Name: טכניקת קיבוע אקריליק שרף דפוס מבוסס ראש במכרסמים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-01-12T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 51 s
Description: למד טכניקת קיבוע ראש חדשנית מבוססת אקריליק שרף דנטלי במכרסמים. שיטה זו מסייעת לחוקרים בתחום מדעי המוח וההתנהגות ללא צורך ברכיבי מתכת.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

מחקר זה נתמך על ידי התוכנית למחקר מדעי בסיסי באמצעות ה-NRF במימון משרד החינוך, המדע והטכנולוגיה (2010-0022362) ו-(2012R1A2A2A02046812).

הצהרת אתיקה: ניסוי זה אושר על ידי הוועדה מוסדית טיפול בבעלי חיים ושימוש באוניברסיטה הלאומית Kyungpook, ובוצע על פי מדריך לטיפול והשימוש בחי מעבדה (המכון הלאומי לבריאות, 1996). לאחר ניסוי, בעלי החיים הוקרבו תחת המתת חסד פחמן דו חמצני. 1. עיצוב של בר-ראש הקיבעון לחולדות הערה: שלב זה הוא קו מנחה כללי לעיצוב בר קיבעון. כל שינוי על הממד והחומר אפשרי בהתאם לחיות או שתלים. עיצוב בר ראש-קיבעון באמצעות תוכנות CAD מומלצת אך לא הכרחי. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בתוכנת CAD לעצב בר קיבעון. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עיצוב בר קיבעון של צורה מלבנית (123 מ&quot;מ × 35 × 6) (איור 1 א). הפוך חריץ מלבני (16 × 20 מ&quot;מ; נמל) באמצע הבר הקיבעון. להוסיף מדרונות או חריצים which לשמש כמעקה מדריך על הגבולות של הנמל (איור 1 א-, איור 1 -arrows). הערה: ודא שאזור הנמל מכסה את המלבן המשוער של הגולגולת של החולדה על המוח כדי לאפשר כניסות אנכיות באמצעות מניפולטור stereotaxic לרוב האזורים במוח באמצעות פתיחת גולגולת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צרף צלחות (50 × 20 × 6 מ&quot;מ) עם שני חורי עיגון מוארכים משני צידי הבר הקיבעון. ודא שהחורים האלה עוברים ברגים בקוטר 6 מ&quot;מ (1A-ד איור). לעשות חור בקוטר של 3 מ&quot;מ בחלק קדמי של היציאה לוו נעילה (איור 1 א-ב). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להפוך את תיבה שיש רצפה (135 × 305 מ&quot;מ) וקירות צדדיים (305 × 76 מ&quot;מ). לקדוח שני חורים בקוטר 6 מ&quot;מ, כפי שמוצג באיור 1 א (הבלעה). להוסיף קירות תומכים בסרגל הקיבוע (איור 1 א-ה). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ייצור בר המעוצב ותיבה ולהרכיב כל אחד מהם באמצעות cyanoacrylate כשמוצג באיור 1 א (הבלעה). להרכיב את הבר בתיבה באמצעות ברגים בקוטר 6 מ&quot;מ. החל מדרון על ידי התאמת עמדת הבורג על הבר לקיבעון ארגונומי ראש (1A-הבלעה איור). הערה: לעכברים, הממד של בר הקיבעון הוא 60 מ&quot;מ × 20 × 4 (מורכב משתי שכבות של 2 מ&quot;מ פנלי אקריליק סמיך). הנמל הוא ריבוע של 8 מ&quot;מ רוחב (עליון) ו -9 x 10 מ&quot;מ (נמוך) כפי שמוצג באיור 1 ג. צלחות עיגון הן באותו הגודל של חולדות. קירות צלחת התיבה וצד הם 100 מ&quot;מ × 72 × 100 ושל 50 מ&quot;מ, בהתאמה. </li></ol> 2. ראש Mounter בנייה במהלך ניתוח השתלה זהירות: היה זהיר בעת התמודדות עם שרף אקרילי שיניים. הנוזל עלול לגרום לגירוי בעור. לשים על מסכה וללבוש כפפות. עובד באזור מאוורר היטב. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנה לפני הניתוח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חוזקה לעטוף את הגבול של נמל AP באמצעות סרגל קיבעוןסרט araffin כדי למנוע הידבקות של שרף אקרילי פנה לבר (ראה איור 1 ואיור 2 א). מעיל הדייר של הנמל המכוסה על ידי סרט פרפין עם שכבה דקה של שרף אקרילי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש במכשירי ניתוח עיקור. ביסודיות לחטא מסגרת stereotaxic והסביבה באמצעות 70% אתיל אלכוהול. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבצע ניתוח השתלת stereotaxic <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים בעלי חיים על ידי זריקת intraperitoneal של תערובת קוקטייל (2 מיליליטר / קילוגרם) של קטמין 10 מיליליטר (50 מ&quot;ג / מיליליטר), hydrochloride xylazine 1.5 מיליליטר (23.32 מ&quot;ג / מיליליטר), ומלח 2.5 מיליליטר. ודא שהחיה בהרדמה מלאה ואינה מגיבה לצובט זנב ובוהן. להזריק תערובת קוקטייל של 1 מיליליטר / קילוגרם במהלך ניתוח בעת צורך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תקן את בעלי החיים למנגנון stereotaxic. החל משחה עיניים על עיניים כדי למנוע יובש במהלך ניתוח. להתגלח ולנקות את הקרקפת עם 70% אתנול. תן הזרקה תת עורית של 2% לידוקאין ולחתוך SCALP לאורך קו האמצע של הגולגולת. לגמרי לגרד periosteum. יש לשטוף מספר פעמים עם מי מלח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך קידוח בר-חור ליד השפה של הגולגולת. ברגי שתל 4-5 סיבובים (עד 1 מ&quot;מ עומק) ממשטח הגולגולת כדי למנוע הפרת מאטר הדורה. ודא שאין דליפה של CSF ודם על פני השטח הגולגולת לאחר השתלת בורג. לשטוף עם מי מלח ולייבש את פני השטח הגולגולת באמצעות אוויר-עלים, בעיקר סביב הברגים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פני גולגולת מעיל עם שכבה דקה של &quot;דבק שיניים (Super-בונד C &amp; B)&quot;. לחלוטין לא מכסה את פני השטח של הגולגולת כולל גבחת אם השתלת אלקטרודה נוספת מתוכננת. השתמש בגבחת לסימון קואורדינטות פתיחת גולגולת. אלקטרודות ו / או דיסק קשיח זעיר שתל ולתקן את זה על ידי החלת גולגולת שרף אקרילי סביבו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל שרף אקרילי נוסף על גבי מלט השיניים. השתמש בכמות מתאימה של שרף אקרילי לעזוב חלל מילוי החוצה מספיק בין שרף מצופה ברשרף הרכבה ראשוני ד כאשר להתקבע הברגים ו / או אלקטרודות (איור 2 א). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח בר הראש-קיבעון 5 מ&quot;מ או יותר מעל פני השטח הגולגולת וליישר מרכזה (איור 2 א מרט). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל שרף אקרילי לפער בין בסיס הגולגולת ושרפי הרכבה ראשוני. (איור 2 א מרכז). חכה עד שהשרף הפך קשה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר אוזן-בר ולמשוך את mounter היצוק מהנמל בר קיבעון. (איור 2 א ה&quot;זכות). זהירות להחיל שרף אקרילי נוסף סביב מסילות קצה mounter היצוק במידת צורך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש לשטוף את משטח הפצע בקרקפת עם תמיסת מלח סטרילית. להזריק אנטיביוטיקה (Enrofloxacin, 5 מ&quot;ג / קילוגרם sc) ו( tartrate butorphanol, 2 מ&quot;ג / קילוגרם sc) משכך כאבים מייד לאחר ניתוח. בית החיה בנפרד בכלוב אחד. </li></ol> 3. בעלי חיים הרגלה לראש קיבעון הערה: דה צעד זהסופרי לוחות זמנים התרגלות מבוססים על ההערכות המוצלחות באופן אמפירי של המחברים. לסקירה כללית של הליך התרגלות לראש-קיבעון, לראות את העבודה של של 10 שוורץ או גואו 11. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תן תקופת התאוששות מספקת (שבוע או יותר) לבעלי חיים. ביום 1, ידית בעלי חיים לעתים קרובות במפגשים קצרים חלוקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביום שלמחרת (יום 2), לחשוף את בעלי החיים לסביבת הקיבעון (תיבה). אל תכניסו את ראשם mounter ליציאה של בר הקיבעון. השאר בעלי חיים כדי להתרגל לסביבה. מאובטח לתפוס mounter הראש בעזרת יד ל1 עד 2 שניות ולשחרר אותו באופן מיידי. חזור על קיבעון טווח קצר על ידי מספר פעמים ביד לתפוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביום 3, להרגיל בעלי חיים לראש-קיבעון. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להביא חיות מכלובי הבית וליישב אותם בתיבת בימוי ראשים לכיוון נמל בר הקיבעון. תפוס את mounter הראש ולהכניס אותו ליציאה של בר הקיבעון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תחייב את mounter (חיה שלראש) לוו הנעילה של בר הקיבעון באמצעות גומייה. לעמוד במשך 5 דקות. הערה: אל תיגעי בתא המטען או הזנב של החיה לאחר קיבוע, אשר מובילה את בעלי החיים לחריקה ולהיאבק הגדלת הלחץ של בעלי החיים. כאשר בעלי החיים ממשיכים נאבקים דקות יותר מ 1, לשחרר אותו ולנסות מאוחר יותר. מהצעד הזה, בעלי חיים מראים הפרשת שתן וצואה בכל פעם שנחשפה לראש קיבעון אבל זה בהדרגה מקבל מופחת כתמורת התרגלות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחזר את הגומייה הנעילה ולהוציא את mounter מחוץ לנמל. שים את החיות בחזרה לכלוב בבית ולספק פיסת דגנים או זרעי חמניות לכלוב בבית כפרס. המשפט הבא מתחיל ב 30 דקות. חזור 3.4.1 ל3.4.4 חמש או יותר תוך יום. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביום 4 עד 7, לחשוף את בעלי החיים לראש קיבעון, כמתואר בפרוטוקול 3.4. בהדרגה להגדיל את משך הזמן של קיבעון הראש (10 דקות, 20 דקות, 30 דקות, 50 דקות וכתמורת הרגלה). הערה: אם בעלי חיים לא יעשולא להאכיל את גמול מזון, זה יכול להיות סימן לרמה גבוהה של לחץ. לא להגדיל את זמן הקיבוע. אם בעלי החיים מראים חזר נאבקים התנהגות, להרגיל אותם לתקופה ארוכה יותר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבדוק את משקל גופו של בעל חיים יומיומי. שקול התרגלות לא מוצלחת כאשר משקל גוף הולך ופוחת. המשך למשימות התנהגותיות עם קיבעון ראש אחרי התרגלות מוצלחת. הערה: התרגלות מוצלחת מאפשרת אימון שלאחר מכן התנהגות (איור 3E וF). </li></ol>

<ol><li>Mayrhofer, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+two-alternative+forced+choice+paradigm+for+bilateral+vibrotactile+whisker+frequency+discrimination+in+head-fixed+mice+and+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Novel two-alternative forced choice paradigm for bilateral vibrotactile whisker frequency discrimination in head-fixed mice and rats.</a> J Neurophysiol. 109, 273-284 (2013).</li>
<li>Bryant, J. L., Roy, S., Heck, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+technique+for+stereotaxic+recordings+of+neuronal+activity+in+awake%2C+head-restrained+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">A technique for stereotaxic recordings of neuronal activity in awake, head-restrained mice.</a> J Neurosci Methods. 178, 75-79 (2009).</li>
<li>Ollerenshaw, D. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+tactile+inputs+in+the+rat+vibrissa+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Detection of tactile inputs in the rat vibrissa pathway.</a> J Neurophysiol. 108, 479-490 (2012).</li>
<li>Lee, M. G., Manns, I. D., Alonso, A., Jones, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sleep-wake+related+discharge+properties+of+basal+forebrain+neurons+recorded+with+micropipettes+in+head-fixed+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Sleep-wake related discharge properties of basal forebrain neurons recorded with micropipettes in head-fixed rats.</a> J Neurophysiol. 92, 1182-1198 (2004).</li>
<li>Lutcke, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+recording+of+neuronal+activity+with+a+genetically-encoded+calcium+indicator+in+anesthetized+and+freely+moving+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Neural+Circuits%22%5BJournal%5D)">Optical recording of neuronal activity with a genetically-encoded calcium indicator in anesthetized and freely moving mice.</a> Front Neural Circuits. 4, 9(2010).</li>
<li>Dombeck, D. A., Khabbaz, A. N., Collman, F., Adelman, T. L., Tank, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+large-scale+neural+activity+with+cellular+resolution+in+awake%2C+mobile+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Imaging large-scale neural activity with cellular resolution in awake, mobile mice.</a> Neuron. 56, 43-57 (2007).</li>
<li>Kimura, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reinforcing+operandum%3A+rapid+and+reliable+learning+of+skilled+forelimb+movements+by+head-fixed+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+neurophysiology%22%5BJournal%5D)">Reinforcing operandum: rapid and reliable learning of skilled forelimb movements by head-fixed rodents.</a> Journal of neurophysiology. 108, 1781-1792 (2012).</li>
<li>Hadlock, T., Kowaleski, J., Mackinnon, S., Heaton, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+method+of+head+fixation+for+the+study+of+rodent+facial+function%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+neurology%22%5BJournal%5D)">A novel method of head fixation for the study of rodent facial function.</a> Experimental neurology. 205, 279-282 (2007).</li>
<li>Roh, M., Jang, I. S., Lee, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Push-in+Head+Restraining+Apparatus+for+Intracranial+Self+Stimulation+Tasks+in+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22Korean+J+Physiol+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Push-in Head Restraining Apparatus for Intracranial Self Stimulation Tasks in Rats.</a> Korean J Physiol Pharmacol. 18, 103-108 (2014).</li>
<li>Schwarz, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+head-fixed+behaving+rat--procedures+and+pitfalls%5BTitle%5D)+AND+%22Somatosensory+%26+motor+research%22%5BJournal%5D)">The head-fixed behaving rat--procedures and pitfalls.</a> Somatosensory & motor research. 27, 131-148 (2010).</li>
<li>Guo, Z. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Procedures+for+Behavioral+Experiments+in+Head-Fixed+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Procedures for Behavioral Experiments in Head-Fixed Mice.</a> PLoS ONE. 9, (2014).</li>
<li>Osborne, J. E., Dudman, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RIVETS%3A+a+mechanical+system+for+in+vivo+and+in+vitro+electrophysiology+and+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">RIVETS: a mechanical system for in vivo and in vitro electrophysiology and imaging.</a> PLoS One. 9, e89007(2014).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

פרוטוקול זה מדגים שיטת קיבוע ראש פשוטה ונוחה באמצעות חומרים בהישג יד. לקיבוע ראש מוצלח פיזית, השלבים הקריטיים הראשונים במהלך הניתוח הם לשטוף ולייבש את משטח הגולגולת בצורה ברורה לפני מריחת מלט שרף הדבק הדנטלי. שנית, שיטה זו אינה משתמשת בברגים המושתלים מתחת לשרירים הטמפורליים ותלויה רק בברגים בגולגולת, השתלתם בניצב על פני שפת הגולגולת היא קריטית10. זה מפחית את האפשרות של הפרדה מקרית של מרכיב שרף מהגולגולת, במיוחד בחולדות.
השרף האקרילי לבניית תושבת הראש הוא דבק למוט. מנענו זאת על ידי כ...

הרחקה קיבעון או ראש בראש היא טכניקה של לשתק את ראשו של בעל החיים על ידי הצמדת מסגרת או צלחת על הגולגולת להידוק נוקשה. הטכניקה כבר אימצתי לגירוי חושי מדויק, חישת התנהגות עם או בלי הקלטה עצבית בבעלי חיים ער 1-3 ותיוג juxtacellular במהלך מחזור 4 שינה ו. כמו כן הוא משמש לin vivo ההדמיה של מוח 5,6. עכשיו טכניקת קיבוע הראש הוא כלי נפוץ במדעי מוח והתנהגות מחקר. בעיקרון, קיבעון הראש מסורתי דורש קובץ מצורף כירורגית של ראש-הודעות מתכת על גבי 6-8 הגולגולת. אז הקבצים המצורפים מהודקים לפלטפורמה נייחת, וכתוצאה מכך חוסר תנועה של הראש. מחקר בבעלי חיים neurophysiological ער כגון עצבי ו / או הקלטה אופטית, התערבות חשמלית במוח, הדמיה מוחית מלווה בניתוח השתלה באמצעות אקריליק שיניים. לכן,נראה משימה פשוטה ליישם את קיבעון הראש במעבדות אלה כאשר הוא בניסוי נחוץ. צריכים להיות מתוכננות המסגרות להיות קל משקל וקטן מספיק כדי לא להפריע התנהגות הטבעית של בעלי החיים בכלובים בביתם. הוא גם מספק קשיחות מכאנית כאשר הידק לפלטפורמה הנייחת. עוד יש לו התאמה ביולוגית בהתאם למטרות ניסויים. לכן, זה קשה מבחינה טכנית כדי לעצב ולייצר ראש-הודעות כאלו בציוד מעבדה כללי. במחקר זה, שיטת קיבוע ראש רומן מתוארת, מתן קשיחות מכאנית באמצעות הידוק נוח מבלי להשתמש בראש-הודעות מתכת. על ידי שימוש בשיטה, קיבעון הראש יכול להיעשות בתנאי מעבדה כלליים, שבו ניתוח השתלה מבוצע בדרך כלל במכרסמים למחקר מוח. הראש-הודעות המתכת מוחלפות במלט שרף אקרילי היצוק באופן חלקי על ידי בר קיבעון ראש מחוייט ודפוס התהליך נעשה במהלך implanניתוח tation. בר הקיבעון מספק תאימות מרחבית גבוהה עם שתלים אחרים, כגון בדיקות הקלטה עצביות, אלקטרודות גירוי. כמו כן הוא מפשט את הפעולות של הידוק הראש של החיה על פלטפורמת הקיבעון על ידי הסרת בורג חיזוק. אנחנו השתמשנו בשיטה זו במחקר ההתנהגות הקודם והגעתי למסקנה שהשיטה זו היא קלה ליישום ונוח בניסויים מעשיים 9.

<table><tbody><tr><td>שרף אקרילי דנטלי</td><td>Lang Dental Manufacturing</td><td>Ortho-Jet</td><td>לייצור</td></tr><tr><td>סרט פרפין</td> יצוק <td>Bemis</td><td>Parafilm</td><td>למניעת הידבקות של שרף אקרילי לבר</td></tr><tr><td>דבק שיניים</td><td>Sun Medical</td><td>Super-Bond C& B</td><td>לחיבור בין שרף אקרילי לגולגולת</td></tr><tr><td>Plexglass או צלחת</td><td></td><td></td> אקרילית אחרת <td>ליצירת מוט קיבוע ופלטפורמת קופסה</td></tr><tr><td>Cyanoacrylate</td><td></td><td></td><td>להדבקת לוחות אקריליק</td></tr></tbody></table>

טכניקת קיבוע אקריליק שרף דפוס מבוסס ראש במכרסמים

Acrylic Resin Molding Based Head Fixation Technique in Rodents

קיבוע ראש הוא טכניקה של קיבוע ראש של בעל חיים על ידי הצמדת עמוד ראש על הגולגולת לצורך הידוק קשיח. קיבוע ראש מסורתי דורש חיבור כירורגי של מסגרות מתכתיות על הגולגולת. לאחר מכן מהדקים את המסגרות המחוברות לפלטפורמה נייחת וכתוצאה מכך קיבוע הראש. עם זאת, מסגרות מתכתיות לקיבוע ראש היו קשות מבחינה טכנית לתכנון ויישום בסביבת מעבדה כללית. במחקר זה, אנו מספקים שיטה חדשה לקיבוע ראש. באמצעות מוט קיבוע ראש בהתאמה אישית, תושבת ראש נבנית במהלך ניתוח השתלה. לאחר מריחת שרף אקרילי להדבקת שתלים כגון אלקטרודות וצינורית על הגולגולת, שרפים נוספים נמרחו על גבי זה לבניית תבנית התואמת ליציאה של מוט הקיבוע. תושבת הראש המעוצבת משמשת כמסילה מדריכה, החוקרים מקבעים בנוחות את ראש החיה על ידי הכנסת תושבת הראש ליציאה של מוט הקיבוע. שיטה זו יכולה להיות ישימה בקלות אם יש צורך בניתוח השתלה באמצעות אקריליק דנטלי ועשויה להיות שימושית עבור מעבדות שאינן יכולות לייצר בקלות עמודי ראש מתכתיים בעיבוד CNC.

שיטת קיבוע ראש זה חל על שני חולדות ועכברים. שמונה חולדות סה&quot;כ קיבלו השתלה דו-צדדית של גירוי אלקטרודות לתוך צרור המוח הקדמי המדיאלי. לארבעה מתוכם, אלקטרודות חוט טונגסטן מותאמות אישית (microdrives) הושתלו גם לאזור forelimb M1 (איור 2 ג). לעכברים (n = 2), ארבע אלקטרודות חוט נירוסטה הושתלו לתוך אזורים חזיתיים / עורפי בקליפת המוח. במהלך ניתוח, mounters הראש היו מעוצב לקיבוע הראש בשני חולדות ועכברים, כפי שמתארים בסעיף פרוטוקול 2. לאחר התאוששות מניתוח, הם נחשפו למפג...

טכניקות קיבוע ראש מסורתיות השתמשו במסגרות מתכתיות המחוברות על הגולגולת כממשק למנגנון קיבוע ראש. פרוטוקול זה מדגים טכניקת קיבוע ראש מבוססת שרף אקרילי ללא מסגרת למשימות התנהגותיות במכרסמים.

Head fixation is a technique of immobilizing animal's head by attaching a head-post on the skull for rigid clamping. Traditional head fixation requires ...

המטרה הכללית של הליך זה היא לספק טכניקה חדשנית לקיבוע הראש באמצעות אקריליק דנטלי, הזמין באופן נרחב במעבדות המבצעות ניתוחי השתלה במכרסמים. שיטה זו יכולה להשיב על שאלות מפתח בתחום חקר המוח וההתנהגות. היתרון המרכזי של טכניקה זו הוא שאינה דורשת מוטים או פלטות קיבוע ממתכת, ולכן היא מתאימה למעבדות שאינן יכולות לייצר בקלות מוטים לקיבוע הראש בעיבוד CNC.בעזרת תוכנת CAD, תכננו מוט קיבוע מלבני במידות 123 על 35 על 6 מילימטרים, עם פתח מלבני מרכזי במידות 16 על 20 מילימטרים. פתח זה משמש לגישה למוח, ולכן יש לשנות את גודלו לפי הצורך. הוסיפו שיפועים או שקעים שישמשו כפסי מוליכה לאורך שולי הפתח. בשני צדי מוט הקיבוע, הכינו פלטות לחיבור באמצעות חורי עיגון מוארכים.החורים צריכים לאפשר מעבר של בורג בקוטר 6 מילימטר; בנוסף, הוסיפו בחלקו הקדמי של הפתח חור בקוטר 3 מילימטר שיתאים לוו וו-נעילה. לאחר מכן, תכננו את הקירות והרצפה של קובייה בגודל 135 על 305 ובגובה 76 מילימטר. דפנות הצד הגדולות יותר משמשות לתמיכה במוט.הם זקוקים לחורים בקוטר 6 מילימטר כדי לשרת מטרה זו. לאחר שכל החלקים עובדו מאקריליקה, הרכיבו את הקופסה ואת המוט באמצעות ציאנואקרילט. לאחר מכן, חברו את המוט לדפנות התמיכה של הקופסה באמצעות ברגים של 6 מילימטר.לבסוף, כווננו את שיפוע התושבת כך שתתאים כראוי לראש של חולדה על ידי כיוון מיקום הבורג. עבור עכברים, השתמשו באותו עיצוב עם מוט מממדים קטנים יותר, אותן לוחיות עיגון וקופסה קטנה יותר. התחילו בהכנת המוט.ראשית, עטפו את הפתח בסרט פאראפין. לאחר מכן, כסו את שולי הפאראפין בשכבה דקה של שרף אקרילי. לבסוף, חטאו את המסגרת באמצעות ניקוי יסודי ב-70% ethanol.לאחר הרדמת החולדה, ודאו את מצב ההרדמה באמצעות צביטה בבוהן. במידת הצורך, ניתן תולדות חצאי מינונים של תערובת התרופות כדי לשמור על ההרדמה. לאחר קיבוע החולדה למסגרת הסטריאוטקסית, מרחו פומדת עינית וגלחו את הפרווה מהגולגולת.לאחר מכן, יש להחדיר זריקה תת-עורית של 2% lidocaine באתר החתך. כעת יש לבצע חתך בקרקפת לאורך קו האמצע ולקלף לחלוטין את ה-Periosteum. לאחר מכן, בצע מספר שטיפות עם תמיסת סליין כדי לחשוף אזור נקי של הגולגולת.לאחר מכן, קדחו חורי ברור (burr holes) עבור הברגים סמוך לשולי הגולגולת. השתילו את הברגים בניצב לגולגולת. אין להשאיר נוזלים הדולפים מהברגים המשתילים.שטפו את האזור מסביב לאתרי השתילים וייבשו את ההכנה בעזרת אוויר. לאחר מכן, כסו את רוב שטח פני הגולגולת בשכבה דקה של דבק דנטלי. השאירו את ה-bregma חשופה לצורך ניווט לפי קואורדינטות.בצעו השתקות נוספות של אלקטרודות או של hyperdrive. לאחר מכן, קבעו את ההשתקות באמצעות שרף אקרילי על שכבת המלט השיניים. בעשיית כן, השאירו מספיק מקום על שרף הקיבוע כך שניתן יהיה להדביק את המוט לגולגולת.כעת, יישרו את מוט קיבוע הראש כ-5 millimeters מעל הגולגולת. מרחו מעט שרף נוסף בין הגולגולת לבין השרינים שעל המוט. לאחר שהשרינים התקשחו, הסירו את מוט האוזן ומשכו את התבנית ואת מתקן ההרכבה מתוך יציאת מוט הקיבוע.כדי לסיים את ההליך, מזריקו לבעל החיים אנטיביוטיקה ומשכך כאבים. לאחר מכן, מעבירים אותו לכלוב התאוששות ומאכלסים אותו באופן פרטני ברגע שהחזיר לעצמו את היכולת לשכב על הבטן (sternal recumbency). יש לאפשר לבעל החיים להתאושש במשך שבוע אחד לפחות לפני הרגלתו לקיבוע הראש.ביום הראשון של ההרגלה, מטפלים בבעלי החיים בתדירות גבוהה במפגשים קצרים. ביום השני מציגים להם את קופסת הקיבוע. אפשרו לבעלי החיים לחקור את הסביבה באופן חופשי.במספר הזדמנויות במהלך תקופת ההכרות, אחזו קצרה במתקן הראש למשך שנייה או שתיים. ביום השלישי, הציגו לבעל החיים את חוויית קיבוע הראש. הניחו את בעל החיים בקופסה וכוונו את הראש אל הפתח שבמוט קיבוע הראש.לאחר מכן, קחו את מתקן קיבוע הראש והניחו אותו במוט הקיבוע. קשרו את הראש בעזרת וו הנעילה וגומיה. לאחר מכן, הניחו לבעל החיים לעמוד במשך חמש דקות מבלי לגעת בו, שכן נגיעה רק תגרום לבעל החיים להיאבק יותר.השהתון וההסקה צפויים ויפחתו בהדרגה עם חשיפה ממושכת יותר לקיבוע. לאחר חמש דקות הסירו את גומיית הגומי והוציאו את מוט הקיבוע. לאחר מכן החזירו את בעל החיים לכלובו ותנו לו דגן או גרעין חמנייה כגמול.לאחר חצי שעה חזרו על התהליך. קבעו את בעל החיים חמש פעמים ביום הראשון של הקיבוע. ביום הרביעי, הגדילו את מספר החשיפות לקיבוע לשבע פעמים.בהמשך, האריכו בהדרגה את תקופת הקיבוע מחמש דקות לעשר דקות, ל-20 דקות, לחצי שעה ולבסוף עד ל-50 דקות. אם בשלב כלשהו בעל החיים מפסיק לקבל את התגמול, אין להגדיל את זמן הקיבוע יותר, שכן זהו סימן למצב של עקה (stress) גבוהה. במהלך תהליך ההתרגלות, שקלו את בעלי החיים מדי יום.אם משקל הגוף של בעל חיים יורד במהלך התהליך, אין להשתמש בו למחקר. בניסוי עם שמונה חולדות, הוצבו אלקטרודות גירוי דו-צדדיות בתוך ה-medial forebrain bundle. באזור M1 של הגפה העליונה, צוידו החולדות במיקרו-דרייבים ובאלקטרודות מחוטי טונגסטן.לאחר תקופת ההסתגלות, ביצעו החולדות משימות התנהגותיות במשך 40 עד 60 דקות תחת קיבוע ראש. כל מתקני קיבוע הראש המודפסים נשארו מחוברים לבעלי החיים לאורך כל 40 ימי הניסוי. במהלך הניסוי, החולדות הולמדו למשוך מנופים כדי לקבל תגמולים של גירוי.בניסוי עם עכברים שבהם הושתלו ארבעה אלקטרודות, מתקן קיבוע הראש נשאר מחובר למשך 80 ימים. העכברים עברו קיבוע ראש יומי למשך 20 עד 40 דקות במהלך אותם 80 ימים. לאחר צפייה בסרטון זה, תהיו בעלי הבנה טובה לגבי אופן תכנון מוט לקיבוע ראש וכיצד לסייע בטיפול בבעלי החיים המקובעים.עם תרגול, ניתן לבצע את השתלת מתקן הראש האקרילי תוך דקות ספורות. לאחר מכן, קיבוע הראש הוא מהיר וקל מאחר שאינו דורש ברגים או סבסבים. זכרו שעבודה עם שרף אקרילי דנטלי עלולה לגרום לגירוי בעור.ויש לנקוט תמיד באמצעי זהירות, כגון חבישת מסכה וכפפות ועבודה באזור מאוורר היטב, בעת ביצוע הליך זה.

acrylic-resin-molding-based-head-fixation-technique-in-rodents

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

אנו מציגים שיטה ליצירת חלון הדמיה בגולגולת העכבר החובקת מילימטרים והוא יציב במשך חודשים ללא דלקת של המוח. שיטה זו גם מתאים מחקרים ארוכי טווח של זרימת דם, דינמיקה סלולריים, ותא / מבנה כלי הדם באמצעות שני פוטונים במיקרוסקופ.

מלוטשת מחוזק דליל, הגולגולת חלון הדמיה לטווח ארוך של מוח עכבר

סרטון זה מציג ניתוח השתלת עמוד ראש במודל מורין. עמוד הראש משמש לא רק לתיקון ראש ולכן לרסן את העכבר במהלך הניסויים, אלא גם לחיבור מאובטח של מכשיר ראש בבעלי חיים הנעים בחופשיות.

השתלת עמוד ראש עכבר: שיטה לקיבוע ראש במכרסמים

מקור: Lee, H. et. al., הדמיית סידן מוצלחת in vivo עם מיקרוסקופ ממוזער המותקן על הראש באמיגדלה של עכבר שמתנהג בחופשיות. J. Vis. Exp. (2020)סרטון זה מדגים הדמיית סידן in vivo בעכבר באמצעות מקדם שבירה שיפוע, או עדשת GRIN, ומיקרוסקופ ממוזער. המערך משלב קיבוע ראש בתוך מערכת כלובים ניידת ללא חיכוך, מגרה נוירונים ומעורר זרם יוני סידן. עדשת GRIN לוכדת איתות סידן במוח, ומאפשרת הדמיה בזמן אמת של פעילות עצבית.

הדמיית סידן מיקרואנדוסקופית בזמן אמת בעכבר הנע בחופשיות

רומן ברזולוציה גבוהה<em&gt; בvivo</em&gt; טכניקת הדמיה כדי לחקור את התגובה דינמית של מבנים תוך גולגולתי לצמיחה גידול וTherapeutics

עבודה זו מציגה שיטה לבצע optogenetic יחיד-יחידת הקלטה אמינה מכל עכבר ער באמצעות optrode של זכוכית בהזמנה אישית.

Optogenetics זיהוי של סוג עצביים עם Optrode זכוכית בעכברים ער

פרוטוקול הציג מייצרת התנגשות חושית מתמשך עבור ניסויים שמטרתם לימוד למידה לטווח ארוך. על ידי לצמיתות לובש מכשיר קבוע על ראשם, עכברים חשופים ללא הרף החושים חוסר התאמה בין תשומות החזותית ואת שיווי המשקל תוך כדי תנועה בחופשיות בתוך כלובים הביתה.

הקונפליקט חושי לטווח ארוך באופן חופשי להתנהג עכברים

עם מניפולציה אופטוגנטית של אוכלוסיות עצביות ספציפיות או אזורים במוח, התנהגות ניתן לשנות עם רזולוציה זמנית ומרחבית גבוהה בבעלי חיים נעים בחופשיות. באמצעות כלים אופטוגנטיים שונים בשילוב עם סיבים אופטיים מושתלים כרונית, ניתן לבצע מגוון של אפנון עצבי ובדיקות התנהגותיות.

מניפולציה אופטוגנטית של פעילות עצבית לווסת את ההתנהגות בעכברים נעים בחופשיות

דימות סידן מיקרונדוסקופי In vivo הוא כלי רב ערך המאפשר ניטור בזמן אמת של פעילויות עצביות בבעלי חיים מתנהגים בחופשיות. עם זאת, יישום טכניקה זו על האמיגדלה היה קשה. פרוטוקול זה נועד לספק קו מנחה שימושי עבור מיקוד מוצלח תאי אמיגדלה עם מיקרוסקופ מיניאטורי בעכברים.

מוצלח בהדמיית סידן Vivo עם מיקרוסקופ מיניאטורי ראש הר באמיגדלה של עכבר מתנהג בחופשיות

מתואר נוהל חדש ומפורט להדמיה תפקודית של חולדות ערות וקבועות ראש.

שתלי ראש לדימות מוחי של חולדות ערות ומקובעות ראש

כאן, אנו מציגים מערכת שתלי בדיקה קלת משקל וחסכונית לאלקטרופיזיולוגיה כרונית במכרסמים המותאמת לקלות שימוש, שחזור בדיקה, רב-תכליתיות ניסיונית ותאימות להתנהגות.

שתל DREAM: מערכת שתלים קלה, מודולרית וחסכונית לאלקטרופיזיולוגיה כרונית בעכברים מקובעים ראש ומתנהגים בחופשיות

המאמר מתאר את הליכי הניסוי עבור פרדיגמת המציאות המדומה (VR) הנפוצה בעכברים, כמו גם קביעת ההיתכנות של הפעלת משימות VR מורכבות על ידי בדיקת משימת אפליית אותות בצורת Y.

נהלי אימון התנהגותי למציאות מדומה קבועה בראש בעכברים

למד טכניקת קיבוע ראש חדשנית מבוססת אקריליק שרף דנטלי במכרסמים. שיטה זו מסייעת לחוקרים בתחום מדעי המוח וההתנהגות ללא צורך ברכיבי מתכת.

טכניקת קיבוע אקריליק שרף דפוס מבוסס ראש במכרסמים

גלה סרטונים נוספים