Name: הדמיה נויטרופילים ומונוציטים בmesenteric ורידים על ידי מיקרוסקופית Intravital על עכברים מורדמים בזמן אמת (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-11-16T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 28 s
Description: למד מיקרוסקופיה אינטרוויטלית לניטור נויטרופילים ומונוציטים בורידי המזנטריום בעכברים מורדמים. שיטה זו מאפשרת מעקב בזמן אמת אחר דינמיקת תאי דם לבנים בתנאי מצב יציב ודלקת.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי EMBO (ל-Y.E.), Foundation Machaon (ל-Y.E.) ו-SNSF (ל-B.A.I). אנו מודים למתקן הליבה של ההדמיה הביולוגית על הזמינות של מיקרוסקופ ה-A1r של Nikon ועל הסיוע הטכני. אנו מודים לגברת קלריסה בארטלי על התיקון באנגלית.

הערה: נהלי בעלי חיים בוצעו בהתאם לוועדה המוסדית האתית של טיפול בבעלי חיים בז&#39;נבה, שווייץ ולשכת הווטרינרית המחוזית. מספר אישור GE / 63/14. 1. הכנת תרחיף תא בודד ממח העצם <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכבר קורבן (8-12 בן שבוע) נקע בצוואר רחם. לעקר רגליים אחוריות עם 70% אתנול. להסיר עור מרגליים אחוריות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנתח את עצמות ירך עכבר וtibias ולהסיר רקמה מרגליים עם אזמל. יש לשטוף את הרגליים עם 90% אתנול ומקום לתוך צלחת תרבות מלאה PBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מתחת למכסה מנוע התרבות, רקמות נקיות מעצמות ירך וtibias עם אזמל ונפרד במפרק הברך. חותך את כל קצה של העצמות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מח עצם סומק מעצם באמצעות מחט 23G ומזרק 1 מיליליטר מלא בינוני הכנה (DMEM / F12 האדום ללא פנול, 1% בסרום עכברוש), לבורג 50 מיליליטר צינור. לשבש אגרגטים תא על ידי בעדינות passaging דרך ne 23Gedle ומזרק 1 מיליליטר. להביא נפח הכולל עד 25 מיליליטר עם מדיום הכנה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה XG 250, 5 דקות, 4 ° C. supernatant מחק. Resuspend גלולה ב 1 מיליליטר של תאי דם אדומים חיץ תמוגה RBLC (8.3 גר &#39;NH 4 Cl, גרם NaHCO 1 3, 1 מיליליטר EDTA (100 מ&quot;מ), שלם לL 1 עם מים מזוקקים, לסנן 0.22 מיקרומטר) בצינור 15 מיליליטר בורג. דגירה 30 שניות על קרח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 10 מיליליטר של מדיום ההכנה וXG 250 צנטריפוגות, 5 דקות, 4 מעלות צלזיוס. בטל supernatant וגלול ב 2 מיליליטר בינוני הכנה. </li></ol> 2. נויטרופילים העשרה על ידי סלקציה שלילית <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף 150 μl של קוקטייל העשרת נויטרופילים עכבר (ערכת פלטפורמת בידוד תא כגון EasySep). לערבב דגירה על קרח למשך 10 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף 10 מיליליטר של פנול אדום DMEM החופשי. הפוך פעם צנטריפוגות 250 XG, 3 דקות, 4 מעלות צלזיוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> supernatant מחק. גלולה גלולה ב1.75 בינוני מיליליטר הכנה ב 5 מיליליטר קלקר עגול צינורות תחתון. הוסף 250 μl ביובקוקטייל בחירה. לערבב דגירה על קרח למשך 10 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מערבולת חלקיקים המגנטיים (מערכת פלטפורמת בידוד תא) למשך 30 שניות כדי resuspend חלקיקים. הוסף 500 חלקיקים מגנטיים μl להשעיה תא. לערבב דגירה על קרח למשך 10 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את הצינור לתוך המגנט. חכה 3 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך את המגנט על 5 מיליליטר קלקר חדש עגול צינורות תחתון כדי לאסוף את התאים ללא תווית הרצויה. אל תיקח את הטיפה האחרונה התלויה בצינור. תאים לא רצויים יישארו בצינור בתוך המגנט. בטל צינור זה לפסולת ביולוגית מסוכנת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את הצינור החדש לתוך המגנט. חכה 3 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך את המגנט על 15 מיליליטר חדש לדפוק צינור כדי לאסוף את התאים ללא תווית הרצויה. אל תיקח את הטיפה האחרונה התלויה בצינור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נפח מלא עד 5 מיליליטר עם DMEM החופשי פנול האדום. </li></ol> 3. תיוג של נויטרופילים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 0.5 μl של צבע כתום כגון תא Tracker אורנג ריכוז עבודה (1 מיקרומטר, CMRA - chloromethyl-rodol-אצטט, מניית 10 מ&quot;מ בDMSO). דגירה 2 דקות ב 37 מעלות צלזיוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף 2.5 מיליליטר של מדיום הכנה. צנטריפוגה XG 250, 5 דקות, 4 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> supernatant מחק. גלולה גלולה במדיום 1 מיליליטר הכנה בצינור 1.5 מיליליטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קח aliquot לספור עם hematocytometer. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה 5 דקות על 37 מעלות צלזיוס. צנטריפוגה XG 250, 5 דקות, 4 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> supernatant מחק. Resuspend גלולה ב 1 מיליליטר PBS. צנטריפוגה XG 250, 5 דקות, 4 ° C כדי לשטוף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> supernatant מחק. גלולה גלולה כ10x10 6 תאים לכל 100 μl PBS. שמור על קרח עד הזרקת IV. הערה: תאים צריכים להיות מוזרק iv מהר ככל האפשר. 6-12x10 6 נויטרופילים / עכבר בדרך כלל מתקבל. </li></ol> 4. עכבר הכנה למיקרוסקופי Intravital הערה:.. שלב 4.1) ו -4.2) צריכה להתבצע בתחילת הניסוי, כדי למנוע זמן ההמתנה ממושך של נויטרופילים שכותרת על ICדואר. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשקול את עכבר CX 3 CR1 GFP (8-12 בן שבוע). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן 800 μl של הרדמה (60 מ&quot;ג / קילוגרם קטמין, 4.5 מ&quot;ג / קילוגרם xylazine, acepromazone 1.75 מ&quot;ג / קילוגרם בPBS). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרדימי עכבר. IP הזרקה עם 200 μl / 20 גרם של עכבר. הרדמה שליטה על ידי בוהן צביטה ועל ידי בדיקת קצב הנשימה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזרק נויטרופילים (10x10 6 תאים ב100 μl PBS) לוריד באמצעות ורידי זנב לרוחב או בסינוסים רטרו מסלולית, בנוחות של הנסיין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים את העכבר על כרית חימום ולהגן על העיניים עם ג&#39;ל העיני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Coverslip זכוכית (35 מ&quot;מ קוטר) הוא לשים בצלחת תרבית רקמת 10 סנטימטרים, שבו יש חור בקוטר 30 מ&quot;מ. שמן שימוש הוא לשמור על צלחת תרבית רקמה במגע עם coverslip. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחתוך עור בטן במספריים כדי לחשוף את הצפק. לחתוך הצפק עם מספריים לחשוף מעי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף 200 μl PBS (מחומם מראש על 37 מעלות צלזיוס) לעמחלל eritoneal. קח את העכבר ביד שלך ולהפוך אותו עם פנים כלפי מטה, כך שהמעי יוצא מחלל הצפק עם לחץ עדין. מניחים את העכבר בצלחת תרבית רקמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעדינות deroll המעי עם ניצני כותנה מעוקרים על coverslip כדי לחשוף את כלי mesenteric. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחתוך רקמות נייר בלהקות ולהרטיב אותם עם 37 מעלות צלזיוס PBS מחומם. לשתק את המעי עם החתיכות של רקמות נייר כדי להקטין את התנועות הנובעות מתנועה פריסטלטית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים את צלחת תרבית רקמה והעכבר בתוך חדר thermostated 37 ° C על הבמה המגש המותאמת אישית של מיקרוסקופ ההפוכה. להציג את מזרק המכיל sc הרדמה לרגלו האחורית. הערה: בנוסף, העכבר יכול לקבל חמצן (0.5 ליטר / דקה) עם מסכה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכבר בקרה להרדמה על ידי בוהן צביטה ובדיקת קצב הנשימה בכל 30 דקות. במידת הצורך, לספק דחיפה של הרדמה (20 μl) כדי לשמור על הרדמה כראוי. לֹאE: יש להימנע ייבוש של כלי הדם. לכן, לחותו נשמר על ידי ההרטבה באופן קבוע רקמות נייר משמשות כדי לשתק את המעי עם 37 מעלות PBS חימם-C. </li></ol> 5. התנהגות מדידת נויטרופילים ומונוציטים בכלי שייט מוסת in vivo באמצעות מיקרוסקופית Intravital <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לייזרי סט ל488- ו561- בהספק הנמוך ביותר הנחוץ כדי למנוע phototoxicity מושרה לייזר. בניסויים שלנו, הוא נמוך מ -0.5%. עוצמה של ה- GFP במונוציטים וצבע כתום בנויטרופילים היא כל כך בהירה, כי בדרך כלל 0.3% הוא מספיק. הערה: זה מייצג כוח לייזר של 0.15-0.25 mW עם המערכת שלנו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לרכוש תמונות של 512 x 512 פיקסלים (כלומר, 635 מיקרומטר) ב 2.2 שניות עם חריר פתוח באמצעות אובייקטיבי היבשה 20X של מיקרוסקופ ההפוכה. השתמש בZ- עומק בין 10 עד 20 מיקרומטר, שמבטיח אות מספיק עם סמכויות לייזר נמוכות. הערה: אנחנו בדרך כלל לבצע ניסויים עם Z- עומק בין 12 עד 1656; מ &#39;. במקרה של דמויות וסרטים שהוצגו, Z- העומק הוא 20 מיקרומטר. בניגוד שלב מאפשר זיהוי של קירות אנדותל והדמיה מתבצעת על ורידי mesenteric. מאחר ותאים שסיירו לעבור די לאט עם מהירות של 5-10 מיקרומטר / min 6, הקלטת תחום העניין בכל 20 שניות היא משביעת רצון. עם ההגדרות שתוארו, השלב הממונע מאפשר ההקלטה של ​​עד 7 תחומי העניין באותו הזמן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את העכבר וכלי mesenteric בתא התרמוסטט של המיקרוסקופ הם לאפשר להם להתאושש מההכנה למשך 30 דקות לפני הרכישה של הסרט הראשון. במהלך תקופה זו, לבחור כמה תחומי העניין. פוקוס על פני השטח luminal של כלי השיט הקרוב ביותר למטרה. במידת הצורך, לנצל את אוטומטי הקרינה הקלה של האנדותל כדי להגדיר את המיקוד. הערה: ניתוח במהלך הכנת עכבר מעט מדגיש את האנדותל. כתוצאה מכך, מתגלגל של נויטרופילים וניתן לצפות / או מונוציטים בהכנת 15 דקות הראשונה שלאחר העכבר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להקליט סרט ראשון למשך 30 דקות בתנאי מצב יציבים, תמונה אחת בכל 20 שניות. הערה: התוכנה רוכשת כל תחום העניין ב2.2 שניות והבמה הממונעת עוברת באופן אוטומטי מתחום אחד למשנהו. זה חוזר למצב הראשון בתוך 20 שניות במהלך 30 דקות של סרט ההקלטה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ליזום דלקת בכלי דם, להוסיף טיפה של 20 μl של PBS המכילה TLR2 של 100 מיקרוגרם / TLR1 אגוניסט Pam3CSK4 12 ישירות על כלי הדמיה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשלוט במיקוד לכל תחום העניין. הערה: במהלך הרכישה, תמיד יש שינויים קלים של התמקדות בציר z. למרות Z- עומק 10-20 מיקרומטר, זה יכול לגרום לירידה של עוצמת הקרינה. לכן, למקד ידני בכל תחום העניין בסופו של כל סרט, במידת צורך. הקלטת סרטים למשך 30 דקות תקופות ועד 3 שעות לטל לאחר תחילת הדלקת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בסוף הניסוי, להקריב את העכבר הרדים נקע בצוואר רחם. </li></ol> 6. דור של קבצי סרטים ומעקב של לויקוציטים הערה: רכישת תוכנת ניקון מייצרת .nd2 קבצים אבל ההליך הבא יהיה דומה עם תוכנה ומותגים אחרים. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קבצי יצוא סדרת TIFF כ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור לתוכנת ImageJ <a href="http://rsb.info.nih.gov/ij/">(http://rsb.info.nih.gov/ij/).</a> לייבא את סדרת TIFF. כל ערוץ כקובץ שונה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל מסנן חציון ברדיוס של 2.0 פיקסל לערוצים הירוקים ואדום כדי להפחית את רעש רקע (תהליך&gt; מסננים&gt; חציון ...). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להמיר קבצים לינארי (תהליך&gt; ינארי&gt; הפוך ינארי). הפעל את התוכנה על מנת לחשב את הסף לכל תמונה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מיזוג ערוצי סדרת תמונה אחת (תמונה&gt; צבע&gt; מיזוג ערוצים ...) ל. בחר מונוציטים בGreeערוץ n, נויטרופילים במסלול האדום והאור מועבר בערוץ האפור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המרת תמונות נערמו לצבעי RGB (תמונה&gt; צבע&gt; מחסנית ל- RGB). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמור את הקובץ כ.אבי </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נתונים מיובאים והידור בתוכנת Imaris (Bitplane). תנועות של מונוציטים ונויטרופילים לאחר מכן מעקב באמצעות ספוט מעקב האשף. </li></ol>

<ol><li>Ley, K., Laudanna, C., Cybulsky, M. I., Nourshargh, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Getting+to+the+site+of+inflammation%3A+the+leukocyte+adhesion+cascade+updated%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Getting to the site of inflammation: the leukocyte adhesion cascade updated.</a> Nat Rev Immunol. 7, 678-689 (2007).</li>
<li>Nourshargh, S., Hordijk, P. L., Sixt, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Breaching+multiple+barriers%3A+leukocyte+motility+through+venular+walls+and+the+interstitium%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Breaching multiple barriers: leukocyte motility through venular walls and the interstitium.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 11, 366-378 (2010).</li>
<li>Nourshargh, S., Alon, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Leukocyte+migration+into+inflamed+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Leukocyte migration into inflamed tissues.</a> Immunity. 41, 694-707 (2014).</li>
<li>Ley, K., et al. Chapter 11. Intravital microscopic investigation of leukocyte interactions with the blood vessel wall. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLey%2C+K+%22Methods+Enzymol%22">Methods Enzymol</a>. 445, 255-279 (2008).</li>
<li>Sperandio, M., Pickard, J., Unnikrishnan, S., Acton, S. T., Ley, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+leukocyte+rolling+in+vivo+and+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Analysis of leukocyte rolling in vivo and in vitro.</a> Methods Enzymol. 416, 346-371 (2006).</li>
<li>Auffray, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+of+blood+vessels+and+tissues+by+a+population+of+monocytes+with+patrolling+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Monitoring of blood vessels and tissues by a population of monocytes with patrolling behavior.</a> Science. 317, 666-670 (2007).</li>
<li>Cros, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+CD14dim+monocytes+patrol+and+sense+nucleic+acids+and+viruses+via+TLR7+and+TLR8+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Human CD14dim monocytes patrol and sense nucleic acids and viruses via TLR7 and TLR8 receptors.</a> Immunity. 33, 375-386 (2010).</li>
<li>Hanna, R. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+transcription+factor+NR4A1+%28Nur77%29+controls+bone+marrow+differentiation+and+the+survival+of+Ly6C-+monocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">The transcription factor NR4A1 (Nur77) controls bone marrow differentiation and the survival of Ly6C- monocytes.</a> Nat Immunol. 12, 778-785 (2011).</li>
<li>Woodfin, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+junctional+adhesion+molecule+JAM-C+regulates+polarized+transendothelial+migration+of+neutrophils+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">The junctional adhesion molecule JAM-C regulates polarized transendothelial migration of neutrophils in vivo.</a> Nat Immunol. 12, 761-769 (2011).</li>
<li>Proebstl, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pericytes+support+neutrophil+subendothelial+cell+crawling+and+breaching+of+venular+walls+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Pericytes support neutrophil subendothelial cell crawling and breaching of venular walls in vivo.</a> J Exp Med. 209, 1219-1234 (2012).</li>
<li>Wantha, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil-derived+cathelicidin+promotes+adhesion+of+classical+monocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Neutrophil-derived cathelicidin promotes adhesion of classical monocytes.</a> Circ Res. 112, 792-801 (2013).</li>
<li>Ozinsky, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+repertoire+for+pattern+recognition+of+pathogens+by+the+innate+immune+system+is+defined+by+cooperation+between+toll-like+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U.S.A%22%5BJournal%5D)">The repertoire for pattern recognition of pathogens by the innate immune system is defined by cooperation between toll-like receptors.</a> Proc Natl Acad Sci U.S.A. 97, 13766-13771 (2000).</li>
<li>Lammermann, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+swarms+require+LTB4+and+integrins+at+sites+of+cell+death+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Neutrophil swarms require LTB4 and integrins at sites of cell death in vivo.</a> Nature. 498, 371-375 (2013).</li>
<li>Carlin, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nr4a1-dependent+Ly6C%28low%29+monocytes+monitor+endothelial+cells+and+orchestrate+their+disposal%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Nr4a1-dependent Ly6C(low) monocytes monitor endothelial cells and orchestrate their disposal.</a> Cell. 153, 362-375 (2013).</li>
<li>Hamon, P., Rodero, M. P., Combadiere, C., Boissonnas, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tracking+mouse+bone+marrow+monocytes+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Tracking mouse bone marrow monocytes in vivo.</a> J Vis Exp. , (2015).</li>
<li>Iqbal, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+CD68+promoter+GFP+transgenic+mice+allow+analysis+of+monocyte+to+macrophage+differentiation+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Human CD68 promoter GFP transgenic mice allow analysis of monocyte to macrophage differentiation in vivo.</a> Blood. 124, e33-e44 (2014).</li>
<li>Jenne, C. N., Wong, C. H., Petri, B., Kubes, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+spinning-disk+confocal+microscopy+for+the+intravital+analysis+of+platelet+dynamics+in+response+to+systemic+and+local+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">The use of spinning-disk confocal microscopy for the intravital analysis of platelet dynamics in response to systemic and local inflammation.</a> PloS One. 6, e25109(2011).</li>
</ol>

המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים פיננסיים מתחרים.

מתודולוגיות מתוארות בכתב היד הזה מספקים גישה עקבית ללמוד ביעילות מונוציטים ונויטרופילים התנהגות בעורקי mesenteric בתנאי מדינה ודלקתית יציבים. הצעד המכריע של ההכנה הוא חוסר תנועה של המעי עם רקמות הרטובות-PBS. אם מבוצע כראוי, כלי mesenteric הם יפה נחשפו על coverslip לרכישת תמונה. זה מאפשר את הבחירה של כמה תחומי העניין לפקח יקוציט התנהגות בעורקי mesenteric. <p class="jove_content" style=";text-align:right;direct...

<html> נויטרופילים ומונוציטים הם תאים של מערכת החיסון המולדת, כי כל זמן במחזור הדם. על פציעה או זיהום, אותות דלקתיים לגרום diapedesis לויקוציטים לרקמות שנפגעו ונגועים, במסמך ייזום תגובה חיסונית תאית 1-3. המהירות של גיוס לויקוציטים קובעת את התוצאה החיובית של התגובה החיסונית. תהליכים מורכבים אלה מסתמכים על מולקולות ספציפיות (למשל, selectins, כמוקינים מאוגדים האנדותל) הנוכחיות על האנדותל המודלק המסייעות להקמת קשר דבק בין כדוריות דם לבנות במחזור והאנדותל 1-3 בדי לקבל תובנות על המולקולות מעורבות ביקוציט מפל גיוס, חשוב לדמיין את קינטיקה של גיוס תא ולעקוב אחר ההתנהגות של כל תא / אוכלוסייה. שיטה יעילה כרוכה מיקרוסקופיה intravital בעכברים הטרנסגניים לבטא חלבוני ניאון בתאים של עניין. תוכן &quot;&gt; נכון להיום, כמה גישות באמצעות מיקרוסקופ intravital פותחו לתמונה בכלי הדם 4,5. לדוגמא, הדמיה של כלי דם הדרמיס אוזן או ורידי mesenteric על ידי מיקרוסקופ confocal intravital שימשה לזהות סיור ההתנהגות של מונוציטים נמוכים Ly6C עכברי ואנושי CD14 לעמעם CD16 + מונוציטים בצד luminal של כלי דם בתנאי מצב יציבים 6-8. מודל כלי דם Cremaster העכבר משמש לעתים קרובות כדי לפקח על התנהגותם של נויטרופילים או מונוציטים גבוהים Ly6C הדלקתי בתנאים דלקתיים או איסכמי בעכברים מהונדסים. שב מקרה, Cremaster מגורה באמצעות הזרקת intrascrotal של IL1β, CCL2, TNFβ או fMLP. לאחר 2-4 שעות, רקמות ואז בניתוח exteriorized ונותחו על ידי מיקרוסקופיה confocal intravital 9-11. הפרוטוקול הבא מתאר שיטה לניטור מונוציטים ונויטרופילים באותו הזמן עם כלהקרינה הפוכה מיקרוסקופ confocal. יתר על כן, השיטה שלנו מפרטת כיצד תמונה אותו כלי השיט לפני (מצב מצב יציב) ולאחר דלקת ואיך לבצע את קינטיקה של גיוס לויקוציטים. לצורך כך, אנו משתמשים 3 CR1 עכבר GFP / WT CX, מונוציטים שלהביע eGFP, הזריק IV עם נויטרופילים עכברי שכותרתו צבע כתום. באמצעות מיקרוסקופ confocal הפוך, זה אפשרי (1) למעקב וניתוח מונוציטים הנמוכים Ly6C הסיור בתנאי מצב יציבים ו( 2) למעקב הגיוס של שני מונוציטים ונויטרופילים באותו הכלי לאחר דלקת מקומית. כאן אנו יוצרים את המצבים דלקתיים על ידי השימוש באגוניסט TLR2 / TLR1 12 Pam3CSK4. יתר על כן, הדמיה כזו עשויה לעזור לקבוע את התפקיד של מולקולות ספציפיות של עניין בשלבים השונים של מפל גיוס לויקוציטים אם בוצע על עכברי נוק-אאוט ספציפיים או בנוכחות של נוגדני חסימת 6,9,13.

<table><tbody><tr><td>5 מ"ל צינורות תחתונים עגולים מפוליסטירן&nbsp;</td><td>בקטון דיקינסון</td><td>352058</td><td></td></tr><tr><td>10x CFI Plan Apochromat 0.45&nbsp; &nbsp; DT:4 מ"מ&nbsp;</td><td>Nikon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>20x CFI Plan Apochromat VC 0.75 DT:1mm&nbsp;</td><td>Nikon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cell Tracker כתום CMRA Dye</td><td>Life Technologies</td><td>C34551</td><td></td></tr><tr><td>EasySep מגנט</td><td>תאי גזע טכנולוגיות</td><td>18000</td><td></td></tr><tr><td>EasySep עכבר נויטרופילים ערכת העשרה</td><td>טכנולוגיות תאי גזע</td><td>19762</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Sigma Aldrich</td><td>E6758</td><td></td></tr><tr><td>FCS</td><td>PAA</td><td>A15-042</td><td></td></tr><tr><td>שמן טבילה סוג A</td><td>ניקון</td><td></td><td>כל שמן צמיג&nbsp;</td></tr><tr><td>Life Box בקרת טמפרטורה</td><td>מערכת הדמיית</td><td></td><td></td>חיים</tr><tr><td>NaHCO3</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S5761</td><td></td></tr><tr><td>NH4Cl</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A9434</td><td></td></tr><tr><td>Nikon A1R מיקרוסקופ קונפוקלי</td><td>Nikon</td><td>A1R</td><td>מיקרוסקופ הפוך, שלב x/y/z ממונע, תוכנת אלמנטים</td></tr><tr><td>NIS PBS</td><td>Life Technologies</td><td>D8537</td><td></td></tr><tr><td>פנול אדום חינם DMEM/F12</td><td>Life Technologies</td><td>21041-025</td><td>כל מדיום נטול פנול אדום מתאים</td></tr><tr><td>PAM3CSK4</td><td>Invivogen</td><td>tlrl-pms</td><td>להרכיב מחדש בסרום PBS</td></tr><tr><td>עכברוש</td> טכנולוגיות <td></td><td>תאי גזע</td><td>הכלולות בערכת העשרת נויטרופילים של עכבר EasySep</td></tr><tr><td>צלחת תרבית רקמות 100</td><td>TPP</td><td>93100</td><td></td></tr></tbody></table>

הדמיה נויטרופילים ומונוציטים בmesenteric ורידים על ידי מיקרוסקופית intravital על עכברים מורדמים בזמן אמת

Imaging Neutrophils and Monocytes in Mesenteric Veins by Intravital Microscopy on Anaesthetized Mice in Real Time

תגובה חיסונית יעילה תלויה בגיוס מהיר של כדוריות דם לבנות בדם לאתר של זיהום או פציעה. חוקר הגירת יקוציט in vivo הוא חיוני להבנת הבסיס המולקולרי של הגירת Transendothelial יקוציט ואינטראקציה עם האנדותל של כלי דם. גישה רבת עוצמה אחד כרוכה מיקרוסקופיה intravital בעכברים הטרנסגניים לבטא חלבוני ניאון בתאים של עניין. כאן אנו מציגים פרוטוקול למונוציטים הדמיה ונויטרופילים בCX 3 iv עכבר CR1 GFP / WT הוזרק נויטרופילים שכותרתו צבע כתומים עם מיקרוסקופ confocal הפוך. זמן לשגות סרטים שנאספו מ -30 דקות לכמה שעות של הדמיה מאפשרים הניתוח של התנהגות יקוציט בעורקי mesenteric תחת שני תנאי המדינה ודלקתיים יציבים. אנו גם מתארים את הצעדים כדי לגרום לדלקת בכלי דם באופן מקומי עם TLR2 / TLR1 אגוניסט Pam3SK4 ולפקח על subsequeגיוס NT של נויטרופילים ומונוציטים. גם הטכניקה שהוצגה ניתן להשתמש כדי לעקוב אחר אוכלוסיות אחרות של לויקוציטים ולחקור מולקולות מעורבות בגיוס לויקוציטים או סחר באמצעות גירויים אחרים או עכברים מהונדסים.

כתב היד מתארת ​​פרוטוקול מותאם כדי לפקח על התנהגותם של מונוציטים ונויטרופילים בורידי mesenteric של עכברים מורדמים בזמן אמת בקלות. השימוש בתא thermostated-37 ° C הוא חובה כדי לשמור על הטמפרטורה של העכבר וגם בשל התנועה תלויה בטמפרטורה של לויקוציטים. הכנה של העכבר מוצגת באיור 1. איור 2 מציג את כל האזור ראה מתחת למיקרוסקופ. אור מועבר מאפשר זיהוי של ורידי mesenteric (חץ אדום) ועורקים (חץ כחול). טיפול ...

אנו מפרטים פרוטוקול לניטור התנהגותם של נויטרופילים ומונוציטים בוורידים מזנטריים במצב יציב ובתנאים דלקתיים באמצעות מיקרוסקופיה קונפוקלית תוך-חיונית בעכברים מורדמים.

הדמיה נויטרופילים ומונוציטים בmesenteric ורידים על ידי מיקרוסקופית Intravital על עכברים מורדמים בזמן אמת

Efficient immune response is dependent on rapid mobilization of blood leukocytes to the site of infection or injury. Investigating leukocyte migration in ...

המטרה הכללית של הליך מיקרוסקופיה קונפוקלית תוך-חי (intra vital) זה היא לנטר את הדינמיקה של נויטרופילים ומונוציטים בוורידים המזנטריים תחת תנאי מצב יציב ותנאי דלקת בעכברים. שיטה זו יכולה לסייע במתן תשובות לשאלות מפתח בתחום האימונולוגיה, כגון מהם הבסיסים המולקולריים של נדידת לוקוציטים, גיוסם והאינטראקציה שלהם עם האנדותל vasculaire. היתרונות העיקריים של טכניקה זו הם היכולת לעקוב ולנתח את הסיור של מונוציטים LY 60 low תחת תנאי מצב יציב, ולעקוב אחר הגיוס של מונוציטים ונויטרופילים לאותו כלי דם לאחר גירויים דלקתיים מקומיים. את ההליך יעדימ Stefan ler, הטכנאי מהמעבדה. כדי להכין תמיסת תאים בודדים ממחול השתיל, עקרו את הרגליים האחוריות של עכבר בן 8 עד 12 שבועות ב-70% ethanol, ולאחר מכן השתמשו בסכין מנתחים כדי לאסוף את ה-femurs וה-tibia לאחר שכל העצמות הופרדו.שטפו את הרגליים ב-90% ethanol והעבירו את העצמות לכלי תרבית מלא ב-PBS. לאחר מכן, תחת מנדף תרביות, השתמשו בסכין ניתוח (scalpel) כדי לנקות את ה-femurs וה-tibia ולהפריד ביניהם במפרק הברך. לאחר מכן, חתכו את קצוות העצמות והשתמשו במזרק של 1 milliliter הממולא במדיום הכנה ומצויד במחט gauge 23 כדי לשטוף את מחול השריד מכל עצם לתוך מבחנה קונית של 50 milliliter.שברו את צברי התאים על ידי העברתם שוב דרך קצה המחט, ולאחר מכן השלימו את הנפח הכולל של תרחיף התאים ל-25 milliliters באמצעות מצע הכנה טרי; מרכזו את התאים בצנטריפוגה ולאחר מכן השעיקו אותם מחדש. השעיקו את המשבכתיים (palate) ב-1 milliliter של בופר לליסיס של כדוריות דם אדומות, והעבירו את התאים לפקום קוני של 15 milliliter על קרח. לאחר 30 שניות, הפסיקו את הליסיס באמצעות 10 milliliters של מצע הכנה.סובבו שוב את התאים למטה ותלו את המשקע בשני מיליליטרים נוספים של מדיום הכנה כדי להעשיר את הנויטרופילים באמצעות ברירה שלילית. ראשית, דגרו את תאי מח העצם עם 150 microliters של תערובת העשרה לנויטרופילים של עכבר על קרח למשך 10 דקות.בסיום האינקובציה, הוסיפו 10 milliliters של dmem ללא פנול אדום. הפכו את המבחנה פעם אחת וסבבו במערך צנטריפוגה כדי להשקיע את התאים. השעיקו מחדש את המשקע ב-1.75 milliliters של מדיום הכנה, והעבירו את התאים למבחנה בעלת תחתית עגולה מפסטירן בנפח של חמישה מיליליטר.לאחר מכן, הדגרימו את התאים עם 250 µL של תערובת בחירה לביוטין (biotin selection cocktail) על קרח למשך 10 דקות. בסיום ההדגרה, השHעו את החלקיקים המגנטיים מערכה לבידוד תאים באמצעות ערבוב בוורטקס למשך 30 שניות. לאחר מכן, הדגרימו את התאים עם 500 µL מהחלקיקים על קרח למשך 10 דקות.בסיום הדגירה, הכנס את המבחנה למגנט. לאחר שלוש דקות, העבר את המגנט למבחנה חדשה בעלת תחתית עגולה מפוליסטירן בנפח five milliliter. כדי לאסוף את התאים שאינם מסומנים, הכנס את המבחנה עם התאים שאינם מסומנים למגנט.לאחר שלוש דקות, העבירו את המגנט לתוך מבחנה קונית של 15 מיליליטר כדי להעביר את התאים הבלתי מסומנים, והשאירו את הטיפה האחרונה במבחנה. לאחר מכן, השלימו את הנפח ל-5 מיליליליטר באמצעות dm טרי ללא פנול אדום. כעת, הוסיפו לתאים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס חצי מיקרוליטר של צבע ציטופלזמי מתאים, כגון cell tracker orange ששימש כאן.לאחר שתי דקות ב-37 °C, שטפו את התאים עם 2.5 milliliters של מצע הכנה והשעו מחדש את המשקע ב-1 milliliter של מצע הכנה בתוך מבחנה של 1.5 milliliter, ספרו את התאים ולאחר מכן דגרו אותם למשך חמש דקות ב-37 °C. לאחר סבב צנטריפוגה של התאים, השעו את המשקע ב-1 milliliter של PBS ולאחר מכן בצעו צנטריפוגה נוספת בזמן שהתאים מסתובבים. השתמשו בשמן כדי להצמיד כיסית זכוכית של 35 millimeter לצלחת תרבית רקמה של 10 centimeter עם חור בקוטר של 30 millimeter.לאחר מכן, השעו מחדש את המשקע בריכוז של 10⁷ תאים ל-100 µL של PBS והניחו את התאים על קרח מיד לאחר הסימון. החדירו את התאי הנוטרופילים המסומנים תוך-ורידית לעכבר CX3CR1-GFP בן 8 עד 12 שבועות תחת הרדמה, והניחו את העכבר על משטח חימום. לאחר מכן, מרחו מיד פומדה על עיני החיה והשתמשו במספריים כדי לפתוח את עור הבטן, כך שהפריטונאום ייחשף; חתכו את הפריטונאום עם המספריים כדי לחשוף את המעיים.לאחר מכן, הזרים 200 µL של PBS בטמפרטורה של 37 °C לחלל הפריטונאום והפנה את העכבר עם הפנים כלפי מטה מעל צלחת תרבית רקמה כדי להוציא את המעיים מחלל הפריטונאום באמצעות לחץ עדין. לאחר מכן, בעזרת מקלוני צמר sterile, גלול בזהירות את המעיים על גבי הזכוכית למטרת חשיפת כלי הדם המזנטריים, וקבע את הרקמה באמצעות פיסות נייר סופג רטובות ב-PBS בטמפרטורה של 37 °C כדי להפחית תנועות הנובעות מפריסטלטיקה. חשוב מאוד להקדיש את הזמן הדרוש כדי לקבע בזהירות את המעי באמצעות הרקמות הספוגות ב-PBS.אחרת, תנועות הנובעות מפעילות פריסטלטית במהלך רכישת התמונה יהרסו את הניסוי. לאחר מכן, העבירו את צלחת תרבית הרקמה ואת העכבר לתא תרמוסטט בטמפרטורה של 37 °C על במה ייעודית של מיקרוסקופ הפוך, ותנו מנה שנייה של חומרי הרדמה בהזרקה תוך-שרירית לרגל האחורית. כעת, הגדירו את הלייזרים המתאימים לעוצמה הנמוכה ביותר הדרושה כדי למנוע פוטו-טוקסיות מושרית לייזר, ואפשרו לעכבר לנוח במשך 30 דקות.לאחר שהבעל חיים התאושש, הקליטו את הסרטון הראשון למשך 30 דקות בתנאי מצב יציב. לאחר מכן, כדי להשרות דלקת בכלי הדם, טפטפו טיפה של 20 µL של PBS המכיל 100 µg של האגוניסט TLR two TLR one PAM three CSK four ישירות על כלי הדם המצולמים. לבסוף, רכשו סרטון שני תוך הקפדה על בקרת הפוקוס לאחר הוספת האגוניסט, שכן הדלקת גורמת לשינויים ברוחב האנדותל, ובכך משנה את הפוקוס של ציר ה-Z. כאן, השלבים השונים של עיבוד התמונה עבור נקודת הזמן הראשונה של סרטון שנרכש בתנאי מצב יציב, כפי שהודגם זה עתה, מוצגים בסרטון זה.ניתן להמחיש את הסיור של מונוציטים מסוג LASIK cilo ירוקים בתנאי מצב יציב (steady state) באמצעות נויטרופילים אדומים הנצפים במחזור הדם. כאן, אותו שדה עניין מוצג 90 דקות לאחר הוספת PAM three CSK four, מה שמוביל לגיוס מאסיבי של נויטרופילים ומונוציטים לדופן האנדותל, אותה המונוציטים סורקים בקפידה. באמצעות התוכנה המתאימה, ניתן לעקוב אחר הנתיבים המדויקים של המונוציטים והנויטרופילים המסיירים באנדותל לפני ואחרי תחילת הדלקת.חשוב לציין כי אובדן פוקוס בציר Z או סטייה במישורי XY עלולים להתרחש כתוצאה מתנועות מעיים המכשילות את הניסוי. ניתן לשנות טכניקה זו על ידי שימוש במודלים שונים של עכברים שעברו שינוי גנטי, או על ידי הזרקת נוגדנים חוסמים או תרופות פרמצבטיות, כדי לקבוע את תפקידם של מולקולות ספציפיות בעניין בהתנהגות הלוקוציטים. לאחר צפייה בסרטון זה, אמורה להיות לכם הבנה טובה של האופן שבו ניתן לנטר את הדינמיקה של לוקוציטים רוויים בוורידים המזנטריים.

imaging-neutrophils-monocytes-mesenteric-veins-intravital-microscopy

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

אנו מתארים פרוטוקול של מיקרוסקופיה brightfield intravital למדידת דינמי נויטרופילים-אנדותל האינטראקציות התא במהלך לגיוס נויטרופילים בתגובה מקור chemoattractant נויטרופילים in vivo. זחילה נויטרופילים intraluminal, הגירה chemotaxis transendothelial ו ברקמת השריר cremaster העכבר הם דמיינו עם הצילום בזמן שחלף וידאו מעקב עם ImageJ.

מעקב זחילה Intraluminal נויטרופילים, הגירה Chemotaxis Transendothelial ועל רקמות על ידי מיקרוסקופית וידאו Intravital

בסרטון זה, אנו מדגימים הדמיה בזמן אמת של אינטראקציות תאי דם-אנדותל בוורידים המזנטריאליים של מודל עכבר המוזרק תוך צפקית עם lipopolysaccharide.

מיקרוסקופ תוך חיוני לניתוח אינטראקציות תאי דם-אנדותל במודל עכבר דלקתי

כאן אנו מדווחים טכניקה ניסויית של מיקרוסקופיה intravital פלואורסצנטי לדמיין אינטראקציות heterotypic טסיות דם נויטרופילים על האנדותל הופעל במהלך דלקת כלי דם והיווצרות קרישים בעכברים חיים. טכנולוגיה מיקרוסקופית זה תהיה יקרה כדי לחקור את המנגנון המולקולרי של מחלת כלי דם ולבדוק סוכנים תרופתיים בתנאי pathophysiological.

הדמיה בזמן אמת של אינטראקציות heterotypic טסיות דם-נויטרופילים על האנדותל הופעל במהלך דלקת של כלי דם והיווצרות קרישים בעכברים חיים

יישום פשוט זה של מיקרוסקופיה תוך-חיונית של ורידי מזנטריה בעכברים יכול לשמש במודלים שונים של דלקת כדי לצפות באינטראקציות לויקוציטים-אנדותל וטסיות-לויקוציטים.

אינטראקציות מיקרוסקופית Intravital של יקוציט-האנדותל וטסיות דם-יקוציט בMesenterial ורידים בעכברים

פרוטוקול נוכחי זה משתמש במדווחים פלואורסצנטיים, תיוג in vivo וטכניקות הדמיה תוך-חיוניות כדי לאפשר ניטור של התהליך הדינמי של תחול נויטרופילים בבעלי חיים חיים.

הדמיה Intravital של Priming נויטרופילים שימוש IL-1β מונחה יזם עכברים Reporter DsRed

הפרוטוקול מתאר מודל חדש של תא חלון עצם הירך של עכברים שניתן להשתמש בו כדי לעקוב אחר תנועת תאים במח עצם הירך in vivo. מיקרוסקופיה פלואורסצנטית רב-פוטונית תוך-חיונית משמשת להדמיית שלושה מרכיבים של מח עצם הירך (כלי דם, מטריצת קולגן ונויטרופילים) לאורך זמן.

חלון ירך דגם קאמרי<em&gt; In vivo</em&gt; מעקב תא Murine מח עצם

ומונוציטים הם מתווכים חשובים של arteriogenesis בהקשר של מחלת עורקים היקפית. פרוטוקול זה באמצעות מטריקס קרום המרתף דמוי מיקרוסקופ intravital, חוקר אנגיוגנזה ביות ו הקשורות הגידול מונוציט לאחר ההזרקה מונוציט במודל מאתר מצדו בעורק הירך.

מיקרוסקופ intravital של יונת מונוציט, הקשורות הגידול אנגיוגנזה במודל מאתר של מחלת עורקים היקפית

אנו מתארים שיטה כדי להמחיש gfp γδ iels התווית באמצעות הדמיה intravital של המעי הדק מורטין על ידי מיקרוסקופית הפוכה דיסק מיקרוסקופ קונפוקלית. טכניקה זו מאפשרת מעקב של תאים חיים בתוך רירית עד 4 h והוא יכול לשמש כדי לחקור מגוון של אינטראקציות מעיים החיסונית-אפיתל.

אינטרטל הדמיה של לימפוציטים תוך-אפיתל במעי קטן מוריין

גיוס לויקוציטים וטסיות דם מהווה מרכיב חיוני הדרוש לצמיחה יעילה של עורקי בטחונות במהלך העורקים. מיקרוסקופ מולטיפוטון הוא כלי יעיל למעקב אחר דינמיקה של תאים עם רזולוציה מרחבית-טמפורלית גבוהה in vivo ופחות רעילות לאור לחקר גיוס לויקוציטים ואקסטרווסציה במהלך העורקים.

הדמיה תוך-חיונית מולטיפוטון לניטור גיוס לויקוציטים במהלך דלקת עורקים במודל מורין גפיים אחוריות

נדידת נויטרופילים מסתמכת על עיצוב מחדש מהיר ומתמשך של קרום הפלזמה בתגובה לכימואטרקנט והאינטראקציות שלו עם המיקרו-סביבה החוץ-תאית. מתואר כאן הליך המבוסס על מיקרוסקופ תת-תאי תוך תאי כדי לחקור את הדינמיקה של עיצוב מחדש של ממברנות בנויטרופילים המוזרקים לאוזן של עכברים מורדמים.

הדמיה של נדידת נויטרופילים בעור העכבר כדי לחקור עיצוב מחדש של קרום תת-תאי בתנאים פיזיולוגיים

פרוטוקול זה מציג שיטה לגרימת פגיעה באיסכמיה-רפרפוזיה מזנטרית ולהדמיית מלכודות נויטרופילים חוץ-תאיות (NETs) בוורידים מזנטריים באמצעות מיקרוסקופ תוך-חיוני. זרימת הדם בעורק המזנטרי העליון הוגבלה למשך שעה אחת, ואחריה רפרפוזיה, המאפשרת כימות ישיר של הידבקות לויקוציטים ו- NETosis.

הדמיה של מלכודות חוץ-תאיות נויטרופילים בוורידים מזנטריים לאחר פגיעה באיסכמיה-רפרפוזיה מזנטרית באמצעות מיקרוסקופ תוך חיוני

למד מיקרוסקופיה אינטרוויטלית לניטור נויטרופילים ומונוציטים בורידי המזנטריום בעכברים מורדמים. שיטה זו מאפשרת מעקב בזמן אמת אחר דינמיקת תאי דם לבנים בתנאי מצב יציב ודלקת.

הדמיה נויטרופילים ומונוציטים בmesenteric ורידים על ידי מיקרוסקופית Intravital על עכברים מורדמים בזמן אמת

גלה סרטונים נוספים