Name: תאי בידוד של תאי Sertoli ו Peritubular מן חולדת האשכים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-02-08T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 11 s
Description: למד שיטת בידוד תאי Sertoli ותאי Peritubular מחולדת האשכים. הפרוטוקול מבוסס על עיכול אנזימטי ומאפשר חקר אימונולוגיה רבייתית זכרית והבנת תפקודי התאים בפוריות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

המחברים מבקשים להודות גידו ורהובן ולודו Deboel, לובן, שהיו מאוד מועילים בהקמת הבידוד של תאי Sertoli העיקרי במעבדת מיינהרדט בגיסן. מוניקה Fijak, גיסן, הוא הודה על עזרתה עם דמות 1A וייעוץ. מחקרים נתמכו דויטשה Forschungsgemeinschaft דרך מענק BH 93 / 1-1 (SB) ומימון של גיסן JLU מכללת בוגר המחקר הבינלאומי (גרמניה) / אוניברסיטת מונש (מלבורן, אוסטרליה) GRK 1871 (SB). תמיכה הושג גם ממענק של מדינת הסן בתוכנית &quot;לנדס-התקפי zur Entwicklung Wissenschaftlich-ökonomischer Exzellenz&quot; (LOEWE) בשם &quot;Männliche Infertilität bei Infektion &amp; Entzündung&quot; (MIBIE).

<ol><li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Andrology.+Male+Reproductive+Health+and+Dysfunction%22">Andrology. Male Reproductive Health and Dysfunction</a>. Nieschlag, E., Behre, H., Nieschlag, S. , 3rd ed, Springer. (2010).</li>
<li>Esaki, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%C3%9Cber+Kulturen+des+Hodengewebes+der+S%C3%A4ugetiere+und+%C3%BCber+die+Natur+des+interstitiellen+Hodengewebes+und+der+Zwischenzellen%5BTitle%5D)+AND+%22Z.+Mikrosk.+Anat.+Forsch%22%5BJournal%5D)">Über Kulturen des Hodengewebes der Säugetiere und über die Natur des interstitiellen Hodengewebes und der Zwischenzellen.</a> Z. Mikrosk. Anat. Forsch. 15, 368-404 (1928).</li>
<li>Hall, P. F., Irby, D. C., De Kretser, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conversion+of+cholesterol+to+androgens+by+rat+testes%3A+comparison+of+interstitial+cells+and+seminiferous+tubules%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Conversion of cholesterol to androgens by rat testes: comparison of interstitial cells and seminiferous tubules.</a> Endocrinology. 84, 488-496 (1969).</li>
<li>Welsh, M. J., Wiebe, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rat+sertoli+cells%3A+a+rapid+method+for+obtaining+viable+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Rat sertoli cells: a rapid method for obtaining viable cells.</a> Endocrinology. 96, 618-624 (1975).</li>
<li>Vitale, R., Fawcett, D. W., Dym, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+normal+development+of+the+blood-testis+barrier+and+the+effects+of+clomiphene+and+estrogen+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Anat.+Rec%22%5BJournal%5D)">The normal development of the blood-testis barrier and the effects of clomiphene and estrogen treatment.</a> Anat. Rec. 176, 331-344 (1973).</li>
<li>Dorrington, J. H., Roller, N. F., Fritz, I. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+follicle-stimulating+hormone+on+cultures+of+Sertoli+cell+preparations%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Cell.+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Effects of follicle-stimulating hormone on cultures of Sertoli cell preparations.</a> Mol. Cell. Endocrinol. 3, 57-70 (1975).</li>
<li>Tung, P. S., Skinner, M. K., Fritz, I. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibronectin+synthesis+is+a+marker+for+peritubular+cell+contaminants+in+Sertoli+cell-enriched+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Reprod%22%5BJournal%5D)">Fibronectin synthesis is a marker for peritubular cell contaminants in Sertoli cell-enriched cultures.</a> Biol. Reprod. 30, 199-211 (1984).</li>
<li>Verhoeven, G., Cailleau, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Testicular+peritubular+cells+secrete+a+protein+under+androgen+control+that+inhibits+induction+of+aromatase+activity+in+Sertoli+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Testicular peritubular cells secrete a protein under androgen control that inhibits induction of aromatase activity in Sertoli cells.</a> Endocrinology. 123, 2100-2110 (1988).</li>
<li>Tung, P. S., Dorrington, J. H., Fritz, I. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+changes+induced+by+follicle-stimulating+hormone+or+dibutyryl+cyclic+AMP+on+presumptive+Sertoli+cells+in+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">Structural changes induced by follicle-stimulating hormone or dibutyryl cyclic AMP on presumptive Sertoli cells in culture.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 72, 1838-1842 (1975).</li>
<li>Teng, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+culture+of+adult+Sertoli+cells+and+their+effects+on+the+function+of+co-cultured+allogeneic+islets+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Chin.+Med.+J.+%28Engl.%29%22%5BJournal%5D)">Isolation and culture of adult Sertoli cells and their effects on the function of co-cultured allogeneic islets in vitro.</a> Chin. Med. J. (Engl.). 118, 1857-1862 (2005).</li>
<li>Kohno, S., Ziparo, E., Marek, L. F., Tung, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+Sertoli+cells%3A+major+histocompatibility+antigens+and+glycoconjugates%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Reprod.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Murine Sertoli cells: major histocompatibility antigens and glycoconjugates.</a> J. Reprod. Immunol. 5, 339-350 (1983).</li>
<li>Dufour, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sertoli+cell+line+lacks+the+immunoprotective+properties+associated+with+primary+Sertoli+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplant%22%5BJournal%5D)">Sertoli cell line lacks the immunoprotective properties associated with primary Sertoli cells.</a> Cell Transplant. 17, 525-534 (2008).</li>
<li>Majumdar, S. S., Tsuruta, J., Griswold, M. D., Bartke, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+culture+of+Sertoli+cells+from+the+testes+of+adult+Siberian+hamsters%3A+analysis+of+proteins+synthesized+and+secreted+by+Sertoli+cells+cultured+from+hamsters+raised+in+a+long+or+a+short+photoperiod%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Reprod%22%5BJournal%5D)">Isolation and culture of Sertoli cells from the testes of adult Siberian hamsters: analysis of proteins synthesized and secreted by Sertoli cells cultured from hamsters raised in a long or a short photoperiod.</a> Biol. Reprod. 52, 658-666 (1995).</li>
<li>Zhang, H., Liu, B., Qiu, Y., Fan, J., Yu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pure+cultures+and+characterization+of+yak+Sertoli+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Cell%22%5BJournal%5D)">Pure cultures and characterization of yak Sertoli cells.</a> Tissue Cell. 45, 414-420 (2013).</li>
<li>Ziparo, E., Geremia, R., Russo, M. A., Stefanini, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surface+interaction+in+vitro+between+Sertoli+cells+and+germ+cells+at+different+stages+of+spermatogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Anat%22%5BJournal%5D)">Surface interaction in vitro between Sertoli cells and germ cells at different stages of spermatogenesis.</a> Am. J. Anat. 159, 385-388 (1980).</li>
<li>Anway, M. D., Folmer, J., Wright, W. W., Zirkin, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+Sertoli+cells+from+adult+rat+testes%3A+an+approach+to+ex+vivo+studies+of+Sertoli+cell+function%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Reprod%22%5BJournal%5D)">Isolation of Sertoli cells from adult rat testes: an approach to ex vivo studies of Sertoli cell function.</a> Biol. Reprod. 68, 996-1002 (2003).</li>
<li>Scarpino, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rapid+method+of+Sertoli+cell+isolation+by+DSA+lectin%2C+allowing+mitotic+analyses%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Cell.+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">A rapid method of Sertoli cell isolation by DSA lectin, allowing mitotic analyses.</a> Mol. Cell. Endocrinol. 146, 121-127 (1998).</li>
<li>Mather, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+and+characterization+of+two+distinct+mouse+testicular+epithelial+cell+lines%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Reprod%22%5BJournal%5D)">Establishment and characterization of two distinct mouse testicular epithelial cell lines.</a> Biol. Reprod. 23, 243-252 (1980).</li>
<li>Korbutt, G. S., Elliott, J. F., Rajotte, R. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cotransplantation+of+allogeneic+islets+with+allogeneic+testicular+cell+aggregates+allows+long-term+graft+survival+without+systemic+immunosuppression%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Cotransplantation of allogeneic islets with allogeneic testicular cell aggregates allows long-term graft survival without systemic immunosuppression.</a> Diabetes. 46, 317-322 (1997).</li>
<li>Fritz, I. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Somatic+cell-germ+cell+relationships+in+mammalian+testes+during+development+and+spermatogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Ciba+Found.+Symp%22%5BJournal%5D)">Somatic cell-germ cell relationships in mammalian testes during development and spermatogenesis.</a> Ciba Found. Symp. 182, 271-281 (1994).</li>
<li>Whaley, P. D., Chaudhary, J., Cupp, A., Skinner, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+specific+response+elements+of+the+c-fos+promoter+and+involvement+of+intermediate+transcription+factor%28s%29+in+the+induction+of+Sertoli+cell+differentiation+%28transferrin+promoter+activation%29+by+the+testicular+paracrine+factor+PModS%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Role of specific response elements of the c-fos promoter and involvement of intermediate transcription factor(s) in the induction of Sertoli cell differentiation (transferrin promoter activation) by the testicular paracrine factor PModS.</a> Endocrinology. 136, 3046-3053 (1995).</li>
<li>Bhushan, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Uropathogenic+Escherichia+coli+block+MyD88-dependent+and+activate+MyD88-independent+signaling+pathways+in+rat+testicular+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Uropathogenic Escherichia coli block MyD88-dependent and activate MyD88-independent signaling pathways in rat testicular cells.</a> J. Immunol. 180, 5537-5547 (2008).</li>
<li>Meinhardt, A., Hedger, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunological%2C+paracrine+and+endocrine+aspects+of+testicular+immune+privilege%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Cell.+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Immunological, paracrine and endocrine aspects of testicular immune privilege.</a> Mol. Cell. Endocrinol. 335, 60-68 (2011).</li>
<li>Fijak, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+Testosterone+on+Inflammatory+Response+in+Testicular+Cells+and+Expression+of+Transcription+Factor+Foxp3+in+T+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Reprod.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Influence of Testosterone on Inflammatory Response in Testicular Cells and Expression of Transcription Factor Foxp3 in T Cells.</a> Am. J. Reprod. Immunol. , 12-25 (2015).</li>
<li>Mamidi, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+passing+mesenchymal+stem+cells+through+smaller+bore+size+needles+for+subsequent+use+in+patients+for+clinical+or+cosmetic+indications%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Transl.+Med%22%5BJournal%5D)">Impact of passing mesenchymal stem cells through smaller bore size needles for subsequent use in patients for clinical or cosmetic indications.</a> J. Transl. Med. 10, 229(2012).</li>
<li>Ito, S., Karnovsky, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Formaldehyde-glutaraldehyde+fixatives+containing+trinitro+compounds%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell.+Biol%22%5BJournal%5D)">Formaldehyde-glutaraldehyde fixatives containing trinitro compounds.</a> J. Cell. Biol. 39, 168-169 (1968).</li>
<li>Galdieri, M., Ziparo, E., Palombi, F., Russo, M. A., Stefanini, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pure+Sertoli+cell+cultures%3A+a+new+model+for+the+study+of+somatic-germ+cell+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Androl%22%5BJournal%5D)">Pure Sertoli cell cultures: a new model for the study of somatic-germ cell interactions.</a> J. Androl. 5, 249-254 (1981).</li>
<li>Fijak, M., Meinhardt, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+testis+in+immune+privilege%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol.+Rev%22%5BJournal%5D)">The testis in immune privilege.</a> Immunol. Rev. 213, 66-81 (2006).</li>
<li>Jegou, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Sertoli+cell+in+vivo+and+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Biol.+Toxicol%22%5BJournal%5D)">The Sertoli cell in vivo and in vitro.</a> Cell Biol. Toxicol. 8, 49-54 (1992).</li>
<li>Pineau, C., Le Magueresse, B., Courtens, J. L., Jegou, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Study+in+vitro+the+phagocytic+function+of+Sertoli+cells+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tissue+Res%22%5BJournal%5D)">Study in vitro the phagocytic function of Sertoli cells in the rat.</a> Cell Tissue Res. 264, 589-598 (1991).</li>
<li>Ren, Y., Savill, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apoptosis%3A+the+importance+of+being+eaten%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Differ%22%5BJournal%5D)">Apoptosis: the importance of being eaten.</a> Cell Death Differ. 5, 563-568 (1998).</li>
<li>Ducray, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+a+mouse+Sertoli+cell+line+producing+rat+androgen-binding+protein+%28ABP%29%5BTitle%5D)+AND+%22Steroids%22%5BJournal%5D)">Establishment of a mouse Sertoli cell line producing rat androgen-binding protein (ABP).</a> Steroids. 63, 285-287 (1998).</li>
<li>Konrad, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rat+Sertoli+cells+express+epithelial+but+also+mesenchymal+genes+after+immortalization+with+SV40%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim.+Biophys.+Acta%22%5BJournal%5D)">Rat Sertoli cells express epithelial but also mesenchymal genes after immortalization with SV40.</a> Biochim. Biophys. Acta. 1722, 6-14 (2005).</li>
</ol>

החוקרים אין לי מה לחשוף.

צינורות הזרע תחומים בשכבה עגולה של תאים פריטובולריים ולמינה בסיסית בצד הלומינלי. תאי סרטולי נחים על הלמינה הבסיסית, מקימים את מחסום אשך הדם באמצעות היווצרות צמתים חוסמים בין תאים סמוכים ומספקים את המסגרת המבנית לארגון אפיתל הזרע. תאי סרטולי ותאי זרע סמוכים שומרים על קשרים אינטימיים לאורך התפתחות תאי הנבט ומספקים מגע פיזי ותקשורת כאחד. לכן, כאשר תאי סרטולי מבודדים באמצעות ההליך המתואר כאן, הם נשללים מהמגע האינטימי שלהם עם PTCs ותאי זרע שכנים. עם זאת, נראה שהם שומרים על תכונות רבות האופייניות להם in vivo כמו היענו...

האשכים לייצר גמטות הורמונים זכריים מינית, כלומר, אנדרוגנים. האורגן מורכב משני תאים. בתא ביניים, המייצג כ 10-12% של נפח האשכים הכולל 1, steroidogenesis מתרחש בתוך התאים ליידיג. תא צינורי מייצג כ 60-80% מנפח האשכים 1 ומכיל בתאי הנבט שני סוגים של תאים סומטיים - תאים פריטובולרית והפרשה תאי Sertoli. לאשכים מחולקים septa רקמת חיבור לתוך 250-300 אוניות, שכל אחת מהן מכיל 1-3 מאוד ראשוני באבוביות מפותל. Tubules אלה מוקפים על ידי קרום בסיס, גיליון קולגן, ושכבה היקפי של תאי peritubular (איור 1 א). אפיתל הנבטי ממוקם בצד luminal של קרום הבסיס. תאי Sertoli הם תאים מאורכים גדולים כי ההיקף האפיתל נבטי כולו מן הקרום הבסיסי אל לומן. הם מאוד attכאב קרום הבסיס ויוצר גיליון הסלולר מתמשך דרך צומת הדוקים basolateral מאורגנות חוסם האפיתל הנבטי מן interstitium ומייצג את מחסום הדם-האשך. יש תאים Sertoli תחזיות ציטופלסמית בולטות והשלכות המאפשרות להם להגיע במגע מורפולוגית ופונקציונלי הדוקים עם מספר מינים ספציפיים אך קבוע של תאים ניבטו. תאי גזע נבטי דיפלואידי להתרבות להתמיין spermatogonia. במהלך המיוזה שאני קצר מועד spermatocytes tetraploid נוצרות המתפתחים נוספים לארבעה spermatids הפלואידים במהלך המיוזה השנייה. כל תאי נבט הם מחוברים על ידי גשרים ציטופלסמית כך שהם יוצרים רשת הסלולר. האירוע העיקרי בתקופת הבשלה של spermatids הוא שהחול של חלקים גדולים של הציטופלסמה, ויצר גופים שיורית, בתהליך הנקרא spermiogenesis. גופי שייר נבחנים phagocytosed ידי תאי Sertoli. spermatids מאוחר ואז משתחררת לתוךלומן הצינור והובל אל יותרת האשך עבור התבגרות נוספת. תאי Sertoli ו בתאי הנבט להופיע לתאם spermatogenesis הדדית טופוגרפית והן מבחינה תפקודית. הכנת סוגי תאי אשכים בודדים נכתבה לפני כמעט מאה שנה כאשר חתיכות אשכים קטנות עובדו סוגי תאים המזוהים על ידי מיקרוסקופ 2. על ידי דיסקציה זהירה של tubules לאחר פתיחת Tunica albuginea באמצעות מלקחיים קנס שקצהו אפשר היה מאוחר להפריד צינורי ותאים ביניים 3. בשנת 1975 וולשית ו וויב הציגה טיפול collagenase כדי לשחרר את tubules מ דבקות רקמת ביניים טיפול pancreatin להסרת שכבת התאים peritubular החיצוני 4. משחר נעוריה חולדות צעירים לא מפותחות (סביב 20 ימים) נוצלו שבה תא Sertoli מהווה חלק הגדול של אוכלוסיית צינורי התא כי spermatogenesis טרם החל. בשעה זו Sert עכברוש גילoli התאים מפסיקים להתחלק, צמתים הדוקים בין תאים שכנים ליצור כך את מחסום הדם-testis מוקמת 5. המבקר של וולשית ו וויב Dorrington et al. הציג שילוב של טריפסין deoxyribonuclease ואחריו מעכב soybeen טריפסין וטיפול collagenase שפורסם באותה שנה 6. שתי הקבוצות גם השתמשו בכוח מכני (ציור שברי צינורי מתעכל שוב ושוב באמצעות מחט מזרק או פיפטה פסטר בהתאמה) כדי לייצר ההשעיה תא הומוגנית ציפוי המכיל כ 70% תאים Sertoli. לאחר 3 ימים בתרבות, באמצעות מדיום זה סרום ללא, באחוז התאים Sertoli מגדילה בכ -90%. זה יכול להיות מיוחס בעיקר מותו של זיהום בתאי הנבט. תאי peritubular שיורים (PTCs), לעומת זאת, להישאר מחוברים היטב באמצעות תאי מטריקס שלהם. PTCs, אבל לא התאים Sertoli, ידועים לייצרפיברונקטין שיכולים לשמש חלבון סמן להערכת זיהום עם PTCs. לכן, טונג ואח. מנומק כי טיפול hyaluronidase נוסף עשוי לשפר את הטוהר של שבר 7 תא סרטולי. ואכן הם יכולים להראות כי טיפול נוסף הצליח להפחית את הזיהום על ידי PTCs כ פי 20, אשר הופך בולט במיוחד כאשר בהשוואה מדיום סרום המכיל משמש לטיפוח התאים Sertoli מטוהרים. מכאן ואילך נוהל משופר ואח טונג. הפך פרוטוקול הרווח וכן נעשה שימוש נרחב על ידי קבוצות גדולות אחרות בתחום 8 (איור 1 ב). במהלך טיפול collagenase רוב PTCs משתחררים ניתן לבודד במקביל לתאי Sertoli. והואיל PTCs במרץ להתרבות אינו מגיב הורמון מגרה זקיק (FSH), תאי Sertoli אינם עוברים מיטוזה יותר ולהגיב FSH ידי שינויים מורפולוגיים מאפייןוגידול monophosphate המחזורית אדנוזין (cAMP) ריכוז 9. מאוד דומה פרוטוקולים עיכול אנזימטי יכול לשמש עבור בידוד של תאים Sertoli העיקרי מבעלי חיים אחרים כמו גבר 10, עכבר 11,12, אוגר סיבירי 13 או יאק 14. למען הסר כמויות גדולות של זיהום בתאי הנבט הלם hypotonic יכול להיות מועסק בסוף ההליך בבידוד 15. זה מאפשר גם בידוד יעיל של תאים Sertoli מן החולדה למבוגרים האשכים 16. השעית תא סרטולי מועשרת יכולה גם להפריד בתאי ניבט ידי ציפוי ההשעיה על מנות לקטינים מצופים ב&quot;דאטורה Stramonium agglutinin 17. רק תאי Sertoli וכמה PTCs שיורית לדבוק צלחות לקטינים. בתרביות תאים ראשוניים Sertoli, בעיקר מן החולדה, שימשו בתחילה על חקירת היענות להורמונים או הקמת שורות תאים כמו li תא העכבר Sertoline TM4 18. שורת תאים זו נחקרה יותר ממאה מחקרים עד היום. בגישה translational תאי Sertoli כבר נוצלו למטרות הגנה חיסונית של תאי שיתוף תרבותיים ורקמות כמו שיתוף השתלת איי לבלב xeno- או אלוגנאית להישרדות שתל לטווח ארוך ללא דיכוי חיסוני מערכתי 19. תאי Sertoli מבודד גם שימשו בניסויים לתרבות משותפת ללימוד-mesenchymal אפיתל (תאים Sertoli - PTCc) ואת תא סומטי-נבט (תאים Sertoli - תאי נבט) אינטראקציות 20, 21. לאחרונה תאי Sertoli ראשיים הועסק על חקירת הביטוי של קולטנים דמוי אגרה ואת הפרשת ציטוקינים מעודדי דלקת וכן מפלי הולכת אותות המוביל ציטוקינים הביטוי בעקבות זיהום עם א פתוגניים ו uropathogenic coli 22. חקירות אחרות האחרונות השתמשו בתאי Sertoli ללימוד p אשכים חיסונייםrivilege 23 והוכיח כי טיפול מקדים טסטוסטרון מדכא את התגובה הדלקתית נגרם LPS 24.

<table><tbody><tr><td>שיבוט נוגדן אקטין (שריר חלק) 1A4</td><td>Dako</td><td>M0851</td><td>נוגדן אנטי אנושי לעכבר חד שבטי. השתמש בדילול של 1:100 לאימונופלואורסצנטיות.</td></tr><tr><td>שבר בקר אלבומין V כיתה סטנדרטית,</td> מסנן <td>Serva</td><td>11930.04</td> ליופיליזציה <td>(0.45 ומיקרו; m) תמיסות BSA המשמשות לאימונופלואורסצנטיות.</td></tr><tr><td>מסננות תאים קורנינג 70&nbsp; ומיקרו; m</td><td>Corning</td><td>431751</td><td>צבע לבן</td></tr><tr><td>קולגנאז A מ Clostridium histolyticum</td><td>Roche</td><td>10103586001</td><td></td></tr><tr><td>תושבת DAPI ProLong Gold Antifade</td><td>Life technologies</td><td>P-36931</td><td></td></tr><tr><td>D-גלוקוז</td><td>Sigma</td><td>G8644</td><td>100 גרם/ליטר</td></tr><tr><td>Dulbecco&acute; s PBS ללא Ca2+/Mg2+</td><td>Gibco</td><td>14190-094</td><td></td></tr><tr><td>DNase I</td><td>Roche</td><td>10104159001</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ אלקטרונים</td><td>Zeiss</td><td>EM 109S</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ פלואורסצנטי</td><td>Zeiss</td><td>Axioplan 2</td><td></td></tr><tr><td>Hyaluronidase מאשך בקר</td><td>Sigma</td><td>H3506</td><td></td></tr><tr><td>אור הפוך מיקרוסקופ</td><td>אולימפוס</td><td>CKX41</td><td>מיקרוסקופ תרבית תאים שגרתי</td></tr><tr><td>עכבר IgG / IgM (H+L) פוליקלונלי נוגדן משני&nbsp;</td><td>טכנולוגיות חיים</td><td>A-10684</td><td>Alexa Fluor 488 מצומד</td></tr><tr><td>שמן אדום O</td><td>Sigma</td><td>O0625</td><td>החליף את סודאן III וסודאן IV בגלל צבע בהיר יותר.</td></tr><tr><td>פרפורמלדהיד</td><td>סיגמא</td><td>P6148</td><td></td></tr><tr><td>פניצילין (5,000&nbsp; U/ml)/ סטרפטומיצין (5,000 ומיקרו; גרם/מ"ל)</td> <td>Gibco</td><td>15070-063</td><td>תמיסה 100x</td></tr><tr><td>RPMI-1640</td><td>Gibco</td><td>21875-034</td><td>מכיל 300 מ"ג/ליטר L-גלוטמין</td></tr><tr><td>טריפסין מלבלב חזיר</td><td>Sigma</td><td>T5266</td><td></td></tr><tr><td>Trypan Blue Stain (0.4%)</td><td>Gibco</td><td>15250-061</td><td></td></tr><tr><td>מעכב טריפסין מפולי סויה</td><td>Sigma</td><td>T6522</td><td>המוצר של סיגמא זול משמעותית מהמוצר ששימש בעבר BPTI (אפרוטינין) של רוש.</td></tr><tr><td>נוגדן וימנטין (V9)</td><td>Sigma</td><td>V6630</td><td>נוגדן וימנטין עכבר חד-שבטי נגד חזיר.&nbsp; השתמש בדילול של 1:100 לאימונופלואורסצנטיות.</td></tr><tr><td>חולדות וויסטאר WU</td><td>צ'ארלס ריבר</td><td></td><td>צריכות להיות בנות 19 יום ביום הניסוי.</td></tr></tbody></table>

תאי בידוד של תאי sertoli ו peritubular מן חולדת האשכים

Isolation of Sertoli Cells and Peritubular Cells from Rat Testes

לאשכים, ובפרט הגמטות הזכריות, קורא תיגר על המערכת החיסונית בדרך ייחודית שהזרע הבדיל מופיעים לראשונה בזמן גיל ההתבגרות - יותר מעשר שנים אחרי הקמת סובלנות החיסונית מערכתית. תאים Spermatogenic להביע מספר חלבונים שעשויים להיראות כמו מה שאינו עצמי על ידי המערכת החיסונית. לאשכים חייב אז יוכלו להקים סובלנות לאנטיגנים-ניאו אלה מצד אחד אך עדיין להיות מסוגל להגן על עצמה מפני זיהומים התפתחות גידולים מצד שני. לכן האשכים הם אחד כמה אתרים חסויים חיסוניים בגוף לסבול אנטיגנים זרים מבלי לעורר תגובה חיסונית דלקתית מזיקה. תאי Sertoli לשחק תפקיד מפתח לשמירה על הסביבה חסויה חיסונית זו של אשכים וגם להאריך הישרדות של תאי cotransplanted בסביבת זרה. לכן התאים Sertoli העיקריים הם כלי חשוב ללימוד זכות החיסונית של האשכים כי לא יכול להיות דוארasily שהחליף שורות תאים הוקם או מודלים תאיים אחרים. כאן אנו מציגים פרוטוקול מפורט ומקיף עבור בידוד של תאים Sertoli - ותאי peritubular אם תרצה בכך - מן האשכים עכברוש בתוך יום אחד.

<html> ההליך המתואר מאפשר בידוד של כ 12 x 10 7 תאים Sertoli מ -10 האשכים חולדה. 3 x 10 6 תאים מצופים בכל טוב על צלחת 6-היטב, כך שש עד שבעה 6 צלחות גם זמינות עבור ניסויים ביום 7. עיכול טריפסין-DNase I הוא השלב הקריטי ביותר במהלך בידוד תא סרטולי. אם עיכול בנקודה זו מקדמת רחוק מדי, היחס בין תאי נבט / תאי Sertoli יגדל עד לא פרופורציונלי עד הסוף. במהלך היום 3-6 של התרבות חשוב לשטוף בזהירות משם כלא דבקות רב או רופף מצורפים בתאים ניבט...

תאי Sertoli הראשי נדרשים ללימוד זכות testis-אימוניות, הולך אותות בזמן דלקת או זיהום, וניצול של נכסי immunoprotective שלהם. כאן אנו מתארים פרוטוקול אנזים המבוסס עבור בידוד של תאי Sertoli העיקרי נקיים במיוחד ותאי peritubular מן אשכי חולדה.

תאי בידוד של תאי Sertoli ו Peritubular מן חולדת האשכים

The testis, and in particular the male gamete, challenges the immune system in a unique way because differentiated sperm first appear at the time of ...

המטרה הכללית של הליך זה היא לבודד תאי סרטולי ראשוניים ותאי פריטובולריים (PTCs) בדרגת טוהר גבוהה מאשכי חולדה. שיטה זו יכולה לסייע במתן תשובות לשאלות מפתח בתחום האימונולוגיה של מערכת הרבייה הזכרית, כגון כיצד תאי סרטולי משפיעים על מקרופאגים באשכים, או כיצד מוסדר תהליך האוטופגיה בתאי סרטולי. איסוף תאי סרטולי ותאים פריטובולריים הוא תהליך מורכב הדורש ריאגנטים יקרים.תאים ראשוניים מבודדים שומרים על תכונות in vivo איכותיות באופן משמעותי יותר במהלך תרבית תאים, בהשוואה לקווי תאים. להשלכות של טכניקה זו יש השפעה על האבחנה שלנו של אי-פריון גברים, מכיוון שתאי סרטולי ממלאים תפקיד מכריע בהתפתחות התאים הספ rättוגניים. באופן כללי, אנשים שאינם מנוסים בשיטה זו יתקלו בקשיים, כיוון שעלול להיות קשה להעריך אם הַנְּבֵּבּוֹת המייצרות זרע עברו עיכול תקין.הדגמה ויזואלית של שיטה זו היא קריטית, שכן הפרוצדורה כולה כוללת שלבים רבים הדורשים ביצוע נכון. טעויות קטנות עלולות להוביל לכישלון. התחילו בחיטוי של הבטנים של עשרה חולדות זכר מסוג Wistar לאחר ריקון דם באמצעות 70% ethanol.לאחר מכן, עבור כל חיה בתורם, השתמשו בפינצטה כדי להרים את העור מהשרירים הבטניים, וגזרו אונה של עור בצורת אליפסה המשתרעת מהסימפיזה הפוביס (pubic symphysis) ועד לעצם החזה (sternum). הרימו את העור כלפי מעלה אל החזה. לאחר מכן, אחזו בשרירים הבטניים ו

isolation-of-sertoli-cells-and-peritubular-cells-from-rat-testes

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

סרטון זה מדגים את הליך הבידוד של תאי סרטולי מצינוריות זרע של עכברים, מרכיב באשכים. עיכול אנזימטי ושטיפות חוזרות ונשנות מקדמים את שחרורם של תאי סרטולי לתמיסה, אשר ניתן לגדל בתרבית נוספת לצורך התרבות וצמיחה.

בידוד תאי סרטולי בקרה חיסונית מצינוריות זרע עכבר

שיטה פשוטה לגזור ולשמור גזע spermatogonial ושורות תאי אב מעכברים בוגרים מוצגת כאן. השיטה מנצלת תאים מזינים שמקורם מתא תא סומטי מאשכי העכברים הבוגרים. טכניקה זו היא ישימה זנים נפוצים, כוללים עכבר מהונדס מוחץ, ולדפוק בעכברים.

העשרה סידורית של גזע Spermatogonial ותאי אב (SSCs) בתרבות לגזירת קווי SSC מאוסים למבוגרים לזמן ארוך

פרוטוקול חדש להכנה מכאנית של השעיות אשכים סלולריים מחומר מכרסם, הימנעות אנזימים וחומרי ניקוי, מתואר. השיטה היא מאוד פשוטה, מהירה, לשחזור, והופכת השעיות תא באיכות טובות, אשר מתאימות למיון זרימה ומיצוי RNA.

טכניקה פשוטה ויעילה להכנת השעיות תא אשכים

שיטת STA-PUT מאפשרת הפרדה של אוכלוסיות שונות של תאי spermatogenic בהתבסס על גודל וצפיפות.

הפרדה של סוגי תאי Spermatogenic שימוש בשקיעה מהירות STA-PUT

אנו מציגים פרוטוקול המשלב בידוד התא ואת כל התא תיקון תיקון מהדק כדי למדוד את המאפיינים החשמליים של תאים אפיתל העיקרי ניתק מן epididymides cauda חולדה. פרוטוקול זה מאפשר חקירה של המאפיינים הפונקציונליים של תאים אפיתלתיים ראשוניים אפידלימלי נוספת להבהיר את התפקיד הפיזיולוגי של האפידידימיס.

כל תא תיקון מהדק הקלטות של תאים אפיתל העיקרי מבודדים מן האברדימיס

מטרת טכניקה זו סקווש צנורית הוא להעריך במהירות תכונות cytological של פיתוח העכבר spermatocytes תוך שמירה על תקינות הסלולר. שיטה זו מאפשרת הלימוד בכל שלבי יצירת זרע, ניתן ליישם בקלות לצד הביוכימי והמולקולרי ביולוגי גישות אחרות לצורך המחקר של העכבר מיוזה.

טכניקה סקווש צנורית וכמה לניתוח Cytological של יצירת זרע שימוש במודל עכבר

כאן, אנו מציגים פרוטוקול כדי להעריך את תקינות מחסום דם-testis על ידי הזרקת אינולין-FITC לתוך האשכים. זוהי שיטה יעילה ויוו ללמוד שלמות מחסום דם testis. זה יכול להיות בסכנה על ידי אלמנטים גנטיים וסביבתיים.

שיטת In Vivo ללמוד העכבר דם Testis מכשול שלמות

מוצג כאן הוא פרוטוקול עבור העשרת החומר העשיר pachytene, עגול spermatocytes, ו להאריך spermatocytes מתוך האשכים עכבר למבוגרים באמצעות סרום מתמשך פרה אלבומין הדרגתי עם מעבדה סטנדרטית ציוד.

העשרה של פכיטנא ספרציטים וספרטידים מאשכים עכבר באמצעות ציוד מעבדה סטנדרטית

כאן, ארבע שיטות ליצירת אורגנואידים אשכים מתאי אשכים מורין ילודים ראשוניים מתוארים כלומר, מטריצה חוץ תאית (ECM) וסביבות תרבות 2D ותלת-מיוד ללא ECM. טכניקות אלה יש יישומי מחקר מרובים והם שימושיים במיוחד ללימוד פיתוח האשכים ופיזיולוגיה במבחנה.

אקסטרה סלולר מבוסס מטריצה ודור נוסף ללא מטריקס סלולרי של אורגנואידים אשכים Murine

כאן אנו מציגים שיטה פשוטה ויעילה לבודד תאי חיידקים מיוטיים ופוסט-מיוטיים חיים מערכי עכבר בוגרים. באמצעות ציטוקסיות נמוכה, צבע מחייב DNA סגול-נרגש ומיון תאים המופעלים על-ידי פלואורסצנה, ניתן לבודד אוכלוסיות תאי זרע מועשרים מאוד עבור יישומים רבים במורד הזרם.

בידוד של תאי זרע מורין באמצעות צבע מחייב DNA סגול-נרגש תא חרוש

מאמר זה מתאר הליך שלב אחר שלב ליצירת מודל של איסכמיה/רפרפוזיה של האשכים לייצור מודל ניתן לשחזור של פיתול האשכים בחקר המנגנונים הפתולוגיים של פגיעה באיסכמיה-רפרפוזיה באשכים.

עיגון אשך מעוות: מודל חולדה של פגיעה באיסכמיה-רפרפוזיה של האשך

למד שיטת בידוד תאי Sertoli ותאי Peritubular מחולדת האשכים. הפרוטוקול מבוסס על עיכול אנזימטי ומאפשר חקר אימונולוגיה רבייתית זכרית והבנת תפקודי התאים בפוריות.

תאי בידוד של תאי Sertoli ו Peritubular מן חולדת האשכים

גלה סרטונים נוספים