Name: מוצקים שומנים חלקיקים (SLNs) אפליקציות לתאיות מיקוד (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-11-17T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 19 s
Description: למד שיטת סינתזה עדינה לננו-חלקיקים שומניים ביוא-תואמים באמצעות שיטת טמפרטורת היפוך הפאזה. שיטה זו מאפשרת אפיון תכונות פיזיקליות והערכת אינטראקציות תאיות ליישומים ביורפואיים מתקדמים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחקר המדווח בפרסום זה נתמך על ידי מחלקת המחקר והפיתוח המחקרי של המעבדה לפיזיקה יישומית של ג'ונס הופקינס, המשרד להעברת טכנולוגיה ותוכנית המלגות של סטיוארט ס. ג'אני, בנוסף למכון הלאומי ללב, ריאות ודם של המכונים הלאומיים לבריאות תחת פרס מספר R21HL127355.

1. עיבוד של SLNs <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סינתזה של SLNs הערה: השתמש בשיטת PIT 1,17,20 להכין 20 תת-SLNs ננומטר 1. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בטכניקה מזוהמת, bioreagents או ריאגנטים כיתה תרבית תאים, וחומרי סטרילי (כלומר, טפטפות, מריות, בקבוקונים, וכו &#39;). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בארון בטיחות ביולוגית לסינתזה של SLNs (איור 2). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שלב 0.6 מ&quot;ג של צבע פלואורסצנטי (הנילוס אדום (ניר), ריכוז הניר הוא כ 0.3 מ&quot;ג / מיליליטר) ו0.10 גרם של Heneicosane (שומנים בדם, 5 WT% WT ריכוז שומנים בדם /) לתוך בקבוקון (15 מיליליטר), שיתוף להמס ב 90 מעלות צלזיוס, ומערבבים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף polyoxyethylene 0.11 גר &#39;(10) אתר oleyl (פעיל שטח, 5.5% WT ריכוז חומרים פעילי שטח WT /). שיתוף להמס את התערובת וכתוצאה מכך על 90 מעלות צלזיוס ומערבבים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף 1.79 גרם של מים סטריליים לתערובת, החום עד 90 מעלות צלזיוס, ומערבבים עד שnanoemulsion שקוף נוצר. שים לב: תחת ערבוב המשיך וקירור מבוקר, SLNS נוצרים. תנאים אלה גורמים היפוך של תחליב מים בשמן לתחליב שמן ב-מים. מולקולות lipophilic כגון מחיצת NiR לטיפי שומנים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן nanoemulsion במקביל מבלי להוסיף צבע הניאון, כדי לשמש דוגמא שליטה. שלב 0.10 גרם של Heneicosane ו0.11 polyoxyethylene גרם (10) אתר oleyl לתוך בקבוקון (15 מיליליטר) שיתוף להמיס על 90 מעלות צלזיוס, ומערבבים. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף 1.79 גרם של מים סטריליים לתערובת, החום עד 90 מעלות צלזיוס, ומערבבים עד שnanoemulsion שקוף נוצר. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נוסף לעקר כל nanoemulsion באמצעות מסנן 0.2 מיקרומטר סטרילי. </li></ol><img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/53102/53102fig2.jpg" /> איור 2. סכמטי של סינתזה של SLNs. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53102/53102fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> גודל חלקיקים ופולydispersity <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בפיזור אור דינמי (DLS) כדי למדוד את גודל החלקיקים וpolydispersity של SLNs 1 באמצעות קובט זכוכית וכלי שנועד למדוד את גודל חלקיקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני המדידות של הדגימות, למדוד את גודל החלקיקים של שני סטנדרטים ידועים הבאים הפרוטוקול של היצרן לעריכה ולמדידת הסטנדרטים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מלא את קובט הזכוכית עם 1.5 מיליליטר של תמיסה סטנדרטית ולמדוד את הפתרון הסטנדרטי באמצעות אותם תנאי המדידה כדוגמאות. הערה: הצעד קודם חזר על עצמו עבור כל תקן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מדוד את הדגימות כפי שהוכן. לכל אחד, להשתמש בפרמטרים של הניסוי הבא: זמן ריצה של 100 שניות, מקדם שבירה של מים (1.33), צמיגות של מים בטמפרטורה של 20 מעלות צלזיוס (1.002 שניות · MPA). הערה: טכניקה זו משתמשת בתדירות השתנתה אור כדי למדוד את הגודל של חלקיקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דווח הקוטר הממוצע של החלקיקים וpolydispersity של Partiהתפלגות גודל CLE. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נקודת התכה וכמוסה חום של התכה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בקלורימטר סריקת ההפרש (DSC) מצויד ברכב-סמפלר ומקור קירור חנקן נוזלי כדי לחקור את התנהגות התרמית של SLNs 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פיפטה SLNs המוכן כמו למחבת אלומיניום 40 μl עם מסה של כ 25 מ&quot;ג והרמטית לאטום את המחבת באמצעות עיתונות crimper אוניברסלית כדי להקטין את איבוד לחות במהלך סריקת DSC. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למדוד כל nanoemulsion 5-80 מעלות צלזיוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דווח על נקודת ההתכה והחום הכמוס של היתוך מעלילת DSC, שבו העמק מייצג את נקודת ההתכה ונפרדת מהשטח מתחת לעקומה בעלילת DSC מחולקת בכמות החומר מייצגים את החום הכמוס של היתוך. </li></ol></li></ol> אינטראקציה 2. SLNs עם fibroblasts ותאים דנדריטים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תרבות של fibroblasts האדם היסודי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> fi האנושי ראשוני התרבותbroblasts לפי הוראות היצרן במדיום נוזלי לתרבות של fibroblasts אדם עורי (הבינוני 106), בתוספת ערכת תוספת צמיחה בסרום הנמוכה (LSGS). שמור על תאים באווירת humidified על 37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2 ותת-תרבות עם הגעת מפגש 80%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור שני MTT וניתוח הדמיה, תאי זרע בצלחת 96-היטב, בצפיפות של 2 x 10 4 תאים לכל גם, ולאפשר לאזן ב 37 CO ° / N לפני חשיפת בלוטת זקיף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בזמן אפס, לדלל SLNs במדיום מלא כפי שצוין (איור 4), ביחס לריכוז שומנים בדם, ולהוסיף 10 μl לכל גם לכל לשכפל גם בצלחת 96-היטב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמור על תאים על 37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2, בתקופת הדגירה. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> MTT הרעילות Assay <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר 24 שעות של דגירה עם SLNs, לקבוע כדאיות סלולרית באמצעות assay MTT, על פי הפרוטוקול של היצרן. &lt;/ Li&gt; <li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף את תאי פעם אחת ולהוסיף בינוני טרי היטב כל אחד (100 μl / טוב). הרוג בארות שליטה על ידי דוגרים בפתרון מתנול 70% במשך 10 דקות לפני החלפה עם מדיום חדש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף מגיב MTT (10 μl לכל גם) היטב בכל microplate דגירה O / N על 37 מעלות צלזיוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר הדגירה O / N, solubilize גבישים תאיים formazin עם תמיסת הניקוי סיפקה (לכל גם 100 μl) על פי הפרוטוקול של היצרן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר 3 שעות של דגירה על RT, לקבל ערכי הספיגה באורך גל של 570 ננומטר מדידה באמצעות קורא microplate. מגיב MTT משמש צריך להיות פחות מ 1% (w / v) 3 (4,5-dimethylthiazolyl-2) -2 ברומיד, 5-diphenyl-tetrazolium: הערה. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מיקרוסקופ פלואורסצנטי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בנקודות זמן ספציפיות הבאות מינון של fibroblasts עם בלוטות זקיף, לשטוף את fibroblasts פעמיים עם תמיסת מלח סטרילית פוספט (PBS) ולתקן במשך 10 דקות עם מתנול 70% קרים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר 10 דקות, להחליף את מתנול עם PBS וללכוד תמונות באמצעות מיקרוסקופ הפוכה, באמצעות לעבור להקה (BP) 690/50 ננומטר מערכת סינון. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תרבות של תאי עכבר מח עצם דנדריטים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגרום לתאי עצם עכבר נגזר מח הדנדריטים (BMDC) כפי שתוארו לעיל 23,24. בקצרה, השעיות תא בודד צלחת של C57BL מח עצם / 10 ב 100 מ&quot;מ צלחות פטרי ב 2 x 10 6 / צלחת עם הגורם מגרה מושבה רקומביננטי עכברי granulocyte-מקרופאג (GM-CSF, 300 U / ml) ועכברי רקומביננטי IL-4 (ב תא גירוי גורם, 200 U / ml). שינוי תקשורת בכל 3 ימים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביום 7, להוסיף SLNs הטעון-ניר למאכלים בריכוז סופי של 0.5 ו 5.0 מיקרוגרם / מיליליטר שומנים בדם ולשמור על התאים ב37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2 באינקובטור לאורך הרצוי של חשיפה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> איסוף תאים מהמנות על ידי aspirating כל אמצעי התקשורת בצלחת, לגבות אותו בצינור 50 מיליליטר, ואחרי שטיפה יסודית של הצלחת (כדי לסלק את המודעה באופן רופףתאי Herent) עם 5 מיליליטר של תמיסת מלח שנאגרו פוספט (PBS) המכיל 4 מ&quot;מ חומצת ethylenediaminetetraacetic (EDTA). אסוף את ההשעיה התא שהושגה באותו הצינור 50 מיליליטר. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הערכה של SLNs התאגדות באמצעות cytometry הזרימה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קבע את הריכוז של ההשעיה התא שהושגה בנקודת 2.4.3 ולהפיץ 3x10 5 תאים לתחתית עגולה צינור FACS 12 מ&quot;מ x 75 מ&quot;מ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף את התאים על ידי הוספת 1 מיליליטר של PBS ולאחר מכן צנטריפוגה הצינורות במשך 5 דקות ב 400 XG, בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בטל supernatant ו resuspend גלולה עם של PBS / 2 / 0.1% אלבומין בסרום שור mM EDTA 100 μl (BSA) (חיץ מכתים) המכיל נוגדנים חד שבטיים נגד CD11c-FITC (סופי 0.25 מיקרוגרם / מיליליטר). דגירה של 30 דקות על קרח בחושך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף את התאים עם 1 מיליליטר של PBS ואז צנטריפוגות הצינורות במשך 5 דקות ב 400 XG, בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בטל supernatant ו resuspend כלגלולה עם 400 μl של חיץ מכתים. התאים מוכנים לרכישת הדגימות עם cytometer זרימה (אולי מצויד בלייזרים כחולים ואדום) עכשיו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות cytometry זרימת תוכנת ניתוח, להעריך את רמת התאגדות של SLNs ידי DC על ידי gating על האוכלוסייה של CD11c תאים + (FITC חיובי) ולהשוות את עוצמת הקרינה הקשורים SLNs (נמדדה בערוצי PerCP-Cy5.5 או APC). </li></ol></li></ol>

<ol><li>Calderon-Colon, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthesis+of+sub-10+nm+solid+lipid+nanoparticles+for+topical+and+biomarker+detection+applications%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nanopart+Res%22%5BJournal%5D)">Synthesis of sub-10 nm solid lipid nanoparticles for topical and biomarker detection applications.</a> J Nanopart Res. 16 (2252), 1-10 (2014).</li>
<li>Patwekar, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Review+on+nanoparticles+used+in+cosmetics+and+dermal+products%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Pharmacy+and+Pharmaceutical+Sciences%22%5BJournal%5D)">Review on nanoparticles used in cosmetics and dermal products.</a> World Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences. 3 (8), 1407-1421 (2014).</li>
<li>Martins, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Solid+lipid+nanoparticles+as+intracellular+drug+transporters%3A+An+investigation+of+the+uptake+mechanism+and+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Pharmaceutics%22%5BJournal%5D)">Solid lipid nanoparticles as intracellular drug transporters: An investigation of the uptake mechanism and pathway.</a> International Journal of Pharmaceutics. 430, 216-227 (2012).</li>
<li>Yadav, N., Khatak, S., Sara, U. V. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Solid+Lipid+Nanoparticles+-+A+Review%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Applied+Pharmaceuticals%22%5BJournal%5D)">Solid Lipid Nanoparticles - A Review.</a> International Journal of Applied Pharmaceuticals. 5 (2), 8-18 (2013).</li>
<li>Weber, S., Zimmer, A., Solid Pardeike, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipid+Nanoparticles+%28SLN%29+and+Nanostructured+Lipid+Carriers+%28NLC%29+for+pulmonary+application%3A+a+review+of+the+state+of+the+art%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Pharm+Biopharm%22%5BJournal%5D)">Lipid Nanoparticles (SLN) and Nanostructured Lipid Carriers (NLC) for pulmonary application: a review of the state of the art.</a> Eur J Pharm Biopharm. 86 (1), 7-22 (2014).</li>
<li>Mahajan, A., Kaur, S., Grewal, N. K., Kaur, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Solid+Lipd+Nanoparticles+%28SLNs%29+-+As+Novel+Lipd+based+Nanocarriers+for+Drugs%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Advanced+Research%22%5BJournal%5D)">Solid Lipd Nanoparticles (SLNs) - As Novel Lipd based Nanocarriers for Drugs.</a> International Journal of Advanced Research. 2 (1), 433-441 (2014).</li>
<li>Buse, J., El-Aneed, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Properties%2C+engineering+and+applications+of+lipid-based+nanoparticle+drug-delivery+systems%3A+current+research+and+advances%5BTitle%5D)+AND+%22Nanomedicine+%28Lond%29%22%5BJournal%5D)">Properties, engineering and applications of lipid-based nanoparticle drug-delivery systems: current research and advances.</a> Nanomedicine (Lond). 5, 1237-1260 (2010).</li>
<li>Malam, Y., Loizidou, M., Seifalian, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liposomes+and+nanoparticles%3A+nanosized+vehicles+for+drug+delivery+in+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Pharmacol+Sci%22%5BJournal%5D)">Liposomes and nanoparticles: nanosized vehicles for drug delivery in cancer.</a> Trends Pharmacol Sci. 30 (11), 592-599 (2009).</li>
<li>Lim, S. B., Banerjee, A., Onyuksel, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improvement+of+drug+safety+by+the+use+of+lipid-based+nanocarriers%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+controlled+release+%3A+official+journal+of+the+Controlled+Release+Society%22%5BJournal%5D)">Improvement of drug safety by the use of lipid-based nanocarriers.</a> Journal of controlled release : official journal of the Controlled Release Society. 163, 34-45 (2012).</li>
<li>Ali Khan, A., Mudassir, J., Mohtar, N., Darwis, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advanced+drug+delivery+to+the+lymphatic+system%3A+lipid-based+nanoformulations%5BTitle%5D)+AND+%22International+journal+of+nanomedicine%22%5BJournal%5D)">Advanced drug delivery to the lymphatic system: lipid-based nanoformulations.</a> International journal of nanomedicine. 8, 2733-2744 (2013).</li>
<li>Oussoren, C., Storm, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liposomes+to+target+the+lymphatics+by+subcutaneous+administration%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+drug+delivery+reviews%22%5BJournal%5D)">Liposomes to target the lymphatics by subcutaneous administration.</a> Advanced drug delivery reviews. 50, 143-156 (2001).</li>
<li>Shang, L., Nienhaus, K., Nienhaus, G. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineered+nanoparticles+interacting+with+cells%3A+size+matters%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nanobiotechnology%22%5BJournal%5D)">Engineered nanoparticles interacting with cells: size matters.</a> J Nanobiotechnology. 12, 5(2014).</li>
<li>Joshi, M. D., Muller, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipid+nanoparticles+for+parenteral+delivery+of+actives%5BTitle%5D)+AND+%22European+journal+of+pharmaceutics+and+biopharmaceutics+%3A+official+journal+of+Arbeitsgemeinschaft+fur+Pharmazeutische+Verfahrenstechnik+e.V%22%5BJournal%5D)">Lipid nanoparticles for parenteral delivery of actives.</a> European journal of pharmaceutics and biopharmaceutics : official journal of Arbeitsgemeinschaft fur Pharmazeutische Verfahrenstechnik e.V. 71, 161-172 (2009).</li>
<li>Torchilin, V. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Micellar+nanocarriers%3A+pharmaceutical+perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmaceutical+research%22%5BJournal%5D)">Micellar nanocarriers: pharmaceutical perspectives.</a> Pharmaceutical research. 24, 1-16 (2007).</li>
<li>Ashley, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+targeted+delivery+of+multicomponent+cargos+to+cancer+cells+by+nanoporous+particle-supported+lipid+bilayers%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+materials%22%5BJournal%5D)">The targeted delivery of multicomponent cargos to cancer cells by nanoporous particle-supported lipid bilayers.</a> Nature materials. 10, 389-397 (2011).</li>
<li>Patchan, M., et al. Nanotech; Nanotechnology 2013: Bio Sensors Instruments, Medical, Environment and Energy; Chapter 3: Materials for Dru., and Gene Delivery. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPatchan%2C+M+%22Nanobandage+for+controlled+release+of+topical+therapeutics%22">Nanobandage for controlled release of topical therapeutics</a>. 3, 255-258 (2013).</li>
<li>Forgiarini, A., Esquena, J., Gonzalez, C., C, S. Formation and stability of nano-emulsions in mixed nonionic surfactant systems. Trends in colloid and interface science XV. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aForgiarini%2C+A+%22Progress+in+Colloid+and+Polymer+Science%22">Progress in Colloid and Polymer Science</a>. Koutsoukos, P. 118, Springer Berlin. Heidelberg. 184-189 (2001).</li>
<li>Nantarat, T., Chansakaow, S., Leelapornpisid, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization%2C+characterization+and+stability+of+essential+oils+blend+loaded+nanoemulsions+by+PIC+technique+for+anti-tyrosinase+activity%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Pharmacy+and+Pharmaceutical+Sciences%22%5BJournal%5D)">Optimization, characterization and stability of essential oils blend loaded nanoemulsions by PIC technique for anti-tyrosinase activity.</a> International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences. 7, 308-312 (2015).</li>
<li>Sevcikova, P., Vltavska, P., Kasparkova, V., Formation Krejci, J. Characterization and Stability of Nanoemulsions Prepared by Phase Inversion. Proceeding MACMESE'11 Proceedings of the 13th WSEAS international conference on Mathematical and computational methods in science and engineering, , 132-137 (2011).</li>
<li>Forgiarini, A., Esquena, J., Gonzalez, C., Solans, C. Studies of the relation between phase behavior and emulsification methods with nanoemulsion formation. Trends in colloid and interface science XIV. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aForgiarini%2C+A+%22Progress+in+Colloid+and+Polymer+Science%22">Progress in Colloid and Polymer Science</a>. Buckin, V. 115, Springer. Berlin Heidelberg. 36-39 (2000).</li>
<li>Forgiarini, A., Esquena, J., Gonzalez, C., Solans, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Formation+of+nano-emulsions+by+low-energy+emulsification+methods+at+constant+temperature%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Formation of nano-emulsions by low-energy emulsification methods at constant temperature.</a> Langmuir. 17 (7), 2076-2083 (2001).</li>
<li>Cabone, C., Tomasello, B., Ruozi, B., Renis, M., Puglisi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+and+optimization+of+PIT+solid+lipid+nanoparticles+via+statistical+factorial+design%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Med+Chem%22%5BJournal%5D)">Preparation and optimization of PIT solid lipid nanoparticles via statistical factorial design.</a> Eur J Med Chem. 49, 110-117 (2012).</li>
<li>Raimondi, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mammalian+Target+of+Rapamycin+Inhibition+and+Alloantigen-Specific+Regulatory+T+Cells+Synergize+To+Promote+Long-Term+Graft+Survival+in+Immunocompetent+Recipients%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Mammalian Target of Rapamycin Inhibition and Alloantigen-Specific Regulatory T Cells Synergize To Promote Long-Term Graft Survival in Immunocompetent Recipients.</a> J Immunol. 184, 624-636 (2010).</li>
<li>Jhunjhunwala, S., Raimondi, G., Thomson, A. W., Little, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Delivery+of+rapamycin+to+dendritic+cells+using+degradable+microparticles%5BTitle%5D)+AND+%22J+Control+Release%22%5BJournal%5D)">Delivery of rapamycin to dendritic cells using degradable microparticles.</a> J Control Release. 133 (13), 191-197 (2009).</li>
<li>Kapse-Mistry, S., Govender, T., Srivastava, R., Yergeri, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanodrug+delivery+in+reversing+multidrug+resistance+in+cancer+cells.%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Nanodrug delivery in reversing multidrug resistance in cancer cells.</a> Front Pharmacol. 5 (159), 1-22 (2014).</li>
<li>Musacchio, T., Torchilin, V. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+developments+in+lipid-based+pharmaceutical+nanocarriers%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Biosci+%28Landmark+Ed%29%22%5BJournal%5D)">Recent developments in lipid-based pharmaceutical nanocarriers.</a> Front Biosci (Landmark Ed). 1 (16), 1388-1412 (2011).</li>
<li>Cerpnjak, K., Zvonar, A., Gašperlin, M., Vrečer, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipid-based+systems+as+a+promising+approach+for+enhancing+the+bioavailability+of+poorly+water-soluble+drugs%29%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Pharm%22%5BJournal%5D)">Lipid-based systems as a promising approach for enhancing the bioavailability of poorly water-soluble drugs).</a> Acta Pharm. 63 (4), 27-445 (2013).</li>
<li>Rodrìguez-Gascòn, A., Pozo-Rodrìguez, A., Solinìs, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+nucleic+acid+vaccines%3A+use+of+self-amplifying+RNA+in+lipid+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">Development of nucleic acid vaccines: use of self-amplifying RNA in lipid nanoparticles.</a> Int J Nanomedicine. 9, 1833-1843 (2014).</li>
<li>Almeida, A. J., Souto, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Solid+lipid+nanoparticles+as+a+drug+delivery+system+for+peptides+and+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Drug+Deliv+Rev%22%5BJournal%5D)">Solid lipid nanoparticles as a drug delivery system for peptides and proteins.</a> Adv Drug Deliv Rev. 59, 478-490 (2007).</li>
<li>Pardeshi, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Solid+lipid+based+nanocarriers%3A+an+overview%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Pharm%22%5BJournal%5D)">Solid lipid based nanocarriers: an overview.</a> Acta Pharm. 62, 433-472 (2012).</li>
<li>Attama, A. A., Momoh, M. A., Builders, P. F. Lipid Nanoparticulate Drug Delivery Systems: A Revolution in Dosage Form Design and Development. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAttama%2C+AA+%22Recent+Advances+in+Novel+Drug+Carrier+Systems%22">Recent Advances in Novel Drug Carrier Systems</a>. Sezer, A. D. , 107-140 (2012).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

במחקר זה, הסינתזה של SLNs ותחולתם ליישומי מיקוד תאיים נחקרו. חלקיקים ביולוגית אלה הראו הבטחה ככלי רכב משלוח עבור יישומים רבים, כולל משלוח סמים, השתקת גנים, וטכנולוגיות חיסון 25-30. SLNs קטן במיוחד היו מסונתז באמצעות תהליך קליל, ויחסי הגומלין שלהם עם תאי עור עיקריים ותאים חיסוניים ראשוניים נחקרו. SLNs נועד כוללת אנקפסולציה של צבע פלואורסצנטי (ניר), ששימש כמטען טיפולי מודל. שיטת PIT הועסקה לסנתז בלוטות ז...

כלי רכב המבוסס על ננו-חלקיקי משלוח הראו הבטחה גדולה עבור יישומי מיקוד תאיים, מתן מנגנון לשנות איתות תאית וביטוי גנים ספציפי. ניתן לטעון כלי רכב אלה עם סמים, חלבונים, וחומצות גרעין נועדו להשפיע תגובות הסלולר ולהשיג אפקט רצוי ברקמות יעד. סוגים רבים של nanocarriers נחקרו לתועלת טיפולית ואבחון כוללים שומנים, פולימרים, סיליקון, וחומרים מגנטיים. מערכות אלו הן אטרקטיביות בשל הפוטנציאל שלהם למשלוח סמים מקומיים, גדל ריכוז טיפולי ברקמות יעד, והפחתה של רעילות מערכתית. חלקיקים מוצקים שומנים (SLNs) הם דוגמא למדה היטב של מערכת מסירת ננו-חלקיקים שנוצר ככלי להעברת תרופות מבטיח בשנים האחרונות. SLNs אפשר לנסח בקלות ליישומים רבים, כולל 1 חישת ביו, קוסמטיקה 2, ולאמשלוח herapeutic 3-7. השירות שלהם נובע מהעובדה שהם מורכבים כולו משומני resorbable, רעילים, וכתוצאה מכך ההתאמה ביולוגית משופרת. במהלך סינתזה, ניתן לשלב תרופות lipophilic לכלי רכב בלוטת זקיף, ובכך להגדיל את מסיסות תרופה והתאמת לממשל parenteral. כלי רכב בלוטת זקיף גם לעזור לייצב תרופות כמוסות, הפחתת השפלה ואישורם, ולמקסם את הפעולה טיפולית. כלי רכב אלה הם גם מתאימים במיוחד למשחק ארוך, הכנות שחרור מבוקר בשל היציבות שלהם ב3,4,8,9 טמפרטורת גוף. חשוב לציין, אנקפסולציה של תרופות בחלקיקי שומנים משנה את פרופילי pharmacokinetic הפנימיים של מולקולות התרופה. זה מספק יתרון פוטנציאלי על ידי המאפשר שחרור המבוקר של תרופות עם מדד טיפולי צר. שיעור השחרור של תרופות-התאגד בלוטת זקיף יכול להיות מכוון המבוסס על קצב פירוק שומנים או שיעור דיפוזיה התרופה במטריצת שומנים. SLNs לעתים קרובות מהונדס להצטבר ברקמות יעד ספציפיות. לדוגמא, בגודל שלהם (בדרך כלל יותר מ -10 ננומטר) מגביר שייר במחזור, שבו כלי הדם הדולפים של רקמת גידול מקל בתצהיר. בנוסף, המסלול של ממשל חלקיקים הוכח לשנות biodistribution עם הפוטנציאל למקד מבנים פיסיולוגיים ספציפיים כגון בלוטות לימפה 10,11. על התצהיר ברקמות יעד, השיג אינטראקציות הסלולר מתאימות והפנמה סופית של חלקיקים הוא מאתגר בשל היכולת של קרום תא לשלוט באופן סלקטיבי את הזרימה של יונים ומולקולות לתוך ומחוץ לתא 12. כדי להקל על ספיגה תאית, ניתן לשנות nanocarriers עם ligands הספציפי כוללים פפטידים, מולקולות קטנות, ונוגדנים חד-שבטיים 13,14. מספר מנגנונים כוללים שתי חדירה פסיבית ותחבורה פעילה של חלקיקיםעל פני קרום התא תוארו בעבר 3,12,15. באופן כללי, זה כבר הוכיח כי אינטראקציות תא-ננו-חלקיקים מושפעות ממאפייני physicochemical של חלקיקים כולל גודל, צורה, תשלום פני השטח וכימיה של פני השטח, בנוסף לפרמטרי תא ספציפי כגון סוג תא או שלב מחזור תא 12. חקירה קודמת הדגימה את הסינתזה של תת-10 SLNs ננומטר עבור יישומי זיהוי אקטואליים 16 וסמן ביולוגי 1 בשיטת טמפרטורת היפוך השלב (PIT) 17. זוהי שיטת סינתזה עדינה שבו 2 הרכב נשאר קבוע בעוד הטמפרטורה משתנה בהדרגה. ערבוב רציף של הפתרון המחומם, כפי שהוא מתקרר לתוצאות RT בnanoemulsion. תוצאות תהליך זה בסינתזה של SLNs עם גודל חלקיקים קטן יותר 1 מזה שדווחו בעבר תוך שימוש בשיטות שונות לסינתזה של השומנים נאןoparticles 17-22. הגודל בקנה מידה וכתוצאה מכך, פחות מ -20 ננומטר, מספק יתרון עבור יישומי מיקוד תאיים בשל הגדלת שטח פנים ואת הפוטנציאל לאינטראקציות סלולריות משופרות. סכמטי של SLNs, נועד לספק צבע ניאון או טיפולי, מוצג באיור 1. SLNs מורכב (למשל, האלקאן ליניארי) מאפשר שילוב של תרכובות lipophilic (למשל, צבעים או הרפוי) וחיצוני פעילי שטח פנים שומנים (פעילי שטח לדוגמא, ליניארי nonionic) מוקף במים. במחקר זה, SLNs היו עמוס בצבע ניאון ומשמש כמודל לחקור אינטראקציות חלקיקי תאים. fibroblasts העיקרי אדם עור ותאים דנדריטים עכבר נחשפו לצבוע טעונים בלוטת זקיף לאורך זמן כדי לאפיין אינטראקציות ביחס לרעילות וספיגת חלקיקים. Assay 3 רומיד -2,5-diphenylphenyltetrazolium (4,5-dimethylthiazol-2-י.ל.) (MTT) היה utilized כדי להקים רמות מינון מתאימות. מיקרוסקופ פלואורסצנטי וcytometry זרימה היו שתי שיטות מועסקות לבחון ספיגת חלקיקים במבחנה. <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/53102/53102fig1.jpg" /> איור 1. סכמטי של בלוטת הזקיף מראה את המרכיבים העיקריים. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53102/53102fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a>

<table><tbody><tr><td>אדום הנילוס (NiR)</td><td>Sigma</td><td>19123</td><td>BioReagent, מתאים לפלואורסצנטיות, &ge; 98.0%</td></tr> <tr><td>Heneicosane</td><td>Aldrich</td><td>286052</td><td>98%</td></tr> <tr><td>Brij O10</td><td>Sigma</td><td>P6136</td><td>Brij 97, C18-1E10, פוליאוקסיאתילן (10) אתר אוליל</td></tr><tr><td>מים</td><td>סיגמא</td><td>W3500</td><td>מסנן סטרילי, BioReagent, מתאים לתרבית תאים</td></tr><tr><td>מסנן מזרק 0.2 ומיקרו; m Supor ממברנה נמוכה קשירת חלבון</td><td>מדעי החיים</td><td>PN4612</td> לא <td>פירוגני</td></tr><tr><td>Nanotrac Ultra&nbsp;</td><td>Microtrac</td><td>מספר סידורי U1985IS</td><td>מכשיר</td></tr><tr><td>סריקה דיפרנציאלית קלורימטר</td><td>Mettlet-Toledo</td><td></td><td>Institutement</td></tr><tr><td>פיברובלסטים אנושיים ראשוניים&nbsp;</td><td>Life Technologies</td><td>C-004-5C</td><td>Neonatal (HDFn)</td></tr><tr><td>Medium 106</td><td>Life Technologies</td><td>M-106-500</td><td>מדיום נוזלי סטרילי לתרבית פיברובלסטים עוריים אנושיים.</td></tr><tr><td>ערכת תוסף צמיחה נמוכה בסרום (ערכת LSGS)</td><td>Life Technologies</td><td>S-003-K</td><td>כל הרכיבים של</td></tr><tr><td>ערכת בדיקת התפשטות תאי</td> LSGS MTT מלאה <td>Trevigen</td><td>4890-025-K</td><td>ערכה רגישה למדידת התפשטות תאים המבוססת על הפחתת מלח הטטרזוליום, 3-[4,5-dimethylthiazol-2- yl]-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide (MTT)</td></tr><tr><td>Safire2 microplate reader</td><td>Tecan</td><td>----</td><td>מכשיר</td></tr><tr><td>פוספט חוצץ מלח&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>P5493</td><td>לביולוגיה מולקולרית</td></tr><tr><td>עכברים רקומביננטיים GM-CSF&nbsp;</td><td>Peprotech</td><td>315-03</td><td>>97%, על ידי SDS-PAGE בתנאים מצמצמים ומוצג על ידי כתם כסף.</td></tr><tr><td>עכברים רקומביננטיים IL-4&nbsp;</td><td>Peprotech</td><td>214-14</td><td>>97%, על ידי SDS-PAGE בתנאים מפחיתים ומוצג על ידי כתם כסף.</td></tr></tbody></table>

מוצקים שומנים חלקיקים (slns) אפליקציות לתאיות מיקוד

Solid Lipid Nanoparticles (SLNs) for Intracellular Targeting Applications

רכבי אספקה מבוססי ננו-חלקיקים הראו הבטחה גדולה ליישומי מיקוד תוך-תאיים, ומספקים מנגנון לשינוי ספציפי של איתות תאים וביטוי גנים. במחקר קודם, הודגמה סינתזה של ננו-חלקיקי שומנים מוצקים קטנים במיוחד (SLNs) לאספקת תרופות מקומיות ויישומי זיהוי סמנים ביולוגיים. SLNs הם דוגמה נחקרת היטב למערכת העברת ננו-חלקיקים שהתגלתה ככלי מבטיח להעברת תרופות. במחקר זה, SLNs הועמסו בצבע פלואורסצנטי ושימשו כמודל לחקירת אינטראקציות חלקיקים-תאים. שיטת טמפרטורת היפוך הפאזה (PIT) שימשה לסינתזה של אוכלוסיות קטנות במיוחד של ננו-חלקיקים תואמים ביולוגית. נעשה שימוש בבדיקת 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenylphenyltetrazolium bromide (MTT) על מנת לקבוע רמות מינון מתאימות לפני מחקרי האינטראקציה בין ננו-חלקיקים לתאים. יתר על כן, פיברובלסטים עוריים אנושיים ראשוניים ותאים דנדריטיים של עכברים נחשפו ל-SLN טעון צבע לאורך זמן והאינטראקציות ביחס לרעילות וספיגת חלקיקים אופיינו באמצעות מיקרוסקופיה פלואורסצנטית וציטומטריית זרימה. מחקר זה הראה כי SLNs קטנים במיוחד, כמערכת העברת ננו-חלקיקים, מתאימים למיקוד תוך-תאי של סוגי תאים שונים.

שיטת PIT שימשה לסנתז SLNs וטמפרטורת היפוך השלב נקבעה ניצול אמבט מים. הדגימות היו מחוממות לאט ובעדינות נסערת עד הפתרון הופיע ברור. טמפרטורת היפוך השלב לSLNs נעשה באמצעות השומנים heneicosane היא 45 מעלות צלזיוס. טבלת 1 מסכמת את גודל חלקיקים, polydispersity, נקודת התכה וחום כמוס של היתוך לSLNs. SLNs מסונתז באמצעות תנאי העיבוד שתוארו לעיל הביא SLNs השליטה וSLNs הטעון-ניר עם קוטר חלקיקים ממוצע של 18.59 ו16.87 ננומטר ועם polydispersity של 5.83 ו4.47, בהתאמה (איו...

במחקר זה תוארה שיטה לסינתזה של אוכלוסיות קטנות במיוחד של ננו-חלקיקים תואמים ביולוגית, כמו גם מספר שיטות מבחנה שבאמצעותן ניתן להעריך את האינטראקציות התאיות שלהם.

מוצקים שומנים חלקיקים (SLNs) אפליקציות לתאיות מיקוד

Nanoparticle-based delivery vehicles have shown great promise for intracellular targeting applications, providing a mechanism to specifically alter ...

המטרה הכללית של פרוצדורה זו היא לסנתז אוכלוסיות קטנות במיוחד של ננו-חלקיקים תואמי-ביולוגיה, לאפיין את תכונותיהם הפיזיקליות ולחקור את האינטראקציות בין החלקיקים לתאים. דבר זה מושג תחילה באמצעות שיטת טמפרטורת היפוך הפאזה לסנתז את הננו-חלקיקים השומניים. במהלך תהליך זה, השומן והחומר הפעיל שטחית מומסים יחד בתחילה.לאחר הוספת כמות ספציפית של מים, התערובת מחוממת עד להתרחשות הפרדה של פאזות. לאחר מכן, התערובת נערבבת באופן רציף עד ליצירת ננו-אמולסיה והשלמת הסינתזה של ננו-חלקיקי ליפיד מוצקים (sln). בשלב הבא, נעשה שימוש בפיזור אור דינמי (DLS) למדידת גודל החלקיקים והפולי-דיספרסיות.קלורימטריה סריקתית דיפרנציאלית (Differential scanning calorimetry) או DSC היא טכניקה נוספת המשמשת לקביעת נקודת ההתכה והחום החבוי של ההתכה על מנת לאפיין את החלקיקים באופן מעמיק יותר; לבסוף, ניתן להשתמש במיקרוסקופיה פלואורסצנטית ובציטומטריה של זרימה כדי לחקור את האינטראקציות בין החלקיקים לתאים. היתרון המרכזי של טכניקה זו על פני שיטות אנרגיה גבוהה קיימות, כגון אולטרסוניקציה, מיקרופלואידיקה והומוגניזציה בלחץ גבוה, הוא שזוהי טכניקת סינתזה עדינה יחסית, שהיא פשוטה וניתנת להרחבה (scalable). כדי לסנתז את ה-LNS, שלבו 0.6 milligrams של צבע פלואורסצנטי או תרכובת ליפופילית אחרת ו-0.10 grams של alkan ליניארי או ליפיד.במבחנה בנפח 15 מיליליטר, המס את הרכיבים בטמפרטורה של 90 °C תוך כדי ערבוב, והוסף 0.11 גרם של חומר פעילי שטח לא-יוני לינארי. לאחר מכן, המס את התערובת שהתקבלה בטמפרטורה של 90 °C תוך כדי ערבוב. בשלב הבא, הוסף לתערובת 1.79 גרם של מים סטריליים, חמם ל-90 °C ועקוב חזותית אחר התמיסה עד להופעת שני מופעים.כעת ערבבו את התערובת עד להיווצרות ננו-אמולסיה שקופה. הכינו במקביל ננו-אמולסיה נפרדת ללא הוספת הצבע הפלואורסצנטי, כדי שתשמש כדגימת ביקורת. Sterilize כל ננו-אמולסיה באמצעות מסנן סטרילי של 0.2 מיקרון.השתמש ב-DLS למדידת גודל החלקיקים והפולי-דיספרסיות של ה-S lns באמצעות מכלי זכוכית במכשיר המיועד למדידת גודל חלקיקים. לפני מדידת הדגימות, יש למדוד את גודל החלקיקים של שני סטנדרטים ידועים, בהתאם לפרוטוקול היצרן להכנה ומדידה של הסטנדרטים. לאחר מכן, מדוד את הדגימות כפי שהוכנו עבור כל אחת. השתמש בזמן ריצה של 100 seconds, במקדם השבירה של מים ובצמיגות של מים ב-20 °C.דווחו על קוטר החלקיקים הממוצע ועל מדד הפולי-דיספרסיביות של התפלגות גודל החלקיקים. כדי לבחון את ההתנהגות התרמית של ה-S lns באמצעות DSC, העבירו תחילה את ה-S LNS באמצעות פיפט למחברון אלומיניום של 40 µL במסה של כ-25 mg. אטמו את המחברון הרמטית באמצעות מכבש דחיסה (crimp press) אוניברסלי כדי למזער את איבוד הלחות במהלך סריקת ה-DSC. לפני מדידת כל ננו-אמולסיה מ-5 עד 80 °C, דווחו על נקודת ההמסכה ועל החום החבוי של ההמסכה מתוך גרף ה-DSC, כאשר השפל מייצג את נקודת ההמסכה והאינטגרל של השטח תחת העקומה מייצג את החום החבוי.בגרף ה-DSC, החלוקה לכמות החומר מייצגת את החום הסמוי של התכת התרבית. פיברובלסטים אנושיים ראשוניים בהתאם להוראות היצרן במצע נוזלי לתרבית של פיברובלסטיים עוריים אנושיים. בתוספת ערכת תוסף צמיחה עם סרום נמוך, שמרו את התאים באטמוספירה לחה בטמפרטורה של 37 °C, 5% carbon dioxide ובצעו תת-תרבית עם הגעה ל-80% confluence עבור ניתוח MTT וניתוח דימוג seed cells.בפלטה של 96 בארות בצפיפות של 20,000 תאים לבאר. יש לאפשר לתאים להגיע לשיווי משקל ב-37 °C למשך הלילה. לפני החשיפה ל-SLN בנקודת הזמן אפס, יש לדלל את ה-SLNs במצע מלא כדי להגיע לריכוז הליפידים הרצוי, ולהוסיף 10 µL לבאר לכל באר חזרה בפלטה של 96 בארות. לאחר 24 שעות של אינקובציה עם SLNs, קבע את החיות התאית באמצעות בדיקת MTT בהתאם לפרוטוקול היצרן. שטוף את התאים פעם אחת והוסף 100 µL של מצע טרי לכל באר.השמידו את בארות הביקורת על ידי דגירה בתמיסת methanol 70% למשך 10 דקות לפני החלפתן במצע טרי. הוסיפו את ריאגנט ה-MTT בנפח של 10 µL לבאור לכל באור במיקרופלטה ודגרו למשך לילה בטמפרטורה של 37 °C. לאחר הדגירה הלילית, המיסו את הצורה התוך-תאית ואת הגבישים באמצעות 100 µL מתמיסת הדטרגנט המסופקת. בהתאם לפרוטוקול היצרן, דגרו את התאים בתמיסת הדטרגנט למשך שלוש שעות בטמפרטורת החדר לפני קבלת ערכי הבליעה (absorbance).שימוש בקורא מיקרופלייטים כהכנה למיקרוסקופיה. שטפו את הפיברובלסטים פעמיים במיאלח פוספט סטרילי (PBS). קבעו את התאים למשך 10 דקות במתנול קר בריכוז 70% בנקודות זמן ספציפיות לאחר מתן lns לפיברובלסטים.לאחר 10 דקות, החלף את המתנול בתמיסת סליין עם בופר פוספט (PBS) לפני צילום התמונות באמצעות מיקרוסקופ הפוך. ה-S SLN שסונתזו הניבו S LNS של ביקורת עם קוטר חלקיקים ממוצע של 18.59 ועם פולי-דיספרסיה של 5.83, ו-SLMs טעונים ב-Nile red עם קוטר חלקיקים ממוצע של 16.87 ננומטרים ועם פולי-דיספרסיה של 4.47, כפי שנמדד בבדיקת MTT. נמדדה השפעת התגובה למינון על המטבוליזם התאי, כאשר עלייה בריכוז החלקיקים הובילה לירידה בחיוניות התאית.לא נצפתה הבדל ברעילות בין תאים שנחשפו ל-SLN לבדם לבין תאים שנחשפו ל-SLN טעונים ב-Nile red. במקביל, נבחנו התאים באופן חזותי להערכת ההיצמדות למצע תרבית הרקמה מפוליסטירן, ונלקחו תמונות כדי להדגים הן מורפולוגיה תאית רפרזנטטיבית והן את ספיגת החלקיקים הפלואורסצנטיים לאורך זמן, תוך שימוש במינון השווה ל-5 µg/mL.ספיגת חלקיקי ליפידים נצפתה שעתיים לאחר החשיפה. רמת ההטמעה של הננו-חלקיקים נקבעה על ידי מדידת עוצמת הפלואורסצנציה של Nile red בתאי דנדריטיים המופקים ממוח עצם של עכברים, או B MDCs, באמצעות ציטומטריה זרימתית. נצפתה קורלציה ישירה בין ריכוז ה-SNS שנעשה בו שימוש לבין כמות הפלואורסצנציה שנמדדה ב-B MDCs.לאחר צפייה בסרטון זה, תרכשו הבנה טובה לגבי האופן שבו מסנתזים אוכלוסיות קטנות במיוחד של ננו-חלקיקים תואמי-ביולוגיה, מאפיינים את תכונותיהם הפיזיקליות וחוקרים את האינטראקציות בין החלקיקים לתאים.

solid-lipid-nanoparticles-slns-for-intracellular-targeting

Research

JoVE Journal

Bioengineering

הנדסה ביולוגית

זריקות רטרו מסלולית חוזרות ונשנות של מתחמי קטיוני liposomes/siRNA/ITSN-1s בעכברים, בכל 72 שעות למשך 24 ימים, ביעילות לספק דופלקס siRNA לmicrovasculature ריאות עכבר הפחתת mRNA ITSN-1S וביטוי חלבון על ידי 75%. טכניקה זו היא שחזור מאוד במודל של בעלי חיים, אין לו תופעות לוואי ונמנע הרוגים.

השתקה ארוכת טווח של Intersectin-1S בעכבר על ידי משלוח ריאות חוזר ונשנה של siRNA ספציפי באמצעות ליפוזומים קטיוני. הערכה של השפעות מציאה על ידי מיקרוסקופית אלקטרונים

אנו מדווחים על יישום חכם של ננו-צינורות פחמן לייצוב קינטי של חלקיקי שומנים המכילים ננו-מבנים בהרכבה עצמית בליבותיהם. הכנת חלקיקי שומנים דורשת ריכוזים נמוכים למדי של ננו-צינורות פחמן המאפשרים את השימוש בהם ביישומים ביו-רפואיים כגון מתן תרופות.

הכנה קלילה של פנימית עצמית התאספו חלקיקים ליפידים מיוצב על ידי פחמן

מטרת פרוטוקול זה היא להשתמש בליפוזומים קטיוניים/אניונים עם פפטיד ממוקד עצבי כמערכת העברת מערכת העצבים המרכזית כדי לאפשר ל-siRNA לחצות את ה-BBB.  אופטימיזציה של מערכת אספקה לטיפולים, כמו siRNA, תאפשר אפשרויות טיפול נוספות לפריונים ומחלות ניווניות אחרות.

משלוח siRNA טיפולית על מערכת העצבים המרכזית באמצעות קטיוני anionic ליפוזומים

ננו-חלקיק גביש נוזלי (LCNP) nanocarrier מנוצלת ככלי עבור במסירה מבוקרת של מטען הידרופובי אל קרום הפלזמה של תאים חיים.

משלוח הממברנה ממוקד על Encapsulated מטענים הידרופובי בנושאת Nanoparticle קריסטל נוזלת

כאן נתאר פרוטוקול לדור של cationic nanoliposomes, אשר מבוססת על שיטת יבש-סרט והוא יכול לשמש עבור הכספת, אספקה יעילה של במבחנה עיבד RNA שליח.

דור של Cationic Nanoliposomes למסירה יעיל של במבחנה עיבד RNA שליח

מאמר זה מתאר את ומגעים falcarindiol ב מצופים השומנים חלקיקים nm 74. ספיגת הסלולר של חלקיקים באמצעות תאי גזע אנושי לתוך טיפות השומנים מנוטרת על ידי הדמיה פלורסנט, קונפוקלי. חלקיקים מיוצרים בשיטת הזרקת מהירה של הממס הסטה, הגודל שלהם נמדד עם טכניקה פיזור אור דינאמי.

ספיגת של חלקיקים חדשים מצופים השומנים, המכיל Falcarindiol על ידי גזע אנושי Mesenchymal

שיטות להכין ולאפיין את המאפיינים הפיסיוכימיים ואת אתריים של מחויב נייטרליים, מגיב pH-תגובה sirna מוצגים. הקריטריונים של siRNA nanomedicines מוצלחת כגון גודל, מורפולוגיה, טעינה משטח, העמסה siRNA, והשתקה גנים נדונים.

הכנת מנטרל-טעון, pH-מגיבים חלקיקים פולימריים עבור משלוח ציטוזה מסירה

מחקר זה מתאר לחות קלאסית באמצעות שיטת הסרט דק השומנים לקראת nanoliposome סוימים ואחריו ננו-חלקיק אפיון. 47 kDa-hydrophilic וחלבון כדורי, טארין, הוא כיום בהצלחה כאסטרטגיה כדי לשפר את היציבות, להימנע הרשאה מהירה, ולקדם שחרור מבוקר. ניתן להתאים את השיטה לעטיפת מולקולות הידרופובי.

הכנה ואפיון ננו-פוטזומים לצורך מלכודת הידרופיזיאליות של חלבונים ביולוגיים

הפרוטוקול מציג את הפרמטרים אופטימיזציה עבור הכנת ליפוזומים תרמיים באמצעות המכשיר מיקרו מיקרופלולה המתלא. זה גם מאפשר משותף של דוקסורוביצין ו indocyanine ירוק ליפוזומים ושחרור פוטותרמי המופעל של דוקסורוביצין עבור שליטה מבוקרת/תרופה שהופעלה.

הפקת מיקרופלואידים של Lysolipid המכילים טמפרטורה רגישה ליפוזומים

חלקיקי שומנים מפותחים באמצעות גישה פלטפורמת ערבוב microfluidic עבור mRNA ו- DNA אנקפסולציה.

גיבוש ואפיון חלקיקי שומנים בדם לאספקת גנים באמצעות פלטפורמת ערבוב מיקרופלואידית

הודגם פרוטוקול מפורט לסינתזה של ננו-חלקיקי שומנים (LNPs) באמצעות טכנולוגיות מיקסר סילון פוגע כלוא (CIJ), כולל CIJ דו-סילוני ומערבל מערבולות רב-סילוני בעל ארבעה סילונים (μMIVM). מערבלי CIJ יוצרים סביבות מיקרו-ערבוב טורבולנטיות הניתנות לשחזור, וכתוצאה מכך מייצרים LNPs חד-מפוזרים.

סינתזה של ננו-חלקיקי שומנים על ידי זרימה טורבולנטית במערבלי סילון פוגעים מוגבלים

למד שיטת סינתזה עדינה לננו-חלקיקים שומניים ביוא-תואמים באמצעות שיטת טמפרטורת היפוך הפאזה. שיטה זו מאפשרת אפיון תכונות פיזיקליות והערכת אינטראקציות תאיות ליישומים ביורפואיים מתקדמים.

מוצקים שומנים חלקיקים (SLNs) אפליקציות לתאיות מיקוד

גלה סרטונים נוספים