצלחת בעדינות לאחר תקופת הדגירה לפזר באופן אחיד את הצבע הכתום בבארות החיוביות. מדוד את הספיגה של בארות assay המכילות את התאים ואת בארות שליטת רקע ריקות באורך גל בין 450-500 גל ננומטר באמצעות קורא צלחת microtiter. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> או אפס קורא צלחת microtiter באמצעות בארות שליטה ריקות או לגרוע הערך הממוצע שלהם מהתוצאות הספציפיות. מדוד את הספיגה של כל בארות assay שוב בwavelengה בין 630-690 ננומטר ולהפחית את הערכים מ450-500 ערכי ננומטר הושגו. הערה: קביעת הספיגה שנייה זה עוזרת למנוע קריאות שאינן ספציפיות מתוצאות assay. Assay XTT חזר על עצמו ארבע פעמים לשתי שורות התאים. </li></ol>

<ol><li>Trendowski, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+promise+of+sonodynamic+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Metastasis+Rev%22%5BJournal%5D)">The promise of sonodynamic therapy.</a> Cancer Metastasis Rev. 33 (1), 143-160 (2014).</li>
<li>Semins, M. J., Trock, B. J., Matlaga, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+shock+wave+rate+on+the+outcome+of+shock+wave+lithotripsy%3A+A+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Urol%22%5BJournal%5D)">The effect of shock wave rate on the outcome of shock wave lithotripsy: A meta-analysis.</a> J Urol. 179 (1), 194-197 (2008).</li>
<li>Pace, K. T., Ghiculete, D., Harju, M., Honey, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Shock+Wave+Lithotripsy+at+60+or+120+shocks+per+minute%3A+A+randomized%2C+double-blind+trial%5BTitle%5D)+AND+%22J+Urol%22%5BJournal%5D)">Shock Wave Lithotripsy at 60 or 120 shocks per minute: A randomized, double-blind trial.</a> J Urol. 174 (2), 595-599 (2005).</li>
<li>McClain, P. D., Lange, J. N., Assimos, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimizing+shock+wave+lithotripsy%3A+a+comprehensive+review%5BTitle%5D)+AND+%22Rev+Urol%22%5BJournal%5D)">Optimizing shock wave lithotripsy: a comprehensive review.</a> Rev Urol. 15 (2), 49-60 (2013).</li>
<li>Mitragotri, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Healing+sound%3A+the+use+of+ultrasound+in+drug+delivery+and+other+therapeutic+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Drug+Discov%22%5BJournal%5D)">Healing sound: the use of ultrasound in drug delivery and other therapeutic applications.</a> Nat Rev Drug Discov. 4 (3), 255-260 (2005).</li>
<li>Cordeiro, E. R., Cathelineau, X., Thüroff, S., Marberger, M., Crouzet, S., de la Rosette, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-intensity+focused+ultrasound+%28HIFU%29+for+definitive+treatment+of+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22BJU+Int%22%5BJournal%5D)">High-intensity focused ultrasound (HIFU) for definitive treatment of prostate cancer.</a> BJU Int. 110 (9), 1228-1242 (2012).</li>
<li>Li, P. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-intensity+focused+ultrasound+treatment+for+patients+with+unresectable+pancreatic+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatobiliary+Pancreat+Dis+Int%22%5BJournal%5D)">High-intensity focused ultrasound treatment for patients with unresectable pancreatic cancer.</a> Hepatobiliary Pancreat Dis Int. 11 (6), 655-660 (2012).</li>
<li>Xiaoping, L., Leizhen, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+of+high+intensity+focused+ultrasound+%28HIFU%29+for+pancreatic+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Hyperthermia%22%5BJournal%5D)">Advances of high intensity focused ultrasound (HIFU) for pancreatic cancer.</a> Int J Hyperthermia. 29 (7), 678-682 (2013).</li>
<li>Lukka, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-intensity+focused+ultrasound+for+prostate+cancer%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Oncol+%28R+Coll+Radiol%29%22%5BJournal%5D)">High-intensity focused ultrasound for prostate cancer: a systematic review.</a> Clin Oncol (R Coll Radiol). 23 (2), 117-127 (2011).</li>
<li>So, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HIFU+ablation+is+not+a+proven+standard+treatment+for+localized+prostate+cancer%29%5BTitle%5D)+AND+%22Can+Urol+Assoc+J%22%5BJournal%5D)">HIFU ablation is not a proven standard treatment for localized prostate cancer).</a> Can Urol Assoc J. 5 (6), 424-426 (2011).</li>
<li>Crouzet, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole-gland+ablation+of+localized+prostate+cancer+with+high-intensity+focused+ultrasound%3A+oncologic+outcomes+and+morbidity+in+1002+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Urol%22%5BJournal%5D)">Whole-gland ablation of localized prostate cancer with high-intensity focused ultrasound: oncologic outcomes and morbidity in 1002 patients.</a> Eur Urol. 65 (5), 907-914 (2014).</li>
<li>Tezel, A., Mitragotri, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interactions+of+inertial+cavitation+bubbles+with+stratum+corneum+lipid+bilayers+during+low-frequency+sonophoresis%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys+J%22%5BJournal%5D)">Interactions of inertial cavitation bubbles with stratum corneum lipid bilayers during low-frequency sonophoresis.</a> Biophys J. 85, 3502-3512 (2003).</li>
<li>Tang, H., Wang, C. C., Blankschtein, D., Langer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+investigation+of+the+role+of+cavitation+in+low-frequency+ultrasound-mediated+transdermal+drug+transport%5BTitle%5D)+AND+%22Pharm+Res%22%5BJournal%5D)">An investigation of the role of cavitation in low-frequency ultrasound-mediated transdermal drug transport.</a> Pharm Res. 19 (8), 1160-1169 (2002).</li>
<li>Ueda, H., Mutoh, M., Seki, T., Kobayashi, D., Morimoto, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acoustic+cavitation+as+an+enhancing+mechanism+of+low-frequency+sonophoresis+for+transdermal+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Pharm+Bull%22%5BJournal%5D)">Acoustic cavitation as an enhancing mechanism of low-frequency sonophoresis for transdermal drug delivery.</a> Biol Pharm Bull. 32 (5), 916-920 (2009).</li>
<li>Trendowski, M., Yu, G., Wong, Y., Aquafondata, C., Christen, T., Fondy, T. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+real+deal%3A+Using+cytochalasin+B+in+sonodynamic+therapy+to+preferentially+damage+leukemia+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Anticancer+Res%22%5BJournal%5D)">The real deal: Using cytochalasin B in sonodynamic therapy to preferentially damage leukemia cells.</a> Anticancer Res. 34 (5), 2195-2202 (2014).</li>
<li>Sonifier Cell Disrupter Model SLPeEDP. , Branson Ultrasonics Corporation. Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.emersonindustrial.com/en-US/documentcenter/BransonUltrasonics/Sonifier_Brochure.pdf">http://www.emersonindustrial.com/en-US/documentcenter/BransonUltrasonics/Sonifier_Brochure.pdf</a> (2010).</li>
<li>Lagneaux, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasonic+low-energy+treatment%3A+A+novel+approach+to+induce+apoptosis+in+human+leukemic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Hematol%22%5BJournal%5D)">Ultrasonic low-energy treatment: A novel approach to induce apoptosis in human leukemic cells.</a> Exp Hematol. 30 (11), 1293-1301 (2002).</li>
<li>Krasovitskia, B., Frenkelb, V., Shohama, S., Kimmel, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intramembrane+cavitation+as+a+unifying+mechanism+for+ultrasound-induced+bioeffects%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">Intramembrane cavitation as a unifying mechanism for ultrasound-induced bioeffects.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 108 (8), 3258-3263 (2011).</li>
<li>Sundaram, J., Mellein, B. R., Mitragotri, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+experimental+and+theoretical+analysis+of+ultrasound-induced+permeabilization+of+cell+membranes%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys+J%22%5BJournal%5D)">An experimental and theoretical analysis of ultrasound-induced permeabilization of cell membranes.</a> Biophys J. 84 (5), 3087-3101 (2003).</li>
<li>Mizrahi, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low+intensity+ultrasound+perturbs+cytoskeleton+dynamics%5BTitle%5D)+AND+%22Soft+Matter%22%5BJournal%5D)">Low intensity ultrasound perturbs cytoskeleton dynamics.</a> Soft Matter. 8 (8), 2438-2443 (2012).</li>
<li>Chen, X., Leow, R. S., Hu, Y., Wan, J. M., Yu, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-site+sonoporation+disrupts+actin+cytoskeleton+organization%5BTitle%5D)+AND+%22J+R+Soc+Interface%22%5BJournal%5D)">Single-site sonoporation disrupts actin cytoskeleton organization.</a> J R Soc Interface. 11 (95), 20140071(2014).</li>
<li>Trendowski, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preferential+enlargement+of+leukemia+cells+using+cytoskeletal-directed+agents+and+cell+cycle+growth+control+parameters+to+induce+sensitivity+to+low+frequency+ultrasound%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Lett%22%5BJournal%5D)">Preferential enlargement of leukemia cells using cytoskeletal-directed agents and cell cycle growth control parameters to induce sensitivity to low frequency ultrasound.</a> Cancer Lett. In press, (2015).</li>
<li>Dumontet, C., Sikic, B. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+action+of+and+resistance+to+antitubulin+agents%3A+Microtubule+dynamics%2C+drug+transport%2C+and+cell+death%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of action of and resistance to antitubulin agents: Microtubule dynamics, drug transport, and cell death.</a> J Clin Oncol. 17 (3), 1061-1070 (1999).</li>
<li>Verrills, N. M., Kavallaris, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+the+targeting+of+tubulin-binding+agents%3A+lessons+from+drug+resistance+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Pharm+Des%22%5BJournal%5D)">Improving the targeting of tubulin-binding agents: lessons from drug resistance studies.</a> Curr Pharm Des. 11 (13), 1719-1733 (2005).</li>
<li>Trendowski, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+inherent+metastasis+of+leukaemia+and+its+exploitation+by+sonodynamic+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Crit+Rev+Oncol+Hematol%22%5BJournal%5D)">The inherent metastasis of leukaemia and its exploitation by sonodynamic therapy.</a> Crit Rev Oncol Hematol. In press, (2014).</li>
<li>Trendowski, M., Wong, V., Wellington, K., Hatfield, S., Fondy, T. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tolerated+doses+in+zebrafish+of+cytochalasins+and+jasplakinolide+for+comparison+with+tolerated+doses+in+mice+in+the+evaluation+of+pre-clinical+activity+of+microfilament-directed+agents+in+tumor+model+systems+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vivo%22%5BJournal%5D)">Tolerated doses in zebrafish of cytochalasins and jasplakinolide for comparison with tolerated doses in mice in the evaluation of pre-clinical activity of microfilament-directed agents in tumor model systems in vivo.</a> In Vivo. 28 (6), 1021-1031 (2014).</li>
</ol>

המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים פיננסיים מתחרים.

כדי להשיג תוצאות אופטימליות, יש לנקוט זהירות מיוחדת למצב בזהירות את המדגם ולנקות את איחוד ממיר-קרן. המיקום של המדגם בקרן הוא חשוב להשגת הרס תא עקבי, כמו שינוי המרחק מהקרן ישנה את המוקדים אקוסטי, ולכן משנה את אנרגיית המדגם חשופה ל. האנרגיה אקוסטית בתוך קרן הכוס יכולה להיות ממופה באמצעות מד cavitation כדי למצוא את המיקום של cavitation המרבי. בנוסף, מטר cavitation, יחד עם אוסצילוסקופ הוא חיוניים לקביעת עוצמת צליל התאים נחשפים ל, כמו גם את ההומוגניות של צורת הגל. לכן, יש להשתמש במכשירים אלה כדי לזהות בעיות במערכת, ולעזור לקבוע מה עשוי להיות נחוצים לפתרון בעיות כדי לתקן חוסר יציבות של מערכת. כאמור, מערכת התדירות הנמוכה עשויה לפעול לדגה נוספת המים לאורך כל הניסוי אם לא לרוץ לכמה דקות לפני לטעום sonication. זה ראשוני ריצה יש לבצע להניב בינוני יחסית degassed sonication ותוצאות וכך עולות בקנה אחד במהלך ניסויים. בנוסף, לא צריכים להיות sonicated תאים ליד או משרעת המרבי כאשר להערכת היעילות של sonosensitizers, כמידה נכונה של רגישות תהיה קשה להעריך. שימוש במשרעת של 33% על מערכת קילוהרץ 40 היא הגדרה אידיאלית, כפי שהיא מייצרת נזק בולט, אבל מספק מספיק מקום sonosensitizers להפגין יעילותם, כפי שהודגם בMeβCD נגד U937 ותאי THP1 (איור 7). נתונים אלה גם לאשר שMeβCD sensitizes קווי לוקמיה מרובים לאולטרסאונד בתדר הנמוך באופן תלוי מינון. יש כבר מספר הניסויים שנעשו בתדירות גבוהה יותר בטווח של 0.75 MHz עד 8 ​​מגה-הרץ מציג ראיות של בועות cavitation intramembrane שנוצר באמצעות sonication 17-19. עם זאת, questioNS עדיין יישאר בכל הקשור למנגנון של תמוגה תא מושרה אולטרסאונד 18 המדויק. הראינו קשר בין fluidizing שלד התא והגדיל את רגישות קולית באמצעות אולטרסאונד הנמוך תדר 15, תופעה שהפגינה מעבדות אחרות 20, 21. בנוסף, מצאנו כי סוכני שיבוש-microfilament כגון cytochalasin B להגביר רגישות קולית בלוקמיה מרובה קווים, אך לא hHSCs או כדוריות דם לבנות 22, המצביע על עיכוב של פילמור אקטין עשויה להיות מנגנון sonosensitizing עניין מיוחד. ראינו גם שvincristine, סוכן שיבוש-microtubule שמעכב פילמור טובולין 23, 24, במידה ניכרת מגבירה את הרגישות קולית סוגים שונים של סרטן דם במבחנה כוללים לוקמיה חריפה מיאלואידית, לוקמיה מיאלואידית הכרונית, ולוקמיה החריפה הלימפה. לעומת זאת, סוכנים מכוונים cytoskeletal שלייצב רכיבי cytoskeletal (paclitaxeljasplakinolide ד) מופיע כדי להפוך לתאים עמידים לsonication, באו לידי ביטוי בשיעורים נמוכים יותר של תא תמוגה 22. יחדיו, נתונים אלה תומכים בהשערה כי fluidizing רכיבי cytoskeletal של תאי neoplastic היא אכן גורם חשוב בהגדלת היעילות של SDT 25. המחקר הנוכחי מוכיח כי גם דלדול כולסטרול עשוי להיות שיטה אחרת שבו להגברה נוספת הרגישות קולית של תאי neoplastic, כמו תאי U937 טופל MeβCD במידה ניכרת רגישים עד 40 קילוהרץ אולטרסאונד. בעוד פרוטוקולי sonication שלנו הוכיחו פעילות antineoplastic מסומנת במבחנה, המתודולוגיה הנוכחית מוגבלת לעבודה במודלי תרבות וחוליות קטנות שיכולים להתאים בבקבוקונים המשמשים לsonication. הראינו דג הזברה שניתן sonicated בבטחה באמצעות אולטרסאונד פעמו תדירות נמוכה (20 קילו-הרץ), ושהסובלנות שלהם לתרופות כימותרפיות היא כמותית דומה למינונים נסבלים על ידי מודלים עכברי 26, המצביעים על כך דג הזברה גידול נושאות ניתן להשתמש בחקירות מקדימות כדי להעריך את פעילות antineoplastic vivo של פרוטוקולים אלה. עם זאת, מתן תרופות כימותרפיות לפני sonication של דגמי יונקים דווח בטווח MHz 1, ויכולים להניח יוארכו פרוטוקולים כגון לשלב אולטרסאונד נמוך תדר, כמו גם כולסטרול-מרוקן וסוכנים מכוונים cytoskeletal. יישומים קליניים אפשריים של צורה זו של SDT עשויים להיות כרוכים sonication דם extracorporeal בי סוכני antineoplastic מנוהלים דרך הווריד (IV) לפני הוצאתו לדם sonication 25. שיטה זו מסירה מחסומי קול פוטנציאליים שמציבים האנטומיה אנושית, ועשויה להיות דרך יעילה לניזק תקיעות leukemic, כמו גם גרורות מגידולים מוצקים. ייתכן גם שיכלו כולסטרול-מרוקן וסוכנים מכוונים cytoskeletalניתן להשתמש בפרוטוקולי HIFU שכבר נבחנו במרפאת בניסיון לשפר את היעילות של שיטת טיפול זו. השיטות שתוארו במחקר הנוכחי הן מסוגלים להעריך את הערך של sonosensitizers הפוטנציאלי, ועידון מערכת נוסף עשויים לשפר את השירות הזה. עם זאת, יש הרבה משתנה שיש להתחשב בעת שימוש ממציא קולי כגון, כולל איכות אספקת חשמל, מוקדי אקוסטי, ווריאציה בודדת בין ממירים. לכן, מחקר עתידי יתמקד בלדמיין את הגלים על-קוליים והבנה השפעתם על תוצאות. SDT הוכיח כדי לשפר את תמוגה תא במבחנה ועשוי להיות בר-קיימא מבחינה קלינית, אם יותר בנתונים vivo במודלים של יונקים נרכשים. ניסויים בוחנים מאפיינים אחרים ניתן לנצלם של תאים ממאירים, וכן דרכים משולבות שונים מעורבים סוכנים ואולטרסאונד מרובים להמשיך במעבדה שלנו.

אולטראסאונד מתייחס לכל גל לחץ קול נדנוד בתדירות גבוהה יותר מהגבול העליון של יכולות שמיעה אנושיות (~ 20 קילו-הרץ) 1. אולטרסאונד בתדר נמוך בטווח 20-60 קילוהרץ נוצל במעבדה כאמצעי ליצירת תחליבים, הכנת דגימות סלולריות להפקת חומצות גרעין, לשיבוש רקמות, ועבור מגוון רחב של בדיקות אחרות. השירות של אולטרסאונד בתדר הנמוך גם הורחב להגדרה התעשייתית לריתוך, חומרי ניקוי שונים, ובטיפול בחומרים. מסחרי גנרטורים אולטרסאונד זמינים לבוא בתדרים הנעים 18-60 קילוהרץ, ובקנה מידה מלא wattages מ100-1,200 W. למרות אולטרסאונד משמש כבר זמן רב בהגדרה הקלינית להדמיה לאבחון, זה כבר מיושם ככלים טיפוליים רק לאחרונה. אולטראסאונד ≥1 MHz מסוגל לשבש calculi שתן (אבנים בכליות) וcalculi מרה בשלום (אבנים בהכיס מרה דואר או בכבד) בחולים כדי להפחית סימפטומים 2,3. גישה זו ידועה כריסוק Shockwave extracorporeal (ESWL) עכשיו מיושמת באופן נרחב במרפאת (מטופלים חולים יותר ממיליון בשנה עם ESWL בארצות הברית לבדה 4), ומציעה שיטה שבי להלא פולשני לשבור את calculi עם ניזק סביבתי מינימאלי באמצעות פולסים אקוסטי לשימוש חיצוני בעוצמה גבוהה, ממוקדת, 2-4. בשל הכוחות הייחודיים הישירים הגז, כמו גם בועות cavitation שנוצרו על ידי אולטרסאונד בעוצמה גבוה, מתודולוגיות אלה נבדקו בטיפול בסרטן לטיפול בסרטן הערמונית עמיד לסירוס ואדנוקרצינומה של לבלב בגישה הידועה כממוקדים בעוצמה גבוהה אולטרסאונד (HIFU ) 5-8. באופן דומה מאוד לESWL, HIFU משתמש קורות אולטרסאונד מרובים ומתמקד באזור מוקדי שנבחר כדי ליצור טמפרטורות של 60 מעלות צלזיוס או HIGשלה באמצעות השימוש באנרגיה האקוסטית, גרימת נמק מִתקַרֵשׁ ברקמות הממוקדות 5. למרות ששיטות אחרות של אבלציה תרמית קיימות כיום (אבלציה בתדר רדיו ואבלציה מיקרוגל), HIFU מציע יתרון ברור על פני שיטות אלה בכך שהוא השיטה hyperthermic לא פולשנית רק 5. HIFU השיג תוצאות מעורבות במרפאת וזמינה כרגע רק בניסויים קליניים 8-11. עם זאת, ההצלחה המוגבלת שהשיג, ומבטיח מאוד בנתונים vivo נרכשו מדגמי יונקים פרה-קליניים הדגימו את הפוטנציאל של אולטרסאונד בטיפול בסרטן. במאמץ לשפר את HIFU, חוקרים ניסו לשלב אולטרסאונד עם סוכני antineoplastic מתאימים כדי ליצור צורה של sonochemotherapy. טיפול Sonodynamic (SDT) הוא שיטת טיפול חדשנית מבטיחה שהוכיחה פעילות antineoplastic מרשימה בהיא במבחנה <em&gt; מחקרי in vivo 1. הוכח אולטרסאונד שמעדיף נזקי תאים ממאירים המבוססים על ההפרש בין גודל תאים כאלה ואלה של היסטולוגיה הרגילה 1,5. SDT משלב סוכנים מיוחדים הידועים כsonosensitizers להגדיל את היקף הנזק מועדף המופעל על ידי אולטרסאונד נגד תאי neoplastic. בעוד יישומים טיפוליים של SDT כבר נבדקו בעבר, מערכות אולטרא סאונד משמשות בדרך כלל להעסיק אולטרסאונד הגבוה תדר (≥1 MHz), ואת ההשפעות של אולטרסאונד בתדר kHz הנמוך טרם נחקרו באופן מלא. תדרים נמוכים של אולטרסאונד לעתים קרובות יותר בקיאים בהפקת cavitation אינרציה, תופעה שגורמת להרס של תאים עקב מתכווצת המהיר של microbubbles, גרימת נזק physicochemical 12-14. הבדל בדור של cavitation אינרציה בין MHz ואולטרסאונד kHz הנמוך זו יוחס לעובדה שתדרי גל נמוכים יאפשר microbubbleזה יותר זמן לגדול על ידי דיפוזיה לתקן במחצית הרחבת המעגל, וכתוצאה מכך הייצור מתמוטט אלים יותר במחצית המחזור 12 הדחיסה הבאה. הראינו בעבר כי תאי monocytic אדם U937 לוקמיה רגישים לאולטרסאונד הנמוך תדר (23.5 kHz), ושרגישות זו יכולה להיות מוגברת במידה ניכרת באמצעות היישום של סוכני antineoplastic שלטרוד את שלד התא 15. יתר על כן, יש לנו הראינו שתאים באופן מועדף ניזק שמבוססים על גודל, עם תאים גדולים יותר מציגים רגישות קולית גבוהה יותר. בנוסף, תאים נורמלים אדם hematopoietic גזע (hHSCs) וכדוריות דם לבנות בגדלי תא דומים הרבה יותר עמידים לsonication מאשר עמיתיהם neoplastic 15, בהיסוס טוענים כי אולטרסאונד בתדר הנמוך ניתן להשתמש כדי לפגוע באופן מועדף תאים ממאירים בנוכחות של רקמה נורמלית. כדי לבחון את האבזר הייחודי נוסףerties של אולטרסאונד בתדר הנמוך לשימוש טיפולי פוטנציאלי, פיתחנו תהליכי ניקוי וייצוב כדי להגדיל את היעילות ואמינה של אחת ממערכות sonication הנוכחיות שלנו, W ברנסון דגם SLPe 150, המשבש סלולארי 40 קילוהרץ, מצויד בצופר 20 מ&quot;מ מצויד לתוך כוס 7.62 סנטימטר. בנוסף, יש לנו כבר הצליח לקבוע אנרגיות מדויקות cavitation המדגם, כמו גם גל עקבי ומשרעת בטווח של 40 קילוהרץ באמצעות מד cavitation ואוסצילוסקופ עם hydrophone. על ידי זיקוק ושיטתי הפרוטוקולים שלנו, יש לנו כבר הצליח להקים עקביות בsonications הניסוי שלנו, ומאפשר לנו להשוות כמותית הרגישויות קולית של תאי אנטינאופלסטיים ונורמלים של שושלות שונות histogenetic. הפרוטוקול שלנו למערכת 40 קילוהרץ מוצג בפירוט רב על מנת למעבדות מעוניינות להיות מסוגל לבצע ניסויים דומים, וכדי להעריך את הממצאים של השפעות antineoplastic שהושרו על ידיאולטרסאונד בתדר נמוך. בנוסף, אנו בוחנים את ההשפעות תלויות מינון של מתיל-β-cyclodextrin (MeβCD; איור 1), סוכן מדלל את כולסטרול, על הגדלת הרגישות קולית של U937 וTHP1 תאים לוקמיה monocytic אנושיים.

<table><tbody><tr><td>מדיום Dulbecco שונה של Iscove עם NaHCO3 & 25mM Hepes&nbsp;</td><td>Life Technologies</td><td>12440079</td><td></td></tr><tr><td>Amphotericin B Solution&nbsp;</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>A2942&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת פניצילין/סטרפטומיצין 100x&nbsp;</td><td>Life Technologies</td><td>10378-016</td><td></td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>12105</td><td></td></tr><tr><td>ברנסון SLPe 40kHz משבש תאים עם 3 אינץ' (25 מ"מ) Cuphorn</td><td>Branson Ultrasonics</td><td>101-063-726</td><td>מכשיר סוניקציה</td></tr><tr><td>Brisk Heat SDC Benchtop בקרת טמפרטורה דיגיטלית עם 1000 מ"ל מחמם מחמם</td><td>חום נמרץ</td><td>SDCJF1A-GBH1000-1</td><td>המשמש לבקרת טמפרטורה</td></tr><tr><td>גודל תא Beckman-Coulter Z2 עם AccuComp&reg; תוכנה</td><td>בקמן-קולטר</td><td>6605700</td><td></td></tr><tr><td>Bio-Rad TC20 מונה תאים אוטומטי</td><td>Bio-Rad</td><td>145-0102</td><td></td></tr><tr><td>ג'נטמיצין 50 מ"ג/מ"ל</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>G1397&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Trypan Blue Solution</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8154</td><td></td></tr><tr><td>Falcon 50 מ"ל ו-25 מ"ל צלוחיות תרבית מאווררות</td><td>Fisher Scientific</td><td>353082</td><td></td></tr><tr><td>Lonza L-Glutamine 200 מ"מ 0.85% NaCl</td><td>Lonza</td><td>17-605C&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Seal-Rite 1.5 מ"ל צינורות מיקרוצנטריפוגה</td><td>USA Scientific</td><td>1615-5510</td><td></td></tr><tr><td>Beckman-Coulter Accuvette ST 25 מ"ל בקבוקונים וכובעים</td><td>בקמן-קולטר</td><td>&nbsp; A35473</td><td></td></tr><tr><td>AccuJet Pro פיפט אוטומטי&nbsp;</td><td>BrandTech Scientific</td><td>26330</td><td></td></tr><tr><td>USA Scientific 10 מ"ל צנרת סרולוגית חד פעמית</td><td>ארה"ב סיינטיפיק</td><td>1071-0810</td><td></td></tr><tr><td>טיפ אחד 100 & #956; l ו-1,000 &#956; l טיפים לסינון</td><td>USA Scientific</td><td>1120-1840, 1126-7810</td><td></td></tr><tr><td>100 & #956; l מיקרופיפטה&nbsp;</td><td>ויטון</td><td>851164</td><td></td></tr><tr><td>1,000 &#956; l Micropipette</td><td>Wheaton</td><td>851168</td><td></td></tr><tr><td>BioRad שקופיות ספירת תא כפול</td><td>Bio-Rad</td><td>145-0015</td><td></td></tr><tr><td>Forma Scientific חממה עם מעטפת מים</td><td>כפולה Forma Scientific</td><td>3131</td><td></td></tr><tr><td>Tektronix&nbsp; DPO 2002B אוסילוסקופ זרחן דיגיטלי</td><td>Tektronix</td><td>DPO2002B</td><td>המשמש למדידת צורת הגל האולטראסונית</td></tr><tr><td>PPB MegaSonics דגם PB-500 מד אנרגיה אולטרסאונד</td><td>PPB Megasonics</td><td>PB-500&nbsp;</td><td>משמש להערכת עוצמת הצליל ב-W/cm2</td></tr><tr><td>Teledyne RESON TC4013-1 הידרופון</td><td>Teledyne</td><td>TC4013-1&nbsp;</td><td>מתחבר לאוסצילוסקופ&nbsp;</td></tr><tr><td>וויטון 250 מ"ל צלוחיות</td><td>סיגמא-אולדריץ</td><td>' Z364827</td><td></td></tr><tr><td>20 מ"ל בקבוקוני נצנוץ מזכוכית&nbsp;</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>Z190527</td><td></td></tr><tr><td>בקמן-קולטר תמיסת מלח איזוטונית&nbsp;</td><td>מדלל Beckman-Coulter</td><td>N/A</td><td>עבור Z2 נגד</td></tr><tr><td>כלורופורם 99%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C2432</td><td></td></tr><tr><td>אתנול 200 הוכחה נטול מים&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>459836</td><td></td></tr><tr><td>שמן מינרלי</td><td>N/A</td><td></td><td></td></tr><tr><td>XTT ערכת בדיקת התפשטות תאים</td><td>ATCC</td><td>30-1011K</td><td></td></tr><tr><td>96-Well Microplate Reader</td><td>Cole-Palmer</td><td>&nbsp; EW-13055-54</td><td></td></tr><tr><td>U937 תאי לוקמיה מונוציטיים אנושיים</td><td>ATCC</td><td>CRL&shy; 1593.2</td><td></td></tr><tr><td>THP1 תאי לוקמיה מונוציטיים אנושיים</td><td>ATCC</td><td>TIB-202</td><td></td></tr></tbody></table>

דור וניתוח כמותי של תדר נמוך פעמו אולטראסאונד כדי לקבוע את הרגישות של סוניק שלא טופלו ותאים שטופלו neoplastic

Generation and Quantitative Analysis of Pulsed Low Frequency Ultrasound to Determine the Sonic Sensitivity of Untreated and Treated Neoplastic Cells

אולטרסאונד בתדר נמוך בטווח של 20 עד 60 קילו-הרץ הוא שיטה פיזיקלית חדשה שבאמצעותה ניתן לגרום לליזה סלקטיבית של תאים ומוות בתאים ניאופלסטיים. בנוסף, ניתן להשתמש בשיטה זו בשילוב עם חומרים מיוחדים המכונים סונו-רגישים כדי להגדיל את היקף הנזק המועדף המופעל על ידי אולטרסאונד כנגד תאים ניאופלסטיים, גישה המכונה טיפול סונודינמי (SDT). המתודולוגיה לייצור ויישום אולטרסאונד בתדר נמוך בסביבה פרה-קלינית במבחנה מוצגת כדי להדגים כי ניתן להשיג הרס תאים הניתן לשחזור על מנת לבחון ולהשוות את השפעות הסוניקציה על תאים ניאופלסטיים ונורמליים. זה מציע אמצעי שבאמצעותו ניתן לבצע סוניקציה מהימנה של תאים ניאופלסטיים ברמת עקביות הנדרשת להערכה טיפולית פרה-קלינית. בנוסף, נדונות ההשפעות של חומרים מדלדלי כולסטרול ומכוונים לשלד הציטו על הגברת הרגישות האולטרסאונד בתאים ניאופלסטיים על מנת להרחיב על מנגנוני פעולה התורמים לגישות סונוכמאת'ראפיוטיות.

יציבות מערכת היא בעל חשיבות עליונה בהשגת תוצאות הדיר ואמינות. מפרט המומנט הנכון של 54.23 N. מ &#39;השיג צימוד נאות של המתמר וsonotrode 2, עם העקביות של הגל שהוערכה באמצעות שימוש ב( איור 3 א) אוסצילוסקופ וhydrophone. איור 3 מתאר מדידות בתוך בקבוקון המדגם, ו איור 3 ג מעריך יציבות בקרן הכוס. כצפוי, משרעת היה מעט מופחת בשל כמה אנרגיה להיקלט על ידי הזכוכית. עם זאת, צורת הגל לא הייתי מוטרד או מעוותת בכל לוח ב &#39;או ג&#39;, אשר הוא הכרחי עבור אספקה ​​אמינה של אנרגיה קולית למדגם. צורת גל שאינו מופיע כגל סינוס יחיד ברור מצביעה על מתמר פגום או התקנה לא תקינה. זה בא לידי ביטוי באיור 3D שמראה גלים חריגים מרובים, היעדר ברור של גל סינוס, ותדירות קריאה לאלא צפוי עם מערכת מתפקדת כראוי. מטר cavitation משמש למדידת אנרגיית cavitation שנוצר (איור 4) מצא את עוצמת הקול להיות 100-110 W / 2 סנטימטר במשרעת של 33%, ו125-130 W / 2 סנטימטר במשרעת של 50%. ברגע שמערכת 40 קילוהרץ הייתה כראוי מכוילת והורכבה בשלמותו (איור 5), הרס תא אמין היה בקלות השיג, כפי שנקבע על ידי שני דלפקי TC20 וZ2 (איור 6). כצפוי, נזק לתאים נרחבים יותר נצפו באוכלוסיות תאי sonicated ב 50%, ולא במשרעת של 33%. עם זאת, 33% משרעת שימושי כנקודת פתיחה לזיהוי תופעות רגישות קולית פוטנציאל של סוכנים מנוהלים, כפי שהיא מייצרת נזק ניכר, אבל משאיר מקום ליותר נזק להתגלות כאשר סוכנים מיושמים להעריך הגברתם של רגישות קולית. זו באה לידי ביטוי באיור 7 א, שבוהשפעות תלויות מינון של MeβCD על potentiating הרגישות קולית של תאי U937 מוצגות. למרות שהתאים שטופלו MeβCD אינו sonicated היו דומים מאוד ביכולת קיום לתאים-sonicated עישון, שלא טופלו, הכדאיות ירדה במידה ניכרת לאחר שלושה פולסים של אולטרסאונד kHz 1 שניות 40 יושם. בנוסף, הירידה בכדאיות לאחר sonication נראה היו תלוי מינון, כמו 5 מ&quot;מ MeβCD מיוצר הירידה הגדולה ביותר בספירת תאים, ואחריו 1 מ&quot;מ, ולאחר מכן 0.5 מ&quot;מ MeβCD. השפעות דומות על כדאיות תא ופעילות המיטוכונדריה נצפו בשני תאי U937 וTHP1 שטופלו בריכוזים שונים של MeβCD לפני sonication, כפי שהוערך עם ערכת XTT (איור 7). למרות THP1 תאים נראים מעט יותר קולי עמיד מאשר תאי U937, שני הקווים לוקמיה ניזוק באופן תלוי מינון. ריכוזים גבוהים יותר של MeβCD ויותר פולסים של לדרבן אולטרסאונדuced ההפחתה הנמוכה ביותר של XTT לנגזר מסיס, צבעוני כתום לשני U937 וTHP1 תאים, המתאים להורדת כדאיות תא ופעילות המיטוכונדריה. <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/53060/53060fig1.jpg" /> איור 1. מבנה מולקולרי של β-cyclodextrin methyl-. () מבנה שלם של מתיל-β-cyclodextrin (MeβCD). (ב) MeβCD הוא פולימר של שבע יחידות חוזרות עם קבוצת R של שני H או CH 3. נוסחה מולקולרית: C 56 H 98 O 35. משקל מולקולרי = 1,331.36. <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/53060/53060fig2.jpg" /> איור 2. torqueing מערכת אולטרסאונד 40 קילוהרץ כראוי. (א) הקרן וממיר יוסרו מן פרי הכוסאו לtorqueing. (ב) מקם את מפתח הברגים חריץ ומפתח מומנט בעמדותיהם. (ג) החל 54.23 N. מ &#39;של מומנט בכיוון השעון לפני reattaching הקרן וממיר לכוס. <img alt="איור 3" src="/files/ftp_upload/53060/53060fig3.jpg" /> איור 3. שימוש באוסצילוסקופ לאפיין את צורת הגל של המערכת קולית. () אוסצילוסקופ עם hydrophone ניתן להשתמש כדי להעריך עקביות משרעת וצורת גל. הקלטה (ב &#39;) שצולמה בכוס ישירות מעל הקרן 1.5 סנטימטר ונקבעה על משרעת של 33%. (ג) צורת הגל בתמונה כאן היא מקריאה רכשה כאשר hydrophone ממוקם בתוך בקבוקון נצנץ זכוכית 20 מיליליטר. הבקבוקון ממוקם ב -1.5 סנטימטרים מעל הקרן וקבע שוב במשרעת של 33%. O מסך אוסצילוסקופ (D)מערכה ה- FA עם תדרים חריגים כפי שניתן היה לצפות עם מערכת פגומה או לא תקין של צימוד איחוד ממיר קרן. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53060/53060fig3large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 4" src="/files/ftp_upload/53060/53060fig4.jpg" /> שימוש איור 4. מטר cavitation לאפיין את עוצמת הקול של המערכת קולית. מטר cavitation ראה כאן משמש כדי לייצג אנרגיית cavitation בW / 2 סנטימטר. זה מכשיר מאוד חשוב להערכת עקביות של אנרגיה ביחס למדגם. <img alt="איור 5" src="/files/ftp_upload/53060/53060fig5.jpg" /> 5. מרכיבי מפתח איור של מערכת אולטרסאונד 40 קילוהרץ. המערכת קולית מוצגים להשלים עם קרן כוס ( <strong&gt;), מנגנון חימום (ב &#39;), ממיר (C), ומנגנון מיצוב מדגם (ד&#39;). עיצוב זה מאפשר למיצוב קל של המדגם (E) מעל הצופר (F). <img alt="איור 6" src="/files/ftp_upload/53060/53060fig6.jpg" /> 6. אפקטי איור של רמות שונות של משרעת על תמוגה קולית של תאי U937 באמצעות מוני TC20 וZ2. תאים היו sonicated עם dismembrator 40 קילוהרץ התא במשרעת של 33% (100-110 W / 2 סנטימטר) או משרעת 50% (125-130 W / 2 סנטימטר) באמצעות שלושה 1 פולסים שניות של אולטרסאונד, עם מרווח 1 שניות בין כל פולסים אלה. (א) צילום מסך מהתוכנה דלפק Z2 מדגים את ההשפעה של sonication על תאי U937. (ב) נתונים מדלפק TC20 לוקטו בגרף כדי להדגים את שחזור של התוצאהים. נתונים אלה כוללים את הסעיפים המוחלט ולחיות תא, כמו גם trypan הכחול העריך כדאיות תא. ברים משקפים את סטיית התקן של הממוצע (SEM) במשך 4 אוכלוסיות תאים עצמאיות. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53060/53060fig6large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 7" src="/files/ftp_upload/53060/53060fig7.jpg" /> איור 7. השפעות של β-cyclodextrin methyl- על potentiating הרגישות קולית של U937 וTHP1 תאים. טופלו () תאי U937 עם משתנה ריכוז של MeβCD במשך 30 דקות לפני שsonicated עם אולטרסאונד kHz 40 (105 W / 2 סנטימטר ) באמצעות שלוש 1 פולסים שניות במרווחים 1 שניות זה מזה. אוכלוסיות תאים קובצו ל≥12 מיקרומטר ו≥17 מיקרומטר. תאים שטופלו (ב) U937 או THP1 שוב עם concent שונהמנות של MeβCD במשך 30 דקות לפני שsonicated עם מערכת 40 קילוהרץ באמצעות 1-3 פולסים של אולטרסאונד 1 שניות במרווחים של 1 שניות. כדאיות תא ופעילות המיטוכונדריה הוערכו עם ערכת XTT. של תאים 100 μl היו זרע לכל גם לצלחת microtiter 96-גם שטוח תחתונה. צלחת הודגר למשך 24 שעות לפני התוספת של פתרון XTT. תאים אז הודגרו לשעה 2 נוספת לפני הגל היה לקרוא. ברים משקפים SEM ל4 אוכלוסיות תאים עצמאיות. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53060/53060fig7large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a>

ניתן להשיג נזק סלקטיבי לתאי לוקמיה אנושיים באמצעות גישה חדשה של יישום אולטרסאונד בתדר נמוך עם ובלי טיפול מקדים כימותרפי בתאים לוקמיים ותאים המטופויאטיים נורמליים.

Low frequency ultrasound in the 20 to 60 kHz range is a novel physical modality by which to induce selective cell lysis and death in neoplastic cells. In ...

המטרה הכוללת של הניסוי הבא היא להעריך את היעילות והשחזוריות של אולטרסאונד פולסי בתדר נמוך בפגיעה באוכלוסיות של תאי לוקמיה אנושיים, בנוכחות או בהיעדר חומר להפחתת כולסטרול. מטרה זו מושגת על ידי ניקוי מערכת הסוניקציה והערכת היציבות שלה. לאחר מכן, תאי הלוקמיה האנושיים עוברים סוניקציה בהיעדר ובנוכחות של methyl beta cyclodextrin.בשלב הבא, נעשה שימוש בסופרי תאים אוטומטיים כדי להעריך את חיוניות התאים ואת ההשפעות של הסוניקציה והדלת כולסטרול. הפעילות המיטוכונדריאלית של תאי לוקמיה מוערכת באמצעותבדיקת XTT. בסופו של דבר, הנתונים מצביעים על כך שניתן להשתמש באולטרסאונד בתדר נמוך כדי לפגוע בתאים ממאירים, תהליך שמתחזק באמצעות שימוש בחומר להדלת כולסטרול.המעבדה שלנו מתעניינת בטיפול ב-sonar namp, מודליות טיפולית חדשנית המשלבת את ההשפעות האנטי-נאופלסטיות של אולטרה-סאונד עם חומרים ייעודיים להגברת השפעות ה-son. הפרוטוקול שלנו מעריך את הרגישות הסונית של תאים נאופלסטיים ותאים נורמליים כדי לקבוע גישות כימותרפויטיות פוטנציאליות המצדיקות חקירה פרה-קלינית נוספת. באופן כללי, אנשים שאינם בקיאים בשיטה זו עשויים להתקשות בשימוש בציוד המשמש להערכת יציבות מערכת ה-so, שכן למידת היישום האופטימלי של מכשירים אלה עשויה לדרוש זמן.הדגמה חזותית של שיטה זו היא קריטית, שכן נהלי הניקוי והייצוב המשמשים להערכת מערכת הסוניקציה הם חיוניים להשגת תוצאות הניתנות לשחזור. לפני תחילת הניסוי, השתמשו בכלורופורם ובמקלון צמר גפן כדי לנקות את החיבור שבין הקרן לממיר. לאחר מכן, מרחו שמן קל על ההברגות של הקרן והממיר.כדי להסיר באופן יסודי שאריות מתכת, חלודה או הצטברות של תחמוצות, הסר את השמן וכל מזהם אחר מהחיבור באמצעות כלורופורם נוסף, ולאחר מכן חבר מחדש את הקרן (horn) לממיר. כדי להדק את המערכת במומנט נכון, משוך את הקרן מחלקו התחתון של הכוס והכנס מפתח חריץ (slot wrench) לאחד משלושת החורים הקטנים הנמצאים ליד החלק העליון של הממיר. כעת, מקם מפתח מומנט המצויד בראש מסוג רגל עורב (crow's foot) של חצי אינץ' על החלק החרוץ של הקרן והדק בכיוון השעון הסטנדרטי עד שמד המומנט יראה 39.99 foot pounds.לאחר ההידוק, החזיר את המתמר ואת הקרן אל התחתית והצמד את החלקים למעמד טבעות במצב אנכי, חבר מחדש את המתמר לספק הכוח, ולאחר מכן הגדר את המערכת למתן מנות בפולסים. השתמש בשנייה אחת של סוניקציה עם שנייה אחת בין הפולסים, ולאחר מכן כוון את המערכת לאמפליטודות הרצויות כדי להעריך את העוצמה והתפקוד של מערכת ה-sauna Fire. התחל בהחזקת מד הקוויטציה במרחק של 1.5 סנטימטרים, תוך הקפדה שאין בועות על פני השטח של גשש המד.קראו את המסך של מד הקוויטציה כדי לוודא שהמערכת פועלת בעוצמה המתאימה. לאחר מכן, טבלו לחלוטין את חיישן ההידרופון בתוך מבחנה המכילה 12.5 milliliters של מים, והשתמשו במעמד הטבעות כדי לתלות את ההידרופון. כדי לוודא את יציבות מאפייני גל הצורה, חברו את ההידרופון לכניסה של האוסילוסקופ ואשרו את נוכחותו של גל סינוס ברור, שכן גלים חריגים עלולים לשנות את ה-Frequency של המערכת.כדי להכין את התאים לסוניקציה, ראשית, זרע אותם בריכוז של 4 × 10⁴ תאים למילילטר בבקבוקון של 25 סמ"ר באמצעות מצע טרי. לאחר קביעת מספר התאים החיים בשיטת הדירה של Trypan blue, דגרי את התרבית בטמפרטורה של 37 °C וב-5% CO₂ עד שהתרבית תגיע לריכוז הרצוי. כאשר התאים מוכנים לסוניקציה, השתמשי בוואקום ובבקבוקון בוכנר כדי לנכש גזים מנפח של מים מזוקקים ודה-יוניים.לאחר מכן, השתמשו במים כדי למלא את קרן הכוס עד לגובה של 15 מילימטרים מעל קצה הקרן. הפעילו את המערכת עם מי ה-Degas למשך כשבע דקות. לאחר מכן, העבירו שלושה מיליליטרים של תאים לבקבוק ניצנוץ (scintillation vial) מזכוכית בנפח 20 מיליליטר, וחברו את הבקבוק למתקן ההחזקה.בשלב הבא, הצמידו את התקן ההחזקה לחלק העליון של קרן הסוניקציה והשתמשו במנגנון ההחלקה כדי לקבוע את גובה התקן ההחזקה ל-15 מילימטרים מקצה הקרן בקו פני המים. כעת בצעו סוניקציה לתאים באמצעות שלושה פולסי אולטרסאונד של שנייה אחת, במרווח של שנייה אחת בין פולס לפולס, בעוצמה של 33% ו-50%, והעריכו את חיוניות התאים לאחר הסוניקציה באמצעות בדיקת הדירה של Tripan blue. כדי להעריך את הנזק לתאים, שטפו את פתח המדידה של אנלייזר חלקיקים מדגם Z2 לפחות פעמיים עם תמיסת סליין איזוטונית.בשלב הבא, הוסיפו 100 µl של התאים שעברו סוניקציה ל-20 mL של תמיסת סלין איזוטונית, והעבירו את דגימת התאים למחזיק הספירה. לאחר מכן, העלו את הפלטפורמה עד לפתח ונתחו את נזקי התאים, החיוניות והפסוליות בהתאם להוראות היצרן. כדי להעריך את חיוניות התאים שעברו סוניקציה באמצעותבדיקת XTT, בצעו סוניקציה לתאים בטווח של אחת עד שלוש.פולסים של שנייה אחת במרווחים של שנייה אחת כדי ליצור טווח של נזקים להערכה באמצעות ערכת XTT, לאחר מכן סבב תרחיף התאים (spin down) ותליה מחדש של המשקעים בריכוז של 10⁵ תאים למיליליטר במצע גידול שהוכן טרי. לאחר מכן, זריעה של 100 µL תאים לכל באר בלוחות מיקרוטיטר בעלי 96 באערים וקרקע שטוחה, בחוזרים threefold, כולל שלוש באערי בקרה המכילים 100 µL של מצע גידול מלא בלבד עבור קריאות ספיגה של דגימות ריק (blank).דגרו את התאים למשך 24 שעות בבוקר הבדיקה, ערבבו בעדינות בסיבובים אליקוואות של XTT ושל ריאגנט ההפעלה שחוממו ל-37 °C עד שהתמיסות יהיו צלולות. לאחר מכן, הוסיפו 0.1 milliliters של ריאגנט ההפעלה ל-5 milliliters של ריאגנט XTT. לאחר מכן, הוסיפו 50 µL של תמיסת XTT מופעלת לכל באר בלוחות המוחדרים ב-U 9 37 וב-THP one, והחזירו את התאים לאנקובטור לתרביות תאים.לאחר שעתיים, נערו את הפלטות בעדינות כדי להפיץ באופן שווה את הצבע הכתום בבארים החיוביות ומדדו את הבליעה באמצעות קורא פלטות מיקרוטיטר בין 450 ל-500 ננומטר. לבסוף, מדדו שוב את הבליעה של כל בארי הבדיקה, בין 630 ל-690 ננומטר. כפי שצפוי, נצפה נזק תאי נרחב יותר באוכלוסיית התאים שעברה סוניקציה באמפליטודה של 50% מאשר זו שעברה סוניקציה באמפליטודה של 33%.עם זאת, אמפליטודה של 33% מאפשרת זיהוי של נזקים נוספים בעת יישום של חומרים. כך גם בניסוי זה, שבו נבחנו ההשפעות התלויות במינון של החומר המדלל כולסטרול methyl beta cyclodextrin, על הגברת הרגישות האולטרסאונית של תאי U 9 37.אף על פי שהתאים שעובדו במתיל בטא ציקלודקסטרין היו דומים בחיוניותם לתאים שלא עובדו, החיוניות ירדה באופן ניכר לאחר הפעלת שלושה פולסים של אולטרסאונד ב-40 kilohertz למשך שנייה אחת. יתרה מכך, נראה כי הירידה בחיוניות לאחר הסוניקציה הייתה תלוית מינון, שכן ריכוז של five millimolar של חומר המדלל את הכולסטרול גרם לירידה הגדולה ביותר במספר התאים, ואחריו טיפולים בריכוזים של one millimolar ו-0.5 millimolar של מתיל בטא ציקלודקסטרין, כפי שנמדד ב-XTT assay. למרות שנראה כי תאי THP one היו עמידים יותר לסוניקציה מאשר תאי U 9 37, שני קווי תאי הלוקמיה האנושיים ניזוקו באופן תלוי מינון.בנוסף, השילוב של ריכוזים גבוהים יותר של methyl beta cyclodextrin עם מספר רב יותר של פולסי אולטרסאונד הניב את ההפחתה הנמוכה ביותר של XTT לנגזרת כתומה בהירה מסיסה הן בתאי U 9 37 והן בתאי THP one, מה שמעיד על חיות תא ופעילות מיטוכונדריאלית נמוכות יותר עבור שניים מקווי התאים. לאחר הליך זה, ניתן להעריך חומרי רגישות סוניים אחרים, כגון חומרים המכוונים לשלד התא או חומרים המייצרים מיני חמצן רבטיביים (ROS), לצורך בחינת הגברת הרגישות הסונית, ובכך לבסס גישות טיפוליות חדשניות שניתן לחקור את יעילותן הפרה-קלינית. בעת ביצוע הליך זה, חשוב לזכור לארגן כראוי את נתוני ה-SON שנרכשו ממנייני ה-TC וה-Z two, שכן הם מספקים מידע מפורט על יעילות פרוטוקול הטיפול שעלול ללכת לאיבוד.אם לא נעשה שימוש בתכנית לוגיסטית, לאחר צפייה בסרטון זה, תהיה לכם הבנה טובה לגבי האופן שבו ניתן להשתמש באולטרסאונד בתדר נמוך בשילוב עם מחדירי תרופות (sensitizers) פוטנציאליים במודלים פרה-קליניים in vitro, כדי להעריך את התועלת הטיפולית הפוטנציאלית שלהם.

generation-quantitative-analysis-pulsed-low-frequency-ultrasound-to

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

Insonation של microbubbles היא אסטרטגיה מבטיח אבלציה הגידול במועד, בממוצע סמכויות מופחת אקוסטי, כמו גם עבור משלוח ממוקד של הרפוי. מטרת המחקר הנוכחי היא לפתח נמוך מחזור אולטרסאונד אסטרטגיות פועם nanocarriers על מנת למקסם את אי - אבלציה תרמית כלי הדם ואספקת מטען אל תת עורית C6 gliomas.

אולטראסאונד ניגודיות ממוקד טיפול gliomas של עכברים באמצעות אספקת סמים נושאות Nanoparticle ו אבלציה כלי הדם

פרוטוקול זה מתאר את הגירוי של fibroblasts בתרבית עם אולטרה סאונד בעוצמה נמוכה פעמו, המניע ליצירת מוקדי הידבקות ו Rac1 ההפעלה על ידי חיקוי האירוסין של הקולטן הטרנסממברני מטריקס, syndecan-4. גישה זו מאפשרת חקירה של טכניקה קליני מוצלח ברמה התאית, ובכך לספק הזדמנויות עידון של טיפול.

אינדוקציה של אותות הדבקה תלויי שימוש בעוצמה נמוכה אולטראסאונד

סרטון זה מתאר את הנזק הסלקטיבי של תאי לוקמיה אנושיים באמצעות אולטרסאונד בתדר נמוך. יישום זה של אולטרסאונד בתדר נמוך במצב פרה-קליני במבחנה מדגים כי ניתן להשיג הרס תאים על מנת לבחון ולהשוות את ההשפעות של סוניקציה על לוקמיה ותאים נורמליים.

יישום אולטרסאונד בתדר נמוך: שיטה לקביעת השפעת הסוניקציה על תאי לוקמיה אנושיים

מאמר זה מתאר את הפרוטוקול עבור בדיקת XTT שהוא בדיקה קולורימטרית להערכת כדאיות התא ופעילות המיטוכונדריה.

בדיקת XTT: בדיקה קולורימטרית להערכת כדאיות התא ופעילות המיטוכונדריה

פרוטוקול זה מתאר את היישום של אולטרסאונד בתדר גבוה (HFUS) לבלוטות לימפה בצוואר הרחם עכבר הדמיה. טכניקה זו מייעלת הדמיה וכימות של מורפולוגיה בלוטה לימפה בצוואר הרחם, נפח וזרימת דם. ביופסיה מונחה הדמיה של בלוטות לימפה בצוואר הרחם ועיבוד של רקמה לימפה להערכה היסטולוגית הוא הוכיח גם.

בתדירות גבוהה אולטראסאונד הדמיה של בלוטות לימפה עכבר צוואר הרחם

גידול טיפול פילדס (TTFields) מתקיים וידוע טיפול יעיל נגד סרטן שיועבר דרך היישום הרציף, לא פולשנית של בעצימות נמוכות, בינוני-תדר, לסירוגין שדות חשמליים. יישום TTFields שורות תאים באמצעות מערכת יישום במבחנת TTFields ב מאפשר קביעת התדירות האופטימלית שמובילה לירידה הגבוהה ביותר ספירת תאי.

קביעת תדירות המעכבות האופטימלית עבור תאים סרטניים באמצעות גידול טיפול פילדס (TTFields)

כאן נתאר את הטכניקה של אולטראסאונד בתדירות גבוהה עבור ויוו ניתוח של העוברים בעכברים. שיטה זו מאפשרת את המעקב של עוברים הניתוח של היפרדות פרמטרים, כמו גם זרימת דם אימהי ו העובר במהלך ההריון.

אולטרסאונד בתדירות גבוהה לניתוח של התפתחות עוברית היפרדות In Vivo

בעוצמה נמוכה פעמו אולטרסאונד גירוי (LIPUS) הוא מודאליות עבור גירוי מכני לא פולשנית של תאים אנדוגני או מהונדסים עם רזולוציה גבוהה של יכולות. מאמר זה מתאר כיצד ליישם את LIPUS כדי במיקרוסקופ epi-זריחה וכיצד למזער את אי התאמה של עכבה אקוסטיים לאורך השביל אולטרסאונד כדי למנוע חפצי מכני לא רצויים.

ריבוב ממוקד אולטרסאונד גירוי עם מיקרוסקופ קרינה פלואורסצנטית

מחסום הדם - מוח (BBB) יכול להיות משובש באופן זמני עם אולטרסאונד ממוקד microbubble בתיווך (FUS). כאן, אנו מתארים פרוטוקול צעד אחר צעד לפתיחת BBB בתפוקה גבוהה ב vivo באמצעות מערכת FUS מודולרית נגישה למומחים שאינם אולטרסאונד.

נוירון סטראוטקטי מונחה תפוקה גבוהה ומערכת אולטרסאונד ממוקדת לפתיחת מחסום דם-מוח במכרסמים

ניתן להשתמש בפרוטוקול הניסיוני המוצג לביצוע מדידות בזמן אמת של פעילות cavitation במכשיר תרבות תאים במטרה לאפשר חקירה של התנאים הנדרשים לאספקת תרופות מוצלחת ו/או ביו-אפקטים אחרים.

לימוד טיפול משופר Cavitation

מלנומה היא מחלה אגרסיבית מאוד שמתפשטת במהירות לאיברים אחרים. פרוטוקול זה מתאר את היישום של הדמיית אולטרסאונד בתדר גבוה במיוחד, יחד עם עיבוד 3D, כדי לפקח על הנפח של בלוטות הלימפה מפשעתיות במודל העכבר Braf / Pten של מלנומה גרורתית.

ניתוח נפח בלוטות הלימפה על ידי הדמיית אולטרסאונד בתדר גבוה במיוחד במודל העכבר המהונדס גנטית Braf /Pten של מלנומה

למדו להעריך את יעילות האולטראסאונד בתדר נמוך בפגיעה בתאי לוקמיה אנושיים, עם או בלי סוכן מסיר כולסטרול. השיטה משלבת ספירת תאים אוטומטית ומבחן XTT להערכת פגיעה ופעילות מיטוכונדריאלית.

דור וניתוח כמותי של תדר נמוך פעמו אולטראסאונד כדי לקבוע את הרגישות של סוניק שלא טופלו ותאים שטופלו neoplastic

גלה סרטונים נוספים