Name: דגם פסגת כריתת עכבר כדי ללמוד התחדשות לב יונקים מוקדמת (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-01-23T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 8 s
Description: למדו את שיטת כריתת הקודקוד בעכברים נאונטליים לחקר התחדשות הלב המוקדמת ביונקים. פרוטוקול זה מספק גישה ישירה לחקירת מנגנוני התיקון הלבבי והתחדשות השריר הלבבי.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מודים בני הזוג. ג&#39;יימס הוקינס, Zu-Xi יו וואן צ&#39;ו מהלב הלאומי, הריאות ודם מכון (NHLBI) לסיוע שלהם עם ניתוח עכבר והכנה וצביעה של חלקי פרפין. המחברים מודים לועדת עורכי עמיתי NIH למערכת סיוע.

כל ניסויי העכבר אושרו על ידי הטיפול בבעלי חיים ושימוש בתכנית במכון הלאומי לבריאות (NIH) עם מספר פרוטוקול H0083R3. NHLBI IACUC אישר את הפרוטוקול ללא משככי כאבים. 1. היפותרמיה הרדמה בעכברים בילוד <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעקר ספוגים וציוד כירורגי בחיטוי לפני הניתוח. הכן את כל החומרים כירורגית ולעבור על דקות 15-20 מעקר חרוז חם מראש להגיע 240 מעלות צלזיוס עד 270 מעלות צלזיוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העבר את כל C57BL הגורים / 6 (P1 גיל) מאם הסיעוד שלהם לכלוב עכבר נקי עם מצעים טריים וחומרי קינון. ברגע שהגורים נלקחים לחדר ניתוח, לבצע את ניתוח הפסגה מייד כדי למזער את זמנם בילה מופרד מאמו וכדי להפחית את הסיכון של קניבליזציה האימהית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימו ספוגים על מיטת קרח ולאחר מכן למקם גור אחד בספוג ל~ 3 דקות כדי להשיג הרדמה היפותרמיה. לאשר הרדמה על ידי התבוננות APNea ואקינזיה וצובטת את רגל אחורית. בדוק את המצב של ילודים לעתים קרובות בגלל מעט מדי זמן לא יעשה את האקינטי הגור וapneic, ומשך מוגזם של הרדמה יכול להוריד את שיעור הישרדות 12. </li></ol> 2. פתיחת בית החזה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העבר את הגור מהמיטה הקרח על אזור benchtop כירורגית ולהשתמש בקלטת כדי לשתק את זרועות, רגליים, והזנב שלה במצב שכיבה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחטא את החזה באמצעות בטאדין ועדינות לנקות אותו באמצעות 70% משטח הכנת אלכוהול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעשות חתך בעור רוחבי לאורך האזור הלאה הצלע של חלל החזה באמצעות Vannas אביב מספריים, ולאחר מכן להקהות לנתח את השרירים הלאה צלע כדי להקל על גישה ללב. הערה: שיעורי הישרדות לשפר כאשר אובדן דם ממוזער במהלך התהליך כירורגי. </li></ol> 3. קטיעה כירורגית של לב חדרית איפקס <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביד, בעדינות להפעיל לחצו על הבטן כדי exteriorizeשיאו של הלב. ספוג דם סביב אזור הניתוח עם החלת כותנה שקצה סטרילי להדמיה ברורה. לילודי שליטת דמה המופעל, להמשיך ישירות לשלב 4 (תפרים ושחזור של עכברים). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מתחת לפנס מגדלת ושימוש iridectomy מספריים, בעדינות לבצע כריתת טיפין טיפין של החדר השמאלי (LV) עד תא LV חשוף. להיות זהיר כדי למזער את החלקים שעברו כריתה של LV. כ -15% כריתה היא הכרחית כדי להשיג חשיפה אופטימלית של חדר LV. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא שהלב חוזר לחלל החזה פעם אחת קאמרי LV חשוף. </li></ol> 4. תפר ושחזור של עכברים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לתפור את הצלעות ושרירים יחד כדי לאטום את חלל החזה באמצעות תפרי פרולין 6-0 סטרילי, ולאחר מכן לסגור בקפידה אתר חתך בעור באמצעות דבק עור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחמם את הילוד תחת מנורת חום ל~ 3 דקות להתאוששות, ולאחר מכן לנקות את עקבות דם ודבק באמצעות 70% משטח הכנת אלכוהול befoמחדש reintroducing להמלטה שלה. לנסות להשלים את כל ההליך כירורגי בתוך 10 דקות, כי צמצום המשך הזמן מופרד מהאם משפר הישרדות גור לאחר כריתת הפסגה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר כל ניתוח, למקם את הכלים כירורגיים במגע עם חרוזים של מעקר חרוז החם לכ -20 שניות לעיקור מלא. לאפשר כלים כירורגיים להתקרר לRT לפני כל ניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר שסיים את הניתוחים לכל הגורים בהמלטה, לערבב את הגורים עם המצעים של האמא וצואה לפני החזרתם לקן של האמא. הערה: באופן כללי, עכברי ICR / CD-1 הן אמהות אומנה טובה יותר מאשר C57BL / 6, אבל גם בקרב אמהות מניקות מאותו הרקע הגנטי, אינסטינקטים טיפוח להשתנות. אם שינוי אם מניקה יש צורך להפחית תמותה על ידי קניבלים אימהיים, להסיר את גורי P0 לאם מניקה ולאחר מכן לבצע כריתת הפסגה בP1. לבצע גם את פעולת דמה או r הפסגה רקesection בהמלטה אחת גורים, כי דמה ערבוב וגורים כירורגית יכולים להפחית את שיעורי ההישרדות של הקבוצה כירורגית של גורים 6. </li></ol> ניתוח 5. לאחר ניתוח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יום אחד לאחר הניתוח, לעקוב אחר הגורים, להבטיח שאין הבדל בין זיוף וקבוצות כירורגית, ולספור את מספר הגורים למדוד את שיעור ההישרדות. אם הניתוחים מבוצעים כראוי, שיעורי ההישרדות צריכים להיות דומים ויותר מ -60% בשני קבוצות דמה וניתוחיות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בידוד לב וקיבעון. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את הגורים בימים 1 ו -2 לאחר ניתוח באמצעות עריפת ראש ויום 21 לאחר ניתוח על ידי CO2 עם הבטחה של מוות על ידי נקע בצוואר הרחם, ולאחר מכן לנקות את החזה באמצעות הכנת אלכוהול 70%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחתוך את העור ושרירים קו האמצע של החזה ולאחר מכן פתח את החזה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בלו כל הלב מחלל בית החזה ולתקן את כל הלב של כל דגימה ב 5 מיליליטר של 4% O paraformaldehyde / N ב RT. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביום שלמחרת, להעביר את הדגימות לאתנול 70%. דוגמאות ניתן לאחסן עד שבוע לפני הטבעת פרפין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סעיפי Slice 5-מיקרומטר בעובי פרפין דרך כל החדר ולבצע hematoxylin הסטנדרטי וeosin (H &amp; E) וצביעת Trichrome של האסון לבחון את התגובה 5 משובי, 7. באופן ספציפי, כתם H &amp; E משמש כדי לבחון החלפת שריר וכתם Trichrome של האסון משמש כדי לבחון את תגובות fibrotic 5. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחר את האזור של עניין ולהקים לפחות שלושה מוקדים לדגימה באמצעות סורק שקופיות באופן ידני. תמונה ולנתח את השקופיות מכתימה ב 40 × הגדלה פי הוראות היצרן עם פרמטרים של ברירת מחדל. </li></ol>

<ol><li>Lin, Z., Pu, W. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strategies+for+cardiac+regeneration+and+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Strategies for cardiac regeneration and repair.</a> Sci Transl Med. 6, 231-239 (2014).</li>
<li>Xin, M., Olson, E. N., Bassel-Duby, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mending+broken+hearts%3A+cardiac+development+as+a+basis+for+adult+heart+regeneration+and+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Mending broken hearts: cardiac development as a basis for adult heart regeneration and repair.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 14, 529-541 (2013).</li>
<li>Mahmoud, A. I., Porrello, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Turning+back+the+cardiac+regenerative+clock%3A+lessons+from+the+neonate%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Cardiovasc+Med%22%5BJournal%5D)">Turning back the cardiac regenerative clock: lessons from the neonate.</a> Trends Cardiovasc Med. 22, 128-133 (2012).</li>
<li>Porrello, E. R., Olson, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+neonatal+blueprint+for+cardiac+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">A neonatal blueprint for cardiac regeneration.</a> Stem Cell Res. 13, 556-570 (2014).</li>
<li>Porrello, E. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transient+regenerative+potential+of+the+neonatal+mouse+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Transient regenerative potential of the neonatal mouse heart.</a> Science. 331, 1078-1080 (2011).</li>
<li>Mahmoud, A. I., Porrello, E. R., Kimura, W., Olson, E. N., Sadek, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+models+for+cardiac+regeneration+in+neonatal+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Surgical models for cardiac regeneration in neonatal mice.</a> Nat Protoc. 9, 305-311 (2014).</li>
<li>Allen, T. C. Armed Forces Institute of Pathology. Hematoxylin and eosin. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAllen%2C+TC+%22Laboratory+methods+in+Histotechnology%22">Laboratory methods in Histotechnology</a>. Prophet, E. B., Mills, B., Arrington, J. B., Sobin, L. H. , American Registry of Pathology. Washington DC. 53-58 (1992).</li>
<li>Andersen, D. C., Ganesalingam, S., Jensen, C. H., Sheikh, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Do+neonatal+mouse+hearts+regenerate+following+heart+apex+resection%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+cell+reports%22%5BJournal%5D)">Do neonatal mouse hearts regenerate following heart apex resection?</a> Stem cell reports. 2, 406-413 (2014).</li>
<li>Kotlikoff, M. I., Hesse, M., Fleischmann, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comment+on+%27Do+neonatal+mouse+hearts+regenerate+following+heart+apex+resection%3F%27%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+cell+reports%22%5BJournal%5D)">Comment on 'Do neonatal mouse hearts regenerate following heart apex resection?'.</a> Stem cell reports. 3, 2(2014).</li>
<li>Sadek, H. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-investigator+letter+on+reproducibility+of+neonatal+heart+regeneration+following+apical+resection%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+cell+reports%22%5BJournal%5D)">Multi-investigator letter on reproducibility of neonatal heart regeneration following apical resection.</a> Stem cell reports. 3, 1(2014).</li>
<li>Andersen, D. C., Jensen, C. H., Sheikh, S. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Response+to+Sadek+et+al.+and+Kotlikoff+et+al%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+cell+reports%22%5BJournal%5D)">Response to Sadek et al. and Kotlikoff et al.</a> Stem cell reports. 3, 3-4 (2014).</li>
<li>Phifer, C. B., Terry, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+hypothermia+for+general+anesthesia+in+preweanling+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Behav%22%5BJournal%5D)">Use of hypothermia for general anesthesia in preweanling rodents.</a> Physiol Behav. 38, 887-890 (1986).</li>
<li>Laflamme, M. A., Murry, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regenerating+the+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Regenerating the heart.</a> Nat Biotechnol. 23, 845-856 (2005).</li>
<li>Laflamme, M. A., Murry, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Heart regeneration.</a> Nature. , 326-335 (2011).</li>
<li>Jesty, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((c-kit%2B+precursors+support+postinfarction+myogenesis+in+the+neonatal%2C+but+not+adult%2C+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">c-kit+ precursors support postinfarction myogenesis in the neonatal, but not adult, heart.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 109, 13380-13385 (2012).</li>
<li>Gonzalez-Rosa, J. M., Martin, V., Peralta, M., Torres, M., Mercader, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extensive+scar+formation+and+regression+during+heart+regeneration+after+cryoinjury+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Extensive scar formation and regression during heart regeneration after cryoinjury in zebrafish.</a> Development. 138, 1663-1674 (2011).</li>
</ol>

עמלות פרסום לכתבה זו מומנו על ידי מתנה מכלי מדע פיין לד&quot;ר ג&#39;יאן הו.

התחדשות הלב מראה פוטנציאל לטיפול ומניעה של אי ספיקת לב1, 2. מודלים של בעלי חיים הם הכרחיים וממלאים תפקיד קריטי בהבנת האופן שבו התחדשות הלב מתרחשת3-6. דו-חיים ודגים רבים מחדשים רקמת לב בתגובה לפציעה, ומספקים תובנה לגבי הבנתנו את מחלות הלב וכלי הדם האנושיות13, 14. במונחים של אבולוציה, לעומת זאת, הפתופיזיולוגיה צריכה להיות שמורה יותר בין מודל עכבר לבני אדם. התחדשות לב במודלים של בעלי חיים של יונקים היא תחום מחקר חדש יחסית אך מתפתח לטיפולים באי ספיקת לב3-6. 
<p class='jove_cont...

תוחלת חיים ממושכת מובילה למחלות שונות הקשורות להזדקנות ולאורח חיים, כולל אי ספיקת לב, גורם מוביל לתמותה. עם זאת, ללא החלפה של תאי שריר לב שאבדו או לא מתפקדים, הטיפולים הנוכחיים יכולים רק לשפר באופן זמני את תפקוד הלב1, 2. לפיכך, יש צורך לגלות ולפתח אסטרטגיות חדשניות להתחדשות ותיקון הלב. ללב היונקים הבוגר יש פוטנציאל התחדשות מוגבל. מחקרים מבעלי חוליות נמוכים יותר, כגון דו-חיים ודגי טלאוסט, סיפקו תובנות חסרות תקדים לגבי המנגנונים המולקולריים והתאים העומדים בבסיס התחדשות הלב3, 4. לאחרונה הופיע מודל עכברי יילודים של התחדשות לב שעשוי לאפשר זיהוי ואפיון של אירועים פתופיזיולוגיים שמורים יותר מבחינה אבולוציונית הנדרשים להתחדשות לב אנושית5. 
כריתה אפיקלית מתייחסת להסרה כירורגית של קודקוד החדר השמאלי. הליך זה מוגבל לעכברים בני 1 עד 7 ימים (P1 עד P7) בשל הקטלניות הגבוהה שלו בעכברים מבוגרים6. תהליך התחדשות הלב בעכברים יילודים לאחר כריתה אפיקלית צפוי להיות כדלקמן: (I) היווצרות מהירה ויעילה של המטומה כדי לאטום את הקודקוד ולמנוע אקסנגווינציה; (II) התחדשות קרדיומיוציטים ושיקום התפקוד הסיסטולי5, 7. עבודות אחרונות עוררו דיון על המשמעות והיעילות של מודל8-11 זה. לפיכך, חשוב להציג את הכריתה האפיקלית בצורה ברורה ומפורטת. לשם כך, פרוטוקול זה מתאר בצורה חיה וספציפית סרטון וידאו של איך ביצעתי כריתה אפיקלית בהתבסס על פרוטוקולקודם 6. 
הבנת המנגנונים המולקולריים העומדים בבסיס התחדשות הלב היא בעלת חשיבות לטיפול במחלות לב המאופיינות באובדן ו/או פגיעה בקרדיומיוציטים, כגון אי ספיקת לב1, 2. בהתחשב בהתקדמות הנוכחית והמבטיחה של כריתה אפיקלית בחקר התחדשות הלב, מחקר זה יכול לקדם את השימוש בטכניקה זו ואת השימושים שלה במחקר התחדשות הלב.

<table><tbody><tr><td>Olsen-Hegar מחזיקי מחטים עם מספריים, 1.5 מ"מ</td><td>Fine Science Tools</td><td>12002-12</td><td></td></tr><tr><td>Vannas Spring Scissors - 2 מ"מ Cutting Edge</td><td>Fine Science Tools</td><td>15000-03</td><td>מספריים לכריתת אירידקטומיה</td></tr><tr><td>מעקר חרוזים חם</td><td>Fine Science Tools</td><td>18000-45</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים לקשתית, ישרים, משוננים</td><td>כלים מדעיים עדינים</td><td>11064-07</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים לקשתיתכלי מדע עדינים מעוקלים ומשוננים</td><td></td><td>11065-07</td><td></td></tr><tr><td>מספריים שיאה - מעוקל/קהה-קהה/12 ס"מ</td><td>כלי מדע עדינים</td><td>14105-12</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים לקשירת תפרים עם ידית עגולה, כלים</td><td>מדעיים עדינים</td> ישרים <td>18025-12</td><td></td></tr><tr><td>מספריים קפיציים עם ידית עגולה כלים</td><td>מדעיים עדינים</td><td>15400-12</td><td></td></tr><tr>כלי<td></td><td></td> <td>מדע עדינים Hemostat13007-12</td><td></td></tr><tr><td>מנורת מגדלת</td><td>Luxolamp Corp</td><td>IM120&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>מנורת חימום</td><td>ברנדט ציוד LLC</td><td>51152/3</td><td></td></tr><tr><td>6-0 תפרי פרולן</td><td>Ethicon</td><td>8889H</td><td></td></tr><tr><td>דבק עור-דבק רקמות Vetbond&nbsp;</td><td>3 חודשים&nbsp;</td><td>1469</td><td></td></tr><tr><td>אפליקטורים סטריליים עם קצה כותנה</td><td>Dynarex</td><td>4305</td><td></td></tr><tr><td>WEBCOL כרית הכנה לאלכוהול</td><td>Covidien</td><td>6818</td><td>בינוני 2 שכבות, 200/BOX, רווי ב-70% איזופרופיל אלכוהול</td></tr><tr><td>Curity ספוגים לכל מטרה</td><td>Covidien</td><td>9024</td><td>לא ארוג 4 שכבות, 4 "x4" (10.2 ס"מ ופעמים; 10.2 ס"מ)</td></tr> <tr><td>יריעת מגן עליונה לספסל</td><td>KIMTECH SCIENCE</td><td>7546</td><td>18 אינץ' x 19.5 אינץ' (45.72 ס"מ x 49.53 ס"מ) x 50</td></tr><tr><td>0.9% נתרן כלורי, 250 מ"ל</td><td>Hospira Inc.</td><td>NDC 0409-6138-22</td><td></td></tr><tr><td>Betadine Solution Swabsticks</td><td>Purdue Products L.P.</td><td>NDC 67618-153-03</td><td></td></tr><tr><td>אוטוקלאב</td><td>TOMY ביולוגיה דיגיטלית</td><td>SX-700</td><td>מעקר קיטור בלחץ גבוה</td></tr><tr><td>סורק שקופיות</td><td>HAMAMATSU</td><td>NanoZoomer 2.0-RS</td><td></td></tr></tbody></table>

דגם פסגת כריתת עכבר כדי ללמוד התחדשות לב יונקים מוקדמת

Apical Resection Mouse Model to Study Early Mammalian Heart Regeneration

מחלת לב וכלי דם המכות כל העולם בשל שינויים באורח חיים אינטנסיביים. התחדשות לב טומנת בחובו הבטחה גדולה לתיקון ושחזור cardiomyocytes איבד בגלל פציעה ומחלה. בניגוד להתחדשות הלב החזקה של בעלי חוליות התחתונות מסוימים, לב של יונקים בוגרים בדרך כלל להראות יכולת מינימאלית להתחדשות לב ותיקון. עם זאת, מחקרים שנעשו לאחרונה עוררו עניין מדעי רב עם הממצא ש, בין יום הלידה 1 עד 7 (P1 לP7), לב העכבר בילוד שומר פוטנציאל התחדשות משמעותי לאחר כריתת הפסגה (כלומר, קטיעה כירורגית וחשיפה של קודקוד של חדר השמאלי). מחלוקת עיקרית אחת מעל ממצא זה יכול להיות בגלל הנהלים הקשורים לניתוח המגוונים המשמשים במאמצים כדי לשכפל או להרחיב על ממצא חשוב זה. הוראות אלה באופן דינמי להציג את חומרים ומתודולוגיה לכריתת הפסגה במודל של עכברים. הצעדים הבולטים של surviva מכרסם זההניתוח כרוך בהרדמה l היפותרמיה, פתיחת בית החזה, כריתה כירורגית של קודקוד של חדר לב, ותפר והתאוששות של עכברים. הגישה המתוארת יכול להרחיב את היישום של מודל עכבר כריתת הפסגה למחקר לב וכלי דם.

גורי עכבר היו מורדמים כריתת פוסט-פסגת 1, 2, ו -21 ימים, ולבם נאספו עבור H &amp; E וכתם Trichrome של האסון. צבע כחול בכתם Trichrome של האסון מציין בתצהיר של מטריקס epicardial 5. עם כריתת הפסגה מוצלחת, קריש דם נוצר בצורה יעילה כדי לאטום את כריתת פוסט-פסגת יום אחד LV, כפי שמוצג באיור 1 א. ספיגה הדרגתית של קריש הדם ולב סיסטיק המוקדם הוא ציין, והחלפה על ידי רקמת שריר לב מתרחשת עד התחדשות של שריר הלב שלמה מתקיימת 21 ימים לאחר כריתת הפסגה (איור 1 ו- C)...

פרוטוקול וידאו שלב אחר שלב של כריתה אפיקלית מודגם במחקר זה. כריתה אפיקלית היא גישה כירורגית שהודגשה לאחרונה במחקר התחדשות לב של יונקים. מחקר זה עשוי לקדם את היישום של כריתה אפיקלית כמתודולוגיה סטנדרטית במחקר על המנגנון העומד בבסיס התחדשות הלב.

Cardiovascular disease plagues the whole world due to intensive lifestyle changes. Heart regeneration holds great promise for repairing and restoring ...

המטרה הכללית של הליך זה היא להשתמש בכריתה של חוד הלב (apical resection) בעכברים רך-הולדים כדי לחקור רגנרציה מוקדמת של הלב ביונקים. נושא זה עשוי לסייע במתן תשובות לשאלות מפתח בתחום רגנרציית הלב, כגון מהם המנגנונים המולקולריים והתאיים העומדים בבסיס רגנרציה לבבית מוקדמת ביונקים. היתרון המרכזי של טכניקה זו הוא שדגם העכברים עם כריתת חוד הלב מספק גישה פשוטה וישירה יחסית לחקר רגנרציה מוקדמת של הלב ביונקים.לפני תחילת הפרוצדורה, העבירו את כל גורי ה-C57 black six ביום postnatal day one מאמם המניקה לכלוב עכברים נקי עם מצע טרי וחומרי קינון. לאחר מכן, עבור כל גור בתורו, העבירו את הגור ממיטת קרח לאזור הניתוח וקבעו את הזרועות, הרגליים והזנב בתנוחה שכיבה (supine). חטאו את החזה באמצעות betadine ולאחריו ניקוי עדין עם פד אלכוהול 70%.כעת, בצעו חתך עור להעברה לאורך אזור הצלע הרביעית הפנימית של חלל בית החזה. השתמשו במספרי קפיץ כדי לבצע חתך בשיא הלב (apex). כדי להגיע ללב, השתמשו במספרי קפיץ כדי לבצע חתך בשיא הלב, ולאחריו דיסקציה קהה של שרירי הצלעות הפנימיים.השתמשו בתפרי 6-0 סטריליים כדי לסגור את הצלעות והשרירים יחדיו. השתמשו בדבק עור כדי לסגור בזהירות את החתך בעור ואפשרו ל新生-נולד להתאושש תחת מנורת חימום למשך כשלוש דקות. לאחר מכן, השתמשו בפד עם 70% alcohol כדי לנקות את כל שאריות הדם והדבק מהגור והחזירו את בעל החיים למשכב עם חברי השלשייה שלו.לאחר ביצוע כל הניתוחים, ערבבו את הגורים עם המצע וההפרשות של האם לפני החזרת הגורים הניונוטליים לקן של האם. יום אחד לאחר הניתוח, ספרו את מספר הגורים מקבוצת השאם והגורים מקבוצת הניתוח כדי לקבוע את שיעור ההישרדות בכל קבוצה. בנקודת הזמן המתאימה לאחר הניתוח, עבור כל חיה בתור, נקו את החזה ב-70% ethanol ובצעו חתך בקו האמצע של עור ושרירי החזה.הוציאו את הלב כולו מחלל בית החזה וקבעו את הרקמה ב-4% פאראפורמאלדהיד למשך לילה בטמפרטורת החדר. למחרת, העבירו את הדגימות ל-70% ethanol למשך עד שבוע לפני הטמעה בפראפין. לאחר השגת חתכי פראפין בעובי של חמישה מיקרומטר לאורך כל הפרונטריקולר, צבעו את הדגימות ב-hematoxylin, ו-Eocene, וב-Masson's trichrome כדי לבחון את החלפת השריר ואת התגובות הפיברוטיות בלבבות שהוסרו, בהתאמה.באמצעות סורק שקופיות, השג ידנית לפחות שלושה מוקדים לכל דגימה. לאחר מכן, נתח את תמונות הדגימות בהגדלה של 40X בהתאם להוראות היצרן ובשימוש בפרמטרים ברירת המחדל של הסורק. בעקבות כריתה אפקלית מוצלחת, בתוך יום אחד מהכריתה האפקלית, קריש דם נוצר ביעילות כדי לאטום את החדר השמאלי.לאחר מכן נצפה ספיגה הדרגתית של קריש הדם ופיברוזה לבבית מוקדמת, עם החלפתם המדורגת ברקא מיוקרדית עד להתחדשות מלאה של השריר הלבבי 21 ימים לאחר הכריתה. למעשה, שלושה שבועות לאחר הניתוח, לא נראה הבדל בין הלבבים שעברו כריתה לאלו שעברו ניתוח דמה (sham) בניתוח מורפולוגי. בעת ביצוע הליך זה, חשוב לזכור לשמור על תנאים סטריליים.בעקבות הליך זה, ניתן לבצע מדדים אחרים כגון סימון ובדיקה ליניארית כדי לענות על שאלות נוספות בנוגע לשגשוג תאי שריר לב (cardiomyocyte) וכריתה של קודקוד הלב (apical resection). לאחר צפייה בסרטון זה, אמורה להיות לכם הבנה טובה של אופן ביצוע כריתת קודקוד הלב בעכברים בניו נטאלים.

apical-resection-mouse-model-to-study-early-mammalian-heart

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

בסרטון זה, אנו מדגימים את ההליך להסרה כירורגית של קודקוד החדר השמאלי של לב עכבר יילוד.

מודל עכבר יילודים לכריתה אפיקלית: הליך כירורגי לקטיעת קודקוד החדר לחקר פוטנציאל התחדשות בלב עכבר יילוד

אי ספיקת לב היא הגורם המוביל לאשפוז וגורם עיקרי לתמותה. מודל של קשירה קבועה של העורק הכלילי היורד הקדמי השמאלי בעכברים מיושם כדי לחקור עיצוב מחדש של החדרים ותפקוד לקוי של הלב לאחר אוטם שריר הלב. מוצגת הטכניקה של מדידות המודינמיות פולשניות בעכברים.

קשירת קבע של העורק השמאלי קדמי יורד כלילית בעכברים: דגם של Remodelling אוטם שריר לב ופוסט-אי ספיקת לב

פרוטוקול זה מתאר מודל הניתן לשחזור של התחדשות הלב על ידי אינדוקציה כירורגית של אוטם שריר הלב בחדר השמאלי של עכברי יום 1 לאחר הלידה. השיטה כוללת אינדוקציה של הרדמה היפותרמית וקשירה של העורק הכלילי היורד הקדמי השמאלי.

אוטם שריר לב עכברים ילודים, מודל התחדשות לב

התפשטות הקרדיוציט לאחר הפציעה היא תהליך דינאמי הדורש סימפוניה של רמזים בלתי-מיכיים מאוכלוסיות תאים שאינן מיוציט. ניצול מעקב אחר השושלת, בהירות פסיבית, ושלושה מימדים שלמים של מיקרוסקופ ההרכבה טכניקות, אנחנו יכולים לנתח את ההשפעה של מגוון סוגי תאים על תיקון לב והתחדשות.

לכידת תגובת פגיעה לב של אוכלוסיות תאים ממוקדות באמצעות לב נקי תלת מימדי הדמיה

פרוטוקול זה נועד להשתיל תיקון ביו-מודפס בתלת-ממד על האפיקארדיום של עכברים אוטמים המדגמים אי ספיקת לב. הוא כולל פרטים לגבי הרדמה, פתיחת החזה הכירורגית, קשירה קבועה של העורק הקדמי השמאלי (LAD) העורק הכלילי ויישום של תיקון bioprinted על האזור האוטם של הלב.

השתלה של תיקון ביו-מודפס בתלת מיתד במודל מורין של אוטם שריר הלב

טכניקה חדשנית לשחזור מעגל הדם במודל הטרוטופי של השתלת לב עכבר בטן מודגמת.

שחזור מעגל הדם במודל השתלת לב של עכבר בטן

אנו מספקים פרוטוקול להפרדת מקרופאג ' לב יילודים והשתלה ללב עכבר מבוגר, אשר יכול להיות דרך מבטיחה לקדם תיקון לב.

השתלת מקרופאגים לב של עכבר יילודים בעכברים בוגרים

העברת תאים מונחית אולטרסאונד סביב האתר של אוטם שריר הלב בעכברים היא דרך בטוחה, יעילה ונוחה להשתלת תאים.

השתלת קרדיומיוציטים פלוריפוטנטיים פלוריפוטנטיים המושרים על ידי אולטרסאונד בעכברים עם אוטם שריר הלב

כאן, אנו מתארים פרוטוקול לבידוד כמות מספקת של לא-קרדיומיוציטים בודדים עם כדאיות גבוהה מלב עכבר לאחר אוטם שריר הלב (MI). זה יכול לשמש לריצוף תא בודד לאחר מכן, ניתוח ציטומטריית זרימה, ותרבית תאים ראשונית.

הכנת תרחיף תאים שאינו קרדיומיוציטים לריצוף RNA חד-תאי מלב עכבר בוגר לאחר אוטם שריר הלב

Xenopus tropicalis הוא מודל אידיאלי למחקר רגנרטיבי מכיוון שלרבים מאיבריו יש יכולת התחדשות יוצאת דופן. כאן אנו מציגים שיטה לבניית מודל של פגיעה בלב ב-X. tropicalis באמצעות כריתת קודקוד.

מודל כריתה אפית בלב הבוגר Xenopus tropicalis

למדו את שיטת כריתת הקודקוד בעכברים נאונטליים לחקר התחדשות הלב המוקדמת ביונקים. פרוטוקול זה מספק גישה ישירה לחקירת מנגנוני התיקון הלבבי והתחדשות השריר הלבבי.

דגם פסגת כריתת עכבר כדי ללמוד התחדשות לב יונקים מוקדמת

גלה סרטונים נוספים