Name: Cortex-, Hippocampus-, Thalamus-, Hypothalamus-, רוחב מחיצת גרעין, וסטריאטום ספציפי ברחם Electroporation בC57BL / 6 העכבר (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-01-18T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min
Description: למד את שיטת האלקטרופורציה ברחם לשינוי תאים ספציפיים במערכת העצבים המרכזית של עכברי C57BL/6. השיטה מאפשרת מניפולציה יעילה של אזורים כמו קורטקס, היפוקמפוס, תלמוס והיפותלמוס ללא צורך ביצירת עכברים מהונדסים גנטית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

טכני נתמך על ידי מלאני פייפר וניקולאי שמרובסקי (המכון לאנטומיה מיקרוסקופית ונוירוביולוגיה, המרכז הרפואי האוניברסיטאי מיינץ).

הצהרת אתיקה: הטיפול בעכברים והפרוצדורות בוצעו בהתאם להנחיות אירופאיות, לאומיות ומוסדיות לטיפול בבעלי חיים. 1. ברחם Electroporation הערה: ברחם electroporation בוצע כפי שפורסם בעבר 12,14. לכן, השיטה היא רק תיארה בקצרה בבאה (איור 1). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן פתרון מהיר ירוק צבעוני ללא רעלן פנימי מתקדם פלסמיד הכיתה transfection (המכיל 1,5 pCAGGS) כפי שתואר קודם לכן 12. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משוך ולטחון (35 זווית מעלות) נימי זכוכית בורוסיליקט (0.8-.9 קוטר) לזריקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעקר מכשירים. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כִּירוּרגִיָה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנהל משככי כאבים (carprofen, 4 מ&quot;ג / קילוגרם משקל גוף, SC, 24 דיפו שעות) לפחות 30 דקות לפני תחילת הניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמור את האורך שלההרדמה למקסימום של 35-45 דקות (שלב III - שלב של הרדמה כירורגית פי 15 guedel - דקות 25-30 מקסימליים). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרדימי עכברי מתוזמן בהריון עם isoflurane (אינדוקציה בתא: 2.8%, ניתוח באמצעות מסכה: 2.5%). לאשר הרדמה על ידי חוסר תגובה לבוהן קמצוץ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל משחה העין כדי למנוע עין-יובש במהלך הרדמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחטא את אזור הניתוח עם 7.5% פתרון Providone-יוד ולכסות את העכבר עם גזה סטרילית (לחה עם פתרון 0.9% מלוחים נזיל אלכוהול) עם רק את אזור הניתוח החשוף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> גזור לפתוח את חלל הבטן עם אזמל (חתך בעור: 1.5-2 סנטימטר, חתך שריר: 1-1.5 סנטימטר). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשמר את חלל הבטן נפתח מהתייבשות על ידי הרטבה עם 0.9% תמיסת מלח נזיל אלכוהול חיממה או תמיסה איזוטונית סטרילית אחרת כמו בבימויו של צוות או ועדה וטרינרים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחלץ בזהירות קרנות רחם (באמצעות מלקחיים טבעת, לא לגעת ברחם עם אצבעים). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזרקה של ה- DNA וelectroporation. הערה: הפרטים המדויקים למיקוד אזורים ספציפיים מצוינים בסעיף 2. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאט לאט להזריק את פתרון ה- DNA בצבע לתוך החדר כפי שצוין באיור 1 וסעיף 2 דרך נימי ורוסיליקט מוכנות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל המתח המתאים לשלב העוברי המתאים (למשל., 36-38 V עבור E14) באמצעות אלקטרודות מיוחדות מלקחיים מסוג פלטינה (אלפיות שני אורך 50 מחזור המרווח, msec הפסקה 950 מרווח). Pulse משוטי electroporation במהלך היישום של המתח כדי למזער את הנזק של קיר הרחם. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> / טיפול שלאחר ניתוח electroporation ההודעה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להחליף את קרן הרחם בזהירות בחלל הבטן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לתפור את השרירים וחתך בעור בנפרד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תן את שאר עכבר על מכשיר תמיכה תרמי להתאוששות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפקח על העכבר במהלך התאוששות (התנהגות, הזנה וצריכת מים), 4 שעות, 24 שעות ו -48 שעות לאחר ניתוח. במידת צורך, יחול משככי כאבים נוספים (carprofen, 4 מ&quot;ג / קילוגרם משקל גוף, 24 דיפו שעות) עבור 2 ימים נוספים. </li></ol></li></ol> 2. Transfection של תחומי מוחין ספציפיים הערה: המיקום של הקוטב החיובי מוצג כזווית בין הציר האנכי דרך החדר מלא בפתרון ה- DNA (החדר ממני או השלישי) ואת המיקום של הקוטב החיובי. כאשר ממלאים את החדר השמאלי העמדות-הפוך מראה. באיור 4 העמדות של קדמוני האוזן מוצגות, המספקות נקודות התייחסות חשובות. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Transfection של אזורים בקליפת המוח (איור 2 א, לוח 1). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבצע ניתוח כפי שתואר בסעיף 1.2. לelectroporation ברחם של אזורים בקליפת המוח להשתמש בעוברי E14. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזרק 1.5-2 μl DNA-פתרון המכיל DNA 4 מיקרוגרם בחדר לרוחב תקיןבאמצעות נימי ורוסיליקט מוכנות. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקם בזהירות את העובר באמצעות מלקחיים טבעת כך שאין כלי נראים מעל האתר לנקב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאט לאט להזריק את ה- DNA-הפתרון כ 0.75 מ&quot;מ העטרה מתפר lambdoidal ו 0.5 מ&quot;מ לרוחב מתפר sagittal (איור 3). ודא שעומק ההחדרה הוא 1.2 מ&quot;מ (E14, נמדד מדופן הרחם). בדקו צביעה כחולה-ירוקה עם תיחום חד. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל מתח באמצעות אלקטרודות פלטינה מלקחיים מהסוג המיוחדות (אלפית שני אורך 50 מחזור המרווח, msec הפסקה 950 מרווח). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בהנעת אלקטרודה 3 או 5 מ&quot;מ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש במתח הנע 36-38 V. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים במרכז אלקטרודות רק הקדמי של primordia האוזן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לtransfect זוויות שימוש קליפת retrosplenial 330-0 מעלות, לtransfect הקורטקס המוטורי 0-40 °, לtransfect הקליפה החושית 40-95 °, לtransfectקליפת אגסי 95-110 מעלות (איור 2 א). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע / טיפול שלאחר ניתוח electroporation הודעה כאמור בסעיף 1.4. להקריב את העכברים ולנתח את העוברים 4 ימים לאחר electroporation (E18) כמפורט בסעיף 3. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Transfection של ההיפוקמפוס (איור 2, לוח 1). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבצע ניתוח כפי שתואר בסעיף 1.2. לelectroporation ברחם של היווצרות בהיפוקמפוס להשתמש עוברי E15. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להזריק 2 μl DNA-תמיסה המכילה 4 מיקרוגרם DNA בחדר לרוחב תקין באמצעות נימי ורוסיליקט מוכנות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל מתח באמצעות אלקטרודות פלטינה מלקחיים מהסוג המיוחדות (אלפית שני אורך 50 מחזור המרווח, msec הפסקה 950 מרווח). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בהנעת אלקטרודה 3 או 5 מ&quot;מ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש במתח הנע 38-40. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים במרכז הקוטב השלילי רק הקדמית של primordium האוזן והמרכז oו הקוטב החיובי באמצע primordium האוזן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לtransfect gyrus המשונן להשתמש זוויות 190-210 מעלות, לtransfect ammonis קורנו (CA) 3 210-230 מעלות, לtransfect Ca 2 230-250 מעלות, לtransfect ° CA1 250-275 (איור 2). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע / טיפול שלאחר ניתוח electroporation הודעה כאמור בסעיף 1.4. לבצע ניתוח לאחר היווצרות בהיפוקמפוס מלאה (לאחר הלידה, p21) כמפורט בסעיף 3. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Transfection של גרעין במחיצה לרוחב וסטריאטום (איור 2 ג, טבלת 1) הערה: הזוויות חופפות עם אלה לtransfecting היפוקמפוס. לtransfect גרעין רוחב המחיצה וסטריאטום ללא שלבים עובריים מוקדם transfection ההיפוקמפוס לא רצוי (E12) ביעילות צריך להיות בשימוש. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבצע ניתוח כפי שתואר בסעיף 1.2. לelectroporation ברחם של הגרעין במחיצה לרוחב וstriatאממ להשתמש עוברי E12. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזרק 1 μl DNA-תמיסה המכילה 4 מיקרוגרם DNA בחדר לרוחב תקין באמצעות נימי ורוסיליקט מוכנות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל מתח באמצעות אלקטרודות פלטינה מלקחיים מהסוג המיוחדות (אלפית שני אורך 50 מחזור המרווח, msec הפסקה 950 מרווח). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש באלקטרודה 0.5 מ&quot;מ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש 33 V. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים במרכז את האלקטרודות ברמה של primordia האוזן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לtransfect זוויות שימוש גרעין במחיצה לרוחב 100-170 מעלות, לtransfect ° סטריאטום 170-240 (איור 2 ג). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע / טיפול שלאחר ניתוח electroporation הודעה כאמור בסעיף 1.4. להקריב את העכברים ולנתח את העוברים 6 ימים לאחר electroporation (E18) כמפורט בסעיף 3. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Transfection של התלמוס וההיפותלמוס (איור 2 ד, טבלת 1) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבצע ניתוח כפי שתואר בסעיף 1.2. בuelectroporation טרו של עוברי E12-E13 שימוש התלמוס וההיפותלמוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזרק 1-1.5 DNA-פתרון μl המכיל 4 מיקרוגרם DNA בחדר לרוחב (משמאל או מימין) דרך נימי ורוסיליקט מוכנות. חכה במשך 2-3 דקות, עד שהפתרון הוא מתפזר לחדר השלישי. לחלופין ישירות להזריק לתוך החדר השלישי. הערה: זה משפר ספציפי אבל עלול לגרום לירידה בשיעור הישרדות (סיכון גבוה לניזק). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל מתח באמצעות אלקטרודות פלטינה מלקחיים מהסוג המיוחדות (אלפית שני אורך 50 מחזור המרווח, msec הפסקה 950 מרווח). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש באלקטרודה 0.5 או 3 מ&quot;מ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש במתח הנע 33-35 V. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים במרכז אלקטרודות רק אחורי primordia האוזן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לtransfect זוויות שימוש התלמוס 25-40 מעלות, לtransfect ° ההיפותלמוס 90-180 (איור 2 ד). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע / טיפול שלאחר ניתוח electroporation הודעה כdescribed בסעיף 1.4. להקריב את העכברים ולנתח את העוברים 6 ימים לאחר electroporation (E18) כמפורט בסעיף 3. </li></ol></li></ol> 3. זלוף קיבוע <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> paraformaldehyde החם 4% (PFA) עד 37 מעלות צלזיוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ממלאי מזרק 50 מיליליטר עם PBS (4 ° C) ומזרק שני עם PFA חימם. למנוע בועות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חבר את המזרקים לברזלי שלוש-דרך. חבר את הקצה השלישי לסט עירוי מכונף (פרפר). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף את סט העירוי המכונף עם PBS. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זִלוּף <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עמוק להרדים את העכברים (בהריון או לאחר לידה transfected) עם יישום תת עורית של קטמין הידרוכלוריד (60 מ&quot;ג / קילוגרם) ו xylazine (7.5 מ&quot;ג / קילוגרם). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאשר את שלב הסובלנות כירורגית על ידי חוסר תגובה לבוהן קמצוץ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתח את חלל הבטן מתחת רק כלוב הצלעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בזהירות לחתוך את הסרעפת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפתוח בזהירות את כלוב הצלעות באמצעות חתך בדואראתר אח עד עצם הבריח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס את הקצה של הפרפר לתוך החדר השמאלי בלב (החל מהשיא של הלב). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותך את תוספת פרוזדורי שמאל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאט perfuse העכבר עם PBS (כ -10 מיליליטר). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעבור הסתום המשולש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Perfuse העכבר עם 5-10 מיליליטר PFA 4%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לערוף את העכבר באמצעות מספריים ולנתח את המוח מתחיל בנקב הגדול. לבצע הנתיחה כפי שפורסם בעבר 16. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Postfixate המוח במשך 2 ימים בPFA 4%. שמור את המוח על 4 מעלות צלזיוס בחושך. </li></ol></li></ol> 4. אימונוהיסטוכימיה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צור 70 מיקרומטר חלקים (לדוגמא, עם vibratome). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אופציונאלי: שפר את הקרינה עם מכתים נוגדן. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחסום את החלקים עבור שעה 1 ב RT (0.1-0.2% Triton X-100, 5% בסרום עז נורמלי) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה O / N עם הנוגדן המתאים (אנטי-GFP, 1: 1,000) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף 3-5 פעמים עם חיץ 0.1 M פוספט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה שעה 3-5 עם נוגדן פלואורסצנטי מצומדות- המתאים המשני (אלקסה פלואוריד 488 נגד הארנב-IgG מצומדות, 1: 1,000). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אופציונאלי: Counterstain עם 4-6-diaminodino-2-phenylindole (DAPI, 0.2 גר &#39;/ מיליליטר במאגר M 0.1 פוספט) 1 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ניתוח הקרינה עם מיקרוסקופ פלואורסצנטי מתאים. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Fukuchi-Shimogori, T., Grove, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neocortex+patterning+by+the+secreted+signaling+molecule+FGF8%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Neocortex patterning by the secreted signaling molecule FGF8.</a> Science. 294 (5544), 1071-1074 (2001).</li>
<li>Saito, T., Nakatsuji, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+gene+transfer+into+the+embryonic+mouse+brain+using+in+vivo+electroporation%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Efficient gene transfer into the embryonic mouse brain using in vivo electroporation.</a> Dev Biol. 240 (1), 237-246 (2001).</li>
<li>Tabata, H., Nakajima, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+in+utero+gene+transfer+system+to+the+developing+mouse+brain+using+electroporation%3A+Visualization+of+neuronal+migration+in+the+developing+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Efficient in utero gene transfer system to the developing mouse brain using electroporation: Visualization of neuronal migration in the developing cortex.</a> Neuroscience. 103 (4), 865-872 (2001).</li>
<li>LoTurco, J., Manent, J. B., Sidiqi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+and+improved+tools+for+in+utero+electroporation+studies+of+developing+cerebral+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Cereb+Cortex%22%5BJournal%5D)">New and improved tools for in utero electroporation studies of developing cerebral cortex.</a> Cereb Cortex. 19 Suppl 1. (July), i120-i125 (1991).</li>
<li>Nakahira, E., Yuasa, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuronal+generation%2C+migration%2C+and+differentiation+in+the+mouse+hippocampal+primoridium+as+revealed+by+enhanced+green+fluorescent+protein+gene+transfer+by+means+of+in+utero+electroporation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Neuronal generation, migration, and differentiation in the mouse hippocampal primoridium as revealed by enhanced green fluorescent protein gene transfer by means of in utero electroporation.</a> J Comp Neurol. 483 (3), 329-340 (2005).</li>
<li>Navarro-Quiroga, I., Chittajallu, R., Gallo, V., Haydar, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term%2C+selective+gene+expression+in+developing+and+adult+hippocampal+pyramidal+neurons+using+focal+in+utero+electroporation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Long-term, selective gene expression in developing and adult hippocampal pyramidal neurons using focal in utero electroporation.</a> J Neurosci. 27 (19), 5007-5011 (2007).</li>
<li>Borrell, V., Yoshimura, Y., Callaway, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+gene+delivery+to+telencephalic+inhibitory+neurons+by+directional+in+utero+electroporation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Targeted gene delivery to telencephalic inhibitory neurons by directional in utero electroporation.</a> J Neurosci Methods. 143 (2), 151-158 (2005).</li>
<li>Kolk, S. M., de Mooij-Malsen, A. J., Martens, G. J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatiotemporal+Molecular+Approach+of+in+utero+Electroporation+to+Functionally+Decipher+Endophenotypes+in+Neurodevelopmental+Disorders%5BTitle%5D)+AND+%22FNMOL%22%5BJournal%5D)">Spatiotemporal Molecular Approach of in utero Electroporation to Functionally Decipher Endophenotypes in Neurodevelopmental Disorders.</a> FNMOL. 4 (November), 37(2011).</li>
<li>Tomita, K., Kubo, K. I., Ishii, K., Nakajima, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disrupted-in-schizophrenia-1+%28Disc1%29+is+necessary+for+migration+of+the+pyramidal+neurons+during+mouse+hippocampal+development%5BTitle%5D)+AND+%22Hu+Mol+Gen%22%5BJournal%5D)">Disrupted-in-schizophrenia-1 (Disc1) is necessary for migration of the pyramidal neurons during mouse hippocampal development.</a> Hu Mol Gen. 20 (14), 2834-2845 (2011).</li>
<li>Niwa, M., Kamiya, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Knockdown+of+DISC1+by+In+Utero+Gene+Transfer+Disturbs+Postnatal+Dopaminergic+Maturation+in+the+Frontal+Cortex+and+Leads+to+Adult+Behavioral+Deficits%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Knockdown of DISC1 by In Utero Gene Transfer Disturbs Postnatal Dopaminergic Maturation in the Frontal Cortex and Leads to Adult Behavioral Deficits.</a> Neuron. 65 (4), 480-489 (2010).</li>
<li>Nakahira, E., Kagawa, T., Shimizu, T., Goulding, M. D., Ikenaka, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+evidence+that+ventral+forebrain+cells+migrate+to+the+cortex+and+contribute+to+the+generation+of+cortical+myelinating+oligodendrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Direct evidence that ventral forebrain cells migrate to the cortex and contribute to the generation of cortical myelinating oligodendrocytes.</a> Dev Biol. 291 (1), 123-131 (2006).</li>
<li>Baumgart, J., Grebe, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((C57BL%2F6-specific+conditions+for+efficient+in+utero+electroporation+of+the+central+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">C57BL/6-specific conditions for efficient in utero electroporation of the central nervous system.</a> J Neurosci Methods. 240, 116-124 (2015).</li>
<li>Saito, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+electroporation+in+the+embryonic+mouse+central+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protc%22%5BJournal%5D)">In vivo electroporation in the embryonic mouse central nervous system.</a> Nat Protc. 1 (3), 1552-1558 (2006).</li>
<li>Matsui, A., Yoshida, A. C., Kubota, M., Ogawa, M., Shimogori, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+in+utero+electroporation%3A+controlled+spatiotemporal+gene+transfection%5BTitle%5D)+AND+%22JoVE%22%5BJournal%5D)">Mouse in utero electroporation: controlled spatiotemporal gene transfection.</a> JoVE. (54), (2011).</li>
<li>Guedel, A. E. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGuedel%2C+AE+%22Inhalation+anesthesia%3A+a+fundamental+guide%22">Inhalation anesthesia: a fundamental guide</a>. , Macmillan. New York. (1937).</li>
<li>Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole+Animal+Perfusion+Fixation+for+Rodents%5BTitle%5D)+AND+%22JoVE%22%5BJournal%5D)">Whole Animal Perfusion Fixation for Rodents.</a> JoVE. (65), e3564(2012).</li>
<li>Mizutani, K., Saito, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progenitors+resume+generating+neurons+after+temporary+inhibition+of+neurogenesis+by+Notch+activation+in+the+mammalian+cerebral+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Progenitors resume generating neurons after temporary inhibition of neurogenesis by Notch activation in the mammalian cerebral cortex.</a> Development. 132 (6), 1295-1304 (2005).</li>
<li>Tabata, H., Nakajima, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Labeling+embryonic+mouse+central+nervous+system+cells+by+in+utero+electroporation%5BTitle%5D)+AND+%22Dev%2C+Growth+%26+Differ%22%5BJournal%5D)">Labeling embryonic mouse central nervous system cells by in utero electroporation.</a> Dev, Growth & Differ. 50 (6), 507-511 (2008).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

פרוטוקול זה מתאר בפירוט כיצד להעביר את קליפת המוח הרטרו-טחולית, קליפת המוח המוטורית, קליפת המוח הסומטוסנסורית, קליפת המוח הפיריפורמית, קורנו אמוניס 1-3, הפיתול המשונן, הסטריאטום, גרעין המחיצה הרוחבית, התלמוס וההיפותלמוס של עכברי C75BL/6. עם כל המידע שסופק זהו הפרוטוקול הראשון, המספק את כל המידע הדרוש כדי לשחזר בקלות טרנספקציות של אזורי המוח הללו בעכבר C57BL/6. פרסומים קודמים התמקדו בעיקר בכמה אזורים ספציפיים ולכן המידע המפורט הדרוש לטרנספקציות ספציפיות הוא רק בקושי סטנדרטי. 
המיקום והגודל של ה...

מאז התיאור הראשון בשנת 2001 על ידי שלוש קבוצות עצמאיות 1-3 אני n electroporation ברחם הפך לכלי סטנדרטי בשימוש נרחב לניתוח ביטוי גנים במערכת העצבים המרכזית של המכרסמים. בהשוואה לדור של עכברי נוקאאוט, שהוא, למרות טכניקות שיפור ברציפות, עדיין זמן וכסף רב, ברחם הערעורים electroporation בשל הפשטות שלה. אז, ברחם electroporation מאפשר gain- מהיר ויעיל ומחקרי הפסד של פונקציה 4. לtransfect האזורים במוח, התמיסה המכילה את הפלסמיד הטעון השלילי מוזרקת לתוך חדר. במהלך הדופק החשמלי, ה- DNA הטעון השלילי נודד לכיוון הקוטב החיובי ולכן אזור transfected ניתן לבחור פשוט על ידי שינוי המיקום של הקוטב החיובי. זה לעתים קרובות הוכח כי אזורים רבים של מערכת העצבים המרכזית יכולים להיות ת&quot;אrgeted 3,5-8. לדוגמא, המחקרים האחרונים מראים transfections הספציפי של ההיפוקמפוס, קליפת אגסי או סטריאטום 9-11. עם זאת, המידע על העמדות המתאימות הם לעתים קרובות טופל רק בקושי והם לא תמיד קלים להעביר לזנים שונים עכבר. Transfection של שלבים עובריים מסוימים הוא רחוק מכך. גורמים המשפיעים על רבים חייבים להילקח בחשבון בעת בחירת ההגדרה לספציפי electroporation ברחם. ראשית, כדי transfect אופטימלי השלבים עובריים המתאימים, יש צורך בידע על המתח המתאים. מתח גבוה להקטין את שיעור ההישרדות, ואילו מתח נמוך להפחית את יעילות transfection 2,3,12. גם הגודל של ההנעה אלקטרודה ממלא תפקיד מכריע, משום שהשימוש במשוטי אלקטרודה שתוצאות גדולות מדי בסגוליות מופחתות או יכול לגרום למוות בשל חיבה של קצב הלב 4,12,13. מיושםמתח ואת הגודל והמיקום של ההנעה אלקטרודה הם התכונות החשובות ביותר שיש לשקול, אבל יש גם גורמים נוספים המשפיעים על התוצאה של electroporation, כמו הכמות השימושית של ה- DNA-פתרון. פיתחנו פרוטוקול מפורט המאפשר transfection המהיר והיעיל של אזורי מוח השונים של עכבר C57BL / 6 12. בפרוטוקול זה מידע מפורט על המתח כדי לשמש ואת הגודל של ההנעה אלקטרודה לסגולית משופרים מסופק. יתר על כן, מידע על החדר להיות מלא יחד עם המלצות לסכום של פתרון פלסמיד ואת המיקום של האלקטרודה מסופקת. אינדיקציה למידע מיקום מפורט במפה והדמיה נוספת של עמדות אלה מאפשרת ספציפיים פשוטים ויעילים ברחם electroporation של קליפת retrosplenial, הקורטקס המוטורי, הקליפה החושית, קליפת אגסי לא,הוא קורנו ammonis 1-3, gyrus המשונן, סטריאטום, הגרעין במחיצה לרוחב, התלמוס וההיפותלמוס.

<table><tbody><tr><td>ערכת מקסי פלסמיד EndoFree</td><td>QIAGEN</td><td>12362</td><td></td></tr><tr><td>רוט ירוק מהיר</td><td></td><td>0301.1</td><td></td></tr><tr><td>pCAGGS</td><td>Addgene</td><td></td><td></td></tr><tr><td>נימי זכוכית בורוסיליקט (קוטר 0.8-0.9 מ"מ)</td> <td>היה Precision Instrument Inc.</td><td>1B100F-4</td><td></td></tr><tr><td>איזופלורן (פורן)</td><td>אבוט</td><td>PZN 4831850</td><td></td></tr><tr><td>קרפרופן (רימדיל)</td><td>פייזר GmbH</td><td>מספר אישור: 400684.00.00</td><td></td></tr><tr><td>משחת עיניים (Bepanthen Augen und Nasensalbe)</td><td>Bayer&nbsp;</td><td>PZN 01578681</td><td></td></tr><tr><td>0.9% בנזיל אלכוהול 0.9% תמיסת מלח</td><td>בית מרקחת של המרכז הרפואי האוניברסיטאי מיינץ</td><td></td><td></td></tr><tr><td>גזה (ES-Kompressen)</td><td>הרטמן</td><td>407835</td><td></td></tr><tr><td>סטרילי 5-0 תפר משי פרמה-יד</td><td>Ethicon Johnson & ג'ונסון</td><td>K890H</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים טבעתיים 1/1.5 מ"מ</td><td>Fine Science</td><td>Tools 11101-09</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים טבעתיים 4.8/ 6 מ"מ</td><td>Fine Science Tools</td><td>11106-09</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים טבעתיים 2.2/ 3 מ"מ</td><td>Fine Science Tools</td><td>11103-09</td><td></td></tr><tr><td>Adson מלקחיים משוננים ישרים 12 ס"מ</td><td>Fine Science Tools</td><td>1106-12</td><td></td></tr><tr><td>Irisמספריים-עדין ישר-חד/ קהה 10 ס"מ</td><td>כלי מדע עדינים</td><td>14028-10</td><td></td></tr><tr><td>מספריים מיונז-סטיל-ישר 15 ס"מ</td><td>כלי מדע עדינים</td><td>14012-15</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5 מלקחיים-Inox</td><td>כלי מדע עדינים</td><td>11251-20</td><td></td></tr><tr><td>מחזיק מחט Castroviejo-עם נעילה-טונגסטן קרביד 14 ס"מ</td><td>כלי מדע עדינים</td><td>12565-14</td><td></td></tr><tr><td>Elektroporator CUY21 SC&nbsp;</td><td>נפה ג'ין ושות'</td><td></td><td></td></tr><tr><td>FST 250 מעקר חרוזים</td><td>חם Fine Science Tools</td><td>18000-45</td><td></td></tr><tr><td>Microgrinder EG-44</td><td>Narishige</td><td></td><td></td></tr><tr><td>P-97 Micropette</td><td>Puller Sutter Instrument Company</td><td>P-97</td><td></td></tr><tr><td>אלקטרודות פלטינה 650P 0.5 מ"מ</td><td>Nepagene</td><td>CUY650P0.5</td><td></td></tr><tr><td>אלקטרודות פלטינה 650P 3 מ"מ</td><td>Nepagene</td><td>CUY650P3</td><td></td></tr><tr><td>אלקטרודות פלטינה 650P 5 מ"מ</td><td>Nepagene</td><td>CUY650P5</td><td></td></tr><tr><td>אלקטרודות פלטינה 650P 10 מ"מ</td><td>Nepagene</td><td>CUY650P10</td><td></td></tr><tr><td>מערכת הרדמה</td><td>Rothacher-Medical GmbH</td><td>CV-30511-3 Vapor 19.3</td><td></td></tr><tr><td>צלחת חימום</td><td>Rothacher-Medical GmbH</td><td>HP-1M</td><td></td></tr><tr><td>בקר טמפרטורה 220V AC</td><td>Rothacher-Medical GmbH</td><td>TCAT-2LV</td><td></td></tr></tbody></table>

cortex-, hippocampus-, thalamus-, hypothalamus-, רוחב מחיצת גרעין, וסטריאטום ספציפי<em&gt; ברחם</em&gt; electroporation בc57bl / 6 העכבר

Cortex-, Hippocampus-, Thalamus-, Hypothalamus-, Lateral Septal Nucleus- and Striatum-specific In Utero Electroporation in the C57BL/6 Mouse

אלקטרופורציה ברחם היא טכניקה בשימוש נרחב למניפולציה מרחבית-זמנית מהירה ויעילה של גנים שונים במערכת העצבים המרכזית של המכרסמים. ביטוי יתר של גנים רצויים אפשרי באותה מידה כמו מחקרי אובדן תפקוד בתיווך shRNA. לכן הוא מציע מגוון רחב של יישומים. ההיתכנות להתמקד בתאים מסוימים באזור מובחן מגדילה עוד יותר את מגוון היישומים הפוטנציאליים של שיטה שימושית מאוד זו. למיקוד יעיל של אזורים ספציפיים ידע על הדקויות, כגון השלב העוברי, המתח שיש להפעיל והכי חשוב מיקום האלקטרודות, הוא הכרחי.
כאן, אנו מספקים פרוטוקול מפורט המאפשר אלקטרופורציה ספציפית ויעילה ברחם של מספר אזורים במערכת העצבים המרכזית של העכבר C57BL/6. בפרט מוצג כיצד להעביר אזורים המתפתחים לקליפת המוח הרטרו-טחולית, קליפת המוח המוטורית, קליפת המוח הסומטוסנסורית, קליפת המוח הפיריפורמית, קורנו אמוניס 1-3, הפיתול המשונן, הסטריאטום, גרעין המחיצה הרוחבית, התלמוס וההיפותלמוס. למידע זה על השלב העוברי המתאים, מסופק המתח המתאים לשלב העוברי המתאים. והכי חשוב מתוארת מפת זווית, המציינת את המיקום המתאים של הקוטב החיובי. פרוטוקול סטנדרטי זה מסייע להקל על יעילות באלקטרופורציה של הרחם, מה שעשוי גם להוביל להפחתת מספר בעלי החיים.

איור 2, מציג דוגמאות לספציפיות electroporation ברחם של אזורי פיתוח לקליפת retrosplenial, הקורטקס המוטורי, הקליפה החושית, קליפת אגסי, קורנו ammonis 1-3, gyrus המשונן, סטריאטום, הגרעין במחיצה לרוחב , התלמוס וההיפותלמוס. תוצאות transfections מוצגות ליד הזווית המומלצת (איור 2). להדמיה טובה יותר של הזוויות in vivo העמדה של האלקטרודה (0.5 מ&quot;מ) מוצגת גם על עובר (איור 5, עובר ברחם, עובר בצק מי שפיר, עובר גז...

פרוטוקול זה מתאר בפירוט כיצד להעביר באופן ספציפי אזורים שונים במערכת העצבים המרכזית C57BL/6 באמצעות אלקטרופורציה ברחם. פרוטוקול זה כולל הוראות מפורטות לטרנספקציות של אזורים המתפתחים לקליפת המוח, ההיפוקמפוס, התלמוס, ההיפותלמוס, גרעין המחיצה הצדדית והסטריאטום.

Cortex-, Hippocampus-, Thalamus-, Hypothalamus-, רוחב מחיצת גרעין, וסטריאטום ספציפי<em&gt; ברחם</em&gt; Electroporation בC57BL / 6 העכבר

In utero electroporation is a widely used technique for fast and efficient spatiotemporal manipulation of various genes in the rodent central nervous ...

המטרה הכללית של מניפולציה תאית זו in vivo היא לשנות באופן ספציפי תאים באזורים מסוימים במערכת העצבים המרכזית של העכבר, כגון הקורטקס, ההיפוקמפוס, התלמוס, ההיפותלמוס, הגרעין הספטלי הלטראלי והסטריאטום. שיטה זו יכולה לסייע במתן תשובות לשאלות מפתח הנוגעות להתפתחות ותפקוד המוח, למשל, באמצעות זיהוי של רצפי העברת אותות שונים וקביעת רמת הדיפרנציאציה של התאים. היתרון המרכזי של טכניקה זו הוא שהיא מאפשרת מניפולציה מהירה ויעילה של סוגי תאים שונים במערכת העצבים המרכזית, ללא הצורך ביצירה ממושכת של עכברים מהונדסים גנטית.באופן כללי, הדגמה של שיטה זו היא מועילה, מכיוון שאנשים שאינם מנוסים בשיטה זו יתקשו לעיתים קרובות במציאת המיקום הנכון של האלקטרודה, דבר שהוא קריטי לאלקטרופורציה ספציפית. כדי להתחיל בהליך זה, חתכו את חלל הבטן של עכברה ההרה מורדמת באמצעות סכין ניתוח (scalpel). מנעו מהחלל הבטני הפתוח להתייבש על ידי הרטבתו עם תמיסת סליין של מתיל אלכוהול 0.9% חמה.לאחר מכן, הוצאו בזהירות את קרני הרחם באמצעות פינצטה טבעתית. בשלב הבא, מקמו עובר בשלב E14 כך שלא ייראו כלי דם מעל אתר הדקירה. לצורך ויזואליזציה טובה יותר, השתמשו באלקטרודה של 5 מילימטרים כדי לאתר את הזווית והמיקום של האזור הרצוי במוח לצורך הטרנספקציה.עבור אלקטרופורציה בתוך הרחם (in utero) של אזור קורטקס, מזגים באיטיות 1.5 עד שני מיקרוליטרים של תמיסת ה-DNA לתוך הפרונטרקל הלטרלי השמאלי. יש לוודא שעומק ההחדרה הוא מילימטר אחד עד שניים, כמדידה מדופן הרחם. לאחר מכן, יש לבדוק אם קיים צבע כחול-ירוק בעל גבול ברור.לקבלת ויזואליזציה טובה יותר, השתמשו באלקטרודה של 5 מילימטרים כדי לאתר את הזווית והמיקום הרצויים במוח לצורך הטרנספקציה. לאחר מכן, מקמו את מרכזן של פלטות אלקטרודת הפלטינה בעלות שלושה מילימטרים קדמית לראשית התפתחות האוזן (ear primordia), וודאו שהן אינן ממוקמות מעל כלי דם או מעל השליה. לאחר מכן, העבירו מתח חשמלי כדי להתחיל בטרנספקציה.עבור אלקטרופורציה תוך-רחמית של תצורת ההיפוקמפוס, מזריקים שני מיקרוליטרים של תמיסת DNA לתוך החדר הצדי הימני של עובר ביום E15. לאחר מכן, מניחים את הקוטב השלילי של פלטות אלקטרודת הפלטינה, בגודל של שלושה עד חמישה מילימטרים, קדמית לראש השברון של האוזן (ear primordium), ואת הקוטב החיובי במרכזו של ראש השברון של האוזן. לאחר מכן, מפעילים מתח כדי להתחיל את התעתוק.עבור אלקטרופורציה ברחם (in utero electroporation) של הגרעין הספטלי הלטרלי והסטריאטום, מזריקים מיקרוליטר אחד של תמיסת DNA לתוך החדר הצדי הימני של עובר בשלב E12. לאחר מכן, מניחים את האלקטרודות בעלות ה-5 מילימטר בגובה רבדי האוזן (ear primordia). לאחר מכן, מפעילים את המתח כדי להתחיל בטרנספקציה.עבור אלקטרופורציה בתוך הרחם (in utero) של התלמוס וההיפותלמוס, מזריקים 1 עד 1.5 µL של תמיסת DNA לתוך החדר הצדי של עובר בשלבים E12 עד E13. לאחר מכן, ממתינים שתי עד שלוש דקות כדי שהתמיסה תתפשט אל תוך החדר השלישי. לאחר מכן, מניחים את האלקטרודות בעלות קוטר של 5 או 3 מ"מ מיד מאחורי ראשית האוזן (ear primordia).לאחר מכן, גרמו מתח כדי להתחיל בטרנספקציה. סכימה זו מראה את המיקומים המתאימים לקטבים החיובי והשלילי עבור טרנספקציה של אזורי הקורטקס. וזו, מראה את המיקומים של הקוטב החיובי והשלילי עבור טרנספקציה של מבני ההיפוקמפוס.מיקומי הקטב החיובי והשלילי עבור טרנספקציית הסטריאטום והגרעין הספטלי הלטראלי מוצגים כאן. ומיקומי האלקטרודות המתאימים עבור טרנספקציית התלמוס וההיפותלמוס מוצגים כאן. ספציפיות הטרנספקציה תלויה בגודל האלקטרודה.הגדלת גודל מאיץ האלקטרודה מפחיתה את הספציפיות של הטרנספקציה. דבר זה בולט במיוחד בשלבי עוברי צעירים, אך נראה גם בשלבים עובריים מאוחרים. לאחר השליטה בטכניקה, ניתן לבצע אותה בתוך 15 דקות, בתנאי שהיא מבוצעת בצורה נכונה.בעת ביצוע פרוצדורה זו, חשוב לטפל בעוברים ובאמהות בזהירות רבה. לאחר צפייה בסרטון זה, תרכשו הבנה טובה לגבי האופן שבו ניתן לבצע טרנספקציה לאזורים ספציפיים במערכת העצבים המרכזית של עכבר Black 6.

cortex-hippocampus-thalamus-hypothalamus-lateral-septal-nucleus

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

בשנת הזרקה תוך חדרי ברחם ו electroporation E15 של עוברי עכברים

ב electroporation ברחם מאפשר למסירה גן מהירה באופן מרחבית, ובזמן שבשליטת במערכת לפתח את העצבים המרכזית (CNS). כאן אנו מתארים וישימה מאוד בפרוטוקול electroporation ברחם, שניתן להשתמש בהם כדי לספק בונה ביטוי עובריים לתוך מערכת העצבים המרכזית מספר תחומים, כולל diencephalon telencephalon, ואת הרשתית.

ג&#39;ין אספקה ​​יעילה לתוך השטחים CNS מרובים באמצעות בתוך הרחם Electroporation

העברת גן שיטה למוח עכבר בפיתוח מתואר באמצעות שיטה ניתוחית ייחודית צורה מיוחדת של אלקטרודות. זו טכניקה ייחודית זו מאפשרת transfection של DNA פלסמיד temporally מרחבית, אשר יסייעו מדעני מוח רבים בחקר התפתחות המוח.

עכבר בתוך הרחם Electroporation: ג&#39;ין מבוקרת transfection Spatiotemporal

מאמר זה מתאר בפירוט פרוטוקול electroporate ברחם לבין קליפת המוח להיפוקמפוס ב E14.5 בעכברים. כמו כן, אנו מראים כי מדובר בשיטה בעלת ערך ללמוד דנדריטים הקוצים שני אזורים מוחיים.

להדמיה מניפולציה גנטית של דנדריטים עם קוצים בקליפת עכבר היפוקמפוס מוחין באמצעות<em&gt; ברחם</em&gt; Electroporation

פרוטוקול זה מתאר הליך explant משופר...

לשעבר הרחם electroporation וexplants חצי כדור שלם: שיטה ניסיונית פשוטה למחקרים בהתפתחות קליפת מוח הקדומה

למרות החשיבות הפונקציונלית ורפואית של...

מניפולציה גנטית של העכבר באמצעות פיתוח היפותלמוס<em&gt; ברחם</em&gt; Electroporation

כאן אנו מציגים פרוטוקול המספק כלי לבחינת מנגנוני ויסות של גנים ספציפיים במהלך התפתחות ההיפוקמפוס. שימוש באלקטרופורציה מחוץ לרחם ותרבית פרוסות אורגנוטיפית מאפשר ויסות למעלה ולמטה של ביטוי הגנים המעניינים בתאים בודדים ולעקוב אחר גורלם במהלך ההתפתחות.

Ex הרחם Electroporation וOrganotypic Slice תרבות של רקמות העכבר בהיפוקמפוס

פונקציות תא-אוטונומי של גנים במוח יכולים להילמד על ידי גרימת הפסד או רווח של פונקציה באוכלוסיות דלילה של תאים. כאן, אנו מתארים בתוך הרחם אלקטרופורציה לספק Cre recombinase לאוכלוסיות דליל לפתח נוירונים בקליפת המוח עם הגנים floxed לגרום לאובדן פונקציה בתוך vivo.

גרימת Cre-לקס רקומבינציה ב העכבר קליפת המוח דרך בתוך הרחם אלקטרופורציה

כאן, אנו מספקים שיטה נמוכים ואמין כדי ליצור electroporated המוח organotypic פרוסה תרבויות מעוברים עכבר מתאים מיקרוסקופיה קונפוקלית טכניקות הדמיה לחיות.

. פשוט תאכל לשעבר אלקטרופורציה ותרבויות פרוסה Organotypic מוח עובריים בעכבר עבור Live-הדמיה של העברת Interneurons GABAergic

השילוב של מיקרוסקופ אלקטרונים הילוכים התמרה חושית ברחם היא גישה חזקה ללמוד שינויים מורפולוגיים במוצא ultrastructure בסדר של מערכת העצבים במהלך הפיתוח. שיטה משולבת זו מאפשרת תובנות שינויים בפרטים מבניים שבבסיס והנוירולוגיה הפלסטית ביחס ייצוגן הטופוגרפי.

הערכה של הפרמטרים והנוירולוגיה הפלסטית Ultrastructural לאחר התמרה חושית עם רחם של פיתוח העכבר המוח ואת חוט השדרה

כפול בתוך הרחם מאפשר מיקוד אוכלוסיות תאים כי הם מופרדים באופן זמני. טכניקה זו שימושית כדי להמחיש אינטראקציות בין אוכלוסיות תאים אלה באמצעות חלבונים פלורסנט בתנאים נורמליים, אך גם לאחר ניסויים פונקציונליים כדי perturb גנים של עניין.

כפול ברחם באמצעות אלקטרופורציה ועד לאוכלוסיית היעד באופן זמני ולאוכלוסיות שאינן מופרדות

למד את שיטת האלקטרופורציה ברחם לשינוי תאים ספציפיים במערכת העצבים המרכזית של עכברי C57BL/6. השיטה מאפשרת מניפולציה יעילה של אזורים כמו קורטקס, היפוקמפוס, תלמוס והיפותלמוס ללא צורך ביצירת עכברים מהונדסים גנטית.

Cortex-, Hippocampus-, Thalamus-, Hypothalamus-, רוחב מחיצת גרעין, וסטריאטום ספציפי

גלה סרטונים נוספים