Name: שיטה פשוטה למיצוי שלב המוצק האוטומטי של דגימות מים לניתוח החיסוני של מזהמים קטנים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-01-01T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 26 s
Description: למד שיטה אוטומטית למיצוי שלב מוצק של מזהמים אורגניים קטנים מדגימות מים. הטכניקה משפרת את יעילות ניתוח החיסוני ומפחיתה עלויות בהשוואה לשיטות SPE מסורתיות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו מומנה על ידי תוכנית המסגרת השביעית של האיחוד האירופי FP7/2007-2013 במסגרת הסכם מענק מס' 265721. המחברים מודים למכון RIKILT לבטיחות מזון (NL) על תמיכתם בפרויקט זה.

הערה: הפרוטוקול הבא מתאר את SPE בוצע על 100 מדגם מיליליטר מים עם סופג C18 וelution עם 50% מתנול V / V. המדגם המועשר מדולל להגיע 10% מתנול V / V לפני ניתוח עם אנזים קשור immunosorbent assay ערכה (ELISA). 1. הכנת ריאגנטים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את דגימות המים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני כל צעד אחר, לסנן כל דגימת 100 מיליליטר מים עם מסנני גודל 0.2 מיקרומטר נקבובית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספייק המדגם עם ריכוז רצוי על ידי דילול הנפח מתאים של פתרון התייחסות לכמות מים. לדוגמא, להכין של דגימת מים עם 100 L / ng של E2 100 מיליליטר ידי דילול 3.3 μl של פתרון התייחסות E2 בריכוז של 300 מיקרוגרם / ליטר. לדלל את הפתרון הזה עשר פעמים כדי לקבל מדגם ממוסמר עם 10 ng / L E2. לדלל אחרון זה עוד עשר פעמים כדי לקבל מדגם של 100 מיליליטר עם 1 ננוגרם / L E2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את המדגם המסונן (ללא שינוי או ממוסמר) בבקבוק זכוכית עם Gחוט L45. השתמש במדגם באותו היום. קח חלק קטן כדי להיות מנותח עם ELISA להעריך ריכוז ראשוני. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן 300 μl של eluent על ידי דילול מתנול במי דה מיונן (di-) 50% v / v בצינור הדוק. </li></ol> 2. הכנת טור SPE <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן 20 מ&quot;ג / מיליליטר השעיה של חלקיקים סופגים octadecyl-סיליקה ידי הוספת 1,600 μl הראשון של מתנול ולאחר מכן 400 μl של di-מים עד 40 מ&quot;ג של סופג שלב הפוך. חוזקה לסגור את המכסה ולהתסיס עם מערבולת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התקנת הקרום התחתון בעמודה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחר קרום ניילון אחד עם הגודל נקבובית 11 מיקרומטר ולמקם אותו בשכבה כפולה של רקמות נגד אבק. עם אגרוף קוטר 3 מ&quot;מ, לחתוך שני חלקים קטנים בקרום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תפוס את אחד מהקרומים הקטנים עם מלקחיים מסנן שטוח סוף ומניח אותו בצד אחד של הטור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הברג את המחבר שטוח תחתון עם הצינור ולהדק. הקרום הוא now במקום וניתן להוסיף סופג באופן מאובטח. צייר חץ בגוף של ההצבעה הטור לקראת הסוף שבו הקרום הוצב. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנת הטור הסופג ארוז <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אבטח את הטור על בעל עם החץ מצביע לכיוון החלק התחתון. העמודה חייבת להיות מוגדרת כאנכי ככל האפשר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צרף ריק 10 מיליליטר מזרק חד פעמי לסוף הצינור של הטור, באמצעות המחברים luer הנעילה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן מיקרו-פיפטה עם קצה 20-200 μl, להגדיר את הנפח ל -100 μl. פורמט קצה פיפטה זה מותאם לגודל של העמודה הסופגת להיות מוכנות. ההליך יהיה קשה יותר עם טיפים פיפטה גדולים כגון אלה המשמשים עם 1 מיליליטר טפטפות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להתסיס את ההשעיה הסופגת עם מערבולת, ומהירות pipet 100 μl במרכז בטור. בעוד הזרקה, לשאוב בעדינות כל פתרון pipetted שוקת הקרום באמצעות המזרק ביד השנייה. ברחוב זהגיל, הפתרון מילוי המזרק צריך להיות ברור של חלקיקים, וחלקיקי מיטת סופו של דבר יכולה להיות שנצפה בעמודה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על תהליך זה פי 2 יותר על ידי התססה מניית ההשעיה בין כל הצעדים על מנת להבטיח pipetting השעיה הומוגנית של החלקיקים בתמיסה. הטור וכתוצאה מכיל 6 מ&quot;ג של סופג. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר 300 μl של השעיה הוטענו ומיובש על ידי aspirating עם המזרק, לשמור את המזרק בעמדה ולמקם את קרום ניילון השני בחלק העליון על ידי שימוש במלקחיים ביד השנייה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לדפוק את המחבר השני עם צינור ולהשליך את המזרק. טור SPE מוכן לשימוש. </li></ol></li></ol> 3. הכנת המערכת <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הדק את טור SPE במכשיר על ידי שימוש במחברי luer הנעילה. החץ חייב להיות מצביע לאותו כיוון כמו זה שמוצג על המכשיר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חבר את הבקבוק המכיל את המדגם למכשיר על ידי ההברגהסיפק כובע בטיחות GL45 על זה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לטעון 200 μl של eluent במאגר &#39;eluent&#39;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עומס 800 μl של di-מים במאגר &quot;הדילול&quot;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח בקבוק ביציאת הפסולת כדי לאסוף את המים מעובד במהלך שלב חילוץ. הפורמט הוא לא חשוב, אבל הנפח צריך להיות מספיק גדול ביחס לנפח הדגימה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח בקבוקון קטן ביציאת החיישן עם קיבולת הנפח המינימלית של 1.5 מיליליטר. נפח מרבי של 1 מיליליטר יהיה קטן מדי כבועות יהוו בשקע זה בעת איסוף eluent המועשר וחיץ דילול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא וסת הלחץ היא במצב סגור על ידי הפיכתו באופן ידני, להפוך כיוון השעון עד תנועה נוספת אינה אפשרית. </li></ol> SPE 4. עם אבטיפוס <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפעל את אב הטיפוס על ידי לחיצה על הכפתור בצד האחורי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנת ממשק המשתמש ובחירת התכנית <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתח את ממשק המשתמש. בחריציאת התקשורת של המחשב שאליו המכשיר מחובר מהרשימה, ולחץ על הכפתור &quot;הבא&quot;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזן את הערכים 580 לpset ו -30 לdpset. המשאבה תתאים לשמירה על לחץ במערכת ומאגרי הלחץ ב580 ± 30 mbar בעת הפעלה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחר את המצב האוטומטי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בפינת המצב האוטומטית, לטעון את קובץ התכנית ב&#39;נתיב קובץ התצורה &quot;תיבה. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התאמת וסת הלחץ <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התחל המשאבה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפעל ידני את וסת הלחץ עד הערך לקרוא לpreg הוא נחותה, אבל קרוב ל -320 mbar. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עצור את המשאבה. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל הליך SPE <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> &quot;התחל&quot; לחץ בפינת המצב האוטומטית. המשאבה תעבור על והצעדים חילוץ, elution ודילול באופן אוטומטי לעקוב אחרי זה. ההליך כולו למדגם 100 מיליליטר מתבצע ב -50 דק &#39;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl">ודא את הערך של preg. זה חייב להיות בטווח 320 - 350 mbar במהלך שלב החילוץ כדי להבטיח ספיקה אופטימלית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגור את הבקבוקון הקטן וחנות ב 4-5 מעלות צלזיוס בחושך עד לניתוח. ביצוע ניתוח בשעה 30 הבאה כדי למנוע השפלה של אנליטי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השלך את המים מעובד. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ניקוי המערכת הערה: לאחר כל הליך חילוץ המערכת צריכה לנקות כדי למנוע זיהום צולב. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן פתרון 10 מיליליטר של מתנול 70% v / v בבקבוק זכוכית 45 GL. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נתק את טור SPE ולחבר את צינורות עם מחברים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במצב האוטומטי, בחר את קובץ &#39;הניקוי&#39; ולהפעיל אותו עם אותו הגדרות לחץ. </li></ol></li></ol> 5. איתור של ריכוז אסטרדיול עם ELISA <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את דגימות כיול עם ריכוזים כמפורט בפרוטוקול מצורף לערכת ELISA המשמשת. הכן calibra אחדtion להגדיר באותה מטריצה ​​כמדגם, וכיול אחת להגדיר עם מתנול 10% V / V. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לוותר את הסכום הדרוש של מדגם בבארות בצלחת, על פי הוראות יצרן. השתמש בדגימות כיול, דגימות מים ללא שינוי וממוסמרים שסוננו אבל לא מעובד עם SPE, והעשירו את הדגימות במתנול v 10% / V. השתמש 3 בארות לדגימה כדי להפחית את השגיאה הקשורים לassay. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע את הסימנים של הפרוטוקול המסופק בערכה לתוספת של מגיבים, זמן דגירה, כביסה ותגובה נוספת עם האנזים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קראו את האות האופטי בכל טוב על פי הוראות יצרן הערכה עם מכשיר צלחת קורא ולאסוף את הנתונים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בתוכנה של מכשיר צלחת הקורא כדי להתאים את עקומות הכיול ולקבוע את ריכוז E2 במדגם הראשוני עם אותו המטריצה, ובדגימות מועשרים עם מתנול 10% נ / נ. </li></ol>

<ol><li>Chang, H. S., Choo, K. H., Choi, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+methods+of+identification%2C+analysis+and+removal+of+endocrine+disrupting+compounds+%28EDCs%29+in+water%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Hazard.+Matter%22%5BJournal%5D)">The methods of identification, analysis and removal of endocrine disrupting compounds (EDCs) in water.</a> J. Hazard. Matter. 172, 1-12 (2009).</li>
<li>Azzouz, A., Souhail, B., Ballesteros, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Continuous+solid-phase+extraction+and+gas+chromatography-mass+spectrometry+determination+of+pharmaceuticals+and+hormones+in+water+samples%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.+A%22%5BJournal%5D)">Continuous solid-phase extraction and gas chromatography-mass spectrometry determination of pharmaceuticals and hormones in water samples.</a> J. Chromatogr. A. 1217, 2956-2963 (2010).</li>
<li>Tomsikova, H., Aufartova, J., Solich, P., Novakova, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+sensitivity+analysis+of+female-steroid+hormones+in+environ-mental+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">High sensitivity analysis of female-steroid hormones in environ-mental samples.</a> Trends Anal. Chem. 34, 35-58 (2012).</li>
<li>Ciofi, L., Fibbi, D., Chiuminatto, U., Coppini, E., Checchini, L., Del Bubba, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fully+automated+on-line+solid+phase+extraction+coupled+to+high-performance+liquid+chromatography-tandem+mass+spectrometric+analysis+at+sub-ng%2FL+levels+of+selected+estrogens+in+surface+water+and+wastewater%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.+A%22%5BJournal%5D)">Fully automated on-line solid phase extraction coupled to high-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometric analysis at sub-ng/L levels of selected estrogens in surface water and wastewater.</a> J. Chromatogr. A. 1283, 53-61 (2013).</li>
<li>Robles-Molina, J., Lara-Ortega, F. J., Gilbert-Lopez, B., Garcia-Reyes, J. F., Molina-Diaz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-residue+method+for+the+determination+of+over+400+priority+and+emerging+pollutants+in+water+and+wastewater+by+solid-phase+extraction+and+liquid+chromatography-time-of-flight+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.+A%22%5BJournal%5D)">Multi-residue method for the determination of over 400 priority and emerging pollutants in water and wastewater by solid-phase extraction and liquid chromatography-time-of-flight mass spectrometry.</a> J. Chromatogr. A. 1350, 30-43 (2014).</li>
<li>Huang, C. H., Sedlak, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+estrogenic+hormones+in+municipal+waste+water+effluent+and+surface+water+using+enzyme-linked+immunosorbent+assay+and+gas+chromatography%2Ftandem+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Toxicol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Analysis of estrogenic hormones in municipal waste water effluent and surface water using enzyme-linked immunosorbent assay and gas chromatography/tandem mass spectrometry.</a> Environ. Toxicol. Chem. 20, 133-139 (2001).</li>
<li>Hintemann, T., Schneider, C., Schöler, H. F., Schneider, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Field+study+using+two+immunoassays+for+the+determination+of+estradiol+and+ethinylestradiol+in+the+aquatic+environment%5BTitle%5D)+AND+%22Water+Res%22%5BJournal%5D)">Field study using two immunoassays for the determination of estradiol and ethinylestradiol in the aquatic environment.</a> Water Res. 40, 2287-2294 (2006).</li>
<li>Farré, M., Kuster, M., Brix, R., Rubio, F., Lopez de Alda, M. J., Barcelo, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+study+of+an+estradiol+enzyme-linked+immunosorbent+assay+kit%2C+liquid+chromatography-tandem+mass+spectrometry%2C+and+ultra-performance+liquid+chromatography-quadrupole+time+of+flight+mass+spectrometry+for+part-per-trillion+analysis+of+estrogens+in+water+samples%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.+A%22%5BJournal%5D)">Comparative study of an estradiol enzyme-linked immunosorbent assay kit, liquid chromatography-tandem mass spectrometry, and ultra-performance liquid chromatography-quadrupole time of flight mass spectrometry for part-per-trillion analysis of estrogens in water samples.</a> J. Chromatogr. A. 1160, 166-175 (2007).</li>
<li>Pu, C., Wu, Y. F., Yang, H., Deng, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trace+analysis+of+contraceptive+drug+levonorgestrel+in+waste+water+samples+by+a+newly+developed+indirect+competitive+enzyme-linked+immunosorbent+assay+%28ELISA%29+coupled+with+solid+phase+extraction%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chim.+Acta%22%5BJournal%5D)">Trace analysis of contraceptive drug levonorgestrel in waste water samples by a newly developed indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) coupled with solid phase extraction.</a> Anal. Chim. Acta. 628, 73-79 (2008).</li>
<li>Van Emon, J. M., Gerlach, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+status+report+on+field-portable+immunoassay%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Sci.+Technol%22%5BJournal%5D)">A status report on field-portable immunoassay.</a> Environ. Sci. Technol. 29 (7), 312A-317A (1995).</li>
<li>Farré, M., Brix, R., Barcelò, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Screening+water+for+pollutants+using+biological+techniques+under+European+Union+funding+during+the+last+10+years%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Screening water for pollutants using biological techniques under European Union funding during the last 10 years.</a> Trends Anal. Chem. 24 (6), 532-545 (2005).</li>
<li>Schneider, C., Schöler, H. F., Schneider, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+enzyme-linked+immunosorbent+assay+for+ethinylestradiol+using+a+long-chain+biotinylated+EE2+derivative%5BTitle%5D)+AND+%22Steroids%22%5BJournal%5D)">A novel enzyme-linked immunosorbent assay for ethinylestradiol using a long-chain biotinylated EE2 derivative.</a> Steroids. 69, 245-253 (2004).</li>
<li>Heub, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+and+portable+solid+phase+extraction+platform+for+immuno-detection+of+17%CE%B2-estradiol+in+water%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chrom.+A%22%5BJournal%5D)">Automated and portable solid phase extraction platform for immuno-detection of 17β-estradiol in water.</a> J. Chrom. A. 1381, 22-28 (2015).</li>
<li>Petrovic, M., Eljarrat, E., Lopez de Alda, M. J., Barcelo, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endocrine+disrupting+compounds+and+other+merging+contaminants+in+the+environment%3A+a+new+survey+on+new+monitoring+strategies+and+occurrence+data%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Bioanal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Endocrine disrupting compounds and other merging contaminants in the environment: a new survey on new monitoring strategies and occurrence data.</a> Anal. Bioanal. Chem. 378, 549-562 (2004).</li>
<li>Richardson, S. D., Ternes, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Water+analysis%3A+Emerging+contaminants+and+current+issues%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Water analysis: Emerging contaminants and current issues.</a> Anal. Chem. 86, 2813-2848 (2014).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

שיטה חדשה להכנת דגימות מים ואחריו ניתוח באמצעות immunoassay הוצעה. המכשיר מאפשר לבצע מיצוי שלב מוצק בצורה אוטומטית וידידותי למשתמש. הסינון של דגימת המים לפני הזרקתו למערכת הוא קריטי. כל חלקיקים שעדיין קיימים בפתרון היה פוטנציאל לגרום לסתימה של רשת fluidic ולחסום את טור SPE. צעד חשוב נוסף הוא ההכנה של טור SPE. כמות החלקיקים בעמודה היא קריטית כדי להשיג את הביצועים הטובים ביותר אפשריים. יש לנקוט זהירות מיוחדת בעת הכ...

לדוגמא הכנה היא צעד חשוב בכל תהליך אנליטי. בפרט, הסרת אפקטי מטריקס, ההפחתה של הפרעות, והעשרה של אנליטי נחוצות כדי להשיג תוצאות מדויקות ולהגיע גבולות נמוכים של גילוי. תרכובות האנדוקרינית לשבש (EDCs) הן מדאיגות במיוחד בשל פעולתם באורגניזמים החיים, גם כאשר הרמות נמוכות מאוד בהווה בסביבה. 17β-אסטרדיול ההורמון הטבעי קיים בזיהום המים האיחוד האירופי רשימת מעקב ונוטה להוסיף לרשימה של חומרי עדיפות מוסדרים באירופה המים מסגרת ההוראה. מיצוי שלב מוצק (SPE) מיושם בדרך כלל לניתוח של מזהמים קטנים במים, עם שני הכימית 1-5 (כרומטוגרפיה, ספקטרוסקופיית מסות) ושיטות זיהוי חיסוניות 6-9. האחרון זכה להתעניינות בתחום הניטור סביבתי, כimmunoassays זמין במגוון רחב של פורמטים, הם ספציפיים לת&quot;אאנליטי r קבל, ולהגיע לגבולות נמוכים של גילוי. 6, 7, 10, 11 מבחני שונים אנזים קשור immunosorbent (ELISA) זמינים מסחרי ולאפשר לנתח דגימות מרובות בבת אחת על צלחת רב גם. ההליך מורכב בצעדי תגובה רצופים שיכול לקחת כמה שעות. המוצר הסופי של תגובה יכול להיות מזוהה אופטי כדי לקבוע את הריכוז של מולקולת היעד המבוססת על עקומת כיול. נהלי SPE קלאסיים כוללים סופג מראש אוויר, חילוץ מדגם, כביסה, elution, וריכוז על ידי אידוי של eluent. הממס המשמש לדילול של תמצית זו נבחר בהתאם לשיטת זיהוי. לשיטות חיסוניות, הסכום של השפעות ממס אורגניות מאוד את הרגישות של השיטה. 12 בנוסף להתאוששות וההופעות טרום ריכוז, השיטה גם צריכה להיות פשוט ועלות יעילה. אוטומציה של procedurדואר עוזר להפחית שגיאות הקשורות לאדם. בעבודה הקודמת שלנו 13 הצגנו אב הטיפוס שלנו לSPE האוטומטי, והשיטה שלנו הייתה מוחלת על הניתוח של 17β-אסטרדיול ההורמון הטבעי בדגימות מי ים. עם הווידאו הנוכחי ברצוננו להדגיש את היתרונות הטכניים של השיטה שלנו בהשוואה לoff-line מסורתי ועל שורת SPE, והתאימות המסוימת שלה עם זיהוי על ידי חיסוני תגובות. אנו מתארים את הפרוטוקול מיושם על דגימות מים לגילוי 17β-אסטרדיול. SPE מתבצע עם octadecyl-סיליקה שלב סופג (C18) וelution מתבצע עם מתנול המדולל.

<table><tbody><tr><td>קרום סינון 0.2 &mu; m גודל נקבוביות</td><td>Merck Millipore</td><td>GNWP04700</td><td>לסינון מדגם</td></tr><tr><td>קרום ניילון 11 &mu; m גודל נקבוביות</td><td>Merck Millipore</td><td>NY1104700</td><td>לטור SPE</td></tr><tr><td>ביופסיה חד פעמית אגרוף 5 מ"מ</td><td>תקציב רפואי</td><td>39302439</td><td></td></tr><tr><td>Nucleodur C18 ec&nbsp;</td><td>Macherey Nagel</td><td>713550.01</td><td>50 &mu; m קוטר חלקיקים</td></tr><tr><td>מי ים סינתטיים סיגמא</td><td>אולדריץ'</td><td>SSWS500-500 מ"ל</td><td></td></tr><tr><td>מתנול</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>17 בטא-אסטרדיול תקן</td><td>Enzo Life Science</td><td></td><td>300 ננוגרם/מ"ל</td></tr><tr><td>17 בטא-אסטרדיול ערכת ELISA</td><td>Enzo Life Science</td><td>ADI-900-008</td><td>96 בארות, טווח 30 - 3,000 ננוגרם/ליטר</td></tr></tbody></table>

שיטה פשוטה למיצוי שלב המוצק האוטומטי של דגימות מים לניתוח החיסוני של מזהמים קטנים

A Simple Method for Automated Solid Phase Extraction of Water Samples for Immunological Analysis of Small Pollutants

שיטה חדשה להפקה מוצקה שלב (SPE) של דגימות מים סביבתיות מוצעת. אב הטיפוס שפותח הוא יעיל וחסכוני וידידותיות למשתמש, ומאפשר לבצע SPE מהיר, אוטומטי ופשוט. הפתרון מראש מרוכז תואם ניתוח על ידי immunoassay, עם תוכן ממס אורגני נמוך. שיטה מתוארת לחילוץ ומראש ריכוז של 17β-אסטרדיול הורמון טבעי במיליליטר 100 דגימות מים. שלב הפוך SPE מתבצע עם סופג octadecyl-סיליקה וelution נעשה עם 200 μl של מתנול 50% V / V. Eluent מדולל על ידי הוספת di-מים כדי להפחית את הכמות של מתנול. לאחר ההכנה ידנית עמודת SPE, ההליך הכולל מתבצע באופן אוטומטי בשעה 1. בסופו של התהליך, ריכוז אסטרדיול נמדד באמצעות assay מסחרי צמוד אנזים חיסוני-סופג (ELISA). טרום ריכוז של פי 100 מושגת ותוכן מתנול רק 10% V / V. החלמה מלאה של המולקולההם השיגו עם 1 ננוגרם / L ממוסמר דגימות מי ים דה מיוננים וסינתטיות.

שחזור של אריזה סופגת הוערך על ידי ייבוש ושקלול הסופג pipetted בבקבוקוני זכוכית והתוצאה מוצגת באיור 1. שחזור של זמן הזרקה נבדקה עבור דגימות 100 מיליליטר, כפי שמוצגת באיור 2. ריכוז ובראשוני מראש מרוכז ממוסמר דגימות נקבעו על ידי שימוש בערכת ELISA מסחרית ל17β-אסטרדיול ומוצגות באיור 3. ההליך המוצע כרוך ...

מוצג פרוטוקול למיצוי וריכוז מראש של אסטרדיול מדגימות מים באמצעות מערכת אוטומטית וממוזערת.

A new method for solid phase extraction (SPE) of environmental water samples is proposed. The developed prototype is cost-efficient and user friendly, and ...

המטרה הכללית של שיטת הכנת דגימה זו היא ריכוז מוקדם של מזהמים אורגניים קטנים מדגימות מים, באופן ידידותי למשתמש, חסכוני ואוטומטי. שיטה זו יכולה להחליף תהליכי SPE סטנדרטיים בעת חקר זיהום של דגימות מים באמצעות שיטות זיהוי אימונולוגי, כגון בדיקות אימונו-סריי (immunoassays) בלוחית בארות או חיישנים ביולוגיים (biosensors). היתרונות המרכזיים של טכניקה זו הם שפעולת ה-SPE היא אוטומטית, בעוד ששטח הפנים והעלות של המכשירים נמוכים בהשוואה לגישות מסורתיות.בנוסף, ביצועי תהליך ההעשרה תואמים את דרישות הניתוח של בדיקות אימונו-סמיות (immunoassays), הן מבחינת תכולת ממס נמוכה והן מבחינת יעילות הריכוז המוקדם. ראשית, סננו דגימת מים בנפח 100 millimeter באמצעות מסנן בעובי נקבוביות של 0.2 micrometer. העבירו את הדגימה המסוננת לבקבוק זכוכית עם הברגת GL 45.הכינו 300 microliters של אלואנט על ידי דילול של methanol במים דה-יוניים, לריכוז של 50 אחוזי נפח בתוך מבחנה אטומה. לאחר מכן, הכינו תרחיף של 20 milligram per milliliter של חלקיקי סורבנט מסוג octadecyl silica על ידי הוספת 1,600 microliters של methanol ולאחריו 400 microliters של מים דה-יוניים ל-40 milligrams של סורבנט פאזה הפוכה בתוך בקבוק זכוכית. סגרו את המכסה היטב, וערבבו באמצעות מערבל וורטקס.הניחו ממברנת ניילון עם גודל נקבים של 11 micrometers על שכבה כפולה של נייר סופג נטול אבק. חללו שני חלקים קטנים בממברנה באמצעות מחלץ בקוטר של 3 millimeter. לאחר מכן, אחזו באחת הממברנות הקטנות בעזרת פינצטה שטוחה למסננים, והניחו אותה בצד אחד של העמודה.לאחר מכן, הברגו את מחבר התחתית השטוחה אל הצינור והדקו אותו. לאחר מכן, שרטטו חץ על גוף העמודה, המצביע לכיוון הקצה שבו הוצבה הממברנה. בשלב זה, קבעו את העמודה על התושבת כאשר החץ מצביע כלפי מטה.חברו מזרק חד-פעמי ריק של 10 milliliter לקצה צינור העמודה באמצעות מחברי הנעילה התחתונים. ערבבו את תרחיף הסורבנט בעזרת מיקסר וורטקס, והעבירו במהירות 100 microliters למרכז העמודה באמצעות פיפטה. בזמן ההזרקה, שאבו בעדינות את התמיסה מהפיפטה דרך הממברנה בעזרת המזרק ביד השנייה.הכנת עמודת ה-SPE היא חשובה מאוד. עליך לוודא שאתה שואב את התמיסה כראוי דרך הממברנה באמצעות המזרק תוך כדי הזרקת תרחיף החלקיקים לעמודה. אחרת, החלקיקים לא ייארזו בצפיפות.חזור על התהליך הקודם פעמיים נוספות, תוך ערבוב של תמיסת המלאי בין כל שלבי הפיפטור, כדי להבטיח סספנסיה הומוגנית של החלקיקים בתמיסה. לאחר שכל הסספנסיה הועמסה והובשה באמצעות שאיבה במזרק, השאר את המזרק במקומו והנח את ממברנת הניילון השנייה מעל, בעזרת פינצטה ביד השנייה. לאחר מכן, הברג את המחבר השני עם צינור והשלך את המזרק.בשלב זה, הדק את העמודה על מכשיר ה-SPE באמצעות מחברי הנעילה התחתונים. חבר את הבקבוק המכיל את הדגימה למכשיר על ידי הברגת מכסה הבטיחות GL 45 המצורף עליו. טען 200 µL של אלואנט (eluent) למאגר האלואנט.לאחר מכן, טענו 800 µL של מים דה-יוניים למאגר הדילול. ודאו שווסת הלחץ נמצא במצב סגור על ידי סיבובו נגד כיוון השעון עד שלא ניתן להניעו יותר. לאחר הפעלת האב-טיפוס, הזינו את הערכים 580 עבור pset ו-30 עבור delta pset.כדי לכוונן את ווסת הלחץ, הפעילו את המשאבה. לאחר מכן, סובבו ידנית את ווסת הלחץ עד שהערך הנקרא עבור preg יהיה נמוך אך קרוב ל-320 millibar. לאחר עצירת המשאבה, התחילו את הליך ה-SPE על ידי לחיצה על start בפינת המצב האוטומטי.עם סיום הליך ה-SPE, סגרו את מבחנת הדגימה הקטנה ואחסנו אותה בטמפרטורה של ארבע עד חמש מעלות Celsius בחושך, עד לביצוע ניתוח ELISA. כדי לנקות את המערכת, הכינו תמיסה של 10 milliliter של 70% methanol בנפח בבקבוק זכוכית עם הברגת GL 45. נתקו את עמודת ה-SPE, ואטמו את הצינורות באמצעות מחברים.במצב האוטומטי, בחרו את קובץ הניקוי (Cleaning) והפעילו אותו עם אותן הגדרות לחץ ששימשו קודם ל-pset, delta pset ו-preg. השחזוריות של אריזת הסופח הוערכה על ידי ייבוש ושקילה של הסופח שהועבר בפיפטה למבחנות זכוכית. השחזוריות של זמן ההזרקה נבדקה עבור דגימות של 100 milliliter.הריכוזים של הדגימות הראשוניות והדגימות המרוכזות שהוספו להן חומרים נקבעו באמצעות ערכת ELISA מסחרית של 17 beta-estradiol. מעקומות הכיול עולה בבירור כי יחס המתנול מהדגימה המועשרת אינו משפיע על הרגישות של הבדיקה האימונולוגית. שיעורי התשואה שחושבו היו 128, פלוס או מינוס 22%, עבור מים דה-יוניים ו-107 פלוס או מינוס 6% עבור מי ים מלאכותיים, בהתאמה.במקום שבו השליטה בטכניקה כבר הושגה, ניתן לבצע את הכנת עמודת ה-SPE בפחות מחמש דקות, אם היא מבוצעת כראוי. את כל הליך ה-SPE ניתן להשלים בפחות משעה אחת. לאחר פיתוחה, סללה טכניקה זו את הדרך עבור חוקרים בתחום מדעי הסביבה לחקור את פיתוחן של שיטות Immunodetection לניטור של מזהמים אורגניים קטנים.לאחר צפייה בסרטון זה, תרכשו הבנה טובה לגבי אופן הכנת דגימות מים באמצעות המכשיר האוטומטי והחסכוני שלנו לניתוח מזהמים באמצעות בדיקות אימונו-סמיות (immunoassays). זכרו כי עבודה עם מזהמים אורגניים וממסים עלולה להיות מסוכנת, ויש לנקוט תמיד באמצעי זהירות, כגון חבישת כפפות מתאימות והגנה על העיניים באמצעות משקפי מגן בעת ביצוע תהליך זה.

a-simple-method-for-automated-solid-phase-extraction-water-samples

Research

JoVE Journal

Environment

סביבה

פרוטוקול זה מתאר את השימוש זרימת משיק חלול סיבים מערכת ultrafiltration מדגם ריכוז דיסוציאציה חום כמו צעדים חלופיים עבור זיהוי של...

שינוי שיטת EPA 1623 שמשתמש תזרים משיק הולו סיבים Ultrafiltration ומחממים צעדים ניתוק לזהות waterborne<em&gt; Cryptosporidium</em&gt; ו<em&gt; Giardia spp.</em

בסרטון זה, אנו מדגימים מיצוי מבוסס SPME של מטבוליטים מכליה מתורם שנקטף מראש. ניתן להשתמש במטבוליטים שחולצו לביצוע אנליזה מטבולית וליפידומית על מנת להעריך את איכות האיברים להשתלה.

דגימת מיקרו-מיצוי בשלב מוצק: טכניקה מבוססת בדיקה לחילוץ דגימות מרקמות השתל

כתב יד זה מתאר גישה אוטומטית לבחירת גודל ג'ל לטיהור מקטעי DNA לריצוף הדור הבא. טכנולוגיית הריינג'ר מספקת אוטומציה מלאה של כל תהליך העמסת ג'ל אגרוז, ניתוח אלקטרופורטי ושחזור של שברי DNA ממוקדים המאפשרים ספריות ריצוף מהדור הבא בתפוקה גבוהה ובאיכות גבוהה.

בחירת גודל האוטומטי ג&#39;ל כדי לשפר את האיכות של ספריות רצף הדור הבא הוכן מדגימות סביבתיות מים

מוצג פרוטוקול הייצור של שבב מיצוי פאזה מוצקה בסיוע דיפול לניתוח קורט מתכת.

המצאה של Microchip הפקת דיפול בסיוע שלב מוצק עבור ניתוח מתכת עקבות בדגימות מים

מוצג פרוטוקול העוסק באפיון ויישום של חמישה התקני דגימה פסיביים שונים.

אפיון ויישום של דוגמים פסיביים עבור ניטור של דברה במים

נדרש טיפול מיוחד ב"טכניקות נקיות" כדי לאסוף ולעבד כראוי דגימות מים למחקרי עקבות מתכות בסביבות מימיות. מוצג פרוטוקול לדגימה, עיבוד והליכים אנליטיים במטרה להשיג נתוני ניטור סביבתי אמינים ותוצאות עם רגישות גבוהה למחקרי עקבות מפורטים.

נקי דיגום ואנליזה של נהר ושפכי הנהרות ווטרס ללימודי מתכת עקבות

אנו מציגים את VacuSIP, שיטה פשוטה, לא פולשנית ואמינה לדגימה נקודתית נקייה ומדויקת של מים. המערכת פותחה והוערכה לאיסוף בו-זמני של המים הנשאפים והנשפים על ידי מזיני תרחיף בנתיים באתרם, כדי למדוד בצורה נקייה הסרה והפרשה של חלקיקים ותרכובות מומסות.

VacuSIP, שיטת INEX משופרת<em&gt; באתרו</em&gt; מדידה של חלקיקים מומס תרכובות מעובד על ידי האכלת השעית Active

פרוטוקול מיצוי מקיף של שומנים, מטבוליטים חלבונים מ רקמות ביולוגיות באמצעות מדגם אחד מוצג.

שיטה פשוטה הפיצול מופץ לניתוח מקיף של מטבוליטים, שומנים וחלבונים מדגם יחיד

כאן, אנו מציגים את פרוטוקול כימות יישוב רציף וניתוח שאינן ממוקדות של תרכובות fluorinated במים באמצעות ספקטרומטר מסה. מתודולוגיה זו מספק רמות כמותית של תרכובות שטיח ידוע ומזהה כימיקלים לא ידוע בדגימות קשורים עם הערכות כמותיות למחצה של שפע שלהם.

זיהוי לכל-כימית Polyfluorinated מינים בזרימת עבודה משולבת יישוב, שאינו ממוקד-סינון ברזולוציה גבוהה ספקטרומטר מסה

פרוטוקול זה מציג זרימת עבודה אוטומטית לחלוטין למיצוי גאוסמין ו-2-מתילאיזובורנול מרקמות דגים עשירות במים ושומנים השיטה מאפשרת זיהוי מוקדם של מולקולות אלו לפני שהן מגיעות לסף הריח. נתונים מייצגים מסביבת חקלאות ימית מסופקים.

מיצוי וזיהוי של גאוסמין ו-2-מתילאיזובורנול במים ובדגים באמצעות בדיקות מיצוי סופגות בעלות קיבולת גבוהה ו-GC-MS

למד שיטה אוטומטית למיצוי שלב מוצק של מזהמים אורגניים קטנים מדגימות מים. הטכניקה משפרת את יעילות ניתוח החיסוני ומפחיתה עלויות בהשוואה לשיטות SPE מסורתיות.

שיטה פשוטה למיצוי שלב המוצק האוטומטי של דגימות מים לניתוח החיסוני של מזהמים קטנים

גלה סרטונים נוספים