Name: הודעת הטור derivatization שימוש ביצועים גבוהים תזרים תגובת עמודות נוזלת כרומטוגרפיה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-04-26T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 25 s
Description: למדו שיפור רגישות ויעילות של כרומטוגרפיית נוזלים בביצועים גבוהים עם עמודות תזרום תגובתי. שיטה זו מבטלת סלילי תגובה ומאפשרת ניתוח מהיר של אנטי-אוקסידנטים, חומצות אמינו ופנולים במחקר פרמצבטי וביורפואי.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי UWS ו-ThermoFisher Scientific. אחד המחברים (DK) מודה על קבלת פרס אוסטרלי לתארים מתקדמים.

<ol><li>Srijaranai, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+1-%282-pyridylazo%29-2-naphthol+as+the+post+column+reagent+for+ion+exchange+chromatography+of+heavy+metals+in+environmental+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Microchem.+J%22%5BJournal%5D)">Use of 1-(2-pyridylazo)-2-naphthol as the post column reagent for ion exchange chromatography of heavy metals in environmental samples.</a> Microchem. J. 99, 152-158 (2011).</li>
<li>Kubickova, A., Kubicek, V., Coufal, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((UV-VIS+detection+of+amino+acids+in+liquid+chromatography%3A+online+post-column+solid-state+derivatization+with+Cu%28II%29+ions%5BTitle%5D)+AND+%22J+Sep+Sci%22%5BJournal%5D)">UV-VIS detection of amino acids in liquid chromatography: online post-column solid-state derivatization with Cu(II) ions.</a> J Sep Sci. 34, 3131-3135 (2011).</li>
<li>Quinto, M., Spadaccino, G., Palermo, C., Centonze, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+aflatoxins+in+cereal+flours+by+solid-phase+microextraction+coupled+with+liquid+chromatography+and+post-column+photochemical+derivatization-fluorescence+detection%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.+A%22%5BJournal%5D)">Determination of aflatoxins in cereal flours by solid-phase microextraction coupled with liquid chromatography and post-column photochemical derivatization-fluorescence detection.</a> J. Chromatogr. A. 1216, 8636-8641 (2009).</li>
<li>Lee, M., Lee, Y., Soltermann, F., von Gunten, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+N-nitrosamines+and+other+nitro%28so%29+compounds+in+water+by+high-performance+liquid+chromatography+with+post-column+UV+photolysis%2FGriess+reaction%5BTitle%5D)+AND+%22Water+Res%22%5BJournal%5D)">Analysis of N-nitrosamines and other nitro(so) compounds in water by high-performance liquid chromatography with post-column UV photolysis/Griess reaction.</a> Water Res. 47, 4893-4903 (2013).</li>
<li>Niu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+isoflavonoids+in+Radix+Puerariae+for+quality+control+using+on-line+high+performance+liquid+chromatography-diode+array+detector-electrospray+ionization-mass+spectrometry+coupled+with+post-column+derivatization%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Res+Int%22%5BJournal%5D)">Identification of isoflavonoids in Radix Puerariae for quality control using on-line high performance liquid chromatography-diode array detector-electrospray ionization-mass spectrometry coupled with post-column derivatization.</a> Food Res Int. 48, 528-537 (2012).</li>
<li>Zacharis, C. K., Tzanavaras, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liquid+chromatography+coupled+to+on-line+post+column+derivatization+for+the+determination+of+organic+compounds%3A+a+review+on+instrumentation+and+chemistries%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chim.+Acta%22%5BJournal%5D)">Liquid chromatography coupled to on-line post column derivatization for the determination of organic compounds: a review on instrumentation and chemistries.</a> Anal. Chim. Acta. 798, 1-24 (2013).</li>
<li>Dousa, M., Brichac, J., Gibala, P., Lehnert, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+hydrophilic+interaction+chromatography+determination+of+lysine+in+pharmaceutical+preparations+with+fluorescence+detection+after+postcolumn+derivatization+with+o-phtaldialdehyde%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharm+Biomed+Anal%22%5BJournal%5D)">Rapid hydrophilic interaction chromatography determination of lysine in pharmaceutical preparations with fluorescence detection after postcolumn derivatization with o-phtaldialdehyde.</a> J Pharm Biomed Anal. 54, 972-978 (2011).</li>
<li>Iijima, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+an+Online+Post-Column+Derivatization+System+for+Ultra+High-Performance+Liquid+Chromatography+%28UHPLC%29+and+Its+Applications+to+Analysis+of+Biogenic+Amines%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Sci%22%5BJournal%5D)">Optimization of an Online Post-Column Derivatization System for Ultra High-Performance Liquid Chromatography (UHPLC) and Its Applications to Analysis of Biogenic Amines.</a> Anal Sci. 29, 539-545 (2013).</li>
<li>Cunico, R. L., Schlabach, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+Ninhydrin+and+o-Phthalaldehyde+Postcolumn+Detection+Techniques+for+High+Performance+Liquid+Chromatography+of+Free+Amino%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.+A%22%5BJournal%5D)">Comparison of Ninhydrin and o-Phthalaldehyde Postcolumn Detection Techniques for High Performance Liquid Chromatography of Free Amino.</a> J. Chromatogr. A. 1983, 461-470 (1983).</li>
<li>Donahue, E. P., Brown, L. L., Flakoll, P. J., Abumrad, N. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+Measurement+of+Leucine-specific+Activity+in+Biological+Fluids+by+Ion-exchange+Chromatography+and+Post-column+Ninhydrin+Detection%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.+A%22%5BJournal%5D)">Rapid Measurement of Leucine-specific Activity in Biological Fluids by Ion-exchange Chromatography and Post-column Ninhydrin Detection.</a> J. Chromatogr. A. 571, 29-36 (1998).</li>
<li>Udenfriend, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescamine%3A+A+Reagent+for+Assay+of+Amino+Acids%2C+Peptides%2C+Proteins+and+Primary+Amines+in+the+Picomole+Range%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Fluorescamine: A Reagent for Assay of Amino Acids, Peptides, Proteins and Primary Amines in the Picomole Range.</a> Science. 1972, 871-872 (1972).</li>
<li>Samejima, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Separation+of+Fluorescamine+Derivitices+of+Aliphatic+Diamines+and+Polyamines+by+High+Speed+Liquid+Chromatography%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.+A%22%5BJournal%5D)">Separation of Fluorescamine Derivitices of Aliphatic Diamines and Polyamines by High Speed Liquid Chromatography.</a> J. Chromatogr. A. 96, 250-254 (1974).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+antioxidant+activity+of+ten+compounds+in+different+tea+samples+by+means+of+an+on-line+HPLC-DPPH+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Res+Int%22%5BJournal%5D)">Evaluation of antioxidant activity of ten compounds in different tea samples by means of an on-line HPLC-DPPH assay.</a> Food Res Int. 53, 847-856 (2013).</li>
<li>Niu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+the+anti-oxidants+in+Flos+Chrysanthemi+by+HPLC-DAD-ESI%2FMS%28n%29+and+HPLC+coupled+with+a+post-column+derivatisation+system%5BTitle%5D)+AND+%22Phytochem+Anal%22%5BJournal%5D)">Identification of the anti-oxidants in Flos Chrysanthemi by HPLC-DAD-ESI/MS(n) and HPLC coupled with a post-column derivatisation system.</a> Phytochem Anal. 24, 59-68 (2013).</li>
<li>Raudonis, R., Bumblauskiene, L., Jakstas, V., Pukalskas, A., Janulis, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+and+validation+of+post-column+assay+for+screening+of+radical+scavengers+in+herbal+raw+materials+and+herbal+preparations%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.+A%22%5BJournal%5D)">Optimization and validation of post-column assay for screening of radical scavengers in herbal raw materials and herbal preparations.</a> J. Chromatogr. A. 1217, 7690-7698 (2010).</li>
<li>Raudonis, R., Raudone, L., Jakstas, V., Janulis, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+evaluation+of+post-column+free+radical+scavenging+and+ferric+reducing+antioxidant+power+assays+for+screening+of+antioxidants+in+strawberries%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.+A%22%5BJournal%5D)">Comparative evaluation of post-column free radical scavenging and ferric reducing antioxidant power assays for screening of antioxidants in strawberries.</a> J. Chromatogr. A. 1233, 8-15 (2012).</li>
<li>Zakrzewski, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+Methimazole+in+Pharmaceutical+Preparations+using+an+HPLC+Method+Coupled+with+an+Iodine-Azide+Post-Column+Reaction%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Liq.+Chrom.+Rel.+Technol%22%5BJournal%5D)">Determination of Methimazole in Pharmaceutical Preparations using an HPLC Method Coupled with an Iodine-Azide Post-Column Reaction.</a> J. Liq. Chrom. Rel. Technol. 32, 383-398 (2008).</li>
<li>Zakrzewski, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+validation+of+a+reversed-phase+HPLC+method+with+post-column+iodine-azide+reaction+for+the+determination+of+thioguanine%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Development and validation of a reversed-phase HPLC method with post-column iodine-azide reaction for the determination of thioguanine.</a> J. Anal. Chem. 64, 1235-1241 (2009).</li>
<li>Gritti, F., Guiochon, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accurate+measurements+of+the+true+column+efficiency+and+of+the+instrument+band+broadening+contributions+in+the+presence+of+a+chromatographic+column%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.+A%22%5BJournal%5D)">Accurate measurements of the true column efficiency and of the instrument band broadening contributions in the presence of a chromatographic column.</a> J. Chromatogr. A. 1327, 49-56 (2014).</li>
<li>Stewart, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Post+cotumn+derivatization+methodology+in+high+performance+liquid+chromatography+%28HPLC%29%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Post cotumn derivatization methodology in high performance liquid chromatography (HPLC).</a> Trends Anal. Chem. 1, 170-174 (1982).</li>
<li>Rigas, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Post-column+labeling+techniques+in+amino+acid+analysis+by+liquid+chromatography%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Bioanal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Post-column labeling techniques in amino acid analysis by liquid chromatography.</a> Anal. Bioanal. Chem. 405, 7957-7992 (2013).</li>
<li>Frei, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reaction+Detectors+in+Modern+Liquid+Chromatography%5BTitle%5D)+AND+%22Chromatographia%22%5BJournal%5D)">Reaction Detectors in Modern Liquid Chromatography.</a> Chromatographia. 15, 161-166 (1982).</li>
<li>Pravadil-Cekic, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+Reaction+Flow+Chromatography+for+the+Analysis+of+Amino+Acid%3A+Derivatisation+With+Fluorescamine+Reagent%5BTitle%5D)+AND+%22Microchem.+J%22%5BJournal%5D)">Using Reaction Flow Chromatography for the Analysis of Amino Acid: Derivatisation With Fluorescamine Reagent.</a> Microchem. J. , (Accepted Manuscript) (2015).</li>
<li>Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Dennis, G. R., Shalliker, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parallel+segmented+flow+chromatography+columns+with+multiplexed+detection%3A+An+illustration+using+antioxidant+screening+of+natural+products%5BTitle%5D)+AND+%22Microchem.+J%22%5BJournal%5D)">Parallel segmented flow chromatography columns with multiplexed detection: An illustration using antioxidant screening of natural products.</a> Microchem. J. 110, 726-730 (2013).</li>
<li>Koleva, I. I., Niederlander, H. A. G., van Beek, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+On-Line+HPLC+Method+for+Detection+of+Radical+Scavenging+Compounds+in+Complex+Mixtures%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">An On-Line HPLC Method for Detection of Radical Scavenging Compounds in Complex Mixtures.</a> Anal Chem. 72, 2323-2328 (2000).</li>
<li>Selim, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Two-component+Post-column+Derivatisation+Method+Utilsing+Reaction+Flow+Chromatography%5BTitle%5D)+AND+%22Microchem.+J%22%5BJournal%5D)">A Two-component Post-column Derivatisation Method Utilsing Reaction Flow Chromatography.</a> Microchem. J. 116, 87-91 (2014).</li>
<li>Bigley, F. P., Grob, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+Phenols+in+Water+and+Wastewater+by+Post-column+Reaction+Detection+High-performance+Liquid+Chromatography%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.+A%22%5BJournal%5D)">Determination of Phenols in Water and Wastewater by Post-column Reaction Detection High-performance Liquid Chromatography.</a> J. Chromatogr. A. 350, 407-416 (1985).</li>
<li>Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Dennis, G. R., Shalliker, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reaction+flow+chromatography+for+rapid+post+column+derivatisations%3A+The+analysis+of+antioxidants+in+natural+products%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.+A%22%5BJournal%5D)">Reaction flow chromatography for rapid post column derivatisations: The analysis of antioxidants in natural products.</a> J. Chromatogr. A. 1303, 62-65 (2013).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

RF-PCD מאפשר ערבוב יעיל של מגיב derivatization עם הפוסט-טור בשפכים HPLC ללא שימוש סלילי התגובה, למזער את ההשפעות של הרחבת הלהקה ושיפור ביצועים ההפרדה. שיטות RF-PCD גם הראו שיפורים בתגובה האות ביחס שיטת הזיהוי. Camenzuli et al. 28 היה הראשון לדווח על השימוש בעמודי זרימת תגובה עם DPPH • לצורך זיהוי של ROS ב מדגם קפה אספרסו. המחקר כלל ניתוח ואופטימיזציה של תנאי RF כדי להשיג ביצועים מרביים, בדיקות טווח הריכוזים DPPH • עם ספיקות DPPH •</su...

כרומטוגרפיה נוזלית ביצועים גבוהים (HPLC) בשילוב עם פוסט טור derivatization (PCD) היא כלי רב עצמה כי הוא שימושי בפתרון מספר בעיות במעבדה האנליטית. זה יכול לשמש כדי לזהות תרכובות שאינן אחר לגילוי עם החבילה של גלאי זמין 1,2, להגדיל את האות של אנליטי היעד, המאפשר גבולות נמוכים של גילוי quantitation 3-5 או סלקטיבי derivatize אנליטי יעד על מנת למנוע תופעות מטריקס 6. בשימוש נפוץ התגובות PCD כוללים התגובה של אמינים, כגון חומצות אמינו, עם-phthaladehyde אורתו 7-9, ninhydrin 9,10 או fluorescamine 11,12, את derivatization של מינים חמצן תגובתי (ROS) עם 2,2-diphenyl- 1-picrylhydrazil הרדיקלי (DPPH •) 13,14 או 2,2&#39;-azino-bis (3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic חומצה (ABTS) 15,16, ושימוש מגיב-אזיד יודיד כדי derivatize ג גופריתתרכובות ontaining 17,18. יש, עם זאת, חסרונות רבים לשימוש תגובות PCD עם מערכות HPLC 6. בעיקר בקרב אלה הוא השימוש סליל תגובה בין נקודת תוספת של מגיב derivatization (ים) ו הגלאי, המאפשר זמן לערבוב והתגובה להתרחש 8. יש תגובה אלה לולאות לעתים קרובות כרכים של 500 μl או יותר, אשר גבוה משמעותית לעומת היקף שאר המערכת HPLC 19. שימוש תגובה בנפח גבוה אלה לולאות תוצאות רחבות שיא גדל לעומת מה יהיה ציין ללא הנוכחות של לולאת התגובה. התוצאה היא קצרות, פסגות רחבות יותר כי יש גבולות גבוהים של quantitation וזיהוי ואפקטים שלילי רזולוצית chromatographic. איורי 1 ו -2 להדגיש את ההידרדרות של צורת שיא הנגרמות כתוצאה מהתוספת של כרכי לולאת תגובה שונים פוסט עמודה. ניתוח זהבוצע באמצעות רכב שלב נייד של מתנול 94% ו -6% מי מילי- Q. קצב הזרימה של השלב הנייד היה 1 מ&quot;ל / דקה, את עוצמת הזריקה היה 20 μl ואת אורך הגל הניתוח היה 265 ננומטר. סלילי של כמויות משתנות מת מ -20 μl 1,000 μl הוכנסו בין הטור לבין הגלאי כדי לדמות את ההשפעה של נפח מת לולאת תגובה בשיטות PCD. לולאות אלה הוכנו מ צינורות נירוסטה של ​​קוטר פנימי 0.5 מ&quot;מ. הניסוי בוצע על מערכת HPLC המורכבת של בקר (SCL-10AVP), בלחץ נמוך Gradient Valve (FCL-10ALVP), משאבה (LC-20AD), מזרק (SIL-10ADVP), וגלאי PDA ( SPD-M10ADVP). השלב הנייד נשאב באמצעות מסלק גזים לפני המבוא למערכת HPLC. ההפרדה בוצעה באמצעות טור 250 מ&quot;מ x 4.6 מ&quot;מ id 5 מיקרומטר. תנאי הניסוי נבחרו להיות אופייני של תגובות PCD אשר פורסמו לאחרונה בספרות. הפשוט, התקנת כור טור פוסט הנפוץ ביותר נקראת כור צינורי הלא מפולח אשר הוא למעשה צינור ארוך, דק שדרכו הנוזל יכול לזרום ואת התגובה יכולה להתרחש. בשנת שיא במערכת זו רחבה תלויה לא רק את הנפח מת להוסיף למערכת, אלא גם את הקוטר הפנימי של הצינור כפי מודגש על ידי Iijima et al. 8. יתר על כן, גיאומטרית סליל ממלא תפקיד הרחבת המותג ציינה. סטיוארט 20 נאמר כי התפתלות של הכור משנה את פרופילי זרימה משני, וכתוצאה מכך ערבוב טוב יותר, כלומר הנפח המת יכול להיות ממוזער. זה כבר נאמר כי הרחבת השיא הוא לא משמעותי בעת שימוש צינורי פתוח סרוגים סליל 21. כאשר הרחבת השיא היא גדולה מדי, סוגים אחרים של כורים יכולים גם להיחשב 20,22. אלה עשויים לכלול כורי מיטה או כורי תזרים מפולחים. כורים אלה הם שימושיים במיוחד עבור תגובות איטיות שאחרת requirלולאות התגובה הגדולה הדואר. כמו כורי צינורי הלא מפולחים הם הסוגים הנפוצים ביותר של כורים המשמשים ליישומי PCD, שאר מאמר זה עוסק בסוג זה של התקנת כור. העיצוב של זרימת תגובה (RF) טור משלבת הולמת סוף מרובה יציאות מאפשרת בשלב נייד כדי לצאת (או להיכנס) בעמודה או דרך יציאה אחת הממוקמת באזור המרכז הרדיאלי של העמודה או שלוש יציאות הממוקמים בחלק החיצוני קיר באזור של הטור (ראה איור 3). זרמים אלה שני מופרדים באמצעות הולם סוף המכיל frit נקבובי מרכזי מוקפת טבעת חדירה כי הוא בתורו המוקף frit הנקבובי חיצוני המשתרע החוצה אל קיר העמודה. בשל זרימת צלב טבעת המרכזית החדירה אינו אפשרי בין שני האזורים הנקבוביים. במהלך כרומטוגרפיה זרימת תגובה, מגיב derivatization (ים) נשאבים נגד כיוון זרימה בשלב נייד לאחת או TWo הנמלים החיצוניים של טור זרימת תגובה. Eluent הטור הוא מעורבב עם מגיב derivatization (הים) frit החיצוני והעביר אל הגלאי דרך יציאה חיצונית בחינם. זרימת תגובה יכולה לשמש אחת מעמד derivatization מגיב יחיד (1 נמלית מגיב derivatization, 1 יציאה להעביר את eluent העמודה אל הגלאי ו -1 היציאה החסומה) או מערכת מגיב כפולה (2 יציאות עבור ריאגנטים derivatization ו -1 יציאה להעביר את eluent עמודה אל הגלאי). תזרים מן הזרם המרכזי או שניתן להשתמש בהם כדי לזהות את eluent טור underivatized, ריבוב ביעילות זיהוי 23, או עבר לבזבז. טכניקת כוונון אחד עיקרית זמינה בעת הפעלת כרומטוגרפיה RF-PCD הוא היחס של התזרים המרכזי ואת הפריפריה. היחס האופטימלי עבור כל derivatization תלוי במספר גורמים כגון האם הזרם המרכזי יזוהו או עבר לבזבז. לכן פעם היחס האופטימלי נקבע, יש להבטיח את זה כי יחס התזרים הנכון מושגת לפני כל סיבוב מתבצע. זה כבר נמצא כי השימוש של frit לערבב את זרם eluent עמודה מגיב derivatization בתוצאות RF-PCD ב ערבוב יעיל יותר לעומת טכניקות ערבוב המסורתי שבדרך כלל להעסיק נפח מת אפס מת נפח T-piece או נמוך פ- חתיכה לערבב שני הזרמים. זו אפשרה את השימוש של לולאות תגובה קטנות יחסית, או אפילו החיסול של לולאת התגובה כלילה. צמצום תוצאות גודל לולאת תגובת פסגות חדות בהשוואה לשיטות derivatization טור פוסט מסורתיות. משמעות דבר היא כי, על אף העובדה כי לא כל eluent העמודה derivatized, אות גדולה יחס רעש הם נצפו ולכן גבולות נמוכים של גילוי quantitation יכולים להיות מושגת. כרומטוגרפיה זרימת תגובה פותחה כדי להתגבר על קשיים עם התאמת תגובת PCD<html> ים לעמודות ומערכות HPLC מודרניים, במיוחד מההפסד היעיל הנגרם על ידי להקת הרחבה בשל כרכים מתו טור פוסט גדולים הנובעים מהצורך להעסיק תגובת נפח גדולה לולאות. תהליכי הערבוב היעילים יותר ב RF-PCD לעומת PCD הקונבנציונלי אומרים כרכי לולאת תגובה קטנה יכולים להיות מועסקים מובילים לעלייה יעילה הפרדה נצפית. יתר על כן כרומטוגרפיה RF-PCD מראה הן גדלו אות וירידת רעש לעומת טכניקות PCD קונבנציונליות וכתוצאה מכך גבולות נמוכים של גילוי quantitation בהשוואה לשיטות PCD קונבנציונליים. יתרון נוסף של RF-PCD בהשוואה לשיטות PCD קונבנציונאלי היא היכולת לנטר את זרם underivatized כי elutes מהנמל המרכזי של הטור RF כמו גם את זרם derivatized כי elutes מאזור הפריפריה של הטור. RF-PCD היא טכניקה חדשה יחסית אך מבטיח המציג יתרונות רבים על פני שיטות PCD המסורתית. &gt; חיבור של טור RF מושג כמעט באותו אופן כמו טור HPLC קונבנציונלי עם ההבדל העיקרי להיות מספר אבזרי קצה על עמודת RF. אבזרים המשמשים לחיבור טור HPLC תקן למערכת HPLC מסוגלים לשמש לחיבור טור RF למערכת HPLC.

<table><tbody><tr><td>מכשיר HPLC</td><td>Agilent</td><td>1290 סדרת HPLC</td><td></td></tr><tr><td>משאבות נוספות למערכת נגזרות</td><td>Shimadzu</td><td>LC-20A</td><td></td></tr><tr><td>RF colum</td><td></td><td></td><td>צינורות PEEK לא</td></tr><tr><td>מסחריים</td><td>Sigma Aldrich</td><td>Z227307</td><td></td></tr><tr><td>פקקי</td><td></td><td></td> עמודים <td>מסופקים עם</td></tr><tr><td>חותך צינור PEEK</td> עמוד <td>Sigma אולדריץ'</td><td>Z290882</td><td></td></tr><tr><td>איזון</td><td></td><td></td> סולם אנליטי <td>איזון אנליטי 4 נקודות</td></tr><tr><td>שעון</td><td></td><td></td> עצור <td>ציוד לא מדעי</td></tr><tr><td>בקבוקוני</td><td></td><td></td> איסוף כל <td>בקבוקון קטן עם תחתית שטוחה יתאים, למשל , בקבוקוני HPLC</td></tr><tr><td>בקבוקוני</td><td></td><td></td> HPLC <td>יהיה תלוי במכשיר בו נעשה שימוש</td></tr><tr><td>כלים לפתרונות פאזה ונגזרת ניידים</td> <td>Sigma Aldrich</td><td>Z232211</td><td></td></tr><tr><td>General Laboratory כלי זכוכית</td><td></td><td></td><td>צלוחיות נפח, פיפטות, etc. כמות ונפחים יהיו תלויים בשיטת הכנת הדגימה.</td></tr><tr><td>מתנול</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>34860</td><td></td></tr><tr><td>DPPH</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>D9132</td><td></td></tr><tr><td>אמוניום אצטט</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>17836</td><td></td></tr><tr><td>אמוניה</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>320145</td> אצטוניטריל <td>קורוזיבי</td></tr><tr><td></td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>34998</td><td></td></tr><tr><td>פלואורסקמין</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>F9015</td><td></td></tr><tr><td>4- אמינואנטיפירן&nbsp;</td><td>Acros Organics BVBA</td><td>AC103151000</td><td></td></tr><tr><td>אשלגן פריציאניד&nbsp;</td><td>אנאלהR</td><td>B10204-30</td><td></td></tr></tbody></table>

הודעת הטור derivatization שימוש ביצועים גבוהים תזרים תגובת עמודות נוזלת כרומטוגרפיה

Post Column Derivatization Using Reaction Flow High Performance Liquid Chromatography Columns

מוצג פרוטוקול לשימוש בעמודות כרומטוגרפיה נוזלית בעלות ביצועים גבוהים של זרימת תגובה לשיטות המשתמשות בנגזרת פוסט עמודה (PCD). קושי מרכזי בהתאמת PCD למערכות ועמודות HPLC מודרניות הוא הצורך בסלילי תגובה בנפח גדול המאפשרים ערבוב ריאגנטים ולאחר מכן תגובת הנגזרת להתרחש. נפח עמוד עמוד גדול זה מוביל להרחבת הלהקה, מה שמביא לאובדן יעילות ההפרדה הנצפית ואכן זיהוי ברגישות. בזרימת תגובה לאחר נגזרת עמודה (RF-PCD) ריאגנט הנגזרת נשאב כנגד זרימת השלב הנייד לתוך אחת או שתיים מהיציאות החיצוניות של עמודת זרימת התגובה, שם הוא מעורבב עם שפכי עמודה בתוך פריט השוכן בתוך מתקן קצה העמודה. טכניקה זו מאפשרת ערבוב יעיל יותר של ריאגנט/ים של שפכי העמודה והנגזרת, כלומר ניתן למזער את נפח לולאות התגובה או אפילו לבטל לחלוטין. נמצא כי שיטות RF-PCD מתפקדות טוב יותר משיטות PCD קונבנציונליות מבחינת יעילות ההפרדה הנצפית ויחס האות לרעש. יתרון נוסף של טכניקות RF-PCD הוא היכולת לנטר שפכים המגיעים מהיציאה המרכזית במצבם התת-קרקעי. RF-PCD נוסה כעת על מגוון קטן יחסית של תגובות לאחר עמודה, עם זאת, אין כרגע סיבה להציע שלא ניתן להתאים את RF-PCD לאף רכיב אחד או שניים קיימים (כל עוד שני הריאגנטים מתווספים בו זמנית) לאחר תגובת נגזרת העמודה.

שיטת PCD הראשונה הותאמה לשימוש על ידי RF-PCD הייתה derivatization של נוגדי חמצון באמצעות 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazil הרדיקלי (DPPH •) 24. תגובה זו הונהגה על ידי ואח Koleva. 25 כבר בשימוש נרחב מאז. הגילוי מסתמך על הַדהָיָה של DPPH • הרדיקלי בנוכחות של מיני חמצן תגובתי, ומכאן הנוכחות של תוצאות נוגדות חמצון טיפה הספיגה ציינה. תגובת DPPH • לעתים קרובות מעסיקה לולאות תגובה גדולות של 500 μl או יותר 13-15, אולם ...

מוצג פרוטוקול לשימוש בעמודות כרומטוגרפיה נוזלית בעלות ביצועים גבוהים של זרימת תגובה לשיטות המשתמשות בנגזרת פוסט עמודה (PCD).

A protocol for the use of reaction flow high performance liquid chromatography columns for methods employing post column derivatization (PCD) is ...

המטרה הכוללת של שיטה זו היא לשפר את היעילות והרגישות של נגזרת לאחר עמודה (post column derivatization), או שיטת PCD, בכרומטוגרפיה נוזלית בעוצמה גבוהה (HPLC), באמצעות שימוש בעמודת זרימה ריאקטיבית. שיטה זו יכולה לסייע במתן תשובה לשאלות מפתח בתחומים כגון מדעי הרוקחות, הביו-רפואה ומדעי הסביבה, שבהם מנותחים תרכובות בעלות תגובה נמוכה לגלאי HPLC. היתרון המרכזי של טכניקה זו הוא שאין צורך בסלילי תגובה.מכיוון שערבוב התוצר היוצא מהעמוד עם ריאגנט הנגזרת מתבצע ביעילות רבה יותר מאשר בשיטות קונבנציונליות, שיטה זו שימשה למתן תובנות לגבי נוגדי חמצון, חומצות אמינו ופנולים. ניתן ליישמה גם לסוגי תרכובות אחרים, כגון תיולים, מתכות, אנטיביוטיקה ורעלים.למרות שלא כל הדגימה עוברת נגזרת (derivatization), בשל הרחבת פס (band broadening) נמוכה יותר, ריכוז האנליט בזרם השפכים גבוה יותר מאשר בניתוח נגזרת רגיל לאחר העמוד (post column derivatization). כדי להתחיל בהליך זה, הכין את מכשיר ה-HPLC עם 100% water בקו A ו-100% methanol בקו B כפאזה ניידת, תוך שטיפה (purging) של המשאבות בהתאם לדרישות היצרן. הגדר את רכיבי ה-HPLC ואת משאבת הנגזרת הנוספת.לאחר מכן, הגדירו את גלאי ה-UV/VIS לניתוח באורך גל של 520 ננומטר. חברו את הכניסה של עמודת זרימת התגובה, או RF, למכשיר ה-HPLC. חברו יציאת פריפריה לגלאי ה-UV/VIS באמצעות צינור בקוטר פנימי של 0.13 מילימטר ובאורך של 15 סנטימטר.בשלב הבא, חברו את קו המשאבה של ה-DPPH ליציאה היקפית (peripheral port) בפתח היציאה של עמודת ה-RF. חסמו את היציאה ההיקפית שאינה בשימוש בפתח היציאה של עמודת ה-RF באמצעות פקק לעמודה. חברו צינור באורך 15 סנטימטרים וקוטר פנימי של 0.13 מילימטר לפתח היציאה המרכזי של עמודת ה-RF.הגדירו את קצב הזרימה של משאבת ה-HPLC ל-1 mm/min ב-100% methanol. לאחר מכן, השביגו את העמודה עם 100% methanol למשך 10 דקות. בשלב זה, הכינו תמיסת DPPH במתנול בריכוז 0.1 mg/mL.בצע סוניקציה לבקבוק המכיל את ריאגנט ה-DPPH למשך 10 דקות. פurge (נקה) את משאבת ה-DPPH עם ריאגנט ה-DPPH שהוכן, בהתאם לדרישות היצרן. לאחר מכן, קח שני כלים נקיים ויבשים וסמן אחד כ-"מרכזי" (central) והשני כ-"היקפי" (peripheral). שקול את שני הכלים בדיוק.אספו את השפכים היוצאים מהפתח המרכזי אל הכלי המסומן "central" למשך דקה אחת. לאחר שקילה חוזרת של כלי הפתח המרכזי, חשבו את משקל הזרימה מהפתח המרכזי. חזרו על השלבים הקודמים עבור השפכים היוצאים מה-UV/VIS המחובר לפתח ההיקפי של עמודת ה-RF.חשב את המשקל עבור כלי הנמל ההיקפי. לאחר מכן, חשב את אחוז הזרימה המגיעה מהנמלים המרכזי וההיקפי. חזור על השלבים הקודמים עד שיחס הזרימה יהיה נכון, ולאחר מכן הגדר את קצב הזרימה של משאבת ה-DPPH ל-0.5 milliliters per minute.בסיום ההרצה, הפסיקו את זרימת משאבת ריאגנט הגזירה (derivatization). הוציאו את קו משאבת ריאגנט ה-DPPH מהפתח ההיקפי וסגרו את הפתח באמצעות פקק. שווו את העמוד עם הפאזה הניידת שבה הוא אמור להישמר, תוך מתן אפשרות לפאזה הנייदित לעבור דרך העמוד בקצב של 1 millimeter per minute למשך 10 דקות.לאחר מכן, הפסיקו את זרימת משאבת שלב הבועות במכשיר ה-HPLC. לבסוף, החליפו את ריאגנט ה-DPPH במתנול ושטפו את המשאבה הנוספת. כאן מוצגים שני כרומטוגרמים של דגימת קפה ריסטרטו, שעברה נגזרת עם רדיקל DPPH באמצעות מכשור PCD קונבנציונלי ו-RF-PCD.גבולות הכימות והגילוי המחושבים עבור כל אחת מחומצות האמינו שנבדקו הן במצב RF-PCD והן במצב PCD קונבנציונלי רשומים כאן. כרומטוגרמה של ארבע חומצות האמינו שנבדקו באמצעות שיטת ה-PCD הקונבנציונלית, שיטת ה-RF-PCD והזרם ללא נגזרת משיטת ה-RF-PCD מוצגת כאן. השוואה של האותות שהתקבלו עבור הפסגות של glycine ו-leucine באמצעות שיטות ה-PCD הקונבנציונלית וה-RF-PCD מוצגת כאן.כאן מוצגת השוואה של רוחב הפיסג של פיסגת הטריפטופאן בעת ניתוח באמצעות שיטת ה-PCD הקונבנציונלית, שיטת ה-RF-PCD, והזרם ללא נגזרת משיטת ה-RF-PCD. דגימת בדיקה בעלת 21 רכיבים, שהכילה רכיבים מסוימים המראים תגובה לסכימת הגזירה וחלק שאינם מראים תגובה, הופרדו, עברו גזירה וזוהו. לצורך השוואה, אותה תערובת הופרדה וזוהה ללא גזירה.השוואה בין צורת הפיס של para-Cresol, הן לאחר נגזרת באמצעות עמודת RF-PCD והן ללא נגזרת, מוצגת כאן. ברגע שהטכניקה תשלט, ניתן להגדירה באותו זמן שנדרש לניתוח נגזרת רגיל לאחר העמודה. בעת ביצוע הליך זה, חשוב לזכור להיצמד ככל האפשר ליחסי הזרימה שהוגדרו.בעקבות פרוצדורה זו, ניתן להשתמש בריאגנטים אחרים לנגזרת לאחר העמודה, כגון OPA, ninhydrin או הלוגנים, כדי לנתח תרכובים אחרים. לאחר צפייה בסרטון זה, צריכה להיות לכם הבנה טובה לגבי האופן שבו מגדירים ומכוונים עמודת זרימה לתגובה.

post-column-derivatization-using-reaction-flow-high-performance

Research

JoVE Journal

Chemistry

כימיה

כאן, אנו מציגים פרוטוקול להפעלה ואופטימיזציה של עמודת טכנולוגיית הזרימה הפעילה (AFT) במצב זרימת וילון (CF) לביצועי הפרדה משופרים.

הרמת מסך טור זרימה: אופטימיזציה של יעילות ורגישות

כאן אנו מציגים פרוטוקול עבור הליך אריזת העמודות הנימיות של FlashPack הממוטב. יישום פרוטוקול ממוטב להתקנת פצצת לחץ נפוצה של 100 ברים מאפשר אריזה וייצור מהירים פי 10 של עמודות נימיות ארוכות בעלות ביצועים גבוהים במיוחד.

ייצור עמודות נימי פשוטות עם ביצועים גבוהים במיוחד עם גישת FlashPack

פרופיל מטבוליט לא ממוקד על ידי כרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים במיוחד בשילוב עם ספקטרומטריית מסה (UPLC-MS) היא טכניקה רבת עוצמה לחקירת חילוף החומרים.  מאמר זה מתאר זרימת עבודה טיפוסית המשמשת לפרופיל מטבוליט לא ממוקד של סרום, כולל ארגון והכנת דגימות, רכישת נתונים, ניתוח נתונים, בקרת איכות וזיהוי מטבוליטים.

בקנה מידה גדול Profiling metabolomic ללא ממוקד של סרום על ידי כרומטוגרפיה נוזלית ביצועים-Mass ספקטרומטריית Ultra (UPLC-MS)

לא ממוקד metabolomics מספק השערת יצירת תמונת מצב של פרופיל מטבולי. פרוטוקול זה יהיה להדגים את המיצוי והניתוח של מטבוליטים מתאי, סרום, או רקמות. מגוון המטבוליטים סקר באמצעות מיצוי שלב נוזלי נוזלי, microflow ultraperformance כרומטוגרפיה נוזלית / רזולוציה גבוהה ספקטרומטריית מסה (UPLC-HRMS) מצמידים את תוכנת ניתוח ההפרש.

Metabolomics לא ממוקדים ממקורות ביולוגיים באמצעות Ultraperformance כרומטוגרפיה נוזלית-רזולוציה גבוהה ספקטרומטריית מסה (UPLC-HRMS)

דופן התא החיידקי מורכבת מפפטידוגליקן, רשת מקרומולקולרית של גדילי סוכר המוצלבים על ידי פפטידים. כרומטוגרפיה נוזלית עם ביצועים גבוהים מספקת רזולוציה גבוהה ותפוקה לגילויים חדשניים של הרכב פפטידוגליקני. אנו מציגים הליך לבידוד קירות התא (sacculi) והכנתם לאחר מכן לניתוח באמצעות UPLC.

בידוד והכנת קירות תא חיידקי לניתוח קומפוזיציוני על ידי כרומטוגרפיה נוזלית אולטרה ביצועים

כאן, אנו מציגים פרוטוקול להפעלה וכוונון של עמודות כרומטוגרפיה של זרימה מקוטעת מקבילה כדי לאפשר זיהוי מרובה.

כוונון טור מקוטע זרימה מקבילה והפעלת איתור Multiplexed

Phosphoinositides מאותת שומנים שיחסית שפע במהירות משתנה בתגובה לגירויים שונים. מאמר זה מתאר שיטה למדידת השפע של phosphoinositides ידי תאים מטבולית תיוג עם -inositol מיו 3 H-, ואחרי חילוץ וdeacylation. glycero-inositides חולץ אז מופרדים על ידי כרומטוגרפיה נוזלית בעל ביצועים גבוהים ולכמת ידי זרימת נצנץ.

Radiolabeling וכימות של רמות סלולריות של Phosphoinositides ידי נצנץ זרימה מצמיד כרומטוגרפיה נוזלית ביצועים גבוהים

המתודולוגיה רומן מוצגת לסנתז ואלסטומרים נוזליים-גבישים עיקרי שרשרת התכנית באמצעות מונומרים מתחילים זמינים מסחרי. מגוון רחב של נכסים טרמומכני היה מותאם על ידי התאמת כמות crosslinker, תוך ביצועי actuation היו תלויים בכמות של מאמץ ליישם במהלך תכנות.

סינתזה של אלסטומרים נוזליים-גבישים לתכנות ראשי-שרשרת באמצעות תגובת תיאול-acrylate שני שלבים

כאן, אנו מתארים בפירוט רב פרוטוקול מבוסס וחזק למיצוי גלוקוזינולטים מחומרים צמחיים טחונים. לאחר טיפול בסולפטאז על העמודה של התמציות, הדסולפוגלוקוזינולטים נפלטים ומנותחים על ידי כרומטוגרפיה נוזלית בלחץ גבוה.

שיטה פשוטה עבור Glucosinolate הפקה וניתוח עם כרומטוגרפיה נוזלית בלחץ גבוה (HPLC)

נציג של מיצוי מוצק-פאזי נוח מצמידים כרומטוגרפיה נוזלית בלחץ גבוה (HPLC) עם זיהוי אלקטרוכימי (ECD) נחישות סימולטני של נוירוטרנסמיטרים מונואמין שלוש ושתיים של מטבוליטים שלהם בשתן תינוקות. אנחנו גם לזהות את המטבוליט MHPG כמו סמן פוטנציאלי לאבחון מוקדם של נזק מוחי תינוקות.

שיטה נוחה עבור חילוץ וניתוח עם כרומטוגרפיה נוזלית בלחץ גבוה של נוירוטרנסמיטורים קטכולאמין מטבוליטים שלהם

למדו שיפור רגישות ויעילות של כרומטוגרפיית נוזלים בביצועים גבוהים עם עמודות תזרום תגובתי. שיטה זו מבטלת סלילי תגובה ומאפשרת ניתוח מהיר של אנטי-אוקסידנטים, חומצות אמינו ופנולים במחקר פרמצבטי וביורפואי.

הודעת הטור derivatization שימוש ביצועים גבוהים תזרים תגובת עמודות נוזלת כרומטוגרפיה

גלה סרטונים נוספים