הרמת מסך טור זרימה: אופטימיזציה של יעילות ורגישות

המטרה הכוללת של שיטה זו היא לשפר את היעילות והרגישות של הפרדה באמצעות אופטימיזציה של עמוד זרימת וילון. שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום מדעי הסביבה, זיהוי פלילי ובתחומים הדורשים ניתוח דגימת עקבות, שבהם נדרשת טכניקת הפרדה יעילה ורגישה ביותר. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא בכך שהיא מגבירה את יעילות ההפרדה ואת רגישות הניתוח בהשוואה לשיטות קונבנציונליות של הפרדת HPLC.

שיטה זו יכולה לספק אמצעי להגדלת כוח ההפרדה, ובכך להאיץ את הקיבולת, בצורה חסכונית וחסכונית בזמן. עמוד זרימת הווילון הוא מושג חדש לעוסקים ב-HPLC, אולם השימוש בו אינו מסובך. זה פשוט דורש אופטימיזציה של יחסי זרימה מתאימים.

ראשית, הכינו בקבוקים של 100 אחוז מים טהורים במיוחד, ו-100 מתנול לשלבים ניידים A ו-B של מכשיר ה-HPLC. נקה את המשאבות לפי דרישת היצרן. לאחר הטיהור, נתק את קו המשאבה משסתום המזרק של הדגימה האוטומטית.

חבר חתיכת T לקו המנותק. לכל יציאה של חתיכת ה- T, חבר צינורות בקוטר פנימי של 0.13 מילימטר ואורך 15 סנטימטרים. חבר צינור אחד מחתיכת ה-T לשסתום המזרק של הדגימה האוטומטית.

לבסוף, הגדר את המשאבה לקצב זרימה של מיליליטר אחד לדקה. טרפו שני כלי איסוף ריקים וסמנו אותם מרכזיים והיקפיים. למשך 60 שניות, השתמש בכלי המסומן במרכז כדי לאסוף את השלב הנייד היוצא מהקו המגיע מהמזרק.

שקלו מחדש את הכלי המרכזי וקבעו את המסה של השלב הנייד שנאסף. חזור על תהליך זה על ידי איסוף הזרימה דרך היציאה ההיקפית עם הכלי ההיקפי. קבע את אחוז הזרימה, או מיליליטר לדקה, מכל שורה באמצעות המשוואות המצוינות.

הנמל המרכזי צריך להיות כ-40 אחוזים, והנמל ההיקפי כ-60 אחוזים. אם הערכים שונים ביותר משני אחוזים, שנה את אורך או קוטר הצינור כדי להתאים את יחס הזרימה. לאחר מכן חזור על שלבי האיסוף והחישוב.

לאחר מכן, כבה את זרימת המשאבה וחבר את קו המזרק ליציאה המרכזית של כניסת העמודה. חבר גם את הקו מחתיכת ה-T ליציאה ההיקפית של כניסת העמודה. הגדל לאט את קצב הזרימה למיליליטר אחד לדקה של 100 אחוז שלב נייד B.To לסיים את כוונון המערכת, הזרם 100 אחוז מתנול במיליליטר לדקה למשך 10 דקות כדי לאזן את העמודה.

כדי להתחיל, השתמש בצינורות כדי לחבר את יציאת השקע המרכזית לגלאי UV-Vis. חבר את אותו סוג ואורך של צינור ליציאת היציאה ההיקפית של עמוד ה-CF. לאחר מכן, הגדר את המשאבה לקצב זרימה של מיליליטר אחד לדקה.

שני כלי איסוף ריקים ושוב תווית אחד לאיסוף מרכזי ואחד לציוד היקפי. למשך 60 שניות, השתמש בכלי המסומן במרכז כדי לאסוף את השלב הנייד היוצא מגלאי ה-UV-Vis. שקלו מחדש את כלי האיסוף כדי לקבוע את מסת התמיסה שחמקה.

חזור על תהליך זה עם יציאת היציאה ההיקפית וכלי האיסוף המסומן. כעת קבע את אחוז הזרימה מכל קו כפי שבוצע קודם לכן עם זרימת הכניסה. קו ה-UV-Vis צריך להיות 21 אחוז, וזרימת היציאה ההיקפית צריכה להיות 79 אחוז.

אם יחס הזרימה סוטה משמעותית, התאם את גודל הצינור המחובר ליציאת גלאי ה-UV-Vis כדי לשנות את אחוז הזרימה המרכזי. חשוב שיחסי הזרימה בין המרכזי וההיקפי בכניסה ויציאת העמוד יעקבו אחר פרוטוקול זה כדי להבטיח ביצועים מיטביים של עמוד זרימת הווילון. עמודי טכנולוגיית זרימה אקטיבית פותחו באמצעות עיצוב פריט מיוחד באביזרי קצה העמודים מרובי היציאות כדי להתגבר על ההטרוגניות של מיטת העמודים ולשפר את ביצועי ההפרדה.

תערובת בדיקה המכילה פנטול, בוטילבנזן ופנטילבנזן נותחה על עמודות קונבנציונליות בקוטר פנימי של 4.6 ו-2.1 מילימטר, ועמודת זרימת וילון קוטר פנימית של 4.6 מילימטר. הפרדת התערובת ממחישה את הביצועים המשופרים מבחינת היעילות והרגישות של עמוד זרימת וילון ביחס לעמודים סטנדרטיים. השימוש בעמודת זרימת וילון הגדיל את האות לבוטילבנזן למרות נפח השיא המופחת.

לאחר שליטה, ניתן להגדיר טכניקה זו תוך פחות מחצי שעה אם היא מבוצעת כראוי. ניתן לעשות שימוש חוזר בהגדרת עמודת זרימת הווילון שוב ושוב, אך יש לבדוק את יחסי הזרימה באופן שגרתי. בעת ניסיון הליך זה, חשוב לזכור להיות קרוב ככל האפשר ליחסי הזרימה שנקבעו.

עמוד זרימת הווילון סלל את הדרך לחוקרים בתחום HPLC לדחוף את גבולות העמודות ומכשירי UPLC כדי להשיג ניתוח דגימה מהיר יותר מבלי לפגוע בביצועי ההפרדה. לאחר צפייה בסרטון זה, עליך להבין את החשיבות של עמודי זרימת וילון, מכיוון שהם יכולים לספק הפרדה טובה יותר מעמודי HPLC קונבנציונליים.