Name: סינתזה של nanofiber קראטין מבוסס על הנדסה ביו רפואית (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-02-07T15:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 43 s
Description: חקור את שיטת האלקטרוספינינג לסינתזת ננופיברים מבוססי קראטין ליישומים ביו-רפואיים. שיטה זו תומכת בריפוי פצעים, הנדסת רקמות ושחרור תרופות ביעילות ובעלות נמוכה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מבקשים להודות הקרן הלאומית למדע דרך מרכז מחקר הנדסי Biomaterials מהפכה מתכתיים (ERC-0,812,348) וחינוך לתואר ראשון ננוטכנולוגיה (EEC 1,242,139) בבקשה שישתתף במימון.

כל הפרוטוקול אחרי קווים מנחים של A צפון קרוליינה &amp; T סטייט משרד מחקר התאימות והאתיקה. 1. הכנת מזון לחומרי קראטין הפקת 4 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להכין 1,000 מ&quot;ל של 2% wt / כרך פתרון חומצה peracetic (PAS), תחת במנדף להוסיף 20 מ&quot;ל של חומצה peracetic כדי 980 מ&quot;ל של Deionized (DI) מים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להכין 1,000 מ&quot;ל של 100 פתרון בסיס מ&quot;מ טריס (TBS), להוסיף 12.2 גרם של טריס בסיס 1,000 מ&quot;ל מים DI ומערבבים עד שהיא נמסה לחלוטין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כן פתרון חומצה הידרוכלורית מדולל (DHAS) במנדף ידי שפיכת 4 מיליליטר של חומצה הידרוכלורית מרוכזת לתוך 30 מ&quot;ל מי DI. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לרכוש כ 20 גרם של קטעי שיער אדם שלא טופלו או שינו כימיים. שיער יכול להיות בכל אורך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שטפו את השיער ביסודיות, ביד, עם מים חמים וסבון. השתמש ללא יונים (DI) מים עבור השטיפה הסופית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים את השיער לשני 600 מ&quot;ל כוסות ומכניסים o 80 ºCven עבור שעה 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מסננים את הנוזל מתחתית הכוס ומניחים ומחזירים לתנור עד שיער יבש לחלוטין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פרד יבשי שיער באופן שווה בין 600 מיליליטר הכוסות, הצבת 10 גרם של השיער לתוך כל כוס. אל תאפשר את השיער כדי למלא יותר מ -500 מ&quot;ל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יוצקים 500 מ&quot;ל של PAS לתוך כל כוס והקפד לכסות את כל השיער. מכסה את הכוסות עם parafilm ולאחסן למשך 12 שעות. </li></ol> 2. הכנת פתרון חלץ קראטין <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפרד את השיער מן PAS באמצעות מסננת 500 מיקרומטר. אסוף את PAS פסולת במיכל נפרד. יש לשטוף את השיער היטב במים DI להסיר כל PAS שאריות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את השיער שטפה בבקבוק 500 מ&quot;ל. יוצקים 400 מ&quot;ל של TBS לתוך הבקבוק, ולוודא כי השיער מכוסה. בקבוק מקום באמבט רועד המוגדר 38 ºC, 65 סל&quot;ד במשך שעה 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחרי שעה 1, להסיר מן רעד אמבטיה ויוצקים את הנוזל, כ 400 מ&quot;ל של תמיסת מיצוי קרטין (KES), אניn כדי מבחנה 1,000 מ&quot;ל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יוצקים 400 מ&quot;ל מים DI לתוך הבקבוק המכיל את השיער על מנת להבטיח כי השיער מכוסה ומניחים לאחור באמבטיה רעד במשך שעה 1. הסר את הבקבוק מהאמבטיה הרועדת ויוצק את 400 מיליליטר הנותר של KES לתוך כוס 1,000 מיליליטר עם KES גבה. השיער אינו נחוץ עוד וניתן זרקה מתוך הבקבוק וזנוח ב למיכל האשפה הקרוב. </li></ol> 3. ריכוז של פתרון חלץ קראטין <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מלאו אמבטיה rotodistiller לשורה העליונה עם מים מזוקקים ולהגדיר עד 90 ºC. סיבוב גדר מהיר 200 סל&quot;ד. הפעל ילר-משאבת קירור ומוגדר -10 ºC. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות מד pH לפקח על pH של KES, להשתמש פיפטה להוסיף באיטיות 1 מ&quot;מ DHAS אל KES עד להגעה pH 7.0. מערבבים לאט כפתרון מתווסף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יוצקים את KES לנטרל לתוך הבקבוק 500 מ&quot;ל מסביב לתחתית עד כרבע מלא. הפעל את המזקק פי יצרןפרוטוקול עבור 1.25 שעות. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלב 3.3 עד שכל KES כבר מזוקק. ודא כי את הבקבוק מחובר בחוזקה. </li></ol></li></ol> 4. דיאליזה של פתרון חלץ קראטין <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יוצקים פתרון KES שווה ל -12 צינורות חרוטי 14 מ&quot;ל נפרד. צנטריפוגה צינורות ב 1,050 XG במשך 10 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יוצק את KES centrifuged לתוך מבחנה נקיה, מוודא לשפוך מן הפסולת שנאספה. חזור על הפעולה עד כל KES כבר centrifuged. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ממלאי 2,000 מיליליטר סיים גליל עם מים די. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותכי קרום תאי צינורות דיאליזה עד 24 אינץ &#39;, קליפ קצה אחד של צינור להחזיק אותו בחוזקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טובל את האורך של צינור בצילינדר של מים די כדי להפוך אותו ליותר גמיש קל יותר לפתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתח את הקצה שאינו גזומה של קרום התאי צינורות דיאליזה ולאט לאט לשפוך 60 מיליליטר של תמיסת KES centrifuged לתוך צינורות. השתמש קליפ אחר להיסגר בסוף זה של הצינור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים את diצינור alysis בצילינדר 2,000 מ&quot;ל מים DI ולאפשר לשבת במשך 24 שעות. להחליף את המים DI בצילינדר בכל שעה 3 עד 4. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר תקופה של 24 שעות, רוקן את הפתרון KES dialyzed לצנצנות כתרים, להיות בטוח להשאיר מקום בחלק העליון ומניחים במקפיא ב -20 ° C למשך 24 שעות. </li></ol> 5. Lyophilization של פתרון חלץ קראטין <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדר את lyophilizer כדי -86 ºC. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את צנצנות ובהן קפוא KES מהמקפיא, לקחת את הפקקים של צנצנות, ולהכניס אותם לתוך אמפולות מייבש ההקפאה. מניחים את החותמות על אמפולות סובבו את הכפתור יוצר לחץ ואקום של 0.133 mbar. Lyophilize דגימות במשך כ -48 שעות, עד שכל הלחות נעלם. </li></ol> 6. הכנת פתרונות Electrospinning (10% WT פתרון קראטין) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את אבקת קראטין מן lyophilizer ולשקול אותו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מוסיפים מים DI אל אבקת קראטין ליצור משקל 10% משקל /פתרון קראטין. </li></ol> 7. הכנת פתרון 10% wt PCL <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השג PCL (פולימר ε-caprolactone, Mn 70 - 90 KDA), ו trifluoroethanol (TFE). כן 10% לפי משקל PCL ב TFE ידי ערבוב O / N ולקבל תערובת הומוגנית. </li></ol> הכנת 8. פתרון קראטין / PCL <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השג את הפתרון PCL 10% WT הכין בעבר ו -10% WT פתרון קרטין. להוסיף קרטין לתוך ירידת פתרון PCL חכם על מנת ליצור 10 מיליליטר PCL / פתרונות קרטין של 90:10, 80:20, 70:30, ו 60:40 יחסים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש vortexer כדי לקבל תערובת הומוגנית של פתרון PCL / קראטין לפני electrospinning. </li></ol> הפקת 9. electrospun PCL / סיבי קרטין <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניח כ -8 מיליליטר של פתרון PCL / קראטין מזרק 10 מיליליטר פנוי מצויד עם צינור פלסטיק בקוטר 0.5 מ&quot;מ. יש להכניס את המזרק ב משאבת מזרק שבו קצב הזרימה מוגדר להיות 2.5 מ&quot;ל / שעה. </li><li&lt;החלת מתח אל קצה המחט מחובר בצינור (ממוצבת ~ 23 סנטימטר מן הסיבים איסוף תוף, ו ~ 30 מעלות יחסית למשטח אופקי). החלת 19 - מתח kV 22 אל צינור וסובבתי את תוף האספן בסביבות 200 סל&quot;ד. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עוטפים את תוף אספן ברדיד אלומיניום לפני הפעלת המדגם. ודא כי רדיד האלומיניום הוא יציב על ידי יישום סרט התיוג על קצוות. הערה: הסיבים יהוו על נייר האלומיניום (ראה איור 2), לאחסן את הרדיד מכוסה סיבים ב RT. </li></ol></li></ol> 10. ניתוח מכני של PCL / nanofibers קראטין <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותכים את מדגם לתוך 60 מ&quot;מ 8 מ&quot;מ. הקפד לרשום את העובי באמצעות מיקרומטר דיגיטלי. עבור כל רכב המוכן, השתמש חמש דגימות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צרף את 60 x 8 מ&quot;מ מדגם הבוחן המתיח. השתמש בעל דגימה אישי מעוצב לצרף המדגם. סנדוויץ מדגם בין מחזיקי דגימה אשר עשוי כרטיס אינדקס באמצעות לחיצה כפולהקלטת צדדית. החל התא 10 N עומס עם שיעור עקירה של 10 מ&quot;מ / דקה. הערה: בעל הדגימה נועד להיות 62 מ&quot;מ על 40 מ&quot;מ עם חלון פנימי של 50 מ&quot;מ על 38 מ&quot;מ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רחבת שיא וערכים טעינה באמצעות תוכנה על פי פרוטוקול תוכנה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חישוב מתח על ידי חלוקת הכח לפי תחומי מדגם הבדיקה. לאחר מכן, לחשב זן ידי חלוקת השינוי באורך ידי אורך ראשוני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צור את עקומת המתח מתח ידי התוויית מתח ציר y עבור מקביל ערך מתח ציר x. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חשב את מודול יאנג מאזור ליניארי שבו שיפוע שווה ל מודולוס האלסטיות. לקבוע חוזק מתיחת מהחלקה המתח מתח על ידי לקיחת 0.2% לקזז לכאביה ציור קו מקביל בעקום באזור ליניארי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע ניתוח הסטטיסטי של הנתונים המכאניים שהושגו בשלושה עותקים באמצעות בעבר ניתוח חד סטרי שונה באמצעות ניתוח תוכנה 8. ערכי p &lt;0.05 לנומחדש נחשב משמעותי מבחינה סטטיסטית. </li></ol> 11. משטח אפיון המורפולוגיה מבני <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמשו במיקרוסקופ אלקטרונים סורק (SEM) עם הפרמטרים של מאיץ מתח של 15 קילו וולט וזרם של 5 מיקרו-אמפר כדי לבחון את המורפולוגיה של סיבים electrospun. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני הדמיה עם SEM, לחתוך קטע 2 2 ס&quot;מ של סיבים וצרף אותו שלב SEM באמצעות קלטת נחושת. מניחים את הבמה בתוך coater גמגום ואת המעיל עם זהב ב 15 mA דקות 1 ו -30 שניות כדי ליצור שכבת זהב כ 11 ננומטר עבה. טענת מדגם לתוך התא של SEM. שימו לב דגימות סיבים. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש ספקטרוסקופיית פורייה (FTIR) לאפיין את הקשר הכימי בין PCL ו קרטין. מניחים את סעיף 2 ס&quot;מ 2 של קרום nanofiber electrospun בבעל מגנטי ולטהר את המערכת עם אוויר יבש לפני הבדיקה. השג ספקטרום עבור 200 סריקות ולנתח את הספקטרום באמצעות STAתוכנת ndard פי פרוטוקול תוכנה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביצוע ניתוח ספקטרום באמצעות תוכנה סטנדרטית ולהשתמש triplicates של כל יחס של nanofiber פי פרוטוקול של היצרן. </li></ol> לימוד 12. של אינטראקציה תא-סיבים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותכים סיביים לתוך 16 מ&quot;מ 2 דוגמאות. השתמש דבק ביולוגי, סיליקון מבוסס לתקן כל דגימה כדי coverslips בקוטר 12 מ&quot;מ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מדביקי קצה אחד של מדגם הסיבים לחלק אחורי של להחליק את המכסה, לעטוף את המדגם ברחבי coverslip, ואז מדביק את הקצה החופשי של מדגם לחלק אחורי של להחליק את המכסה, כמו גם, ומשאיר את העליונים של פליטת מכוסה רק מדגם סיבים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את דגימות סיבים בצלחת 24 גם. לעקר את הדגימות על ידי טבילה באתנול 80% במשך שעה 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שוטפים את אתנול מן דגימות באמצעות מים די. ואז, פיפטה 2 מ&quot;ל של מדיום הבסיס על דגימות, והקפד לכסות המדגם. הסר בינוני לאחר 5 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש פיברובלסטים 3תאי T3 לזרוע את דגימות סיבים. להשעות את התאים במדיום של הנשר שונה של Dulbecco (DMEM) השלימו עם אנטיביוטיקה ו -10% בסרום שור העובר (FBS), כך ישנם כ 62,000 תאים / 2 ס&quot;מ לכל 1 מ&quot;ל של DMEM. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זרוק 1 מ&quot;ל של הפתרון 3T3 התא המכיל DMEM לתוך כל צלחת היטב להבטיח כי כל דגימה סיבים מכוסה כ 62,000 תאים / 2 ס&quot;מ. דגירה היטב צלחות עבור 24 שעות ב 37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2. הערה: השתמש 5% CO 2 כי רמת שבדרך כלל יכול לשמור על pH של התקשורת תא בטווח הפיזיולוגי במשך ימים. </li></ol> ביזוי 13. של מטריקס nanofiber <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Cut יבשים PCL / ממברנות nanofiber קרטין לתוך הכיכר כ 30 מ&quot;מ x 30 מ&quot;מ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעקר את 900 מ&quot;מ 2 דוגמאות עם אלכוהול 80% עבור תקופת דגירה 10 דקות ולשטוף היטב במים DI. דגירה דגימות ב 15 מ&quot;ל של PBS, pH 7.5, ב 37 ºC. החזר את bufFER כל 3 ימים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קח את ממברנות מתוך הפתרון בפרקי זמן מוגדרים, 1 שבוע 7 שבועות, ולשטוף עם מים די. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את דגימות הממברנה לתוך אמפולות מייבש ההקפאה. מניחים את החותמות על אמפולות סובבו את הכפתור כדי ליצור ואקום. Lyophilize למשך 24 שעות, עד שהחומר מתייבש לגמרי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צרף המדגם המיובש זה לשלב SEM באמצעות קלטת נחושת. מניחים את הבמה בתוך coater גמגום ואת המעיל עם זהב ב 15 mA דקות 1 ו -30 שניות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טענת מדגם לתוך התא של SEM. שימו לב דגימות סיבים לעבר מתח מאיץ של 1.5 קילו וולט ו -5 הנוכחי מיקרו-אמפר. </li></ol>

<ol><li>Huang, Z. -M., Zhang, Y. Z., Kotaki, M., Ramakrishna, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+on+polymer+nanofibers+by+electrospinning+and+their+applications+in+nanocomposites%5BTitle%5D)+AND+%22Compos+Sci+Technol%22%5BJournal%5D)">A review on polymer nanofibers by electrospinning and their applications in nanocomposites.</a> Compos Sci Technol. 63, (2003).</li>
<li>Li, W. J., Laurencin, C. T., Caterson, E. J., Tuan, R. S., Ko, F. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrospun+nanofibrous+structure%3A+a+novel+scaffold+for+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Mater+Res%22%5BJournal%5D)">Electrospun nanofibrous structure: a novel scaffold for tissue engineering.</a> J Biomed Mater Res. 60, 613-621 (2002).</li>
<li>Liu, W., Thomopoulos, S., Xia, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrospun+nanofibers+for+regenerative+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Healthc+Mater%22%5BJournal%5D)">Electrospun nanofibers for regenerative medicine.</a> Adv Healthc Mater. 1, 10-25 (2012).</li>
<li>Edwards, A., Jarvis, D., Hopkins, T., Pixley, S., Bhattarai, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Poly%28-caprolactone%29%2Fkeratin-based+composite+nanofibers+for+biomedical+applications%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Mater+Res+B%22%5BJournal%5D)">Poly(-caprolactone)/keratin-based composite nanofibers for biomedical applications.</a> J Biomed Mater Res B. 103, 21-30 (2015).</li>
<li>Dowling, L. M., Crewther, W. G., Parry, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Secondary+structure+of+component+8c-1+of+alpha-keratin.+An+analysis+of+the+amino+acid+sequence%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+J%22%5BJournal%5D)">Secondary structure of component 8c-1 of alpha-keratin. An analysis of the amino acid sequence.</a> Biochem J. 236, 705-712 (1986).</li>
<li>Yamauchi, K., Maniwa, M., Mori, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cultivation+of+fibroblast+cells+on+keratin-coated+substrata%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomat+Sci-Polymer%22%5BJournal%5D)">Cultivation of fibroblast cells on keratin-coated substrata.</a> J Biomat Sci-Polymer. 9, 259-270 (1998).</li>
<li>Shea, L. D., Wang, D., Franceschi, R. T., Mooney, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineered+Bone+Development+from+a+Pre-Osteoblast+Cell+Line+on+Three-Dimensional+Scaffolds%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+E%22%5BJournal%5D)">Engineered Bone Development from a Pre-Osteoblast Cell Line on Three-Dimensional Scaffolds.</a> Tissue E. 6, 605-617 (2000).</li>
<li>Fortin, M. -J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+Biological+Software%5BTitle%5D)+AND+%22Q+Rev+Biol%22%5BJournal%5D)">New Biological Software.</a> Q Rev Biol. 71, 169-170 (1996).</li>
<li>Bhattarai, N., Edmondson, D., Veiseh, O., Matsen, F. A., Zhang, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrospun+chitosan-based+nanofibers+and+their+cellular+compatibility%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Electrospun chitosan-based nanofibers and their cellular compatibility.</a> Biomaterials. 26, 6176-6184 (2005).</li>
<li>Yang, S., Leong, K. F., Du, Z., Chua, C. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+design+of+scaffolds+for+use+in+tissue+engineering.+Part+I.+Traditional+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+E%22%5BJournal%5D)">The design of scaffolds for use in tissue engineering. Part I. Traditional factors.</a> Tissue E. 7, 679-689 (2001).</li>
<li>Bhattarai, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Natural-Synthetic+Polyblend+Nanofibers+for+Biomedical+Applications%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Mater%22%5BJournal%5D)">Natural-Synthetic Polyblend Nanofibers for Biomedical Applications.</a> Adv Mater. 21, 2792-2797 (2009).</li>
</ol>

החוקרים מצהירים כי אין להם אינטרסים כלכליים מתחרים.

הפקת קרטין מ שערת אדם הושגה בהצלחה. החומצה peracetic פעל כסוכן חמצון על שיער אדם, המאפשר קרטין להיעקר ידי טריס הבסיס. הפקת אבקת קראטין היה בקנה מידה קטן בשל העובדה שהדבר נעשה רק למטרות מחקר. הליך זה כבר הוקמה בשנת בתעשייה עבור ייצור בקנה מידה גדול. מטרת חילוץ קרטין בקנה המידה הקטנה הייתה לשלוט זיהום, השתנות יצוו, וחסכנות. מיצוי קרטין הוא צעד ההגבלה של הליך זה. התשואה של אבקת קראטין היא נמוכה מאוד, 0.7 - 2%. 20g ש...

Electrospinning מוכרת כשיטה נפוצה להשגת nanofibers פולימר. הסיבים יכולים להיות מיוצרים על ננו ואת מאפייני הסיבים ניתנים להתאמה אישי 1. התפתחויות אלה ואת המאפיינים של nanofibers electrospun יכולים להיות מעניינות במיוחד עבור יישומים שלהם בהנדסה ביו-רפואי במיוחד בהנדסת רקמות. Nanofibers electrospun להחזיק דמיון לחומר הבין-תאי ובכך לקדם את הידבקות תאים, נדידה ושגשוגם 2. בשל הדמיון הזה לחומר הבין-תאי (ECM), ניתן להשתמש סיבי electrospun כחומריים לסייע הלבשת פצע, אספקת סמים, ועל רקמות הנדסה כגון כבד, עצם, לב, שריר 3. מגוון של פולימרים שונים ממוצא הסינטטי וטבעי שמש ליצירת סיבי electrospun עבור יישומי הנדסה ביו שונה 4. לאחרונה יש כבר גדל בterest בפיתוח nanofibers מרוכבים על ידי ערבוב סינתטי 4 פולימרים טבעיים. בקומפוזיציות אלה המוצרים הסופיים בדרך כלל לרשת את חוזק המכנים הקשורים הפולימר הסינטטי תוך אימוץ רמזים ביולוגיים ומאפיינים מן הפולימר הטבעי. בניסוי זה, PCL ו קרטין מוצגים כמו פולימרים סינתטיים וטבעיים לשמש לסינתזה של nanofiber מרוכבים. קראטין הוא פולימר טבעי שנמצא שיער, צמר ומסמרים. יש בו הרבה שאריות חומצת אמינו; עניין ראוי לציון הוא ציסטאין 4,5. באופן אידיאלי פולימר טבעי יהיה biorenewable, ביולוגי מתכלה. קראטין הוא בעל כל שלושת המאפיינים הללו תוך שיפור תא התפשטות מצורף אל biomaterials זה כבר שולבו ב 6. Polycaprolactone (PCL) הוא פולימר resorbable, סינתטי שהיא משמעותיתהנדסת 4 רקמות. פולימר זה כבר שבח בעבר את היציבות מבנית המכאנית שלה, לעומת זאת, היא חסרה זיקת תא מניבה שיעור שפלה ממושכת. האופי ההידרופובי של PCL אחראי סביר על חוסר תא זיקה 7. עם זאת, PCL מפצה על מגבלותיו ידי להיות בליל מאוד עם פולימרים אחרים. צירוף PCL / קרטין צריך להדגים את התכונות המכאניות של PCL ולשלב את התכונות הביולוגיות של קרטין, מה שהופך אותו לבחירה אידיאלית עבור יישומים ביו שונים.

<table><tbody><tr><td>שיער אנושי&nbsp;</td><td></td><td></td><td>מתקבל ממספרה מקומית בגרינסבורו</td></tr><tr><td>חומצה פראצטית</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PCL (פולימר קפרולקטון)</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>502-44-3</td><td>Mn 70-90 kDa</td></tr><tr><td>טריפלואורואתנול (TFE)</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>75-89-8</td><td></td></tr><tr><td>טריס בסיס (אבקת בסיס TrizmaTM)</td><td>סיגמא אולדריץ</td><td></td>'<td>>99.9% גבישי</td></tr><tr><td>חומצה הידרוכלורית</td><td>פישר מדעית</td><td>A144C-212 לוט 093601</td><td>וולת'ם, MA</td></tr><tr><td>Kwik-Sil</td><td>מכשירי דיוק</td><td></td> עולמיים <td>סרסוטה, פלורידה</td></tr><tr><td>קרום תאית</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td></td><td>12 - 14 kDa מיקרוסקופ אופטי חתוך מולקולרי</td></tr><tr><td></td><td>אולימפוס BX51M</td><td>BX51M</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ אלקטרונים סורק</td><td>יפן היטאצ'י SU8000</td><td>SU8000</td><td></td></tr><tr><td>מכונת Shimadzu שולחנית</td><td>ביפן בצפון אמריקה מכשירי ניתוח ומדידה סדרת AGS-X</td><td>סדרת AGS-X&nbsp;</td><td>קולומביה, מרילנד</td></tr><tr><td>ספקטרוסקופיה אינפרא אדום טרנספורמציה פורייה</td><td>Bruker Tensor 2 מכשיר&nbsp;</td><td></td><td>Billerica, MA</td></tr><tr><td>Microcal Origin Software</td><td></td><td></td><td>Northampton, MA</td></tr><tr><td>עקיפה של קרני רנטגן (XRD)</td><td>Bruker AXS D8 Advance X-ray Diffractometer</td><td></td><td>Madison, WI</td></tr><tr><td>Fibroblast 3T3&nbsp;</td><td>תא American Tissue Type Culture Collection</td><td></td><td>Manassas,</td></tr><tr><td>מדיום הנשר השונה של VA Dulbecco (DMEM</td><td>Invitrogen</td><td></td><td>Grand Island, NY</td></tr><tr><td>Spectra max Gemini XPS microplate reader</td><td>מכשירים</td><td></td> מולקולריים <td>Sunnyvale, CA</td></tr><tr><td>סטודנט- ניומן-Keuls מבחן פוסט הוק</td><td>תוכנת</td><td></td><td></td> SigmaPlot 12</tr></tbody></table>

סינתזה של nanofiber קראטין מבוסס על הנדסה ביו רפואית

Synthesis of Keratin-based Nanofiber for Biomedical Engineering

Electrospinning, בגלל הרבגוניות ואת הפוטנציאל שלה עבור יישומים בתחומים שונים, נמצא בשימוש לעתים קרובות כדי לפברק nanofibers. הפקה של nanofibers הנקבובי אלה היא עניין רב בשל מאפיינים הייחודיים שלהם physiochemical. כאן נפרט על ייצור של קרטין המכיל פולי (ε-caprolactone) (PCL) nanofibers (כלומר, PCL / סיבים מרוכבים קרטין). קרטין נמס במים הופק הראשון שיער אדם מהול PCL ביחסים שונים. הפתרון מעורבב של PCL / קרטין הפך ממברנות nanofibrous באמצעות electrospinning תוכנן מעבדה להגדיר. מורפולוגיה סיבים תכונות מכניות של nanofiber השיג נצפו ונמדדו באמצעות מיקרוסקופ אלקטרונים סורק בודק מתיחה. יתר על כן, נכסים פריקים והכימיים של nanofiber נחקרו על ידי FTIR. תמונות SEM הראו מורפולוגיה משטח אחידה עבור סיבי PCL / קרטין של קומפוזיציות שונות. אלה PCL / keratiסיבי n גם הראו תכונות מצוינות מכנות כגון נקודת מודולוס וכישלון של יאנג. תאים פיברובלסטים הצליחו לצרף מתרבים ובכך להוכיח כדאיות התא טוב. בהתבסס על מאפייני שנדונו לעיל, אנו יכולים לטעון בתוקף כי nanofibers מעורבב של פולימרים טבעיים וסינתטיים יכול לייצג פיתוח מעולה של חומרים מרוכבים, שניתן להשתמש בהם עבור יישומים ביו שונים.

מורפולוגיה סיבים תמונות SEM של הסיבים התקבלו עבור כל קומפוזיציות הסיבים. ראה איור 3. תמונת סיבים מאשרת כי סיבים מכוונים באופן אקראי. בדיקות מכאניות סיבים חזקים מבחינה מכאנית נדרשים בדרך כלל עבור יישומי הנדסת רקמות שונות. סיבים אלו צריכים לשמור על חוזק וגמישות מספיק תחת לחץ מס...

nanofibers electrospun יש שטח פנים גבוה יחס משקל, שלמות מכנים מעולה, ולתמוך גדילת תא תפוצה. יש nanofibers אלה מגוון רחב של יישומים ביו. כאן אנו לפברק nanofibers קרטין / PCL, באמצעות טכניקה electrospinning, ולאפיין את סיבי עבור יישומים אפשריים בהנדסת רקמות.

Electrospinning, due to its versatility and potential for applications in various fields, is being frequently used to fabricate nanofibers. Production of ...

המטרה הכללית של ניסוי זה היא לסנתז ולאפיין ננו-סיבים מבוססי קרטין ליישומים ביו-רפואיים. שיטה זו יכולה לסייע במתן מענה לשאלות מפתח בתחום ההנדסה הביו-רפואית, כגון ריפוי פצעים, הולכת תרופות ורקמות מהונדסות, כגון כבד, עצם ושריר. היתרון המרכזי של טכניקה זו הוא שהיא זולה, יעילה וניתנת לשדרוג לייצור בקנה מידה גדול.השלכות טכניקה זו משתרעות על טיפול בפצעים והחדרה של תרופות לצורך התחדשות רקמות. למרות ששיטה זו יכולה לספק תובנות לגבי היתרונות שבשימוש בננו-סיבים שנוצרו באמצעות אלקטרוספינינג (electrospun nanofibers), ניתן להחילה אותה גם על מערכות אחרות, כגון התחדשות רקמות. באופן כללי, אנשים שאינם מורגלים בשיטה זו עשויים להיתקל בקשיים, שכן קשה להכין חומר פולימרי המסוגל להפיק ננו-סיבים.השיגו כ-20 גרם של גזי שיער אנושי שלא עברו טיפול כימי או שינוי. השיער יכול להיות בכל אורך. שטפו את השיער היטב ביד עם מים חמימים וסבון.השתמשו במים דה-יוניים לשטיפה הסופית. העבירו את השיער לשתי כוס כימיות של 600 מיליליטר והניחו בתנור בטמפרטורה של 80 מעלות צלזיוס למשך שעה אחת. לאחר הייבוש, חלקו את השיער היבש באופן שווה בין הכוסות כימיות של 600 מיליליטר, כך שייכנסו 10 גרם שיער לכל כוס.אין לאפשר לשיער למלא יותר מ-500 milliliters. לאחר מכן, שפכו 500 milliliters של תמיסת חומצה פראצטית, או PAS, לתוך כל כלי שיקוף, תוך כדי וידוא שכל השיער מכוסה. כסו את כלי השיקוף ב-Parafilm ואחסנו למשך 12 שעות.הפרידו את השערות מה-PAS באמצעות נפה של 500 micron, ואספו את ה-PAS השאר כפסולת למכל נפרד. שטפו את השערות היטב במים דה-יוניזציה כדי להסיר שאריות PAS. לאחר הנחת השערות השטופות בבקראך של 500 milliliter, שפכו לבקראך 400 milliliters של תמיסת Tris Base בריכוז 100 millimolar, או TBS, וודאו שהשערות מכוסות.לאחר מכן, הניחו את הבקראק בבן מרחץ רועד המכוון ל-38 °C, במהירות של 65 RPM, למשך שעה אחת. לאחר שעה, הוציאו את הבקראק מהבן המרחץ. שפכו את הנוזל, שהוואי כ-400 milliliters של תמיסת מיצוי קרטין, או KES, לתוך כלי שיעור של 1000 milliliters.שפכו 400 milliliters של מים דה-יוניים לתוך הבקבוק המכיל את השערה, וודאו שהשערה מכוסה לפני החזרת הבקבוק לאמבט הרעידה למשך שעה אחת. הוציאו את הבקבוק מאמבט הרעידה ושפכו את 400 milliliters הנותרים של ה-KES לתוך כוס המדידה בנפח 1000 milliliter עם ה-KES שנאסף קודם לכן. אין יותר צורך בשערה וניתן להשליכה לפח האשפה הקרוב ביותר.לאחר ניטרול ה-KES שנאסף כפי שמתואר בפרוטוקול הטקסט, שפכו את התמיסה לבקבוק תחתית עגולה בנפח 500 מיליליטר עד למילוי של כרבע מהנפח. הפעילו את המזקקה בהתאם לפרוטוקול היצרן למשך 1.25 שעות, תוך וידוא שהבקבוק מחובר בצורה הדוקה. חזרו על תהליך זה עד שכל ה-KES יזוקק.שפכו את תמיסת ה-KES המזוקקת באופן שווה ל-12 מבחנות קוניות נפרדות בנפח 14 מיליליטר. סובבו את המבחנות בצנטריפוגה במהירות של 1,050 ×g למשך 10 דקות. שפכו את ה-KES שנצנטרף לכלי ביקר נקי, תוך הקפדה למזוג הרחק מהשקיעים שנאספו.חזרו על הפעולה עד שכל ה-KES יסתיים לעבור צנטריפוגה. לאחר מכן, גזרו ממברנת תאית של צינור דיאליזה לאורך 24 אינץ' וסגרו קצה אחד של הצינור באמצעות תליב כדי להחזיקו סגור. פתחו את הקצה הלא סגור של ממברנת התאית של צינור הדיאליזה ושפכו לאט 60 milliliters של תמיסת KES שעברה צנטריפוגה לתוך הצינור.השתמשו בתסבך נוסף כדי לסגור את הקצה הזה של הפרוג. הניחו את נבובת הדיאליזה בתוך משבור של 2,000 מיליליטר של מים דה-יוניים והשאירו אותה שם למשך 24 שעות, תוך החלפת המים הדה-יוניים במשבור בכל שלוש עד ארבע שעות. לאחר מכן, רוקנו את תמיסת ה-KES שעברה דיאליזה אל תוך צנצנות סגורות, והקפידו להשאיר מרווח בחלק העליון.הניחו את הצנצנות הסגורות במקפיא בטמפרטורה של 20- מעלות צלזיוס למשך 24 שעות. לאחר תקופת ההקפאה של 24 שעות, הסירו את המכסים מהצנצנות והעבירו את התוכן לאמפולות של מייבש הקפאה. הרכיבו את האטמים על האמפולות וסובבו את הכפתור כדי ליצור לחץ ואקום של 0.133 millibar.בצעו ליופיליזציה לדגימות למשך כ-48 שעות עד להסרה מלאה של כל הלחות. הכינו תמיסת PCL keratin על ידי הוספה של תמיסת keratin בריכוז 10% לתמיסת PCL בריכוז 10% בטיפות, כדי ליצור תמיסות בנפח של 10 מיליליטר עם יחסי PCL ל-Keratin של 90 ל-10, 80 ל-20, 70 ל-30 ו-60 ל-40. העבירו כ-8 מיליליטר מהתמיסה של PCL/keratin שעברה ערבוב בוורטקס למזרק חד-פעמי של 10 מיליליטר, המחובר לצינור פלסטיק בעובי 0.5 מילימטר.מקמו את המזרק במשאבת מזרקים שבה קצב הזרימה מוגדר ל-2.5 milliliters per hour. הגשילו מתח לקצה המחט המחוברת לצינור. הפעילו מתח של 19 עד 22 kilovolt על הצינור וסובבו את תוף האיסוף במהירות של כ-200 RPM.גזרו את הסיבים לדגימות בגודל 16 מילימטר רבוע. השתמשו בדבק ביו-תואם על בסיס סיליקון כדי לקבע כל דגימה לזכוכית כיסוי בעלת קוטר של 12 מילימטר. הדביקו קצה אחד של דגימת הסיב לגב זכוכית הכיסוי ועטפו את הדגימה סביב זכוכית הכיסוי.לאחר מכן, הדביקו גם את הקצה החופשי של הדגימה לגב זכוכית הכסייה, כך שחלקו העליון של הנסיון יהיה מכוסה רק על ידי דגימת הסיב. הניחו את דגימות הסיב בפלטה בעלת 24 בארות. סטריליזציה של הדגימות תתבצע על ידי טבילה ב-80% ethanol למשך שעה אחת.שטפו את האתנול מהדגימות באמצעות מים דאיונזיים. לאחר מכן, העבירו בפיפט 2 milliliters של מצע בסיס על הדגימות, תוך הבטחה שכל הדגימה תהיה מכוסה למשך חמש דקות. השתמשו בתאי fibroblast 3T3 לזריעת דגימות הסיבים.סספנדו את התאים ב-DMEM, בתוספת אנטיביוטיקה ו-10% fetal bovine serum, כך שיהיו כ-62,000 תאים לסנטימטר רבוע לכל מיליליטר אחד של DMEM. טפטפו מיליליטר אחד של תמיסת ה-DMEM המכילה תאי 3T3 לכל באר בלוח הבארות, תוך הבטחה שכל דגימת סיב מכוסה בכ-62,000 תאים לסנטימטר רבוע. דגרו את לוחות הבארות למשך 24 שעות בטמפרטורה של 37 degrees Celsius ו-5% carbon dioxide.לאחר חיתוך ממбраנות ננו-סיבי PCL/keratin מיובשות, יש לעקר את הדגימות בגודל 900 ריבוע מילימטר באמצעות 80% alcohol למשך תקופת דגירה של 10 דקות. לאחר מכן, יש לשטוף את הממברנות ביסודיות במים דה-יוניים. לאחר מכן, דגרו את הדגימות ב-15 milliliters של PBS, pH 7.5, בטמפרטורה של 37 degrees Celsius, והחליפו את התמימות מדי שלושה ימים.הוציאו את הממברנות מהתמיסה במרווחי זמן שצוינו של שבוע אחד ושבעה שבועות. שטפו במים דה-יוניזציה. העבירו את דגימות הממברנה לאמפולות של מייבש קיפאון.הניחו את האטמים על האמפולות צרו ואקום כדי לבצע ליופיליזציה לדגימות למשך 24 שעות עד לייבוש מלא. לאחר מכן, הצמידו את הדגימה המיובשת לשלב של מיקרוסקופ אלקטרונים סורק (SEM) באמצעות סרט נחושת. הניחו את השלב בתוך מכשיר הציפוי (sputter coater) וצפו בזהב בזרם של 15 milliamps למשך דקה ו-30 שניות.הטעינו את הדגימה לתא של ה-SEM. בחנו את דגימות הסיבים במתח האצה של 1.5 kilovolts ובזרם של חמישה microamps. מוצגות כאן תמונות מייצגות של ננו-סיבים מבוססי PCL/keratin שהופקו בהצלחה בשיטת אלקטרוספינינג מתמיסות עם יחסי PCL/kertain של 70 ל-30, 80 ל-20 ו-90 ל-10.נמצא כי לסיבים שהופקו באלקטרוספינינג יש מודול יאנג קרוב לזה של הרקמה הטבעית. מודולי היאנג פחתו עם עלייה ביחס הקרטין. האיור מציג מגמה גרפית של שינוי במודול היאנג לעומת יחס ה-PCL/keratin.ספקטרומי ספקטרוסקופיית פורייה אינפרא-אדום (FTIR) המוצגים כאן מאשרים את ההיקשרות של PCL לקרטין. השיא המרכזי, שנמדד ב-1,722 סנטימטרים הפוכים, תואם למדידות הבסיס הסטנדרטיות של פס הבליעה של PCL ונראה בכל הספקטרומים. היצמדות תאים והתרבות תאים על סיבי ה-PCL keratin מאשרים כי הסיבים אינם רעילים ומספקים תמיכה לצמיחת תאים.צמיחת הפילופודיה לאורך הננו-סיבים מעידה על אינטראקציה חיובית בין הפיברובלסטים לבין סיבי ה-PCL/keratin. לאחר רכישת המיומנות, ניתן לבצע טכניקה זו של סינתזת ננו-סיבים תוך 24 שעות, במידה שהיא מבוצעת כהלכה. בעת ביצוע תהליך האלקטרוספינינג, חשוב לזכור את צמיגות תמיסת הפולימר, קצב זרימת התמיסה, המתח המופעל, מהירות התוף המסתובב ואת השלבים לתרבית תאי פיברובלסטים.לאחר צפייה בסרטון זה, תרכשו הבנה טובה לגבי האופן שבו מסנתזים ננו-סיבים מבוססי PCL/keratin וחשיבותם בתחום ההנדסה הביו-רפואית. בעקבות פרוצדורה זו, ניתן לבצע שיטות נוספות, כגון בדיקות חיוניות תאים ובדיקות פירוק in vivo, כדי לענות על שאלות נוספות בנוגע לתגובת רעילות לרקמה, צמיחת רקמות ופירוק הסיבים. לאחר פיתוחה, סללה טכניקה זו את הדרך עבור חוקרים בתחום ההנדסה הרגנרטיבית לחקור תחומים כגון התחדשות עור, ריפוי פצעים והולכת תרופות.אל תשכחו כי עבודה עם ממסים אורגניים, כגון TFE, ומתחים גבוהים עלולה להיות מסוכנת ביותר, ויש לנקוט תמיד באמצעי זהירות בעת ביצוע הליך זה, כגון הרכבת משקפי מגן, חלוקי מעבדה וכפפות, ופינוי נאות של הממסים.

synthesis-of-keratin-based-nanofiber-for-biomedical-engineering

Research

JoVE Journal

Bioengineering

הנדסה ביולוגית

גישה יעילה להכנת nanofibers מעוטר בקבוצות המסוגלים אינטראקציה ספציפית עם חלבונים תפקודיות מתוארת. הגישה דורשת 1 הכנת פולימרים פונקציונליים עם הקבוצה הפונקציונלית המתאימה. הפולימרים הפונקציונליים הם מפוברקים לnanofibers ידי electrospinning. היעילות של הכריכה של nanofibers עם חלבון ונלמדת על ידי מיקרוסקופיה confocal.

הליך לבודת Nanofibers Biofunctional

פיגומים Electrospun יכול להיות מעובד הייצור עבור יישומים הנדסת רקמות. כאן אנו מתארים שיטות ספינינג פיגומים מורכבים (על ידי ספינינג רצופים), להכנת פיגומים עבים יותר (על ידי שכבות רב באמצעות אדי חום או חישול), להשגת עקרות (ייצור מזוהם או פירסום הייצור עיקור) ו להשגת תכונות ביומכניים המתאימים.

Postproduction עיבוד Fibres Electrospun עבור הנדסת רקמות

שיטה להשיג nanofibers וננו המורכב מחלבונים מטריצת חוץ תאיים בודדים או מרובים מתוארת. שיטה זו משתמשת באינטראקציות חלבון פני השטח כדי ליצור חומרים המבוססים על חלבונים חופשיים עומדים עם הרכב מתכונן וארכיטקטורה לשימוש במגוון רחב של יישומי הנדסה וביוטכנולוגיה רקמות.

Nanofibers חלבון ECM ועצרת ביוזמת פני שטח באמצעות ננו תכנון הנדסי

סינתזה וייצור של סיבי electrospun ארוכים המשתרעים על שטח גדול יותר הפקדה באמצעות אספן חדש תוכנן מפולימר מתכלה רומן בשם פולי (גליצרול-dodecanoate) (PGD) דווחה. הסיבים היו מסוגלים לתמוך בצמיחה של תאים שמקורם בתאי גזע pluripotent עכבר.

Electrospun סיבי פיגומים של פולי (גליצרול-dodecanedioate) להנדסה עצבית רקמות מתאי גזע עובריים בעכבר

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לפברק פיגומי nanofiber electrospun עם ארגון מדורג של סיבים ולחקור את היישומים שלהם בויסות מורפולוגיה תא / אורינטציה. הדרגתיים בכל קשורים לתכונות פיסיקליות וכימיות של פיגומי nanofiber מציע מגוון רחב של יישומים בתחום ביו-רפואיים.

Electrospun nanofiber פיגומים עם דרגות בארגון סיבים

חומרים פולימריים סופר-הידרופוביים דו-ממדיים ותלת-ממדיים מוכנים על ידי אלקטרו-ספינינג או ריסוס אלקטרו פולימרים מתכלים מעורבבים עם פולימר בעל אנרגיית פני שטח נמוכה יותר בעל הרכב דומה.

בודה חומרים פולימריים עבור יישומים ביו-הידרופובי

כתב יד זה מתאר את ההליך כדי להמציא לאפיין את סיבי electrospun פולי Griffithsin-לאחרונה (חומצה לקטית-co-גליקולית) הממחישים דבק חזק ופעילות אנטי נגד זיהום מסוג 1 וירוס הכשל החיסוני האנושי במבחנה. שיטות השתמשו כדי לסנתז, שינוי פני השטח, לאפיין את המורפולוגיה וכתוצאה מכך, נטיה, ואת desorption של Griffithsin מסיבי השטח-השתנה מתוארים.

ייצור ואפיון של סיבים Griffithsin-השתנה פיגומים לצורך מניעת מחלות המועברות

מטרת פרוטוקול זה היא להראות את ההרכבה של ננומטריקס ביומימטי (NM) עם צינוריות בסיס יאנוס (JBNTs) ו fibronectin (FN). כאשר הם מתרבים במשותף עם תאי גזע mesenchymal אנושי (hMSCs), NMs להפגין ביואקטיביות מעולה בעידוד הידבקות hMSCs.

ייצור ננו-מטריקס ביומימטי עם צינורות בסיס יאנוס ופיברונקטין להדבקת תאי גזע

תוספות תרבית רקמה עם ממברנות פלסטיק הן תקן הזהב במעבדות תרביות תאים כתומכות חדירות לביסוס שכבות תאים ומודלים של רקמות מחסום. במאמר זה אנו מציגים שיטה פשוטה להחלפת קרום הפלסטיק בקרום רלוונטי יותר מבחינה ביולוגית העשוי מחלבון משי עכביש רקומביננטי מתפקד.

חיקוי קרום מרתף ננופיברילרי עשוי ממשי עכביש פונקציונלי רקומביננטי בתוספות תרבית רקמה בהתאמה אישית

הפרוטוקול הבא מציג שיטת שחול מבוססת גזירה לייצור הידרוג'לים של קולגן עם סיבים בדוגמת ננומטר, הניתנת ליישום במגוון רחב של יישומי הנדסת רקמות.

ייצור קולגן בדוגמת ננו-פיברילר להנדסת רקמות

חקור את שיטת האלקטרוספינינג לסינתזת ננופיברים מבוססי קראטין ליישומים ביו-רפואיים. שיטה זו תומכת בריפוי פצעים, הנדסת רקמות ושחרור תרופות ביעילות ובעלות נמוכה.

סינתזה של nanofiber קראטין מבוסס על הנדסה ביו רפואית

גלה סרטונים נוספים