Name: אופטימיזציה של assay Scratch הפצע כדי לזהות שינויים בנדידת תאי Murine mesenchymal סטרומה לאחר נזק על ידי תמצית עשן סיגריות מסיס (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-12-03T10:15:00.000+00:00
Duration: 8 min 40 s
Description: חקור שינויים בנדידת תאי מזנכימל סטרומה ריאתיים עכבריים לאחר נזק בתמצית עשן סיגריות מסיס באמצעות שיטת Scratch assay. שיטה זו מספקת מדידות כמותיות מדויקות לחקר ביולוגיה רגנרטיבית של הריאה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו אסירי תודה לחברי המעבדה האחרים על הסיוע הטכני שלהם בפיתוח מבחן הנזק של CSE, ועל התמיכה והייעוץ שלהם במהלך פיתוח בדיקה זו. בנוסף, אנו אסירי תודה לוועדת המלומדים של הצלב הקדוש פנוויק על תמיכתם בניקולס קורמייר, ולתוכנית המצטיינים של מכללת הצלב הקדוש על תמיכתם באלכסנדר יאו.

הערה: במחקר זה, תאי סטרומה mesenchymal ריאות (LR-MSCs) מרקמת הריאה דיסטלי היו מבודדים או המבוסס על ביטוים של סמנים פני התא (נג CD45, CD31 נג, 1-Sca נג הגבוה, EpCAM) 14,15, באמצעות explant את הצמיחה 16, או באמצעות עיכול אנזימטי 17. חסיד LR-MSCs היה בתרבית בDMEM עם גלוקוז גבוה ולא גלוטמין, FBS 15%, גלוטמין 1x האנטיביוטי / antimycotic, ו -2 מ&quot;מ (להלן תקשורת מלאה) וטופחו על 37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2. LR-MSCs היה passaged 3-4 פעמים על מנת להבטיח אוכלוסייה של תאים בעלי מאפייני צמיחה הומוגני יחסית עבור assay ההגירה. 1. הכנה חד שכבתי ומחוברות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לנתק MSCs מתרבות מנות 100 מ&quot;מ סטנדרטית, לשטוף תאים עם 10 מיליליטר של 37 מעלות PBS מראש חימם C, לשאוב PBS ולהוסיף 4 מיליליטר של טריפסין (0.25%). דגירה 3-5 דקות בחממה 37 ° C. לשאוב גאמות לתוך צינור חרוטי, להוסיף נפח שווה של תקשורת וצנטריפוגות המלאה ב 300 גרם במשך 5 דקות עד גלולה את התאים. הערה: דגירה ארוכה יותר בטריפסין יכולה לשנות את הקולטנים בתא שטח ופוטנציאל להשפיע הגירה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תקשורת לשאוב ותאים גלולים בתקשורת מלאה טרי. ספירת תאים, כולל תאים מתים באמצעות הרחקת trypan כחולה וצלחת תאי סטרומה 500,000 mesenchymal ב 4 מיליליטר של מדיה מלאה על צלחת תרבית תאי 60 מ&quot;מ. הערה: בהתאם למקור של התאים, בדיקות עשויות להיות נחוצות כדי לקבוע את המספר האופטימלי של תאים דרושים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה תאים עד צלחות ומחוברות 90% עבור קובץ מצורף תא אופטימלי ושגשוג, בדרך כלל 48-72 שעות לMSCs. הערה: מפגש 100% אינו מומלץ, שכן עיכוב רב מעגן תלוי קשר ניסיון תאים, אשר עשוי לשנות את יכולת הנדידה שלהם. צלחות עם מפגש פחות מ -80% יגרמו לתמונות שמישים כי תוכנת ניתוח תמונה תפרש פערים בין תאים כחלק מהמערכת של השריטה (ראה איור 1D). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר שהתאים הגיעו 90 מפגש%, לגרום נזק לתאים בהתאם ליישום. כדי להעריך תא נזק לאחר חשיפה לתמצית עשן סיגריות מסיסה (CSE), ליצור 100% CSE על ידי ציור העשן מהסיגריה מחקר 1 אוניברסיטת קנטאקי (3R4F) באמצעות 25 מיליליטר של מדיה מלאה בבקבוק ביכנר מעל 2 דקות 18. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה התאים עבור 24 שעות בCSE 4 מיליליטר 1-4% בדילול מלא בתקשורת. לאחר דגירה, לשטוף את התאים פעמיים עם 4 מיליליטר של PBS סטרילי החם, לפני החלפה עם תקשורת מלאה טרי 4 מיליליטר. הערה: תאי פגיעה בריכוזים גבוהים של תמצית עשן סיגריות (&gt; 5%) יכול להפחית באופן משמעותי מפגש. </li></ol> 2. יצירת Scratch <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בסביבת סטרילית, להסיר את המכסה מצלחת 60 מ&quot;מ של תאי גזע פגומים, ולהניח קצה ישר (לדוגמא שליט פלסטיק מעוקר) ACרוס השפה העליונה של הצלחת. מבלי להסיר את התקשורת, השתמש טיפ pipet סטרילי 200 μl מונחה על ידי סטרילי הקצה ישר לעשות 03:59 סריטות מקבילות פני הצלחת מלבד כ 5 מ&quot;מ ו -50 מ&quot;מ ארוך. הערה: קצה ישר ממזער את כמות ההתאמות הדרושות כדי סיבוב הצלחת כאשר הוא על הבמה מיקרוסקופ. זה הכרחי כי השריטות מופיעות אנכיות לחלוטין (או אופקית) על המסך. יצירת סריטות מרובות על צלחת 60 מ&quot;מ אינו משנה את המיקרו-הסביבה, באופן שמשפיע על נדידת תאים (מידע לא מוצג), אבל יכול להיות שיקול לסוגי תאים אחרים. השימוש בבארות קטנות יותר אינו מומלצת שכן ההשתנות של תאים גדלה קרוב לקצה של הבאר הופכת בולטת יותר ועלולה להשפיע על דור אחיד של סריטות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשאוב התקשורת ולשטוף בעדינות את הצלחות עם 2 מיליליטר של מדיה מלאה מראש חימם כדי למנוע מתאים מהדבקות במרכז של השריטה, וכדי להסיר תאיםים שכבר שחרר את ידי הגירוד. החלף עם 4 מיליליטר של מדיה מלאה טרי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות סמן קבע סטרילי, לתייג כל שריטה מ 1-4 על החלק התחתון של הצלחת במיקום זה לא יפריע הדמיה השריטות. הערה: חשוב שתמונות מאותו מאפס הן בהשוואה לפני ואחרי ההגירה, שכן יש יכולה להיות וריאציה ברוחב מאפס. </li></ol> 3. לוקחים תמונות ראשוניות של השריטה הערה: אם assay השריטה מתבצע על צלחות מרובות, מומלצת שהתמונות ראשוניות של כל השריטות על צלחת אחת נלקחות לפני סריטות נעשות על הצלחת הבאה. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש במיקרוסקופ לעומת שלב הפוך עם מצלמה כדי ליצור את התמונות דרושות לניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקם את צלחת התרבות על המיקרוסקופ, ולהשתמש במטרת צריכת החשמל הנמוכה (10X) כדי לאתר # שריטה 1. אם עיבוי על המכסה של צלחת תרבות פגיעה מתאר לעצמי ברור<html> דואר של התאים, להשתמש תפאורה מחוממת ל -37 מעלות צלזיוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמירה על השריטה לחלוטין אופקי ובמרכז שדה הראייה, להשיג תמונות רבות כמו צורך להקיף 90% מהאורך של השריטה. להשיג תמונות של חלקים שונים של השריטה ללא חפיפה בין תמונות. הערה: השבירה של אור בשולי צלחת תרבות overexposes תמונות, מה שהופך אותם בלתי אפשרי לנתח. לכן, לא לוקח תמונות מהראשונה ואחרונים 5% מהאורך של השריטה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשמור תמונות מכל שריטה בתיקייה נפרדת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלבים 3.2-3.4 לסריטות 2, 3, ו -4. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור צלחות לחממה מייד לאחר הדמיה ראשונית. בואו תאים לנדוד ל4-7 שעות. הערה: 7 שעות היא אופטימליות כאשר הערכת MSCs פגום עם מנוע חיפוש מותאם אישית. דוגרים תאים ליותר מ -7 שעות אינם מומלצים משום שהתפשטות תאים יכולה לפעול כמשתנה מתערב לנדידת תאים (ראו הערה אופציונלית 8.2 להלן). </li></ol>class = &quot;jove_title&quot;&gt; 4. ניתוח תמונות Scratch ראשוניות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הורד ImageJ ולהתקין את תוסף ריפוי פצע הכלי (עיין בטבלה של חומרים / ציוד). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתח את קובץ התמונה בImageJ, לאחר מכן לחץ על &quot;תהליך&quot; ו- &quot;מצא את הקצוות&quot; כדי להדגיש את התאים המקיפים את השריטה לכלי ריפוי פצע כדי לחשב את השטח מאפס (איור 2). לאחר מכן, לחץ על &quot;תמונה&quot;, &quot;להתאים&quot;, &quot;סף צבע&quot; ובתפריט הנפתח שכותרתו &quot;צבע סף&quot; לשנות את הערך ל&quot; B &amp; W. &quot; </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בתוך התפריט &quot;סף צבע&quot;, להתאים את שני מחווני סף הבהירות עד ניגוד אופטימלי בין חזית השריטה ותא מושגת. כדי לאפשר למגוון הרחב ביותר כאשר מנסה ליצור ניגוד בתמונה, הזז את המחוון התחתון לחלוטין לימין (תמונה שחורה לחלוטין), ולאחר מכן להתאים את המחוון העליון כדי ליצור ניגוד מרבי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאט לאט להתאים את BRI העליוןמחוון ghtness משמאל לימין עד לתמונה נקיה מציגה את קווי המתאר של השריטה (איור 2 ג). ברגע שהקצוות של השריטה זוהו, לחץ על &quot;כלים נוספים&quot; בסרגל כלי ImageJ, בחר &quot;MRI_Wound_Healing_Tool&quot; מהתפריט הנפתח, ולחץ על הכפתור &quot;m&quot; (שיופיע בסרגל כלי ImageJ) כדי להדגיש את אזור השריטה ופלט האזור ממוחשבים בחלון פופ-את תוצאות (איור 2 ד). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להעתיק ולהדביק את כל המספרים מחלון התוצאות (איור 2E) לגיליון אלקטרוני Excel. הקפד להפריד נתונים משריטות בודדות. </li></ol> 5. לוקחים תמונות סופיות של השריטה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחרי התאים היגרו (4-7 שעות), חזור על שלבים 3.2-3.4. תמונת הצלחות באותו סדר שהם גירדו כך שתאים על כל צלחת היו זמן שווה להגר. הערה: ניתן הדמיה התאים בנקודות זמן מרובות, בהתאם Sensitivity לשני שינויי הטמפרטורה וחומציות. לחלופין, הדמיה תא חי יכולה להשתמש כדי לעקוב אחר התאים בזמן אמת כפי שהם נודדים. </li></ol> 6. ניתוח תמונות Scratch סופיות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלבים 4.2-4.5 לתמונות מאפס סופיות. </li></ol> 7. חישוב שטח Scratch לכמת הגירה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשב את השטח שלפני ההגירה הממוצעת על ידי חישוב ממוצע ערכי שטח הראשוניים של השריטות בהתאמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשב את הסכום הכולל של הגירה על ידי הפחתת השטח הסופי הגירה לכל תמונה, מחושב בשלב 6, מהאזור הממוצע טרום ההגירה (שלב 7.1). ליצור רשימה של ערכים עבור כל שריטה המייצגת את השינוי בהגירה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בריכת נתונים משריטות מרובות באותה קבוצת הבדיקה (כלומר כל הצלחות וכל השריטות על תאים שנחשפו לCSE 0%). השתמש בניתוח של מבחן שונות לנתח את ההבדלים בין קבוצות ניסוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם התאים הם איטיים להגרודורש זמן דגירה ארוך יותר לאחר הגירוד (יותר מ 10-12 שעות), לבצע BrdU או assay התאגדות edu 19 כדי לקבוע אם תאים עוברים כל התפשטות בתקופה שבי assay ההגירה מתרחש. בחר זמן assay הגירה כדי למנוע התפשטות תאים משמעותית. </li></ol> 8. אופציונליים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> על מנת להעריך האם הזדקנות תא משמעותית מתרחשת כתוצאה מהליך הגירוד, לבצע assay Beta-galactosidase הקשורים הזדקנות על צלחת בדיקה בזמנים שנקבעו מראש לאחר מגרד 19. </li></ol>

<ol><li>Gough, W., Hulkower, K. I., Lynch, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+quantitative%2C+facile%2C+and+high-throughput+image-based+cell+migration+method+is+a+robust+alternative+to+the+scratch+assay%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biomol.+Screen%22%5BJournal%5D)">A quantitative, facile, and high-throughput image-based cell migration method is a robust alternative to the scratch assay.</a> J. Biomol. Screen. 16 (2), 155-163 (2011).</li>
<li>Ridley, A. J., Schwartz, M. A., Burridge, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+migration%3A+integrating+signals+from+front+to+back%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Cell migration: integrating signals from front to back.</a> Science. 302 (5651), 1704-1709 (2013).</li>
<li>Sharma, R. R., Pollock, K., Hubel, A., McKenna, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+or+stromal+cells%3A+a+review+of+clinical+applications+and+manufacturing+practices%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem or stromal cells: a review of clinical applications and manufacturing practices.</a> Transfusion. 54 (5), 1418-1437 (2014).</li>
<li>Booth-Gauthier, E. A., Du, V., Ghibaudo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hutchinson-Gilford+progeria+syndrome+alters+nuclear+shape+and+reduces+cell+motility+in+three+dimensional+model+substrates%5BTitle%5D)+AND+%22Integr.+Biol.+%28Camb%29%22%5BJournal%5D)">Hutchinson-Gilford progeria syndrome alters nuclear shape and reduces cell motility in three dimensional model substrates.</a> Integr. Biol. (Camb). 5 (3), 569-577 (2013).</li>
<li>Keese, C. R., Wegener, J., Walker, S. R., Giaever, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrical+wound-healing+assay+for+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Electrical wound-healing assay for cells in vitro.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101 (6), 1554-1559 (2004).</li>
<li>Pinco, K. A., He, W., Yang, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alpha4beta1+Integrin+Regulates+Lamellipodia+Protrusion+Via+a+Focal+Complex%2Ffocal+Adhesion-Independent+Mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Biol.+Cell%22%5BJournal%5D)">Alpha4beta1 Integrin Regulates Lamellipodia Protrusion Via a Focal Complex/focal Adhesion-Independent Mechanism.</a> Mol. Biol. Cell. 13 (9), 3203-3217 (2002).</li>
<li>Fronza, M., Heinzmann, B., Hamburger, M., Laufer, S., Merfort, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+the+wound+healing+effect+of+Calendula+extracts+using+the+scratch+assay+with+3T3+fibroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Ethnopharmacol%22%5BJournal%5D)">Determination of the wound healing effect of Calendula extracts using the scratch assay with 3T3 fibroblasts.</a> J. Ethnopharmacol. 126 (3), 463-467 (2009).</li>
<li>Justus, C. R., Leffler, N., Ruiz-Echevarria, M., Yang, L. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+cell+migration+and+invasion+assays%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">In vitro cell migration and invasion assays.</a> J. Vis. Exp. (88), (2014).</li>
<li>Walter, M. N., Wright, K. T., Fuller, H. R., MacNeil, S., Johnson, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cell-conditioned+medium+accelerates+skin+wound+healing%3A+an+in+vitro+study+of+fibroblast+and+keratinocyte+scratch+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cell-conditioned medium accelerates skin wound healing: an in vitro study of fibroblast and keratinocyte scratch assays.</a> Exp. Cell Res. 316 (7), 1271-1281 (2010).</li>
<li>Goetsch, K. P., Niesler, C. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+the+scratch+assay+for+in+vitro+skeletal+muscle+wound+healing+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Biochem%22%5BJournal%5D)">Optimization of the scratch assay for in vitro skeletal muscle wound healing analysis.</a> Anal. Biochem. 411 (1), 158-160 (2011).</li>
<li>Chung, C. A., Chen, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+cell+sedimentation+on+measuring+chondrocyte+population+migration+using+a+Boyden+chamber%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Theor.+Biol%22%5BJournal%5D)">The effect of cell sedimentation on measuring chondrocyte population migration using a Boyden chamber.</a> J. Theor. Biol. 261 (4), 610-625 (2009).</li>
<li>Fabbri, M., Bianchi, E., Fumagalli, L., Pardi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+lymphocyte+traffic+by+adhesion+molecules%5BTitle%5D)+AND+%22Inflamm.+Res%22%5BJournal%5D)">Regulation of lymphocyte traffic by adhesion molecules.</a> Inflamm. Res. 48 (5), 239-246 (1999).</li>
<li>Saez, A., Ghibaudo, M., Buguin, A., Silberzan, P., Ladoux, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rigidity-driven+growth+and+migration+of+epithelial+cells+on+microstructured+anisotropic+substrates%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Rigidity-driven growth and migration of epithelial cells on microstructured anisotropic substrates.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 104 (20), 8281-8286 (2007).</li>
<li>Paxson, J. A., Gruntman, A. M., Davis, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age+Dependence+of+Lung+Mesenchymal+Stromal+Cell+Dynamics+Following+Pneumonectomy%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Dev%22%5BJournal%5D)">Age Dependence of Lung Mesenchymal Stromal Cell Dynamics Following Pneumonectomy.</a> Stem Cells Dev. 22 (24), 3214-3225 (2013).</li>
<li>McQualter, J. L., Brouard, N., Williams, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endogenous+fibroblastic+progenitor+cells+in+the+adult+mouse+lung+are+highly+enriched+in+the+sca-1+positive+cell+fraction%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Endogenous fibroblastic progenitor cells in the adult mouse lung are highly enriched in the sca-1 positive cell fraction.</a> Stem Cells. 27 (3), 623-633 (2009).</li>
<li>Hoffman, A. M., Paxson, J. A., Mazan, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lung-Derived+Mesenchymal+Stromal+Cell+Post-Transplantation+Survival%2C+Persistence%2C+Paracrine+Expression%2C+and+Repair+of+Elastase-Injured+Lung%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Dev%22%5BJournal%5D)">Lung-Derived Mesenchymal Stromal Cell Post-Transplantation Survival, Persistence, Paracrine Expression, and Repair of Elastase-Injured Lung.</a> Stem Cells Dev. 20 (10), 1779-1792 (2011).</li>
<li>Beane, O. S., Fonseca, V. C., Cooper, L. L., Koren, G., Darling, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+aging+on+the+regenerative+properties+of+bone+marrow-%2C+muscle-%2C+and+adipose-derived+mesenchymal+stem%2Fstromal+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Impact of aging on the regenerative properties of bone marrow-, muscle-, and adipose-derived mesenchymal stem/stromal cells.</a> PLoS One. 9 (12), e115963(2014).</li>
<li>Chen, L., Ge, Q., Tjin, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+cigarette+smoke+extract+on+human+airway+smooth+muscle+cells+in+COPD%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+Respir.+J%22%5BJournal%5D)">Effects of cigarette smoke extract on human airway smooth muscle cells in COPD.</a> Eur. Respir. J. 44 (3), 634-646 (2014).</li>
<li>Itahana, K., Campisi, J., Dimri, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+to+detect+biomarkers+of+cellular+senescence%3A+the+senescence-associated+beta-galactosidase+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Methods to detect biomarkers of cellular senescence: the senescence-associated beta-galactosidase assay.</a> Methods Mol. Biol. 371, 21-31 (2007).</li>
</ol>

המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים פיננסיים מתחרים.

הפרוטוקול המתואר כאן מספק שיטת כמותית חזקה, תקנית לבצע ולנתח מבחני מאפס. מבחני שריטה פשוטים משמשים באופן שיגרתי בתחומים רבים ושונים של מחקר לבחון הגירה סלולרית. עם זאת, באופן מסורתי assay השריטה חסר פרוטוקול הגדרה וכימות סטנדרטי, מה שהוביל לבעיות בשחזור 7,10. רבים מהשינויים ואופטימיזציות לשיפור assay השריטה צמצמו נושאים אלה, כוללים הדמיה פרט לחיות תאים, מבחני מבוססי פקק סטנדרטיים, ושלושה מבחני מיקרו-ממדיים עמוד 4,8,10. עם זאת, מבחני אלה יכולים להיות קשים כדי ...

נדידת תאים היא מתואמת ביותר וחיונית לתהליכים פיסיולוגיים רבים כגון פיתוח רקמות, תיקון, והתחדשות, כמו גם תהליכים פתולוגיים כגון גרורות סרטן וטרשת עורקת 1. הבנה של נדידת תאים רלוונטית במיוחד לטיפולים מתעוררים משמשים לתיקון רקמות פגועות וטיפול במצבים פתולוגיים, כולל טכנולוגיות השתלת תאים ורקמות מלאכותיות השתלת 2. לאור ההתעניינות הנוכחית בתפקיד של תאי סטרומה mesenchymal (MSCs) בתיווך רקמת תיקון 3, כימות יכולת הנדידה של תאים אלה באמצעות assay שהוא בקפדנות לכימות, להתאמה, והוא עניין חסכוני. חשוב לציין, assay כזה חייב להיות רגיש מספיק כדי לזהות שינויים עדינים יחסית ביכולת נדידה סלולרית לאחר נזק. שיטות קיימים לכימותי נדידת תאים, כולל מבחני מאפס, מבחני הגירת טרנס היטב (CH וידןambers), מערכי micropillar, ומבחני אזור הדרת תא יש מגוון של מגבלות בשחזור, ההתאמה האישית, כימות, ועלות-תועלת 1,4,5. Assay השריטה מותאמת המתואר כאן מדגים תוצאות חזקות, יכולות ניתוח וכימות מבוסס תמונה, עלות-תועלת, והתאמה ליישומים אחרים. מבחני גירוד שימשו בתפקידים מרובים להעריך נדידת תאים והתרבות בתנאי ניסוי שונה 5. Assay כרוך זריעת התאים הייעודיים, גידולם כדי להשלים או מפגש קרוב, ומגרד את monolayer התוצאה עם מחט סטרילית או קצה pipet 6. ניתוח מבוצע בדרך כלל על ידי השוואת הרוחב של השריטה על נקודות זמן מרובות במקומות שנבחרו באקראי 7-9. למרות השימוש הבולט שלה, assay השריטה הוא מבולבל על ידי בעיות עם שחזור וכימות. השתנות בדור של השריטה לא רק משנה את המיקרו-הסביבה של התאים, אבל גם יכול לעכב נדידת תאים על ידי פגיעה במשטח הצלחת ותאית-מטריצה ​​בסיסית 5. מבחני נערכים בתדירות גבוהה מעל 7 לשעה 12, לעומת זאת לשורות תאים בו מוצגות הגירה ופעמים assay יותר איטיות, ריבוי הופך 7,10 משתנים בלבול. לבסוף, תאים מזדקנים שנוצרו על ידי תהליך הגירוד יכולים לשחרר גורמים שמפריעים לאיתות תאית הדרושה כדי לסגור את הפער בשכבה 1. אופטימיזציה של assay מאפס דורשת יצירת פער עקבי שאינו מפריע למאפייני שטח, מזעור אורך זמן assay, ומניעת מוות של תאים לא רצוי במניפולציה. Assay מבוסס פקק הוא אופטימיזציה של assay אזור הדרת תא. assay זה מנצל פקק ממוקם באמצע גם שאינה כולל צמיחת תאים, אבל מאפשר לתאים להיות מצופים ברחבי אזור ההדרה המרכזי.כדי להעריך הגירה, הפקק מוסר, ואזור הדרת התוצאה מספק משטח להגירה להתרחש. עם זאת, assay זה קשה כדי להתאים אישית או להתאים 10 ועבור יישומים מסוימים, טכניקה זו יכולה גם להיות עלות מונעת. בניגוד למבחנים מאפס ונגזרותיהם, מבחני הגירת טרנס היטב (או מבחני קאמריים בוידן) להעריך הגירה על ידי כימות את מספר התאים שעוברים מתא אחד, דרך קרום מסנן microporous, לתא המכיל סוכני chemotactic 8,11, 12. טכניקה זו מוגבלת שירות עבור תאים חסיד כמו MSCs כי בעקבות הגירה דרך הקרום הנקבובי, תאים לדבוק בצד הקרום נחשף לסוכני chemotactic, ויכולים להיות קשה לכמת במדויק. בעוד assay הוא מסוגל לבחון כמה דפוסי הגירה תלת-ממדיים, סוגים המוגבלים התא שהוא מסוגל לכמת מגבלת נדידת תאי השירות שלה בצורה מדויקת 10. חלופה נוספת למבחני שריטה משתמשת מערך מיקרו-עמוד, אשר מודד תנועתיות סלולרית דרך מרחב תלת-ממדים באמצעות היכולת של תאים כדי לעוות ולהעביר לתוך המערך כפונדקאי. Polydimethlysiloxane אלסטומרים (PDMS) נרפאו על עובש מדויק וטופלו באוזון ופיברונקטין מייצר מייקרו-סביבה הומוגנית ואינו מתכלה. מרווח מיקרו-עמוד גם יכול להיות מגוון לפי צורך לאמוד את יכולתם של תאים להיכנס למערך 4. העובש נוצר באמצעות תחריט יון תגובה עמוק של פרוסות סיליקון כדי ליצור גרסה שלילית של מערך יחס רוחב-גובה הגבוה 13. בעוד assay מתחזק על ידי ההתאמה האישית שלה, היכולת לבנות מודל תלת ממדי הגירה, וניתוח באמצעות הדמיה ישירה של תאים נודדים, קושי ביצירת מערכי מיקרו-כלכלי עמוד מעכב השימוש הנרחב שלה. Assay השריטה מותאמת מתואר בפרוטוקול זה מספק יעיל, cosשיטה לא יעילים להפקת סריטות עקביות שניתן לנתח באמצעות תוכנה זמינה באופן חופשי. במקום מדידות רוחב פשוט עשו על פני השריטה לפני ואחרי נדידת תאים, התוכנה מאפשרת למשתמש לקבוע כלל אזורי מאפס לפני ואחרי ההגירה. קידום זה מגביל את סוגיית מנסה לקבוע היכן השריטה צריכה לקחת מדידות הרוחב, ואם הרוחב של השריטה הוא אחיד לכל אורכו של. בנוסף, אופטימיזציה זהירה של מספרים סלולריים, מפגש תא ואת הסוג ומידת הנזק שנגרם לתאים נדונה על מנת לייעל את assay נוסף.

<table><tbody><tr><td>DMEM (גלוקוז גבוה, ללא תוספת גלוטמין)</td><td>Life Technologies</td><td>31053-036</td><td></td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי, Thermo Scientific HyClone</td><td>Fisher</td><td>SH3091002</td><td></td></tr><tr><td>אנטיביוטיקה/אנטי-פטרייה, Thermo Scientific HyClone&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>SV3007901</td><td></td></tr><tr><td>גלוטמין, 200 מ"מ, Thermo Scientific HyClone</td><td>Fisher Scientific</td><td>SH3003401</td><td></td></tr><tr><td>מגיב דיסוציאציה של תאים TypeLE</td><td>Life Technologies</td><td>12563-01</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco's Phosphate Buffered Saming, Thermo Scientific HyClone&nbsp;</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>SH3002802</td><td></td></tr><tr><td>פלקון סטנדרטי 60 מ"מ כלי תרבית רקמות</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>08-772B</td><td></td></tr><tr><td>פישרברנד סטרילי 200 &mu; l טיפים פיפט</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>02-707-502</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ אור הפוך עם חיבור מצלמה</td> תוכנת ImageJ <td>משתנה</td><td></td><td></td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td>http://imagej.nih.gov/ij/</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>MRI_Wound_Healing</td> <td>plugin<a href="http://dev.mri.cnrs.fr/projects/imagej-macros/wiki/Wound_Healing_Tool">http://dev.mri.cnrs.fr/projects/imagej-macros/wiki/Wound_Healing_Tool</a></td><td></td><td></td></tr><tr><td>תוכנת ניתוח סטטיסטי</td><td>Microsoft Excel</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

אופטימיזציה של assay scratch הפצע כדי לזהות שינויים בנדידת תאי murine mesenchymal סטרומה לאחר נזק על ידי תמצית עשן סיגריות מסיס

Optimization of the Wound Scratch Assay to Detect Changes in Murine Mesenchymal Stromal Cell Migration After Damage by Soluble Cigarette Smoke Extract

נדידת תאים חיונית לתהליכים פיזיולוגיים ופתולוגיים רבים, כולל התפתחות רקמות, תיקון והתחדשות, גרורות סרטניות ותגובות דלקתיות. בהתחשב בעניין הנוכחי בתפקידם של תאי סטרומה מזנכימליים בתיווך תיקון רקמות, אנו מעוניינים לכמת את יכולת הנדידה של תאים אלה, ולהבין כיצד יכולת הנדידה עשויה להשתנות לאחר נזק. אופטימיזציה של בדיקת הגירה כמותית קפדנית שהיא גם קלה להתאמה אישית וגם חסכונית לביצוע היא המפתח למענה על שאלות הנוגעות לשינויים בנדידת תאים בתגובה לגירויים שונים. לשיטות הנוכחיות לכימות נדידת תאים, כולל מבחני שריטות, מבחני נדידת בארות טרנס-באר (תאי ביידן), מערכי מיקרו-עמודים ומבחני אזור אי הכללת תאים, יש מגוון מגבלות ביכולת שחזור, התאמה אישית, כימות וחסכוניות. למרות השימוש הבולט בו, בדיקת השריטה מבולבלת על ידי בעיות עם יכולת שחזור הקשורות לנזק למיקרו-סביבת התא, מכשולים לנדידת תאים, השפעת תאים מזדקנים שכנים והתפשטות תאים, כמו גם היעדר כימות קפדני. בדיקת השריטה האופטימלית המתוארת כאן מדגימה תוצאות חזקות, יכולות ניתוח ניתנות לכימות ומבוססות תמונה, עלות-תועלת ויכולת הסתגלות ליישומים אחרים.

מבחני השריטה שהוצגו כאן בוצעו באמצעות תאי סטרומה mesenchymal עכברי תושב ריאות (LR-MSCs) ומבודדים שבסימוכין בביאורים הפרוטוקול. LR-MSCs היה זורעים בצפיפות של 500,000 תאים בצלחת תרבית רקמת 60 מ&quot;מ, וגדל למפגש 90% ב- 48 שעות. כדי ליצור נזק, מנוע חיפוש מותאם אישית של 4% (שתואר לעיל) הודגר עם התאים למשך 24 שעות לאחר תקופת הזריעה הראשונית אבל לפני assay מאפס. לכל assay, השריטה נוצרה באמצעות קצה pipet 200 μl. תמונות ראשוניות נלקחו לאחר השריטה שנוצרה, וכל תאים ופסולת רופפים שנשטפו עם ...

היכולת לנדוד היא פונקציה מרכזית של סוגי תאים רבים ושונים, כולל תאי סטרומה מזנכימליים (MSCs). עם זאת, כימות שינויים ביכולת הנדידה לאחר נזק הוא מאתגר. פרוטוקול זה מתאר בדיקת הגירה הניתנת להתאמה בקלות המשתמשת בסטטיסטיקה קפדנית כדי לכמת שינויים ביכולת הנדידה של MSC לאחר נזק.

אופטימיזציה של assay Scratch הפצע כדי לזהות שינויים בנדידת תאי Murine mesenchymal סטרומה לאחר נזק על ידי תמצית עשן סיגריות מסיס

Cell migration is vital to many physiological and pathological processes including tissue development, repair, and regeneration, cancer metastasis, and ...

המטרה הכוללת של בדיקה זו היא לזהות שינויים ביכולת הנדידה של תאי סטרומה מזנכימליים של הריאה לאחר פגיעה באמצעות תמצית מסיסה של עשן סיגריות. ניתן להשתמש בשיטה זו כדי לענות על שאלות מפתח בתחום הביולוגיה הרגנרטיבית של הריאה, כולל כיצד ניתן לשפר את יכולת הנדידה של תאי פרוגניטור של הריאה כדי לסייע בתיקון הריאה. היתרון המרכזי של טכניקה זו הוא שהיא עברה אופטימיזציה כדי לספק מדידות כמותיות טובות יותר של נדידת תאים, תוך שהיא נותרת כלכלית לביצוע וקלה להתאמה אישית.בהדגמה זו, ייעשה שימוש בבדיקת שריטה (scratch assay) כדי לכמת את יכולת הנדידה של תאי סטרומה מזנכימליים מריאות של עכברים, או MSCs. לאחר חשיפה לתמצית מסיסה של עשן סיגריות, ה-MSCs גודלים במצע גידול מלא בצלחות של 60 מילימטר ונפגעים כפי שמתואר בטקסט של הפרוטוקול. רמת התקהבות (confluence) מתאימה היא חשובה עבור בדיקת השריטה, שכן היא מבטיחה שתוכנת הדימוג תוכל לזהות נכונה את גבולות השריטה.דוגמה זו מציגה תאי MSC במצב של 95% confluence, המתאים לביצוע שריטה בסביבה סטרילית. הסר את המכסה מלוחית של תאי MSC פגומים והנח סרגל, כגון סרגל פלסטיק שעקר, לרוחב השפה העליונה של הלוחית. שימוש בסרגל ממזער את כמות ההתאמות הסיבוביות שיידרשו עבור הלוחית כאשר היא תונח מאוחר יותר עלבמת המיקרוסקופ לצורך הדמיה.בלי להסיר את המצע, השתמשו בטיפ סטרילי של פפית 200 microliter בהנחיית סרגל סטרילי כדי ליצור ארבעה שריטות מקבילות על הפלטה, במרווחים של כ-5 millimeters ובאורך 50 millimeters. יצירת שריטות מרובות בפלטה של 60 millimeter אינה משנה את המיקרו-סביבה באופן המשפיע על נדידת תאי MSCs, אך הדבר עשוי להיות שיקול עבור סוגי תאים אחרים. שאבו את המצע ושטפו בעדינות את הפלטה עם 2 milliliters של מצע מלא שחומם מראש.פעולה זו מונעת מתאים להיצמד למרכז השריטה ומסירה תאים שהשתחררו כתוצאה מהשריטה. החליפו את הנוזל בארבעה מיליליטר של מצע גידול מלא וטרי, ובאמצעות טוש קבוע וסטרילי, סמנו כל שריטה מהמספר אחת עד ארבע בחלק התחתון של הצלחת, במיקומים שלא יפריעו לדימוג. יש לצלם תמונות ראשוניות של כל שריטה, שכן חשוב להשוות תמונות מאותה שריטה לפני ואחרי הנדידה, מכיוון שייתכנו הבדלים ברוחב השריטות.אם בדיקת השריטה (scratch assay) מבוצעת על מספר פלטות, מומלץ לצלם את התמונות הראשוניות של כל השריטות בפלטה אחת לפני ביצוע השריטות בפלטה הבאה. השתמשו במיקרוסקופ פאזה הפוך המצויד במצלמה כדי לרכוש את התמונות הדרושות לניתוח. מקמו את פלטת התרבית על המיקרוסקופ והשתמשו בעדשה בעלת הגדלה נמוכה כדי לאתר את השריטה.מספר אחת. חובה לוודא שהשריטה מופיעה בצורה אופקית לחלוטין על המסך. תוך שמירה על השריטה במצב אופקי מלא ובמרכז שדה הראייה, השג מספר תמונות רב ככל שיידרש כדי לכסות 90% מאורך השריטה. צלם תמונות מחלקים נפרדים של השריטה ללא חפיפה בין התמונות.אין לצלם תמונות מה-5% הראשונים והאחרונים של אורך השריטה, מכיוון ששבירת האור בקצות צלחת התרבית גורמת לחשיפת יתר של התמונות, מה שהופך אותן לבלתי ניתנות לניתוח. שמרו את התמונות מהשריטה הראשונה בתיקייה אחת. השגיגו תמונות עבור השריטות השנייה, השלישית והרביעית באופן דומה, ושמרו את התמונות מכל שריטה בתיקייה נפרדת.החזירו את הצלחות לאינקובטור מיד לאחר הדמיה ראשונית זו. אפשרו לתאים להגר למשך ארבע עד שבע שעות לפני תחילת בדיקה זו. הורד את תוכנת Image J והתקין את התוסף של כלי ריפוי הפצעים (wound healing tool).פתחו את קובץ התמונה ב-ImageJ, לאחר מכן לחצו על process ובחרו ב-find edges כדי להדגיש את התאים המקיפים את השריטה עבור כלי ה-wound healing. כדי לחשב את שטח השריטה, לחצו על image adjust ואז על color threshold, ובתפריט הנפתח המסומן כ-threshold color, שנו את הערך ל-BNW בתוך תפריט ה-color threshold. הזיזו את הסליידר התחתון לחלוטין ימינה כדי להפוך את התמונה לשחורה לחלוטין, ולאחר מכן כווננו את הסליידר העליון כדי ליצור ניגודיות מקסימלית בין השריטה לחזית התאים.כווננו באיטיות את מד הבהירות העליון משמאל לימין עד שהתמונה תציג בבירור את קווי המתאר של השריטה. לאחר זיהוי קצוות השריטה, לחצו על more tools. בסרגל הכלים של image J בחרו ב-MRI wound healing tool מהתפריט הנפתח ולחצו על כפתור ה-M כדי לסמן את אזור השריטה ולהפיק את השטח שחושב.בחלון קופץ של תוצאות, העתיקו והדביקו את כל המספרים מחלון התוצאות לגיליון Excel. ודאו שאתם מפרידים בין הנתונים של שריטות בודדות. לאחר שהתאים נדדו במשך ארבע עד שבע שעות, חזרו על הליך רכישת התמונות עבור השריטות; צלמו את הפלטות באותו סדר שבו הן נשרטו, כדי שלתאים בכל פלטה יהיה זמן נדידה שווה.ניתן לדמות את התאים במספר נקודות זמן, בהתאם לרגישותם לשינויים בטמפרטורה וב-pH. תמונות השריטה הסופיות מנותחות לאחר מכן באמצעות Image J באותו אופן שהודגם עבור תמונות השריטה הראשוניות. ניתן גם לחשב את שטחי השריטה כדי לכמת את הנדידה, נכון.הצפיפות (Confluence) היא קריטית להצלחת בדיקת השריטה (scratch assay). כאן מוצגת שריטה מוצלחת של MSCs מריאות עכבריות בצפיפות של 95%. לעומת זאת, צפיפות של 70% נמוכה מדי לשריטה מוצלחת ועלולה ליצור גבולות שגויים.אלו הן תמונות מקוריות מייצגות שלפני ההגירה ואחריה, עם גבולות שטח השריטה המתאימים כפי שהוגדרו על ידי תוכנת הדימות. גרפים אלו מראים את שטח השריטה הממוצע המחושב בפיקסלים עבור כל אחד מארבעת השריטות שבוצעו על פני צלחת של murine lung MSCs בהסמכה (confluence) של 95%, לפני או אחרי הגירה עם חשיפה ל-0% או 4% cigarette smoke extract. השוואה של השינוי הממוצע המחושב בשטח השריטה חשפה הגירה מועטה יותר של murine lung MSC לאחר חשיפה ל-4% cigarette smoke extract.בעת ביצוע פרוצדורה זו, חשוב לזכור לבצע אופטימיזציה ולנטר בקפידה את התשטח התאי (confluence) עבור סוג התאים הספציפי שבו עבדו, ולתרגל את יצירת השריטות כדי להבטיח שהן אחידות ככל האפשר. לאחר ביצוע פרוצדורה זו, ניתן להשתמש בטכניקות אחרות, כגון אימונוהיסטוכימיה, כדי לענות על שאלות נוספות בנוגע לשינויים וביטוי חלבונים שעשויים להשפיע על נדידת תאים.

optimization-wound-scratch-assay-to-detect-changes-murine-mesenchymal

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

ביולוגיה התפתחותית

סרטון זה מתאר בדיקת ריפוי פצעים ללא מגע בתרבית משותפת כדי להעריך את יכולת הנדידה של מיובלסטים מורינים. זה עוזר להבין רכיבים של שליחת אותות וקבלת אותות של אינטראקציות איתות Wnt פרקריניות לא קנוניות במבחנה.

בדיקת פצעים כדי להעריך את יכולת הנדידה של מיובלסטים מורינים בתרבות משותפת

המחקר מדווח על שתי שיטות שונות לניתוח של הפלישה תא והעברה: וזמינותו קאמרית בוידן, במבחנה וידאו מבוסס-מיקרוסקופ ריפוי פצע וזמינותו. הפרוטוקולים עבור שני ניסויים אלה מתוארים, היתרונות והחסרונות שלהם מושווים.

הערכה של הפלישה התא, תהליך ההעברה: השוואה של השריטה מבוסס-מיקרוסקופ וידאו פצע Assay ואת וזמינותו קאמרית בוידן

כתב יד זה מתאר איך חתך דמוי נגעים על monolayers בתרבית תאים אפיתל בנוחות דגם פצע ריפוי במבחנה, ומאפשר הדמיה על ידי קונאפוקלית או סריקה מיקרוסקופ לייזר, אשר יכול לספק באיכות גבוהה נתונים כמותיים ואיכותיים ללמוד בהתנהגות התא והן את המנגנונים המעורבים בהעברה.

מיקרוסקופ המבוסס על שיטות להערכה של נדידת תאים אפיתל במהלך במבחנה ריפוי הפצע

כאן, אנו מציגים פרוטוקול כדי להעריך את ההשפעה של פפטידים על ההעברה של תאי אפיתל כנגד ברונכיט. שיטה זו מאפשרת הקניית מהיר ולא מאוד לשחזור נתונים כמותיים על מהירות הסגר ההעברה וגמר התא.

הרומן במבחנה פצע ריפוי הנועד להעריך את נדידת תאים

כאן נתאר הליך כדי לבחון את התא ההעברה במבחנה עם מיקרוסקופ אופטי מצלמה אוטומטית. וזמינותו מאפס כבר בשימוש נרחב שבו הסגר על השריטה מלווה קצוב. מיקרוסקופ אופטי מאפשר זיהוי אמין וזול של נדידת תאים.

אופטימיזציה Assay מאפס במבחנה בדיקה של נדידת תאים עם מצלמה אופטית אוטומטית

מחקר זה מתמקד מודל במבחנה של הפצע הריפוי (גירוד assay) בתור מנגנון לקביעת מזהמים סביבתיים איך כגון ארסן השפעה הסלולר ההעברה. התוצאות מדגימים כי assay חוץ גופית בתוך זה מספק אינדיקציות מהיר ולא מוקדם של שינויים ההעברה הסלולר לפני ניסויים ויוו .

במבחנה לגרד Assay כדי להדגים את השפעת הרעל על נדידת תאים בעור

כאן, אנו מציגים פרוטוקול עבור התיקון שריטות מבחנה באמצעות הפיברוכדורים העיקריים עבור vivo העור הפצע הריפוי הטיפול בעכברים. שניהם מספר שיטות ברורות כדי להעריך בתוך מבחנה וריפוי פצעים vivo.

שיטת העברת שריטות וחדר מתקפל לחלל מתורבת בניתוח Vivo של ריפוי פצעים

אנו מציגים שיטה חסכונית לגיירת השריטות המספקת גישה חדשה לקביעת העברת תאים ללא שימוש בשיטות עתירות ציוד. בעוד פיברובלסטים שימשו בפרוטוקול זה, זה יכול להיות מותאם ומנוצל כדי ללמוד סוגי תאים נוספים והשפעות על העברת תאים.

תס"א של העברת שריטות חסכונית ותואמה

באמצעות שילוב של עיצוב חוויית אינטראקציה וניתוח דרישות משתמש, אנו מציגים מגרד תאים חדשני המשפר את מבחני ריפוי הפצעים התאיים במונחים של שחזור, אמינות, מעשיות, שלמות התא וחוויית המשתמש.

כלי ליצירת רווחים יציבים וניתנים לשחזור ללא תאים לשיפור האמינות של בדיקת ריפוי פצעים בתאים

מחקר זה מציג את בדיקת נדידת פצעי השריטה הדו-ממדית (2D) ואת בדיקת הנבטת הספרואידים התלת-ממדית (3D), יחד עם שיטות הניתוח שלהם במורד הזרם, כולל מיצוי RNA ואימונוציטוכימיה, כבדיקות מתאימות לחקר אנגיוגנזה במבחנה.

חקירת אנגיוגנזה ברמה תפקודית ומולקולרית על ידי מינוף בדיקת נדידת פצע השריטה ובדיקת הנבטת הספרואיד

במאמר זה אנו מתארים מודל במבחנה לבידוד והתמיינות של תאי אפיתל בדרכי הנשימה, תוך התמקדות בהתאקלמותם לתמצית עשן סיגריות כרונית (CSE). ניתן להשתמש במודל כדי לאפיין באופן מקיף את ההשפעה הרב-אומית של CSE, מה שעשוי לספק תובנות לגבי התגובות התאיות תחת חשיפה כרונית לעשן.

מודל In Vitro לחקר התמיינות ושינויים של מולטי-אומיקה בתאי אפיתל של דרכי הנשימה של מורין המגורות באמצעות תמצית עשן סיגריות

חקור שינויים בנדידת תאי מזנכימל סטרומה ריאתיים עכבריים לאחר נזק בתמצית עשן סיגריות מסיס באמצעות שיטת Scratch assay. שיטה זו מספקת מדידות כמותיות מדויקות לחקר ביולוגיה רגנרטיבית של הריאה.

אופטימיזציה של assay Scratch הפצע כדי לזהות שינויים בנדידת תאי Murine mesenchymal סטרומה לאחר נזק על ידי תמצית עשן סיגריות מסיס

גלה סרטונים נוספים