Name: פענוח ופתוגנזה הדמיה והשתרגות Abscessus Mycobacterium בעוברי דג הזברה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-09-09T15:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 38 s
Description: חקור את האינטראקציות בין Mycobacterium abscessus למערכת החיסון המולדת בעוברי דג הזברה שקופים באמצעות הדמיית פלואורסצנציה. שיטה זו מאפשרת לחקור תהליכי זיהום בזמן אמת ותפקיד המקרופאגים בבקרת החיידקים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מודים לק Kissa לדיונים מועילים ולמתן Lipo-clodronate ול &#39;Ramakrishnan למתנה הנדיבה של pTEC27 וpTEC15 המאפשרים ביטוי של tdTomato וואסאבי, בהתאמה. חלק צורות עבודה זו של הפרויקטים של הסוכנות הלאומית למחקר הצרפתי (ANR ZebraFlam-10-MIDI-009 וDIMYVIR ANR-13-BSV3-007-01) ותכנית המסגרת השביעית של הקהילה האירופית (FP7-אנשים-2011-ITN) על פי הסכם מענק לא. PITN-GA-2011-289209 להדרכה ראשונית רשת FishForPharma מארי קירי-. אנו מאחלים גם להודות לאיגוד גרגורי Lemarchal וVaincre La Mucoviscidose (RF20130500835) למימון CM דופון.

<ol><li>Brown-Elliott, B. A., Wallace, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+and+taxonomic+status+of+pathogenic+nonpigmented+or+late-pigmenting+rapidly+growing+mycobacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Microbiology+Reviews%22%5BJournal%5D)">Clinical and taxonomic status of pathogenic nonpigmented or late-pigmenting rapidly growing mycobacteria.</a> Clinical Microbiology Reviews. 15 (4), 716-746 (2002).</li>
<li>Aitken, M. L., Limaye, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Respiratory+outbreak+of+Mycobacterium+abscessus+subspecies+massiliense+in+a+lung+transplant+and+cystic+fibrosis+center%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Respiratory+and+Critical+Care+Medicine%22%5BJournal%5D)">Respiratory outbreak of Mycobacterium abscessus subspecies massiliense in a lung transplant and cystic fibrosis center.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 185 (2), 231-232 (2012).</li>
<li>Gilljam, M., Lindblad, A., Ridell, M., Wold, A. E., Welinder-Olsson, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+epidemiology+of+Mycobacterium+abscessus%2C+with+focus+on+cystic+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Molecular epidemiology of Mycobacterium abscessus, with focus on cystic fibrosis.</a> Journal of Clinical Microbiology. 45 (5), 1497-1504 (2007).</li>
<li>Roux, A. -L., Catherinot, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multicenter+study+of+prevalence+of+nontuberculous+mycobacteria+in+patients+with+cystic+fibrosis+in+France%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Multicenter study of prevalence of nontuberculous mycobacteria in patients with cystic fibrosis in France.</a> Journal of Clinical Microbiology. 47 (12), 4124-4128 (2009).</li>
<li>Lee, M. -R., Cheng, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CNS+infections+caused+by+Mycobacterium+abscessus+complex%3A+clinical+features+and+antimicrobial+susceptibilities+of+isolates%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Antimicrobial+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">CNS infections caused by Mycobacterium abscessus complex: clinical features and antimicrobial susceptibilities of isolates.</a> The Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 67 (1), 222-225 (2012).</li>
<li>Talati, N. J., Rouphael, N., Kuppalli, K., Franco-Paredes, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spectrum+of+CNS+disease+caused+by+rapidly+growing+mycobacteria%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Spectrum of CNS disease caused by rapidly growing mycobacteria.</a> The Lancet Infectious Diseases. 8 (6), 390-398 (2008).</li>
<li>Medjahed, H., Gaillard, J. -L., Reyrat, J. -M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mycobacterium+abscessus%3A+a+new+player+in+the+mycobacterial+field%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Mycobacterium abscessus: a new player in the mycobacterial field.</a> Trends in Microbiology. 18 (3), 117-123 (2010).</li>
<li>Griffith, D. E., Girard, W. M., Wallace, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+features+of+pulmonary+disease+caused+by+rapidly+growing+mycobacteria.+An+analysis+of+154+patients%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Review+of+Respiratory+Disease%22%5BJournal%5D)">Clinical features of pulmonary disease caused by rapidly growing mycobacteria. An analysis of 154 patients.</a> The American Review of Respiratory Disease. 147 (5), 1271-1278 (1993).</li>
<li>Nessar, R., Cambau, E., Reyrat, J. M., Murray, A., Gicquel, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mycobacterium+abscessus%3A+a+new+antibiotic+nightmare%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Antimicrobial+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Mycobacterium abscessus: a new antibiotic nightmare.</a> The Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 67 (4), 810-818 (2012).</li>
<li>Sanguinetti, M., Ardito, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fatal+pulmonary+infection+due+to+multidrug-resistant+Mycobacterium+abscessus+a+patient+with+cystic+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Fatal pulmonary infection due to multidrug-resistant Mycobacterium abscessus a patient with cystic fibrosis.</a> Journal of Clinical Microbiology. 39 (2), 816-819 (2001).</li>
<li>Griffith, D. E., Aksamit, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+official+ATS%2FIDSA+statement%3A+diagnosis%2C+treatment%2C+and+prevention+of+nontuberculous+mycobacterial+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Respiratory+and+Critical+Care+Medicine%22%5BJournal%5D)">An official ATS/IDSA statement: diagnosis, treatment, and prevention of nontuberculous mycobacterial diseases.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 175 (4), 367-416 (2007).</li>
<li>Howard, S. T., Rhoades, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spontaneous+reversion+of+Mycobacterium+abscessus+a+smooth+to+a+rough+morphotype+is+associated+with+reduced+expression+of+glycopeptidolipid+and+reacquisition+of+an+invasive+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiology+%28Reading%2C+England%29%22%5BJournal%5D)">Spontaneous reversion of Mycobacterium abscessus a smooth to a rough morphotype is associated with reduced expression of glycopeptidolipid and reacquisition of an invasive phenotype.</a> Microbiology (Reading, England). 152 (Pt 6), 1581-1590 (2006).</li>
<li>Chardi, A., Olivares, F., Byrd, T. F., Julián, E., Brambilla, C., Luquin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Demonstration+of+cord+formation+by+rough+Mycobacterium+abscessus+variants%3A+implications+for+the+clinical+microbiology+laboratory%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Demonstration of cord formation by rough Mycobacterium abscessus variants: implications for the clinical microbiology laboratory.</a> Journal of Clinical Microbiology. 49 (6), 2293-2295 (2011).</li>
<li>Byrd, T. F., Lyons, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preliminary+characterization+of+a+Mycobacterium+abscessus+mutant+in+human+and+murine+models+of+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">Preliminary characterization of a Mycobacterium abscessus mutant in human and murine models of infection.</a> Infection and Immunity. 67 (9), 4700-4707 (1999).</li>
<li>Catherinot, E., Clarissou, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypervariance+of+a+rough+variant+of+the+Mycobacterium+abscessus+type+strain%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">Hypervariance of a rough variant of the Mycobacterium abscessus type strain.</a> Infection and Immunity. 75 (2), 1055-1058 (2007).</li>
<li>Catherinot, E., Roux, A. -L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+respiratory+failure+involving+an+R+variant+of+Mycobacterium+abscessus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Acute respiratory failure involving an R variant of Mycobacterium abscessus.</a> Journal of Clinical Microbiology. 47 (1), 271-274 (2009).</li>
<li>Bernut, A., Le Moigne, V., Lesne, T., Lutfalla, G., Herrmann, J. -L., Kremer, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+assessment+of+drug+efficacy+against+Mycobacterium+abscessus+using+the+embryonic+zebrafish+test+system%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrobial+Agents+and+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">In vivo assessment of drug efficacy against Mycobacterium abscessus using the embryonic zebrafish test system.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 58 (7), 4054-4063 (2014).</li>
<li>Oh, C. -T., Moon, C., Jeong, M. S., Kwon, S. -H., Jang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+melanogaster+for+Mycobacterium+abscessus+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Microbes+and+Infection+%2F+Institut+Pasteur%22%5BJournal%5D)">Drosophila melanogaster for Mycobacterium abscessus infection.</a> Microbes and Infection / Institut Pasteur. 15 (12), 788-795 (2013).</li>
<li>Bernut, A., Herrmann, J. -L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mycobacterium+abscessus+cording+prevents+phagocytosis+and+promotes+abscess+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Mycobacterium abscessus cording prevents phagocytosis and promotes abscess formation.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (10), E943-E952 (2014).</li>
<li>Dubée, V., Bernut, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%CE%B2-Lactamase+inhibition+by+avibactam+in+Mycobacterium+abscessus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Antimicrobial+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">β-Lactamase inhibition by avibactam in Mycobacterium abscessus.</a> Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 70 (4), 1051-1058 (2015).</li>
<li>Torraca, V., Masud, S., Spaink, H. P., Meijer, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage-pathogen+interactions+in+infectious+diseases%3A+new+therapeutic+insights+from+the+zebrafish+host+model%5BTitle%5D)+AND+%22Disease+Models+Mechanisms%22%5BJournal%5D)">Macrophage-pathogen interactions in infectious diseases: new therapeutic insights from the zebrafish host model.</a> Disease Models Mechanisms. 7 (7), 785-797 (2014).</li>
<li>Alibaud, L., Rombouts, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Mycobacterium+marinum+TesA+mutant+defective+for+major+cell+wall-associated+lipids+is+highly+attenuated+in+Dictyostelium+discoideum+and+zebrafish+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Microbiology%22%5BJournal%5D)">A Mycobacterium marinum TesA mutant defective for major cell wall-associated lipids is highly attenuated in Dictyostelium discoideum and zebrafish embryos.</a> Molecular Microbiology. 80 (4), 919-934 (2011).</li>
<li>Clay, H., Volkman, H. E., Ramakrishnan, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+necrosis+factor+signaling+mediates+resistance+to+mycobacteria+by+inhibiting+bacterial+growth+and+macrophage+death%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Tumor necrosis factor signaling mediates resistance to mycobacteria by inhibiting bacterial growth and macrophage death.</a> Immunity. 29 (2), 283-294 (2008).</li>
<li>Palha, N., Guivel-Benhassine, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+whole-body+visualization+of+Chikungunya+Virus+infection+and+host+interferon+response+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+pathogens%22%5BJournal%5D)">Real-time whole-body visualization of Chikungunya Virus infection and host interferon response in zebrafish.</a> PLoS pathogens. 9 (9), e1003619(2013).</li>
<li>Mostowy, S., Boucontet, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+zebrafish+as+a+new+model+for+the+in+vivo+study+of+Shigella+flexneri+with+phagocytes+and+bacterial+autophagy%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+pathogens%22%5BJournal%5D)">The zebrafish as a new model for the in vivo study of Shigella flexneri with phagocytes and bacterial autophagy.</a> PLoS pathogens. 9 (9), e1003588(2013).</li>
<li>Prajsnar, T. K., Cunliffe, V. T., Foster, S. J., Renshaw, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+vertebrate+model+of+Staphylococcus+aureus+reveals+phagocyte-dependent+resistance+of+zebrafish+to+non-host+specialized+pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+Microbiology%22%5BJournal%5D)">A novel vertebrate model of Staphylococcus aureus reveals phagocyte-dependent resistance of zebrafish to non-host specialized pathogens.</a> Cellular Microbiology. 10 (11), 2312-2325 (2008).</li>
<li>Van der Sar, A. M., Appelmelk, B. J., Vandenbroucke-Grauls, C. M. J. E., Bitter, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+star+with+stripes%3A+zebrafish+as+an+infection+model%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Microbiology%22%5BJournal%5D)">A star with stripes: zebrafish as an infection model.</a> Trends in Microbiology. 12 (10), 451-457 (2004).</li>
<li>Vergunst, A. C., Meijer, A. H., Renshaw, S. A., O’Callaghan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Burkholderia+cenocepacia+creates+an+intramacrophage+replication+niche+in+zebrafish+embryos%2C+followed+by+bacterial+dissemination+and+establishment+of+systemic+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">Burkholderia cenocepacia creates an intramacrophage replication niche in zebrafish embryos, followed by bacterial dissemination and establishment of systemic infection.</a> Infection and Immunity. 78 (4), 1495-1508 (2010).</li>
<li>Levraud, J. -P., Disson, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+observation+of+Listeria+monocytogenes-phagocyte+interactions+in+living+zebrafish+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">Real-time observation of Listeria monocytogenes-phagocyte interactions in living zebrafish larvae.</a> Infection and Immunity. 77 (9), 3651-3660 (2009).</li>
<li>Meijer, A. H., Spaink, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Host-pathogen+interactions+made+transparent+with+the+zebrafish+model%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Drug+Targets%22%5BJournal%5D)">Host-pathogen interactions made transparent with the zebrafish model.</a> Current Drug Targets. 12 (7), 1000-1017 (2011).</li>
<li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWesterfield%2C+M+%22The+Zebrafish+Book%3A+A+Guide+for+the+Laboratory+Use+of+Zebrafish+%28Danio+Rerio%29%22">The Zebrafish Book: A Guide for the Laboratory Use of Zebrafish (Danio Rerio)</a>. , (2007).</li>
<li>Benard, E. L., van der Sar, A. M., Ellett, F., Lieschke, G. J., Spaink, H. P., Meijer, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Infection+of+zebrafish+embryos+with+intracellular+bacterial+pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Infection of zebrafish embryos with intracellular bacterial pathogens.</a> Journal of Visualized Experiments. (61), e3781(2012).</li>
<li>Van Rooijen, N., Sanders, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liposome+mediated+depletion+of+macrophages%3A+mechanism+of+action%2C+preparation+of+liposomes+and+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunological+Methods%22%5BJournal%5D)">Liposome mediated depletion of macrophages: mechanism of action, preparation of liposomes and applications.</a> Journal of Immunological Methods. 174 (1-2), 83-93 (1994).</li>
<li>Adams, K. N., Takaki, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug+tolerance+in+replicating+mycobacteria+mediated+by+a+macrophage-induced+efflux+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Drug tolerance in replicating mycobacteria mediated by a macrophage-induced efflux mechanism.</a> Cell. 145 (1), 39-53 (2011).</li>
<li>Ramakrishnan, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Looking+within+the+zebrafish+to+understand+the+tuberculous+granuloma%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Experimental+Medicine+and+Biology%22%5BJournal%5D)">Looking within the zebrafish to understand the tuberculous granuloma.</a> Advances in Experimental Medicine and Biology. 783, 251-266 (2013).</li>
<li>Davis, J. M., Clay, H., Lewis, J. L., Ghori, N., Herbomel, P., Ramakrishnan, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+visualization+of+Mycobacterium-macrophage+interactions+leading+to+initiation+of+granuloma+formation+in+zebrafish+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Real-time visualization of Mycobacterium-macrophage interactions leading to initiation of granuloma formation in zebrafish embryos.</a> Immunity. 17 (6), 693-702 (2002).</li>
<li>Lamason, R. L., Mohideen, M. -A. P. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SLC24A5%2C+a+putative+cation+exchanger%2C+affects+pigmentation+in+zebrafish+and+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Science+%28New+York%2C+NY%29%22%5BJournal%5D)">SLC24A5, a putative cation exchanger, affects pigmentation in zebrafish and humans.</a> Science (New York, NY). 310 (5755), 1782-1786 (2005).</li>
<li>Renshaw, S. A., Loynes, C. A., Trushell, D. M. I., Elworthy, S., Ingham, P. W., Whyte, M. K. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+transgenic+zebrafish+model+of+neutrophilic+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">A transgenic zebrafish model of neutrophilic inflammation.</a> Blood. 108 (13), 3976-3978 (2006).</li>
<li>Hall, C., Flores, M. V., Storm, T., Crosier, K., Crosier, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+zebrafish+lysozyme+C+promoter+drives+myeloid-specific+expression+in+transgenic+fish%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+developmental+biology%22%5BJournal%5D)">The zebrafish lysozyme C promoter drives myeloid-specific expression in transgenic fish.</a> BMC developmental biology. 7, 42(2007).</li>
<li>Takaki, K., Davis, J. M., Winglee, K., Ramakrishnan, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+the+pathogenesis+and+treatment+of+Mycobacterium+marinum+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Evaluation of the pathogenesis and treatment of Mycobacterium marinum in zebrafish.</a> Nature Protocols. 8 (6), 1114-1124 (2013).</li>
<li>Stoop, E. J. M., Schipper, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+embryo+screen+for+mycobacterial+genes+involved+in+the+initiation+of+granuloma+formation+reveals+a+newly+identified+ESX-1+component%5BTitle%5D)+AND+%22Disease+Models+Mechanisms%22%5BJournal%5D)">Zebrafish embryo screen for mycobacterial genes involved in the initiation of granuloma formation reveals a newly identified ESX-1 component.</a> Disease Models Mechanisms. 4 (4), 526-536 (2011).</li>
<li>Carvalho, R., de Sonneville, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high-throughput+screen+for+tuberculosis+progression%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">A high-throughput screen for tuberculosis progression.</a> PloS One. 6 (2), e16779(2011).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

דג הזברה התפתחה לאחרונה כמערכת מודל חוליות מצוינת ללימוד הדינמיקה של זיהום חיידקים באמצעות שדה רחב והדמיה confocal בזמן אמת 36. השילוב של מתלים התפזרו mycobacterial (פרוטוקול 2.2) יחד עם שיטות הזרקת מיקרו (פרוטוקול 4) מאפשר זיהומים לשחזור מערכתיים, ולאחר מכן ניטור והדמיה של ההתקדמות של הזיהום עם דגש מיוחד על אינטראקציות חיידקים עם מקרופאגים מארח. ארסיותו של מ &#39; abscessus in vivo יכול להיחקר הודות לשימוש בדג הזברה זהב wild-type 37. ללמוד ...

abscessus Mycobacterium הוא הפתוגן מתעוררים שגורם ספקטרום רחב של תסמונות קליניות בבני אדם. אלה כוללים זיהומים עוריים, כמו גם זיהומי ריאות כרוניים קשים, בעיקר נתקלו במדוכאי חיסון וחולי סיסטיק פיברוזיס 1,2,3,4. מ &#39; abscessus גם נחשב למינים צומחים במהירות גדול mycobacterial אחראים לזיהומי nosocomial וiatrogenic בבני אדם. יתר על כן, לאחרונה פורסם מספר מחקרים הדגישו את האפשרות שמ &#39; abscessus יכול לחצות את מחסום דם-המוח ולגרום לנגעים חשובים במערכת העצבים המרכזית (CNS) 5,6. למרות היותו מגדל מהיר, מ &#39; תערוכות abscessus גם כמה תכונות פתוגניים הקשורים לאלה של שחפת Mycobacterium, כולל היכולת לשתוק במשך שנים בתוך מבני granulomatous וליצור נגעי caseous בריאות 7. יותר מדאיג היא סן הנמוכהsitivity של מ &#39; abscessus לאנטיביוטיקה, טיוח זיהומים אלה קשים מאוד לטיפול מוביל לשיעור כישלון טיפולי משמעותי 8,9. האיום החשוב של מין זה הוא בעיקר התנגדותו הפנימית לאנטיביוטיקה, אשר היא דאגה מרכזית במוסדות בריאות ציבוריים 10 ונגד להשתלת ריאה 11. מציג abscessus מ morphotypes מושבה (R) חלק (S) או מחוספס שיובילו לתוצאות קליניות שונות. בניגוד למתח S, יש לי חיידקי R נטייה לגדול קצה לקצה, שהוביל לחבל או כמו חוט-מבנה 12,13. מספר מחקרים עצמאיים המבוססים על מודלים או סלולריים או בעלי חיים גילו את הפנוטיפ היפר-האלימות של R morphotype 14,15. ממחקרים אפידמיולוגיים, במקרים החמורים ביותר של מ &#39; זיהומי ריאות abscessus מופיעים להיות מזוהים עם R גרסאות 16 שהגרסה היחידה שכבר ראה להתמיד במשך שנים במארח נגוע 3. הבדל morphotype מסתמך על הנוכחות (בS) או הפסד (בR) של glycopeptidolipids הקשורים משטח (GPL) 12. עם זאת, בשל המגבלות המובנות של הדגמים סלולריים / בעלי החיים הזמינים המשמש כיום ללמוד מ &#39; זיהום abscessus, הידע שלנו על אירועי pathophysiological של גרסאות R או S נותר מעורפל. זיהום של עכברים חיסוניים מוסמכת באמצעות נתיבים תוך ורידי או תרסיס מוביל להתישבות ארעית, המעכב את השימוש בעכברים ללמוד זיהומים מתמשכים ולin vivo בדיקת רגישות לסמים 17. לכן, פיתוח מודלים של בעלי חיים ניתנים למניפולציה של תגובת המארח הוא אתגר גדול. בהקשר זה, מודלים שאינם יונקים של זיהום פותחו לאחרונה, כולל דרוזופילה melanogaster 18 שמציעה מספר יתרונות כגון עלות, מהירות וo קבילות האתיתVer מודל העכבר. מודל דג הזברה (Danio rerio) של זיהום גם נחקר לדמיין, על ידי הדמיה לא פולשנית, ההתקדמות והכרונולוגיה של מ &#39; זיהום abscessus בחי 19. חשוב לציין, הוכחה של קונספט הוקמה גם כדי להדגים את התאמתה לin vivo הערכות אנטיביוטיות נגד מ &#39; abscessus 17,20. דג הזברה הייתה בשימוש נרחב בשני העשורים האחרונים ללמוד את יחסי הגומלין בין פתוגנים שונים והמערכת החיסונית מארח 21. ההצלחה הגוברת של מודל חוליות חלופה זו מסתמכת על הזדמנויות גדולות וייחודיות שהניעו ומאומתים השימוש בו להבנה טובה יותר של זיהומים נגיפיים וחיידקיים רבים 19,22,23,24,25,26,27,28,29. בניגוד למרבית המודלים של בעלי החיים האחרים, עוברי דג הזברה הם שקופים אופטי, המאפשרים הדמיה הקרינה בלתי פולשני 30. זה חהשעות הובילו ללמוד מ &#39; abscessus נגוע עוברי דג הזברה עם פרטים חסרי תקדים, שהגיע לשיא עם התיאור של cording תאי, המייצג דוגמא לגמישות מורפולוגיים בקטריאלי. Cording מייצג מנגנון חדש של חתרנות של מערכת החיסון ומנגנון מפתח קידום פתוגנזה של מ &#39;החריף זיהום abscessus 19. דו&quot;ח זה מתאר כלים ושיטות חדשים באמצעות עובר דג הזברה לפענח את תכונות pathophysiological של מ &#39; abscessus זיהום וללמוד את יחסי הגומלין ההדוקים בין מערכת החיסון המולדת החיידקים ו. ראשית, פרוטוקול microinjection מפורט הכולל עיבוד של הבידוד החיידקים, הכנת עובר, וזיהום כשלעצמו, מוצג. שיטות מותאמות במיוחד כדי להעריך מ &#39; ארסיות abscessus על ידי מדידת פרמטרים שונים, כגון הישרדות מארח וניטל חיידקים, מוצגות. דגש מיוחד יינתן לאופןכדי לפקח, ברמת spatiotemporal, הגורל והתקדמות של הזיהום ואת התגובה החיסונית מארח למ &#39; abscessus באמצעות מיקרוסקופ וידאו. יתר על כן, כדי לחקור את התרומה ואת התפקיד של מקרופאגים במ &#39; abscessus זיהום, שיטות להפקת מקרופאגים מדולדלים עוברים (תוך שימוש בגישות או genetically- או מבוססות כימי) מתוארים. לבסוף, פרוטוקולים כדי להמחיש את האינטראקציות הספציפיות עם מקרופאגים או נויטרופילים או באמצעות עוברים קבועים או חיים מתועדים. מטרת דו&quot;ח זה היא לעורר מחקרים נוספים כדי לשפוך אור חדש לתוך מ &#39; מנגנוני abscessus אלימות ובמיוחד את התפקיד של cording בהקמת תהליך זיהום חריף ובלתי מבוקר.

<table><tbody><tr><td>BBL MGIT PANTA</td><td>BD Biosciences</td><td>245114</td><td></td></tr><tr><td>סרום בקר אלבומין&nbsp;</td><td>Euromedex</td><td>04-100-811-E</td><td></td></tr><tr><td>קטלאז מכבד בקר&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C40</td><td></td></tr><tr><td>Difco Middlebrook 7H10 Agar</td><td>BD Biosciences</td><td>262710</td><td></td></tr><tr><td>Difco Middlebrook 7H9 Broth</td><td>BD Biosciences</td><td>271310</td><td></td></tr><tr><td>אתיל 3-אמינובנזואט מלח מתאן סולפונאט (טריקאין)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A5040</td><td></td></tr><tr><td>חומצה אולאית</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>O1008</td><td></td></tr><tr><td>פרפורמלדהיד</td><td>דלתא Microscopie</td><td>15710</td><td></td></tr><tr><td>פנול אדום</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>319244</td><td></td></tr><tr><td>טווין 80</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>P4780</td><td></td></tr><tr><td>Agar</td><td>Gibco Life Technologie</td><td>30391-023</td><td></td></tr><tr><td>אגרוז נמס נמוך</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td></td><td></td></tr><tr><td>מלחי ים מיידיים באוקיינוס&nbsp;</td><td>אקווריום סיסטמס בע"מ</td><td></td><td></td></tr><tr><td>נימי זכוכית בורוסיליקט&nbsp;</td><td>Sutter instrument Inc</td><td>BF100-78-10</td><td>1 מ"מ OD X 0.78 מ"מ תעודת זהות</td></tr><tr><td>מכשיר מושך מיקרופיפטה&nbsp;</td><td>Sutter Instrument Inc</td><td></td><td>חולץ מיקרופיפטה בוער/חום p-87</td></tr><tr><td>מיקרו-מזרק</td><td>Tritech Research&nbsp;</td><td></td><td>מיקרו מזרק דיגיטלי, MINJ-D</td></tr><tr><td>פינצטה</td><td>Sciences Tools inc</td><td></td><td>Dumont # M5S&nbsp;</td></tr><tr><td>טיפים למיקרו-מעמיס</td><td>אפנדורף</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

פענוח ופתוגנזה הדמיה והשתרגות<em&gt; abscessus mycobacterium</em&gt; בעוברי דג הזברה

Deciphering and Imaging Pathogenesis and Cording of Mycobacterium abscessus in Zebrafish Embryos

עוברי דג הזברה (Danio rerio) משמשים יותר ויותר כמודל זיהום לחקר תפקוד מערכת החיסון המולדת של בעלי חוליות באינטראקציות מארח-פתוגן. הקלות בהשגת מספר רב של עוברים, נגישותם עקב התפתחות חיצונית, השקיפות האופטית שלהם כמו גם הזמינות של מגוון רחב של כלים גנטיים/אימונולוגיים ואוספי קווי דיווח טרנסגניים, תורמים לרבגוניות של מודל זה. מבחינה זו, כתב היד הנוכחי מתאר את השימוש בדג הזברה כמערכת מודל in vivo לחקירת הכרונולוגיה של זיהום Mycobacterium abscessus. פתוגן אנושי זה יכול להתקיים כגרסאות חלקות (S) או מחוספסות (R), בהתאם להרכב דופן התא, וניתן לדמות ולהשוות את האלימות שלהם בעוברים וזחלים של דג הזברה. מיקרו-הזרקה של גרסאות פלואורסצנטיות S או R ישירות למחזור הדם דרך וריד הזנב, מובילה לזיהומים כרוניים או חריפים/קטלניים, בהתאמה. מערכת ביולוגית זו מאפשרת הדמיה ברזולוציה גבוהה וניתוח של תפקיד המיתרים המיקובקטריאליים בקידום היווצרות מורסה. בנוסף, השימוש בחיידקים פלואורסצנטיים יחד עם קווי דגי זברה טרנסגניים המכילים מקרופאגים פלואורסצנטיים מייצר הזדמנות ייחודית להדמיה רב-צבעונית של אינטראקציות מארח-פתוגן. מאמר זה מתאר פרוטוקולים מפורטים להכנת חיסון הומוגני של M. abscessus ולהזרקה תוך ורידית של עוברי דג זברה להדמיה פלואורסצנטית לאחר מכן של האינטראקציה עם מקרופאגים. טכניקות אלה פותחות את הדרך לחקירות עתידיות הכוללות מוטנטים פגומים ביצירת חבל הטבור ומוקדשות להבנת האופן שבו זה משפיע על פתוגניות M. abscessus בבעלי חוליות שלמים.

למרות שניתן להזריק אתרים אנטומיים שונים 32, זריקות וריד הזנב משמשים לעתים קרובות כדי ליצור זיהום מערכתי לניתוחים שלאחר מכן, כולל ניסויי הישרדות, נחישות נטל חיידקים, פעילות phagocytosis או היווצרות חוט. זריקות בשרירי הזנב משמשות להעריך את הגיוס של מקרופאגים באתר ההזרקה (איור 3 א). לחקור ולהשוות את האלימות של גרסאות R ו- S של מ &#39; abscessus, השעיות חיידקי ניאון מוזרקות בוריד הזנב של 30 hpf עוברים (איור 3 א) 19. בניג...

עוברי דג זברה שקופים אופטית נמצאים בשימוש נרחב כדי לחקור ולדמיין בזמן אמת את האינטראקציות בין מיקרואורגניזמים פתוגניים לתאי החיסון המולדים. מיקרו-הזרקה של Mycobacterium abscessus, בשילוב עם הדמיה פלואורסצנטית, משמשת לבחינת מאפיינים פתוגניים חיוניים כגון היווצרות חבל בעוברי דג זברה.

פענוח ופתוגנזה הדמיה והשתרגות<em&gt; Abscessus Mycobacterium</em&gt; בעוברי דג הזברה

Zebrafish (Danio rerio) embryos are increasingly used as an infection model to study the function of the vertebrate innate immune system in host-pathogen ...

המטרה הכוללת של פרוצדורה זו היא ללמוד ולהשוות את העוצמה הפתוגנית (virulence) של זני Mycobacterium abscessus ולתאר את האינטראקציות בין חיידקים אלה לבין מערכת החיסון המולדת של המארח in vivo באמצעות עוברי דגי זהב שקופים. דבר זה מושג תחילה על ידי הכנת תסמיך חיידקי הומוגני. לאחר מכן, עוברי הדגים מקבלים הזרקה תוורידית של תמיסות החיידקים 30 שעות לאחר ההפריה.בנוסף, כדי לחקור באופן מדויק יותר את תפקידם של המקרופאגים בבקרת הזיהום, נעשה שימוש בהליך הזרקה המבוסס על lipo choate כדי ליצור עובריים נטולי מקרופאגים. לבסוף, העובריים המזוהמים מוכנים ומצולמים באמצעות מיקרוסקופיה פלואורסצנטית וקונפוקלית כדי לעקוב אחר התקדמות הזיהום. בסופו של דבר, התוצאות שניתן להשיג מראות את האינטראקציות הספציפיות בין התאים הפגוציטיים הפלואורסצנטיים לבין M abscessus, הן כבסיס אינדיבידואלי והן כשרשראות נחשיות בתוך עוברי שקוף.היתרון העיקרי בשימוש בדגי זברה לעומת מודלים של בעלי חיים אחרים, כגון עכברים, הוא שהדבר מאפשר לחקור באופן ספציפי את תהליך הזיהום בזמן אמת וללמוד ולדמיין את האינטראקציות הספציפיות בין *Mycobacterium abscessus* למקרופאגים או נויטרופילים. שלב זה הוא סוגיה קריטית עבור לחץ ההזרקה העוקב בדגי זברה. בשל נטייה גבוהה של *Mycobacterium abscessus* גס ליצור אגרגטים גדולים ולהפיק קודים, נדרש לכן טיפול ספציפי כדי להכין אינוקולום הומוגני ומבוקר כמותית לפני המיקרו-הזרקה.להכנת m abscessus, העבירו תרביות בצמיחה מעריכית מבקבוחי תרבית רקמה של 150 square centimeter לשפופרות פלסטיק סטריליות של 50 milliliter וסבבו בצנטריפוגה במהירות של 4,000 ×g בטמפרטורת החדר למשך 15 דקות. השתמשו ב-1 milliliter של Middlebrook 7H9, מועשר ב-OADC וב-tween 80, אשר יכונה להלן מדיום 7H9, כדי להשעות מחדש את המשקע. העבירו מנות (aliquots) של 200 µL מהסספנסיה הבקטריאלית לשפופרות של 1.5 milliliter באמצעות מחט בכיול 26 gauge. הומוגניזרו כל מנה של סספנסיה בקטריאלית 15 פעמים.לאחר מכן, בצעו סוניקציה באמצעות מק неרח במיחם שלוש פעמים למשך 10 שניות בכל פעם, עם הפסקות של עשר שניות בין סבב לסבב. בין לבין, הוסיפו 1 mL של מצע 7H9 וערבבו קצרה במערבל Vortex, ולאחר מכן סבבו בצנטריפוגה ב-100 ×g למשך שלוש דקות. אספו בזהירות את העל-נוזלים המכילים את המיקובקטריה כדי למנוע היווצרות גושים, והעבירו את התו suspension ההומוגני לשפופרת פלסטיק סטרילית של 50 mL.סובב את התרחיף בצנטריפוגה ב-4,000 ×g למשך חמש דקות והשתמש ב-200 µL של מצע 7H9 כדי לתוחלה את המשקע והערך את האינוקולום הבקטריאלי הסופי. בהתאם לפרוטוקול הכתוב, ההדגמה הוויזואלית של שיטה זו היא קריטית מכיוון שהשלבים קשים ללמידה, שכן המניפולציה העדינה והמדויקת של ההזרקה לעוברים של דגי זבברה תחת המיקרוסקופ, כמו גם רכישת טכניקת המיקרו-הזרקה, דורשות זמן. כדי לבצע מיקרו-הזרקה של M. abscessus בערך 24 שעות לאחר ההפריה (HPF), השתמש בפינצטה כדי להעביר עוברים לצחנת פטרי בנפח 100 מ"מ ושמור אותם בטמפרטורה של 28.5 °C.העבירו 30 עוברים בני 48 HPF לתא מיקום בצורת V המלא ב-25 milliliters של מי דגים המכילים 270 milligrams per liter של trica, באמצעות קצה חתוך של micro loader. מקמו את העוברים כראוי בתעלות כדי להקל על המניפולציה. השתמשו ב-PBST עם 0.05%between 80 כדי לדלל את האינוקולום החיידקי ל-CFU הרצוי להזרקה, והוסיפו 10%phenol red כדי לוודא את תקינות ההזרקה באמצעות קצה של micro loader.טענו מחט למיקרו-הזרקה ב-5 עד 10 µL של התרבית הבקטריאלית. חברו את מחט המיקרו-הזרקה למחזיק של מיקרו-מניפולטור המחובר למזרק, והשתמשו בפינצטה עדינה כדי לשבור את קצה המחט, על מנת לקבל קוטר פתח של 5 עד 10 µm.כויל את נפח ההזרקה על ידי התאמת לחץ וזמן המיקרו-הזרקה. לאחר מכן, כדי להגיע לנפח ההזרקה הנדרש, מדוד את קוטרה של טיפה המופעלת אל תוך החלמון של עובר אחד לצורך מיקרו-הזרקה לווריד החלבון (coddle vein). מקם את העובר כאשר הצד הבטני פונה כלפי המחט, והנח את קצה המחט קרוב לפתח העורגניטלי.דחפו בעדינות את קצה המחט אל תוך העובר עד שהיא רק חודרת את אזור וריד ה-coddle. לאחר מכן, הזריקו את הנפח הרצוי של תרחיף החיידקים, בדרך כלל 1 עד 3 nanoliters המכילים כ-100 CFUs ל-nanoliter. דגרו ועקבו אחר העוברים בהתאם לפרוטוקול הכתוב כדי לבצע lipo Choate, דילול של מקרופאגים ועוברים ב-24 HP. סננו את העוברים והעבירו אותם לצלוחית הזרקה מלאה במי דגים עם trica.לאחר מכן, הכוון אותם כך שהצד הגבי פונה כלפי מטה. לאחר ערבוב ב-vortex של תמיסת ה-clodronate העטופה בליפוזומים, טען את מחט המיקרו-קפילריה וכייל את נפח ההזרקה. דקור את אזור וריד ה-coddle כפי שהודגם קודם לכן, והזרק שני עד שלושה ליטרים מהתמיסה.חזור על ההזרקה שלוש פעמים. דגרו את העובריים בטמפרטורה של 28.5 °C והשתמשו במיקרוסקופיה פלואורסצנטית כדי לוודא את הדילול התקין של המקרופאגים לפני ההדבקה. כפי שהודגם קודם לכן בסרטון זה, כדי לספור יחידות יוצרות מושבות או CFUs בנקודת הזמן הרצויה.אספו חמישה עוברים עבור כל תנאי זיהום והעבירו כל עובר לתוך מבחנת מיקרו-צנטריפוגה בנפח 1.5 מיליליטר. הרדימו את העוברים בשיטת קריו על ידי הדגרה בקרח למשך 10 דקות לאחר קטילת העוברים ב-300 עד 500 מיליגרם לליטר Trica. השתמשו במים סטריליים כדי לשטוף את העוברים פעמיים במבחנה חדשה.לאחר מכן, יש להסיר את המים ב-2% Triton X 100 ב-one XPBS מכל עובר, ולהשתמש במחט במידה 26 gauge כדי להומוגניзировать את הרקמה לצורך ליזיס מלא. לאחר סבוב של התו сусפנזיה בצנטריפוגה, השתמשו ב-one X-P-B-S-T כדי לתוחב מחדש את המשקע. לאחר מכן, פזרו דילולים סדרתיים של ההומוגנאט על Middlebrook seven H 10 OADC.בתוספת B-B-L-M-G-I-T Panta, דגרו את הצלחות במשך ארבעה ימים בטמפרטורה של 30 degrees Celsius לפני ספירת המושבות לצורך הדמיה חיה של זיהום M abscessus; עבור הדמיה חיה, הרכיבו עוברים של trica הרדומים ב-1% low melting point agarose בתוך Petri dish עם תחתית זכוכית של 35 millimeter עבור מיקרוסקופ הפוך, או בשקע בודד של תיתית עבור מיקרוסקופ קונפוקאלי ישר. כוון את העובר למנח הרצוי וכסו את ה-agarose שהתגבש במי דגים המכילים trica. לצורך הדמיה קבועה של זיהום M abscessus, לאחר הדשתו של העוברים, העבירו אותם למבחנות מיקרו-צנטריפוגה של 1.5 milliliter, וקבעו את העוברים ב-4% Paraformaldehyde ב-one X-P-B-S-T למשך שעתיים.בטמפרטורת החדר, הסירו את הפאראפורמאלדהיד על ידי שטיפה כפולה של העוברים ב-1X PBST למשך 10 דקות, כדי לשמור על שלמות הרקמות ועל הפלואורסצנציה באופן רציף. דגרו את העוברים בריכוזים עולים של תמיסת גליצרין למשך 10 דקות לכל תנאי. הניחו את העובר הטבול ב-50% גליצרין בתא צפייה.לבסוף, השתמשו במיקרוסקופ פלואורסצנציה עם עדשה אובייקטיבית 10x או במיקרוסקופ קונפוקלי פלואורסצנציה עם עדשות אובייקטיביות 40x או 63x לצורך רכישת פלואורסצנציה רציפה ודימות תמסורת (transmission) של העובר. כדי לחקור ולהשוות את העוצמה הזיהומית (virulence) של וריאנטים מחוספסים (rough) וחלקים (smooth) של M abscessus, הוזרקו חיידקים פלואורסצנטיים תוך-ורידית לתוך 30 עוברים בעלי יכולת HPFC. בניגוד לווריאנט החלק, הווריאנט המחוספס גורם לזיהום חריף וקטלני יותר עם התפתחות של מורסות בתוך מערכת העצבים המרכזית.הבדלים בעוצמת העוצמה (virulence) כוונתו כמותית או על ידי ספירת ה-CFU, או על ידי קביעת מספר הפיקסלים הפלואורסצנטיים, שהם מתואמים. דבר זה מצביע על עומסים בקטריאליים גבוהים יותר עבור הווריאנט הגס (rough variant). כפי שניתן לראות בדמות זו, ניתן לנטר ולדמות את קינטיקת היווצרות השרוכים (cords) באמצעות מיקרוסקופיית וידאו באופן לא פולשני, מה שמדגים את נטייתו של הווריאנט הגס להתרבות מחוץ לתא, כפי שמוצג כאן. הדבקה של עוברים שבהם נושלו מקרופאגים ב-M abscessus הגס מובילה לעלייה מאסיבית בעומסים הבקטריאליים ובייצור השרוכים, ולמוות מהיר של הזחלים.דבר זה מעיד בבירור כי מקרופאגים נחוצים כדי לשלוט בזיהום של M abscessus, וכדי לצפות בזמן אמת באינטראקציות שבין המקרופאגים ל-M abscessus. ניתן להשתמש בקו התורשתי EG one M cherry המייצר מקרופאגים פלואורסצנטיים אדומים. זיהומים גורמים לגיוס מובהק של מקרופאגים עם פגוציטוזה יעילה של חיידקים בודדים, בעוד ששרשראות מיקובקטריאליות (mycobacterial cords) מייצגות אסטרטגיה שפיתח ה-M abscessus כדי להימנע מפגוציטוזה לאחר התפתחותן.טכניקה זו סללה את הדרך לחקר התפקיד החשוב של קידוד כמנגנון חדש של חמיקה חיסונית. הודות למודל הזיהום בדגי zebrafish, ניתן כעת לצפות ולתאר את התרומה של קודים ב-in vivo לפתוגנזה של mycobacterium abscesses.

deciphering-imaging-pathogenesis-cording-mycobacterium-abscessus

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

עוברי דג הזברה שקוף הוכיחו המארחים מודל שימושי כדי לחזות אינטראקציות למידה תפקודית בין תאים חיסוניים מולדים פתוגנים חיידקיים תאיים,...

זיהום של עוברים דג הזברה עם פתוגנים חיידקיים תאיים

ההתפתחות המהירה, גודל קטן השקיפות של דג הזברה הם יתרונות עצומים למחקר שליטה החיסון המולדת של...

הדמיה לא פולשנית של פטרת מופצת הזחלים דג הזברה

סרטון זה מתאר שיטת מיקרו-הזרקה להעברת תאי סרטן השד לחלל הפריביטלין של עוברי דגי זברה טרנסגניים. לאחר הדגירה, אנו מדמיינים את העובר תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי כדי לצפות בפלישה של תאים סרטניים, הפצתם וגרורות.

zPDX-אנליזה של פולשניות: חקירת התנהגות פולשנית של תאי סרטן גרורתיים בעוברי זברה Xenografts

מקור: Zhang, X., et al. מודל עובר דג זברה להדמיה in vivo וניתוח תוך-חיוני של זיהום סטפילוקוקוס זהוב הקשור לביו-חומר. J. Vis. Exp. (2019)סרטון זה מדגים הדמיה פלואורסצנטית של עוברי דג זברה שהוזרקו עם Staphylococcus aureus, המאפשר כימות של התקדמות הזיהום והתפלגות החיידקים כדי להעריך את ההשפעה של מיקרוספירות ביו-חומר על אינטראקציות מארח-פתוגן in vivo.

 הדמיה פלואורסצנטית של זיהום חיידקי הקשור לביו-חומר בעוברי דג זברה

מקור: ניו, ל. ואחרים. הדמיה של מוות תאי ליז של מקרופאגים במהלך זיהום מיקובקטריאלי בעוברי דגי זברה באמצעות מיקרוסקופיה תוך-חיונית. J. Vis. Exp. (2019)סרטון זה מדגים את השימוש במיקרוסקופיה קונפוקלית תוך-חיונית כדי להמחיש מוות תאי ליז של מקרופאגים בעוברי דגי זברה לאחר זיהום Mycobacterium marinum .

הדמיה חיה של מוות תאי מקרופאג במהלך זיהום מיקובקטריאלי בעוברי דגי זברה

מקור: ברנוט, א., ואח', פענוח והדמיה של פתוגנזה ודימות של מיקובקטריום אבססיסוס בעוברי דגי זברה. J. Vis. Exp. (2015).הסרטון הזה מדגים פרוטוקול לבידוד וכימות של Mycobacterium abscessus מעובר דג זברה נגוע. ההליך כולל המתת חסד של עוברים, ניתוק רקמות והומוגניזציה לשחרור החיידקים, ולאחר מכן צנטריפוגה והשעיה מחדש בבופר סורפקטנטים. לבסוף, ההשעיה החיידקית מדוללת באופן סדרתי, מצופה על אגר עם תוספת אנטיביוטיקה, ומודגרת כדי לאפשר יצירת מושבות וכמות.

בידוד וגידול חיידקים מעוברי דגי זברה להערכת עומס זיהום

מקור: ברנוט, א. ואחרים. פענוח והדמיה של פתוגנזה והקורדינג של Mycobacterium abscessus בעוברי דגי זברה. J. Vis. Exp. (2015)הסרטון הזה מדגים פרוטוקול המשתמש בעוברים טרנסגניים של דגי זברה המבטאים מקרופאגים פלואורסצנטיים ונדבקים בזן מחוספס של Mycobacterium abscessus כדי להמחיש אינטראקציות בין מארח לפתוגן. הוא חושף כיצד חבל חוץ-תאי מאפשר התחמקות חיסונית, ומקדם הישרדות חיידקים ונזק לתאי המארח.

הדמיה חיה של אינטראקציות בין המאכסן לפתוגן בעוברי דגי זברה שנדבקו ב-Mycobacterium abscessus

הדמיה של כלי דם במוח בפיתוח דג הזברה זחל הוא תאר. טכניקות כדי להקל על ההדמיה 3D ולשנות התפתחות כלי דם במוח באמצעות טיפולים כימיים גם מסופקות.

הדמיה ו3D שחזור של מבני כלי דם במוח בעוברי דג הזברה

הדמיית ההתנהגות הדינמית של אברונים ומבנים תת-תאיים אחרים in vivo יכולה לשפוך אור על תפקודם במצבים פיזיולוגיים ומחלות. כאן, אנו מציגים שיטות לתיוג גנטי של שני אברונים, צנטרוזומים ומיטוכונדריה, והדמיית הדינמיקה שלהם בעוברי דג זברה חיים באמצעות מיקרוסקופיה רחבת שדה וקונפוקלית.

הדמית מבני subcellular בעובר דג הזברה החייה

המחקר הנוכחי מתאר מודל העובר דג זברה ויזואליזציה ויוו וניתוח intravital לזיהום הקשורים biomaterial לאורך זמן מבוסס על קרינה פלואורסצנטית מיקרוסקופ. מודל זה היא מערכת מבטיח משלימים מודלים בעלי חיים יונקים כגון עכבר מודלים לימוד הקשורים biomaterial זיהומים ויוו.

מודל העובר דג זברה, ויזואליזציה Vivo, ניתוח Intravital של Biomaterial-הקשורים Staphylococcus aureus זיהום

פרוטוקול זה מתאר טכניקה להמחיש התנהגות מקרופאג ומוות העובריים מתחלקים במהלך הזיהום של מריחיידק של פטרת . צעדים להכנת חיידקים, זיהום העוברים, ומיקרוסקופ ה, כלולים. טכניקה זו עשויה להיות מיושמת על התבוננות של התנהגות תאית ומוות בתרחישים דומים הכרוכים זיהום או דלקת סטרילית.

ויזואליזציה של מקרופאג Lytic תא המוות במהלך זיהום פטרת העוברים באמצעות מיקרוסקופ אינטרטל

חקור את האינטראקציות בין Mycobacterium abscessus למערכת החיסון המולדת בעוברי דג הזברה שקופים באמצעות הדמיית פלואורסצנציה. שיטה זו מאפשרת לחקור תהליכי זיהום בזמן אמת ותפקיד המקרופאגים בבקרת החיידקים.

פענוח ופתוגנזה הדמיה והשתרגות

גלה סרטונים נוספים