Name: רקמות טחונות ב הדחוס קולגן: A Biotransplant המכיל נייד עבור תיקון Reconstructive המבוים יחיד (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-02-24T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 43 s
Description: חקור שיטה להרחבת רקמות אוטולוגיות בתוך הגוף לצורך ניתוחים שיקומיים באמצעות שתל PCL קולגן דחוס. גישה זו מצמצמת עיבוד מחוץ לגוף ומשפרת שילוב רקמות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מודים לאגודה השוודית למחקר רפואי, לקרן פרומוביליה, לקרן נסיכת הכתר לוביזה, לקרן הבונים החופשיים לרווחת הילד, לאגודה השוודית לרפואה, לקרן סולסטיקן, למכון קרולינסקה ולמועצת העיר שטוקהולם על התמיכה הכספית.

<ol><li>Rheinwald, J. G., Green, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serial+cultivation+of+strains+of+human+epidermal+keratinocytes%3A+the+formation+of+keratinizing+colonies+from+single+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Serial cultivation of strains of human epidermal keratinocytes: the formation of keratinizing colonies from single cells.</a> Cell. 6, 331-343 (1975).</li>
<li>Fossum, M., Nordenskjold, A., Kratz, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+of+multilayered+urinary+tissue+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering%22%5BJournal%5D)">Engineering of multilayered urinary tissue in vitro.</a> Tissue Engineering. 10, 175-180 (2004).</li>
<li>Salmikangas, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Manufacturing%2C+characterization+and+control+of+cell-based+medicinal+products%3A+challenging+paradigms+toward+commercial+use%5BTitle%5D)+AND+%22Regen+Med%22%5BJournal%5D)">Manufacturing, characterization and control of cell-based medicinal products: challenging paradigms toward commercial use.</a> Regen Med. 10, 65-78 (2015).</li>
<li>Guidelines of 7 March 2013 on Good Distribution Practice of medicinal products for human use (OJ C 343/1, 23.11.2013). 7, Retrieved from:
 <a target="_blank" href="http://ec.europa.eu/health/human-use/good_distribution_practice/index_en.htm">http://ec.europa.eu/health/human-use/good_distribution_practice/index_en.htm</a> (2013).</li>
<li>Fossum, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minced+skin+for+tissue+engineering+of+epithelialized+subcutaneous+tunnels%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering.+Part+A%22%5BJournal%5D)">Minced skin for tissue engineering of epithelialized subcutaneous tunnels.</a> Tissue Engineering. Part A. 15, 2085-2092 (2009).</li>
<li>Fossum, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minced+urothelium+to+create+epithelialized+subcutaneous+conduits%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Urology%22%5BJournal%5D)">Minced urothelium to create epithelialized subcutaneous conduits.</a> The Journal of Urology. 184, 757-761 (2010).</li>
<li>Reinfeldt Engberg, G., Lundberg, J., Chamorro, C. L., Nordenskjold, A., Fossum, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+autologous+minced+bladder+mucosa+for+a+one-step+reconstruction+of+a+tissue+engineered+bladder+conduit%5BTitle%5D)+AND+%22BioMed+Research+International%22%5BJournal%5D)">Transplantation of autologous minced bladder mucosa for a one-step reconstruction of a tissue engineered bladder conduit.</a> BioMed Research International. 2013, 212734(2013).</li>
<li>Meek, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Successful+microdermagrafting+using+the+Meek-Wall+microdermatome%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Surg%22%5BJournal%5D)">Successful microdermagrafting using the Meek-Wall microdermatome.</a> Am J Surg. 96, 557-558 (1958).</li>
<li>Tanner, J. C., Vandeput, J., Olley, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Mesh+skin+graft%5BTitle%5D)+AND+%22Plastic+and+Reconstructive+Surgery%22%5BJournal%5D)">The Mesh skin graft.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 34, 287-292 (1964).</li>
<li>Svensjo, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autologous+skin+transplantation%3A+comparison+of+minced+skin+to+other+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Surgical+Research%22%5BJournal%5D)">Autologous skin transplantation: comparison of minced skin to other techniques.</a> The Journal of Surgical Research. 103, 19-29 (2002).</li>
<li>Ajalloueian, F., Zeiai, S., Rojas, R., Fossum, M., Hilborn, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((One-stage+tissue+engineering+of+bladder+wall+patches+for+an+easy-to-use+approach+at+the+surgical+table%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering.+Part+C%2C+Methods%22%5BJournal%5D)">One-stage tissue engineering of bladder wall patches for an easy-to-use approach at the surgical table.</a> Tissue Engineering. Part C, Methods. 19, 688-696 (2013).</li>
<li>Engelhardt, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+collagen-poly%28lactic+acid-co-varepsilon-caprolactone%29+hybrid+scaffold+for+bladder+tissue+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">A collagen-poly(lactic acid-co-varepsilon-caprolactone) hybrid scaffold for bladder tissue regeneration.</a> Biomaterials. 32, 3969-3976 (2011).</li>
<li>Brown, R. A., Wiseman, M., Chuo, C. B., Cheema, U., Nazhat, S. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrarapid+engineering+of+biomimetic+materials+and+tissues%3A+fabrication+of+nano-+and+microstructures+by+plastic+compression%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Funct+Mater%22%5BJournal%5D)">Ultrarapid engineering of biomimetic materials and tissues: fabrication of nano- and microstructures by plastic compression.</a> Adv Funct Mater. 15, 1762-1770 (2005).</li>
<li>Fumagalli Romario, U., Puccetti, F., Elmore, U., Massaron, S., Rosati, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-gripping+mesh+versus+staple+fixation+in+laparoscopic+inguinal+hernia+repair%3A+a+prospective+comparison%5BTitle%5D)+AND+%22Surg+Endosc%22%5BJournal%5D)">Self-gripping mesh versus staple fixation in laparoscopic inguinal hernia repair: a prospective comparison.</a> Surg Endosc. 27, 1798-1802 (2013).</li>
<li>Muangman, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complex+Wound+Management+Utilizing+an+Artificial+Dermal+Matrix%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Plastic+Surgery%22%5BJournal%5D)">Complex Wound Management Utilizing an Artificial Dermal Matrix.</a> Annals of Plastic Surgery. 57, 199-202 (2006).</li>
<li>Ajalloueian, F., Zeiai, S., Fossum, M., Hilborn, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Constructs+of+electrospun+PLGA%2C+compressed+collagen+and+minced+urothelium+for+minimally+manipulated+autologous+bladder+tissue+expansion%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Constructs of electrospun PLGA, compressed collagen and minced urothelium for minimally manipulated autologous bladder tissue expansion.</a> Biomaterials. 35, 5741-5748 (2014).</li>
<li>Orabi, H., AbouShwareb, T., Zhang, Y., Yoo, J. J., Atala, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-seeded+tubularized+scaffolds+for+reconstruction+of+long+urethral+defects%3A+a+preclinical+study%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Urol%22%5BJournal%5D)">Cell-seeded tubularized scaffolds for reconstruction of long urethral defects: a preclinical study.</a> Eur Urol. 63, 531-538 (2013).</li>
<li>Blais, M., Parenteau-Bareil, R., Cadau, S., Berthod, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Concise+review%3A+tissue-engineered+skin+and+nerve+regeneration+in+burn+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Concise review: tissue-engineered skin and nerve regeneration in burn treatment.</a> Stem Cells Transl Med. 2, 545-551 (2013).</li>
<li>Serpooshan, V., Muja, N., Marelli, B., Nazhat, S. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibroblast+contractility+and+growth+in+plastic+compressed+collagen+gel+scaffolds+with+microstructures+correlated+with+hydraulic+permeability%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Mater+Res+A%22%5BJournal%5D)">Fibroblast contractility and growth in plastic compressed collagen gel scaffolds with microstructures correlated with hydraulic permeability.</a> J Biomed Mater Res A. 96, 609-620 (2011).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

המחקר זה מציג גישה קלה לשימוש לייצר תיקונים לדופן שלפוחית ​​עם רקמה עצמית להשתלה ליד השולחן כירורגית. המדבקות נוצרות על ידי השילוב של סריגת פולימר מתכלה באמצע וקולגן עם ובלי רקמות טחונות ב המשטחים החיצוניים בשילוב עם דחיסת פלסטיק. דחיסת פלסטיק היא שיטה שתוארה לעיל על ידי מחברים אחרים יכולה להיות מוגדר כ גירוש מהיר של נוזל ג&#39;ל קולגן 12,13. טחון הרקמה של רירית שלפוחית ​​שתן או עור זורעת לתוך הפיגום הזה לבין ההיווצרות של האפיתל שלפוחית ​​שתן או עור יכול להיות מלווה במה...

רוב המחקרים בהנדסת רקמות על השתלה לעור בדרכי השתן ואברי המין כוללים יבולי תא אוטולוגי מרקמות בריאות הרחבת תא במתקנים-culturing תא מאובזר במיוחד 1,2. לאחר הרחבת התא, התאים בדרך כלל מאוחסנים לשימוש מאוחר יותר כאשר החולה הוא מוכן לקבל את autograft. מקפיאי חנקן לאפשר אחסון לטווח ארוך בטמפרטורות נמוכות של -150 מעלות צלזיוס ומטה. תהליך ההקפאה חייב להיזהר ומבוקר על מנת לא לאבד את התאים. אחת הסכנות של מוות של תאים הוא התגבשות של מים תאיים במהלך תהליך ההפשרה, מה שעלול להוביל לקרע של קרום התא. תא הקפאה מתבצעת לרוב על ידי קירור איטי ומבוקר (-1 ° C לדקה), באמצעות ריכוז גבוה של תאים, בסרום שור העובר, וכן sulfoxide דימתיל. לאחר הפשרה, תאים צריכים להיות מעובד שוב על ידי הסרה בינוני מקפיא culturing על פלסטיק תרבית תאים אוביולוגי לפני ההשתלה בחזרה לחולה. כל השלבים הנ&quot;ל הן זמן רב, מייגע, ויקר 3. בנוסף, כל במבחנת העיבוד של תאים המיועדים להשתלה לחולה נמצא תחת הרגולציה מאוד ודורש ומוכרים מאומנים היטב אנשים ומעבדות 4. בסיכומו של דבר, כדי להשיג תהליך הייצור בטוח ואמין, הטכניקה יכול יוקם רק במספר קטן מאוד של מרכזי מתקדם מבחינה טכנית לשימוש רחב יותר בהפרעות כירורגית משותפות מוטל בספק. על מנת להתגבר על המגבלות של culturing תא בסביבת מעבדה, הרעיון של השתלת רקמות טחון עבור הרחבת התא in vivo הוא הציג באמצעות הגוף עצמו בתור bioreactor. למטרות אלה, autografts יהיה להשתיל מועדף על תבנית 3D על פי הצורה מה שצריך לשיקום הסופי של האיבר של interest 5-7. במקור, הרעיון של השתלת אפיתל טחון הוצגה על ידי מיק בשנת 1958 כשתיאר כיצד האפיתל צומחת מן הקצוות של פצע. הוא הוכיח כי חתיכה קטנה של עור תגדיל את שולי רווח שלה ובכך פוטנציאל שלה הרחבת התא ב -100% על ידי חיתוך הפיסה פעמים בכיוונים ניצב (איור 1) 8. התאוריה כבר נתמכה על ידי שימוש בשתלי עור בעובי חלקי מרושתים להשתלת עור 9 וב עור ריפוי פצעי מודלים 10. <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/53061/53061fig1.jpg" width="600" /> איור 1:. התיאוריה מיק על פי התיאוריה של מיק, האפיתל צומחת מן הקצוות של פצע. על ידי הגדלת שטח החשופה על ידי הטכנולוגיה מתייפייף, רקמות טחונות epithelializes פצעי כתמים רבים. המחקר הנוכחי מבוסס על היפוהתזה כי אותו עיקרון יכול להיות מיושם על הרקמה התת עורית על ידי הצבת האפיתל טחון סביב עובש. לתאי האפיתל יגייסו מ השתלות טחונות (מחדש), לכסות את אזורי הפצע (להעביר) ומתחלקים (להרחיב) על מנת לגבש neoepithelium רציפה המכסה את אזור הפצע ומפריד הגוף הזר (העובש) מהגוף הפנימי ( איור 2). <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/53061/53061fig2.jpg" /> איור 2:. קריקטורה של עובש 3D עם אפיתל טחון עבור in vivo להרחבת רקמות intracorporal פי התיאוריה של מיק באמצעות רקמות טחון דגש על תבנית ולאחר מכן להשתיל את הרקמה התת עורית, ההשערה היא כי תאי אפיתל להגר מן שולי הרקמה טחון, להתארגן מחדש ולהרחיב כדי לגבש neoepithelium רציפה המכסה את אזור הפצע ומפריד הגוף הזר (עובש) מהגוף הפנימי. למרות שמחקרי in vivo קודמים הראו תוצאות מבטיחות, שיפורים נוספים ניתן להשיג על ידי חיזוק autografts כך האפיתל מחדש יכול לעמוד טראומה מכאנית 7 טוב יותר. לעניין זה, תנאים מוקדמים חשובים עבור ביולוגי מוצלח זוהו, כגון: דיפוזיה קל של חומרים מזינים ופסולת, אפשרות לעצב באופן 3D ונינוחות של טיפול כירורגים. מסקנות נעשו כי הצרכים הללו יכול להיות נפגשו על ידי הוספת ביולוגי מרוכבים אל הרקמה טחון. המחקר הנוכחי במטרה לפתח פיגום מורכב רקמות טחונות בפלסטיק-דחוס המכיל קולגן גרעין חיזוק של בד מתכלה. תודות לאמצעים אלה תאי קיימא עשויים להגר מ- חלקיקי הרקמות הטחונים מתרבים עם מאפיין תכונות מורפולוגיות של האפיתל המקורי (עור או urothelium). באמצעות דחיסת פלסטיק, הפיגום היה להפחיתד בגודל 1 ס&quot;מ לכ 420 מיקרומטר כמו חלקיקים טחון היו נתונות קולגן השכבה העליונה. בד הליבה יכול להיות כל פולימר אבל צריך להיות שונים עם משטח הידרופילי כדי interlink עם שכבות קולגן הכוללים 11. השיטה סיפק שלמות פיגום משופרת על ידי שילוב של רשת סרוגים המורכב פולי (ε-caprolactone) (PCL) בתוך שני ג&#39;ל קולגן דחוס פלסטיק להשתמש בה כמו פיגום עבור culturing רירית שלפוחית ​​השתן טחון או העור טחון חזירים. הבונה נשמרה בתנאי תרבית תאים עד 6 שבועות במבחנה, הוכחת היווצרות מוצלחת של urothelium מרובדת, רב שכבתי או אפיתל עור קשקש על חלק עליון של מבנה היברידי אוחד גם. הבונה הייתה קלה לטפל ניתן לצורך איחוי במקום למטרות הגדלת שלפוחית ​​או כיסוי של פגמים בעור. כל החלקים של הפיגום רקמות ה- FDA ואת הטכניקהיוכל לשמש עבור הליכים חד-שלבי על ידי קצירת רקמות, מגונדרת, דחיסה פלסטיק, השתלה בחזרה לחולה כמו התערבות חד מבוים. ההליך יכול להתבצע להרחבת רקמות ושיקום בתנאים סטריליים בכל יחידת כירורגיה כללית.

<table><tbody><tr><td>קטטר סיליקון 10-צרפתית</td><td></td><td></td><td>הכנת החיה לניתוח, סעיף 1</td></tr><tr><td>DMEM 10x</td><td>Gibco</td><td>31885-023</td><td>דחיסה פלסטית סעיף 4</td></tr><tr><td>24 צלחות באר</td><td>Falcon</td><td>08-772-1</td><td>דחיסה פלסטית קטע 4</td></tr><tr><td>3',3',5-Triiodothyronine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>IRMM469</td><td>in vitro תרבית; סעיף 5</td></tr><tr><td>4% PFA</td><td>Labmed Solutions</td><td>200-001-8</td><td>אימונוציטוכימיה; סעיף 6</td></tr><tr><td>70% אתנול</td><td>היסטולאב</td><td></td><td>אימונוציטוכימיה; סעיף 6</td></tr><tr><td>ערכת ABC Elite: ערכת זיהוי ביוטין-סטרפטווידין</td><td>וקטור</td><td>PK6102</td><td>אימונוציטוכימיה; סעיף 6</td></tr><tr><td>אתנול מוחלט</td><td>היסטולאב</td><td>1399.01</td><td>אימונוציטוכימיה; סעיף 6</td></tr><tr><td>אדנין</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>A8626</td><td>תרבות במבחנה; סעיף 5</td></tr><tr><td>אטרופין 25 &mu; גרם/ק"ג</td><td>Temgesic, RB Pharmaceuticals, בריטניה</td><td></td><td>הכנת החיה לניתוח, סעיף 1</td></tr><tr><td>Azaperone 2&thinsp; מ"ג/ק"ג&nbsp;</td><td>Stresnil, Janssen-Cilag, פארמה, אוסטריה</td><td></td><td>הכנת בעל החיים לניתוח, סעיף 1</td></tr><tr><td>בטיחות ביולוגית רמה 2 ברדס&nbsp;</td><td></td><td></td><td>דחיסת פלסטיק; סעיף 4</td></tr><tr><td>פתרון חסימה:&nbsp; נוצר סרום רגיל מאותו מין כמו הנוגדן המשני המשני.</td><td>וקטור</td><td>תמיסת החסימה תלויה במקור&nbsp; הנוגדן הראשון</td><td>אימונוציטוכימיה; סעיף 6</td></tr><tr><td>בופרנורפין 45 &mu; גרם/ק"ג</td><td>אטרופין, מיילן בע"מ, קנונסבורג, פנסילבניה</td><td></td><td>הכנת החיה לניתוח, סעיף 1</td></tr><tr><td>קרפרופן 3&thinsp; מ"ג/ק"ג&nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>רימדיל, אוריון פארמה, שוודיה</td><td></td><td>הכנת בעל החיים לניתוח, סעיף 1</td></tr><tr><td>כלורהקסידין גלוקונאט&nbsp;</td><td>היבישסקראב 40&thinsp; mg/mL, Regent Medical, אנגליה</td><td></td><td>הכנת בעל החיים לניתוח, סעיף 1</td></tr><tr><td>תרבית רעלן כולרה</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C8052</td><td>in vitro; סעיף 5</td></tr><tr><td>צנצנת קופלין: צנצנת צביעה להרתחה</td><td>Histolab</td><td>6150</td><td>אימונוציטוכימיה; סעיף 6</td></tr>: <tr><td>תבנית אל חלד (33 מ"מ x 22 מ"מ x 10 מ"מ)</td> דחיסת פלסטיק בהתאמה <td></td><td></td> אישית<td>; סעיף 4</td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Gibco</td><td>3188-5023</td><td>דחיסת פלסטיק סעיף 4. המשיכו על הקרח&nbsp; כאשר משתמשים בו בדחיסה פלסטית</td></tr><tr><td>גורם גדילה אפידרמלי</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E9644</td><td>in vitro תרבית; סעיף 5</td></tr><tr><td>אתילון (מונופילמנט שאינו נספג לתפרי עור)</td>ניתוח <td>אתיקון</td><td></td><td>, סעיף 1</td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי (FBS)</td><td>Gibco</td><td>10437-036</td><td>דחיסה פלסטית סעיף 4</td></tr><tr><td>מלקחיים (אדיסון עם שן)</td><td></td><td></td><td>הכנת החיה לניתוח, סעיף 1</td></tr><tr><td>גזה (Gazin Mullkompresse)&nbsp;</td><td></td><td></td><td>הכנת החיה לניתוח, סעיף 1</td></tr><tr><td>F12</td><td>Gibco</td><td>31765-027</td><td>דחיסה פלסטית סעיף 4</td></tr><tr><td>המטוקסילין</td><td>היסטולאב</td><td>1820</td><td>אימונוציטוכימיה; סעיף 6</td></tr><tr><td>תא לחות</td><td>DALAB</td><td></td><td>אימונוציטוכימיה; סעיף 6</td></tr><tr><td>הידרוקורטיזון</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>H0888</td><td>תרבית במבחנה; סעיף 5</td></tr><tr><td>תמיסת מי חמצן 30%</td> <td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>H1009</td><td>אימונוציטוכימיה; סעיף 6</td></tr><tr><td>Insulin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I3536</td><td>In vitro culture; סעיף 5</td></tr><tr><td>איזופלורן</td><td>איזופלורן, בקסטר, דירפילד, אילינוי</td><td></td><td>הכנת החיה לניתוח, סעיף 1</td></tr><tr><td>לידוקאין 5 מ"ג/מ"ל</td><td>קסילוקאין, אסטרהזניקה, שוודיה</td><td></td><td>הכנת החיה לניתוח, סעיף 1</td></tr><tr><td>לוקוז 25&thinsp; מ"ג/מ"ל</td><td>בקסטר, דירפילד, אילינוי</td><td></td><td>הכנת החיה לניתוח, סעיף 1</td></tr><tr><td>עט פאפ סמן</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>Z377821-1EA</td><td>אימונוציטוכימיה; סעיף 6</td></tr><tr><td>Medetomidine 25 &mu; גרם/ק"ג&nbsp;</td><td>דומיטור, אוריון פארמה, שוודיה</td><td></td><td>הכנת החיה לניתוח, סעיף 1</td></tr><tr><td>מכשיר טחינה</td><td>Applied Tissue Technologies LLC</td><td></td><td>הכנת רקמות טחונות, סעיף 2</td></tr><tr><td>מונוקריל (מונופילמנט נספג)</td><td>ניתוח אתיקון</td><td></td><td>, סעיף 1</td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S7653</td><td>אימונוציטוכימיה; סעיף 6</td></tr><tr><td>NaOH 1&nbsp; N</td><td>Merck Millipore</td><td>106462</td><td>סעיף דחיסה מפלסטיק 4 ותרבית תאים</td></tr><tr><td>רשת ניילון, 110 &mu; גודל נקבוביות עבה M 0.04&nbsp; מ"ר</td><td></td><td></td><td>דחיסת פלסטיק; סעיף 4</td></tr><tr><td>Oculentum simplex APL: משחה להגנה על העיניים</td><td>APL</td><td>Vnr</td><td>ניתוח 336164, סעיף 1</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Gibco</td><td>14190-094</td><td>סעיף דחיסה פלסטית 4</td></tr><tr><td>פניצילין-סטרפטומיצין</td><td>Gibco</td><td>15140-122</td><td>דחיסה פלסטית סעיף 4</td></tr><tr><td>Phenobarbiturate 15&nbsp; מ"ג/ק"ג</td><td>פנטוברביטל, APL, שוודיה</td><td></td><td>הכנת החיה לניתוח, סעיף 1</td></tr><tr>בד <td></td><td></td><td>סרוג PCL</td><td>דחיסה פלסטית; סעיף 4</td></tr><tr><td>קולגן זנב עכברוש</td><td>First LINK, Ltd, בריטניה</td><td>60-30-810</td><td>דחיסה פלסטית סעיף 4, שמור על קרח</td></tr><tr><td>להב אזמל - 15</td><td></td><td></td><td>הכנת החיה לניתוח, סעיף 1</td></tr><tr><td>מזמרה</td><td></td><td></td> לגילוח <td>הכנת החיה לניתוח, סעיף 1</td></tr><tr><td>רשת אל חלד, 400&nbsp; &mu; גודל</td><td></td><td></td> נקבוביות עבה M <td>דחיסת פלסטיק; סעיף 4</td></tr><tr><td>כפפות</td><td></td><td></td> סטריליות <td>הכנת בעל החיים לניתוח, סעיף 1</td></tr><tr><td>חלוקים</td><td></td><td></td> סטריליים <td>הכנת החיה לניתוח, סעיף 1</td></tr><tr><td>וילונות</td><td></td><td></td><td></td>סטריליים</tr><tr><td>Sterilium</td><td>Bode Chemie HAMBURG</td><td></td><td>הכנת החיה לניתוח, סעיף 1</td></tr><tr><td>חוט תפר אתילון</td><td></td><td></td><td>הכנת החיה ל ניתוח, סעיף 1</td></tr><tr><td>תמיסת TE (תמיסת חשיפת אנטיגן) מורכב מ-10 מ"מ טריס ו-1 מ"מ EDTA, pH 9.0</td><td></td><td></td><td>10 מ"מ Tris/1 מ"מ EDTA, &nbsp; התאם את ה-pH ל-&nbsp; 9.0</td></tr><tr><td>טילטמין היפוכלוריד 2.5&nbsp; מ"ג/ק"ג</td><td></td><td></td><td>הכנת החיה לניתוח, סעיף 1</td></tr><tr><td>טרנספרין</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>T8158</td><td>תרבית במבחנה; סעיף 5</td></tr><tr><td>בסיס טריזמה, H2NC&nbsp;</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>T6066</td><td>אימונוציטוכימיה; סעיף 6</td></tr><tr><td>ערכת וקטור VIP: אנזים&nbsp; ערכת סובסטרט פרוקסידאז</td><td>וקטור</td><td>SK4600</td><td>אימונוציטוכימיה; סעיף 6</td></tr><tr><td>ויקריל (ספיגה)</td> ניתוח <td>אתיקון</td><td></td><td>, סעיף 1</td></tr><tr><td>Tris buffer pH 7.6 (מאגר כביסה)</td><td></td><td></td><td>תמיסת TE: הכינו 10x (0.5 M Tris, 1.5 M NaCl) על ידי ערבוב: 60.6 גרם Tris (Trizma Base, H2NC(CH2OH)3, M=121.14 גרם/מול), מוסיפים 800 מ"ל מים מזוקקים, מכוונים את ה-pH עד 7.6, מוסיפים 87.7 גרם NaCl וממלאים ל-1,000 מ"ל במים מזוקקים. יש לדלל ל-1x במים מזוקקים.</td></tr><tr><td>X-tra solv (ממס)</td><td>DALAB</td><td>41-5213-810</td><td>אימונוציטוכימיה; סעיף 6. שימוש מתחת למכסה אדים</td></tr><tr><td>Zolazepam hypochloride</td><td>Zoletil, Virbac, צרפת</td><td></td><td>הכנת החיה לניתוח, סעיף 1</td></tr><tr><td>רצועות שעווה להסרת</td> שיער <td>Veet</td><td></td><td>הכנת החיה לניתוח, סעיף 1</td></tr><tr><td>סיום נתרן פנטוברביטל</td><td>לונדבק</td><td></td><td>, סעיף 3</td></tr></tbody></table>

רקמות טחונות ב הדחוס קולגן: a biotransplant המכיל נייד עבור תיקון reconstructive המבוים יחיד

Minced Tissue in Compressed Collagen: A Cell-containing Biotransplant for Single-staged Reconstructive Repair

טכניקות קונבנציונליות להרחבת תאים והשתלת תאים אוטולוגיים למטרות הנדסת רקמות יכולות להתרחש במתקני תרבית תאים אנושיים מאובזרים במיוחד. שיטות אלו כוללות בידוד תאים בתרחיף תא בודד ומספר אירועים מייגעים וגוזלי זמן לפני ההשתלה בחזרה למטופל. מחקרים קודמים מצביעים על כך שהגוף עצמו יכול לשמש כביו-ריאקטור להרחבת תאים והתחדשות רקמות על מנת למזער מניפולציות ex vivo של רקמות ותאים לפני ההשתלה לחולה. מטרת מחקר זה הייתה להדגים שיטה לקצירת רקמות, בידוד אפיתל רציף, טחינת האפיתל לחתיכות קטנות ושילובם בחומר ביולוגי תלת שכבתי. החומר הביולוגי התלת-שכבתי שימש אז ככלי מסירה, כדי לאפשר טיפול כירורגי, חילופי תזונה לאורך ההשתלה ופירוק מבוקר. החומר הביולוגי היה מורכב משתי שכבות חיצוניות של קולגן וליבה של פולימר יציב מכנית ומתכלה לאט. האפיתל הטחון שולב באחת משכבות הקולגן לפני ההשתלה. על ידי טחינת רקמת האפיתל לחתיכות קטנות, ניתן היה לפזר את החלקים ובכך לעורר את התפשטות התאים. לאחר הנטילה הראשונית של ההשתלות, התרחבות וארגון מחדש של התאים יתרחשו והמטריצה החוץ-תאית תתבגר כדי לאפשר צמיחה של נימים ועצבים והבשלה נוספת של המטריצה החוץ-תאית. הטכניקה ממזערת מניפולציות ex vivo ומאפשרת קצירת תאים, הכנת השתלה אוטומטית והשתלה למטופל כהתערבות פשוטה בשלב אחד. בעתיד, ניתן יהיה להתחיל הרחבת רקמות סביב תבנית תלת מימדית בתוך הגוף עצמו, בהתאם לצרכים הספציפיים של המטופל. בנוסף, ניתן לבצע את הטכניקה במסגרת כירורגית רגילה ללא צורך במתקני תרבית תאים מתוחכמים.

מחקר זה מציג שיטה שמראה איך לייצר ביולוגי להשתלה באמצעות דחיסת פלסטיק של הקולגן ולבניית רקמות טחון. רירית שלפוחית ​​שתן ועור ניתן לקצור ואז טחון מכאני לחלקיקים קטנים (איור 3). על ידי דחיסת פלסטיק, חלקיקים הטחונים משולבים בתוך פיגום מרוכבים מורכבים פולימר מתכלה להציב מאתר מרכזי, חזק מכאני בתוך שכבות חיצוניות של ג&#39;ל קולגן (איור 4). חלקיקי רקמת טחון ניתן להפריד לאפשר 1: קצב התפש...

הנדסת רקמות קרובות כולל בהרחבת חוץ גופית על מנת ליצור autografts לשחזור רקמות. במחקר זה שיטה להרחבת רקמות, התחדשות, ושחזור in vivo פותחה על מנת למזער את העיבוד של תאים וחומרים ביולוגיים מחוץ לגוף.

רקמות טחונות ב הדחוס קולגן: A Biotransplant המכיל נייד עבור תיקון Reconstructive המבוים יחיד

Conventional techniques for cell expansion and transplantation of autologous cells for tissue engineering purposes can take place in specially equipped ...

המטרה הכללית של הפרוצדורה הבאה היא להשפיע על רקמה אוטולוגית לצורך הרחבתה במהלך ניתוח שחזור. הדבר מושג תחילה על ידי נטילת ביופסיה מהרקמה הרלוונטית. לאחר מכן, הביופסיה נקטעת ומבנים הש Transplant של קולגן ופוליקפרולקטון (PCL) דחוס מפלסטיק.לאחר מכן, משלבים את ה-PCL ואת הרקמות האוטולוגיות הקצוצות כדי ליצור את הפיגום התלת-ממדי (3D scaffold). השתמשנו ביחס הרחבה של אחת לשש. לאחר מכן, משתילים את הפיגום בחזרה אל תוך הנבדק.בסופו של דבר, ניתן להעריך את התחדשות הרקמה המושתלת באופן אוטוגרפי באמצעות ניתוח אימונוהיסטוכימי של השכפול והארגון מחדש של התאים בתוך הפיגומים וחלקי הרקמה הקצוצות. שיטה זו תוצג במודל חיות, על עור ועל אורותליום (urothelium). המשמעות של טכניקה זוי חלה על טיפול ברקמות עם מומים חמורים או לאחר טראומה במקרים שבהם קיים מחסור חמור ברקמה לצורך תיקון כירורגי.היתרון המרכזי של טכניקה זו על פני שיטות קיימות, כגון תרבית in vitro, הוא שניתן לבצע שיטה זו כהליך כירורגי בשלב אחד. הדגמה חזותית של שיטה זו היא קריטית, שכן את השלבים מקצירת הרקמה ועד להשתּלה יש לבצע בתנאים סטריליים. כדי להשיג דגימה ביופסית משלפוחית חזיר, ראשית, אחזו בשלפוחית בעזרת פינצטה, והשתמשו בסרט מדידה סטרילי כדי לקבוע את ממדי הרקמה.בשלב הבא, השתמשו בעט סטרילי כדי לסמן ביופסיה בצורת אליפסה בגודל שני על שני סנטימטרים, במטרה להשיג קצב התרחבות של אחת עד שש. לאחר מכן, הסִירו את הרקמה המסומנת באמצעות סכין מנתחים, והניחו את דגימת הביופסיה מהשלפוחית ב-DMEM בתנאים סטריליים. כדי לקבל דגימה של ביופסיית עור, השתמשו בדרמטום כדי להוציא דגימה בעובי חלקי של 0.3 מילימטרים.לאחר מכן, מקמו את הרקמה ב-DMEM וכסו את אזור הפצע בתחבושת. בשלב הבא, שטפו את הביופסיה מהשלפוחית פעמיים ב-DMEM והעבירו את הרקמה לצלחת ניתוח סטרילית, כאשר הרירית פונה כלפי מעלה. בעזרת סיכות ניתוח, קבעו צד אחד של הדגימה לצלחת והשתמשו במספריים עדינים ופינצטה כדי להפריד את רקמת הרירית משריר הדטרוסור.לאחר מכן, הנחו מכשיר קיצוץ על גבי הרירית והעבירו אותו באופן אנכי ואופקי מקצה אחד של הרקמה לשנייה כדי לקבל חלקי רקמה קצוצים בגודל 0.8 על ידי 0.8 מילימטר. שימו לב כי יש להפעיל לחץ עם מכשיר הקיצוץ על הרקמה בזמן התנועה עליה. להכנת אוטוגרפט קולגן דחוס מפלסטיק, הוסיפו תחילה טיפה אחר טיפה של נתרן הידרוקסיד רגיל לתוך 10X DMEM המועשר בקולגן מסוג I עד שהתווך משנה את צבעו מצהוב עז לוורוד.לאחר אישור pH של 7.4 עד 8, ערבבו בזהירות שני מיליליטר של DMEM לתוך התמיסה. לאחר מכן, צקו כמעט שני מיליליטר של קולגן לתוך באר של תבנית פלדה מלבנית בגודל 20x30x10 מילימטר והדגירו את הקולגן למשך עשר דקות. כאשר הקולגן התקשח, צקו את הנפח המתאים של ביו-חומר PCL מעל הקולגן הג'לטיני ושפכו את ששת המיליליטרים הנותרים של הקולגן מעל ה-PCL.החזיר את התבנית למדגרה למשך 20 דקות נוספות. לאחר מכן, ערם שכבה עבה של רפידות גזה על משטח סטרילי. לאחר מכן, הנח רשת פלדת אל-חלד בעובי 400 micron מעל הגזה, ולאחריה יריעת רשת ניילון בעובי 110 micron.העבירו בעדינות את ג'ל הקולגן אל רשת הניילון והסירו בזהירות את תבנית הפלדה המלבנית. העבירו את הרקמה הקצוצה על גבי הקולגן. בשלב זה, אנו שואפים למקדם התרחבות של אחת לשש.לאחר מכן, הניחו שכבה חדשה של רשת ניילון מעל ג'ל הקולגן והרקמה, ולאחר מכן הניחו רשת פלדה שנייה מעל רשת הניילון, ואחריה פלטת העמסה השוקלת לפחות 120 גרם. לאחר חמש דקות, הסירו את המשקולת, רשתות הפלדה והניילון מהשתל העצמי. לצורך תרבית in vitro של השתל העצמי, חתכו תחילה את המבנה שנדלל לחתיכות קטנות מספיק כדי שייכנסו לפלטות של 12 בארות.לאחר מכן, הוסיפו מיליליטר אחד של מצע גידול לקראטינוציטים לכל באר והדגירו את הרקמות למשך שלושה עד שישה שבועות. כדי להשתיל השתלה עצמית של רירית שלפוחית השתן קצוצה לשלפוחית של חזיר, הרטיבו את הש Transplant באמצעות DMEM. לאחר מכן, השתילו את המבנה לרקמה הבריאה בעזרת תפרי מונופילמנטים דקים.אששו שהשתל אטום למים על ידי מילוי השלפוחית בתמיסת סליין דרך הקטטר השפופרתי השוהה. להשתלת אוטוגרפט עם אפידרמיס של עור קצוץ לפצע בעובי מלא, הרטיבו את השתל ב-DMEM. לאחר מכן, באמצעות תפרים נפרדים בפינות ובמרכז האוטוגרפט, הצמידו את המבנה לתחתית הפצע בעובי מלא בעור.לבסוף, כסו את הפצע עם תחבשה פלסטית כדי לשמור על לחות. כפי שניתן לראות בתמונה זו של השתקה עצמית של עור קצוץ, הביוגרפט המורכב יכול לעמוד בתפיסה, בתפירה ובטיפול כירורגי. אימונוהיסטוכימיה בנקודות זמן שונות במהלך התרבית in vitro מגלה כי התאים שוכפלים, נודדים ומתארגנים מחדש לאפיתל רציף עם מיקרוארכיטקטורה האופיינית לפנוטיפ של התאים.לדוגמה, לאחר שבועיים, שכבת התאים על פני השטח של השתל העור האוטולוגית היא בעובי של כשתי שכבות. מימין, אפיתליית השלפוחית היא בעובי של כשמונה שכבות לאחר אותה תקופת תרבית. לאחר חמישה עד שישה שבועות, האפיתליום הרציף הוא בעובי של כשמונה עד עשר שכבות תאים הן בהשתלי אפיתליום עור קצוץ והן בהשתלי רירית שלפוחית קצוצה.בהשוואה להרחבת רקמות in vitro, שיטה זו היא מהירה, פחות עתירת עבודה ואינה דורשת משאבי מעבדה מורכבים. בנוסף, כל החלקים מאושרים על ידי ה-FDA, מה שמאפשר את השימוש בהם במסגרת ניתוחית סטנדרטית. בעת ביצוע הליך זה, חשוב לזכור להכין את הג'ל, השתלים הביולוגיים והרקמות האוטולוגיות תחת תנאים סטריליים.ניתן לבצע הליך זה ושיטות אחרות, כגון תרבית in vitro של התאים, כדי לענות על שאלות נוספות בנוגע להתרבות ודיפרנציאציה של תאים. לאחר פיתוחה, טכניקה זו עשויה לסלול את הדרך עבור חוקרים בתחום הרפואה הרגנרטיבית. באמצעות אמצעים אלה, נוכל לטפל במומים חמורים בעור או במערכת השתן באמצעות השתלות של רקמות אוטולוגיות מהונדסות.

minced-tissue-compressed-collagen-cell-containing-biotransplant-for

Research

JoVE Journal

Bioengineering

הנדסה ביולוגית

יצירה של מיקרו רקמות באמצעות ג'ל קולגן גלילי, המכונה מודולים, המכילות תאים אשר מוטבעים משטח מצופה בתאי האנדותל.

ייצור של מיקרו-רקמות באמצעות מודולים של קולגן ג&#39;ל התאים המכילים

בדו"ח זה, אנחנו מדגימים מערכת לבודד התורם התרבות תאים מבלוטת החלב העכבר, ו orthotopically השתלת תאים אלה בעכברים הנמען לנתח סטרומה: אינטראקציות אפיתל במהלך התפתחות הגידול החלב.

השתלה של תאים סטרומה החלב ותאי קרצינומה של עכברים C57BL/6J

אדם בתאי גזע perivascular (PSCs) הם גזע הרומן הסלולרי בכיתה לשחזור רקמות השלד דומה בתאי גזע mesenchymal (MSCs). PSCs יכול להיות מבודד על ידי FACS (תא הקרינה מיון פעיל) מרקמת השומן רכש במהלך הליכים סטנדרטיים שאיבת שומן, בשילוב מכן עם פיגום osteoinductive להשיג היווצרות...

שימוש בתאי גזע לשחזור עצם Perivascular

המכשול העיקרי בתא טיפולים שוטפים גזע הוא לקבוע את השיטה היעילה ביותר, כדי לספק תאים אלה לרקמות המארחות. כאן אנו מתארים שיטה chitosan מבוסס משלוח יעיל ופשוט של הגישה, תוך מתן אפשרות השומן שמקורם בתאי גזע כדי לשמור על multipotency שלהם.

בניית Hydrogel קולגן עבור משלוח של התא טעון גזע Chitosan microspheres

מערכת מודל זה מתחילה מג'ל הפיברין myofibroblast-מאוכלס שיכול לשמש כדי לחקור קולגן אנדוגני (מחדש) ארגון בזמן האמת באופן הרסני. מערכת המודל היא מאוד מתכונן, כפי שהוא יכול להיות בשימוש עם מקורות תאים שונים, תוספים בינוניים, וניתן להתאים בקלות לצרכי ספציפיים.

בונה הנדסת רקמות מבוססת הפיברין מmyofibroblasts ויישום של אילוצים ומתח כדי לגרום לתא וקולגן ארגון (בעניין)

עבור יישומים עתידיים כתיקון כדי לתקן דמעות חלקיות של הקדמית הצולבת הרצועה (ACL), תאי שמקורם ACL האנושי בודדו מרקמות שהושגו במהלך הליכים שיקומיים, הרחיבו במבחנה וגדלו על פיגומי רקמה מהונדסת. הידבקות ומורפולוגיה תאיות הייתה אז מבוצעים כדי לאשר התאמה ביולוגית על פני פיגום.

אחזור כירורגי, בידוד ו<em&gt; במבחנה</em&gt; הרחבת תאים הצולבות קדמי אדם נגזרים רצועה עבור יישומי הנדסת רקמות

בעבודה זו אנו מציגים טכניקה לייצור מהיר של רקמות כלי דם חיות על ידי תרבית ישירה של קולגן, תאי שריר חלק ותאי אנדותל. בנוסף, מתואר פרוטוקול חדש לאפיון מכני של רקמות כלי דם מהונדסות.

הנדסת ג&#39;ל קולגן Cellularized 3D לשחזור רקמות וכלי דם

הפרוטוקול מתאר שיטה חדשה disaggregate ברקמות אדם ליצור-שתל מייקרו עצמי, וזה ביחד עם ספוגי קולגן, להצמיח-מתחמים ביו אדם מוכנים לשימוש בטיפול נגעים בעור. יתר על כן, מערכת זו שומרת כדאיות התא של שתלי מיקרו בזמנים שונים לאחר חלוקה מכני.

אפיון רקמות לאחר שיטה חדשה חלוקה לעור מיקרו שתלי הדור

אנו מציעים הרחבה תא פרוטוקול על macroporous microcarriers ואת השימוש בהם כמערכת משלוח ב זלוף מגיב ביולוגי כדי להפיץ מטריצה רקמות decellularized. אנו גם כוללים טכניקות שונות כדי לקבוע התפשטות תאים ואת הכדאיות של תאים תרבותי על microcarriers. יתר על כן, נדגים את הפונקציונליות של התאים לאחר ביוריאקטור תרבויות.

קולגן רקומביננטי אני Microcarriers פפטיד עבור הרחבת התא והשתמש פוטנציאלי שלהם כמערכת מסירה תאים במגיב ביולוגי מדגמן

במאמר זה, אנו מציגים במבחנה ובפרוטוקול במקום כדי לתקן פער גידים של עד 1.5 ס"מ על ידי מילויו בשתל קולגן מהונדס. זה בוצע על ידי פיתוח טכניקת תיל שונה לקחת את העומס המכני עד השתל מתבגר לתוך הרקמה המארחת.

טכניקת תפירת טנורהאפי חדשנית עם שתל קולגן מהונדס רקמה לתיקון פגמים גדולים בגיד

מחלות כבד נגרמות על ידי גורמים רבים המקדמים פיברוזיס או שחמת הכבד. השתלה היא האפשרות היחידה להחלים בריאות. עם זאת, בהתחשב במחסור באיברים הניתנים להשתלה, יש לחקור חלופות. המחקר שלנו מציע השתלת פיגומי קולגן ברקמת הכבד ממודל של בעלי חיים.

השתלת פיגומי מטריצת קולגן תלת מימדית כאסטרטגיית התחדשות הכבד

חקור שיטה להרחבת רקמות אוטולוגיות בתוך הגוף לצורך ניתוחים שיקומיים באמצעות שתל PCL קולגן דחוס. גישה זו מצמצמת עיבוד מחוץ לגוף ומשפרת שילוב רקמות.

רקמות טחונות ב הדחוס קולגן: A Biotransplant המכיל נייד עבור תיקון Reconstructive המבוים יחיד

גלה סרטונים נוספים