Name: כימות של גרורות סרטן השחלות תוך הצפק (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-07-18T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 58 s
Description: למד שיטה חדשנית לכימות גרורות סרטן השחלות תוך הצפק במודל עכברי באמצעות תאים מסומנים בחלבון פלואורסצנטי אדום. השיטה מסירה פלואורסצנציה עצמית של רקמות ומאפשרת מדידה מדויקת של עומס הגידול לניטור יעילות טיפולית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

מחקר זה נתמך על ידי מענקי מחקר RO1CA109545 ו-RO1CA086984 ל-MSS על ידי המכונים הלאומיים לבריאות/המכון הלאומי לסרטן ועל ידי פרס מקרן הצדקה ליאו ואן אלברט (ל-MSS).

כל המחקרים vivo ב אושרו על ידי האוניברסיטה של טיפול בבעלי חיים נוטרדאם ועדת שימוש והשתמשו עכברות C57 / BL6J. 1. תרבית תאים Murine סרטן השחלות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך את מדיום תרבית תאי סרטן שחלות murine ID8 כדלקמן: 1 ליטר של בינוני הנשר השונה של Dulbecco (DMEM) השלים עם 4% עובריים שור סרום (FBS), 1% פניצילין / סטרפטומיצין, 5 מיקרוגרם / אינסולין מיליליטר, 5 מיקרוגרם / מיליליטר transferrin ו 5 ng / ml נתרן סלניט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Transduce תאים סרטניים בשחלות murine ID8 13 לבטא חלבון פלואורסצנטי אדום (RFP) באמצעות חלקיקי lentiviral רכש מסחרי מבטאי RFP ועם סמן בחירה (blasticidin גן). שים לב חלבון פלואורסצנטי ירוק ניתן להשתמש, אבל מספק אותות הקרינה חלשה. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בסמוך לפני התמרה, תרבות תאים 50 - 70% מפגש ולהוסיף בינוני טרי (ללא פניצילין / סטרפטומיצין) הכולל 1 מיליליטר polybrene (5 מיקרוגרם / מיליליטר סופיריכוז). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעדינות פיפטה RFP-lentivirus (20 μl) dropwise לתוך צלחת לדגור על 37 מעלות צלסיוס למשך 72 שעות. הסר בינוני דגירה עם מדיום חדש למשך 24 שעות. להתחיל לבחור תאים transduced ידי הוספת blasticidin עד בינוני התרבות (5 מיקרוגרם / מ&quot;ל), ויעקוב אחרי התאים האדומים באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי (figure1). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תרבות התאים מתויג RFP במדיום ID8 ידי זריעה כ 10 6 תאים לתוך צלחת בתרבית רקמה באופן חזותי באמצעות ימי מיקרוסקופ אור עד monolayer התא הוא ומחוברות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר ומחוברות, למסוק את התאים באמצעות טריפסין (0.25%, 3 דקות) ולחזור הבקבוק אל האינקובטור 37 מעלות צלסיוס עד שהתאים מנותקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנטרל את טריפסין עם 6 מ&quot;ל של מדיום תרבות ID8 המכילה סרום. פיפטה מעלה ומטה כנגד בתחתית הצלחת, ולאחר מכן להעביר צינור חרוטי 15 מ&quot;ל. צנטריפוגה ב 1200 סל&quot;ד במשך 2 דקות, ולאחר מכן לשאוב את המדיום באמצעות GLפיפטה תחת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שוטפים את התאים עם בופר פוספט (PBS) על ידי resuspending בעדינות 6 מ&quot;ל PBS חם צנטריפוגה כמו 1.5 לעיל. Re- להשעות ב PBS לריכוז סופי של 5 x 10 6 תאים / מ&quot;ל. שמור את התאים חמים (37 מעלות צלסיוס) עד הזרקה. </li></ol> 2. תוך הצפק הזרקה של תאים ID8 בתחום ההדמיה vivo <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להזריק כל עכבר עם 2 מ&quot;ל של הפתרון ID8-PBS חם עבור סכום כולל של 10 מיליון תאים באמצעות הזרקה תוך הצפק (IP). אפשר תאים סרטניים לגדול in vivo במשך כ -10 שבועות עם הדמיה חייה מדי שבוע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מיד לאחר ההזרקה ובכל שבוע לאחר מכן, לשקול את העכברים ואז להרדים כל העכבר באמצעות isofluorane (קצב הזרימה של 2.5% ב 0.5 L / min O 2 זרימה). הערה: עכברים נשקלו, ולא כמדד כמותי של נטל הגידול, אלא מדד כללי יותר של התקדמות פיזית עכבר הפרט לאורך כל תקופת המחקר. עכברים לשקולts הושוו עם ערכים למשקל הקודם שלהם. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים עכברים על ידי הנחת בתא isofluorane. לשמור על הרדמה קבועה בזמן סריקה על ידי מיצוב ראש העכבר בחרוט האף לחשיפה isofluorane קצב זרימה 2.5% לאורך כל ההליך. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש קרם מקריח כדי להסיר את השיער על הגוף והבטן של כל עכבר, כמו השיער השחור יגרום הנחתה של אות הקרינה. עכברים שטופים במים חמים לאחר היישום של קרם המקריח מיובש עם מגבות נייר RT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעוד מורדם, לסרוק את כל הגוף של כל עכבר באמצעות מערכת דימות אופטי חיה קטנה. סרוק את כל העכברים במדגם בכל נקודת זמן. השתמש בפרוטוקול השני בשלב הבא (איור 2 א): <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשלב 1, להתבונן שכותרתו fluorescently (RFP) תאים סרטניים, לבצע רכישה multispectral לגבות סך של 5 תמונות באמצעות מסננים עירור של 440 ננומטר, 460 ננומטר, 480 ננומטר, 520 ננומטר ו -540 ננומטר, ואת מסנן פליטה של ​​600 ננומטר. השתמש פרמטרי רכישת הבאים: חשיפה רמה 15 שניות, 2 x 2 binning, FOV של 160 מ&quot;מ, f stop של 1.1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשלב 2, להתבונן על חית כולה, לרכוש תמונת החזרה באמצעות מסנן עירור פתוח (אור לבן), מסנן פליטה פתוח, חשיפה סטנדרטית של 0.2 שניות עם binning 2 x 2 ו FOV של 16 סנטימטר. שים לב: בפעם הדמיה בפועל הוא ~ 1 דק &#39;. </li></ol></li></ol> 3. עכבר Dissection ו Image Acquisition <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר הדמיה לחיות מראת הנוכחות של הצטברות תערוכה תוך הצפק מחלה או חיות נרחבות של מיימת (כפי שמעידים נפיחות בטנית), פסד או רווח של משקל גוף יותר מ -20%, עייפות או סימנים אחרים של מצוקה, להרדים כל עכבר באמצעות CO 2 הרדמה ואחריו נקע בצוואר הרחם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותכים את העור anteriorly לאורך קו האמצע הגחון של העכבר, באמצעות dissectio מחודדn מספרי, מהחלק העליון של הירכיים לתחתיות כלוב הצלעות. קח בזהירות רבה כדי לחתוך רק את שכבת העור (איור 2Bi). בעדינות להפריד את העור מרקמת הצפק, להיות בטוח שלא לנקב את קיר הבטן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת מספריים לנתיחה מחודדים, לחתוך רוחבי הוא בחלק התחתון של כלוב הצלעות והחלק העליון של הירכיים ליצור שני קפלי העור (איור 2 ב II, III). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניח כל עכבר בצד הגחון שלו (חלל הצפק פונה כלפי מטה) עם שולי העור ופתח ולסרוק כל עכבר עם מוסדותיה באתרו באמצעות מערכת דימות אופטי חיה הקטנה (איור 3 א &#39;, ב&#39;). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש באותו הפרמטרים רכישת תמונה כמתואר-2.4.2 2.4.1.. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המשך ביתור את העכבר על ידי לחילוץ איברים הצפק בודדים כולל כבד, omentum / לבלב, קיבה, סרעפת, מעי דק, מעי גס, שמאלה הצפק תקינים, שחלות, kidneys, לפדר ואת כרית השומן. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים לב, למנות, ולהקליט גידולים גלויים על כל איבר. השתמש קליפר למדוד את הקוטר של כל גידול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לייעד גידולים פחות מ -2 מ&quot;מ קוטר קטנים, בין 2 ו -5 מ&quot;מ כבינוני ו יותר מ -5 מ&quot;מימ כמו גדולים. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניח את האיברים על תבנית סריקת איבר (איור 4) שמזהה במיקום קבוע מראש עבור כל איבר. השתמש PBS לשמור על האיברים לחים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סרוק כל גיליון של איברים באמצעות מערכת דימות אופטי חיה הקטנה (איור 3 ג, ד). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש באותו הפרמטרים רכישת תמונה כמתואר בשלב 2.4. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר סריקה, איברי המקום בפורמלין 10% כדי לאפשר עיבוד עוקב עבור היסטולוגיה. </li></ol> כימות 4. נטל הגידול ב התמונות דואר קרינה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> על מנת להפחית את כמות קרינה אוטומטית בכל סריקת multispectral, ראשון unmix את הקבצים באמצעות תוכנה זמינה עם מערכת הדמית חיה הקטנה. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טען תחילה RFP: בקובץ ספקטרלי Vivo, ואחריו Autofluor: בתיק האדום Vivo בחלון תמונות צרוף ובחר Unmix. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לייצא את הקבצים .bip כמו 16 ביט .tiff (ללא שינוי) הפורמט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בתוכנת ImageJ (לשעבר vivo איברים ואז גוף העכבר המלא עם איברים באתרו). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש באפשרות קובץ&gt; פתיחה כדי לפתוח את קבצי .tiff 16 ביט של קבצי תבנית סריקת איבר ImageJ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תחת תמונה&gt; התאם&gt; הבהירות / ניגודיות, לבחור להגדיר את המינימום מוצג ערך ל -0 ואת המקסימום הוצג ערך 35,353 ולאחר מכן, תחתשולחנות תמונה&gt; בדיקה, בחרו רד הוט. הערה: מודלים של בעלי חיים שונים ידרשו רמות בהירות שונות, אך חשוב לשמור על הבהירות העקבית לאורך מחקר נתון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת כלי הבחירה Freehand, לצייר באזור צורה חופשית של מבחר עניין (ROI) סביב כל איבר ולהשתמש בכלי מדידה (CTRL + M) כדי לחשב את שטח הפנים של כל איבר; להקליט את שטח הפנים של כל איבר בגיליון אלקטרוני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עם ROI נמשך סביב כל איבר, קליק ימני בתוך ROI ובחר שכפלו לכלול רק האיבר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעוד אני מסתכל על האיבר היחיד, תחת תמונה&gt; התאם&gt; סף, לבחור כדי לקבוע את הסף של התמונה לרמת סף תחתונה של + 1200 רמת סף עליונה של + 1700 בחר only האזורים הכי בהיר קורנים ולבדוק כדי לבחור רקע כהה; ובחר אישור. הערה: התמונות עשויות לדרוש מניפולציה ידנית של מחווני סף ImageJ כך שהאזורים הבהירים בעבר נבחרו לשלב ניתוח, כפי שפורטה לעיל. מודלי מחלה שונים ידרשו מגבלות סף שונות, אך חשוב לשמור על רמות הסף אחידות בכל מחקר נתון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תחת לנתח&gt; לנתח חלקיקים, לשנות את גודל (פיקסלים ^ 2) עד 10-אינפיניטי, לבחור התכנית: מתאר, לבדוק כדי לבחור רק &quot;הצג תוצאות&quot; ולחץ על אישור כדי למדוד גם את תחומי וצפיפות משולבת הגלם של אזורים בהירים אלה, גידולים ייחשבו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רשום את הערכים של שטח פנים ואת הצפיפות המשולבת גלם של כל מבחר גידול המוצגים <sטרונג&gt; שולחן תוצאות באותו גיליון אלקטרוני המכיל את שטח פנים איברים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תחת לנתח&gt; כלים&gt; בר כיול, להוסיף סרגל מידת כיול לתמונות של האיברים. הערה: בדוגמה זו, זה נעשה על ידי שינוי מיקום עליון מימין, צבע המילוי השחור, צבע לייבל ווייט, מספר התוויות עד 5, עשרוני מקומות 0, גודל גופן 12 ואת זום פקטור ל -4.0 ולאפשר טקסט מודגש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תחת קובץ&gt; שמירה בשם ..., שמור את מונטאז בתור .TIFF וכן JPEG. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש באפשרות קובץ&gt; פתיחה כדי לפתוח את הקובץ בפורמט JPEG של האברים ולאחר מכן, תחת הוספה &lt;תיבת טקסט </strong&gt;, להוסיף תוויות איבר ידי יצירת תיבת טקסט מתחת לכל אחת משלוש שורות של איברים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש באפשרות קובץ&gt; פתיחה כדי לפתוח את כל 16 קבצי .tiff קצת סריקות הגוף המלאות ב ImageJ לפי סדר מספר עכבר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תחת תמונה&gt; התאם&gt; הבהירות / ניגודיות, לבחור להגדיר את המינימום מוצג ערך ל -0 ואת המקסימום הוצג ערך + 35,353 ולאחר מכן, תחת &#39;תמונה&#39;&gt; שולחנות בדיקה, בחרו רד הוט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תחת קובץ&gt; שמירה בשם ..., שמור את מונטאז &#39;בתור. Tiff וכן JPEG. </li></ol></li></ol> ניתוח 5. נתונים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מוסיף את אזורי בחירת גידול צפיפויות משולבות גלם, בהתאמה, עבור כל איבר של כל עכבר ולהקליט את אזור גידול איבר הכולל עבור כל עכבר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנרמל באזור הקליט integrat גלםערכי צפיפות ed עבור הגודל של כל איבר על ידי חלוקת שטח הגידול הכולל וערכי צפיפות משולבים הכוללים גלם על ידי שטח פן איבר המתאים (טבלת 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשב ולתכנן את הממוצע של שני אזורי משטח גידול המנורמלים ואת ערכי צפיפות המנורמלים גלם המשולב (איור 5 א &#39;, ב&#39;). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השוואת ערכים ממוצעים אלה לאלה שהושגו על ידי חזותית לספור את הגידולים שהיו גלויים לעין בלתי מזוינת במהלך הבדיקה של כל איבר עבור גרורות. </li></ol>

<ol><li>American Cancer Society. , Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.cancer.org/cancer/ovariancancer/overviewguide/ovarian-cancer-overview-key-statistics">http://www.cancer.org/cancer/ovariancancer/overviewguide/ovarian-cancer-overview-key-statistics</a> (2015).</li>
<li>Lengyel, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ovarian+cancer+development+and+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Ovarian cancer development and metastasis.</a> American Journal of Pathology. 177 (3), 1053-1064 (2010).</li>
<li>Halkia, E., Spiliotis, J., Sugarbaker, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnosis+and+management+of+peritoneal+metastases+from+ovarian+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology+Research+and+Practice%22%5BJournal%5D)">Diagnosis and management of peritoneal metastases from ovarian cancer.</a> Gastroenterology Research and Practice. 2012, 541842-541854 (2012).</li>
<li>Barbolina, M. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microenvironmental+regulation+of+ovarian+cancer+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Treatment+and+Research%22%5BJournal%5D)">Microenvironmental regulation of ovarian cancer metastasis.</a> Cancer Treatment and Research. 149, 319-334 (2009).</li>
<li>Lengyel, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+ovarian+cancer+experimental+models%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Epithelial ovarian cancer experimental models.</a> Oncogene. 33 (28), 3619-3633 (2014).</li>
<li>Harter, P., duBois, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+surgery+in+ovarian+cancer+with+special+emphasis+on+cytoreductive+surgery+for+recurrence%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Oncology%22%5BJournal%5D)">The role of surgery in ovarian cancer with special emphasis on cytoreductive surgery for recurrence.</a> Current Opinion in Oncology. 17 (5), 505-514 (2005).</li>
<li>Bristow, R. E., Puri, I., Chi, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytoreductive+surgery+for+recurrent+ovarian+cancer%3A+a+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Gynecologic+Oncology%22%5BJournal%5D)">Cytoreductive surgery for recurrent ovarian cancer: a meta-analysis.</a> Gynecologic Oncology. 112 (1), 265-274 (2009).</li>
<li>Hoffman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+of+metastatic+cancer+with+fluorescent+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+and+Differentiation%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging of metastatic cancer with fluorescent proteins.</a> Cell Death and Differentiation. 9, 786-789 (2002).</li>
<li>Sweeney, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualizing+the+kinetics+of+tumor-cell+clearance+in+living+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Science+USA%22%5BJournal%5D)">Visualizing the kinetics of tumor-cell clearance in living animals.</a> Proceedings of the National Academy of Science USA. 96, 12044-12049 (1999).</li>
<li>Chishima, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+invasion+and+micrometastasis+visualized+in+live+tissue+by+green+fluorescent+protein+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Cancer invasion and micrometastasis visualized in live tissue by green fluorescent protein expression.</a> Cancer Research. 57, 2042-2047 (1997).</li>
<li>Bouvet, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+optical+imaging+of+primary+tumor+growth+and+multiple+metastatic+events+in+a+pancreatic+cancer+orthotopic+model%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Real-time optical imaging of primary tumor growth and multiple metastatic events in a pancreatic cancer orthotopic model.</a> Cancer Research. 62, 1534-1540 (2002).</li>
<li>Hoffman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Multiples+Uses+of+Fluorescent+Proteins+to+Visualize+Cancer+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews%22%5BJournal%5D)">The Multiples Uses of Fluorescent Proteins to Visualize Cancer in vivo.</a> Nature Reviews. 5, 796-806 (2005).</li>
<li>Roby, K. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+syngeneic+mouse+model+for+events+related+to+ovarian+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Carcinogenesis%22%5BJournal%5D)">Development of a syngeneic mouse model for events related to ovarian cancer.</a> Carcinogenesis. 21 (4), 585-591 (2000).</li>
<li>Rampurwala, M., Ravoori, M. K., Wei, W., Johnson, V. E., Vikram, R., Kundra, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualization+and+quantification+of+intraperitoneal+tumors+by+in+vivo+computed+tomography+using+negative+contrast+enhancement+strategy+in+a+mouse+model+of+ovarian+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Translational+Oncology%22%5BJournal%5D)">Visualization and quantification of intraperitoneal tumors by in vivo computed tomography using negative contrast enhancement strategy in a mouse model of ovarian cancer.</a> Translational Oncology. 2 (2), 96-106 (2009).</li>
<li>Kim, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antitumor+and+antivascular+effects+of+AVE8062+in+ovarian+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Antitumor and antivascular effects of AVE8062 in ovarian carcinoma.</a> Cancer Research. 67, 9337-9345 (2007).</li>
<li>Picchio, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advanced+ovarian+carcinoma%3A+usefulness+of+%5B%2818%29F%5DFDG-PET+in+combination+with+CT+for+lesion+detection+after+primary+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Quarterly+Journal+of+Nuclear+Medicine%22%5BJournal%5D)">Advanced ovarian carcinoma: usefulness of [(18)F]FDG-PET in combination with CT for lesion detection after primary treatment.</a> Quarterly Journal of Nuclear Medicine. 47, 77-84 (2003).</li>
</ol>

מאמר זה הוא חלק של גיליון מיוחד בנושא מולטימודליות טרום קליני הדמיה, בחסות Bruker Biospin.

בניגוד למחקרים באמצעות תאי סרטן שחלות אדם חייב להתנהל בעכברי immunocompromised, הפרוטוקול המתואר לעיל מנצל מערכת חיסון תקין עכברי C57 / BL6 ותאי סרטן שחלות murine syngeneic. אמנם זה מאפשר הערכה של פוטנציאל התפקיד של מחלחל חיסוני התקדמות גידול וגרור, הנוכחות של שיער כהה על פני שטח הבטן הופכת הדמיה פחות רגישה. שימוש מקריח להסיר שיער לפני ההדמיה משפרת רכישת תמונה, אבל היא גוזלת זמן, במיוחד עבור ניסויים הדורשים הדמיה אורכת. &#39;עירום&#39; עכברים חסרי שיער ניתן להשתמש בפרוטוקול זה ואי...

סרטן שחלות אפיתל (EOC) הוא הגורם השכיח ביותר למוות ממאיר גינקולוגיות, עם אבחנות חדשות 21,290 המשוער בארה&quot;ב בשנת 2015 ו 1 14,180 מקרי מוות. הרוב המכריע (&gt; 75%) של נשים מאובחנים עם מחלה בשלב מאוחר (שלב III או IV) מאופיין גרורות תוך הצפק מפוזרות פרוגנוזה גרועה. ישנות מחל חלל הצפק בעקבות כימותרפיה כקו הראשון הן גם נפוצות ומייצג אחד גורמים עיקריים של 2,3 תמותה. EOC גרורה ידי מנגנון ייחודי המעורבים הוא המשך ישיר מן הגידול הראשוני לאיברים הצפק שכנות כמו גם על ידי ניתוק או שפיכת התאים מפני שטח גידול הראשוני כמו תאים בודדים או אגרגטים רבים תאיים. תאים הם לשפוך לתוך חלל הצפק, שבה הם להתנגד הנגרמת ניתוק אפופטוזיס 4. הצטברות של מיימת הצפק שכיחה, כפי תאים סרטניים לשפוך לחסום ניקוז לימפטי הצפק tumors לייצר גורמי גדילה אשר משנים חדירות כלי הדם. חלק של תאים סרטניים לשפוך לצרף אל פני השטח של איברים הצפק ומבנים כולל המעי, הכבד, omentum ו לפדר, ואז הם לעגן מתרבים כדי לייצר נגעים משניים מרובים לתפוצה רחבה 3,5. גרורות Hematogenous הן נדירות. לפיכך, ניהול קליני מורכב בדרך של ניתוח cytoreductive כולל &quot;debulking אופטימלי&quot;, המוגדר כריתה של כל הגידול גלוי (לא משנה כמה קטן). Cytoreduction השלם קשור לעלייה משמעותית בהישרדות הכוללת 6,7 והיא קשורה עם האתגר של זיהוי והסרה של נגעים &lt;0.5 סנטימטר. במודלים של בעלי חיים קטנים הוכיחו שירות במחקר סרטן השחלות בשיפור ההבנה שלנו של התקדמות מחלה וכן יש להציג תעודת מזהה של סמנים פרוגנוסטיים ובדיקה של תרופות רומן או גישות טיפול משולב. ככל העיקריהאתר של שכיחות סרטן השחלות גרורות הוא חלל הצפק, מודלים orthotopic של גרורות EOC כרוך בניתוח ואפיון של המחלה intraperitoneal. למרות חלו שיפורים אחרונים ביכולת תאים סרטני תמונה, אפילו ברמה של התא הבודד, עדיין קיימים קשיים משמעותיים בכימות ניטל גידול גרורתי של EOC. אתגרים אלה נובעים בשל מספר, גודל ומיקום אנטומי של גרורות. יתר על כן קיים צורך לתאי סרטן התווית כדי להבדילם תאי מארחים נורמלים. מחקרים קודמים מנוצלים פרוטוקולי תיוג מבוסס נוגדן או transfection של תאים סרטניים עם 8,9 בלוציפראז. תיוג פלורסנט ישיר של תאים סרטניים דווח לראשונה על ידי Chishima ועמיתים לעבודה בשנת 1997 10. תוויות פלורסנט אינן דורשות תוספת של מצע אקסוגניים ולספק סגולי תאים סרטניים מעודן, מתן אמצעים יעילים יותר כדי לעקוב אחר גרורות סרטן 11,12 </sup&gt;. בזאת אנו מתארים שיטת הדמיה אופטית ניתוח כמותי של מחלה גרורתית באמצעות מודל xenograft orthotopic syngeneic המורכב חלבון פלואורסצנטי אדום (RFP) -tagged בתאי סרטן שחלות murine ID8 13 ועכברים חיסוני המוסמכות C57 / BL6. אנו מדגימים שיטה חדשה של כימות נטל הגידול היחסי שילוב in vivo לשעבר vivo הדמיה עם הסרת פלואורסצנציה אוטומטי רקמות. לגישה הזאת יש פוטנציאל השירות במחקרים שנועדו להעריך את ההשפעה של שינויים ספציפיים גנטיים, אפיגנטיים או מיקרו-סביבתיים ו / או שיטות טיפול על גרורות איבר ספציפי של סרטן השחלות.

<table><tbody><tr><td>Dulbecco's Modified Eagle Medium</td><td>Corning</td><td>10-014-CM</td><td></td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי</td><td>Gibco</td><td>10437-028</td><td></td></tr><tr><td>פניצילין/סטרפטומיצין</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>תוסף מדיה אינסולין-טרנספרין-נתרן סלניט</td><td>Sigma</td><td>I-1884</td><td></td></tr><tr><td>Bruker Xtreme מערכת הדמיה לבעלי חיים קטנים</td><td>Bruker Corp.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>תוכנת Bruker Multispectral</td><td>Bruker Corp</td><td></td><td></td></tr><tr><td>חלקיקים לנטי-ויראליים עם חלבון פלואורסצנטי אדום</td><td>GenTarget, Inc.</td><td>LVP023</td><td></td></tr><tr><td>טריפסין לתרבית תאים</td><td>קורנינג</td><td>25-053-CI</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td> קרם אפילציה <td>קורנינג</td><td>21-040-CM</td><td></td></tr><tr><td>(כגון קרם מסיר שיער נאיר)</td><td>רכישות מבית מרקחת&nbsp;</td>תוכנת ImageJ <td>לא ישים</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td>http://imagej.nih.gov/ij/&nbsp;</td><td></td><td>להורדה חינם</td></tr><tr><td>כלי ניתוח (מלקחיים)</td><td>מכשיר כירורגי רובוז</td><td>&nbsp; כלי ניתוח RS 5130</td><td></td></tr><tr><td>(מספריים)</td><td>מכשיר כירורגי Roboz</td><td>RS 5910</td><td></td></tr></tbody></table>

כימות של גרורות סרטן השחלות תוך הצפק

Quantitation of Intra-peritoneal Ovarian Cancer Metastasis

סרטן שחלות אפיתל (EOC) הוא גורם המוות המוביל מממאירות גינקולוגית בארצות הברית. התמותה נובעת מאבחון של 75% מהנשים עם מחלה בשלב מאוחר, כאשר גרורות כבר קיימות. EOC מאופיין בגרורות תוך-צפקיות מפוזרות ומפוזרות באופן נרחב. תאים נושרים מעוגן הגידול הראשוני במזותל המצפה את חלל הצפק כמו גם באומנטום, וכתוצאה מכך גרורות רב-מוקדיות, לעתים קרובות בנוכחות מיימת צפקית. המאמצים במעבדה שלנו מכוונים להבנה מפורטת יותר של הגורמים המווסתים את הצלחת EOC גרורתית. עם זאת, כימות עומס הגידול הגרורתי מהווה אתגר טכני משמעותי בשל המספר הגדול, הגודל הקטן והפיזור הרחב של הנגעים ברחבי הצפק. כאן אנו מתארים שיטה לניתוח גרורות EOC באמצעות תאים המסומנים בחלבון פלואורסצנטי אדום (RFP) יחד עם הדמיה מולטי-ספקטרלית in vivo. לאחר הזרקה תוך-צפקית של תאי גידול המסומנים ב-RFP, עכברים מצולמים מדי שבוע עד למועד ההקרבה. בשלב זה, חלל הצפק נחשף בניתוח ואיברים מצולמים באתרם. לאחר מכן איברים מנותחים מונחים על תבנית שקופה מסומנת ומצולמים ex vivo. הסרת אוטו-פלואורסצנטיות של רקמות במהלך עיבוד תמונה באמצעות פירוק מולטי-ספקטרלי מאפשרת כימות מדויק של עומס הגידול היחסי. לשיטה זו יש תועלת במגוון יישומים, כולל מחקרים טיפוליים להערכת תרכובות שעלולות לעכב גרורות ובכך לשפר את ההישרדות הכוללת.

המנגנון גרורתי של סרטן השחלות מאופיין גרורות תוך הצפק מפוזרים מאוד מורכבות נגעים רבים בגדלים שונים, כולל מספר קטן (&lt;2 מ&quot;מ) נגעים. לפיכך, השימוש של תאים סרטניים שכותרתו RFP (איור 1) ו דימות אופטי מספק שיטה חלופית כדי ספירה ידנית ומדידה של גודל הנגע. התפתחות נטל הגידול לאורך זמן ניתן לקבוע על ידי שקילה שבועית של עכברים ומדידה של ההקף הבטן כדי לאמוד הימצאות אפשרית של מיימת. דימות אופטי בשנת vivo מספק גישה משלימה להערי...

גרורות סרטן השחלות מאופיינת בנגעים תוך-צפקיים מפוזרים רבים, כך שכימות חזותי מדויק של עומס הגידול הוא מאתגר. כאן אנו מתארים שיטה לכימות במקום ומחוץ לגוף של עומס גידול גרורתי באמצעות תאי גידול עם חלבון פלואורסצנטי אדום (RFP) והדמיה אופטית.

Epithelial ovarian cancer (EOC) is the leading cause of death from gynecologic malignancy in the United States.  Mortality is due to diagnosis of 75% of ...

המטרה הכללית של ניסוי זה היא לקבוע את נטל הגידול היחסי של גרורות סרטן השחלה בתוך הפריטונאום במודל עכברי של השתלה קסנוגרפטית אורתוטופית סינגנאית. שיטה חדשנית זו להדמיה וכימות של נטל גידול יחסי יכולה לסייע לנו במתן תשובות לשאלות מפתח בבקרת גרורות של סרטן השחלה. היתרון הבסיסי של טכניקה זו הוא שעל ידי הפרדה (un-mixing) של ספקטרומים פלואורסצנטיים, האוטופלואורסצנציה של הרקמה מוסרת מהתמונות, מה שמאפשר מדידה של נטל גידול יחסי וסטנדרטי.טכניקה זו מספקת תובנות לגבי גרורות של סרטן השחלה בבני אדם, עם השלכות על ניטור יעילותן של תרופות. הדגמה ויזואלית של שיטה זו היא קריטית, כיוון שאנו משלבים טכניקת דימות חזקה עם הליך אנליטי להפקת נתונים כמותיים מהתמונות. מי שתדגים את ההליך היום היא Yueying Liu, מנהלת התוכנית במעבדת Stack Lab.לאחר 10 שבועות של צמיחת תאי גידול, העבירו את גופם של העכברים המורדמים, אחד אחד, למערכת דימוי אופטי לבעלי חיים קטנים. סרקו את כל העכברים בקבוחה בכל נקודת זמן. כדי לצפות בתאי גידול מסומנים פלורוצנטית, בצעו רכישה מולטי-ספקטרלית (multi-spectral acquisition) כדי לאסוף סך הכל חמישה תמונות.בחר זמן חשיפה סטנדרטי של 15 שניות, בינינג (binning) של שתיים על שתיים, שדה ראייה של 16 סנטימטרים ומספר צמצם (F stop) של 1.1. לאחר מכן, רכוש תמונת רפלקטנציה של החיה כולה באמצעות אור לבן ממסנן עירור

quantitation-of-intra-peritoneal-ovarian-cancer-metastasis

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

Assay אישור mesothelial המתוארת כאן מנצלת את התאים שכותרתו fluorescently ואת זמן לשגות מיקרוסקופיה וידאו להמחיש כמותית למדוד את יחסי הגומלין של סרטן השחלות spheroids תאיים ו monolayers התא mesothelial. Assay מתווך זה מדגים את השלבים המוקדמים של גרורות סרטן השחלות.

ב Assay עמילות חוץ גופית mesothelial כי מודלים השלבים המוקדמים של גרורות סרטן השחלות

בסרטון זה אנו מדגימים פיתוח מודל תלת מימדי במבחנה של רירית חלל הצפק. תרבית אורגנוטיפית זו יכולה לסייע בחקירת הידבקות תאי סרטן השחלות, פלישה והתפשטות.

מידול גרורות סרטן השחלות ברירית חלל הצפק: שיטה להקמת מודל תלת ממדי במבחנה של רירית הצפק

פלישת תאי סרטן השחלות לmesothelial הבטנה של הצפק היא תהליך דינמי לאורך זמן. ניצול מנתח בזמן אמת, את היכולת פולשני של תאי סרטן שחלות במודל תא שיתוף תרבות אליפטית-mesothelial ניתן לכמת על פני תקופות זמן ממושכות, המספקת תובנות גורמים המסדירים את התהליך גרורתי.

הערכה של קובץ מצורף סרטן השחלות אליפטית ופלישה של תאי mesothelial בזמן אמת

אנו מתארים פלטפורמת הדמיה לא פולשנית של בעלי חיים המאפשרת זיהוי, כימות וניטור של צמיחה והישנות של סרטן השחלות. מודל קסנוגרפט תוך-צפקי זה מחקה את הפרופיל הקליני של חולות עם סרטן השחלות.

דגם Murine הדמיה בלתי פולשנית לזיהוי ומעקב סרטן השחלות הישנות

אנו מתארים פרוטוקול המיישם גישות in vivo ו-ex vivo לחקר קולוניזציה של סרטן השחלות ברקמות השומן הצפקיות, במיוחד האומנטום. יתר על כן, אנו מציגים פרוטוקול לכימות וניתוח מבני תאים חיסוניים באומנטום המכונים כתמים חלביים, המקדמים גרורות של שומן צפק.

In vivo לשעבר vivo גישות לחקר סרטן השחלות גרורתי התיישבות של מבני ספוט החלב בהצפק שומני

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לבניית מודל תלת מימדי במבחנה של רירית חלל הצפק, המורכב מתאי מזותל אנושיים ראשוניים ופיברובלסטים בשכבות עם מטריצה חוץ-תאית, ככלי לחקירת הדבקה, פלישה והתפשטות של תאי סרטן השחלות.

דוגמנות השלבים המוקדמים של סרטן השחלות הפצה בתרבות Organotypic של אדם חלל הבטן

כדי להבהיר את תהליך רב שלבי של הפצת הצפק של קרצינומה השחלות, המחקר הנוכחי מציג מודל ניסיוני בעכברים של התפתחות גידולים המקורי וגרורות הצפק באמצעות חיסון orthotopic עם תאים סרטניים אלה.

Murine ניסיוני דגם של התפתחות גידולים מקורית גרור הצפק<em&gt; דרך</em&gt; Orthotopic הרכבה עם קרצינומה של תאי השחלות

סרטן השחלות טפסים גרורות לאורך כל חלל הצפק. כאן, אנו מציגים פרוטוקול כדי להפוך, שימוש חומצה פולית-קולטן ממוקד תהודה משופרת משטח nanoprobes פיזור ראמאן לגלות נגעים עם ירידה לפרטים גבוהה באמצעות הדמיה רציומטרי. Nanoprobes מנוהלים intraperitoneally חי לעכברים, הדימויים נגזר לתאם עם היסטולוגיה.

ראמאן תהודה משופרת השטח פיזור Nanoprobe Ratiometry לגילוי סרטן השחלות מיקרוסקופיים באמצעות חומצה פולית קולטן מיקוד

פרוטוקול זה מתאר את הקמתו של מודל אקס ויו תלת-ממדי (3D) של אינטראקציה בין תאים סרטניים ל-omentum. המודל מספק פלטפורמה להבהרת מנגנונים מעודדי גידול בתוך נישת השומן ולבדיקת טיפולים חדשניים.

מודל Ex Vivo של סרטן השחלות גרורות פריטוניאליות באמצעות Omentum אנושי

כאן אנו מציגים פרוטוקול שלב אחר שלב לקביעת מודלים תוך-פריטוניאליים ותוך-בורסליים לחקר התקדמות סרטן השחלה, מטסאציס ותגובה טיפולית. בנוסף, אנו מתארים כיצד להשתמש בהדמיה לא פולשנית מבוססת לוסיפראז במודלים אלו כדי לעקוב אחר התקדמות הגידול בעכבר.

מודלים קלינית רלוונטיים להשתלה של גידולים לחקר סרטן שחלות גרורתי ותגובה טיפולית בעכברים

למד שיטה חדשנית לכימות גרורות סרטן השחלות תוך הצפק במודל עכברי באמצעות תאים מסומנים בחלבון פלואורסצנטי אדום. השיטה מסירה פלואורסצנציה עצמית של רקמות ומאפשרת מדידה מדויקת של עומס הגידול לניטור יעילות טיפולית.

כימות של גרורות סרטן השחלות תוך הצפק

גלה סרטונים נוספים