Name: Air-שנדגמו ניתוח סינון עבור אנדוטוקסינים ותוכן DNA (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-03-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 16 s
Description: חקור שיטות לניתוח אנדוטוקסינים ו-DNA בחלקיקים ביולוגיים באוויר באמצעות מסנני קוורץ. טכניקות אלו מסייעות להבנת אירוסולים ביולוגיים בפנים ובחוץ ולהערכת השפעותיהם על הבריאות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מודים לד"ר יואב ברק מהפקולטה לכימיה במכון ויצמן למדע על התמיכה והייעוץ. מחקר זה נתמך על ידי הקרן הלאומית למדע (מענק #913/12), ועל ידי קרן מינרווה במימון המשרד הפדרלי הגרמני לחינוך ומחקר.

<ol><li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Methods+of+Air+Sampling+and+Analysis%22">Methods of Air Sampling and Analysis</a>. Lodge, J. P. J. , 3rd ed, Lewis Publishers, Inc. (1988).</li>
<li>Costa, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characteristics+of+carbonaceous+aerosols+in+Emilia-Romagna+%28Northern+Italy%29+based+on+two+fall%2Fwinter+field+campaigns%5BTitle%5D)+AND+%22Atmos.+Res%22%5BJournal%5D)">Characteristics of carbonaceous aerosols in Emilia-Romagna (Northern Italy) based on two fall/winter field campaigns.</a> Atmos. Res. , (2015).</li>
<li>Brent, L. C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Development%2C+enhancement%2C+and+evaluation+of+aircraft+measurement+techniques+for+national+ambient+air+quality+standard+criteria+pollutants+%5B%5D%22">Development, enhancement, and evaluation of aircraft measurement techniques for national ambient air quality standard criteria pollutants [dissertation]</a>. , University of Maryland, College Park. Thesis 3682591 (2014).</li>
<li>Okuda, T., Schauer, J. J., Shafer, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+methods+for+elemental+analysis+of+atmospheric+aerosols+for+evaluating+human+health+impacts+of+aerosols+in+East+Asia%5BTitle%5D)+AND+%22Atmos.+Environ%22%5BJournal%5D)">Improved methods for elemental analysis of atmospheric aerosols for evaluating human health impacts of aerosols in East Asia.</a> Atmos. Environ. 97, 552-555 (2014).</li>
<li>Hospodsky, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterizing+airborne+fungal+and+bacterial+concentrations+and+emission+rates+in+six+occupied+children%27s+classrooms%5BTitle%5D)+AND+%22Indoor+air%22%5BJournal%5D)">Characterizing airborne fungal and bacterial concentrations and emission rates in six occupied children's classrooms.</a> Indoor air. , (2014).</li>
<li>Bottos, E., Woo, A., Zawar-Reza, P., Pointing, S., Cary, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Airborne+Bacterial+Populations+Above+Desert+Soils+of+the+McMurdo+Dry+Valleys%2C+Antarctica%5BTitle%5D)+AND+%22Microb.+Ecol%22%5BJournal%5D)">Airborne Bacterial Populations Above Desert Soils of the McMurdo Dry Valleys, Antarctica.</a> Microb. Ecol. 67, 120-128 (2014).</li>
<li>Ovadnevaite, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Submicron+NE+Atlantic+marine+aerosol+chemical+composition+and+abundance%3A+Seasonal+trends+and+air+mass+categorization%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Geophys.+Res.+Atmos%22%5BJournal%5D)">Submicron NE Atlantic marine aerosol chemical composition and abundance: Seasonal trends and air mass categorization.</a> J. Geophys. Res. Atmos. 119, (2014).</li>
<li>Lodge, J. Jr <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ES%26T+Books%3A+Methods+of+Air+Sampling+and+Analysis%2C+3rd+ed%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Sci.+Technol%22%5BJournal%5D)">ES&T Books: Methods of Air Sampling and Analysis, 3rd ed.</a> Environ. Sci. Technol. 23, 938(1989).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Aerosol+Measurement%3A+Principles%2C+Techniques%2C+and+Applications%22">Aerosol Measurement: Principles, Techniques, and Applications</a>. Pramod, K., Baron, P. A., Willeke, K. , John Wiley & Sons. (2011).</li>
<li>Vincent, J. H. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aVincent%2C+JH+%22Aerosol+Sampling%3A+Science%2C+Standards%2C+Instrumentation+and+Applications%22">Aerosol Sampling: Science, Standards, Instrumentation and Applications</a>. , John Wiley & Sons. (2007).</li>
<li>Duquenne, P., Marchand, G., Duchaine, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+Endotoxins+in+Bioaerosols+at+Workplace%3A+A+Critical+Review+of+Literature+and+a+Standardization+Issue%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Occup.+Hyg%22%5BJournal%5D)">Measurement of Endotoxins in Bioaerosols at Workplace: A Critical Review of Literature and a Standardization Issue.</a> Ann. Occup. Hyg. 57, 137-172 (2013).</li>
<li>Okuda, T., Schauer, J. J., Shafer, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+methods+for+elemental+analysis+of+atmospheric+aerosols+for+evaluating+human+health+impacts+of+aerosols+in+East+Asia%5BTitle%5D)+AND+%22Atmos.+Environ%22%5BJournal%5D)">Improved methods for elemental analysis of atmospheric aerosols for evaluating human health impacts of aerosols in East Asia.</a> Atmos. Environ. 97, 552-555 (2014).</li>
<li>Lewtas, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Air+pollution+combustion+emissions%3A+Characterization+of+causative+agents+and+mechanisms+associated+with+cancer%2C+reproductive%2C+and+cardiovascular+effects%5BTitle%5D)+AND+%22Mutat.+Res.-Rev.+Mutat%22%5BJournal%5D)">Air pollution combustion emissions: Characterization of causative agents and mechanisms associated with cancer, reproductive, and cardiovascular effects.</a> Mutat. Res.-Rev. Mutat. 636, 95-133 (2007).</li>
<li>Lang-Yona, N., Lehahn, Y., Herut, B., Burshtein, N., Rudich, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Marine+aerosol+as+a+possible+source+for+endotoxins+in+coastal+areas%5BTitle%5D)+AND+%22Sci.+Total.+Environ%22%5BJournal%5D)">Marine aerosol as a possible source for endotoxins in coastal areas.</a> Sci. Total. Environ. 499, 311-318 (2014).</li>
<li>Levin, J., Bang, F. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clottable+protein+in+Limulus%3A+its+localization+and+kinetics+of+its+coagulation+by+endotoxin%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb.+Diath.+Haemorrh%22%5BJournal%5D)">Clottable protein in Limulus: its localization and kinetics of its coagulation by endotoxin.</a> Thromb. Diath. Haemorrh. 19, 186-197 (1968).</li>
<li>Heid, C. A., Stevens, J., Livak, K. J., Williams, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real+time+quantitative+PCR%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Res%22%5BJournal%5D)">Real time quantitative PCR.</a> Genome Res. 6, 986-994 (1996).</li>
<li>O'Dowd, C. D., de Leeuw, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Marine+aerosol+production%3A+a+review+of+the+current+knowledge%5BTitle%5D)+AND+%22Phil.+Trans.+R.+Soc.+A%22%5BJournal%5D)">Marine aerosol production: a review of the current knowledge.</a> Phil. Trans. R. Soc. A. 365, 1753-1774 (2007).</li>
<li>O'Dowd, C. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biogenically+driven+organic+contribution+to+marine+aerosol%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Biogenically driven organic contribution to marine aerosol.</a> Nature. 431, 676-680 (2004).</li>
<li>Yang, R., Paparini, A., Monis, P., Ryan, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+next-generation+droplet+digital+PCR+%28ddPCR%29+with+quantitative+PCR+%28qPCR%29+for+enumeration+of+Cryptosporidium+oocysts+in+faecal+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Parasitol%22%5BJournal%5D)">Comparison of next-generation droplet digital PCR (ddPCR) with quantitative PCR (qPCR) for enumeration of Cryptosporidium oocysts in faecal samples.</a> Int. J. Parasitol. 44, 1105-1113 (2014).</li>
<li>Stetzenbach, L. D., Buttner, M. P., Cruz, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+and+enumeration+of+airborne+biocontaminants%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Detection and enumeration of airborne biocontaminants.</a> Curr. Opin. Biotechnol. 15, 170-174 (2004).</li>
<li>Dannemiller, K. C., Gent, J. F., Leaderer, B. P., Peccia, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+housing+characteristics+on+bacterial+and+fungal+communities+in+homes+of+asthmatic+children%5BTitle%5D)+AND+%22Indoor+air%22%5BJournal%5D)">Influence of housing characteristics on bacterial and fungal communities in homes of asthmatic children.</a> Indoor air. , (2015).</li>
<li>Yamamoto, N., Hospodsky, D., Dannemiller, K. C., Nazaroff, W. W., Peccia, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Indoor+emissions+as+a+primary+source+of+airborne+allergenic+fungal+particles+in+classrooms%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Sci.+Technol%22%5BJournal%5D)">Indoor emissions as a primary source of airborne allergenic fungal particles in classrooms.</a> Environ. Sci. Technol. 49, 5098-5106 (2015).</li>
<li>Yamamoto, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Particle-size+distributions+and+seasonal+diversity+of+allergenic+and+pathogenic+fungi+in+outdoor+air%5BTitle%5D)+AND+%22ISME+J%22%5BJournal%5D)">Particle-size distributions and seasonal diversity of allergenic and pathogenic fungi in outdoor air.</a> ISME J. 6, 1801-1811 (2012).</li>
<li>Karottki, D. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiovascular+and+lung+function+in+relation+to+outdoor+and+indoor+exposure+to+fine+and+ultrafine+particulate+matter+in+middle-aged+subjects%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Int%22%5BJournal%5D)">Cardiovascular and lung function in relation to outdoor and indoor exposure to fine and ultrafine particulate matter in middle-aged subjects.</a> Environ Int. 73, 372-381 (2014).</li>
<li>Guy, D. Endotoxins and Depyrogenation. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGuy%2C+D+%22Industrial+Pharmaceutical+Microbiology%3A+Standards+and+Controls%22">Industrial Pharmaceutical Microbiology: Standards and Controls</a>. Hodges, N., Hanlon, G. , Euromed. 12.1-12.15 (2003).</li>
<li>Associates of Cape Cod Incorporated. Limulus Amebocyte Lysate - PYROTELL-T. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://www.acciusa.com/pdfs/accProduct/inserts/PyrotellT.pdf">http://www.acciusa.com/pdfs/accProduct/inserts/PyrotellT.pdf</a> (2006).</li>
<li>Associates of Cape Cod Incorporated. Endotoxin (E. coli O113:H10) Control Standard Endotoxin (CSE). , Available from:
 <a target="_blank" href="http://www.acciusa.com/pdfs/accProduct/pisheets/CSE%200.5ug.pdf">http://www.acciusa.com/pdfs/accProduct/pisheets/CSE%200.5ug.pdf</a> (2007).</li>
<li>Associates of Cape Cod Incorporated. Cape Cod Certificate of Analysis. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://www.acciusa.com/pageCOA.php">http://www.acciusa.com/pageCOA.php</a> (2015).</li>
<li>Thorne, P. S., Bartlett, K. H., Phipps, J., Kulhankova, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+Five+Extraction+Protocols+for+Quantification+of+Endotoxin+in+Metalworking+Fluid+Aerosol%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Occup.+Hyg%22%5BJournal%5D)">Evaluation of Five Extraction Protocols for Quantification of Endotoxin in Metalworking Fluid Aerosol.</a> Ann. Occup. Hyg. 47, 31-36 (2003).</li>
<li>Thornton, B., Basu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+PCR+%28qPCR%29+primer+design+using+free+online+software%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem.+Mol.+Biol.+Educ%22%5BJournal%5D)">Real-time PCR (qPCR) primer design using free online software.</a> Biochem. Mol. Biol. Educ. 39, 145-154 (2011).</li>
<li>Madigan, M. T., Clark, D. P., Stahl, D., Martinko, J. M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMadigan%2C+MT+%22Brock+Biology+of+Microorganisms%22">Brock Biology of Microorganisms</a>. , 13th ed, Benjamin Cummings. (2011).</li>
<li>Watson, J. G., Chow, J. C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWatson%2C+JG+%22Aerosol+Measurement%3A+Principles+and+Techniques%22">Aerosol Measurement: Principles and Techniques</a>. , 3rd ed, John Wiley & Sons, Inc. 591-613 (2011).</li>
<li>Mueller-Anneling, L., Avol, E., Peters, J. M., Thorne, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ambient+endotoxin+concentrations+in+PM10+from+Southern+California%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Health+Perspect%22%5BJournal%5D)">Ambient endotoxin concentrations in PM10 from Southern California.</a> Environ. Health Perspect. 112, 583-588 (2004).</li>
<li>Hospodsky, D., Yamamoto, N., Peccia, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accuracy%2C+Precision%2C+and+Method+Detection+Limits+of+Quantitative+PCR+for+Airborne+Bacteria+and+Fungi%5BTitle%5D)+AND+%22Appl.+Environ.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Accuracy, Precision, and Method Detection Limits of Quantitative PCR for Airborne Bacteria and Fungi.</a> Appl. Environ. Microbiol. 76, 7004-7012 (2010).</li>
<li>Kutyavin, I. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((3%E2%80%B2-Minor+groove+binder-DNA+probes+increase+sequence+specificity+at+PCR+extension+temperatures%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">3′-Minor groove binder-DNA probes increase sequence specificity at PCR extension temperatures.</a> Nucleic Acids Res. 28, 655-661 (2000).</li>
<li>Brankatschk, R., Bodenhausen, N., Zeyer, J., Bürgmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simple+absolute+quantification+method+correcting+for+quantitative+PCR+efficiency+variations+for+microbial+community+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Appl.+Environ.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Simple absolute quantification method correcting for quantitative PCR efficiency variations for microbial community samples.</a> Appl. Environ. Microbiol. 78, 4481-4489 (2012).</li>
<li>Strober, W. Appendix 3B, Trypan Blue Exclusion Test of Cell Viability. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aStrober%2C+W+%22Current+Protocols+in+Immunology%22">Current Protocols in Immunology</a>. , John Wiley & Sons, Inc. (2001).</li>
<li>Hollander, A., Heederik, D., Versloot, P., Douwes, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+and+enhancement+in+the+analysis+of+airborne+endotoxin+levels+in+various+occupational+environments%5BTitle%5D)+AND+%22Am+Ind+Hyg+Assoc+J%22%5BJournal%5D)">Inhibition and enhancement in the analysis of airborne endotoxin levels in various occupational environments.</a> Am Ind Hyg Assoc J. 54, 647-653 (1993).</li>
<li>Kennedy, S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKennedy%2C+S+%22PCR+troubleshooting+and+optimization+%3A+the+essential+guide%22">PCR troubleshooting and optimization : the essential guide</a>. , Caister Academic Press. (2011).</li>
<li>Joiner, T. J., Kraus, P. F., Kupiec, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+Endotoxin+Testing+Methods+for+Pharmaceutical+Products%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Pharm+Compd%22%5BJournal%5D)">Comparison of Endotoxin Testing Methods for Pharmaceutical Products.</a> Int J Pharm Compd. 6, 408-409 (2002).</li>
<li>Ebentier, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+the+repeatability+and+reproducibility+of+a+suite+of+qPCR-based+microbial+source+tracking+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Water+Res%22%5BJournal%5D)">Evaluation of the repeatability and reproducibility of a suite of qPCR-based microbial source tracking methods.</a> Water Res. 47, 6839-6848 (2013).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

עבודה זו מתארת ​​שיטות חילוץ וזיהוי לכימות הוא אנדוטוקסינים ובהווה DNA בדגימות אירוסול שנאספו על מסננים. השיטות דורשות שגרות מדויקות וניתן לבצעו בקלות כל עוד בניסויים דבק כמה נקודות חיוניות וחשיבות דנו כאן. עבור שלב זיהוי רעלן הפנימי, לציין כי פתרון lysate די צמיג נוטה לייצר בועות על pipetting. קשה להסיר לך בועות, והם להביא לשינויי ערכי microplate הקוראים. לכן, חשוב למקם את המדגם ראשון בצלחת ורק לאחר שווידאת שכל ...

דגימת אוויר על מסננים הוא כלי בסיסי במחקר אירוסולים אטמוספריים. 1 המסננים שנדגמו הם נקודת המוצא כימית שונה, פיזי, ומאפיינים ביולוגיים של חלקיקי הסביבה שנאספו. 2-11 היתרון של גישה זו הוא כי ניתוחים שונים יכולים להיות ביצע off-line על מדגם זהה. ליקוט נתונים מכל הניתוחים השונים מאפשר לחוקר לקבל הבנה טובה של המאפיינים של חלקיקים שנאספו ועזרים בפתרון שאלות מורכבות בתחום מדעי האטמוספרה. 12,13 לדוגמה, ימיית יבשת אוויר-דגימות שנלקחו במהלך אותה תקופת ניתן להשוות ביחס רעילות החלקיקים שנדגמו והרכב ביולוגי. 14 לצורך המחקר, lipopolysaccharides (LPS), רכיבים על קירות תא החיידק גרם שליליים, הידוע גם בשם אנדוטוקסינים, חולצו מן מסננים שנדגמו על-shore ב אתר יבש, וכן הוערך באמצעותLimulus lysate amebocyte (LAL) הבדיקה. במקביל, ערכה הגנומי של תוכן החיידקים (חיידקים הכולל, גרמו שלילית, כחוליות) בוצעו על המדגם הזהה באמצעות תגובת שרשרת פולימרז כמוני (q-PCR). מבחן LAL מבוסס על מדידות של עכירות נוצרו בעקבות התוספת של תמצית מימית של amebocytes מן סרטן הפרסה, פוליפמוס Limulus, כדי בתמיסה מימית המכילה את אנדוטוקסינים. ריכוז רעלן הפנימי הגבוה ב המדגם, העכירות מהר מפתחת. 15 ניתוח q-PCR מבוסס על אותות קרינה נפלטים כמו קטע DNA ספציפי מוגבר. 16 על ידי ניטור בזמן אמת של האות בשלב המעריכים של PCR ניתן לכמת תגובת כיול עם עקומת סטנדרט, כמות ה- DNA הראשונית. השילוב של שני אלה מנתח יחד עם אחרים, כמפורט במקומות אחרים, 14 יכול לספק הערכה טובה של רמות של רעלן פנימי ואתכמות חיידקי המקור בדגימות. מטרת השיטה המוצגת כאן היא להשיג ניתוח מדויק והאמין ביותר של תוכן רעלן הפנימי ו- DNA של ביו-אירוסולים מופקים מסננים. בעוד שיטות הדגימו את המאפיינים הכימיים הפיסיים אנאורגניים אירוסולים ידועות, ולאחרונה, שיטות פותחו כדי לחקור מרכיב החומר האורגני שלה, 17 חלו מחקר דל על המרכיב הביולוגי של אירוסולים. 18 רציונל הזרם שיטה היא לתת מענה לפער זה על ידי ההצגה בפירוט שיטה חזקה לחילוץ, ניתוח וזיהוי החלק הביולוגי של אירוסולים מוטסים. 14 השיטה המפורטת כאן צפויה למצוא שימוש רחב התפשט בפרויקטים מחקריים אירוסול מקורה ביולוגיים החיצוניים המעורבים ניתוח מסנן. 20-24

<table><tbody><tr><td><דגימת מסנן חזקה></חזקה></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>HiVol 3000 - דוגם אוויר בנפח גבוה</td> מסנני מיקרופייבר <td>קוורץ Ecotech</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>Whatman</td><td>1851-865</td><td>203 מ"מ x 254 מ"מ</td></tr><tr><td>ELF - תנורי תא מעבדה</td><td>קרבוליט</td><td>ELF 11series</td><td></td></tr><tr><td>רדיד אלומיניום</td><td>אופל</td><td></td><td></td></tr><tr><td>שם</td><td>Company</td><td>Catalog Number</strong</td><td>>Comments</td></tr><tr><td>Endotoxin</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Sigma Aldrich</td><td>16368&nbsp;</td><td>ריאגנט מעבדה, 96%</td></tr><tr><td>ארון בטיחות ביולוגי מסוג Airstream Class II AC-4E1</td><td>ESCO</td><td>10011712</td><td></td></tr><tr><td>Pyrotell -T</td><td>Associates of Cape Cod, Inc.</td><td>T0051</td><td></td></tr><tr><td>בקרת תקן אנדוטוקסין</td><td>עמיתים של קייפ קוד, בע"מ</td><td>E0005-1</td><td>Escherichia coli&nbsp; O113:H10, 0.5 ומיקרו; g/בקבוקון 1 חבילה</td></tr><tr><td>LAL Reagent Water</td><td>Associates של קייפ קוד, בע"מ</td><td>מזרק סטרילי W0051</td><td></td></tr><tr><td>10 מ"ל עם Luer-Lok Tip</td><td>Becton-Dickinson & Co.</td><td></td><td></td>309605</tr><tr><td>מחט מזרק BD Precisionglide</td><td>Becton-Dickinson & Co.</td><td>305129</td><td>סטרילי&nbsp;</td></tr><tr><td>סרט איטום Parafilm-M</td><td>Parafilm</td><td>P7543</td><td>Sigma מספר קטלוגי</td></tr><tr><td>Microtubes</td><td>Axigen</td><td>MCT-200-C</td><td>2 מ"ל, ללא פירוגן</td></tr><tr><td>קוטר 1.12 ס"מ Cork Borer</td><td>Boekel Scientific</td><td>1601 BD Series - פלדה</td><td>חלק מסט מקדחי שעם המכיל מקדחים בקטרים שונים.&nbsp;</td></tr><tr><td>מיניפלסט צלחת פטרי 50 מ"מ</td><td>עין שמר</td><td>72050-01</td> מערבולת <td>אספטית</td></tr><tr><td>ג'יני 2&nbsp;</td><td>תעשיות מדעיות, בע"מ</td><td>SI-0297</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוצנטריפוגה 5415 D</td><td>Eppendorf</td><td>22621408</td><td></td></tr><tr><td>TC MicroWell 96 F SI עם מכסה</td><td>Nunc</td><td>167008</td><td>בארות תחתונות שטוחות (עם מכסה (עטוף בנפרד)), סטרילי, ללא פירוגן</td></tr><tr><td>Synergy HT Multi-Detection Microplate Reader</td><td>Biotek</td><td>7091000</td><td></td></tr><tr><td>שם</חזק></td><td><חזק>חברה</חזק></td><td>Catalog Number</td><td>Comments</td></tr><tr><td>DNA</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>DNA רחוק</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>7010</td><td></td></tr><tr><td>DNA סטנדרטי של המינים המיקרוביאליים המעניינים</td><td>ATCC או אוסף</td><td></td> תרביות אחר או <td>הזן המיקרוביאלי המתאים למיצוי DNA או ה-DNA</td></tr> <tr><td>המופקNeubauer</td><td>משופר Marienfeld</td><td>640030</td><td>Hemocytometer</td></tr><tr><td>TE buffer, Low EDTA</td><td>Life Technologies</td><td>12090-015</td><td>10 mM Tris-HCl (pH 8.0)&nbsp; 0.1 מ"מ EDTA&nbsp;</td></tr><tr><td>מים בדרגת PCR נטולי נוקלאז'&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>3315959001</td><td></td></tr><tr><td>פריימרים PCR</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td><td>מכוון למינים המיקרוביאליים המעניינים</td></tr><tr><td>בדיקות עם תווית כפולה</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td><td>מכוון למינים המיקרוביאליים המעניינים</td></tr><tr><td>צינורות מכסה בורג</td><td>Axigen</td><td>ST-200-SS</td><td>2 ml&nbsp;</td></tr><tr><td>ערכת מיצוי DNA של PowerSoil&nbsp;</td><td>Mo Bio Laboratories</td><td>12888-100</td><td></td></tr><tr><td>חרוזי זכוכית, שטופים בחומצה 425-600 ומיקרו; m</td><td>Sigma Aldrich</td><td>G8772-100G</td><td></td></tr><tr><td>חרוזי זכוכית, שטופים בחומצה < 106 ומיקרו; m</td><td>Sigma Aldrich</td><td>G4649-100G</td><td></td></tr><tr><td>PowerSoil Solution C1</td><td>Mo Bio Laboratories</td><td>12888-100-1</td><td>מאגר ליזה של תאים, ערכת אדמה Power Magic</td></tr><tr><td>Touch דלי קרח</td><td>Bel-Art</td><td>18848-4001</td><td></td></tr><tr><td>Mini-Beadbeater-16</td><td>BioSpec</td><td>607EUR</td><td></td></tr><tr><td>StepOnePlus מערכת PCR בזמן אמת</td><td>יישומי Biosystems</td><td>4376600</td><td></td></tr><tr><td>מהיר SYBR Green Master Mix</td><td>Applied Biosystems</td><td>4385612</td><td></td></tr><tr><td>TaqMan Gene Expression Master Mix</td><td>Applied Biosystems</td><td>4370048</td><td></td></tr><tr><td>MicroAmp מהיר אופטי 96 בארות צלחת תגובה עם ברקוד, 0.1 מ"ל</td><td>Applied Biosystems</td><td>4346906</td><td></td></tr><tr><td>MicroAmp ללא התזות 96 בארות</td><td>בסיס יישומי Biosystems</td><td>4312063</td><td></td></tr><tr><td>סרט</td> <td>דבק אופטי מיקרואמפאפלייד ביוסיסטמס</td><td>4311971</td><td></td></tr><tr><td>צנטריפוגה 5810 R</td><td>Eppendorf</td><td>5811 000.010</td><td>רוטור A-4-62 עם כפות MTP&nbsp;</td></tr></tbody></table>

air-שנדגמו ניתוח סינון עבור אנדוטוקסינים ותוכן dna

Air-sampled Filter Analysis for Endotoxins and DNA Content

מחקר אירוסול חיצוני כלל משתמש חומר חלקיקי נדגמים מסננים. הליך זה מאפשר אפיונים שונים של חלקיקים שנאספו להתבצע במקביל. מטרת השיטה המוצגת כאן היא להשיג ניתוח מדויק והאמין ביותר של תוכן רעלן הפנימי ו- DNA של ביו-אירוסולים מופקים מסננים. הפקת מולקולות אורגניות משקל מולקולרי גבוה, כגון lipopolysaccharides, ממסנני שנדגמו כרוך רועד המדגם בתווך על בסיס מים pyrogen חינם. הניתוח שלאחר מכן מבוסס על תגובה האנזימטית כי ניתן לאתר באמצעות מדידת turbidimetric. כתוצאת התוכן האורגני הגבוה על מסנני שנדגמו, החילוץ של דנ&quot;א הדגימות מתבצע באמצעות ערכת חילוץ DNA מסחרית אשר תוכננה במקור עבור קרקעות שונות כדי לשפר את תשואת DNA. איתור וכימות של מינים ספציפיים של חיידקים באמצעות Reacti שרשרת פולימראז כמותייםעל (q-PCR) ניתוח מתואר ולעומת משיטות אחרות.

<html> זה נפוץ ללמוד אירוסולים באטמוספירה באמצעות &quot;off-line&quot; מנתח של מסננים שנדגמו (ראה איור 2). 32 בדיקות כימיות של שנדגמו משנה כוללים אורגני (חלבון למשל, מולקולות פחמימנים, סכרידים) ואי-אורגניים (מתכות למשל, מלחים) תוכן . ניתוחים ביולוגיים לכלול תוכן מיקרואורגניזם קיימא ושאינו קיימא, זיהוי מינים באמצעות גישת DNA או מיקרוסקופיה, כמו גם כימותים מבוססים-DNA. <p class="jove_content" fo:keep-t...

שני ניתוחים משלימים של חלקיקים ביולוגיים אטמוספריים ממסננים שנדגמו באוויר מתוארים כאן: מיצוי וזיהוי של אנדוטוקסין ושל DNA.

Air-שנדגמו ניתוח סינון עבור אנדוטוקסינים ותוכן DNA

Outdoor aerosol research commonly uses particulate matter sampled on filters. This procedure enables various characterizations of the collected particles ...

המטרה הכללית של פרוצדורה זו היא לתאר כיצד לנתח במדויק את תכולת האנדוטוקסין וה-DNA של חלקיקים הנישאים באוויר שנדגמו על מסננים. שיטה זו יכולה לסייע במתן מענה לשאלות מפתח במחקר של אירוסולים ביולוגיים בחללים סגורים ובחוץ, כגון הבנת סיבות בריאותיות. את פרוצדורת הדגימה על המסנן ידגים ינון מזר, סטודנט לתואר מתקדם מהמעבדה שלי.לדגימה בנפח גבוה, השתמשו במסננים העשויים מסיבי קוורץ. לחלופין, בחרו את סוג המסנן הספציפי ואת גודל נקבוביות הסינון המתאימים ביותר לצרכי המחקר. בצעו חימום מקדים (Prebake) למסננים המיועדים לדגימה של תרכובות אורגניות וביולוגיות, כאשר ראשית עטפו כל מסנן בנפרד בנייר אלומיניום.לאחר מכן יש לאפות אותם בתנור מעבדה בטמפרטורה של 450 °C למשך חמש שעות לפחות. פעולה זו תסלק שאריות אורגניות קיימות. יש לאחסן את המסננים האופים בטמפרטורה של 20 °C עד למועד השימוש בהם לדגימה.בשלב הבא, נקה וחטא את הדוגם לנפח גבוה, כזה המתואר בפרוטוקול הטקסט המצורף. לאחר מכן, הנח את המסנן שנאפה מראש במארז המסננים והפעל את הדוגם בהתאם להוראות היצרן כדי לאסוף דגימה מתאימה. בתוך מabilis בטיחות ביולוגית מסוג class two, גזור 22 חלקיקים מעגליים של חומר מסנן נקי שנאפה מראש, באמצעות מקדח שעם נקי בקוטר 1.12 centimeter.השתמש בחלקים אלו כדי להכין סדרה של מסננים עם תוספת אנדוטוקסין שישמשו כביקורות. לאחר מכן, חתוך את המסננים המכילים את הדגימה שנאספה באמצעות שואב שעם נקי בקוטר 1.12 centimeter והעבר כל דגימה לשפופרת נפרדת של 2 milliliter נקייה מפיירוגנים. כמו כן, העבר את המסננים המיובשים עם תוספת האנדוטוקסין לשפופרות נפרדות של 2 milliliter נקיות מפיירוגנים.הוסף מיליליטר אחד של מים נקיים מפירוגנים (pyrogen free water) לכל מבחנה. נער אותם במשך 60 דקות בטמפרטורת החדר באמצעות מנער מעבדה. לאחר מכן, סבב את מבחנות הדגימה במיקרוצנטריפוגה ב-375 ×g למשך 10 דקות.לאחר מכן, העבירו את העליון המכיל את האנדוטוקסינים למבחנה חדשה של 2 מיליליטר נקייה מפירוגנים. הכינו פלטה של 96 בארות בעלת תחתית שטוחה ומכסה, נקייה מפירוגנים, עבור בדיקת האנדוטוקסינים, על ידי קביעת מיקומי הדגימות תחילה.בשלב הבא, הפעל את קורא המיקרופלטית ותכנת אותו לתגובה קינטית בטמפרטורה של 37 °C עם ניעור כל חמש דקות. לאחר מכן, בצע מדידות באורך גל של 405 nm. חזור על פעולת הניעור של חמש הדקות ועל קריאת הפלטה 18 פעמים.טען את הדגימות לתוך המגש על ידי הוספת 50 µL של תמיסות סטנדרט אנדוטוקסין, ששימשו קודם לביצוע ה-spike למסננים, לשורות A1 עד A10 ו-B1 עד B10. מקם את הביקורות הריקות (blanks) ב-A11, A12, B11 ו-B12. לאחר מכן, הוסף את העלייה (supernatant) מתוך תמצית המסנן עם ה-spike שעברה סרצ'יפוגציה ואת הביקורות הריקות שלה לשורות C ו-D. לבסוף, הוסף את העליות מהדגימות הניסיוניות ומהביקורות הריקות לבארות הנותרות לפי הצורך.כדי להפעיל את הבדיקה, הוסיפו במהירות 50 µL של תמיסת limulus amebocyte glycate לכל באער. נערה את הפלטה בעדינות באופן אופקי, לפני הרמתה לקורא הפלטות ותחילת ההרצה הניסויית.עם סיום התהליך, הוצא את הפלטה מקורא הפלטות. קבע את רמת האנדוטוקסין בכל דגימה באמצעות עקומת הסטנדרט, וחשב גם את היעילות שבה חולצו האנדוטוקסינים מהמסננים של הדגימה. ראשית, הכן את המסננים שהושלב בהם DNA כפי שמתואר בפרוטוקול הטקסט הנלווה.עבור כל דגימת מסנן, הכין תערובת של חרוזי זכוכית שטופים בחומצה בתוך מבחנות סטריליות של 0.5 מיליליטר, הכוללת 0.1 גרם חרוזים בעלי קוטר של 425 עד 600 מיקרומטר ו-0.3 גרם חרוזים בעלי קוטר של 106 מיקרומטר או פחות. לאחר מכן, גזור שלוש חתיכות מעגליות ממיקומים שנבחרו באופן אקראי מכל דגימת מסנן, באמצעות שואב שעם (cork borer) מחומצם בעל קוטר של 1.12 סנטימטר. הנח את דגימות המסנן למבחנות נפרדות עם מכסה הברגה בנפח של שני מיליליטר.לאחר מכן, הוסיפו את תערובת חרוזי הזכוכית לכל מבחנה יחד עם 60 µL של בופר לליזיס תאים (cell lysis buffer) המסופק עם ערכה להפקת DNA. סגרו את המבחנות והניחו את הדגימות במכשיר ה-bead beater. השתמשו ב-bead beater כדי לפרק את התאים המסוננים באופן מכני למשך דקה אחת, ולאחר מכן קררו את הדגימות על ידי הנחתן על קרח למשך דקה נוספת.חזרו על מחזור זה חמש פעמים. המשיכו לפי הפרוטוקול של ספק הערכה ובצעו מיצוי של ה-DNA מהתאים שעברו ליזה. לאחר האלוציה, העבירו שוב את הדגימה המאולוצית דרך עמודת המיצוי פעם שנייה כדי לשפר את תנובת ה-DNA.הפעל את מכשיר ה-quantitative PCR מראש כדי לאפשר לו זמן לחימום. בקובץ תוכנית חדש, הזן את פרטי הרצת ה-quantitative PCR בתוכנת ההפעלה של המכשיר. לאחר מכן, חטא את משטח העבודה באמצעות חומר להסרת זיהומי DNA ממשטחים ועבוד אך ורק עם מבחנות, טיפים וריאגנטים סטריליים.בנוסף, הניחו דלי קרח לצד שולחן העבודה והניחו את תערובת ה-tac polemoraris בתוך הדלי. הכינו את תערובת התגובה ל-quantitative PCR כפי שמתואר בטבלה 4 בפרוטוקול הטקסט המצורף. שמרו את תערובת התגובה בחושך ועל קרח עד לשימוש.בשלב הבא, הניחו מיקרופלטה נקייה בתוך מחזיק פלטות כדי למנוע ממנה לגעת במשטח העבודה ולשמור על ניקיונה. הוסיפו מיקרוליטר אחד של DNA סטנדרטי, DNA של דגימה או מים נקיים מנוקלאז (nuclease-free water), לתוך בארות מיקרופלטת ה-quantitative PCR בשלוש חזרות. לאחר מכן, הוסיפו תשעה מיקרוליטרים של תערובת ריאקציה מאסטר (master reaction mix) לכל בארת ריאקציה.בסיום, כסו את הפלטה בסרט דביק אופטי ואטמו אותה היטב מכל הצדדים. סובבו את הפלטה בצנטריפוגה המצוידת במחזיקי פלטות למשך דקה אחת במהירות של 1000 ×g, לפני הנחתה בטרמוסייקלר. לבסוף, הפעילו והריצו את תוכנית ה-quantitative PCR שהוכנה.במהלך הפקת האנדוטוקסין, דגימות מסוננות מסובבבות בצנטריפוגה כדי להפיק את האנדוטוקסין מהמסנן. מהירויות צנטריפוגה שונות מובילות ליעילויות הפקה משתנות, במיוחד בריכוזי אנדוטוקסין גבוהים יותר.יש לבצע בדיקה ראשונית של יעילות המיצוי עבור המסנן הספציפי שנבחר והפרוטוקול שבוצע. יעילות מיצוי גבוהה יותר מושגת מהוספת תסמין למסננים נקיים בהשוואה למסנני קוורץ שנבדקו, ושתי יעילויות אלו נמוכות מזו המושגת באמצעות גילוי ישיר של תמיסת הסטנדרט. לאחר השליטה בשיטה, ניתן לבצע את אנליזת האנדוטוקסין תוך שלוש שעות וחצי, במידה והיא מבוצעת כהלכה.בעקבות הליך זה, ניתן לבצע שיטות אחרות כגון ריצוף DNA כדי לענות על שאלות נוספות בנוגע להעברה של אורגניזמים באטמוספירה. לאחר צפייה בסרטון זה, תהיה לכם הבנה טובה לגבי האופן שבו ניתן להפיק ביעילות אנדוטוקסינים ו-DNA ממסנני דגימות אוויר ולנתח אותם באופן מדויק.

air-sampled-filter-analysis-for-endotoxins-and-dna-content

Research

JoVE Journal

Environment

סביבה

סרטון זה מדגים בדיקה ביולוגית מהירה לחקירת פעילות אנדוטוקסין בדגימת דם שלמה באמצעות שיטה מבוססת כימילומינסנציה. בדיקה זו היא בדיקת סמן ביולוגי מהירה ורגישה לאבחון בשלב מוקדם של אלח דם בתיווך אנדוטוקסין.

בדיקת פעילות אנדוטוקסין: בדיקה ביולוגית מבוססת כימילומינסנציה לחקר פעילות אנדוטוקסין בדגימת דם

סרטון וידאו זה מתאר את הפורמט הטורבידימטרי של בדיקת Limulus amoebocyte lysate, או LAL, כדי להעריך זיהום אנדוטוקסין בננו-פורמולציות דוקסורוביצין ליפוזומליות PEGylated. העכירות של התמיסה בעקבות התגובה של האנדוטוקסין עם מגיב LAL מסייעת להעריך את האנדוטוקסין בדגימה.

Turbidimetric Limulus Amoebocyte Lysate Assay: טכניקה לזיהוי וכימות זיהום אנדוטוקסין בתרופות ננו

סרטון זה מתאר בדיקת קריש ג'ל כדי לקבוע את נוכחותם של אנדוטוקסינים חיידקיים בננו-פורמולציות באמצעות Limulus Amoebocyte Lysate שמקורו בתאי הדם של סרטני פרסה. הבדיקה מסייעת לבדוק זיהום אנדוטוקסין של מוצרים פרמצבטיים, כולל פורמולציות מבוססות ננו.

בדיקת ג'ל-קריש לימולוס אמבוציטים ליזט: שיטה לזיהוי אנדוטוקסין חיידקי בפורמולציות ננו-חלקיקים

סרטון זה מדגים בדיקה לבחינת הפעילות התלויה בקולטן דמוי אגרה (TLR) של גורמי השעתוק גורם גרעיני-קאפה-B (NF-κB) וחלבון מפעיל -1 (AP-1) במקרופאגים. ה-TLRs מפעילים מפל איתות פרו-דלקתי בעת זיהוי דפוסים מולקולריים הקשורים לנזק (DAMPs), ומפעילים NF-κB ו-AP-1. המקרופאגים המהונדסים מייצרים אנזים אלקליין פוספטאז עוברי מופרש (SEAP) בהפעלת NF-κB ו-AP-1, אשר מזוהה באמצעות תגובה כרומוגנית.

בדיקה עבור NF-&kcy--תלוי TLR;B/AP-1 איתות גורם שעתוק במקרופאגים

אנו מתארים פרוטוקול לסינון דגימות מים עם מחסנית מסנן וחילוץ DNA סביבתי (eDNA) מבלי לחתוך את המארז כדי להסיר את המסנן. פרוטוקול זה פותח עבור מטברקוד דנ"א מדגים, אולם הוא ישים גם לדנ"א סביבתי מאורגניזמים אחרים.

שימוש במחסנית סינון עבור הסינון של מי דוגמאות הפקת DNA הסביבה

קביעת המגוון פטרייתי בתוך סביבה היא שיטה מנוצל בלימודי בריאות תעסוקתית לזהות את הסכנות הבריאותיות. פרוטוקול זה מתאר מיצוי DNA מדגימות האוויר תעסוקתית עבור הגברה ורצף של אזורים ITS פטרייתי. גישה זו מזהה הרבה מינים פטרייתי זה ניתן להתעלם על ידי שיטות הערכה מסורתית.

אוסף והפקת האוויר תעסוקתית דוגמאות לניתוח של DNA פטרייתי

בזאת אנו מציגים פרוטוקול למדוד במיטה את פעילות האנדוטוקסין של דגימות הדם האנושיות. הבדיקה של פעילות אנדוטוקסין היא מבחן פשוט לבצע והוא עשוי להיות ביוארקר שימושי בחולים באורח אנוש חולה עם אלח דם.

שיטת פעילות אנדוטוקסין לאיתור דם כולו אנדוטוקמיה בחולים חולי אנוש

הבנת ההרכב הביולוגי של חלקיקי סביבתי חשוב לחקר שלה השפעות משמעותיות על בריאות האדם ואת התפשטות המחלה. . היינו שלושה סוגים של שיטות דגימה bioaerosol, ניתוח הביולוגי של חיידקים באוויר כדאי לחקור את קהילות חיידקים באוויר בתנאים סביבתיים שונים.

הלחנה וניתוח הפצה Bioaerosols בתנאים סביבתיים שונים

זיהוי של endotoxins של ננו-חומרים מהונדסים מייצג אחד האתגרים הגדול ביותר בתחום של ננו-רפואה. כאן, אנו מציגים חקר מקרה המתארת את המסגרת המורכבת LAL שלושה פורמטים שונים כדי להעריך את פוטנציאל זיהום אנדוטוקסין בחלקיקים.

זיהוי של אנדוטוקסין ניסוחים-Nano באמצעות מבחני Lysate (LAL) Amoebocyte Limulus

פרוטוקול זה מספק לחוקרים עם שיטה מהירה, עקיפה של מדידת tlr תלויי-NF-кb/AP-1 הפעילות שעתוק בשורה מקרופאג cell מורה בתגובה למגוון של משטחים פולימריים ושכבות חלבון נספחת כי המודל ביומיהמיקרוסביבה השתל ביומטריה.

תא עיתונאי מקרופאג שיטה לבחון קולטן שיחת כמו-תיווך NF-kB/AP-1 איתות על שכבות חלבון Adsorbed על משטחים פולימריים

צורות אמינות ומדויקות של ניתוח DNA שניתן לפרוס בשטח הן קריטיות לתעשיות רבות. מאמר זה מציע שתי שיטות לניתוח מיקרוביאלי סביבתי בשטח: 1) בידוד DNA מיקרוביאלי מדגימות סביבתיות באמצעות ערכת שדה חילוץ ביולוגית, ו-2) ניתוח DNA באמצעות יחידת qPCR בשטח.

ניתוח DNA מיקרוביאלי בשטח באמצעות ערכת שדה חילוץ ביולוגית ויחידת qPCR שדה

חקור שיטות לניתוח אנדוטוקסינים ו-DNA בחלקיקים ביולוגיים באוויר באמצעות מסנני קוורץ. טכניקות אלו מסייעות להבנת אירוסולים ביולוגיים בפנים ובחוץ ולהערכת השפעותיהם על הבריאות.

Air-שנדגמו ניתוח סינון עבור אנדוטוקסינים ותוכן DNA

גלה סרטונים נוספים