מודל עכבר לneovascularization Choroidal מושרה לייזר

המטרה הכוללת של הליך זה היא לשחזר את סימני ההיכר של ניוון מקולרי הקשור לגיל הניאו-וסקולרי או MD במודל בעלי חיים קל למחקר. ניתן להשתמש בשיטה זו כדי לחקור היבטים שונים של מחקר MD ניאו-וסקולרי, כולל כיצד שינויים גנטיים או טיפולים תרופתיים יכולים להשפיע על המחלה או כיצד המחלה יכולה להתבטא בשיטות הדמיה שונות. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שברגע ששולטים בה, קל לשחזר אותה, מה שמאפשר לבצע ניסויים במהירות וביעילות.

בדרך כלל, אנשים חדשים בשיטה זו יתקשו מכיוון שהם חסרים את המיומנות והקואורדינציה העדינה כדי להצליח, ושניהם משתפרים עם התרגול. כדי להכין את מיקום תחנת הלייזר, מנורת הלייזר והחריץ שבה ניתן לגשת אליה בקלות, הפעל את הלייזר והגדר אותו לפרמטרים שנקבעו מראש. כאן משתמשים בהגדרה של 75 מיקרומטר, גודל נקודה, הספק של 100 מיליוואט ומשך של 100 אלפיות השנייה.

לאחר מכן, הניחו את מגבוני הרקמות וטיפות העיניים המחממים יותר של בעלי חיים בהישג יד של מפעיל הלייזר. לאחר הרדמת העכבר הראשון, הנח אותו על מחמם בעלי החיים למשך כשלוש עד חמש דקות. בצע צביטה בבוהן כדי להבטיח הרדמה מלאה.

לאחר מכן השתמשו במגבון טישו מגולגל כדי למנוע שאיבת אף של גלגול נוזלים. יש להניח טיפה של 30 מיקרוליטר של טטרקאין הידרוכלוריד לכל עין. המתן שתי דקות עד שהפתרון ייכנס לתוקף.

לאחר מכן, מרחו טיפה אחת של עזר טרופי מקומי על כל עין על מנת להרחיב את האישונים. והמתן שתי דקות עד שהפתרון ייכנס לתוקף. כעת הנח במהירות את העכבר על במת העכבר, ולאחר מכן הנח את הבמה על משענת הסנטר של מנורת החריץ.

הפעל את מנורת החריץ והתאם אותה לבהירות האור הנמוכה ביותר. העריכו את התרחבות האישונים של העכבר. אם האישון לא השיג התרחבות של 2.5 עד שלושה מילימטרים.

החזירו את העכבר למחמם בעלי החיים או תנו טיפה נוספת של עזר טרופי לאחר הרחבת האישונים. כוון את העכבר על הפלטפורמה כך שהוא ישכב אופקית בניצב לקורת החריץ. סובב מעט את העכבר כך שהוא לא יהיה בזווית של כ-170 מעלות.

כאשר הראש מכוון קרוב יותר למפעיל הלייזר, מקם את העכבר קרוב ככל האפשר למנורת החריץ תוך שמירה על יציבות הפלטפורמה והשארת מספיק מקום למפעיל לבצע מניפולציות מוטוריות עדינות. לאחר שהעכבר ממוקם כראוי, מרחו טיפה אחת של תמיסת דמעות מלאכותית על פתק כיסוי זכוכית בגודל 25 מילימטר על 25 מילימטר. כמו כן, יש להניח טיפה אחת של תמיסה זו על העין הלא ממוקדת של העכבר כדי למנוע התייבשות.

אחוז בפינה אחת של החלקת הכיסוי בין האגודל לאצבע המצביעה, ועטוף את שלוש האצבעות הנותרות סביב העכבר כדי לתמוך ולייצב הן את החיה והן את ידו של המפעיל. לאחר מכן לחץ בזהירות על המכסה. החליקו על עין העכבר כדי לשטח את הקרנית.

מקם את החלקת הכיסוי בניצב לנתיב קרן הלייזר כדי למנוע פיזור או השתקפות של האלומה. הסתכל דרך מנורת החריץ, השתמש ביד החופשית כדי לכוונן את המיקוד עד שהרשתית תיראה לעין. הרשתית צריכה להיראות צהובה בהירה עד אדומה: עם כלי דם אדומים מובהקים נוכחים, לאט ובזהירות, הזיזו את ראש העכבר או את החלקת הכיסוי עד לזיהוי עצב הראייה.

עצב הראייה יהיה צהוב עם כלי דם מרובים המוקרנים ממנו. לאחר מכן הפעל את קרן מיקוד הלייזר ותמרן אותה כדי להתמקד באפיתל פיגמנט הרשתית או RPE של פונדוס העין. אם אלומת המיקוד נראית אליפסה או לא ממוקדת, כוונן את מיקוד מנורת החריץ או את החלקת הכיסוי.

כאשר קרן המיקוד מותאמת כראוי, השתמש בהדק כף הרגל כדי ליזום מתן לייזר. בועה אמורה להיווצר מיד לאחר מתן לייזר יש להוציא מהניתוח נגעים עם גבולות מעורפלים או עיניים עם נגעים מדממים. הקפד להתבונן בהיווצרות בועות ובאזור מעגלי ברור ומוגדר בחדות המעיד על צריבת לייזר ממוקדת.

נגעים שאינם מייצרים בועה עשויים שלא לגרום כראוי ל-CNV. צור נגעים נוספים בכל מיקומי הניאו-וסקולריזציה הכורואידליים או ה-CNV הרצויים. העבר את הלייזר למצב המתנה כאשר אינו בשימוש רשום במחברת מעבדה את המיקום והתוצאה של כל מתן לייזר.

חזור על מתן הלייזר לעין השנייה של העכבר באמצעות החלקת כיסוי טרייה והיד הנגדית כדי לייצב את העכבר. לאחר השלמת כל הניהולים, כבה את הלייזר ואת מנורת החריץ, השליך את פתק הכיסוי והנח את העכבר על החיה. חם יותר מבחינה מקרוסקופית.

בדוק את העין לאיתור משטח קרנית או פגיעה בקטרקט. לאחר ההתאוששות, החזר את העכבר לכלוב שלו. CNVs כומתו באמצעות ניתוח של כורואידים שטוחים לאחר צביעה אימונו-פלואורסצנטית כאן.

תיוג דקסטרן מתאים נעשה באמצעות זלוף מיד לפני הקרבת בעלי חיים. לאחר מכן בוצע כימות שטח באמצעות סף בתמונה J.כאן צביעה חיסונית לאחר המוות עם סמן תאי האנדותל. בוצע ISO selectin GS IB 4, ואחריו הדמיה באמצעות מיקרוסקופיה קונפוקלית.

נוצרו שחזורים תלת מימדיים של נגע ה-CNV ב-FOSS ובמבט מהצד. הדמיית טומוגרפיה קוהרנטית אופטית שימשה גם להדמיית נגעי CNV in vivo. כאן, תמונת חתך של הרשתית מוצגת עם נגע CNV מוקף בצהוב.

מוצגת גם תמונת en FOSS של הנגע, מוקפת בעיגול צהוב. לאחר שליטה, ניתן לבצע טכניקה זו תוך 10 דקות אם היא מבוצעת כראוי. בזמן ניסיון הליך זה, חשוב לוודא שהחיה מורדמת כראוי ולמקם את הידיים כך שהיא נתמכת ויציבה.

לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד לספק מיקוד. צריבה בלייזר כדי לגרום ל-CNV, שלאחר מכן ניתן לחקור במגוון דרכים.