Name: gingivalis Porphyromonas כאורגניזם מודל להערכת אינטראקציה של חיידקים אנאירוביים עם תאי מארח (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-12-17T13:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 16 s
Description: למד פרוטוקולים להערכת אינטראקציה של חיידקים אנאירוביים עם תאי מארח באמצעות Porphyromonas gingivalis. השיטה מאפשרת מדידת חדירה והישרדות חיידקית בתנאים אנאירוביים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

ברצוננו להודות לד"ר הירושי מיאזאקי, ד"ר סקוט הנדרסון, ד"ר טוד קיטן, ד"ר ג'סטין האצ'רסון, ד"ר קתרין ג'אורגי וקולין ר. ברי. עבודה זו נתמכה על ידי מענקי NIH NIDCR R01DE016124, R01DE018039 ו-R01DE023304 לג'יי.פי לואיס.
מיקרוסקופיה בוצעה במתקן המיקרוסקופיה של המחלקה לאנטומיה ונוירוביולוגיה של VCU, בתמיכה, בין השאר, במימון מענק הליבה של מרכז NIH-NINDS (5P30NS047463).

<ol><li>Hentges, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Anaerobic+Microflora+of+the+Human+Body%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">The Anaerobic Microflora of the Human Body.</a> Clin. Infect. Dis. 16 (4), S175-S180 (1993).</li>
<li>Willis, A. T. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWillis%2C+AT+%22Anaerobic+bacteriology%3A+clinical+and+laboratory+practice%22">Anaerobic bacteriology: clinical and laboratory practice</a>. , (2014).</li>
<li>Wren, M. W., Baldwin, A. W., Eldon, C. P., Sanderson, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+anaerobic+culture+of+clinical+specimens%3A+a+14-month+study%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Med.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">The anaerobic culture of clinical specimens: a 14-month study.</a> J. Med. Microbiol. 10 (1), 49-61 (1977).</li>
<li>Woolard, M. D., Frelinger, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Outsmarting+the+host%3A+bacteria+modulating+the+immune+response%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol.+Res%22%5BJournal%5D)">Outsmarting the host: bacteria modulating the immune response.</a> Immunol. Res. 41 (3), 188-202 (2008).</li>
<li>Mayrand, D., Holt, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biology+of+asaccharolytic+black-pigmented+Bacteroides+species%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Biology of asaccharolytic black-pigmented Bacteroides species.</a> Microbiol. Rev. 52 (1), 134-152 (1988).</li>
<li>Lamont, R. J., Jenkinson, H. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Life+below+the+gum+line%3A+pathogenic+mechanisms+of+Porphyromonas+gingivalis%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiol.+Mol.+Biol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Life below the gum line: pathogenic mechanisms of Porphyromonas gingivalis.</a> Microbiol. Mol. Biol. Rev. 62 (4), 1244-1263 (1998).</li>
<li>Haffajee, A. D., Socransky, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbial+etiological+agents+of+destructive+periodontal+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Periodontol.+2000%22%5BJournal%5D)">Microbial etiological agents of destructive periodontal diseases.</a> Periodontol. 2000. 5 (1), 78-111 (1994).</li>
<li>Listgarten, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure+of+the+microbial+flora+associated+with+periodontal+health+and+disease+in+man.+A+light+and+electron+microscopic+study%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Periodontol%22%5BJournal%5D)">Structure of the microbial flora associated with periodontal health and disease in man. A light and electron microscopic study.</a> J. Periodontol. 47 (1), 1-18 (1976).</li>
<li>Ximénez-Fyvie, L. A., Haffajee, A. D., Socransky, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+the+microbiota+of+supra-+and+subgingival+plaque+in+health+and+periodontitis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Periodontol%22%5BJournal%5D)">Comparison of the microbiota of supra- and subgingival plaque in health and periodontitis.</a> J. Clin. Periodontol. 27 (9), 648-657 (2000).</li>
<li>Darveau, R. P., Hajishengallis, G., Curtis, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Porphyromonas+gingivalis+as+a+potential+community+activist+for+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Dent.+Res%22%5BJournal%5D)">Porphyromonas gingivalis as a potential community activist for disease.</a> J. Dent. Res. 91 (9), 816-820 (2012).</li>
<li>Holt, S. C., Kesavalu, L., Walker, S., Genco, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Virulence+factors+of+Porphyromonas+gingivalis%5BTitle%5D)+AND+%22Periodontol.+2000%22%5BJournal%5D)">Virulence factors of Porphyromonas gingivalis.</a> Periodontol. 2000. 20 (1), 168-238 (1999).</li>
<li>Lamont, R. J., Yilmaz, öZ. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+or+out%3A+the+invasiveness+of+oral+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Periodontol.+2000%22%5BJournal%5D)">In or out: the invasiveness of oral bacteria.</a> Periodontol. 2000. 30 (1), 61-69 (2002).</li>
<li>Lamont, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Porphyromonas+gingivalis+invasion+of+gingival+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Porphyromonas gingivalis invasion of gingival epithelial cells.</a> Infect. Immun. 63 (10), 3878-3885 (1995).</li>
<li>Belton, C. M., Izutsu, K. T., Goodwin, P. C., Park, Y., Lamont, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescence+image+analysis+of+the+association+between+Porphyromonas+gingivalis+and+gingival+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Fluorescence image analysis of the association between Porphyromonas gingivalis and gingival epithelial cells.</a> Cell. Microbiol. 1 (3), 215-223 (1999).</li>
<li>Rautemaa, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracellular+localization+of+Porphyromonas+gingivalis+thiol+proteinase+in+periodontal+tissues+of+chronic+periodontitis+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+Dis%22%5BJournal%5D)">Intracellular localization of Porphyromonas gingivalis thiol proteinase in periodontal tissues of chronic periodontitis patients.</a> Oral Dis. 10 (5), 298-305 (2004).</li>
<li>Kaufmann, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunity+to+intracellular+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Immunity to intracellular bacteria.</a> Annu. Rev. Immunol. 11 (1), 129-163 (1993).</li>
<li>Diaz, P., Rogers, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+oxygen+on+the+growth+and+physiology+of+Porphyromonas+gingivalis%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+Microbiol.+Immunol%22%5BJournal%5D)">The effect of oxygen on the growth and physiology of Porphyromonas gingivalis.</a> Oral Microbiol. Immunol. 19 (2), 88-94 (2004).</li>
<li>Lewis, J. P., Iyer, D., Anaya-Bergman, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adaptation+of+Porphyromonas+gingivalis+to+microaerophilic+conditions+involves+increased+consumption+of+formate+and+reduced+utilization+of+lactate%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiology%22%5BJournal%5D)">Adaptation of Porphyromonas gingivalis to microaerophilic conditions involves increased consumption of formate and reduced utilization of lactate.</a> Microbiology. 155, 3758-3774 (2009).</li>
<li>Edwards, A. N., Suarez, J. M., McBride, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culturing+and+maintaining+Clostridium+difficile+in+an+anaerobic+environment%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Culturing and maintaining Clostridium difficile in an anaerobic environment.</a> J. Vis. Exp. (79), e50787(2013).</li>
<li>Strober, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trypan+blue+exclusion+test+of+cell+viability%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Protoc.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Trypan blue exclusion test of cell viability.</a> Curr. Protoc. Immunol. , (2001).</li>
<li>Koch, A. L., Crandall, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photometric+measurement+of+bacterial+growth%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Biology+Teacher%22%5BJournal%5D)">Photometric measurement of bacterial growth.</a> The American Biology Teacher. 30 (6), 481-485 (1968).</li>
<li>Wikins, T. D., Holdeman, L. V., Abramson, I. J., Moore, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standardized+single-disc+method+for+antibiotic+susceptibility+testing+of+anaerobic+bacteria+Antimicrob%5BTitle%5D)+AND+%22Agents+Chemother%22%5BJournal%5D)">Standardized single-disc method for antibiotic susceptibility testing of anaerobic bacteria Antimicrob.</a> Agents Chemother. 1 (6), 451-459 (1972).</li>
<li>Bauer, A. W., Kirby, W. M., Sherris, J. C., Turck, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibiotic+susceptibility+testing+by+a+standardized+single+disk+method%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Clin.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Antibiotic susceptibility testing by a standardized single disk method.</a> Am. J. Clin. Pathol. 45 (4), 493-496 (1966).</li>
<li>Mandell, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interaction+of+intraleukocytic+bacteria+and+antibiotics%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Interaction of intraleukocytic bacteria and antibiotics.</a> J. Clin. Invest. 52 (7), 1673-1679 (1973).</li>
<li>Menzies, B. E., Kourteva, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Internalization+of+Staphylococcus+aureus+by+endothelial+cells+induces+apoptosis%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Internalization of Staphylococcus aureus by endothelial cells induces apoptosis.</a> Infect. Immun. 66 (12), 5994-5998 (1998).</li>
<li>Naito, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+the+genome+sequence+of+Porphyromonas+gingivalis+strain+ATCC+33277+and+genomic+comparison+with+strain+W83+revealed+extensive+genome+rearrangements+in+P.+gingivalis%5BTitle%5D)+AND+%22DNA+Res%22%5BJournal%5D)">Determination of the genome sequence of Porphyromonas gingivalis strain ATCC 33277 and genomic comparison with strain W83 revealed extensive genome rearrangements in P. gingivalis.</a> DNA Res. 15 (4), 215-225 (2008).</li>
<li>Goebel, W., Kuhn, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacterial+replication+in+the+host+cell+cytosol%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Bacterial replication in the host cell cytosol.</a> Curr. Opin. Microbiol. 3 (1), 49-53 (2000).</li>
<li>Gospodarowicz, D. III <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((C.+Extracellular+matrix+and+control+of+proliferation+of+vascular+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">C. Extracellular matrix and control of proliferation of vascular endothelial cells.</a> J. Clin. Invest. 65 (6), 1351-1364 (1980).</li>
<li>DeQuach, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simple+and+high+yielding+method+for+preparing+tissue+specific+extracellular+matrix+coatings+for+cell+culture%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Simple and high yielding method for preparing tissue specific extracellular matrix coatings for cell culture.</a> PloS One. 5 (9), e13039(2010).</li>
<li>Sellers, J. R., Cook, S., Goldmacher, V. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+cytotoxicity+assay+utilizing+a+fluorescent+dye+that+determines+accurate+surviving+fractions+of+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol.+Methods%22%5BJournal%5D)">A cytotoxicity assay utilizing a fluorescent dye that determines accurate surviving fractions of cells.</a> J. Immunol. Methods. 172 (2), 255-264 (1994).</li>
<li>Van Veen, H. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+a+proton+motive+force+by+the+excretion+of+metal-phosphate+in+the+polyphosphate-accumulating+Acinetobacter+johnsonii+strain+210A%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Generation of a proton motive force by the excretion of metal-phosphate in the polyphosphate-accumulating Acinetobacter johnsonii strain 210A.</a> J. Biol. Chem. 269 (47), 29509-29514 (1994).</li>
<li>Jackson, V. N., Halestrap, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+kinetics%2C+substrate%2C+and+inhibitor+specificity+of+the+monocarboxylate+%28lactate%29+transporter+of+rat+liver+cells+determined+using+the+fluorescent+intracellular+pH+indicator%2C+2%27%2C7%27-bis%28carboxyethyl%29-5%286%29-carboxyfluorescein%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">The kinetics, substrate, and inhibitor specificity of the monocarboxylate (lactate) transporter of rat liver cells determined using the fluorescent intracellular pH indicator, 2',7'-bis(carboxyethyl)-5(6)-carboxyfluorescein.</a> J. Biol. Chem. 271 (2), 861-868 (1996).</li>
<li>He, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+Porphyromonas+gingivalis+FeoB2+in+metal+uptake+and+oxidative+stress+protection%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Role of Porphyromonas gingivalis FeoB2 in metal uptake and oxidative stress protection.</a> Infect. Immun. 74 (7), 4214-4223 (2006).</li>
<li>Anaya-Bergman, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Porphyromonas+gingivalis+ferrous+iron+transporter+FeoB1+influences+sensitivity+to+oxidative+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Porphyromonas gingivalis ferrous iron transporter FeoB1 influences sensitivity to oxidative stress.</a> Infect. Immun. 78 (2), 688-696 (2010).</li>
<li>Ueshima, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purification%2C+gene+cloning%2C+gene+expression%2C+and+mutants+of+Dps+from+the+obligate+anaerobe+Porphyromonas+gingivalis%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Purification, gene cloning, gene expression, and mutants of Dps from the obligate anaerobe Porphyromonas gingivalis.</a> Infect. Immun. 71 (3), 1170-1178 (2003).</li>
<li>Johnson, M. B., Criss, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescence+microscopy+methods+for+determining+the+viability+of+bacteria+in+association+with+mammalian+cells%5BTitle%5D)+AND+%22JoVE%22%5BJournal%5D)">Fluorescence microscopy methods for determining the viability of bacteria in association with mammalian cells.</a> JoVE. (79), (2013).</li>
<li>Cordes, T., Maiser, A., Steinhauer, C., Schermelleh, L., Tinnefeld, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+and+advancement+of+antifading+agents+for+fluorescence+microscopy+and+single-molecule+spectroscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Physical+Chemistry+Chemical+Physics%22%5BJournal%5D)">Mechanisms and advancement of antifading agents for fluorescence microscopy and single-molecule spectroscopy.</a> Physical Chemistry Chemical Physics. 13 (14), 6699-6709 (2011).</li>
<li>Pawley, J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPawley%2C+J+%22Handbook+of+biological+confocal+microscopy%22">Handbook of biological confocal microscopy</a>. , (2010).</li>
<li>Gursoy, U., Könönen, E., Uitto, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevotella+intermedia+ATCC+25611+targets+host+cell+lamellipodia+in+epithelial+cell+adhesion+and+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+Microbiol.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Prevotella intermedia ATCC 25611 targets host cell lamellipodia in epithelial cell adhesion and invasion.</a> Oral Microbiol. Immunol. 24 (4), 304-309 (2009).</li>
<li>Sengupta, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interaction+of+Prevotella+intermedia+strain+17+leucine-rich+repeat+domain+protein+AdpF+with+eukaryotic+cells+promotes+bacterial+internalization%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Interaction of Prevotella intermedia strain 17 leucine-rich repeat domain protein AdpF with eukaryotic cells promotes bacterial internalization.</a> Infect. Immun. 82 (6), 2637-2648 (2014).</li>
<li>Reyes, L., Herrera, D., Kozarov, E., Roldán, S., Progulske-Fox, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Periodontal+bacterial+invasion+and+infection%3A+contribution+to+atherosclerotic+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Periodontol%22%5BJournal%5D)">Periodontal bacterial invasion and infection: contribution to atherosclerotic pathology.</a> J. Clin. Periodontol. 40, S30-S50 (2013).</li>
<li>Grant, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxygen+tension+modulates+the+cytokine+response+of+oral+epithelium+to+periodontal+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Periodontol%22%5BJournal%5D)">Oxygen tension modulates the cytokine response of oral epithelium to periodontal bacteria.</a> J. Clin. Periodontol. 37 (12), 1039-1048 (2010).</li>
<li>Biedermann, A., Kriebel, K., Kreikemeyer, B., Lang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interactions+of+Anaerobic+Bacteria+with+Dental+Stem+Cells%3A+An+In+Vitro+Study%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Interactions of Anaerobic Bacteria with Dental Stem Cells: An In Vitro Study.</a> PloS One. 9 (11), e110616(2014).</li>
<li>Kriebel, K., Biedermann, A., Kreikemeyer, B., Lang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anaerobic+Co-Culture+of+Mesenchymal+Stem+Cells+and+Anaerobic+Pathogens-A+New+In+Vitro+Model+System%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Anaerobic Co-Culture of Mesenchymal Stem Cells and Anaerobic Pathogens-A New In Vitro Model System.</a> PloS One. 8 (11), e78226(2013).</li>
<li>Peyyala, R., Kirakodu, S. S., Novak, K. F., Ebersole, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oral+microbial+biofilm+stimulation+of+epithelial+cell+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Cytokine%22%5BJournal%5D)">Oral microbial biofilm stimulation of epithelial cell responses.</a> Cytokine. 58 (1), 65-72 (2012).</li>
<li>Halldorsson, S., Lucumi, E., Gòmez-Sjöberg, R., Fleming, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advantages+and+challenges+of+microfluidic+cell+culture+in+polydimethylsiloxane+devices%5BTitle%5D)+AND+%22Biosens+Bioelectro%22%5BJournal%5D)">Advantages and challenges of microfluidic cell culture in polydimethylsiloxane devices.</a> Biosens Bioelectro. 63, 218-231 (2015).</li>
<li>Iyer, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AdpC+is+a+Prevotella+intermedia+17+leucine-rich+repeat+internalin-like+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">AdpC is a Prevotella intermedia 17 leucine-rich repeat internalin-like protein.</a> Infect. Immun. 78 (6), 2385-2396 (2010).</li>
</ol>

לסופרים אין מה לחשוף.

כל השיטות הנ&quot;ל יכולות לשמש כדי לתכנן מבחני ספציפיים על מנת להעריך את האינטראקציה של חיידקים אנאירוביים עם תאים האיקריוטים. עם זאת, יש כמה שיקולים לבצע בהצלחה את הניסויים. הם ראשון זני חיידקים לשימוש במחקר. זה חיוני בהשוואה של שני זנים עם שני assay ההישרדות, כמו גם על ידי ניתוח מיקרוסקופי שהם נמצאים בשלבי צמיחה דומים ולהשיג ריכוזי תא דומים להבדלים בלעיל יכול להשפיע יעילות פלישת 13. כאשר עקומות גדיל...

חיידקים אנאירוביים ליישב כמעט כל משטחים של הגוף האנושי. למרות דומיננטי בצמחייה של קטעי מעיים ומין ושתן שבו ריכוזי חמצן נמוכים, הם קיימים גם ברמות גבוהות על העור, פה, האף והגרון 1. חיידקים אנאירוביים הם גורם נפוץ של זיהומי אנדוגני ולעתים קרובות מבודדים מאתרים נגועים. עם זאת, בגלל אופיים האנין, אנאירוביים יכול להיות קשה לבודד ותרבות. מחקרים שכלל חיידקים אנאירוביים חייבים להיעשות בתנאים מוגבלים. טכניקות אנאירובי-תרבות מודרניות מאפשרות לחוקרים לחקות את הגדרות אנאירובי נדרשו ללמוד הרבה זני מעבדה אנאירובי או אפילו מבודד קליני 2,3. חיידקים אנאירוביים פתוגניים פיתחו מערכת יחסים דינמיות ושיתוף אבולוציה עם תאי המארח שבו הם מתגוררים. רוב אנאירוביים רגישים להרג על ידי התגובה החיסונית המארח לפני שהגיע infectiרמות היחידות הארגוניות. עם זאת, כמה חיידקים פתוגניים פיתחו מנגנונים לברוח מאו לחתור תחת התגובה החיסונית המארח. הם להשיג מטרה זו באמצעות מנגנונים כגון התחמקות של הכרה חיסונית, נטרול של מתווכים חיסוניים, שינוי של חסינות תא בתיווך, פלישה של תאי מארח, ושינוי של חיסון איתות 4. Porphyromonas gingivalis, anaerobe גראם שלילי מעורב בשני אוראליים ו מחלות extraoral, הוא דוגמא אחת לפתוגן חיידקים המותאם ביותר מסוגל לגרום שינויים פתוגניים במארח 5-7. כיסים של שלט biofilm נצברו בנקיקים עמוקים שנוצרו בין השיניים וחניכיימיים הרקמה רירית יכול נמל חיידקים אנאירוביים שמוגנים מחמצן אטמוספרי 8. כיסי חניכיים אלו משמשים כנישה לפתוגנים אנאירובי שונים, כגון פ gingivalis 9. פ gingivalis הוא הפתוגן אבן הראשה כי הוא מסוגל לשפץing קהילת חיידקי הפה בדרכים שיקדמו התפתחות והתקדמות של מחלות חניכיים 10. היא מייצרת מספר רב של גורמים ארסי הפועלים נגד קשת רחבה של חלבוני מארח ומספק מנגנונים להתחמקות של הגנות מארח 11. הוא גם מסוגל לפלוש לאפיתל, אנדותל, fibroblastic, ותאי רצועת חניכיים במבחנה 12-14 וin vivo 15. על ידי יעילות פולש תאי מארח, פ gingivalis יכול לברוח חסינות מארח. פלישה אפקטיבית של תאי מארח מאפשרת לא רק החיידק לברוח הגנות מארח, אלא גם משמשת כמאגר לזיהום מחדש בעתיד, כמו גם משנה את התא המארח. מחקרים של המנגנונים המולקולריים המעורבים בהדבקה והפנמה של החיידק על ידי תאי מארח יש צורך. בהבנת האירועים המולקולריים הקשורים בהפנמה של פ מחקר במספר מעבדות מתמקד gingivalis על ידי תאי המארחכמו גם את המנגנונים המשמשים לדיכוי ולחטוף את התגובה החיסונית ולשרוד את מנגנוני הגנת מארח העוינים. יש מבחני רבים מסוגלים לזהות ולאפיין פתוגנים המסוגלים פולש תאי מארח. עם זאת, מחקרים במבחנה עם פתוגנים אנאירובי מציבים בעיות ניסיוניות רבות לחוקר בעיקר משום שקשה לבצע מחקרים המסתמכים על מכשירים מגושמים בהיעדר חמצן. זה מורכב על ידי העובדה שתאים האיקריוטים דורשים חמצן כדי לגדול, וכך צריך להיות מוכנות בנפרד בחממות בתרבית רקמה. דרך אחת למנוע מכשולים כזה תהיה לבצע מחקרים בחמצן באטמוספרה, אבל זה יהפוך את הצמיחה של חיידקים אנאירוביים בלתי אפשרית. שיטה נוספת תהיה להשתמש חיידקים נהרגו חום להדביק וללמוד אינטראקציות מארח תאים. עם זאת, קיימים הבדלים בין חיידקים נהרגו חום ובת קיימא שיקטינו את הרלוונטיות של interacti מארח הפתוגןב -16 ב. היא מרכזית ללמוד חיידקי קיימא עם ביטוי ללא שינוי באינטראקציה עם תאי מארח; לכן, שיטות לculturing פ gingivalis בהגדרת אנאירובי מקבל. כמו כן, שני פרוטוקולים חסכוניים פשוטים הם הפגינו להערכת יכולתה של פ gingivalis להיות מופנם על ידי תאים אנושיים טבור וריד אנדותל (HUVECs). הפרוטוקול הראשון מבוסס על assay הגנת האנטיביוטיקה הפופולרי. למרות assay הוא פשוט, ניתנים שיקולים בעת שימוש במייקרו-אורגניזמים אנאירובי. הפרוטוקול השני דורש שימוש במיקרוסקופ סריקת ניאון כדי לחזות אינטראקציה והפנים פ gingivalis. לכל assay מגבלות ויתרונות שיידונו לספק חוקר מתווה ללימוד הפולשנות של חיידקים אנאירוביים. למרות שכתב היד הנוכחית לומדת פ gingivalis וHUVECs, פרוטוקולים אלה יכולים לשמש להרבה חיידקים אנאירוביים אחרים גם כןכעבור סוגים אחרים של תאי מארח.

<table><tbody><tr><td>ויניל תא אנאירובי סוג B</td><td>מוצרי</td><td></td> מעבדה <td>קוי דגם 2000 אינקובטור&nbsp;</td></tr><tr><td>TSA II Trypticase אגר סויה עם 5% דם כבשים</td><td>BBL</td><td>221261</td><td></td></tr><tr><td>תאי אנדותל וריד טבורי אנושי 10 תורמים</td><td>Pool LifeLine Technology</td><td>FC-0044</td><td></td></tr><tr><td>VascuLife VEGF ערכה שלמה בינונית</td><td>LifeLine Technology</td><td>LL-0003</td><td></td></tr><tr><td>TrypKit</td><td>LifeLine</td><td>LL-0013</td><td></td></tr><tr><td>Saponin</td><td>Riedel-de Haen</td><td>16109</td><td></td></tr><tr><td>מלח ג'נטמיצין סולפט</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>G-1264</td><td></td></tr><tr><td>מטרונידזול</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>M-3761</td><td></td></tr><tr><td>BCECF-AM</td><td>LifeTechnologies</td><td>B1150</td><td></td></tr><tr><td>TRITC פלואידין&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1951</td><td></td></tr><tr><td>18 מ"מ כיסויים עגולים</td><td>מדעי מיקרוסקופיה אלקטרונית</td><td>72222-01</td><td></td></tr><tr><td>מדיום הרכבה VectaShield עם</td><td>DAPI Vector Laboratories</td><td>H-1200</td><td></td></tr></tbody></table>

gingivalis porphyromonas כאורגניזם מודל להערכת אינטראקציה של חיידקים אנאירוביים עם תאי מארח

Porphyromonas gingivalis as a Model Organism for Assessing Interaction of Anaerobic Bacteria with Host Cells

חיידקים אנאירוביים הרבה משיעור aerobes בהרבה נישות אנושיות כגון הבטן, פה, ונרתיק. יתר על כן, זיהומים אנאירוביים נפוצים ולעתים קרובות ממוצא ילידים. היכולת של כמה פתוגנים אנאירובי לפלוש תאים אנושיים נותנת להם אמצעי הסתגלות לברוח חסינות מולדת, כמו גם לווסת מארח התנהגות תא. עם זאת, על מנת להבטיח כי החיידקים אנאירוביים הם חיה במהלך החקירה ניסויית של האירועים יכולים להוות אתגר. Gingivalis Porphyromonas, anaerobe גראם שלילי, הוא מסוגל פולש מגוון של תאים שאינם phagocytic האיקריוטים. מאמר זה מתאר כיצד בהצלחה התרבות ולהעריך את היכולת של פ gingivalis לפלוש תאים אנושיים וריד טבור אנדותל (HUVECs). שני פרוטוקולים שפותחו: אחד למדוד חיידקים שהצלחה יכולה לפלוש ולשרוד בתוך המארח, והשני כדי להמחיש חיידקי אינטראקציה עם תאי מארח. טכניקות אלו מצריכות שימוש בanaerobic קאמרי לספק פ gingivalis עם סביבת אנאירובי לצמיחה אופטימלית. הפרוטוקול הראשון מבוסס על assay הגנת האנטיביוטיקה, המשמש במידה רבה כדי ללמוד את הפלישה של תאי מארח על ידי חיידקים. עם זאת, assay הגנת האנטיביוטיקה הוא מוגבל; רק חיידקים תאיים שculturable הבא טיפול אנטיביוטי ותמוגה תא מארח נמדדים. כדי להעריך את כל חיידקי אינטראקציה עם תאי מארח, שני חיים ומתים, שפיתחנו פרוטוקול המשתמש במיקרוסקופ פלואורסצנטי לבחון אינטראקציה מארח הפתוגן. חיידקים שכותרתו fluorescently עם 2 &#39;, 7&#39;-ביסה (2-carboxyethyl) -5- (ו- 6) -carboxyfluorescein acetoxymethyl אסתר (BCECF-AM) ושימש להדביק תאים האיקריוטים בתנאים אנאירוביים. בעקבות תיקון עם paraformaldehyde וpermeabilization עם 0.2% Triton X-100, תאי מארח מסומנים עם phalloidin TRITC וDAPI לתייג שלד תא התא וגרעין, בהתאמה. הר&quot;י מרובהGES נלקחה בנקודות שונות מוקד (Z-ערימה) מתקבלת להדמיה זמנית-מרחבי של חיידקים. שיטות ששמשו במחקר זה יכול להיות מיושמות על כל anaerobe לעיבוד חקלאי וכל סוג תא האיקריוטים.

פרוטוקולים שתוארו לעיל שמשו בלימוד האינטראקציה מארח הפתוגן בין פ gingivalis ותאי האנדותל. פ gingivalis W83 ופ gingivalis V3150 ביצוע מחיקה של PG0228 שימש במחקר. PG0228 צפוי לקודד חלבון שעשוי לשנות את הרמות של RNA וחלבונים, אשר עשוי להשפיע בסופו של אינטראקציה של פ gingivalis עם תאי מארח. כדי לחקור את ההשפעה של PG0228 על פ של gingivalis היכולת ליצור אינטראקציה עם תאי מארח, את היכולת של זני ההורים ומוטציה לאינטראקציה עם HUVECs הוש...

מאמר זה מציג שני פרוטוקולים: האחד למדידת חיידקים אנאירוביים שיכולים לפלוש ולשרוד בהצלחה בתוך המארח, והשני לדמיין חיידקים אנאירוביים מקיימים אינטראקציה עם תאים מארחים. ניתן ליישם מחקר זה על כל אנאירובי הניתן לעיבוד וכל סוג תא אוקריוטי.

gingivalis Porphyromonas כאורגניזם מודל להערכת אינטראקציה של חיידקים אנאירוביים עם תאי מארח

Anaerobic bacteria far outnumber aerobes in many human niches such as the gut, mouth, and vagina. Furthermore, anaerobic infections are common and ...

המטרה הכללית של סרטון זה היא להדגים פרוטוקולים להערכת האינטראקציה של חיידקים אנאירוביים עם תאי מאכסן. התנאים המשמשים לתרבית תאי מאכסן הם רעילים לחיידקים אנאירוביים ולהיפך. מצב זה מהווה אתגר בחקר האינטראקציות ביניהם, ויש להשיג תנאים אופטימליים עבור שניהם כדי שימשיכו להיות פעילים מטבולית במהלך תקופת המחקר.תנאים אלו ישקפו באופן מדויק יותר את תרחיש האינטראקציה בין המאחס לפתוגן המתרחשת in vivo. השיטה המוצגת כאן תסייע במתן תשובות לשאלות הנוגעות למנגנונים המעורבים בהישרדות מיקרובית, כמו גם בקישור ובהפנמה של תאי חיידקים אנאירוביים במהלך זיהום. באופן כללי, אנשים שאינם מנוסים בשיטה זו עשויים להתקשות, מכיוון שעבודה עם חיידקים אנאירוביים דורשת ידע בשימוש בתא אנאירובי ובטכניקות סטריליות נאותות.הדגמה חזותית של שיטה זו היא קריטית, שכן השלבים הכוללים שימוש בתא אנאירובי הם קשים ללמידה. כמו כן, יש לנקוט משנה זהירות בעת ניסויים עם תאי אנאירובי לצורך תרבית וניסויים עם *Porphyromonas gingivalis*. תא אנאירובי מויניל מתוחזק עם אטמוספירה מלאכותית המכילה 80% nitrogen, 10% hydrogen ו-10% carbon dioxide; יש להניח בתוך התא האנאירובי 30 צלחות blood agar, 500 milliliters של PBS ו-30 milliliters של מצע vascular endothelial growth factor או VEGF.24 שעות מראש, כדי להביא את הריאגנטים לשיווי משקל, זרעו 4×10⁵ תאי אנדותל של וריד טביליות אנושי (HUVECs) לכל באר בפלטות של 6 בארות במדיום VEGF, והשאירו אותם באינקובטור לתרביות תאים למשך הלילה לצורך היצמדות. הכינו תרביות של *Porphyromonas gingivalis* במדיום Brain Heart Infusion, או BHI, כפי שמתואר בטקסט הנלווה, ואפשרו לתרביות להגיע לשלב הלוג (log phase), כאשר הצפיפות האופטית של התרבית ב-660 nanometers נעה בין 0.5 ל-0.7. העבירו את החיידקים לשפופרת של 15 milliliter ועטפו פיסת פאראפילם סביב הפקק כדי למנוע סגירה אירובית.לאחר מכן, סנטריפוגו את החיידקים ב-5,000 times G למשך 10 דקות בתוך התא אנאירובי. שטפו את משקע החיידקים ב-PBS אנאירובי וסנטריפוגו שוב ב-5,000 times G למשך 10 דקות. השעירו את החיידקים במדיום VEGF כדי להדביק את ה-HU X באמצעות העברה פרומינוסית.העבירו את פלטות שש הבארות מהאינקובטור לתאנאירובי, שאבו את המצע מהבארות הניסיוניות ושטפו שלוש פעמים עם PBS אנאירובי. קבעו את מספר התאים מבער נציגה אחת באמצעות בדיקת הדירה של trypan blue. לאחר מכן, הוסיפו שתי מיליליטר לכל בארה של מצע VEGF אנאירובי והניחו את הפלטות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס באינקובטור אנאירובי למשך 20 דקות. כדי להגיע לשיווי משקל, קבעו את הצפיפות האופטית של החיידקים וביצעו סספנזיה.דוהקו אותם בנפח מתאים של מצע VEGF כדי להדביק תאים בריבוי הדבקה (multiplicity of infection) של יחס של 100 חיידקים לתא אחד. הוסיפו את תרחיף החיידקים לתאים והדגירו למשך 30 דקות ב-37 °C לצורך הדבקה וליזיס של התאים בתוך התא אנאירובי. הכינו תמיסת ספונין בריכוז 1% משקל לנפח במצע BHI וסננו דרך מסנן של 0.2 micron כדי לחקור אינטראקציות של חיידקים עם תאי מאכסן.הוצא את הפלטה בעלת ששת הבארים מהאינקובטור ושאב את מצע ההדבקה. שטוף שלוש פעמים עם PBS אנאירובי. לאחר מכן, הוסף שני מיליליטר של תמיסת ספונין לכל באר והדגר למשך 15 דקות כדי לאפשר ליזיס של התאים.בשלב הבא, גרדו את התאים מתחתית הבאר ודללו את ליסאט התאים ביחס של אחד לאחד עם מצע BHI. לאחר מכן, בצעו מהלולת דילול החל מיחס של אחד ל-100, וזרועו 200 µL של דילול מתאים על צלחות אגר דם. עטפו את הצלחות ב-perfil והדגירו אותן באינקובטור אנאירובי בטמפרטורה של 37 °C למשך שבעה ימים כדי לאפשר היווצרות מושבות.לאחר מכן, בעזרת שולחן אור, ספרו את היחידות יוצרות המושבות (CFUs) בכל צלחת בעקבות ההדבקה של תאי HU E. שטפו את התאים שלוש פעמים ב-PBS אנאירובי. לאחר מכן, הוסיפו שני מיליליטר של מצע VEGF המועשר בריכוזים אופטימליים של אנטיביוטיקה לתאי ה-HU E.דגרו את התאים למשך שעה אחת, שאבו את המצע והוסיפו לכל באר 2 mL של תמיסת saponin בריכוז 1% ב-BHI, ודגרו למשך 15 דקות. לאחר מכן, גרדו את התאים שעברו ליזיס ואספו את הליזאט לשפופרת צנטריפוגה. דללו את הליזאט ביחס של 1:1 עם מצע BHI, ולאחר מכן הכינו דילולות סדרתיות החל מיחס של 1:100.פרוסו 200 microliters מהריכוזים המתאימים על מצעי אגר דם. הרשו לחיידקים לגדול במשך שבעה ימים בתא אנאירובי ולאחר מכן ספרו את המושבות.שיטת הפריסה המתוארת משקללת רק את החיידקים החיים המקיימים אינטראקציה עם התאים. כדי להתגבר על חיסרון זה, אנו משתמשים במיקרוסקופיה שבאמצעותה ניתן להדמיות הן חיידקים חיים והן חיידקים מתים הקשורים לתא. כדי להדמיות חיידקים שהפנימו לתא, ראשית העבר באופן אספטי מהאוטוקלאב.הניחו כיסויי זכוכית בתוך כל באער של פלטת 12 באערים, בריכוז של 5×10⁴ חלקיקים לבאער על הכיסוי. הדגרירו למשך 24 שעות לסמן את החיידקים, סבבו בצנטריפוגה, השלימו את תהליך סמיכות החיידקים, והשעיקו מחדש את המשקע ב-PBS אנאירובי; סבבו שוב בצנטריפוגה וחזרו על שלב השטיפה. הוסיפו 20 µL של 0.2 mM B-C-E-C-F-A-M לשני מיליליטר של PBS אנאירובי המכיל 5-7×10⁸.דגרו את החיידקים למילליליטר בטמפרטורה של 37 °C למשך 30 דקות בחושך. הצבע הפלואורסצנטי שבו אנו משתמשים יכול לצבוע את רוב החיידקים האנאירוביים, ולכן אין צורך בריאגנטים נוספים כגון נוגדן ספציפי. סבב את תרחיף החיידקים בצנטריפוגה במהירות של 5,000 ×g למשך 10 דקות כדי להסיר את ריאגנט הסימון שאינו קשור, והשביו את החיידקים למצב של סספנסיה בתווך VEGF.לאחר מכן, הדביקו את תאי ה-UIC ביחס של 100 חיידקים לתא אחד והדגירו בטמפרטורה של 37 °C למשך 30 דקות. לאחר הדגירה, הסירו את מצע ההדבקה ושטפו את התאים שלוש פעמים עם PBS. לאחר מכן, הוסיפו 4% paraaldehyde והדגירו בטמפרטורת החדר למשך 10 דקות.כדי לקבע את התאים בתא אנאירובי, הוצא את התאים המקובעים מהתא ולאחר מכן שטוף את לביבות הכיסוי (cover slips) עם PBS שלוש פעמים. הדגר את לביבות הכיסוי ב-1 mL של 0.2% Triton X 100 למשך 10 דקות כדי להגדיל את חדירות התאים. לאחר מכן, שטוף שוב את לביבות הכיסוי עם PBS שלוש פעמים. הוסף 50 µL של 50 µg/mL של T-R-I-T-C phalloidin לכל לביבת כיסוי והדגר למשך 45 דקות בטמפרטורת החדר כדי לצבוע אקטין אוליגומרי תאי.לאחר הדגירה, שטפו את כיסוי הזכוכית ב-PBS 3 פעמים. הפכו את כיסוי הזכוכית על גבי שלגיה עם מדיום קיבוע רך המכיל 1 µg/mL DAPI לצביעת גרעינים. לאחר מכן, אטמו את היקף כיסוי הזכוכית בעזרת לק ציפורים ובחנו באמצעות מיקרוסקופ קונפוקאלי את האינטראקציה של החיידק האנאירובי.בתוצאות אלו מוצגים Porphyromonas gingivalis עם uve. דילול סדרתי של התאים, שהליזאט שלהם הכיל חיידקים שהתחברו לתא או שהופנמו בתוכו, עד לפי 100 פעמים, הניב מספר ספיר של CFUs על צלחות אגר דם. מוצגת כאן השוואה של תנובת ה-CFU על צלחות אגר שבעה ימים לאחר האינקובציה, בין זיהום על ידי Porphyromonas gingivalis W 83 מסוג wildtype לבין זיהום על ידי מוטנט מחיקה V 315.המוטציה משפיעה על יכולת ההדבקה של החיידק. ה-VE המוצג כאן הוא ייצוג גרפי של מושבות חיידקים שהופקו מתאים נגועים. כאשר נבחנה האינטראקציה, הופקו פחות חיידקים מוטנטים מתאים נגועים בהשוואה לזן הפרא (wild type).התוצאות שהתקבלו לאחר השמדת החיידקים החוץ-תאיים באמצעות טיפול באנטיביוטיקה מוצגות בעמודות הימניות. שוב, זן המוטציה היה לא יעיל בפלישה לתאי uve בחיים. חיידקים נצפים לאחר סימון באמצעות BCE CFAM.צביעה נוספת של סיבי האקטין ושל גרעין התא נראית בفلואורסצנציה אדומה וכחולה, בהתאמה. לאחר רכישת מיומנות, ניתן לבצע כל אחת מהטכניקות הללו בתוך שש שעות אם הן מבוצעות כראוי. בעת ביצוע פרוצדורה זו, חשוב לזכור לשמור על החיידקים בתנאים אנרוביים, וכן להשוות את כל המדיות והציוד בתא האנרובי למשך עד 24 שעות לפני הניסוי.יש לזכור כי עבודה עם פתוגנים אנאירוביים עלולה להיות מסוכנת ביותר, ויש לנקוט תמיד באמצעי זהירות כגון הרכבת כפפות, שטיפת ידיים ושימוש בטכניקות סטריליות בעת ביצוע פרוצדורה זו. לפיכך, שיטה זו יכולה לספק תובנות לגבי פתוגנים פרה-דנטליים. ניתן ליישמה גם במערכות אחרות כגון אספירציה, דלקת ריאות, זיהומים תוך-בטניים, זיהומים גינקולוגיים וזיהומים אנאירוביים רבים אחרים הנמצאים באתרים שונים בגוף האדם.ההשלכות של טכניקה זו משתרעות על הטיפול התרופתי שלנו עבור פתוגנים אנאירוביים שונים, כיוון שניתן להוסיף בקלות מדדים מעכבים לפרוטוקול ולמדוד ישירות את ההפנמה לאחר הטיפול. לאחר צפייה בסרטון זה, תרכשו הבנה טובה לגבי האופן שבו ניתן לגדל חיידקים אנאירוביים ולהעריך את יכולתם לקיים אינטראקציה עם תאי מאחס.

porphyromonas-gingivalis-as-model-organism-for-assessing-interaction

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

מקור: קלטאיוד ארויו, מ., ואחרים. הערכת הכדאיות של קונסורציום חיידקים סינתטי בממשק המארח-מיקרוב המעי במבחנה. J. Vis. Exp. (2018).סרטון זה מדגים מודל של מארח-מיקרוב במעי במבחנה לחקר חיוניות חיידקים. קו-קולטורה של תאי Caco-2 ו-HT29-MTX מדוגרת עם חיידקים שעברו טיפול מוקדם בתנאי עיכול מדומים. שלמות מחסום האפיתל מוערכת באמצעות התנגדות חשמלית טרנס-אפיתליאלית, וחלקים מהתווך, הריר הממס, הליזאט התא ושאריות התא נאספים לניתוח במורד הזרם.

מודל המעי במבחנה להערכת הידבקות ואינטרנליזציה של חיידקים

Source: Calatayud Arroyo, M., et al. Assessing the Viability of a Synthetic Bacterial Consortium on the In Vitro Gut Host-microbe Interface. J. Vis. Exp. (2018)The video demonstrates a method to evaluate the viability of anaerobic oral bacteria using fluorescent dyes and flow cytometry. It begins with culturing bacteria in oxygen-free broth, followed by resuspending a single colony from a blood agar plate. After incubation and dilution, the culture is stained with membrane-permeable and...

Fluorescence-Based Viability Assessment of Oral Anaerobic Bacteria

Source: Alshehri, M. et. al., Organotypic Tissue Model Systems for Investigating Host-Pathogen Interactions In Vitro. J. Vis. Exp. (2025)This video demonstrates a co-culture model using multi-species oral biofilms and human oral epithelium. It highlights epithelial immune activation and enables the downstream analysis of host-pathogen interaction.

A Transwell Tissue Model for Studying Interactions Between Human Oral Biofilms and Epithelium

סרטון זה מדגים טכניקה להערכת היכולת של Porphyromonas gingivalis, חיידק פתוגני אנאירובי, להיצמד ולפלוש לתאי אנדותל של ורידים טבוריים אנושיים (HUVECs). לאחר הדבקת תאי המאכסן בחיידק, התאים המארחים עוברים ליזה כדי לשחרר חיידקים דבוקים ומופנמים. כאשר הליזט מצופה בתווך מתאים, נוכחות מושבות מעידה על אינטראקציות מוצלחות בין חיידקים לתאים מארחים.

בדיקת זיהום חיידקי לחקר אינטראקציות אנאירוביות בין חיידקים לתאים מארחים

בסרטון זה, אנו מדגימים הליך לדמיין Porphyromonas gingivalis מופנם, חיידק פתוגני אנאירובי, בתוך תאי אנדותל אנושיים באמצעות מיקרוסקופ קונפוקלי. החיידקים מוכתמים בצבע פלואורסצנטי בעוד ששלד התא האנדותל המארח אקטין מסומן בצבע פלואורסצנטי אחר. Porphyromonas gingivalis המופנמים בתוך תאי אנדותל מומחשים באמצעות מיקרוסקופ קונפוקלי.

הדמיה של חיידקים אנאירוביים מופנמים בתוך תאי אנדותל מארחים

בסרטון זה, אנו מדגימים בדיקה להערכת הישרדות Porphyromonas gingivalis בתוך תאי אנדותל אנושיים. מדד ההישרדות והצמיחה של Porphyromonas gingivalis מופנם מוערך על ידי מספר המושבות על צלחת אגר הדם.

הערכת Porphyromonas gingivalis מופנמת בתאי אנדותל מארחים

מודלים של בעלי החיים הוכיחו להיות כלי רב ערך בהגדרת מנגנונים ספציפיים מארח ופתוגן שתורמים להתפתחות של דלקת כרונית. כאן אנו מתארים מודל עכבר של זיהום אוראלי עם הפתוגן האנושי Porphyromonas gingivalis ומתודולוגיות פרט כדי להעריך את ההתקדמות של דלקת באתרים מקומיים ומערכתיים.

מודל של עכברים של דלקת כרונית הנגרם על ידי פתוגן באתרים מקומיים ומערכתיים

אינטראקציות מארח-חיידק מעיים היו העריכו באמצעות גישה מוזרה שילוב קהילה אוראלי סינתטי במבחנה במערכת העיכול עיכול, דגם של האפיתל המעי הדק. אנו מציגים שיטה שבה ניתן להתאים כדי להעריך את התא הפלישה של גורמי מחלה, biofilms מינים רב, או אפילו כדי לבדוק את השרידות של פרוביוטיקה ניסוחים.

הערכת הכדאיות של קונסורציום חיידקי סינתטי על הממשק מארח-חיידק במעיים במבחנה

הפרוטוקול הנוכחי מתאר את היישום של מודלים של רקמות אורגנוטיפיות לחקירת אינטראקציות מארח-פתוגן במבחנה. באופן ספציפי, מערכת המודל המתוארת משתמשת באפיתל אוראלי רב שכבתי החשוף למיקרואורגניזמים הקשורים לביופילמים (רובד שיניים) בהקשר של בריאות הפה לעומת מחלות.

מערכות מודל רקמות אורגנוטיפיות לחקירת אינטראקציות מארח-פתוגן במבחנה

אנו מתארים פרוטוקול לזיהוי תפקידי מפתח של מולקולות איתות מארחת בשכפול של וירוס ההרפס ממוסס מודל, גמא 68 ההרפס (γHV68). ניצול זני עכבר מהונדס גנטי ופיברובלסטים עובריים לשכפול ממוסס γHV68, הפרוטוקול מאפשר גם אפיון פנוטיפי וחקירה מולקולרית של אינטראקציות וירוסים מארחים בשכפול ממוסס נגיפי.

אינטראקצית מארח וירוס ביתור בשכפול של וירוס ההרפס ממוסס דגם

למד פרוטוקולים להערכת אינטראקציה של חיידקים אנאירוביים עם תאי מארח באמצעות Porphyromonas gingivalis. השיטה מאפשרת מדידת חדירה והישרדות חיידקית בתנאים אנאירוביים.

gingivalis Porphyromonas כאורגניזם מודל להערכת אינטראקציה של חיידקים אנאירוביים עם תאי מארח

גלה סרטונים נוספים