הערכת רגישות התנהגות נגרמת קוק העדפות מקום אלפו עכברים

המטרה הכללית של משימות התנהגותיות אלו היא לאפשר לחוקרים לבחון התנהגויות הקשורות לסמים, כגון תגמול ורגישות-יתר (sensitization). שיטות אלו יכולים לסייע במתן מענה לשאלות מפתח בתחום התמכרויות לסמים, כגון אילו מולקולות או מסלולים תורמים לפלסטיות המושרה על ידי סמים. היתרון העיקרי של טכניקות אלו הוא שהן בעלות תפוקה גבוהה וניתן לבצען באמצעות ציוד תוצרת בית או ציוד שנרכש. כאשר אנו מבצעים בדיקות של העדפת מקום מותנית (conditioned place preference - CPP) באמצעות מינונים שונים של סם, גישה זו יכולה לחשוף הבדלים הנובעים מרגישות משתנה לסם ולספק ביטחון נוסף בממצאים שלכם. ניסוי זה משתמש בתיבות CPP בעלות שלושה תאים המצוידות בקרני אור (photo beams) לאיסוף נתונים אוטומטי. החזיקו ארבע תיבות או יותר זמינות. למכשיר זה יש שני תאים גדולים, A ו-B, אליהם ניתן להכניס עכברים דרך מכסה. בתוך כל תא נמצא מקור אור ניתן לעמעום. התאים A ו-B נבחרים כך שיהיו מובחנים חזותית, לדוגמה, לבן מול שחור, וכן מובחנים מבחינה תחושתית, כגון באמצעות מרקמי רצפה שונים. בין שני התאים הגדולים נמצא תא ניטרלי קטן ומקשר, או C, הנגיש באמצעות דלתות הזזה. לפרטים נוספים על תיבות ה-CPP, כולל מידע חשוב על הגדרת תכנון מאוזן (balanced design), עיינו בפרוטוקול הכתוב. עבור ניסויים אלו, השתמשו בעכברים שעברו טיפול שגרתי (handling) כדי למזער את השפעת השונות בטיפול בבעלי החיים על התוצאות. הכינו את חדר הבדיקות, נקו את תיבות ה-CPP ביסודיות. הדליקו את הציוד ועממעו את אורות החדר. לאחר מכן, העבירו את העכברים לאזור הבדיקה 60 עד 90 דקות לפני הניסוי. ביום הבדיקה הראשון, בצעו מבחנה מקדמה (pre-test). הכינו את התאים על ידי פתיחת הדלתות שבין התאים. לאחר מכן, פתחו את תוכנת המחשב. טענו את תוכנית הבדיקה. שם, הזינו את מזהי בעלי החיים והנחיתו את פקודת ההתחלה. כשאתם מוכנים, הניחו בעדינות כל עכבר בתא האמצעי של המכשיר שהוקצה לו. לאחר הבדיקות המקדמיות, החזירו את העכברים לכלובים הביתיים שלהם וייצאו את הנתונים. מתוצאות המבחנה המקדמה, קבעו את ההעדפה של כל בעל חיים לתאים A ו-B. החסירה את הזמן שהועבר בכל אחד מהם מהשני, והשתמשו בהפרש כאינדקס. שימו לב במיוחד לבעלי חיים עם העדפות חזקות במבחנה המקדמה, המוצגות כאן באדום, כפי שמתואר בפרוטוקול הכתוב. בחרו את התא המשויך לסם עבור כל עכבר בהתבסס על תוצאה זו. יש להפוך את סכום ציוני האינדקס עבור כל קבוצת בדיקה לשקול וקרוב לאפס. במילים אחרות, בחרו את הצד המועדף עבור כחצי מהעכברים. כמו כן, שייכו את בעלי החיים באופן שווה לתאים A ו-B בתוך כל קבוצה. אם ברצונכם לבצע התניה למספר קבוצות בו-זמנית, נסו לשייך בעלי חיים המשתמשים באותו מכשיר לתאים מנוגדים. לפרטים נוספים, עיינו בפרוטוקול הכתוב. שלב קריטי בהעדפת מקום מותנית בעת שימוש בתכנון מאוזן הוא שיוך התאים המשויכים לסם כך שציוני המבחנה המקדמה יהיו כמעט שווים עבור כל קבוצות הבדיקה וקרובים ככל האפשר לאפס או להיעדר העדפה. כדי להתחיל, שקלו תמיד כל עכבר לפני שלב ההתניה. ביום ההתניה הראשון, הכינו מזרקים עם קוקאין או הסם הנבדק שנבחר בהתאם למשקל הגוף של כל בעל חיים. בימים חלופים, הכינו מזרקים עם סליין (תמיסת מלח) או נושאי סם (vehicle) מתאימים אחרים. הכינו את התיבות על ידי סגירת הדלתות שבין התאים. טענו את תוכנית ההתניה במחשב, הזינו את המזהים והפעילו את התוכנית. לאחר מכן, מזריקו לבעלי החיים את מנת הסם או הנושאי סם והכניסו אותם לתיבה שהוקצתה להם. קריטי להבטיח שההתניה מתרחשת בתאים A או B הנכונים עבור כל עכבר, בכל יום, כפי שנקבע, שכן טעויות בשלב זה עלולות להוביל להסרת בעלי חיים מהמחקר. לאחר לא יותר מ-30 דקות של התניה, החזירו את העכברים לכלובים הביתיים שלהם. כשכל הניסויים הושלמו, ייצאו את הנתונים והחזירו את העכברים למושבה. בדיקה זו משתמשת במערכי קרני אור של ארבע על שמונה שהם בגודל 20 אינץ' על 11.5 אינץ'. החזיקו בין ארבע ל-16 מערכים זמינים. הכניסו כל מערך לתא פלקסיגלס שחור פתוח מלמעלה. בחדר הבדיקות, הכינו אור אדום להארת התאים. בתוכנה, הכינו את הפגישות של התוכנית עבור הרגלה יומית וניסויי הזרקה. ראשית, הגדירו את אורך ניסוי ההרגלה ל-30 עד 60 דקות. שעה היא נקודת התחלה טובה. הגדירו את רישום קטיעות הקרן במרווחי זמן של חמש דקות או פחות. שנית, הגדירו את זמן הניסוי בכל תא כך שיתחיל כאשר קרן האור הראשונה נקטעת, מה שקורה לאחר שהניסוי הופעל עם סיגנל התחלה. שלישית, הגדירו את אורך ניסוי ההזרקה ל-60 עד 120 דקות. אם אפשר, בניסויי הזרקה, בחרו להפעיל את סיגנלי ההתחלה ממערכי קרני האור באופן אינדיבידואלי ולא בבת אחת. רגישות-יתר לוקומוטורית (locomotor sensitization) דורשת הרצה ראשונית של בדיקות במשך 10 או 11 ימים רצופים. בכל יום, הביאו את העכברים לחדר ההמתנה ההתנהגותי 30 עד 60 דקות לפני הבדיקה. כעת, הניחו כלוב עכברים שקוף ונקי בכל תא. ודאו שקרני האור ממורכזות על הציר הארוך של כל כלוב. כשאתם מוכנים, הוציאו את העכברים בסדר אקראי מכלוביהם הביתיים. ראשית, אחזו אותם בעורף ושקלו אותם. לאחר מכן, הניחו כל אחד מהם בכלוב בדיקת לוקומוציה שהוקצה לו לניסוי ההרגלה וכסו במכסה. כל יום כולל ניסוי הרגלה ללא הזרקה, ולאחריו ניסוי הזרקה. במהלך ניסוי ההרגלה, הכינו מזרקים בהתבסס על משקל הגוף הנוכחי של כל עכבר. לאחר שכל ניסויי ההרגלה הסתיימו, טענו את תוכנית ניסוי ההזרקה והיכנסו בשקט לחדר הבדיקות. לאחר הזרקה לעכבר, הפעילו במהירות את סיגנל התחילת הכלוב בתוכנה, ואז החזירו את העכבר לכלוב הבדיקה שלו. במהלך שלושת או ארבעת ימי הבדיקה הראשונים, מזריקו סליין או נושאי סם מתאימים אחרים. במהלך שבעת הימים הבאים, מזריקו קוקאין או את הסם הנבדק שנבחר. לאחר שכל ניסויי ההזרקה הסתיימו, החזירו את העכברים לחדר המגורים שלהם. בבדיקת ה-CPP, עכברים מסוג wild type C57 black 6n הותנו עם סליין בלבד, או עם שני ריכוזים שונים של קוקאין. קבוצת הסליין בלבד לא הראתה שינוי בהעדפה לאחר ההתניה, כצפוי, בעוד שהעדפות מוגברות נצפו בקבוצות שטופלו בקוקאין. הזמן שהועבר בתאים שונים לפני ואחרי הבדיקה הוכיח כי עכברים שטופלו בקוקאין בילו זמן רב יותר בתא המשויך לקוקאין מאשר בכל תא אחר. עכברים שקיבלו סליין בלבד לא הראו הבדלים בולטים בהעדפת תאים, כצפוי. לאחר מכן, בוצעה בדיקת לוקומוציה בעכברי C67 black 6n. הזרקות סליין ניתנו במשך שלושה עד ארבעה ימים, ולאחריהן הזרקות קוקאין בארבעה מינונים שונים במשך שבעה ימים. כצפוי, נצפו שינויים בולטים יותר בהתנהגות עם מינונים עולים של קוקאין. כאתגר, לאחר שבוע עד שבועיים של גמילה, כל קבוצה קיבלה את מינון הקוקאין המקורי. לאחר מכן ניתנו אתגרים נוספים עם תקופות גמילה ומינונים משתנים. למרות שסרטון זה הדגים טכניקות אלו באמצעות ציוד שנרכש מסחרית, מעבדות רבות ביצעו אותן בהצלחה באמצעות מכשירים שנבנו באופן עצמאי. בעת ניסוי בפרוצדורות אלו, חשוב להבטיח שכל בעלי החיים מקבלים טיפול שווה כדי להפחית סטרס, טעויות ושונות בין ניסויים. משתנים שיש להביא בחשבון כוללים את זמן הטיפול ואת הזמן שהועבר בחדר הבדיקה ובתא. ייתכן שיהיה רצוי לבצע הרחבות לבדיקות אלו, כולל הכחדה (extinction) והחזרה (reinstatement) עבור CPP, ואתגרי רגישות-יתר לטווח ארוך או רגישות-יתר צולבת (cross-sensitization) עבור רגישות-יתר לוקומוטורית. בנוסף, חשוב להשתמש בסמים נטולי