Name: האף מגבונים לשפעת זיהוי וירוסים ובידוד מחזירים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-12-04T15:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 59 s
Description: למדו שיטת איסוף מגבונים מאפי חזירים לזיהוי וירוס השפעת A. שיטה זו מפחיתה מתח בבעלי חיים ומשפרת מעורבות בתוכניות מעקב וטרינריות ללא צורך בהכשרה מיוחדת.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

עבודה זו מומנה בחלקה מכספים פדרליים ממרכזי המצוינות למחקר ומעקב אחר שפעת (CEIRS), המכון הלאומי לאלרגיה ומחלות זיהומיות, המכונים הלאומיים לבריאות, מחלקת הבריאות ושירותי האנוש, תחת חוזה מס. HHSN272201400006C.

כל החזירים בשימוש באוסף של נתונים הבאים היו מוגנים תחת הוועדה מוסדית טיפול בבעלי חיים ושימוש באוניברסיטת אוהיו (מספר פרוטוקול שימוש בבעלי החיים 2009A0134-R1). 1. הכנת ויראלי תחבורה בינונית והמדגם בקבוקי אוסף <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף 37 גרם של מוח לב עירוי עד 900 מיליליטר של מים מטוהרים ומערבבים היטב עם בר מערבבים ובוחש מגנטי תוך חימום עד 70 מעלות צלזיוס לפזר את האבקה לחלוטין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החיטוי המרק ב 121 מעלות צלזיוס במשך 15 דקות. מגניב על גבי הספסל עד המרק מגיע לטמפרטורת חדר. במקרר ב 4 מעלות צלזיוס למשך הלילה במידת הצורך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפזר, על ידי ערבוב עם בר ומערבבים מגנטי, 6.02 גרם של מלח נתרן פניצילין G ו -10 גרם של סולפט סטרפטומיצין לתוך 50 מיליליטר של מים מטוהרים בטמפרטורת חדר. מוסיף מים מטוהרים נוספים כדי להביא את הנפח הכולל עד 100 מיליליטר. סנן את הפתרון דרך קרום polyethersulfone 0.22 מיקרומטר לתוך בקבוק סטרילי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסביבה נקיה מחיידקים להוסיף פניצילין המסונן ופתרון סטרפטומיצין למוח לב עירוי מרק התקרר ומערבבים היטב (בר מערבבים או בקבוק מערבולת ביד) כדי להפוך את מדיום תחבורת ויראלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסביבה נקיה מחיידקים לבדוק את ה- pH של מדיום התחבורה הנגיפי; במידת צורך, להתאים את ה- pH 7.4 ± 0.2 באמצעות HCl או NaOH. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבצע בדיקות אבטחת איכות במדיום התחבורה הנגיפית על ידי בדיקה לשפעת חלבון מטריקס וירוס על ידי RRT-PCR, כפי שתואר על ידי ג&#39;אנג והרמון. 22 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לוותר 5 מיליליטר של מדיום התחבורה הנגיפי לתוך בקבוקי פוליאתילן בצפיפות גבוהה סטרילי עם קיבולת 8 מיליליטר. תווית הבקבוקונים לשימוש בתחום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחסן את הבקבוקונים מוכנים לשימוש בcryo-תיבות סטנדרטיים ב -20 ° C עד לגביית מדגם. </li></ol> 2. אוסף של באף מגבונים מחזירים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להפשיר את המספר המתאים של בקבוקונים מייד לפני לטעום אוסף; בקבוקון אחד יהיה צורך לחזיר שנדגמו. מפשיר בחדרטמפרטורה אורכת כ 30-45 דקות. שמור את הבקבוקונים המופשרים לקרר בשקיות קרח עד לשימוש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ציוד מגן אישי מתאים דון כפי שהוכתב על ידי המצב (למשל סרבל, כיסויי אתחול, מונשמים, אטמי אוזניים, וכו &#39;). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזן את השטח לבעלי החיים. במידת הצורך, להגביל את החזיר לאזור קטן אבל לא לרסן. אל תעיר נחים בעלי חיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשים על זוג כפפות חד פעמיות בחינה. יש להיזהר שלא לזהם את הכפפות על ידי חזירי נגיעה, אנשים, או חפצים דוממים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש ביד בכפפה כדי להסיר 5.08 סנטימטרים סטרילי × 5.08 סנטימטר (2 ב. × 2 ב.) תחבושת כותנה מאריזתו. יש להשתמש פדה גזת סטרילי בכל ההזדמנות אפשרית. פדה גזה עטופה בנפרד הן נוחה יותר לשימוש מאשר אלו עטופים בשתי פודים גזה לכל חבילה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החזק את תחבושת כותנה עם קצות האצבעות של יד אחת לחשוף כמה שיותר משטח אפשרי לדגימה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נגב את התחבושת על פני החוטם של החזיר, לוקחטיפול נוסף להיכנס לnares החיצוני במידת האפשר. לאסוף הפרשות מהאף גלויות (כ 1 מיליליטר) עם אותו התחבושת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש באותה היד, לקפל את התחבושת על עצמה כדי להקל על מיקום בבקבוקון המכיל בינוני תחבורת ויראלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש מצד השני, להסיר את הכובע מהבקבוקון והנח את רפידת הגזה המקופלת לתוך הבקבוקון. לסכם את הבקבוקון ולנער את הבקבוקון כדי להבטיח הערבוב של התחבושת ובינוני תחבורת ויראלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את הכפפות ומקום בקיבול מתאים. לשנות כפפות בין כל חזיר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא מזהה הבקבוקון. מספר שיא זיהוי חזיר, גיל, מין, סימנים קליניים, והערות אחרות הכרחית על ידי חוקר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צ&#39;יל הדגימות מייד לאחר איסוף. לשקול ביצוע aliquots של המדגם לפני ההקפאה כדי למנוע להקפיא להפשיר מחזורים מרובים. בהקדם האפשרי לאחר איסוף, למקם את הדגימות על קרח יבש לתחבורה למעבדה. אחסן את הבקבוקונים ב -80° C עד הבדיקה היא יזמה. </li></ol> 3. וירוס איתור של שפעת חומצות גרעין <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להפשיר הדגימות באמבט חרוז יבש 37 מעלות צלזיוס למשך 5 דקות ולאחר מכן לסיים מפשיר את הדגימות על גבי הספסל בטמפרטורת חדר למשך 20-30 דקות. בנוסף בו זמנית של כמה בקבוקונים לחרוזים יגרמו האמבטיה כדי לחמם; יש להיזהר לא לחמם יותר מדי כמו לבקבוקונים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר של מדיום תחבורה נגיפי 100 μl להפקת RNA. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בתפוקה גבוהה (96 בפורמט צלחת היטב) פלטפורמת חרוז מגנטית לחילוץ RNA ממספר גדול של דגימות. 31 </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש במבחני PCR טרנסקריפטאז בזמן אמת לשפעת זיהוי המהיר וירוס. 31 </li></ol> 4. בידוד של וירוס שפעת ממגבונים באף <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להפשיר את הדגימות כפי שתואר לעיל בסעיף 3.1 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פנק את הדגימות מופשרים עם סולפט גנטמיצין (1,000מיקרוגרם / מיליליטר), amphotericin B (22.5 מיקרוגרם / מיליליטר), וסולפט kanamycin (325 מיקרוגרם / מיליליטר). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחסן לכליות כלבי מדין-דארבי (MDCK) תאי האפיתל כפי שתואר לעיל. 32 </li></ol>

<ol><li>Ma, W., Kahn, R. E., Richt, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pig+as+a+mixing+vessel+for+influenza+viruses%3A+Human+and+veterinary+implications%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mol.+Genet.+Med%22%5BJournal%5D)">The pig as a mixing vessel for influenza viruses: Human and veterinary implications.</a> J. Mol. Genet. Med. 3 (1), 158-166 (2008).</li>
<li>Nelson, M. I., Vincent, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reverse+zoonosis+of+influenza+to+swine%3A+new+perspectives+on+the+human-animal+interface%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Reverse zoonosis of influenza to swine: new perspectives on the human-animal interface.</a> Trends Microbiol. 23, (2015).</li>
<li>Zhou, N. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+reassortment+of+avian%2C+swine%2C+and+human+influenza+A+viruses+in+American+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Genetic reassortment of avian, swine, and human influenza A viruses in American pigs.</a> J. Virol. 73 (10), 8851-8856 (1999).</li>
<li>Webby, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+of+swine+H3N2+influenza+viruses+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Evolution of swine H3N2 influenza viruses in the United States.</a> J. Virol. 74 (18), 8243-8251 (2000).</li>
<li>Vincent, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Review+of+influenza+A+virus+in+swine+worldwide%3A+a+call+for+increased+surveillance+and+research%5BTitle%5D)+AND+%22Zoonoses+Public+Health%22%5BJournal%5D)">Review of influenza A virus in swine worldwide: a call for increased surveillance and research.</a> Zoonoses Public Health. 61 (1), 4-17 (2014).</li>
<li>Karasin, A. I., Olsen, C. W., Anderson, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+characterization+of+an+H1N2+influenza+virus+isolated+from+a+pig+in+Indiana%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Genetic characterization of an H1N2 influenza virus isolated from a pig in Indiana.</a> J. Clin. Microbiol. 38 (6), 2453-2456 (2000).</li>
<li>Zhou, N. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emergence+of+H3N2+reassortant+influenza+A+viruses+in+North+American+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22Vet.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Emergence of H3N2 reassortant influenza A viruses in North American pigs.</a> Vet. Microbiol. 74 (1-2), 47-58 (2000).</li>
<li>Corzo, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Active+Surveillance+for+Influenza+A+Virus+among+Swine%2C+Midwestern+United+States%2C+2009-2011%5BTitle%5D)+AND+%22Emerg.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Active Surveillance for Influenza A Virus among Swine, Midwestern United States, 2009-2011.</a> Emerg. Infect. Dis. 19 (6), 954-960 (2013).</li>
<li>Lorusso, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+and+antigenic+characterization+of+H1+influenza+viruses+from+United+States+swine+from+2008%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Gen.+Virol%22%5BJournal%5D)">Genetic and antigenic characterization of H1 influenza viruses from United States swine from 2008.</a> J. Gen. Virol. 92 (Pt 4), 919-930 (2011).</li>
<li>Loving, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+in+pigs+of+inactivated+and+live+attenuated+influenza+virus+vaccines+against+infection+and+transmission+of+an+emerging+H3N2+similar+to+the+2011-2012+H3N2v%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Efficacy in pigs of inactivated and live attenuated influenza virus vaccines against infection and transmission of an emerging H3N2 similar to the 2011-2012 H3N2v.</a> J. Virol. 87 (17), 9895-9903 (2013).</li>
<li>Vincent, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+of+inactivated+swine+influenza+virus+vaccines+against+the+2009+A%2FH1N1+influenza+virus+in+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">Efficacy of inactivated swine influenza virus vaccines against the 2009 A/H1N1 influenza virus in pigs.</a> Vaccine. 28 (15), 2782-2787 (2010).</li>
<li>Smith, G. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Origins+and+evolutionary+genomics+of+the+2009+swine-origin+H1N1+influenza+A+epidemic%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Origins and evolutionary genomics of the 2009 swine-origin H1N1 influenza A epidemic.</a> Nature. 459 (7250), 1122-1125 (2009).</li>
<li>Vijaykrishna, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reassortment+of+Pandemic+H1N1%2F2009+Influenza+A+Virus+in+Swine%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Reassortment of Pandemic H1N1/2009 Influenza A Virus in Swine.</a> Science. 328 (5985), 1529(2010).</li>
<li>Ducatez, M. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+Reassortment+between+Pandemic+%28H1N1%29+2009+and+Endemic+Influenza+Viruses+in+Pigs%2C+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22Emerg.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Multiple Reassortment between Pandemic (H1N1) 2009 and Endemic Influenza Viruses in Pigs, United States.</a> Emerg. Infect. Dis. 17 (9), 1624-1629 (2011).</li>
<li>Jhung, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Outbreak+of+variant+influenza+A%28H3N2%29+virus+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Outbreak of variant influenza A(H3N2) virus in the United States.</a> Clin. Infect. Dis. 57 (12), 1703-1712 (2013).</li>
<li>Vincent, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+an+influenza+A+virus+isolated+from+pigs+during+an+outbreak+of+respiratory+disease+in+swine+and+people+during+a+county+fair+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22Vet.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Characterization of an influenza A virus isolated from pigs during an outbreak of respiratory disease in swine and people during a county fair in the United States.</a> Vet. Microbiol. 137 (1-2), 51-59 (2009).</li>
<li>Killian, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+Infection+of+Pigs+and+People+with+Triple-Reassortant+Swine+Influenza+Virus+H1N1+at+a+U.S.+County+Fair%5BTitle%5D)+AND+%22Zoonoses+Public+Health%22%5BJournal%5D)">Simultaneous Infection of Pigs and People with Triple-Reassortant Swine Influenza Virus H1N1 at a U.S. County Fair.</a> Zoonoses Public Health. 60 (3), 196-201 (2013).</li>
<li>Wong, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Outbreak+of+influenza+A+%28H3N2%29+variant+virus+infection+among+attendees+of+an+agricultural+fair%2C+Pennsylvania%2C+USA%2C+2011%5BTitle%5D)+AND+%22Emerg.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Outbreak of influenza A (H3N2) variant virus infection among attendees of an agricultural fair, Pennsylvania, USA, 2011.</a> Emerg. Infect. Dis. 18 (12), 1937-1944 (2011).</li>
<li>Bowman, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+evidence+for+interspecies+transmission+of+H3N2pM%2FH3N2v+influenza+A+viruses+at+an+Ohio+agricultural+fair%2C+July+2012%5BTitle%5D)+AND+%22Emerg.+Microbes.+Infect%22%5BJournal%5D)">Molecular evidence for interspecies transmission of H3N2pM/H3N2v influenza A viruses at an Ohio agricultural fair, July 2012.</a> Emerg. Microbes. Infect. 1 (10), e33(2012).</li>
<li>Wells, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Swine+influenza+virus+infections.+Transmission+from+ill+pigs+to+humans+at+a+Wisconsin+agricultural+fair+and+subsequent+probable+person-to-person+transmission%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA%22%5BJournal%5D)">Swine influenza virus infections. Transmission from ill pigs to humans at a Wisconsin agricultural fair and subsequent probable person-to-person transmission.</a> JAMA. 265 (4), 478-481 (1991).</li>
<li>Bowman, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Swine-to-human+transmission+of+influenza+A%28H3N2%29+virus+at+agricultural+fairs%2C+Ohio%2C+USA%2C+2012%5BTitle%5D)+AND+%22Emerg.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Swine-to-human transmission of influenza A(H3N2) virus at agricultural fairs, Ohio, USA, 2012.</a> Emerg. Infect. Dis. 20 (9), 1472-1480 (2012).</li>
<li>Bowman, A. S., Nolting, J. M., Nelson, S. W., Slemons, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subclinical+influenza+virus+A+infections+in+pigs+exhibited+at+agricultural+fairs%2C+Ohio%2C+USA%2C+2009-2011%5BTitle%5D)+AND+%22Emerg.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Subclinical influenza virus A infections in pigs exhibited at agricultural fairs, Ohio, USA, 2009-2011.</a> Emerg. Infect. Dis. 18 (12), 1945-1950 (2012).</li>
<li>Gray, G. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influenza+A%28H1N1%29pdm09+Virus+among+Healthy+Show+Pigs%2C+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22Emerg.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Influenza A(H1N1)pdm09 Virus among Healthy Show Pigs, United States.</a> Emerg. Infect. Dis. 18 (9), 1519-1521 (2012).</li>
<li>Van Reeth, K., Brown, I. H., Olsen, C. W. Ch. 40, Influenza virus. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aVan+Reeth%2C+K+%22Diseases+of+Swine%22">Diseases of Swine</a>. Zimmerman, J. J. , Wiley-Blackwell. 557-571 (2012).</li>
<li>Culhane, M. R., Detmer, S. E. Ch. 21, Sample types, collection, and transport for influenza A viruses of swine. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCulhane%2C+MR+%22Methods+in+Molecular+Biology%22">Methods in Molecular Biology</a>. Spackman, E. Animal Influenza Virus, Methods in Molecular Biology; 1161. 259-263 (2014).</li>
<li>Sheldon, C. C., Sonsthagen, T., Topel, J. A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSheldon%2C+CC+%22Animal+Restraint+for+Veterinary+Professionals%22">Animal Restraint for Veterinary Professionals</a>. , Mosby. (2006).</li>
<li>Detmer, S. E., Patnayak, D. P., Jiang, Y., Gramer, M. R., Goyal, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+Influenza+A+virus+in+porcine+oral+fluid+samples%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vet.+Diagn.+Invest%22%5BJournal%5D)">Detection of Influenza A virus in porcine oral fluid samples.</a> J. Vet. Diagn. Invest. 23 (2), 241-247 (2011).</li>
<li>Goodell, C. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Probability+of+detecting+influenza+A+virus+subtypes+H1N1+and+H3N2+in+individual+pig+nasal+swabs+and+pen-based+oral+fluid+specimens+over+time%5BTitle%5D)+AND+%22Vet.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Probability of detecting influenza A virus subtypes H1N1 and H3N2 in individual pig nasal swabs and pen-based oral fluid specimens over time.</a> Vet. Microbiol. 166 (3-4), 3-4 (2013).</li>
<li>Romagosa, A., Gramer, M., Joo, H. S., Torremorell, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensitivity+of+oral+fluids+for+detecting+influenza+A+virus+in+populations+of+vaccinated+and+non-vaccinated+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22Influenza+Other+Respir.+Viruses%22%5BJournal%5D)">Sensitivity of oral fluids for detecting influenza A virus in populations of vaccinated and non-vaccinated pigs.</a> Influenza Other Respir. Viruses. 6 (2), 110-118 (2012).</li>
<li>Edwards, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Utility+of+snout+wipe+samples+for+influenza+A+virus+surveillance+in+exhibition+swine+populations%5BTitle%5D)+AND+%22Influenza+Other+Respir.+Viruses%22%5BJournal%5D)">Utility of snout wipe samples for influenza A virus surveillance in exhibition swine populations.</a> Influenza Other Respir. Viruses. 8 (5), 574-579 (2014).</li>
<li>Zhang, J., Harmon, K. M. Ch. 23, RNA extraction from swine samples and detection of influenza A virus in swine by real-time RT-PCR. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aZhang%2C+J+%22Animal+Influenza+Virus%22">Animal Influenza Virus</a>. Spackman, E. , Methods in Molecular Biology; 1161. 277-293 (2014).</li>
<li>Zhang, J., Gauger, P. C. Ch. 22, Isolation of swine influenza virus in cell cultures and embryonated chicken eggs. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aZhang%2C+J+%22Animal+Influenza+Virus%22">Animal Influenza Virus</a>. Spackman, E. , Methods in Molecular Biology; 1161. 265-276 (2014).</li>
<li>Bowman, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Inability+to+Screen+Exhibition+Swine+for+Influenza+A+Virus+Using+Body+Temperature%5BTitle%5D)+AND+%22Zoonoses+Public+Health%22%5BJournal%5D)">The Inability to Screen Exhibition Swine for Influenza A Virus Using Body Temperature.</a> Zoonoses Public Health. , (2015).</li>
<li>Prickett, J. R., Kim, W., Simer, R., Yoon, K. J., Zimmerman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oral-fluid+samples+for+surveillance+of+commercial+growing+pigs+for+porcine+reproductive+and+respiratory+syndrome+virus+and+porcine+circovirus+type+2+infections%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Swine+Health+Prod%22%5BJournal%5D)">Oral-fluid samples for surveillance of commercial growing pigs for porcine reproductive and respiratory syndrome virus and porcine circovirus type 2 infections.</a> J. Swine Health Prod. 16 (2), 86-91 (2008).</li>
<li>Prickett, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+Porcine+reproductive+and+respiratory+syndrome+virus+infection+in+porcine+oral+fluid+samples%3A+a+longitudinal+study+under+experimental+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vet.+Diagn.+Invest%22%5BJournal%5D)">Detection of Porcine reproductive and respiratory syndrome virus infection in porcine oral fluid samples: a longitudinal study under experimental conditions.</a> J. Vet. Diagn. Invest. 20 (2), 156-163 (2008).</li>
<li>Pepin, B., Liu, F. F., Main, R., Ramirez, A., Zimmerman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collection+of+oral+fluid+from+individually+housed+sows%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Swine+Health+Prod%22%5BJournal%5D)">Collection of oral fluid from individually housed sows.</a> J. Swine Health Prod. 23 (1), 35-37 (2015).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

איסוף דגימות מחזירים באמצעות מטליות האף-הטה פוליאסטר הוכיח שימושי בניהול מעקב IAV; עם זאת, השימוש בנוהל ספוגית האף מעכב את מאמצי מעקב עקב השימוש הנדרש של מלכודת לאיפוק. מגבוני האף מייצגים עידון של טכניקות דגימת חזירים הנוכחיות כדי למזער את הלחץ על אנשים וחזירים במהלך איסוף דגימה. בעוד השיטה פותחה ולמאומתת בהגדרות חזירים תערוכה, זה יכול להיות מיושם בקלות למצבים אחרים שבם זיהוי אנטה-מורטם של IAV בחזירים יש צורך (כלומר חזירים מסחריים, שווקי בעלי החיים חיים, מחקר ביו-רפואי, <...

<html> נגיפי שפעת (IAV) גורמים למחלות בדרכי הנשימה במינים רבים, כוללים ציפורים מקומיות, חזירים, ובני אדם. בשל reassortment של האבולוציה הנגיפית המהירה הגנום IAV המפולח יכול להתרחש וזני IAV חדשים לעתים קרובות להופיע. חזירים הם מינים שיכולים לשמש ככלי לערבוב reassortment של IAVS ממיני מארח מרובים. 1 כרגע יש שלושה תת-סוגים עיקריים של IAV מחזור נפוץ בקרב חזירים בצפון אמריקה (H1N1, H1N2, H3N2), אבל יש לי היכרויות IAV מרובות מבני האדם הוביל לגיוון IAV הנרחב בתוך תת אלה. 2 אבולוציה מהירה של IAVS הדבקת חזירים הייתה ברורה מאז 1998 כאשר reassortant משולש IAV המכיל קטעי גן מוירוסים אנושיים, עופות וחזירים 3 הפכו נפוצים בקרב חזירים בארצות הברית. 4 הגן הפנימי קטעים שמIAV reassortant המשולש יישארו נפוצים מאוד בקרב IAVS הדבקת חזירים כיום. 5 &quot;&gt; ברחבי העולם, IAV הוא גורם משמעותי למחלות בדרכי הנשימה בחזירים שבסימנים קליניים אופייניים כוללים חום, אנורקסיה, עייפות, שיעול, נשימה מאומצת, התעטשות, נזלת ועלייה במשקל ירוד. IAV יכול להיות יקר במיוחד לזרוע חוות שבי רבייה כישלון בשל חום וחזירונים נולדו חלשים-induced IAV תועד. 6,7 בתוך ארצות הברית, IAV מזוהה בדרך כלל בעדרי חזירים מסחריים ומגוון הנרחב אנטיגני וגנומי ופיתוח המתמשך בין החזירים הדבקת IAV עכב שליטה של זה וירוס. 8-11 חששות לבריאות ציבור על הופעתה של מתח IAV מגיפה כתוצאה מreassortment בחזירים מומשו בשנת 2009 כאשר IAV חזירים שושלת מכיל קטעים מגן השושלת המשולשת reassortant צפון אמריקה חזירים ושושלת חזירים כמו עופות האירו גרם למגפה בעולם בבני אדם. 12 (pdm09 A (H1N1)) הנגיף מאזreassorted עם חזירים אנדמיים IAV זני 13,14 וחלק מהזנים חדש reassorted אלה הועבר בחזרה לבני אדם. 15 התדירות של אירועים והופעתה של זנים חדשים IAV עם פוטנציאל מגיפה עושה מעקב פעיל של מחזורי וירוסי IAV בחזירים הכרחיים reassortment, במיוחד בממשק החזירים-אדם. ממשק החזירים-אדם הוא חשוב להעברת interspecies דו-כיוונית של IAV. אדם לחזירי שידור מתרחש בייצור חזירים מסחרי אחראי לכמות גדולה של גיוון IAV כיום קיים באוכלוסיית החזירים. ירידים חקלאיים הם ההגדרות הגדולות ביותר לcomingling של אנשים וחזירים בארצות הברית וידועים באתרים להעברת zoonotic של IAV. 15-21 בשנת 2012, במהלך פרוץ גרסת H3N2 IAV, 93% מהמקרים מדווחים נוכחות ב הוגן חקלאית בימים שקדם לתחילתה של מחלה. 15 ניתוח הגנוםשל בידודים נגיפיים מחזירי תערוכה לעומת מבודדים אנושי אישר העברת zoonotic. חזירים 21 תערוכה נגוע בIAV לעתים קרובות לא מראה סימנים קליניים של מחלה, 21-23 המציינים את הצורך בבדיקות אבחון ישירים. דגימה של חזירים חולים בעליל לבד לא לזהות בהצלחה שכיחות IAV בחזירים ולא ניתן לסמוך על לזהות זנים חדשים של IAV מתעוררים בקרב חזירים. מעקב פעיל הוא הכרחי לצורך זיהוי של זנים המתעוררים מIAV בחזירים ולהעריך האיום שלהם עבור שני חזירים ובריאות הציבור. רוב פעילויות מעקב IAV הן מרצון ולכן יש צורך בשיטות זעיר-מפריעות. שלושה הליכי גביית מדגם גדולים אנטה-מורטם לIAV הדבקת חזירים הם: מטליות האף, נוזלים דרך הפה, ומגבוני האף. המלצות נוכחיים לדגימת חזירים בודדים כדי לזהות רשימת IAV החדרת סינטטי הסיבים הטו מטליות לנחיריים כשיטת המועדפתלאסוף הפרשות מהאף ותאי האפיתל. 24,25 בגלל חזירים עלולים לנסות להימנע מהליך זה, צוות של אנשים מיומנים חייבים לרסן את החזירים באופן ידני או עם מלכודת תלוי בגודל של החיה. 26 תהליך האיפוק הוא מייגע ל כוח אדם, ומלחיץ עבור החזירים. בנוסף, חזירים תערוכה לעתים קרובות מעורבים בתחרויות מרובות ביריד כך התפיסה של מתח הוסיף על בעלי חיים תחרות יכולה לעשות בעלים עמידים למאמצי המעקב. בהסתברויות של זיהוי IAV החל 80-100% בIAV עדרים נגועים, נוזלים אוראליים הפכו חלופה פופולרית לאף מטליות לזיהוי המולקולרי של IAV באוכלוסיות של חזירים. 27,28 בנוסף, נוזלים דרך הפה עשוי לספק חלון רחב יותר של זיהוי IAV מ מטליות האף בעקבות זיהום ראשוני. עם זאת, בידוד IAV מנוזלים דרך הפה היה בעייתי עם רק 50% מניסיונות בידוד נגיף וכתוצאה מכך IAV התאוששות. 29 שימוש במגבוני האף במקום מטליות האף במהלך מעקב IAV בחזירים מתגבר על המגבלות שתוארו לעיל. מגבוני האף אינו דורשים שימוש במלכודת הרחקה וניתן לבצעו ללא הדגיש בעלי החיים או עדים של ההליך. יש צורך בהכשרה טכנית מינימאלית כדי לאסוף מגבוני האף, המאפשר אנשי מקצוע שאינה וטרינרית, לרבות בעלי חזירים, כדי לאסוף את דגימות המעקב. מגבוני האף הושוו בעבר למטליות האף לזיהוי והבידוד של וירוס שפעת 30 והפרוטוקול מפורט לשיטה לא פולשנית של דגימה מתואר להלן.

<table><tbody><tr><td>BBL Brain Heart Infusion</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>211059</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin G Sodium Salt</td><td>MP Biomedicals, LLC</td><td>021194537</td><td>1500 u/mg</td></tr><tr><td>Streptomycin Sulfate</td><td>AMRESCO LLC</td><td>0382</td><td></td></tr><tr><td>Gentamicin Solution</td><td>Mediatech, Inc.</td><td>30-005-CR</td><td>50 מ"ג/מ"ל</td></tr><tr><td>Amphotericin B Solution</td><td>Fisher</td><td>S 24 25</td><td>250 ug/ml</td></tr><tr><td>Kanamycin Sulfate</td><td>Teknova</td><td>K2105</td><td>5000 ug/ml</td></tr><tr><td>TPP Rapid Filtermax מערכת</td><td>TPP טכנו מוצרי פלסטיק AG&nbsp;</td><td>99150</td><td></td></tr><tr><td>בקבוקי אבחון Nalgen</td><td>Thermo Scientific</td><td>342002-9025</td><td>HDPE עם סגירת PP לבנה</td></tr><tr><td>ספוג גזה Dermacea, 8 שכבות</td><td>Covidien</td><td>441211</td><td>5.08 ס"מ ופעמים; 5.08 ס"מ (2 אינץ' ופעמים; 2 אינץ')&nbsp;</td></tr><tr><td>כפפות בחינת ניטריל</td><td>בחירה בטוחה</td><td>19-170-010 (A-D)</td><td></td></tr></tbody></table>

האף מגבונים לשפעת זיהוי וירוסים ובידוד מחזירים

Nasal Wipes for Influenza A Virus Detection and Isolation from Swine

מעקב לנגיפי שפעת בחזירים הוא קריטי לבריאות אדם ובעלי החיים, כי שפעת וירוס במהירות מתפתח באוכלוסיות חזירים וזנים חדשים צצים ללא הרף. חזירים יכולים להיות נגוע על ידי שושלות שונות של נגיף שפעת שהופכים אותם מארחים חשובים להופעה והתחזוקה של שפעת רומן זני וירוס. דגימת חזירים בהגדרות מגוונות כגון חוות מסחריות חזירים, ירידים חקלאיים, ושווקי החי חשוב לספק תמונה מקיפה של מחזור כיום זני IAV. הטכניקה הנוכחית הזהב סטנדרטי אנטה-מורטם הדגימה (כלומר אוסף של מטליות האף) היא עבודה אינטנסיבית מכיוון שהיא דורשת איפוק פיזי של החזירים. מגבוני האף כרוכים משפשפים את פיסת הבד על פני החוטם של החזיר עם מינימאלי ללא ריסון של בעלי החיים. האף לנגב הליך הוא פשוט לביצוע ואינו דורש כוח אדם עם וטרינרים מקצועיים או הכשרת טיפול בבעלי חיים. While מעט פחות רגיש ממטליות האף, שיעורי זיהוי וירוסים ובידוד מספיקים כדי להפוך את האף מגבוני חלופה לדגימת חזירים בודדים כאשר שיטות דגימה נמוך מתח נדרשות. פרוטוקול ההליך מתאר את הצעדים הדרושים כדי לאסוף האף קיימא למחוק מחזיר בודד.

שימוש מוצלח בשיטה זו מניבה RRT-PCR תוצאות ש, מלווה בשימוש בבקרה פנימית במהלך הפקת RNA וRRT-PCR, דגימות תכנית לא הכילו מעכבי PCR מכל פסולת סביבתית הרימה במהלך דגימה. לאחר חיסון מדגם, בארות בידוד וירוס צריכה להיות חופשיות של פסולת סביבתית גלויה מהמדגם. יש הסכמה סבירה בין תוצאות RRT-PCR ותוצאות בידוד נגיף מתוך ההבנה שPCR לעתים קרובות מניב שיעור חיובי גבוה יותר מאשר IAV בידוד נגיף בגלל PCR מזהה חומצת גרעין נגיפית, לא וירוס קיימא בהכרח. <p class="jove_content" style=";text-align:ri...

המחברים מציגים פרוטוקול לאיסוף מגבוני אף חזירים כדי לזהות ולבודד נגיפי שפעת A.

Surveillance for influenza A viruses in swine is critical to human and animal health because influenza A virus rapidly evolves in swine populations and ...

המטרה הכללית של הליך זה היא לאסוף ניגובים מהאף של חזירים למטרת מעקב אחר נגיף השפעת A, כחלופה בעלת רמת סטרס נמוכה לדגימות תמיריות מהאף. שיטה זו יכולה לשפר את המעקב ולספק תובנות לגבי זני נגיף השפעת A המסתובבים בקרב חזירים, מכיוון שהיא פשוטה לביצוע ואינה דורשת הכשרה מיוחדת.היתרון המרכזי של טכניקה זו הוא שניתן לאסוף את הדגימות לבדיקות אבחנתיות מבעלי חיים בודדים תוך שימוש בריסון מינימלי. ההשלכות של טכניקה זו פונות לשיפור ההשתתפות בתוכניות למעקב אחר נגיף השפעת A, מכיוון ששיטה המשרה לחץ מועט יותר מושכת יותר עבור בעלי חזירים. למרות ששיטה זו פותחה במקור לשימוש עם חזירים לתערוכה, ניתן ליישמה למעקב אחר נגיפים בחזירות מסחריות, בענייני חקלאות ובשווקי בעלי חיים חיים.כדי להתחיל, המיסו תחילה 37 גרם של brain heart infusion, או אבקת BHI, ב-900 מיליליטר של מים מזוקקים. ערבבו את התמיסה בטמפרטורה של 70 °C כדי להמיס את האבקה, עקרו את המצע באופן מלא באוטוקלאב למשך 15 דקות במחזור לנוזלים, ולאחר מכן הניחו לו להתרנן. לאחר מכן, המיסו 6.02 גרם של penicillin, G, sodium salt, ו-10 גרם של streptomycin sulfate ב-100 מיליליטר של מים מזוקקים בטמפרטורת החדר בתוך המCהHood.סננו את תמיסת האנטיביוטיקה דרך ממברנת פוליאתר בנקב של 0.22 מיקרון אל תוך בקבוק סטרילי. הוסיפו את כל 100 המיליליטרים של תמיסה זו ל-900 המיליליטרים ש

nasal-wipes-for-influenza-a-virus-detection-and-isolation-from-swine

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

שיטה זו מתארת ​​את השימוש במערכת הדמיה צבע אינפרא אדום מבוסס על זיהוי של H1N1 בנוזל bronchioalveolar (BAL) שטיפה של עכברים נגועים על רגישות גבוהה. מתודולוגיה זו ניתן לבצע 96 - או 384 גם צלחת, דורש &lt;10 נפח μl של חומר הבדיקה יש פוטנציאל הקרנה בו זמנית של פתוגנים רבים.

תפוקה גבוהה איתור שיטת וירוס השפעת

מקור: לנהרד, א. ואחרים. מודל עכבר למעבר של Streptococcus pneumoniae ממתיישב לפתוגן בעקבות זיהום נגיפי משחזר מחלה שהוחמרה על ידי הגיל. J. Vis. Exp. (2022)הסרטון הזה מדגים מודל זיהום משותף לעכברים, שבו נגיף השפעת מפעיל את המעבר של Streptococcus pneumoniae ממתיישב לפתוגן. הוא מפרט את השלבים המעורבים בהתיישבות חיידקית, זיהום ויראלי והתקדמות מחלה.

מודל עכבר לחקר המעבר הפתוגני של Streptococcus pneumoniae בעקבות זיהום נלווה ויראלי

Source: Wang, M., et al, Evaluation of T Follicular Helper Cells and Germinal Center Response During Influenza A Virus Infection in Mice. J. Vis. Exp. (2020).This video demonstrates intranasal infection of a mouse with a pathogenic influenza virus to establish a respiratory tract infection. The procedure outlines the administration of the virus into the nasal cavity. The virus enters host cells, replicates, and activates the immune system.

Intranasal Infection of a Mouse with a Pathogenic Influenza Virus

הסרטון מדגים בדיקה לכימות נגיפי שפעת A ו-B. בדיקה זו משתמשת בהגברה של אנדונוקלאז עם פריימרים ספציפיים לשפעת וזיהוי מטרות באמצעות בדיקות משואות מולקולריות.

בדיקה מבוססת מולקולרית לכימות נגיפי שפעת A ו-B

אנו מתארים assay מהיר, מולקולרי מבוסס השפעת A ו- B. שפעת assay מזהה כל מטרה בתוך 15 דקות על ידי העסקת הגברת בידוד תרמית עם פריימרים ספציפי שפעת ואחריו איתור יעד עם בדיקות משואה מולקולריות. שפעת A ו- B assay הוא ידידותי למשתמש ונזקק ידות על מינימאליות זמן לבצע.

איתור מולקולרית ראפיד והבחנה א נגיפי שפעת A ו- B

בדיקות תפוקה גבוהה של פתוגנים מבוססים DNA ו- RNA על ידי ננו PCR מתוארות באמצעות כלבים syndromic ולוח PCR נשימת סוסים.

איתור תפוקה גבוהה של פתוגנים הנשימה בדגימות בעלי חיים על ידי ננו PCR

מחקר זה מתאר   מבוססי הדמיה assay מיקרו-נטרול לנתח את היחסים בין אנטיגני וירוסים. פרוטוקול מעסיקה וסורק ויש לו ארבעה שלבים, כולל טיטרציה, quantitation טיטרציה, נטרול, ו quantitation הניטרול. את assay עובד היטב עם שפעת A במחזור הנוכחי (H1N1) pdm09, A (H3N2), ווירוסים B.

אופטימיזציה של Assay כמותי מיקרו-נטרול

וירוסים שפעת A (IAVs) הם חשובים פתוגנים הנשימה האנושית. כדי להבין את פתוגניות של IAVs וכדי לבצע בדיקות פרה גישות חיסון הרומן, חייתיים מחקה פיזיולוגיה אנושית נדרשים. כאן, אנו מתארים שיטות להערכת iav ב פתוגנזה, התגובות ההורמונאלית, יעילות החיסון באמצעות מודל של העכבר של זיהום.

מחקרים וירוס שפעת A במודל של עכברים של זיהום

הפרוטוקול הנוכחי מתאר שיטה חדשה למניעת זיהום דם בנוזל שטיפת האף של העכברים (NLF). מכיוון ששיטה זו מבטיחה איסוף NLF ללא זיהום דם, היא מאפשרת זיהוי מדויק יותר של רכיבים אימונולוגיים ופתוגנים נשימתיים שונים.

איסוף נוזלי שטיפת אף של עכברים ללא זיהום דם

פרוטוקול זה מספק הוראות למתן תוך-אף של IAV וניתוח במורד הזרם של נזק לריאות עכברים ושינויים שעתוק נלווים לסוגי תאי ריאה.

מידול תיקון דיספלסטי ותפקודי של מכתשית ריאות לאחר זיהום בשפעת

למדו שיטת איסוף מגבונים מאפי חזירים לזיהוי וירוס השפעת A. שיטה זו מפחיתה מתח בבעלי חיים ומשפרת מעורבות בתוכניות מעקב וטרינריות ללא צורך בהכשרה מיוחדת.

האף מגבונים לשפעת זיהוי וירוסים ובידוד מחזירים

גלה סרטונים נוספים