שיטה פשוטה למיצוי שלב המוצק האוטומטי של דגימות מים לניתוח החיסוני של מזהמים קטנים

המטרה הכוללת של שיטת הכנת דגימה זו היא לרכז מראש מזהמים קטנים ואורגניים מדגימות מים, בצורה ידידותית למשתמש, חסכונית ואוטומטית. שיטה זו יכולה להחליף תהליכי SPE סטנדרטיים בעת חקר זיהום דגימות מים באמצעות שיטות זיהוי חיסוני, כגון בדיקות אימונולוגיות של צלחת או חיישנים ביולוגיים. היתרונות העיקריים של טכניקה זו הם שהליך SPE הוא אוטומטי בעוד טביעת הרגל והעלות של המכשירים נמוכים בהשוואה לגישות מסורתיות.

בנוסף, ביצועי תהליך ההעשרה תואמים את הדרישה לניתוח בדיקות אימונולוגיות הן מבחינת תכולת ממס נמוכה והן מבחינת יעילות הריכוז המקדים. ראשית, סנן דגימת מים של 100 מילימטר עם מסנן בגודל מזיגה של נקודת אפס ושני מיקרומטר. הנח את הדגימה המסוננת בבקבוק זכוכית עם חוט GL 45.

הכן 300 מיקרוליטר נוזל על ידי דילול מתנול במים נטולי יונים, ל-50 אחוז נפח בצינור הדוק. לאחר מכן, הכינו תרחיף של 20 מיליגרם למיליליטר של חלקיקי ספיגה אוקטדציל סיליקה על ידי הוספת 1,600 מיקרוליטר מתנול ואחריו 400 מיקרוליטר של מים נטולי יונים ל-40 מיליגרם של סופג פאזה הפוכה בזכוכית. סוגרים היטב את המכסה, ומערבלים בעזרת מערבל מערבולת.

הניחו קרום ניילון בגודל נקבוביות 11 מיקרומטר על שכבה כפולה של רקמה נגד אבק. חותכים שני חלקים קטנים בקרום בעזרת אגרוף בקוטר שלושה מילימטרים. לאחר מכן, תפוס את הממברנות הקטנות בעזרת מלקחיים מסננים שטוחים, והנח אותו בצד אחד של העמוד.

לאחר מכן, הברג את המחבר התחתון השטוח עם הצינור והדק. לאחר מכן, צייר חץ על גוף העמוד, המצביע לכיוון הסוף בו הונח הממברנה. בשלב זה, אבטח את העמודה על המחזיק כשהחץ מצביע לכיוון התחתית.

חבר מזרק חד פעמי ריק של 10 מיליליטר לקצה צינור העמוד באמצעות מחברי הנעילה התחתונים. מערבל את המתלה הסופג בעזרת מערבל המערבולת, ופיפטה במהירות 100 מיקרוליטר במרכז העמוד. בזמן ההזרקה, שאפו בעדינות את תמיסת הפיפטה דרך הממברנה באמצעות המזרק ביד השנייה.

הכנת עמודת SPE חשובה מאוד. עליכם לוודא שאתם שואבים כראוי את התמיסה דרך הממברנה באמצעות המזרק תוך הזרקת תרחיף החלקיקים בעמודה. אחרת, החלקיקים לא יהיו ארוזים בצפיפות.

חזור על התהליך הקודם פעמיים נוספות, על ידי ערבוב מתלה המלאי בין כל שלבי הפיפטינג, כדי להבטיח השעיה הומוגנית של החלקיקים בתמיסה. לאחר העמסה וייבוש של כל המתלה על ידי שאיבה בעזרת מזרק, שמור את המזרק במקומו והנח את קרום הניילון השני על ידי שימוש במלקחיים ביד השנייה. לאחר מכן, הברג את המחבר השני בעזרת צינור והשליך את המזרק.

בשלב זה, הדק את העמודה בהתקן SPE באמצעות מחברי הנעילה התחתונים. חבר את הבקבוק המכיל את הדגימה למכשיר על ידי הברגת מכסה הבטיחות GL 45 המצורף עליו. טען 200 מיקרוליטר נוזל במאגר הנוזל.

לאחר מכן, טען 800 מיקרוליטר של מים נטולי יונים במאגר הדילול. ודא שווסת הלחץ נמצא במצב סגור על ידי סיבובו לאחור בכיוון השעון עד שלא ניתן לבצע תנועה נוספת. לאחר הפעלת אב הטיפוס, הזן את הערכים 580 עבור pset ו- 30 עבור delta pset.

כדי לכוונן את ווסת הלחץ, הפעל את המשאבה. לאחר מכן, סובב ידנית את ווסת הלחץ עד שהערך שנקרא עבור preg נחות אך קרוב ל-320 מיליבר. לאחר עצירת המשאבה, התחל את הליך SPE על ידי לחיצה על התחל בפינת המצב האוטומטי.

לאחר השלמת הליך ה- SPE, סגור את הבקבוק הקטן של הדגימה ואחסן בארבע עד חמש מעלות צלזיוס בחושך, עד לניתוח ELISA. לניקוי המערכת, הכינו תמיסה של 10 מיליליטר של 70 אחוז מתנול בנפח בבקבוק זכוכית עם חוט GL 45. נתק את עמוד ה-SPE וחבר את הצינור עם מחברים.

במצב האוטומטי, בחר את ניקוי file והתחל אותו עם אותן הגדרות לחץ ששימשו בעבר עבור pset, delta pset ו-preg. יכולת השחזור של אריזות סופגות הוערכה על ידי ייבוש ושקילה של הסופג הפיפט בבקבוקי זכוכית. יכולת השחזור של זמן ההזרקה נבדקה עבור דגימות של 100 מיליליטר.

הריכוזים של הדגימות הראשוניות והמרוכזות מראש נקבעו באמצעות ערכת ELISA מסחרית של 17 בטא-אסטרדיול. ברור מעקומות הכיול שיחס המתנול מהדגימה המועשרת אינו משפיע על רגישות הבדיקה החיסונית. התאוששות של 128, פלוס מינוס 22 אחוזים, ו-107 פלוס מינוס שישה אחוזים, חושבו עבור מים נטולי יונים ומי ים מלאכותיים בהתאמה.

לאחר השליטה, הכנת עמודת SPE יכולה להיעשות תוך פחות מחמש דקות, אם היא מבוצעת כראוי. ניתן להשלים את כל הליך ה-SPE בפחות משעה. לאחר פיתוחה, טכניקה זו סללה את הדרך לחוקרים בתחום מדעי הסביבה לחקור את הפיתוח של שיטות זיהוי חיסוני לניטור מזהמים אורגניים קטנים.

לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד להכין דגימות מים באמצעות המכשיר האוטומטי והחסכוני שלנו לניתוח מזהמים על ידי בדיקות חיסוניות. אל תשכח שעבודה עם מזהמים וממיסים אורגניים עלולה להיות מסוכנת, ותמיד יש לנקוט באמצעי זהירות כגון לבישת כפפות מתאימות ומשקפי מגן בעת ביצוע תהליך זה.