פרוטוקול מתח מתון כרוני בלתי צפוי לתסמיני דיכאון ייזום, שינויים התנהגותיים ותוצאות בריאותיות שליליות במכרסמים

המטרה הכוללת של הניסוי הבא היא לחשוף זן של מכרסמים לסדרה של גורמי עקה כרוניים ולא צפויים שנקבעים באופן אקראי, כך שהבעל לא יוכל לפצות על כך ביעילות ותתפתח חומרה גוברת של תסמיני דיכאון. דבר זה מושג על ידי חשיפה יומית לאחד מרשימה של גירויים אפשריים שנועדו להיות מעיקים אך לא מזיקים או פוגעים בבעל החיים. בעלי החיים נחשפים לגורמי העקה חמישה עד שישה ימים בשבוע במשך שמונה שבועות במרווחי זמן קבועים; בעלי החיים נמצאים במעקב אחר התפתחות תסמיני דיכאון באמצעות הערכת מצב הכלוב ותגובות בעלי החיים לגירויים המוטלים עליהם, כגון מבחן תרסיס סוכרוז.

התוצאות מראות כי החלת גורמי עקה כרוניים, אקראיים ולא פתירים בסביבת בעל החיים, מונעת את יכולתו להסתגל וגורמת להתפתחות של סימפטומים דיכאוניים במהלך מספר שבועות. שיטה זו יכולה לסייע במתן מענה לשאלות מפתח בתחום המחלות הכרוניות, כגון השאלה כיצד סימפטומים דיכאוניים כרוניים עלולים להוביל לתוצאות בריאותיות שליליות ברקמות או במערכות איברים אחרות. הרעיון להשתמש בשיטה זו עלה לראשונה כאשר למדנו על הקשרים התחלואתיים העמוקים בין מחלות קרדיווסקולריות מתקדמות לבין סיכון למחלה באוכלוסיות הקליניות שלנו, ועל ההופעה המקבילה של מחלות דיכאוניות קשות.

מי שידגימו את הפרוצדורה הם מר סטיבן ברוקס וגב' קיילה ברנון, סטודנטים לדוקטורט מהמעבדות שלנו. על מנת להעניק עקה קלה לעכברי בית בכלובים נפרדים ולחשוף את העכברים לגורם עקה אחד או שניים ביום למשך שלוש עד ארבע שעות לפחות עבור כל גורם עקה, יש לבצע את רשימת גורמי העקה הבאה בלוח זמנים אקראי. עבור גורם העקה של מצע לח: יש להרטיב את המצע על ידי מזיגת 10 עד 20 ounces של מים נקיים לתוך כלוב סטנדרטי.

השאירו את העכבר בכלוב לח למשך שלוש עד ארבע שעות. הסירו את מצע הכלוב למשך שלוש עד ארבע שעות, ולאחר מכן העבירו את העכבר לגורם עקה אחר הדורש כלוב ריק, או הניחו אותו בכלוב נקי עם מצע טרי. הטו כלובים ללא מצע בזווית של כ-45 מעלות למשך שלוש עד ארבע שעות באמצעות חפץ יציב שיישאר במקומו בעוד העכבר נע בתוך הכלוב. עבור גורם עקה זה, שנו את מחזורי האור והחושך הרגילים של 12 שעות אור ו-12 שעות חושך לרצף של פרקי זמן של 30 דקות, למשך שמונה שעות בסך הכל.

העבירו את העכבר מכלוב המגורים שלו לכלוב של עכבר שכני שהוצא ממנו למשך תקופת הגורם למתח של שלוש שעות. הסירו את מצע הכלוב והוסיפו מים לעומק של כ-0.25 inches עבור העכברים, והשאירו את העכבר למשך כארבע שעות. בסיום החשיפה למים, ייבשו את העכבר קצרות באמצעות מגבת רכה.

חשפו את העכברים לטורף, לריחות או לצלילים על ידי הוספת קבוצות פרווה המפוזרות באופן אקראי או 10 עד 20 milliliters של שתן ממין טורף טבעי לתוך הכלוב, והשאירו את העכבר למשך שלוש עד ארבע שעות. לחלופין, השמיעו קולות נהימה או רעשים של מיני טורפים טבעיים בקרבת הכלובים למשך שלוש שעות בסוף כל תקופת לחץ יומית. העבירו את העכברים לכלובים נקיים והחזירו אותם למתקן הגידול מדי יום.

בחנו כל בעל חיים פעם בשבוע כדי לזהות פצעים או נגעים העשויים לדרוש טיפול וטרינרי; השתמשו בשני חוקרים שהוכשרו בהערכת קוד הטיפוח (grooming code). בחנו כל בעל חיים והקצו ציון קוד שבועי על סולם שבין אפס לאחד. חשבו את הציון האישי על ידי הקצאת ציונים אישיים של אפס (המשמעות היא נקי) או אחד (המשמעות היא מלוכלך) עבור כל אחד משמונה אזורי גוף.

הראש, הצוואר, הפרווה הגבית, הפרווה הבטנית, הזנב, ארבעת הגפיים, הגפיים האחוריות והאזור הגניטלי. הניחו את החיה בכלוב נקי המרופד בפד כותנה או במגבת כדי למנוע מהמצע להידבק לפרוותה. לאחר מכן, רססו תמיסת sucrose בריכוז 10% על הראש והפרווה הגבית של כל חיה ורשמו את סך התנהגות הטיפוח למשך חמש דקות.

מדדו את זמן ההשהיה (latency) ואת התדירות של פעילות טיפוח הפנים במהלך זמן זה. זמן ההשהיה הוא פרק הזמן שבין הריסוס הראשון לבין תחילת טיפוח הפנים, ואת התדירות יש למדוד כמספר הפעמים שבהן בוצע טיפוח הפנים. לאחר שמונה שבועות של סטרס מתמשך קל ולא צפוי (unpredictable chronic mild stress), נצפו שינויים משמעותיים הן בתוצאות ההתנהגותיות והן בתוצאות הפיזיולוגיות במכרסמים שנחשפו לסטרס כרוני בהשוואה לזני הביקורת שלא נחשפו לסטרס.

עכברים פיתחו תסמינים דמויי דיכאון בעקבות לחץ כרוני קל בלתי צפוי, והראו ירידה הדרגתית במדדי טיפוח הפרווה. התדרדרות ניכרת זו במצב הפיזי של הפרווה מרמזת על ירידה בפעילות הטיפוח ועשויה להקביל לחוסר מוטיבציה. ראיות מהזמן האחרון הצביעו על כך שקיים שוני כמותי משמעותי בתגובות ללחץ כרוני קל בלתי צפוי בין עכברים זכרים לנקבות.

באופן ספציפי, נתונים מצביעים על כך שעכברים נקבות שנחשפו לפרוטוקול סטרס זהה לזה של זכרים בעלי גיל תואם, מפתחות תגובות התנהגותיות חמורות יותר לפרוטוקול מאשר הזכרים. בעקבות הליך זה, ניתן לבצע בקלות שיטות נוספות המתאימות לתפקוד ספציפי של איברים כדי לענות על שאלות נוספות, כגון כיצד נוכחות של תסמיני דיכאון כרוניים יכולה להשפיע על התפקוד התקין של מערכת האיברים הנבדקת. לאחר צפייה בסרטון זה, תהיה לכם הבנה טובה לגבי האופן שבו ניתן להשתמש בשלבים ובפרוצדורות השונות בפרוטוקול ה-UCMS כדי ליצור באופן הדרגתי תנאים של תסמיני דיכאון גוברים במודל המכרסמים שלכם.