Name: במבחנה הדגם של פיזיולוגי ופתולוגיים זרימת דם עם בקשה לחקירות של שיפוץ תא דם (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-11-03T12:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 30 s
Description: חקור את השפעות הזרימה הפולסטילית על תאי אנדותל במודל מבחנתי. השיטה מאפשרת לחקור שינויים במורפולוגיה ובביטוי חלבונים בתנאי זרימה פיזיולוגיים ופתולוגיים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מבקשים להודות מקורות מימון, ובכלל זה AHA (13GRNT16990019 לWT) וNHLBI (HL097246 וHL119371 לWT).

1. Silanization וbiomolecule Functionalization של שקופיות או פוליקרבונט ממברנה הערה: רבים מהכימיקלים והפתרונות בפרוטוקול זה שיעורי אידוי גבוהים (אתנול (EtOH), אצטון, וכו &#39;). צעדים אחרים כרוכים פעמים דגירה ארוכות לשיעורי אידוי נמוכים. סרט פרפין מומלץ לאטום מכולות. זהירות: רבים של הכימיקלים (כולל: חומצה גופרתית, אצטון, (3-aminopropyl) triethoxysilane, glutaraldehyde, EtOH) נחשבים מסוכן, או הפכפך. התייעץ גיליון בטיחות חומרים (MSDS) של כל חומר לאחסון נאות, טיפול, ורשות לפני השימוש. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים שקופית חדשה זכוכית מדידת 75 מ&quot;מ ב -50 מ&quot;מ על ידי מ&quot;מ 1, ב, מנה מכתימה שקופיות זכוכית נקייה ללא קשר לנטייה, הבטחת טבילה מלאה. השתמש במכל לצעדים 1.1-1.12. קרום לתרבות משותפת, כולל פוליקרבונט (PC) עם 0.4 מיקרון גודל נקבובית, לחתוך לגודל של 75 מ&quot;מ ב -50 מ&quot;מ, לכל STE הבא: הערהנ.ב. לfunctionalization מחשב וזריעת EC. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לטבול את השקופית בחומצה גופרתית (20%), O / N. זהירות: התייעץ MSDS לחומצה גופרתית לפני השימוש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף שקופיות ידי טבילה במים ללא יונים (DI) ל5 דקות, שלוש פעמים, שינוי DI בכל פעם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לטבול את השקופית באצטון למשך 30 דקות. זהירות: התייעץ MSDS לאצטון לפני השימוש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לטבול את השקופית ב6% O פתרון triethoxysilane / אצטון (3-aminopropyl) / N. זהירות: התייעץ MSDS לtriethoxysilane (3-aminopropyl) ואצטון לפני השימוש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לטבול את השקופית באצטון ל5 דקות, שלוש פעמים, שינוי אצטון בכל פעם. זהירות: התייעץ MSDS לאצטון לפני השימוש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף שקופיות ידי הטבילה בDI ל5 דקות, שלוש פעמים, שינוי DI בכל פעם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לטבול את השקופית בשיעור של 1.5% פתרון glutaraldehyde / DI במשך 60 דקות. זהירות: התייעץ MSDS לglutaraldehyde לפני השימוש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף שקופיות ידי הטבילה בDI ל5 דקות, שתי פעמים, שינוי DI בכל פעם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שקופית מקוםשל 70% אתנול ל( EtOH) למשך 30 דקות בסטרילי, זרימה למינרית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר EtOH ולאפשר נותרו שאריות להתאדות. לטבול את השקופיות בDI וניקוז סטרילי כדי רעננות השקופיות. הערה: שקופיות או קרום מחשב יכול להיות אטום בהחזיק שקופיות זכוכית ומאוחסן על 4 מעלות צלזיוס עד שבוע. על השימוש לתרבית תאים, חזור על שלבים 1.10 ו1.11. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את השקופיות מהחזיק השקופיות ולמקם אותו לתוך 100 מ&quot;מ על ידי 100 מ&quot;מ צלחת פטרי רבוע בזרימה למינרית. הערה: מיכל זה ישמש לכל השלבים הנותרים. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן שקופית או מחשב לזריעת תאי האנדותל לניסוי monoculture. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעיל השקופיות פונקציונליות או מחשב (שלב 1.11) עם פתרון 1 מיליליטר פיברונקטין (25 מיקרוגרם / מיליליטר), בצד אחד, המכסה את האזור המשוער שנחשף לתא תרבית תאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה שקופיות או מחשב בחממה סטרילית נקבעה על 37 מעלות צלזיוס במשך 1-2 שעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר דגירה, לשאוב את הפתרון שנותר באמצעות GLAפיפטה aspirator ss מחוברת לואקום. הערה: שקופיות יכולות עכשיו להיות מאוחסנים O / N ב 4 ° C לשימוש עתידי. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עקוב 1.12.2 צעדים רק להכנת שיתוף תרבות EC / SMC. הכן וזרע תרבות חלקה תא שריר (SMC) לניסוי התרבות משותפת. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אטם סיליקון מקום על גבי השקופית (שלב 1.11), עם ממדים של 75 מ&quot;מ על ידי קוטר 50 מ&quot;מ חיצוני, קוטר הפנימי של 50 מ&quot;מ ב -30 מ&quot;מ, עובי של 0.5 מ&quot;מ, ונקבים שליישר עם זרימת תא ואקום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן 1 מיליליטר SMC ב 10% FBS השעיה / DMEM. לנטרל 1 מיליליטר פתרון של 2 מ&quot;ג / מיליליטר קולגן סוג אני עם 7% NaHCO 3 ו 0.1 פתרון M NaOH לpH של 7.4, ולערבב עם ההשעיה SMC עם צפיפות תא סופית של 2 x 10 6 תאים / מיליליטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מורחים פתרון SMC בתוך אטם דגירה שקופיות על 37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2 למשך 30 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר דגירה, לכסות את השקופית עם סרום 25 מיליליטר 0.1% שור עוברי (FBS) מעורבת בDulbecco של שינוינשר בינוני (DMEM) במשך 72 שעות. </li></ol></li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תאי האנדותל תרבות (ECs) על קרום שקופיות / פוליקרבונט זכוכית. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זרע 1 ECs מיליליטר ב 10% FBS / DMEM, עם ריכוז ראשוני של 6.0 x 10 5 תאים / מיליליטר, על משטחי פיברונקטין של שקופיות זכוכית או קרום פוליקרבונט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה תאים בחממה על 37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2, ו -10% FBS 120 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שקופיות כיסוי המכילות תאים עם תוספת של 10% FBS / DMEM, ומקום בחממה ב -37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2 O / N, עד 70% -80% ומחוברות. </li></ol></li></ol> 2. קביעת צמיגות נוזל ונפח קצב זרימה הערה: viscometers סיבוב הוא ציוד רגיש, והמדריך למשתמש viscometer יש להתייעץ לפני הכיול, איפוס, או ביצוע מדידות. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקבוע גזירה רצויה נוזל (τ) מהספרות של כלי הדם הממוקד של הניסוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> MeasurFBS דואר 1% / צמיגות DMEM (μ), באמצעות viscometer סיבוב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקבוע קצב זרימת נפח הנדרש (Q) ממשוואה Poiseuille: <img alt="משוואת 1" src="/files/ftp_upload/53224/53224eq1.jpg" /> , שבו τ = גזירת נוזל, μ = צמיגות, Q = כרך. קצב זרימה, רוחב w = קאמרי, וh = קאמרי גובה). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משאבה מוגדרת קצב הזרימה נגזר בשלב 2.3, ולהשתמש לכל השלבים הבאים. </li></ol> 3. קביעת Pulsatility האינדקס הערה: כל יציאות החיבור במערכת צריכה להיות מחוברות עם עקיצה נעילת טבעת לגודל מתאים, או חיבורי luer לעקיצה נקבה. צינורות PVC חיבור עשויים אז להיות מחוברים לאבזרי עקיצה, ומעגל הושלם. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חבר זרימת מעגל כמו באיור 2, עם דעיכת קאמרית (איור 3) ומד זרימה קולי בכיוון זרימה נכון. הערה: מד זרימת Ultrasonic הוא פיסת הציוד רגישה, והמדריך למשתמש יש להתייעץ לפני השימוש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מלא זרימת מעגל ומאגר עם מים די, על ידי הבטחת צינור לשקע מאגר (לשאוב) הוא שקוע בתוך מאגר נפח. דמיין זרימת צורת גל באמצעות מד זרימה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שסתום שחרור האוויר פתוח בתא דעיכת לשנות יחס נפח נוזל / אוויר. שסתום לסגור שחרור אוויר במרווחי מפלס נוזל שונים ולחשב מדד pulsatility (PI = (V מקס - V מינ &#39;) / V Mean) באמצעות זרימת שיא גל (V מקס), שוקת (V מינ&#39;), ואומרים (V מתכוון). ערכי PI רשומות במחברת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מארק וכתוצאה מכך רמת נוזל וPI על חדר דעיכת, באמצעות הלבד הטה, עט דיו קבוע לשימוש עתידי. לקבוע רמות PI רצויות מהספרות פתולוגיה 11. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Tube הסיליקון Formation- אופציונאלי, שיטה מתקדמת יותר של pulsatility שליטה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מערבבים את בסיס אלסטומר סיליקון וסוכן ריפוי ביחסים שונים (לדוגמא, basיחס בין 10 דואר ל- crosslinker: 1 עד 36:. 1) למגוון moduli אלסטי הממוקד, כפי שמודגם בעבר 2 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפברק צינורות סיליקון על ידי תהליך טבילה-תרופה חוזרת ונשנית, טבילה קצרה צינורית פלדה (14 G) לתערובת prepolymer סיליקון עם יחס הבסיס לcrosslinker שנקבע מראש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את הצינורית מצופה prepolymer לתנור על 60 מעלות צלזיוס למשך 4 שעות כדי לרפא את ציפוי הפולימרים בצינורית, מיתוג הכיוון באמצע תהליך הריפוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על תהליך הטבילה באותה התערובת אלסטומר סיליקון ומניח בחזרה בתנור במשך 4 שעות נוספות, וכתוצאה מכך ~ 0.3 מ&quot;מ צינורות עבים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את צינור סיליקון Ultrathin מצינורית הנירוסטה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חבר צינורות לזרום במעגל במקום דעיכת קאמרית, וPI בדיקה עבור כל אחד כמו ב3.3. </li></ol></li></ol> עיקור 4. משאבה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לטבול את תא הזרימה (איור 2), צינורות PVC, ואטמים ב10% מי חמצן (H 2 O 2). לשטוף עם DI סטרילי לפני שלב 4. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את משאבת הדם על מדף חממת חילוף. הערה: מדפי חממה צריכים להיות נירוסטה, ולהיות מסוגל לתמוך במשקל של כל מעגל הזרימה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מלא את זרימת המעגל ומאגר עם 10% H 2 O 2 על ידי הבטחת צינור לשקע מאגר (לשאוב) הוא שקוע בתוך מאגר נפח. הפץ H 2 O 2 על ידי שאיבה באמצעות מעגל עבור 20 דקות בזרימה למינרית עם אור UV על. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשאוב כל H 2 O 2 מצינורות, ולשטוף עם PBS סטרילי על ידי שאיבה באמצעות זרימת מעגל. </li></ol> 5. עצרת לשכת זרימה הערה: תא הזרימה מורכב של אקריליק, צלחת מותאמת אישית, עם יציאות ואקום וכניסה וזרימה לשקע יציאות (ראה איור 2). הרכבה קאמרית מורכבת של הצבת תא הזרימה ואטמים על גבי שקופיות תרבות, פרוPerly מיושר, והוא מתואר להלן. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחמם 1% FBS / DMEM באמבט מים 37 מעלות צלזיוס ולהכין תא זרימה. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קח שקופיות EC מתקשורת (מצעד 1.13) ואטם מקום על גבי עם צד תא למעלה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> (אופציונאלי) קרום מחשב קח את המדיה (מצעד 1.13) ואטם מקום על גבי עם צד תא למעלה. מניחים שקופית שיתוף תרבות עם זרע SMC (שלב 1.12.2) מתחת קרום מחשב. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יישר ערוץ ואקום של תא הזרימה עם החורים באטם (איור 2). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צרף צינור ואקום ליציאות ואקום (איור 2) להבטיח שום הדלפות לתקשורת לואקום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> גיליון פוליקרבונט מקום מתחת שקופיות זכוכית והרכבת תא זרימת מהדק עם מהדק האביב, אחד בכל צד של תא זרימה (איורים 2 ו 5). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מערכת זרימת מקום בחממה ב 37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2, ולמלא את המעגל עם תקשורת על ידי שאיבה ממאגר מלא בpulsatility הנמוך.לשמור על התזרים הזה במשך 4 שעות לנפשיים מראש תאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התאם נפח נוזל בדעיכה קאמרי לרמת PI הניכרת, ותרבות לזמן רצוי. </li></ol>

<ol><li>Scott-Drechsel, D., Su, Z., Hunter, K., Li, M., Shandas, R., Tan, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+flow+co-culture+system+for+studying+mechanobiology+effects+of+pulse+flow+waves%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotechnology%22%5BJournal%5D)">A new flow co-culture system for studying mechanobiology effects of pulse flow waves.</a> Cytotechnology. 64 (6), 649-666 (2012).</li>
<li>Tan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stiffening-Induced+High+Pulsatility+Flow+Activates+Endothelial+Inflammation+via+a+TLR2%2FNF-%CE%BAB+Pathway%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Stiffening-Induced High Pulsatility Flow Activates Endothelial Inflammation via a TLR2/NF-κB Pathway.</a> PLoS ONE. 9 (7), e102195(2014).</li>
<li>Wexler, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coronary+Artery+Calcification%3A+Pathophysiology%2C+Epidemiology%2C+Imaging+Methods%2C+and+Clinical+Implications+A+Statement+for+Health+Professionals+From+the+American+Heart+Association%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Coronary Artery Calcification: Pathophysiology, Epidemiology, Imaging Methods, and Clinical Implications A Statement for Health Professionals From the American Heart Association.</a> Circulation. 94 (5), 1175-1192 (1996).</li>
<li>Lan, T. -H., Huang, X. -Q., Tan, H. -M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+fibrosis+in+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Pathol%22%5BJournal%5D)">Vascular fibrosis in atherosclerosis.</a> Cardiovasc Pathol. 22 (5), 401-407 (2013).</li>
<li>Lee, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Promoting+endothelial+recovery+and+reducing+neointimal+hyperplasia+using+sequential-like+release+of+acetylsalicylic+acid+and+paclitaxel-loaded+biodegradable+stents%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">Promoting endothelial recovery and reducing neointimal hyperplasia using sequential-like release of acetylsalicylic acid and paclitaxel-loaded biodegradable stents.</a> Int J Nanomedicine. 9, 4117-4133 (2014).</li>
<li>Intengan, H. D., Schiffrin, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+Remodeling+in+Hypertension+Roles+of+Apoptosis+Inflammation%2C+and+Fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Hypertension%22%5BJournal%5D)">Vascular Remodeling in Hypertension Roles of Apoptosis Inflammation, and Fibrosis.</a> Hypertension. 38 (3), 581-587 (2001).</li>
<li>Greil, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+carotid+artery+flow+velocities+after+stent+implantation%3A+a+fluid+dynamics+study+with+laser+Doppler+anemometry%5BTitle%5D)+AND+%22J+Endovasc+Ther%22%5BJournal%5D)">Changes in carotid artery flow velocities after stent implantation: a fluid dynamics study with laser Doppler anemometry.</a> J Endovasc Ther. 10 (2), 275-284 (2003).</li>
<li>Egorova, A. D., van der Heiden, K., Poelmann, R. E., Hierck, B. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+cilia+as+biomechanical+sensors+in+regulating+endothelial+function%5BTitle%5D)+AND+%22Differentiation%22%5BJournal%5D)">Primary cilia as biomechanical sensors in regulating endothelial function.</a> Differentiation. 83 (2), S56-S61 (2012).</li>
<li>Liu, S. Q., Goldman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+blood+shear+stress+in+the+regulation+of+vascular+smooth+muscle+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22IEEE+T+Bio-Med+Eng%22%5BJournal%5D)">Role of blood shear stress in the regulation of vascular smooth muscle cell migration.</a> IEEE T Bio-Med Eng. 48 (4), 474-483 (2001).</li>
<li>Scott, D., Tan, Y., Shandas, R., Stenmark, K. R., Tan, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+pulsatility+flow+stimulates+smooth+muscle+cell+hypertrophy+and+contractile+protein+expression%5BTitle%5D)+AND+%22AJP%3A+Lung+C%22%5BJournal%5D)">High pulsatility flow stimulates smooth muscle cell hypertrophy and contractile protein expression.</a> AJP: Lung C. 304 (1), L70-L81 (2013).</li>
<li>Panaritis, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulsatility+Index+of+Temporal+and+Renal+Arteries+as+an+Early+Finding+of+Arteriopathy+in+Diabetic+Patients.%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Vasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Pulsatility Index of Temporal and Renal Arteries as an Early Finding of Arteriopathy in Diabetic Patients.</a> Ann Vasc Surg. 19 (1), 80-83 (2005).</li>
<li>Miao, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+Flow+Patterns+on+the+Localization+and+Expression+of+VE-Cadherin+at+Vascular+Endothelial+Cell+Junctions%3A+In+vivo+and+in+vitro+Investigations%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Res%22%5BJournal%5D)">Effects of Flow Patterns on the Localization and Expression of VE-Cadherin at Vascular Endothelial Cell Junctions: In vivo and in vitro Investigations.</a> J Vasc Res. 42 (1), 77-89 (2005).</li>
</ol>

יש המחברים אין לחשוף.

פרוטוקול זה מתאר שיטה של שכפול זרימה פועמת במבחנה, ועשוי להיות צעד ראשון סייע בקביעת תרומה של תנאי זרימה לפתולוגיות מחלה. המחקרים קודמים תוך שימוש בפרוטוקול זה מצאו תנאי זרימה לתרום לתגובה דלקתית בכלי הדם. 1, 10 בנוסף, פרוטוקול זה מיועד למעבדות מנוסים. ככזה, לא במכניקת נוזלי עומק, ולא האנליזה ביוכימית מתוארת במסמך זה. לדינמיקה מתקדמת יותר נוזלים, 1 וטכניקות מתקדמות, להתייעץ הספרות 2 קריטיים בתאי culturing תחת גזירת נוזל לאורך תקופות ממושכו...

שיעורי תחלואה במחלות לב וכלי דם הם הגדולים ביותר באמריקה, עם רבים כתוצאה מכלי דם בריאים. עורקים בריאים מורכבים של רקמה אלסטית, עם משטח luminal רך מצופה monolayer תא האנדותל (EC). זרימה בעורקים עשויה להיות מודל כפונקצית גל נדנוד עם שיעור זרימה ממוצע חיובי. מדד pulsatility (PI) הוא המנה של גודל תנודה ואומר זרימה (PI = (מקס -.. מינ &#39;) / Mean), 1 וכבר דגם במבחנה עם גמישות כלי משתנה 2 גמישות עורקים חשובה באחסון של זרימה. אנרגיה מהתכווצויות לב, מתרחב בלחץ הסיסטולי, וממלא תפקיד משמעותי בויסות זרימת דם לצרכן. כי הלב שומר עקבי, pulsatile, זרימת נפחית, הרחבת עורקים מגבירה שטח חתך, שיפור זרימת יציבות על ידי הקטנת מהירות זרימה, מאמץ גזירה, וצרכן. לעתים קרובות, שינויי עורקים בריאים נוכחי לגמישותאו עמידה, בו מוצגות התקשות משיפוץ כלי דם, רקמת צלקת או הסתיידות 3, 4. בנוסף, הפרעות אחרות של כלי דם, כגון היפרפלזיה neointimal (NIH), 5 מפרצת ויתר לחץ דם 6 וסיסטיק כלי דם 4, עלולות להצר קוטר כלי. עם זאת, טיפול תרופתי וטיפול הנוכחי של מכשיר מחלות כלי דם לעתים קרובות להזניח את החשיבות של דינמיקת קיר כלי עמידה או זרימת דם במחלת כלי דם שמסתבכת לעתים קרובות על ידי שינויים במורפולוגיה כלי ונכסים. לא אנגיופלסטיקה הבלון ולא תומכן לענות הסיבוך של קיר גמישות 7. לכן, דוגמנות במבחנה של דם זורמת כתוצאה ממחלת עורקים וטיפולים חשובה בחקירת פתולוגיות מחלה ויעילות של טיפול בעתיד. בזאת, אנו מתארים שיטה של ​​שכפול זרימת דם פיזיולוגית ופתולוגיים שנועדה לקבוע את תגובת תא בpathol מחלת כלי דםogies. זרימת נוזל גורמת ללחץ גזירה בקיר הכלי, שהוא אות מכאנית חשובה בבריאות כלי שיט, המשפיע על כל התאים בתוך כלי הדם. כמה חיישנים מכאניים על האנדותל של כלי הדם לגזירת נוזל זוהו, כולל cilium העיקרי שמוצג במחקרים שנעשה לאחרונה לאנדותל mechanosensing 8. פעילות תאי האנדותל ומורפולוגיה מושפעות מהירות זרימה, כיוון, וpulsatility. בנוסף, תא שריר חלק הגירה (SMC) יכולה להיות מושפעת על ידי mechano-אותות של מהירות זרימה נמוכה עד 9 נוזל ביניים, וגם יכולה להיות דרך האיתות אוטוקריני מתאי האנדותל באמצעות תגובתם לזרום וmechano-התמרה של זרימת אותות באמצעות ציטוקינים לשחרר 10. תלות &quot;המנה&quot; של גזירה ממוצעת, PI, ואיתות אוטוקריני יכולה להיות גם תלות הדדית. לשם כך, קביעת תגובת תא כלי דם לגזירת נוזל עם &quot;מינון&quot; מגוון בתרבות monolayerאו שיתוף התרבות במבחנה יכולה לספק תובנות מכניסטית לשיפוץ כלי דם ולשפר את המחלה וחיזוי טיפול. מערכת הזרימה השתמשה בניסוי זה מורכב ממשאבת דם, מאגר אוויר זרימת דעיכת במעלה הזרם, מד זרימה במורד הזרם משמש רק במהלך התקנה ניסיונית, תרבית תאים במורד הזרם, תא זרימת לוחות מקבילים, ומאגר המדיה. בקרת הזרימה משתנה כלי דם כגון מתכוונים קצב זרימה, פעימות לדקה, וPI יכול להיות מושגת באמצעות קצב זרימת שליטה, תדירות דופק, והכנסה של לחץ דעיכת. משאבות דם פועמות זמינות עם עקירת שבץ משתנה, בתדירות שבץ מבוקרת, הנוגעות ישירות לאומרים קצב זרימת נפחית, ותדירות דופק. מבוא של מאגר אוויר בתוך זרימת המעגל מאפשר לדעיכת לחץ, צמצום גודל זרימת תנודה. תקשורת היא נוזל בלתי דחיס, בעוד אוויר בתוך חדר דעיכת הוא דחיסה, המאפשר לחץ עודף מזרימת הגל להיותנקלט על ידי דחיסת אוויר. האוויר ליחס תקשורת מאפשר שליטה על כמה דעיכת מתרחשת. תא זרימת תרבית תאים מותאם אישית 75 מ&quot;מ באורך של 50 מ&quot;מ ברוחב נוצר מאקריליק. הזרימה נכנסה דרך נמל הכניסה, ומרחיבה דרך סעפת היניקה, מתן זרימה עקבית בשלמות של תא הזרימה. זרימה ומבנים דומים נמצאות בתא שקע. תאים הם זורעים על גבי שקופיות פונקציונליות, ולאחר מכן מחובר לתא הזרימה. זה מאפשר לאוכלוסיות גדולות, לקח בקלות לאחר המחקר. ניסויי שיתוף התרבות יכולים להשתמש בקרום פוליקרבונט נקבובי לחסל מגע תא אל התא בין תרבויות, ובמקביל לאפשר ציטוקינים / זרימת תחבורה. מערכת זו בעבר שימשה מודל זרימה הגבוה PI והשפעתו על תרבות monolayer האנדותל ושיתוף תרבות EC / SMC 1, 10, לחקור תא תגובה למחלה לצרכן גבוהה פתולוגית. בתיאור הפרוטוקול המשמש למודל הזרימה קון אלהditions, אנו מקווים לסייע לאחרים בקביעת תרומת זרימת אות לתא תגובה.

<table><tbody><tr><td>אצטון</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>34850</td><td></td></tr><tr><td>חומצה גופרתית</td><td>סיגמא-אולדריץ</td>' <td>320501</td><td></td></tr><tr><td>(3-אמינופרופיל) טריאתוקסיסילאן</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>440140</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת גלוטרלדהיד</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>G5882</td><td></td></tr><tr><td>אתנול</td><td>סיגמא-אולדריץ</td>' <td>459844</td><td></td></tr><tr><td>שקופית זכוכית (70&#160; מ"מ x 50&#160; מ"מ)</td> <td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>CLS294775X50</td><td></td></tr><tr><td>ממברנת פוליקרבונט</td><td>Millipore Corp.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>אטם סיליקון</td> HTTP09030 <td>Grace Bio-Labs</td><td>RD 475464</td><td></td></tr><tr><td>פיברונקטין (25 &mu; גרם/מ"ל)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F1141</td><td></td></tr><tr><td>קולגן Type-I</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C3867</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>Fluka</td><td>36486</td><td></td></tr><tr><td>NaOH</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S5881</td><td></td></tr><tr>תא <td></td><td></td><td>שיכוך</td><td>תא זה מיוצר בהתאמה אישית, וניתן לבקש אותו באמצעות השרטוט ההנדסי של <חזק>איור 3</חזק>.</td></tr><tr><td>משאבת דם</td><td>מכשירי הרווארד</td><td>529552</td><td></td></tr><tr><td>צינורות פולי-ויניל קרבונט</td><td>ארה"ב פלסטיק</td><td>65066, 65063, 65062</td><td>ייתכן שיידרשו גדלים שונים</td></tr><tr><td>חיבורי לואר</td><td>נורדסון רפואי</td><td></td><td>בגדלים שונים יידרשו, ויש לרכוש מספר חלקים לשימוש חלופי.</td></tr><tr><td>תא תרבות</td><td>במכונה ביתית</td> ניתן לרכוש אקריליק <td>מותאם אישית</td><td>ביריעות ולעבד אותו לשימוש המיועד. השרטוט ההנדסי המוצג ב<חזק>איור 2</חזק> עשוי לשמש לשחזור תא זה.</td></tr><tr><td>צלחת פטרי מרובעת</td><td>Cole-Parmer</td><td>EW-14007-10</td><td></td></tr><tr><td>מחזיק שקופיות זכוכית</td><td>Capitol Scientific</td><td>WHE-900303</td><td></td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי</td><td>Mediatech, Inc.</td><td>35-010-CV</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco's Modified Eagle Medium</td><td>Mediatech, Inc.</td><td>10-013-CV</td><td></td></tr><tr><td>מד זרימה</td><td>Sonotec, GmbH</td><td>Sonoflow co.55/060</td><td></td></tr><tr><td>ערכת אלסטומר Sylgard</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>761036-5EA</td><td></td></tr><tr><td>14 G צינורית פלדה</td><td>אספקת מעבדה כללית</td><td>S8365-1</td><td></td></tr></tbody></table>

במבחנה הדגם של פיזיולוגי ופתולוגיים זרימת דם עם בקשה לחקירות של שיפוץ תא דם

In Vitro Model of Physiological and Pathological Blood Flow with Application to Investigations of Vascular Cell Remodeling

מחלת כלי דם היא סיבה שכיחה למוות בארצות הברית. במסמך זה, אנו מציגים שיטה לבחון את התרומה של זרימת דינמיקה לקראת פתולוגיות מחלת כלי דם. עורקים בריאים לעתים קרובות נוכחי עם קיר התקשות, צלקות, או היצרות חלקית אשר עשוי להשפיע על כל שיעורי זרימת נוזל, ואת הגודל של זרימה פועמת, או מדד pulsatility. שכפול של תנאי זרימה שונים הוא התוצאה של כוונון לחץ זרימת דעיכת קאמרית במורד הזרם של משאבת דם. מבוא של אוויר בתוך מערכת זרימה סגורה מאפשר למדיום דחיסה לספוג לחץ פועם מהמשאבה, ולכן משתנה מדד pulsatility. השיטה המתוארת במסמך זה היא פשוט לשכפל, עם קלט השליטה ביותר, ותוצאות ניתן למדוד בקלות. מגבלות מסוימות הן בילוי של צורת גל המורכבת הפיזיולוגית הדופק, שנאמד רק על ידי המערכת. תאי אנדותל, תאי שריר חלק, ופיברובלסטים מושפעים זרימת דם through העורק. הרכיב הדינמי של זרימת דם נקבע על ידי עמידת פלט ודפנות העורקים של הלב. mechano-התמרה תא כלי דם של זרימת דינמיקה עלולה לעורר שחרור ציטוקינים והצטלבות בין סוגי תאים בתוך העורק. שיתוף התרבות של תאי כלי דם היא אינטראקציה תאי תאי תמונה המשקפת מדויקת יותר על קיר כלי דם ותגובת כלי דם לאיתות מכאנית. תרומה של זרימת דינמיקה, כולל תגובת התא למרכיבים הדינמיים וממוצעים (או יציבים) של זרימה, ולכן מדד חשוב בקביעת פתולוגיה מחלה ויעילות טיפול. באמצעות החדרת מודל שיתוף תרבות במבחנה ולחץ דעיכת במורד הזרם של משאבת דם אשר מייצרת תפוקת לב מדומה, פתולוגיות מחלת עורקים שונות עשויים להיחקר.

תחזוקה של תנאי זרימה היא סומך על הרכבה נכונה של זרימת המעגל (איור 1). צינורות בקוטר הוא בחירה חשובה בהרכבה, בקטרים ​​גדולים יותר צמצום זרימת התנגדות וירידה בלחץ הבא לפני ואחרי חדר התרבות. כדי להבטיח שנועדה מהירות לחץ וזרימה, להרכיב את המערכת עם מד זרימה לפני ניסוי עם צינורות מיועדים. מערך של ערוץ קאמרי תרבות ואקום (איור 2), עם נקבים באטם סיליקון (לא בתמונה), שומר לאטום בתוך זרימת המעגל. כדי להבטיח חותם, מהדק האביב ניתן להשתמש כדי להפעיל לחץ נוסף ע...

פרוטוקול זה משכפל את זרימת דם פיזיולוגית או פתולוגי במבחנה כדי לסייע בקביעת תגובת תא בפתולוגיות מחלה. על ידי החדרת לחץ דעיכת הקאמרית במורד הזרם של משאבת דם, זרימת דם בכלי הדם ברחבי ניתן סכמה והוטלה על monolayer של האנדותל של כלי דם או תרבות משותפת כוזב.

Vascular disease is a common cause of death within the United States. Herein, we present a method to examine the contribution of flow dynamics towards ...

המטרה הכללית של הניסוי הבא היא לבחון את ההשפעות של פתולוגיות שונות של זרימה פולסטילית על תאי אנדותל in vitro. מטרה זו מושגת תחילה על ידי טיפול כימי של שקיפות זכוכית וציפוין בחלבון, כדי להבטיח היצמדות תאים במהלך החשיפה לזרימה.כשלב שני, נקבע מדד הפעימות (pulsatility index) של הזרימה, המאפשר להשוות את הזרימה במערכת in vitro לערכים המתוארים בספרות. לאחר מכן, שקופיות שעליהן הושבנו תאים מחוברות למערכת הזרימה כדי למדוד את תגובת התאים לפתולוגיות של זרימה. התוצאות מראות שינויים במורפולוגיה ובביטוי חלבוני בהתבסס על פרופילי זרימה, תוך שימוש במיקרוסקופיה אופטית ובצביעה אימונופלואורסצנטית.היתרון העיקרי של טכניקה זו על פני משאבה פריסטלטית או פולסטילית הוא היכולת להתאים את פולסטיליות הזרימה כדי לחקות תגובה של רקמה חולה או בריאה. דבר זה עשוי לסייע במתן מענה לשאלות מפתח בתחום של מחלות עורקים. לתחילת העבודה, הניחו תויות זכוכית חדשות במידות של 75 millimeters על 50 millimeters על one millimeter לתוך כלי צביעה נקי עבור תויות זכוכית.לאחר מכן, הוסיפו כמות מספיקה של תמיסת חומצה גופרית 20% כדי לשקוע את השקופיות במלואן, והדגירו אותן בתמיסת החומצה למשך הלילה. למחרת, שטפו את השקופיות שלוש פעמים על ידי טבילה במים דה-יוניים טריים למשך חמש דקות בכל פעם. לאחר השטיפה, טבלו את השקופיות באצטון למשך 30 דקות, ולאחר מכן למשך הלילה בתמיסה של 6% three amino propyl trixi seline באצטון.בשלב הבא, שטפו את השקופיות שלוש פעמים באצטון טהור למשך חמש דקות, והחליפו את האצטון לאחר כל שטיפה. לאחר מכן, שטפו את השקופיות שלוש פעמים במים דה-יוניים למשך חמש דקות, והחליפו את המים הדה-יוניים לאחר כל שטיפה. לאחר מכן, טבלו את השקופיות ב-1.5% glutaraldehyde והשאירו אותן טבולות למשך 60 דקות.לאחר הקשירה הצולבת, שטפו את השקופיות פעמיים במים דה-יוניים, תוך החלפת המים הדה-יוניים אחרי כל שטיפה, ולאחר מכן הניחו את השקופיות ב-70% ethanol למשך 30 דקות לצורך עיקור. הסירו את ה-ethanol והניחו לכל שאריות שנותרו להתאדות מהשקופיות. לאחר הייבוש, בצעו רהידרציה לשקופיות על ידי הנחתן לזמן קצר במים דה-יוניים סטריליים.בשלב הבא, הוצא את מחזיק הזריקות והנח אותו בתוך צלחת פטרי ריבועית של 100 millimeter על 100 millimeter. במנדף זרימה למינרית, צפה את הזריקה הפונקציונלית ב-1 milliliter של תמיסת fibronectin בריכוז 25 microgram per milliliter, כך שתכסה את השטח המשוער שייחשף לתא תרבית התאים. לאחר מכן, כסה את הצלחת והדגר את הזריקות בטמפרטורה של 37 degrees Celsius למשך שעה עד שעתיים. לאחר ההדגרה, שאב את התמיסה הנותרת וזריע 600,000 תאי אנדותל ב-1 milliliter של DMEM עם 10%FBS על הצד המצופה של הזריקה.כסו את התא ולאחר מכן דגרו את התאים בטמפרטורה של 37 °C וב-5% carbon dioxide למשך 120 דקות. לאחר מכן, כסו את התאים במצע נוסף והמשיכו לדגור אותם עד שיגיעו ל-70% עד 80% confluent. חברו את מעגל הזרימה כפי שמתואר בפרוטוקול הטקסט המצורף וכפי שמוצג כאן; ודאו שתא השיכוך ומד הזרימה האולטרסוני מסודרים בכיוון הזרימה הנכון.בשלב הבא, מלאו את מעגל הזרימה והמאגר במים דה-יוניים. ודאו שצינור היציאה של המאגר טבול בתוך נפח המאגר. לאחר מכן, הדמינו את תבנית הזרימה באמצעות מד זרימה.פתחו את שסתום שחרור האוויר בתא הבלימה כדי לשנות את יחס הנפח של הנוזל לאוויר. סגרו את שסתום שחרור האוויר במרווחי מפלס נוזל שונים וחשבו את מדד הפולסטיליות (pulsatility index). כדי לחשב את המדד, העריכו את צורת גל הזרימה, כאשר השיא מייצג את ה-VM max.השפל מייצג את ה-v min וה-V mean הוא הממוצע של רישום האות. רשום את ערכי מדד הפעימה (puls index) במחברת. סמן את מפלס הנוזל שהתקבל ואת מדד הפעימותיות (pulsatility index) על תא הריסון באמצעות עט טוש קבוע לשימוש עתידי.קבעו את רמות מדד הדופק (pulsatility index) הרצויות מתוך ספרות הפתולוגיה המצוטטת בפרוטוקול הטקסט הנלווה, תוך כדי הכנת חימום מוקדם לתא הזרימה. DMEM מועשר ב-1%FBS באמבט מים בטמפרטורה של 37 °C. הוציאו אחת מהשקופיות המצופות בתאים מהתווך כאשר הם מגיעים ל-70 עד 80% התמזגות (confluency), והניחו אטם על הצד שבו ממוקמים התאים.בשלב הבא, יישרו את תעלת הוואקום של תא הזרימה עם החורים באטם. לאחר מכן, חברו צינורות ואקום לפתחי הוואקום, תוך הבטחה שאין דליפה של מדיה לוואקום. הניחו לוח פוליקרבונט מתחת לסמידה הזכוכית וסגרו את מכלול תא הזרימה באמצעות מהדק קפיץ אחד בכל אחד מהצדדים הקצרים ושני מהדקי קפיץ לאורך הצדדים הארוכים של תא הזרימה.בשלב הבא, חברו את תא הזרימה, את הכניסה ואת היציאה למעגל הזרימה. הניחו את מערכת הזרימה באינקובטור המכוון ל-37 °C ו-5% carbon dioxide ומלאו את המעגל במצע שחומם מראש על ידי מילוי המאגר במצע ושאיבתו פנימה בפעימות נמוכות. שמרו על זרימה זו במשך ארבע שעות כדי להכין את התאים (precondition).לאחר מכן, התאימו את נפח הנוזל בתא השיכוך לרמת מדד הפעימות (pulsatility index) המסומנת מראש והביאו את התאים לתרבית למשך הזמן הרצוי. התאי האנדותליים המוצגים כאן גודלו ללא זרימה, בזרימה קבועה ובזרימה פועמת.ניתן להבחין בשינויים במורפולוגיה, מהמורפולוגיה טיפוסית של תאי אנדותל למורפולוגיה דמוית כישור, לאחר 24 שעות של חשיפה לזרימה פולסטילית גבוהה. זאת בעוד שבזרימה סטטית ובזרימה רציפה נראה הבדל קטן או שום הבדל במורפולוגיה. תאי שריר חלק מושפעים אף הם מתרבית משותפת עם תאי אנדותל שנחשפו לזרימה פולסטילית גבוהה, כפי שמעידים כאן רמות שונות של alpha smooth muscle actin ו-myosin heavy chain.במהלך תנאי הזרימה המשתנים, תאים שנחשפו לזרימה פולסטילית הראו את הכמויות הגדולות ביותר של שני החלבונים, דבר המעיד על היפרטרופיה ויכולת התכווצות. בעת ביצוע פרוצדורה זו, חשוב לזכור לשמור על כל האטמים ולהבטיח שרמות הנוזלים יישארו קבועות לאחר סיום הפעולה. ניתן לבצע שיטות אחרות, כגון תרביות משותפות (co-culture) של תאי אנדותל ותאי כלי דם, על מנת לענות על שאלות נוספות, כגון אינטראקציות בין תאים.לאחר צפייה בסרטון זה, תרכשו הבנה טובה של אופן הרכבת מעגל הזרימה, בקרת האינדקס וחשיפת תאים אנדותליאליים לזרימה פולסטילית.

in-vitro-model-physiological-pathological-blood-flow-with-application

Research

JoVE Journal

Bioengineering

הנדסה ביולוגית

שיטת לתרבות monolayer תא האנדותל לאורך כל פני השטח הפנימי של המכשיר 3D microfluidic עם כלי הדם בגודל הערוצים (&lt;30 מיקרומטר) מתואר.

מיקרופלואידיקה Endothelialized לחקר אינטראקציות כלי הדם במחלות המטולוגיות

הנגישות של מודלים אמינים לחקירת אינטראקציות דם וסקולריות בבני אדם לוקה בחסר. אנו מציגים מודל מבחנה של תאי אנדותל אנושיים ראשוניים בתרבית בשילוב עם דם מלא אנושי כדי לחקור אינטראקציות תאיות הן בדם (ELISA) והן בתא כלי הדם (מיקרוסקופיה).

רומן במבחנה מודל לחקר יחסי הגומלין בין אדם דם מלא והאנדותל

כדי לחקור את האינטראקציה של חיידקים עם כלי הדם תחת לחץ גזירה, מתוארים תא זרימה ומודל מיקרוסקופיה תוך-חיונית מזנטרית in vivo המאפשרים לנתח את גורמי החיידקים והמארח התורמים להידבקות כלי הדם.

במבחנת in vivo המודל ללמוד הידבקות חיידקים לכלי השיט וול תנאי זרימה תחת

תאי אנדותל וריד טבורי אנושיים ראשוניים (HUVECs) גודלו למפגש בתוך מכשיר רשת מיקרופלואידי. צומת תאי האנדותל והתפלגות ה-F-actin הודגמו והשינויים בריכוז הסידן התוך-תאי וייצור תחמוצת החנקן בתגובה לאדנוזין טריפוספט (ATP) כומתו בזמן אמת ברמות תאים בודדים.

פיתוח ואפיון של<em&gt; במבחנה</em&gt; כלי דם קטן רשת מדידות כמותיות של האנדותל [Ca<sup&gt; 2 +</sup&gt;]<sub&gt; i</sub&gt; וייצור Nitric Oxide

כתב יד זה מציג שיטת הזרקה להנדס microvessels כי לשחזר מאפיינים פיסיולוגיים של האנדותל. תהליך microfluidic המבוסס יוצר רשתות כלי דם 3D פטנט עם תנאי tailorable, כגון זרימה, רכב הסלולר, גיאומטריה, והדרגות ביוכימיים. תהליך ייצור ודוגמאות של יישומים פוטנציאליים מתוארים.

Micropatterning והרכבת 3D microvessels

אנו מציגים מודל מחלת כלי דם במבחנה לחקור אינטראקציות דם שלם עם אנדותל נגזר המטופל. מערכת זו מאפשרת לחקור תכונות טרומבוגניות של תאי אנדותל ראשוניים בנסיבות שונות. השיטה מתאימה במיוחד להעריך את הטיפול situ thrombogenicity ונוגדי קרישה בשלבים שונים של קרישה.

במודל מחלה מיקרופלוידיקית במבחנה ללמוד אינטראקציות דם-אנדותל שלם ודינמיקת קריש דם בזמן אמת

כאן, אנו מספקים שבב microfluidic ומערכת מיקרופלואידית במחזור מבוקרת ויעילה מאוד באופן אוטומטי, כי מסכם את microenvironment הראשונית של neovascularization, המאפשר לתאי אנדותל (ECs) להיות מגורה על ידי מתח גזירה זוהר גבוה, רמה פיזיולוגית של זרימה transendothelial, גורם צמיחה אנדותל כלי דם שונים (VEGF) הפצה בו זמנית.

מודל מיקרופלואידי לחקות אירוע ראשוני של ניאו-סקולריזציה

כאן, אנו מציגים פרוטוקול חדש כדי לחקור ולמפה את התצהיר הממוקד של נשאי סמים לתאי אנדותל במודלים מפוברקים, בגודל אמיתי, עורק אנושי תלת מימדי תחת זרימה פיזיולוגית. השיטה המוצגת עשויה לשמש פלטפורמה חדשה למיקוד נשאי סמים בתוך מערכת כלי הדם.

אין ויטרו מודלים עורקיים בתרבית תאים 3D לחקר פילוח תרופות כלי דם תחת זרימה

פרוטוקול זה מציג את ההתקנה והתפעול של ביוריאקטור מודפס תלת-ממדי שפותח לאחרונה עבור תרבית ex vivo של כלי דם בזילוח. המערכת תוכננה להיות מאומצת בקלות על ידי משתמשים אחרים, מעשית, במחיר סביר וניתנת להתאמה ליישומים ניסיוניים שונים, כגון ביולוגיה בסיסית ומחקרים פרמקולוגיים.

אקס ויוו תרבית זילוח של כלי דם גדולים בביוריאקטור מודפס בתלת-ממד

מתואר כאן תהליך עבודה פשוט להבדיל בין תאי אנדותל לתאי גזע פלוריפוטנטיים אנושיים ואחריו פרוטוקול מפורט לגירוי המכני שלהם. זה מאפשר לחקור את המכנוביולוגיה ההתפתחותית של תאי אנדותל. גישה זו תואמת לבדיקות במורד הזרם של תאים חיים שנאספו משבב התרבית לאחר גירוי מכני.

במבחנה מודל של כלי דם אנושיים עובריים על שבב לחקר מכנוביולוגיה התפתחותית

חקור את השפעות הזרימה הפולסטילית על תאי אנדותל במודל מבחנתי. השיטה מאפשרת לחקור שינויים במורפולוגיה ובביטוי חלבונים בתנאי זרימה פיזיולוגיים ופתולוגיים.

במבחנה הדגם של פיזיולוגי ופתולוגיים זרימת דם עם בקשה לחקירות של שיפוץ תא דם

גלה סרטונים נוספים