Name: הערכת פנוטיפים מישורים-Cell-קוטביות ב Ciliopathy עכבר Mutant שבלול (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-02-21T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 7 s
Description: למדו הערכת פנוטיפים של קוטביות תאית מישורית בשבלול עכברים מיוטנטים לציליופתיה. שיטה זו משלבת ניתוח פנוטיפי, אימונוהיסטוכימיה ומיקרוסקופיה אלקטרונית לסריקה לחקר תפקידי הריסנים באותות PCP בפיתוח האוזן הפנימית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחבר מבקש להודות מתיו קלי, Tiziana Cogliati, ג&#39;סיקה Gumerson, Uwe Wolfrum, רבקה לברון, ויולה קרצ&#39;מר וזואי מאן להערכה ביקורתית שלהם של כתב היד. עבודה זו מומנה על ידי בפרס Sofja Kovalevskaya (קרן Humbodlt) ואת יוהנס-גוטנברג אוניברסיטת מיינץ, גרמניה.

<ol><li>Waters, A. M., Beales, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ciliopathies%3A+an+expanding+disease+spectrum%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Ciliopathies: an expanding disease spectrum.</a> Pediatr Nephrol. 26, 1039-1056 (2011).</li>
<li>May-Simera, H. L., Kelley, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cilia%2C+Wnt+signaling%2C+and+the+cytoskeleton%5BTitle%5D)+AND+%22Cilia%22%5BJournal%5D)">Cilia, Wnt signaling, and the cytoskeleton.</a> Cilia. 1, 7(2012).</li>
<li>Ross, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disruption+of+Bardet-Biedl+syndrome+ciliary+proteins+perturbs+planar+cell+polarity+in+vertebrates%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">Disruption of Bardet-Biedl syndrome ciliary proteins perturbs planar cell polarity in vertebrates.</a> Nat Genet. 37, 1135-1140 (2005).</li>
<li>Ezan, J., Montcouquiol, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Revisiting+planar+cell+polarity+in+the+inner+ear%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+cell+%26+developmental+biology%22%5BJournal%5D)">Revisiting planar cell polarity in the inner ear.</a> Seminars in cell & developmental biology. 24, 499-506 (2013).</li>
<li>Semenov, M. V., Habas, R., Macdonald, B. T., He, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SnapShot%3A+Noncanonical+Wnt+Signaling+Pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">SnapShot: Noncanonical Wnt Signaling Pathways.</a> Cell. 131, 1378(2007).</li>
<li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+polarized+extension+and+planar+cell+polarity+in+the+cochlea+by+the+vertebrate+PCP+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">Regulation of polarized extension and planar cell polarity in the cochlea by the vertebrate PCP pathway.</a> Nat Genet. 37, 980-985 (2005).</li>
<li>Montcouquiol, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+Vangl2+and+Scrb1+as+planar+polarity+genes+in+mammals%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Identification of Vangl2 and Scrb1 as planar polarity genes in mammals.</a> Nature. 423, 173-177 (2003).</li>
<li>May-Simera, H. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ciliary+proteins+Bbs8+and+Ift20+promote+planar+cell+polarity+in+the+cochlea%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Ciliary proteins Bbs8 and Ift20 promote planar cell polarity in the cochlea.</a> Development. 142, 555-566 (2015).</li>
<li>Jones, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ciliary+proteins+link+basal+body+polarization+to+planar+cell+polarity+regulation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">Ciliary proteins link basal body polarization to planar cell polarity regulation.</a> Nat Genet. 40, 69-77 (2008).</li>
<li>Lim, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+structure+of+the+organ+of+Corti%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Hearing+research%22%5BJournal%5D)">Functional structure of the organ of Corti: a review.</a> Hearing research. 22, 117-146 (1986).</li>
<li>Nayak, G. D., Ratnayaka, H. S., Goodyear, R. J., Richardson, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+the+hair+bundle+and+mechanotransduction%5BTitle%5D)+AND+%22The+International+journal+of+developmental+biology%22%5BJournal%5D)">Development of the hair bundle and mechanotransduction.</a> The International journal of developmental biology. 51, 597-608 (2007).</li>
<li>Denman-Johnson, K., Forge, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+hair+bundle+polarity+and+orientation+in+the+deveoping+vestibular+system+of+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurocytol%22%5BJournal%5D)">Establishment of hair bundle polarity and orientation in the deveoping vestibular system of the mouse.</a> J. Neurocytol. , 821-835 (1999).</li>
<li>Sobkowicz, H. M., Slapnick, S. M., August, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+kinocilium+of+auditory+hair+cells+and+evidence+for+its+morphogenetic+role+during+the+regeneration+of+stereocilia+and+cuticular+plates%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+neurocytology%22%5BJournal%5D)">The kinocilium of auditory hair cells and evidence for its morphogenetic role during the regeneration of stereocilia and cuticular plates.</a> Journal of neurocytology. 24, 633-653 (1995).</li>
<li>Denman-Johnson, K., Forge, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+hair+bundle+polarity+and+orientation+in+the+developing+vestibular+system+of+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+neurocytology%22%5BJournal%5D)">Establishment of hair bundle polarity and orientation in the developing vestibular system of the mouse.</a> Journal of neurocytology. 28, 821-835 (1999).</li>
<li>van Dam, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+SYSCILIA+gold+standard+%28SCGSv1%29+of+known+ciliary+components+and+its+applications+within+a+systems+biology+consortium%5BTitle%5D)+AND+%22Cilia%22%5BJournal%5D)">The SYSCILIA gold standard (SCGSv1) of known ciliary components and its applications within a systems biology consortium.</a> Cilia. 2, 7(2013).</li>
<li>Blacque, O. E., Sanders, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Compartments+within+a+compartment%3A+what+C.+elegans+can+tell+us+about+ciliary+subdomain+composition%2C+biogenesis%2C+function%2C+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Organogenesis%22%5BJournal%5D)">Compartments within a compartment: what C. elegans can tell us about ciliary subdomain composition, biogenesis, function, and disease.</a> Organogenesis. 10, 126-137 (2014).</li>
<li>Wallingford, J. B., Mitchell, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strange+as+it+may+seem%3A+the+many+links+between+Wnt+signaling%2C+planar+cell+polarity%2C+and+cilia%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+%26+development%22%5BJournal%5D)">Strange as it may seem: the many links between Wnt signaling, planar cell polarity, and cilia.</a> Genes & development. 25, 201-213 (2011).</li>
<li>Borovina, A., Ciruna, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IFT88+plays+a+cilia-+and+PCP-independent+role+in+controlling+oriented+cell+divisions+during+vertebrate+embryonic+development%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+reports%22%5BJournal%5D)">IFT88 plays a cilia- and PCP-independent role in controlling oriented cell divisions during vertebrate embryonic development.</a> Cell reports. 5, 37-43 (2013).</li>
<li>Huang, P., Schier, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dampened+Hedgehog+signaling+but+normal+Wnt+signaling+in+zebrafish+without+cilia%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Dampened Hedgehog signaling but normal Wnt signaling in zebrafish without cilia.</a> Development. 136, 3089-3098 (2009).</li>
<li>Ocbina, P. J., Tuson, M., Anderson, K. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+cilia+are+not+required+for+normal+canonical+Wnt+signaling+in+the+mouse+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Primary cilia are not required for normal canonical Wnt signaling in the mouse embryo.</a> PloS one. 4, e6839(2009).</li>
<li>Jones, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scanning+electron+microscopy%3A+preparation+and+imaging+for+SEM%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Scanning electron microscopy: preparation and imaging for SEM.</a> Methods Mol Biol. 915, 1-20 (2012).</li>
<li>Curtin, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mutation+of+Celsr1+disrupts+planar+polarity+of+inner+ear+hair+cells+and+causes+severe+neural+tube+defects+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Current+biology+%3A+CB%22%5BJournal%5D)">Mutation of Celsr1 disrupts planar polarity of inner ear hair cells and causes severe neural tube defects in the mouse.</a> Current biology : CB. 13, 1129-1133 (2003).</li>
<li>Wang, Y., Guo, N., Nathans, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+Frizzled3+and+Frizzled6+in+neural+tube+closure+and+in+the+planar+polarity+of+inner-ear+sensory+hair+cells%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience+%3A+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The role of Frizzled3 and Frizzled6 in neural tube closure and in the planar polarity of inner-ear sensory hair cells.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 26, 2147-2156 (2006).</li>
<li>Montcouquiol, M., Jones, J. M., Sans, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+planar+polarity+proteins+in+mammalian+cochlea%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Detection of planar polarity proteins in mammalian cochlea.</a> Methods Mol Biol. 468, 207-219 (2008).</li>
<li>May-Simera, H., Kelley, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Examining+planar+cell+polarity+in+the+mammalian+cochlea%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Examining planar cell polarity in the mammalian cochlea.</a> Methods Mol Biol. 839, 157-171 (2012).</li>
<li>Yin, H., Copley, C. O., Goodrich, L. V., Deans, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+phenotypes+between+different+vangl2+mutants+demonstrates+dominant+effects+of+the+Looptail+mutation+during+hair+cell+development%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Comparison of phenotypes between different vangl2 mutants demonstrates dominant effects of the Looptail mutation during hair cell development.</a> PloS one. 7, e31988(2012).</li>
<li>Rachel, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combining+Cep290+and+Mkks+ciliopathy+alleles+in+mice+rescues+sensory+defects+and+restores+ciliogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Combining Cep290 and Mkks ciliopathy alleles in mice rescues sensory defects and restores ciliogenesis.</a> J Clin Invest. 122, 1233-1245 (2012).</li>
<li>Jagger, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alstrom+Syndrome+protein+ALMS1+localizes+to+basal+bodies+of+cochlear+hair+cells+and+regulates+cilium-dependent+planar+cell+polarity%5BTitle%5D)+AND+%22Human+molecular+genetics%22%5BJournal%5D)">Alstrom Syndrome protein ALMS1 localizes to basal bodies of cochlear hair cells and regulates cilium-dependent planar cell polarity.</a> Human molecular genetics. 20, 466-481 (2011).</li>
<li>Collin, G. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Alstrom+Syndrome+Protein%2C+ALMS1%2C+Interacts+with+alpha-Actinin+and+Components+of+the+Endosome+Recycling+Pathway%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">The Alstrom Syndrome Protein, ALMS1, Interacts with alpha-Actinin and Components of the Endosome Recycling Pathway.</a> PloS one. 7, e37925(2012).</li>
<li>Copley, C. O., Duncan, J. S., Liu, C., Cheng, H., Deans, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postnatal+refinement+of+auditory+hair+cell+planar+polarity+deficits+occurs+in+the+absence+of+Vangl2%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience+%3A+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Postnatal refinement of auditory hair cell planar polarity deficits occurs in the absence of Vangl2.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 33, 14001-14016 (2013).</li>
<li>Sorusch, N., Wunderlich, K., Bauss, K., Nagel-Wolfrum, K., Wolfrum, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Usher+syndrome+protein+network+functions+in+the+retina+and+their+relation+to+other+retinal+ciliopathies%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+experimental+medicine+and+biology%22%5BJournal%5D)">Usher syndrome protein network functions in the retina and their relation to other retinal ciliopathies.</a> Advances in experimental medicine and biology. 801, 527-533 (2014).</li>
<li>Hebert, J. M., McConnell, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+of+cre+to+the+Foxg1+%28BF-1%29+locus+mediates+loxP+recombination+in+the+telencephalon+and+other+developing+head+structures%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Targeting of cre to the Foxg1 (BF-1) locus mediates loxP recombination in the telencephalon and other developing head structures.</a> Dev Biol. 222, 296-306 (2000).</li>
<li>Willott, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chapter+8%2C+Measurement+of+the+auditory+brainstem+response+%28ABR%29+to+study+auditory+sensitivity+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Current+protocols+in+neuroscience%22%5BJournal%5D)">Chapter 8, Measurement of the auditory brainstem response (ABR) to study auditory sensitivity in mice.</a> Current protocols in neuroscience. , Unit8 21B(2006).</li>
<li>Martin, G. K., Stagner, B. B., Lonsbury-Martin, B. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chapter+8%2C+Assessment+of+cochlear+function+in+mice%3A+distortion-product+otoacoustic+emissions%5BTitle%5D)+AND+%22Current+protocols+in+neuroscience%22%5BJournal%5D)">Chapter 8, Assessment of cochlear function in mice: distortion-product otoacoustic emissions.</a> Current protocols in neuroscience. , Unit8 21C(2006).</li>
<li>Finetti, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraflagellar+transport+is+required+for+polarized+recycling+of+the+TCR%2FCD3+complex+to+the+immune+synapse%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+cell+biology%22%5BJournal%5D)">Intraflagellar transport is required for polarized recycling of the TCR/CD3 complex to the immune synapse.</a> Nature cell biology. 11, 1332-1339 (2009).</li>
<li>Sedmak, T., Wolfrum, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraflagellar+transport+molecules+in+ciliary+and+nonciliary+cells+of+the+retina%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Intraflagellar transport molecules in ciliary and nonciliary cells of the retina.</a> J Cell Biol. 189, 171-186 (2010).</li>
<li>Yuan, S., Sun, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expanding+horizons%3A+ciliary+proteins+reach+beyond+cilia%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+review+of+genetics%22%5BJournal%5D)">Expanding horizons: ciliary proteins reach beyond cilia.</a> Annual review of genetics. 47, 353-376 (2013).</li>
<li>Tarchini, B., Jolicoeur, C., Cayouette, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+molecular+blueprint+at+the+apical+surface+establishes+planar+asymmetry+in+cochlear+hair+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+cell%22%5BJournal%5D)">A molecular blueprint at the apical surface establishes planar asymmetry in cochlear hair cells.</a> Developmental cell. 27, 88-102 (2013).</li>
<li>Ezan, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+cilium+migration+depends+on+G-protein+signalling+control+of+subapical+cytoskeleton%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+cell+biology%22%5BJournal%5D)">Primary cilium migration depends on G-protein signalling control of subapical cytoskeleton.</a> Nature cell biology. 15, 1107-1115 (2013).</li>
</ol>

המחבר מצהיר שאין אינטרסים פיננסיים מתחרים.

בעת הכנת רקמת שבלול לניתוח, יש כמה נקודות מפתח כדי לזכור. ראשית, בדלי רקע גנטי יכולים לשנות את הפנוטיפ השבלול, מה שהופך אותו הצורך לנתח ולהשוות שולט להמלטה בלבד. שנית, הסרה מלאה של קרום tectorial נדרש לקבל את התמונות הטובות ביותר עם אימונוהיסטוכימיה והוא חיוני SEM. קרום tectorial הוא מבנה אטום יכול לטשטש את תאי האפיתל חושית ישירות מתחתיו, מה שהופך הדמיה יותר מאתגר. לפעמים במהלך עיבוד, קרום tectorial עלול להתכווץ בחזרה, לחשוף את תאי השיער. גם במקרים אלה הסרה מומלצת בחום. שלב זה דור...

cilia ראשי הם נספחי microtubule מבוסס ארוכים שמרחיבים מפני שטח של רוב בתאי יונקים. cilia הראשי מבולבלים לעתים קרובות עם cilia ניע, אשר יש תמיד מרובים לכל תא, ואשר מטרתו הוא להעביר נוזל על פני משטחים הממברנה. cilia היסודי, לעומת זאת, לאמץ תפקידים חושיים ובשל כך הן גם התייחסו cilia החושית כמו. לאחר שאבד עליהם כלח, אברון זה כבר &quot;מחדש&quot; לאחרונה כתוצאה ההתאגדות שלה עם שפע של מחלות גנטיות האדם 1. באופן אידיאלי מיקומו בתור אברון איתות, את cilium העיקרי הוכח לווסת מסלולים רבים איתות, שרבים מהם חשובים לא רק הומאוסטזיס רקמה ומחלות, אלא גם במהלך הפיתוח 2. אחד מסלולי איתות הראשונה הראו להיות הקשורות בתפקוד cilia היה מסלול איתות Wnt קאנונית, הידוע גם בשם הקוטביות בתא מישוריים (PCP) מסלול <sup<html> &gt; 3. מפל איתות זה בתחילה זיהה תסיסנית, הוא קריטי עבור עובר; בפרט עבור תהליכי התכנסות ארכה את הכיוון הנכון של תאי המטוס של אפיתלים 4. את האיתות הרציפה של גרעין המוגדר של חלבונים רגולטוריים מתרגם רמזים כיוונית אשר בסופו של הדבר להוביל rearrangements cytoskeletal ולגרום הקיטוב המתואם של תאי אפיתל במטוס 5. תהליך ההתכנסות והסיומת הוא דרוש לחלוטין את צינור השבלול להאריך ועבור דפוסים הסלולר נכונים 6. כמו זה מוסדר באמצעות שפעול מסלול PCP, אחד פנוטיפים הבולטים ביותר של מוטציות שבלול PCP הוא צינור שבלול יקוצר epithelia החושית מאורגנת 7. באופן דומה, מוטנטים עכבר, אשר חסר cilia, גם תערוכה כגון פנוטיפ התכנסות ורחב 8,9, למרות בדיוק איך זה מוסדר נותר הובהר. ve_content &quot;&gt; מכיוון תהליכי התכנסות והרחבה הם קריטיים עבור התולדה של צינור השבלול, דפוסים הסלולר של epithelia החושית בתוך צינור השבלול, השבלול המתפתח הוא איבר אידיאלי שבו לבחון איתות PCP במהלך ההתפתחות החולייתנים. הביטאון קורטי, השם שניתן האפיתל החושית המיוחדת המרפדת את צינור השבלול, מורכבת ותאי תומכים שאינם חושיים ותאי שיער mechanosensory אשר חייב להיות מכוונות באופן אחיד עבור השבלול לתפקד 10. תאי שיער mechanosensory נקראים כך בגלל חבילות stereociliary שמרחיבות מצלחת cuticular (למשטח פסגה) של כל תא שיער חושי 11. אלה משמשות מתמרים עיקריים של mechanosensation ולמרות המינוח שלהם כמו stereocilia, מורכבות למעשה של microvilli מבוסס נימה תקטין שונה. בתוך כל שיער בצורת שברון צרור, שלוש שורות של stereocilia מאורגנים רשות הורה מאוד ורגילttern באופן במקרה דמוי מדרג. Cilia microtubule מבוססי ריאל, כינה kinocilia, נדרשים לפיתוח והכיוון של חבילות stereociliary 12. עם כל תא שיער, kinocilium אחת מחוברת פיזית את צרור stereocilia, הממוקמת בסמוך מרכזי לשורה הגבוהה של stereocilia. הפונקציה מדויק של kinocilium אינה ברורה, אחת ההשערות היא כי kinocilium &#39;מושך&#39; את stereocilia לכושר כשהם מתבגרים מן microvilli 12. בבעלי החוליות, kinocilia בשבלול נוכח רק זמנים לסגת מתאי השיער בעכברים לפני תחילת שמיעת 11,13,14. אובדן מוחלט של השיער בתוצאות שבלול המתפתח צינוריות שבלול מקוצר קשות, יצרו אי ו MIS מוכווני חבילות stereociliary, וכן גופים הבסיס ממוקם mis 8,9. Cilium תפקודית אינה מורכבת רק של axoneme ריסי. חלבונים רבים הקשורים ciliaפונקציה להתרחש מתחמים מקומיים תחומיים משנה הקשורות cilia כמו גוף בסיסי, אזור מעבר, או ריסי axoneme 15. הגוף הבסיסי, נגזר אמא צנטריול של centrosome, היא גם המרכז מתארגן microtubule עבור microtubules הארכה הרחק cilium לתוך גוף תא יכול לווסת סחר תאי וכן סחר ריסים. אזור מעבר הריסים הוא אזור אחר שבו פונקצית ריסי מוסדר מבחינת ארגון יבוא ויצוא של תרכובות ריסי 16. מחקרים רבים זיהו קשר בין הריסים ו קאנונית Wnt (איתות PCP), אם כי המנגנון המדויק אינו ברור 17. יתירות של גני ריסים ו PCP ואת הרגישות של קוטביות בתא לאי תקינות הסלולר כללית, להקשות לקשר מוטציה ישירות גירעונות ספציפיים PCP. אחד פסקי לקריאה של איתות PCP הוא המיקום של הגוף הבסיסי ו primarcilium y, ולכן ההפרדה העיקרית מן הפגמים המשניים הם מאתגר. כמה מחקרים מוטנטים דג הזברה והעכבר הציעו שום קשר בין הריסים ו Wnt איתות 18-20. אי-התאמות בנתונים עשויות לשקף מינים, רקמות, או בדלים זמניים תלויים תרומות ריסים לקראת איתות Wnt. יתר על כן, היענות Wnt רגיל עלולים להיעזר במידת גופים הבזליים להישאר פונקציונליים. תובנה עמוקה יותר לתוך התפקיד של חלבונים ריסי במסלולי איתות הסלולר תופעות ביולוגיות אחרות חיונית להבנת ביולוגיה תאית והתפתחותית, וכן לפיתוח אסטרטגיות טיפול ממוקד.

<table><tbody><tr><td>כלים/ציוד</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>אלסטומר סיליקון - Sylgard 184</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>761028-5EA</td><td>ראה הערה 2</td></tr><tr><td>מספריים מיקרו ניתוח-להב ישר</td><td></td> מלקחיים עדינים שונים <td></td><td></td></tr><tr><td>(מס' 5 ו-55) ומלקחיים קהים</td><td></td> מיקרוסקופ ניתוח שונים<td></td><td></td></tr><tr><td>.</td><td>שקופיות</td> מיקרוסקופ זכוכית לא מצופות שונות <td></td><td></td></tr><tr><td>פתקי כיסוי מיקרוסקופ שונים (22 מ"מ ופעמים; 40 מ"מ ופעמים; 0.15 מ"מ)</td><td></td> פיפטות העברה שונות <td></td><td></td></tr><tr><td>פינים</td> זעירים <td>שונים</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td>&nbsp;<td></td><td></td></tr><tr><td></td><td> Fine Science Tools</td><td>26002-10</td><td></td></tr><tr><td>SEM מחזיק מדגם</td><td>tousimis</td><td>8762</td><td></td></tr><tr><td>סריקת חתיכי מיקרוסקופ אלקטרונים</td><td>TED PELLA</td><td>16111</td><td></td></tr><tr><td>PELCO לשוניות: דבק פחמן</td><td>TED PELLA</td><td>16084-3</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ פלורסנט</td><td></td> מייבש נקודות קריטיות שונות <td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>שונותסריקת מיקרוסקופ אלקטרונים</td><td></td> שקופיות מיקרוסקופ זכוכית שונות <td></td><td></td></tr><tr><td>כיסויי זכוכית</td><td>שונים</td> רקמות Kimwipe שונות<td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td>&nbsp;<td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td> ריאגנטים <td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr> שונים <tr><td>של מברשת</td><td></td><td></td><td></td>צבע עדין</tr><tr><td>1& פעמים; תמיסת מלח חומצה פוספט (PBS)</td><td>Gibco/Life Technologies</td><td>10010023</td><td></td></tr><tr><td>פרפורמלדהיד&nbsp; (PFA) (דרגת EM נדרשת עבור EM)</td><td>שונים</td><td></td><td>הכן תמיסה של 4% ב -1 פעמים; PBS התרעננה בכל פעם. דרגת EM נדרשת עבור EM.</td></tr><tr><td>2.5% גלוטראלדהיד דרגה 1</td><td>סיגמא-אולדריץ</td>' <td>G5882</td><td></td></tr><tr><td>Tris-HCl (pH 7.5)</td> <td>שונים</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>שונים</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CaCl 2</td><td>שונים</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>שונים סרום עיזים רגיל</td><td>שונים</td><td></td><td></td></tr><tr><td>AffiniPure Fab Fragment חמור נגד עכבר IgG (H+L)</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>715-007-003</td><td></td></tr><tr><td>Fluoromount-G מדיה הרכבה</td><td>SouthernBiotech</td><td>0100-01</td><td></td></tr><tr><td>10&times; הנקס תמיסת מלח מאוזנת (HBSS)</td><td>Gibco/Life Technologies</td><td>14065</td><td></td></tr><tr><td>Hepes</td><td>Gibco/Life Technologies</td><td>15630-080</td><td></td></tr><tr><td>אוסמיום טטרוקסיד (OsO4</td>) <td>סיגמא-אולדריץ'/פלוקה אנליטי</td><td>75632</td><td></td></tr><tr><td>חומצה טאנית</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>403040</td><td></td></tr><tr><td>אתנול 200 הוכחה</td><td>נוגדנים שונים</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>anti Arl13b</td><td>Protein Tech</td><td>17711-1-AP</td><td>ריכוז מומלץ 1:1,000</td></tr><tr><td>אנטי אצטילציה טובולין (611-B1)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T6793</td><td>ריכוז מומלץ 1:800</td></tr><tr><td>אנטי גמא טובולין (GTU-88)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T6557</td><td>ריכוז מומלץ 1:200</td></tr><tr><td>anti Zo_1&nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td>40-2300</td><td>ריכוז מומלץ 1:500</td></tr><tr><td>Myosin VI</td><td>Proteus Biosciences</td><td>25-6791</td><td>ריכוז מומלץ 1:1000</td></tr><tr><td>Myosin VIIa</td><td>Proteus Biosciences</td><td>25-6790</td><td>ריכוז מומלץ 1:1,000</td></tr><tr><td>anti Vangl2</td><td>Merk Millipore</td><td>ABN373</td><td>ריכוז מומלץ 1:250</td></tr><tr><td>anti G&alpha; i3</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G4040</td><td>ריכוז מומלץ 1:250</td></tr><tr><td>Alexa Fluor&reg; 488 Phalloidin</td><td>Invitrogen/Life Technologies</td><td>A12379</td><td>ריכוז מומלץ 1:300 - 1,000</td></tr><tr><td>Alexa Fluor&reg; 568 Phalloidin</td><td>Invitrogen/Life Technologies</td><td>A12380</td><td>ריכוז מומלץ 1:300 - 1,000</td></tr></tbody></table>

הערכת פנוטיפים מישורים-cell-קוטביות ב ciliopathy עכבר mutant שבלול

Evaluation of Planar-Cell-Polarity Phenotypes in Ciliopathy Mouse Mutant Cochlea

בשנים האחרונות, ריסים ראשוניים התגלו כמווסתים מרכזיים בהתפתחות ובמחלות על ידי השפעה על מסלולי איתות רבים. אחד ממסלולי האיתות המוקדמים ביותר שהוכחו כקשורים לתפקוד הרירי היה מסלול האיתות הלא קנוני Wnt, המכונה גם איתות קוטביות תאים מישורית (PCP). אחד המקומות הטובים ביותר לחקור את ההשפעות של איתות קוטביות תאים מישוריים (PCP) במהלך התפתחות בעלי חוליות הוא שבלול היונקים. שיבוש איתות PCP בשבלול העכבר משבש את צמיחת השבלול, דפוס התאים וכיוון תאי השערה, כולם מושפעים מתפקוד לקוי של הריסים. מטרת פרוטוקול זה היא לתאר את הניתוח של איתות PCP בשבלול היונקים המתפתח באמצעות ניתוח פנוטיפי, אימונוהיסטוכימיה ומיקרוסקופ אלקטרונים סורק. פגמים בהתכנסות ובהתרחבות באים לידי ביטוי כקיצור של צינור השבלול ו/או שינויים בדפוס התאי, שניתן לכמת לאחר דיסקציה ממוטציות עכברים מתפתחות. ניתן לצפות ולכמת שינויים בכיוון הצרור הסטריאוציליארי ובאורך או במיקום הקינוציליה באמצעות אימונופלואורסצנציה או מיקרוסקופ אלקטרונים סורק (SEM). תובנה מעמיקה יותר לגבי תפקידם של חלבונים ריסניים במסלולי איתות תאיים ותופעות ביולוגיות אחרות היא חיונית להבנתנו את הביולוגיה התאית וההתפתחותית, כמו גם לפיתוח אסטרטגיות טיפול ממוקדות.

שבלול Dissection והכן רקמות לאחר הסרת המוח, דיסקציה sagittal באמצע הקו לתפקיד ראש עכבר P0, המבוך הגרמי, במבט מאחור, ניתן דמיינו (איור 1A, חץ לבן) והוסר. איור 1B מציגה את המבוכים גרמיים המבודדים עם שיער השבלול כלפי מעלה, גחון, (מהשמאל) מאחור, הגבה (מימין). נקודות חץ הלבנות אל החלון הסגלגל שממנו אפשר...

ריסים ראשוניים משפיעים על מסלולי איתות שונים. שבלול היונקים אידיאלי לבחינת איתות קוטביות תאים מישוריים (PCP). תפקוד לקוי של ריסים משפיע על צמיחת השבלול, דפוס התאים וכיוון תאי השערה, קריאות של PCP. מטרתנו היא לנתח איתות PCP בשבלול עכבר באמצעות ניתוח פנוטיפי, אימונוהיסטוכימיה ומיקרוסקופ אלקטרונים סורק.

הערכת פנוטיפים מישורים-Cell-קוטביות ב Ciliopathy עכבר Mutant שבלול

In recent years, primary cilia have emerged as key regulators in development and disease by influencing numerous signaling pathways. One of the earliest ...

המטרה הכוללת של פרוטוקול זה היא לבחון את השבלול של עכברי מוטציה של השריש (cilia) לאיתור פנוטיפים של קוטביות תא מישורית (planar-cell-polarity - PCP). טכניקות אלה מאפשרות פירוט נרחב של הפנוטיפ השבלולי, אשר יוביל להבנה מדויקת יותר של המעורבות של השריש בביסוס סיגנל ה-PCP בחולייתנים. היתרון העיקרי של פרוטוקול זה הוא שברגע שהשליטה בו תושג, ניתן להשתמש באפיתל השבלולי שהופרד למגוון סוגים שונים של ניתוחים פנוטיפיים.לאחר הכנת הרגיאנטים והרקמות מבעלי החיים בניסוי, בשלבי התפתחות E16.5 עד p3, השתמשו בלהב סקלפל או במספריים קטנים כדי לבצע דיסקציה של הראש לאורך קו האמצע הסגיטלי, החל מהאף ועד לקוטילה. הוציאו את המוח מכל חצי של הגולגולת באמצעות פינצטה. לאחר מכן, זהו את עצמות הרקה המכילות את המבוכים הגרמיים המתפתחים של האוזן הפנימית.בעת העבודה עם הדגימה תחת מיקרוסקופ דיסקציה, השתמשו בפינצטה כדי להפריד את המבוכים העצמיים מהגולגולת על ידי החלקת הפינצטה בעדינות מתחת למבוכים העצמיים. לאחר הדיסקציה, השתמשו בקצה הפינצטה כדי לנקות את החלונות האליפטי והעגול וצרו חור קטן בשיא (apex) של הספירלה הקוכליארית. לאחר מכן, קבעו את המבוכים העצמיים ב-1.5 milliliters של 4% paraformaldehyde למשך חמש דקות על קרח כדי לאפשר הסרה קלה של קרומי התקרה (tectorial membrane).כעת, הניחו את המבוך הגרמיים בתוך צלחת ניתוח מצופה באלסטומר סיליקון שחור המכילה PBS כדי להקל על הניתוח. השתמשו בפינצטה מספר 5 כדי להסיר את הסחוס החיצוני, ובכך לחשוף את תעלת השבלול. התחילו בחלון הביצוי, הכניסו את קצה הפינצטה לחלון הביצוי, ופתחו בעדינות את הסחוס תוך כדי תנועה איטית כלפי מעלה לכיוון השיא (apex).בשלב הבא, השתמשו בפינצטה עדינה כדי לתפוס את קרומי רייסנר (Reissner's membrane) בבסיס התעלת השבלול, וקלפו אותה בתנועה כלפי מעלה. הדמיאנו את ההיבט הגבי (dorsal aspect) של תעלת השבלול, כולל האפיתל התחושתי. לאחר מכן, השתמשו בפינצטה מספר 55 כדי לתפוס את הקרומי הטקטוריאלית (tectorial membrane) בבסיס השבלול, וקלפו כלפי מעלה לכיוון השיא (apex).הסרה מלאה של הקרומית הטקטורית (tectorial membrane) נדרשת כדי לקבל את התמונות הטובות ביותר באימונוהיסטוכימיה, והיא חיונית למיקרוסקופיה אלקטרונית סורקת. לאחר חשיפת איבר קורטי (organ of Corti), יש לקבע את הרקמה באופן נוסף ולבצע אימונוהיסטוכימיה, או להכין את הדגימה למיקרוסקופיה אלקטרונית סורקת, כפי שפירוט בחלק הכתוב של הפרוטוקול. לאחר צביעת הרקמה, יש להניח את הדגימה בכלי מסוג סיליקון אלסטומר שחור המכיל PBS.באמצעות פינצטה עדינה, הסר את האזור הווסטיבולרי (vestibular region) מהספירלה הקוכלארית. לאחר מכן, הסר בזהירות רבה את הסחוס והמזנכימה שמתחתיה מהספירלה הקוכלארית. הספירלה הקוכלארית שנותרה כוללת את התלימה הפנימית (inner sulcus), את איבר קורטי (organ of Corti) ואת התלימה החיצונית (outer sulcus).העבירו את הספירלה הקוכלארית לתוך טיפה של PBS שהונחה על זכוכית של מיקרוסקופ. ספגו את ה-PBS באמצעות טישוע סופג או פיסת נייר סינון, וסדרו מחדש בעדינות את הספירלה הקוכלארית במידה והאפיתלית זזה או חופפת על עצמה. הוסיפו טיפה של מדיום קיבוע (mounting media) ישירות על דגימת הקוכלאה, והניחו בעדינות זכוכית כיסוי ישירות על הדגימה, תוך הקפדה להימנע מבועות אוויר.השתמשו במיקרוסקופ אפי-פלואורסצנטי או במיקרוסקופ קונפוקאלי עם סריקת לייזר, המצוידים בעדשות הגדלה גבוהה ובמפתח מספרי (NA) גבוה, כדי ללכוד תמונות של המשטח האפיקלי של תאי השערה בשבלול. השתמשו בעדשות בעלות הגדלה נמוכה יותר כדי לצלם תמונות חופפות של ספירלת השבלול לצורך כימות אורכו של תעלת השבלול. התמונות הבאות מציגות צביעה אימונו-פלואורסצנטית של התסבוב הבזאלי בשבלול של יום ראשון לאחר הלידה.Phalloidin מסמן אקטין פילמנטוזי בסטריאוציליה, ואקטין קורטיקלי בהיקף התא. Myosin VIIA הוא סמן עבור תאי שיער פנימיים וחיצוניים. ZO_1 מסמן את הצומתים הדוקים בין התאים, מה שהופך אותו לסמן מצוין להבחנה בין גבולות התאים.alpha-tubulin אצטילאט משמש כסמן עבור הקינוצילום (kinocilium) בקודקוד הצורר, כפי שסומן על ידי החץ הלבן. מיקרוטובולי פנימיים מסומנים אף הם על ידי alpha-tubulin אצטילאט, אשר מצויים בשפע רב במיוחד בתאי עמוד (pillar cells), כפי שסומן על ידי הכוכביות הלבנות. תמונה זו של תעלות שבלול (cochlear ducts) שבוצע להן ניתוח ביום העוברי E18.5, שצבעו ב-tubulin אצטילאט, מדגימה קיצור ניכר של תעלות השבלול בעכברים עם נוקאאוט מותנה של IFT20 בהשוואה לקבוצת הביקורת.התמונה הבאה היא הדגמה של הרכבה שלמה (whole-mount) של התסבוב הבזאלי של השבלול, בעכברי knockout ל-BBS8, ביום הלידה (post natal day zero). צמורי הסטריאוסיליה בשבלול של עכברי knockout ל-BBS8 מסובבים באופן משתנה, כפי שמוצג על ידי החץ הימני, או שטוחים וממוקמים באופן שגוי, כפי שמוצג על ידי החץ האמצעי. הקינוסיליה ממוקמת באופן שגוי, או שהאקסונמות חסרות, כפי שמוצג על ידי החץ השמאלי.בעת הכנת פנוטיפ של השבלול (cochlear phenotype) לאנליזה, חשוב לזכור כי הבדלים ברקע הגנטי עשויים לשנות את הפנוטיפ של השבלול. לכן, חשוב להשתמש בביקורות של בני שגר (littermate controls) לצורך האנליזה. אנליזות נוספות כוללות בדיקות אודיומטריות ותרביות של נתחים מהשבלול (cochlear explants), המאפשרות טיפול במפעילים או מעכבים שונים של אותות (signaling activators or inhibitors), ובכך תורמות להבנה מכניסטית של התהליכים ההתפתחותיים המעורבים.לאחר צפייה בסרטון זה, תרכשו הבנה טובה לגבי אופן הכנת רקמת שבלול (cochlear tissue) לצורך ניתוח תפקידם של רכיבי השריש (ciliary components) והשפעותיהם המובחנות על סיגנל PCP.

evaluation-planar-cell-polarity-phenotypes-ciliopathy-mouse-mutant

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

הליך פשוט של vibratome חתך את האיבר של קורטי, ואחריו מיקרוסקופיה אימונוהיסטוכימיה ו confocal מתואר. הליך זה מאפשר שימור משופר של cytoarchitecture את הקנס של האיבר של קורטי יונקים, וכתוצאה מכך מאפשר כימות מדויק של סוגי תאים.

Vibratome חתך לשימור משופרת של Cytoarchitecture של איברים של יונקים של קורטי

ציטומטריית זרימה היא כלי רב עוצמה המאפשר בידוד וחקר של אוכלוסיות תאים ספציפיות. פרוטוקול זה מתאר את השלבים לבידוד תאים המבטאים LacZ מרקמות שבלול של עכברים טרנסגניים ניאונטליים. תאי שבלול מופרדים סומנו באמצעות סובסטרטים המשורשרים לפלואורופור של β-galactosidase לפני ההפרדה באמצעות ציטומטריית זרימה.

בידוד LacZ-להביע תאים פנימית עכבר רקמות האוזן באמצעות זרימת cytometry

הדמיה חיה של שבלול האוזן של יונקים העובריים היא מאתגרת, כי התהליכים התפתחותיים ביד פועלים על שיפוע זמני על עשרה ימים. כאן אנו מציגים שיטה culturing ולאחר מכן ההדמיה רקמות explant השבלול עוברית שנלקחו מעכבר כתב ניאון בחמישה ימים.

לטווח ארוך זמן פקיעת הדמיה של Explants שבלול העכבר

אנו מציגים שיטה המתארת בידוד ותרבית של צמחי שבלול מהאוזן הפנימית של עכבר עוברי.  אנו גם מדגימים שיטה להעברת גנים לתוך צמחי שבלול באמצעות אלקטרופורציה של גל מרובע. תרבית הצמח במבחנה יחד עם טכניקת העברת גנים מאפשרת לחוקרים לחקור את ההשפעות של שינוי ביטוי גנים במהלך ההתפתחות.

תרבות של עוברי Explants שבלול העכבר וג&#39;ין העברה על ידי Electroporation

אנו מציגים שיטה לבודד את האיבר הבוגר של קורטי כשלושה סיבובים שלמים שבלול (קודקוד, אמצע, ובסיס). אנחנו גם מדגימים הליך immunostaining עם נוגדנים מתויגים fluorescently. יחד טכניקות אלה יאפשרו המחקר של תאי שיער, תאי תמיכה, וסוגי תאים אחרים הנמצא בשבלול.

ההר שלם Dissection וImmunofluorescence של מבוגרי עכבר השבלול

אנו מציגים פרוטוקול לבידוד הבולה השמיעתית, הקפסולה והעצמות מעכברים לאחר לידה לצורך ניתוח היסטולוגי שלם.

דיסקציה של בולה השמיעה של עכברים אחרי לידה: בידוד של עצמות באוזן התיכונה ניתוח היסטולוגית

Organotypic תלת מימדי התרבויות של מאתר utricle, שבלול ב שטיחות נקה קולגן אני ג ' לים שימור רקמות מולדת מורפולוגיה לאפשר גירוי מכני באמצעות התאמה של מטריקס נוקשות, אישור המסירה הגן וירוס בתיווך.

Organotypic תלת מימדי התרבויות שיווי המשקל ושמיעתיים אברי החישה

כתב יד זה מתאר פרוטוקול ניסיוני להערכת מאפיינים מורפולוגיים ומעמד פונקציונלי של הסינפסות של רצועת הכלים בעכברים נורמליים. המודל הנוכחי מתאים גם לרעש המושרה והקשורות לגיל synaptopathy מודלים מוגבלים. גם התוצאות של לימודי העכבר הקודמים נדונו.

מורפולוגית ופונקציונלית הערכה של הסרט סינפסות בתדר ספציפי אזורים של העכבר שבלול

מאמר זה מציג משטח שונה הכנה שבלול שיטה הדורשת decalcification ושימוש של תא ודבק רקמה לדבוק פיסות של epithelia לכסות 10 מ"מ כיסוי עגול עבור אימונוהיסטוכימיה העכבר למבוגרים כנימת.

הכנה לפני שבלול בעכבר למבוגרים

מחקר זה מתאר כיצד לנתח את השק האנדולימפטי מהאוזן הפנימית של העכבר בגילאים שונים. התוצאה של דיסקציה דומה מוצגת במודל עכבר Slc26a4-null של הגדלת השק האנדולימפטי. עכבר מהונדס עם כתב ניאון המתבטא בשק האנדולימפטי מוצג כמודל לדמיין בקלות את השק האנדולימפטי, ואת הכלי החינוכי.

נתיחת השק האנדולימפטי מעכברים

הפרוטוקול הנוכחי מעדכן פרוטוקולים קודמים ומשלב גישות פשוטות יחסית לגידול צמחי שבלול באיכות גבוהה. זה מספק איסוף נתונים אמין והדמיה ברזולוציה גבוהה בתאים חיים וקבועים. פרוטוקול זה תומך במגמה המתמשכת של חקר תאי האוזן הפנימית.

צמחי שבלול שלמים של ילודים כמודל במבחנה

למדו הערכת פנוטיפים של קוטביות תאית מישורית בשבלול עכברים מיוטנטים לציליופתיה. שיטה זו משלבת ניתוח פנוטיפי, אימונוהיסטוכימיה ומיקרוסקופיה אלקטרונית לסריקה לחקר תפקידי הריסנים באותות PCP בפיתוח האוזן הפנימית.

הערכת פנוטיפים מישורים-Cell-קוטביות ב Ciliopathy עכבר Mutant שבלול

גלה סרטונים נוספים