Name: שיטת ניקוד מהירה פנוטיפי נוירולוגיות להערכת מחלת התקדמות בSOD1-G93A מודל העכבר של ALS (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-10-06T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 49 s
Description: למד שיטת ניקוד נוירולוגית פנוטיפית להערכת התקדמות מחלת ALS במודל עכבר SOD1-G93A. שיטה זו מאפשרת הערכה יומיומית מהירה ואמינה של תפקוד הגפיים האחוריות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

ברצוננו להודות לבת' לוין על הביקורת על כתב היד, לואלרי טסינרי על פיתוח פרוטוקול הגנוטיפ, ולמאט פרולה וקרלוס מאיה על הטיפול יוצא הדופן שלהם בבעלי חיים.

כל הניסויים שנערכו בהתאם לפרוטוקולים שתוארו על ידי המכונים הלאומי לבריאות מדריך לטיפול והשימוש בבעלי חיים ואושרו על ידי הוועדה של ALS TDI טיפול בבעלי חיים מוסדיים ושימוש (IACUC). 1. בעלי חיים, שיכון, ועיצוב הלימוד הערה: המושבה עכבר SOD1-G93A נגזרה מB6SJLTgN המתח הגבוה 1Gur עותק (SOD1G93A) המיוצר במקור על ידי et al גורני 7.. המושבה כיום מתוחזק על ידי חציית זכרים C57BL / 6-SJL מהונדסים עם נקבות C57BL / 6-SJL F1 wild-type. בעלי החיים F1 נוצרים על ידי חציית זכרים SJL עם נקבות B6. עכברים נשלחים לשבועון TDI ALS ב35-45 ימים של גיל. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאפשר עכברים לפחות אחד שבוע להסתגל למתקן בעלי החיים (מחזור אור / חושך של 12 שעות בטמפרטורה של C ° 18-23 ולחות 40-60%) לפני הקצאה למחקר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> SOD1-G93A זכר בית מיקרופוןדואר עכבר אחד בכל כלוב, מאז הקבוצה שוכנו זכרים נוטים להילחם. עכברי הבית הנקבה SOD1-G93A עד שני לכלוב. לספק העשרה סביבתית, בצורה של בקתות פלסטיק. לספק כרצונך מזון ומי מודעה, אלא אם העכברים הם חלק ממחקר הדורש מתן תרופה במי שתייה / אוכל. במקרים אלה, מנה ומזון שיא ומים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בגין מחקר סמים יעילות סביב גיל 50 יום וכולל 64 עכברי מין מאוזן בהתאמה המלטה (32 לכל מחזור). לבסוף, להבטיח כי החוקרים עורכים המחקרים עיוורו לתנאי ניסוי. הערה: מומלץ כי מחקר סמים יעילות טיפוסי מתחיל בגיל 50 יום אך המבוסס על הסוג של התערבות טיפולית שזה עשוי להיות עדיף להתחיל המחקר מוקדם או במאוחר. הערה: מחקר עם 32 עכברים למחזור הוא מופעל כדי לזהות סמים לוואי מין ספציפי. אם אין השוואות בין המינים ספציפיים נדרשות, 24 עכברים למחזור צריכים להספיק כדי לזהות סמים השפעות הכוללות.</li></ol> 2. משקל גוף <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משקל גוף רשומה לכל העכברים בלימוד יומי עם דיוק של עשירית גרם. הערה: משקל גוף הוא אינדיקטור רגיש להתקדמות מחלה ושל כל חולשה שעלולה להיגרם כתוצאה מטיפול תרופתי כרוני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משקל גוף העכבר להשתנות במידה ניכרת במהלך יום, להיות גבוה יותר בבקרים, ובכך לרשום אותם בערך באותו הזמן בכל יום. </li></ol> 3. מערכת נוירולוגיות ניקוד (NeuroScore) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להעריך ציוני נוירולוגיות (NS) עבור כל עכבר יומי על ידי התבוננות בעכבר תחת שלושה התנאים הבאים מבוצעים ברצף:) העכבר מושעה בזנבו, ב) העכבר מותר ללכת, ולאחר תחילת paresis ג) עכבר ממוקם על צידו. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבדיקת ההשעיה זנב, להחזיק את העכבר כ 1.5 &quot;מבסיס הזנב מעל החוט של הכלוב בביתם במשך 1-2 שניות, הרחק מאגן המזון, ואילו הערהארווינג hindlimbs. חזור על בדיקת ההשעיה 3 פעמים ולהקליט את התוצאה העקבית ביותר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למבחן ההליכה, הנח את העכבר על משטח נקי שמספק כמה מתיחה ומרחק הליכה של 25 סנטימטר (למשל., מגבת נייר מודבקת למטה למניעת החלקה). אפשר העכבר כדי ללכת כולל של 75 סנטימטר (אורך 3X של מגבת נייר) תוך התבוננות בהליכה שלה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למבחן &quot;רפלקס ליישר&quot;, הצב את העכבר על צדו ימני או השמאלי ובאמצעות תחנה-שעון למדוד את הזמן שלוקח לתקן את עצמו עד ללא עזרה משני הצדדים. הערה: רק משפט אחד של מבחן זה נדרש. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקבוע NS של כל hindlimb (ימין או שמאל) באופן עצמאי בסולם מ 0 עד 4. הערה: לדוגמא ציון של 0, 1 מציין כי hindlimb עזבה NS הוא 0, ואילו hindlimb NS הנכון הוא 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להקצות עשרות נוירולוגיות (0-4) המתאימות לקבוצה של תצפיות (סיכום שנקבעו בלוח 1) הבאה:<ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הקצאת NS 0 (Pre-סימפטומטי) אם הבא הוא ציין: כאשר העכבר הוא מושעה בזנב, hindlimb מציגה נוטה החוצה נורמלי כלומר, הוא מוארך מקו האמצע לרוחב באופן מלא והוא נשאר בתפקיד זה במשך 2 שניות או ארוך יותר. כאשר העכבר מותר ללכת, הליכה נורמלית הוא ציין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הקצאת 1 NS (סימפטומים ראשונים) אם הבא הוא ציין: כאשר העכבר הוא מושעה בזנב, hindlimb מציגה נוטה החוצה נורמלי, כלומר, הוא התמוטט או באופן חלקי התמוטט לכיוון קו האמצע לרוחב או שרועד בהשעית זנב או שהוא חזר בו / שלובות. כאשר העכבר מותר ללכת, הליכה רגילה או מעט איטית הוא ציין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הקצאת NS 2 (Onset של paresis) אם הבא הוא ציין: כאשר העכבר הוא מושעה בזנב, hindlimb היא באופן חלקי או לחלוטין התמוטט, לא להאריך הרבה. (יש עדיין עשויה להיות תנועה משותפת). כאשר העכבר מותר ללכת, hindlimb משמשת לmot קדימהיון עם זאת הבהונות כלפי מטה להתכרבל לפחות פעמיים במהלך הליכה של 90 סנטימטר או כל חלק של כף הרגל גורר לאורך תחתית כלוב / שולחן. כאשר העכבר ממוקם בצדו הימני והשמאלי, הוא מסוגל לתקן את עצמו בתוך 10 שניות משני הצדדים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הקצאת 3 NS (שיתוק) אם הבא הוא ציין: כאשר העכבר הוא מושעה בזנב, יש שיתוק נוקשה בhindlimb או תנועה משותפת מינימאלית. כאשר העכבר מותר ללכת קדימה יש תנועה עם זאת hindlimb לא נמצאת בשימוש לתנועה קדימה. כאשר העכבר ממוקם בצדו הימני והשמאלי, הוא מסוגל לתקן את עצמו בתוך 10 שניות משני הצדדים. הערה: לעתים רחוקות, לאחר תחילת השיתוק, לחות שתן עלולה להופיע בhindlimbs. לחות שתן שלא טופלה עלולה לגרום לשמאל שתן &quot;לשרוף&quot; ונגעים בעור. פנק את לחות שתן על ידי גזירת השיער, להחיל מים חמים סופג להסיר את השתן, ובעדינות למחוק יבש. אם נגעים בעור נמצאים תחול antibioמשחה טיק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הקצאת 4 NS (נקודת סיום הומנית) אם הבא הוא ציין: כאשר העכבר הוא מושעה בזנב, יש שיתוק נוקשה בhindlimbs. כאשר העכבר מותר ללכת, אין תנועה קדימה. כאשר העכבר ממוקם בצדו הימני והשמאלי הוא לא מסוגל לתקן את עצמו בתוך 10 שניות מצד או. כלומר, היעדר ליישר רפלקס. </li></ol></li></ol> 4. הזנת נתונים וניתוח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במהלך מחקר יעילות תרופה, להזין נתונים שנאספו עבור כל עכבר למערכת ניהול מידע מעבדה (LIMS) או לתוכנת גיליון אלקטרוני זמינה באופן מסחרי. הערה: תוכנת LIMS המפותחת TDI ALS היא מאגר מרכזי לכל הנתונים שנאספו ממחקרים פנימיים, מה שהופך את הנתונים הללו בנוחות נגישה לאורך זמן לחוקרי ALS TDI. LIMS עוקב כל עכבר בודד, עם זיהוי הייחודי שלה, חזרה לשושלת, משקל הגוף או ציון הנוירולוגיות בכל הימים העיון,וכולל את כל תצפיות אחרות ציינו במהלך חייו. LIMS סופו של דבר יוצר גיליון אלקטרוני המשמש לניתוחים שלאחר מכן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עם השלמת מחקר סמים יעילות, כלומר, כאשר כל העכברים להגיע לנקודת הסיום ההומנית, תוכנת גיליון אלקטרוני שימוש (ראה טבלה של חומרים) כדי לחשב את NS המשולב לכל עכבר, עבור כל יום על ידי ממוצעי hindlimb ימין ועל שמאל NS . בשלב הבא, לחשב את הגיל החציוני בכל NS לכל עכבר ומספר הימים בכל עכבר מבלה בNS מסוים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ניתוח שינויים הכוללים בNS לאורך זמן על ידי יבוא נתונים מהתוכנה הגיליון האלקטרוני לתוכנה הסטטיסטית (ראה טבלה של חומרים). להתאים את הנתונים הללו באמצעות מודל של רגרסיה לוגיסטית סודר האומד את NS הצפוי, עם גיל החציונים בNS ותרופה לטיפול בתופעות ברגרסיה. שימוש במבחן כיכר צ&#39;י יומן הדרגה להעריך את הסתברות סבירות השפעה ולקבוע אם אפקט תרופה-טיפול על התקדמות NS הוא סטטיסטיly משמעותי (ראה קובץ קוד נוסף להוראות צעד-אחר-צעד). הערה: p-value &lt;0.05 נחשב משמעותי מבחינה סטטיסטית. הערה: שיטה זו של ניתוח סטטיסטי מכבדת את הטבע הסידורי של נתונים NS והטבע המשתנה של מסלולי NS לעכברים בודדים. הוא העדיף משום מסלולי NS בודדים יכולים להיות שונים במידה ניכרת וכתוצאה מכך ממוצעי קבוצה הקשורים זמן NS שאינם מספיק רעיוני של תגובות NS. בנוסף, בחלק מהמקרים NS יכול להשתנות, במיוחד כאשר בטווח אפס-על-אחד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבסוף, תוכנת גרפים שימוש (ראה טבלה של חומרים) כדי ליצור &quot;סודר צפוי NS לעומת חציון גיל בNS&quot; גרפים לבעלי חיים שטופל בתרופה ושליטה (איור 2; ראה נוסף קוד קובץ להוראות צעד-אחר-צעד). השתמש בגרפים אלה כדי להעריך נוחות משמרות בין קבוצות שטופלה בתרופה ושליטה על ידי ביון מהציר y הגיל החציוני של תחילת מחלה (i.דואר., NS 2) על ציר x. הערה: ההבדל בגיל החציוני בין שתי הקבוצות מייצג שינוי תוצאת משימוש בסמים ומטופל כאמצעי מעשי של סדר הגודל של השפעה. הערה: משמרות ימינה בלעומת העקומה הצפויה NS חציון הגיל מצביע על האטת התקדמות מחלה סימפטומטית. לעומת זאת, משמרות שמאלה בעיקול לעומת הגיל החציוני הצפוי NS מצביעות מואצות התקדמות מחלה סימפטומטית. </li></ol>

<ol><li>Gurney, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Motor+neuron+degeneration+in+mice+that+express+a+human+Cu%2CZn+superoxide+dismutase+mutation%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Motor neuron degeneration in mice that express a human Cu,Zn superoxide dismutase mutation.</a> Science. 264 (5166), 1772-1775 (1994).</li>
<li>Rosen, D. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mutations+in+Cu%2FZn+superoxide+dismutase+gene+are+associated+with+familial+amyotrophic+lateral+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Mutations in Cu/Zn superoxide dismutase gene are associated with familial amyotrophic lateral sclerosis.</a> Nature. 362 (6415), 59-62 (1993).</li>
<li>Gurney, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+transgenic+mouse+models+of+amyotrophic+lateral+sclerosis+in+preclinical+drug+studies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurol+Sci.+152%2C+Suppl%22%5BJournal%5D)">The use of transgenic mouse models of amyotrophic lateral sclerosis in preclinical drug studies.</a> J Neurol Sci. 152, Suppl. 1 (6415), (1997).</li>
<li>Scott, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Design%2C+power%2C+and+interpretation+of+studies+in+the+standard+murine+model+of+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22Amyotroph+Lateral+Scler%22%5BJournal%5D)">Design, power, and interpretation of studies in the standard murine model of ALS.</a> Amyotroph Lateral Scler. 9 (1), 4-15 (2008).</li>
<li>Hegedus, J., Putman, C. T., Gordon, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time+course+of+preferential+motor+unit+loss+in+the+SOD1+G93A+mouse+model+of+amyotrophic+lateral+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol.+Dis%22%5BJournal%5D)">Time course of preferential motor unit loss in the SOD1 G93A mouse model of amyotrophic lateral sclerosis.</a> Neurobiol. Dis. 28 (2), 154-164 (2007).</li>
<li>Gordon, T., Ly, V., Hegedus, J., Tyreman, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+detection+of+denervated+muscle+fibers+in+hindlimb+muscles+after+sciatic+nerve+transection+in+wild+type+mice+and+in+the+G93A+mouse+model+of+amyotrophic+lateral+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Neurol.+Res%22%5BJournal%5D)">Early detection of denervated muscle fibers in hindlimb muscles after sciatic nerve transection in wild type mice and in the G93A mouse model of amyotrophic lateral sclerosis.</a> Neurol. Res. 31 (1), 28-42 (2009).</li>
<li>Gurney, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Motor+neuron+degeneration+in+mice+that+express+a+human+Cu%2CZn+superoxide+dismutase+mutation%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Motor neuron degeneration in mice that express a human Cu,Zn superoxide dismutase mutation.</a> Science. 264 (5166), 1772-1775 (1994).</li>
<li>Kim, K., Moore, D. H., Makriyannis, A., Abood, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AM1241%2C+a+cannabinoid+CB2+receptor+selective+compound%2C+delays+disease+progression+in+a+mouse+model+of+amyotrophic+lateral+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">AM1241, a cannabinoid CB2 receptor selective compound, delays disease progression in a mouse model of amyotrophic lateral sclerosis.</a> Eur. J. Pharmacol. 542 (1-3), 1-3 (2006).</li>
<li>Weydt, P., Hong, S. Y., Kliot, M., Moller, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+disease+onset+and+progression+in+the+SOD1+mouse+model+of+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroreport%22%5BJournal%5D)">Assessing disease onset and progression in the SOD1 mouse model of ALS.</a> Neuroreport. 14 (7), 1051-1054 (2003).</li>
<li>Azari, M. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioural+and+anatomical+effects+of+systemically+administered+leukemia+inhibitory+factor+in+the+SOD1%28G93A+G1H%29+mouse+model+of+familial+amyotrophic+lateral+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Behavioural and anatomical effects of systemically administered leukemia inhibitory factor in the SOD1(G93A G1H) mouse model of familial amyotrophic lateral sclerosis.</a> Brain Res. 982 (1), 92-97 (2003).</li>
<li>Guan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thiazolidinediones+expand+body+fluid+volume+through+PPARgamma+stimulation+of+ENaC-mediated+renal+salt+absorption%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">Thiazolidinediones expand body fluid volume through PPARgamma stimulation of ENaC-mediated renal salt absorption.</a> Nat. Med. 11 (8), 861-866 (2005).</li>
<li>Savcheniuk, O. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+probiotic+therapy+on+development+of+experimental+obesity+in+rats+caused+by+monosodium+glutamate%5BTitle%5D)+AND+%22Fiziol.+Zh%22%5BJournal%5D)">The effect of probiotic therapy on development of experimental obesity in rats caused by monosodium glutamate.</a> Fiziol. Zh. 60 (2), 63-69 (2014).</li>
<li>Smittkamp, S. E., Brown, J. W., Stanford, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time-course+and+characterization+of+orolingual+motor+deficits+in+B6SJL-Tg%28SOD1-G93A%291Gur%2FJ+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Time-course and characterization of orolingual motor deficits in B6SJL-Tg(SOD1-G93A)1Gur/J mice.</a> Neuroscience. 151 (2), 613-621 (2008).</li>
<li>C, M., Gurney, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+low+expressor+line+of+transgenic+mice+carrying+a+mutant+human+Cu%2CZn+superoxide+dismutase+%28SOD1%29+gene+develops+pathological+changes+that+most+closely+resemble+those+in+human+amyotrophic+lateral+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">A low expressor line of transgenic mice carrying a mutant human Cu,Zn superoxide dismutase (SOD1) gene develops pathological changes that most closely resemble those in human amyotrophic lateral sclerosis.</a> Acta Neuropathol. 93 (6), 537-550 (1997).</li>
<li>Wegorzewska, I., Baloh, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TDP-43-based+animal+models+of+neurodegeneration%3A+new+insights+into+ALS+pathology+and+pathophysiology%5BTitle%5D)+AND+%22Neurodegener.+Dis%22%5BJournal%5D)">TDP-43-based animal models of neurodegeneration: new insights into ALS pathology and pathophysiology.</a> Neurodegener. Dis. 8 (4), 262-274 (2011).</li>
<li>Hatzipetros, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((C57BL%2F6J+congenic+Prp-TDP43A315T+mice+develop+progressive+neurodegeneration+in+the+myenteric+plexus+of+the+colon+without+exhibiting+key+features+of+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">C57BL/6J congenic Prp-TDP43A315T mice develop progressive neurodegeneration in the myenteric plexus of the colon without exhibiting key features of ALS.</a> Brain Res. 1584, 59-72 (2014).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

בדו&quot;ח זה, אנו מתארים פרוטוקול וידאו מהיר ופשוט, שאם מיושם כהלכה, מסוגל באופן מהימן הערכת התקדמות המחלה בעכברי SOD1-G93A וזיהוי שינויים בהשפעת סמים. בעוד קבוצות שונות פיתחו מערכות ניקוד פנוטיפי לSOD1 לעכברי G93A-8-10, הם לעתים קרובות לא מספקים פרטים מספיקים על ההליך ואינם מתאימים לשכפול. כתוצאה מכך, מערכות ניקוד משמשות מחוץ לקבוצה הספציפית שמפתחת אותם רק לעתים נדירות. בדוח זה, שילוב של כתב יד מפורטת עם וידאו ממזער בהירויות ניקוד והשתנות הבין-הנסיין ובכך מאפשרות לפרו...

מאז הפיתוח שלה באמצע שנתי ה -1990 דגם העכבר מהונדס SOD1-G93A היה מודל החיה הנפוצה ביותר של מחלת ניוון (ALS) 1. מודל עכבר מהונדס זה מהונדס גנטי לביטוי יתר טופס מוטציה של גן סופראוקסיד דיסמוטאז Cu / Zn האנושי 1 (SOD1) חסת גליצין קשור-ALS למוטצית אלאנין בחומצת אמינו 93 (G93A). המוטציה G93A היא אחד של מוטציות רבות בגן SOD1 שהאיפור באופן קולקטיבי כחמישית ממקרי ה- ALS המשפחתיים 2. מודל SOD1-G93A הפך סוס עבודה מחקר לפיתוח תרופות ALS כי בנוסף לקשר הגנטי הברור שלה לALS, היא דומה רבות של התכונות פתולוגיים של ALS בבני אדם כגון אובדן מוטורי נוירון, חולשת שרירים מתקדמת וניוון, עם סופו של דבר שיתוק ומוות 3. אם כי, כפי שקורה לעתים קרובות עם מודלים של בעלי חיים מהונדסים, יש דו טבועהשתנות ological קשורות עם SOD1 לעכברים-G93A. סקוט ואח &#39;. קבע כי קבוצות של לפחות 24 עכברי מין מאוזן בהתאמה המלטה יש צורך במחקר עיצובי סמים יעילות כדי להתגבר על הרעש שנוצר על ידי השונות הביולוגיות 4. המספר הגדול של בעלי חיים הנדרשים במחקרים אלה, בשילוב עם התקדמות המחלה האגרסיבית ואת הצורך בניטור יומי אוסר על השימוש בטכניקות משוכללות, גוזל זמן ופוטנציאל דחק למדידת כוח ותפקוד עצבית-שרירית (לדוגמא, electromyography, כוח אחיזה, rotorod , וכיוצא בזה.). במקום זאת, הוא מדגיש את הצורך בin vivo כלי הקרנה שבאופן מהימן מעריך את התפקוד העצבית-שרירית של SOD1 לעכברים-G93A באופן מהיר. בALS TDI פרוטוקול פותח שמאפשר ההערכה אמינה של התפקוד העצבית-שרירית של SOD1 לעכברים-G93A בפחות מ -30 שניות לכל עכבר בממוצע. encompa פרוטוקול זהsses הערכה יומית של פונקצית hindlimb באמצעות מערכת פשוטה נוירולוגיות ניקוד (NeuroScore) אשר מתוארת בדוח זה בעיתונות ובוידאו. על תפקוד hindlimb NeuroScore מתמקד בגלל גירעונות hindlimb הם המוקדם ביותר שדווחו סימן נוירולוגיות של מחלה בעכברי SOD1-G93A 5,6. יתר על כן, הפרוטוקול שפותח על ידי ALS TDI מספק הערכה בלתי מוטה של ​​תחילת paresis (שיתוק קל או חלקי), התקדמות והחומרה של שיתוק והוא רגיש מספיק כדי לזהות שינויים בהשפעת סמים בהתקדמות מחלה.

<table><tbody><tr><td>B6SJLTgN(SOD1G93A)1זן גור</td><td>מעבדת ג'קסון, בר הרבור, ME</td><td>002726</td><td>זן עכברים ששימש במחקר זה</td></tr><tr><td>Breeders</td><td>Biomedical Research Models, Inc., Worcester, MA</td><td></td><td>Maintenance</td></tr><tr><td>Colony Scale Navigator</td><td>OHAUS, Parsippany, NJ</td><td>דגם N14120</td><td>משמש לשקילת עכברים</td></tr><tr><td>Nutra-GelH</td><td>Bio-Serv, Flemington, NJ</td><td></td>#S4798 <td>מזון רטוב מסופק לעכברים חולים</td></tr><tr><td>מוקרנים מעבדה בעלי חיים דיאטה</td><td>הרלן, אינדיאנפוליס, IN</td><td>2918-111914M</td><td>צ'או דיאטת</td></tr><tr><td>צ'או בדרגת מעבדה סאני-צ'יפס</td><td>הרלן טקלד, אינדיאנפוליס, IN</td><td>7090</td><td>מצעים</td></tr><tr><td>JMPH&nbsp;</td><td>מכון SAS, בע"מ, SAS קמפוס דרייב, קארי, קרוליינה הצפונית</td><td>&nbsp; v10.0.2</td><td>תוכנה סטטיסטית</td></tr><tr><td>Microsoft Excel</td><td>Microsoft, One Microsoft Way, Redmond, WA</td><td>Excel 2013 (v 15.0)</td><td>תוכנת גיליון אלקטרוני</td></tr><tr><td>GraphPad Prism 5</td><td>GraphPad software Inc., La Jolla, CA</td><td>v5.4</td><td>תוכנת גרפים</td></tr><tr><td>Mouse Huts</td><td>Bio-Serv, Flemington, NJ</td><td>K3272</td><td>להעשרה סביבתית</td></tr></tbody></table>

שיטת ניקוד מהירה פנוטיפי נוירולוגיות להערכת מחלת התקדמות בsod1-g93a מודל העכבר של als

A Quick Phenotypic Neurological Scoring System for Evaluating Disease Progression in the SOD1-G93A Mouse Model of ALS

העכבר הטרנסגני SOD1-G93A הוא המודל החייתי הנפוץ ביותר של טרשת אמיוטרופית צידית (ALS). ב-ALS TDI פיתחנו פרוטוקול סינון פנוטיפי, המודגם בסרטון כאן, המעריך באופן אמין את התפקוד העצבי-שרירי של עכברי SOD1-G93A בצורה מהירה. פרוטוקול זה כולל מערכת ניקוד נוירולוגית פשוטה (NeuroScore) שנועדה להעריך את תפקוד הגפיים האחוריות. NeuroScore מתמקדת בתפקוד הגפיים האחוריות מכיוון שליקויים בגפיים האחוריות הם הסימן הנוירולוגי המוקדם ביותר המדווח למחלה בעכברי SOD1-G93A. הפרוטוקול שפותח על ידי ALS TDI מספק הערכה בלתי משוחדת של הופעת שיתוק (שיתוק קל או חלקי), התקדמות וחומרת השיתוק והוא רגיש מספיק כדי לזהות שינויים הנגרמים על ידי תרופות בהתקדמות המחלה. בדוח זה, השילוב של כתב יד מפורט עם וידאו ממזער את אי הבהירות בניקוד ואת השונות בין הנסיינים ובכך מאפשר לאמץ את הפרוטוקול על ידי מעבדות אחרות ומאפשר השוואות בין מחקרים המתקיימים במסגרות שונות. אנו מאמינים שפרוטוקול וידאו זה יכול לשמש ככלי אימון מצוין לחוקרי ALS בהווה ובעתיד.

נתוני ציון הנוירולוגית של 90 גברים ו -94 נקבות עכברים שאינם מטופלים SOD1-G93A למדו בALS TDI בשינה 2014 הוערכו. התוצאות מראות כי יש לי עכברי זכרים בדרך כלל התקדמות מחלה אגרסיבית יותר מאשר נקבות עכברים, כפי שמעידים חלק גדול יותר של תוחלת החיים שלהם ליום 1 בNS בהשוואה לנשים. NS 2 וNS 3 להתרחש בתדירות כמעט שווה על פני מינים. NS 0 הוצא מהניתוח, כי זה נחשב פנוטיפ &quot;נורמלי&quot;. 4 NS גם לא נכלל כי על פי הגדרה זה יכול להתרחש רק פעם אחת בחיים של SOD1-G93A עכבר (טבלה 2 ואיור 1)...

פרוטוקול וידאו זה מתאר שיטה רגישה, אמינה ומהירה להערכת הליקויים העצביים-שריריים במודל עכבר טרנסגני של טרשת אמיוטרופית צידית.

שיטת ניקוד מהירה פנוטיפי נוירולוגיות להערכת מחלת התקדמות בSOD1-G93A מודל העכבר של ALS

The SOD1-G93A transgenic mouse is the most widely used animal model of amyotrophic lateral sclerosis (ALS). At ALS TDI we developed a phenotypic screening ...

המטרה הכללית של הליך זה היא להעריך במהירות ובאמינות את התפקוד הנוירו-שרירי של עכברי SOD1-G93A באמצעות הערכה יומית של תפקוד הגפיים האחוריות שלהם, תוך שימוש במערכת פשוטה של דירוג נוירולוגי פנוטיפי. הדבר מבוצע תחילה על ידי התבוננות בגפיים האחוריות של העכברים בעת תלייתם מהזנב. השלב השני הוא מתן אפשרות לעכברים ללכת תוך כדי התבוננות בהליכתם.בשלב הבא, העכברים מונחים על צדם כדי לבחון את נוכחותו או היעדרו של רפלקס הכתיבה. השלב האחרון הוא ביצוע ניתוח הנתונים על ידי התאמת נתוני הניקוד הנוירולוגי של קבוצות העכברים למודל רגרסיה לוגיסטית סדרית. בסופו של דבר, מערכת הניקוד הנוירולוגי הפנוטיפית שלנו משמשת להערכת התקדמות המחלה ב-SOD1-G93A, מודל עכברים ל-ALS, במטרה להבחין ביעילותם של התערבויות טיפוליות.היתרון המרכזי של שיטה זו על פני כל שאר הטכניקות הקיימות הוא שהיא מהירה, פשוטה, אמינה וגורמת למינימום של סטרס לעכברים. להשלכות של שיטה זו יש חשיבות עבור טיפול בטרשת נשית צדית (ALS), כיוון שהיא מאפשרת הערכה מהירה של התערבויות טיפוליות במודל העכברים הנפוץ ביותר למחלה. הדגמה חזותית היא קריטית, שכן שיטת הניקוד הנוירולוגית קשה ללמידה מכיוון שההבדלים הנוירולוגיים עשויים להיות דקים.התחלו בשיכון עכברי SOD1-G93A זכרים כך שיהיה עכבר אחד בכל כלוב; עכברי SOD1-G93A נקבות שיכנו עד שתיים בכל כלוב. ספקו לעכברים העשרה סביבתית בדמות בקתות פלסטיק. ספקו לעכברים מזון ומים ad libitum.מדדו את משקל הגוף של כל העכברים והמחקרים באותו הזמן. משקל גוף יומי הוא אינדיקטור רגיש להתקדמות המחלה ולכל אי-שלווה שעלולה לנבוע מטיפול תרופתי כרוני. במהלך המחקר, העריכו מדי יום את הניקוד הנוירולוגי של כל עכבר באמצעות סדרת מבחנים הכוללת שלושה בדיקות המבוצעות באופן רצפי.צפו בזהירות, כיוון שקביעת ציונים בנקודות מעבר פנוטיפיות היא קשה מאוד במבחן הראשון. במבחן תליית הזנב, החזיקו את העכבר במרחק של כ-1.5 inches מבסיס הזנב מעל חוט העליון של כלוב הבית. צפו בתפקוד הגפיים האחוריות למשך תקופה של שנייה אחת עד שתיים וחזרו על המבחן שלוש פעמים.עבור מבחן ההליכה. הניחו את העכבר על משטח נקי המספק אחיזה מסוימת ובעל מרחק הליכה של 25 סנטימטרים לפחות. אפשרו לעכבר ללכת עד 75 סנטימטרים תוך כדי תצפית על דפוסי ההליכה שלו.עבור בדיקת רפלקס הכתיבה, הניחו את העכבר על צדו והשתמשו בשעון עצר כדי למדוד את הזמן הדרוש לו כדי לכתוב את עצמו ללא סיוע משני הצדדים. נדרש ניסוי אחד בלבד של בדיקה זו. דרגו כל גפה אחורית, שמאל או ימין, באופן עצמאי על סולם של אפס עד ארבע, בהתבסס על התוצאה המצטברת של שלוש בדיקות התצפית הפנוטיפיות.ציון סינוס של אפס מעיד על כך שהעכבר נמצא בשלב טרום-סימפטומטי. במצב זה, במהלך מבחן ההשעיה, הגפיים האחוריות פשוטות לחלוטין הרחק מקו האמצע הלטרלי ונשארות בתנוחה זו למשך שתי שניות או יותר. כמו כן, במהלך מבחן ההליכה, נצפה הליכה תקינה.הקצה ציון של אחת המציין את הופעת התסמינים הראשונים. זאת אם במהלך מבחן התלייה, הגפה האחורית קורסת לכיוון קו האמצע הלטרלי, קורסת חלקית לכיוון קו האמצע הלטרלי, רועדת או פרושה באופן חריג בצורה אחרת. בנוסף לתסמיני מבחן התלייה שהוצגו כעת, ההליכה של עכבר שצריך לקבל ציון של אחת צריכה עדיין להיראות נורמלית או נמוכה מעט יותר.הקצה ציון של שתיים המעיד על תחילת פארזיס (Parsis). אם במהלך בדיקת ההשעיה, הגפה האחורית קורסת באופן חלקי או מלא, ובנוסף, במהלך בדיקת ההליכה, הגפיים האחוריות משמשות לתנועה קדימה. עם זאת, כדי לקבל ציון של שתיים, הבהונות חייבות להתקפל כלפי מטה לפחות פעמיים במהלך הליכה של 75 סנטימטר, או שכל חלק מהכף הרגל נגרר.על העכבר להיות מסוגל להזדקף בעצמו תוך 10 שניות לאחר שהוצב על שני צדדיו. ציון סינוס של שלוש מעיד על שיתוק. אם במהלך מבחן התלייה העכבר מראה שיתוק קשיח בגפה האחורית או תנועת מפרקים מינימלית, העכבר עשוי להפגין תנועה קדימה במהלך מבחן ההליכה, אך לא באמצעות הגפיים האחוריות שלו.בנוסף לציון סינוס של שלושה, העכבר חייב עדיין להיות מסוגל לזקוף את עצמו לאחר שהוצב על שני צדדיו בתוך 10 שניות. לבסוף, ציון של ארבעה מגדיר את נקודת הסיום ההומנית בכל פעם שהעכבר מפגין שיתוק נוקשה במהלך התליה. הבדיקה מראה היעדר תנועה קדימה במהלך מבחן ההליכה באמצעות הגפיים האחוריות, והעכבר אינו מסוגל לזקוף את עצמו בתוך 10 שניות לאחר שהוצב על אחת הצדדים.לעכברים זכרים יש בדרך כלל התקדמות מחלה אגרסיבית יותר מאשר לעכברים נקבות, כפי שמעיד שיעור גבוה יותר של משך חייהם שבו מופיעים תסמינים שניתן לסווגם כציון נוירולוגי של אחת בהשוואה לנקבות. כאשר התסמינים מחמירים לטווח של ציון נוירולוגי של שתיים או שלוש, מספר הימים שבילו בכל ציון הוא שווה בתדירותו בין המגדרים. מוצגים כאן לוגיסטיקות סדרתיות, גרפים של ניתוח סטטיסטי שהופקו באמצעות פרוטוקול ה-neuroco שתואר זה עתה.נתונים אלה לקוחים ממחקר פרמקולוגי של יעילות תרופתית, שבו קבוצת עכברים מסוג SOD one G 93 a שקיבלו את התרכובת הנבדקת TDI 1 73 הושוותה לקבוצת עכברים שקיבלו vehicle. לא נצפו הבדלים מובהקים סטטיסטית כאשר המינים נותחו בנפרד, אך הושגה מובהקות סטטיסטית כאשר המינים אוחדו. למרות שהראתה מגמות דומות, ניתוח הישרדות לפי Kaplan Meyer לא היה רגיש מספיק כדי לחשוף הבדלים מובהקים, גם כאשר המינים אוחדו.ברגע שהשיטה נלמדת, ניתן להחיל את מערכת הניקוד בפחות מדקה לעכבר, במידה והיא מבוצעת כראוי. לאחר צפייה בסרטון זה, אמורה להיות לכם הבנה טובה לגבי האופן שבו מעריכים את התקדמות המחלה ב-SOD one G 93, מודל עכברים ל-ALS, באמצעות מערכת ה-Neuroco.

a-quick-phenotypic-neurological-scoring-system-for-evaluating-disease

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

אנו מתארים פרוטוקול עבור כימות מהיר ורגיש של חומרת המחלה בעכברי מודל אטקסיה cerebellar. אמצעים כגון גפיים אחוריות וספקה, מדף הבדיקה, הליכה ו קיפוזיס. פרוטוקול זה ביעילות מפלה בין אנשים מושפעים ולא מושפעים, ומזהה את ההתקדמות של אנשים מושפעים לאורך זמן.

ניקוד פשוט Composite הפנוטיפ מערכת להערכת מודלים של עכבר אטקסיה cerebellar

במודל של עכברים של טרשת לרוחב amyotrophic (ALS) נבחן קלינית התנהגותית. כתנאי ניתוח immunohistological נלווה להכנת חוט השדרה מתואר בפירוט.

בדיקה קלינית הסרת חוט השדרה במודל של עכברים של טרשת לרוחב amyotrophic (ALS)

פרוטוקול בדיקה אופטימלי מוצג במאמר זה עבור מבחן הביצועים של Rotarod, המשמש למדידת נכות נוירולוגית מתקדמת בעכברים נגועים ב-TMEV.

מדידת נכות נוירולוגית מתקדמת עכבר דגם של טרשת נפוצה

תיאר כאן היא מבוימת, התנהגות ההקרנה התנהגותית שניתן להשתמש בהם כדי המסך עבור תרכובות כי התערוכה יעילות vivo על התנהגויות מוטוריות קוגניטיבית ופונקציונלית מודלים עכבר מהונדס של עמילואידוזיס β ו tauopathy. שיטות אלה מותאמות לתצוגת תרכובות עבור פעילות במשימות זיכרון לטווח קצר ולזיכרון עבודה.

הערכה של חלופה ספונטנית, זיהוי אובייקטים רומנטי ו Clbing איברים מודלים עכבר מהונדס של Amyloid-β ו נוירופתולוגיה טאו

מאמר זה מציג שיטה מדידות חוזרות של אוורור ופעילות שרירי הנשימה בתוך טרשת לרוחב amyotrophic מתנהג בחופשיות במודל של עכברים (ALS) לאורך התקדמות המחלה עם plethysmography הגוף כולו ואת electromyography באמצעות מכשיר טלמטריה מושתל.

מדידה חוזרת של פעילות שרירי הנשימה ואת אוורור בעכברי מודל של המחלה שרירית

המדד של תסמונת גיאן הוא כלי שימושי כדי להעריך את העכבר דגמי הקשורים ניוון מוחיים אך לעתים קרובות הוא להחיל רק כדי לגרות בעצב הירך ב- hindlimbs. כאן, אנו מתארים שיטה למדידת השריר מורכבים פוטנציאל הפעולה (CMAP) ויוו בשרירי forelimb העכבר innervated על ידי מקלעת הזרוע.

אין ויוו מדידות אלקטרופיזיולוגיות של פוטנציאל הפעולה השריר מורכב מ Forelimbs העכבר דגמים של ניוון מוטורי נוירון

אנצפלומיאליטיס אוטואימונית ניסיונית (EAE) משמשת כמודל של בעלי חיים לטרשת נפוצה. מאמר זה מתאר גישה לניקוד דלקת בחוט השדרה, דמיאלינציה ופגיעה אקסונלית ב- EAE. בנוסף, מוצגת שיטה לכימות רמות האור של נוירופילמנט מסיס בסרום העכברים, המאפשרת הערכה של פגיעה אקסונלית בעכברים חיים.

ניקוד דלקת במערכת העצבים המרכזית, דמיאלינציה ופגיעה באקסון באנצפלומיאליטיס אוטואימונית ניסיונית

אנצפלומיאליטיס אוטואימונית ניסיונית היא אחד המודלים הנפוצים ביותר של טרשת נפוצה. בפרוטוקול הנוכחי, עכברי C57BL/6J משני המינים מחוסנים בפפטיד גליקופרוטאין אוליגודנדרוציטים מיאלין, וכתוצאה מכך בעיקר פרזיס עולה של הזנב והגפיים. כאן אנו דנים בפרוטוקול של אינדוקציה והערכה של EAE.

מידול טרשת נפוצה בשני המינים: MOG35-induced ניסיוני אוטואימוני אנצפלומיאליטיס

מאמר זה מציג פרוטוקול לביצוע הרעיון של יחידת שבץ עכבר (mSU) בעכברים בעלי פעימות גדולות ומוכח באופן עצמאי. הוא גם מספק פרוטוקול סטנדרטי לביצוע סולם שבץ ניסיוני מוקד בעכברים, אשר מעריך ליקויים מוקדיים שבץ שזוהו אפילו לטווח ארוך.

פרוטוקול יחידת שבץ עכבר עם ניקוד נוירולוגי סטנדרטי למחקרי שבץ עכבר תרגומיים

מאמר זה מפרט את שיטות המתן התוך-אתקלית לטיפולים ממוקדים במערכת העצבים המרכזית בעכברים בוגרים, תוך התמקדות בדיוק בפרוטוקול ובאפשרות הזרקה חוזרת. הוא כולל ממצאים ממחקר אימות שבו אוליגונוקלאוטידים אנטיסנסיים הפחיתו ביטוי SOD1 מוטנטי בעכברי מודל SOD1-ALS, מה שתומך בתועלת הגישה במחקר פרה-קליני במחלות נוירודגנרטיביות.

הזרקה תוך-ראשית מותנית של SOD1-ASO למטרות מיקוד מדויק במערכת העצבים המרכזית (CNS) ויעילות חיזוי בעכברי ALS בני אדם עם SOD1-G93A

למד שיטת ניקוד נוירולוגית פנוטיפית להערכת התקדמות מחלת ALS במודל עכבר SOD1-G93A. שיטה זו מאפשרת הערכה יומיומית מהירה ואמינה של תפקוד הגפיים האחוריות.

שיטת ניקוד מהירה פנוטיפי נוירולוגיות להערכת מחלת התקדמות בSOD1-G93A מודל העכבר של ALS

גלה סרטונים נוספים