Name: דג הזברה כמודל להעריך את הפוטנציאל טרטוגניות של ניטריט (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-02-16T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 29 s
Description: למדו להעריך השפעות טרטוגניות של ניטריט על עוברי דג הזברה באמצעות חשיפה בזמנים וריכוזים שונים. שיטה זו מאפשרת לחקור פגמים התפתחותיים ולהבין את הסיכון הכימי לעוברים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

VK מומן על ידי מענקים מהמחלקה לביולוגיה של IUP ובית הספר ללימודים מתקדמים ומחקר (פיתוח מקצועי של סטודנטים לתארים מתקדמים). CQD ו-TWS נתמכו על ידי בית הספר ללימודים מתקדמים ומחקר של IUP (עלויות פרסום פקולטה / הוצאות מחקר נלוות). אנו מודים גם לחברי מעבדת Diep על תחזוקת מתקן דג הזברה.

הנהלים המתואר בפרוטוקול זה אושרו על ידי ועדת טיפול בבעלי חיים מוסדיים השתמש באוניברסיטת אינדיאנה פנסילבניה. 1. עובר קציר <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשמור על דג הזברה על 28.5 מעלות צלזיוס, pH 7, מוליכות בין 500-1,500 מיקרו-שניות, ואת מחזור אור / חושך של 14 אור hr ו -10 שעות חושך 24. השתמש זני wild-type כגון ט&quot;ו, AB או היברידי ט&quot;ו / AB. זנים שונים עשויים להגיב באופן שונה לטיפול כימי 25. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדר את הדגים לצורך הזדווגות אמש ביצי קציר על ידי הוספת מי מערכת דגים לתוך טנק הזדווגות. הוספת זכר ודגי נקבה לתוך הטנק להפריד בין שני דגים עם מחיצה. כל זוג דגים ייצרו מגוון של 50-300 ביצים. כדי להבטיח כי ביצים מספיק תופקנה, להקים 30 זוגות של דגים. בדרך כלל, כ -50% של זוגות דגים בגיל ההזדווגות הממשלה (6-9 חודשים) יהיה לייצר ביציות, וכתוצאה מכך עד 200 ביצים לכל זוג ועד למקסימום של עד 3ביצים, 000 לצורך הניסוי הזה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למחרת בבוקר אחרי האור נדלק, להסיר את המחיצה כדי ליזום הזדווגות. בדקו את טנקי הזדווגות ביצים כל 15 דק &#39;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר הדגים מטילים ביצים, לקצור את כל העוברים באמצעות מסננת תה ולשלב אותם לתוך מכולה אחת גדולה עם חיץ E3 (5 mM NaCl, 0.17 מ&quot;מ KCl, 0.33 מ&quot;מ CaCl 2, 0.33 מ&quot;מ MgSO 4). 1.5 hpf, להסיר ולסלק ביצים מופרות עם pipet העברה פלסטיק תחת מיקרוסקופ לנתח. ביצים מופרות הן אטומות בעוד ביצים מופרות הם שקופות 34. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברת 50 עוברים לתוך צלחת זכוכית מ&quot;מ 100 x 15 פטרי המכילה 50 מ&quot;ל E3 חיץ עבור כל תנאי הטיפול. סך של 33 מנות נדרשים עבור 11 תנאי טיפול ו -3 משכפל. </li></ol> 2. עובר טיפול <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביצוע טיפולים ב -2 שעות לאחר ההפריה (hpf) 35. עוברים / זחלים לדגור על 28.5 מעלות צלזיוס ולבחון את הזחלים ב 120 hpf. בצע בבית לאהרח שלושה משכפל של כל תנאי הטיפול לניתוח סטטיסטי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במשך 3 צלחות פטרי (כל 50 עוברים המכילים) בשעה 2 hpf, להסיר את החיץ E3 עם pipet העברת ולהוסיף 50 מ&quot;ל של אתנול 300 מ&quot;מ מדולל במאגר E3. מכסים את צלחות פטרי עם Parafilm כדי למזער אידוי של אתנול. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המשך חשיפה עוברת כדי אתנול במשך 22 שעות. ואז להסיר את אתנול עם העברת pipet. הוסף 50 מ&quot;ל של חיץ E3 ו מערבולת צלחת כמה פעמים כדי לשטוף את אתנול. הסר חוצץ E3 זה עם pipet העביר וחזור על שלב כביסה פי 2 יותר. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במשך 3 צלחות פטרי (כל 50 עוברים המכילים) בשעה 2 hpf, להסיר את החיץ E3 עם pipet העברת ולהוסיף 50 מ&quot;ל של חיץ E3 חדש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במשך 9 צלחות פטרי (כל 50 עוברים המכילים) בשעה 2 hpf, להסיר את החיץ E3 עם pipet העברת ולהוסיף 50 מ&quot;ל של 1,000 מ&quot;ג / L סודיום ניטריט מומס חיץ E3. אשר את הריכוז של הפתרון ניטריט המניות מראש באמצעותשינוי של diazotization (USEPA שיטה 354.1) שיטת spectrophotometric 28. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המשך חשיפת 3 מנות במשך 46 שעות, 3 מנות עבור 70 שעות ו 3 מנות עבור 94 שעות. החלף את הפתרון ניטריט עם פתרון ניטריט טרי מדי יום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר כל זמן החשיפה, להסיר את ניטריט עם pipet העברה. הוסף 50 מ&quot;ל של חיץ E3 ו מערבולת צלחת כמה פעמים כדי לשטוף את ניטריט. הסר חוצץ E3 זה עם pipet העביר וחזור על שלב כביסה פי 2 יותר. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במשך 3 צלחות פטרי (כל 50 עוברים המכילים) בשעה 2 hpf, להסיר את החיץ E3 עם pipet העברת ולהוסיף 50 מ&quot;ל של 200 מ&quot;ג / L סודיום ניטריט. חזרו על פעולה זו עם 400, 600, 800, ו -1,000 מ&quot;ג / ליטר של סודיום ניטריט. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המשך חשיפה עוברת ניטריט עבור 70 שעות. החלף את הפתרון ניטריט עם פתרון ניטריט טרי מדי יום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר זמן החשיפה, להסיר את ניטריט עם pipet העברה. הוסף 50 מ&quot;ל של חיץ E3 ו מערבולת המנה מספרפעמים כדי לשטוף את ניטריט. הסר חוצץ E3 זה עם pipet העביר וחזור על שלב כביסה פי 2 יותר. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במשך 3 צלחות פטרי (כל 50 עוברים המכילים) בשעה 2 hpf, להסיר את החיץ E3 עם pipet העברת ולהוסיף 50 מ&quot;ל של 1,000 מ&quot;ג / L נתרן חנקתי מומס חיץ E3. אשר את הריכוז של התמיסה חנקה כסף המניות מראש באמצעות שינוי של הפחתת קדמיום (שיטת USEPA 353.3) שיטת spectrophotometric 28. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המשך חשיפת העוברים חנקו עבור 70 שעות. החלף את הפתרון חנק עם פתרון חנק טרי מדי יום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר זמן החשיפה, להסיר את חנקתי עם pipet העברה. הוסף 50 מ&quot;ל של חיץ E3 ו מערבולת צלחת כמה פעמים כדי לשטוף את חנקתי. הסר חוצץ E3 זה עם pipet העביר וחזור על שלב כביסה פי 2 יותר. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במהלך כל יום של החשיפה, לספור את מספר עובר / זחלים מתים באמצעות סטראו. סימנים של מוותבין השאר, חוסר דופק ואת זרימת הדם, או חוסר תנועתיות לאחר 1 דקות של התבוננות. סר עובר / זחלים מתים עם pipet העביר להפחתת זיהום של למאגר E3. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר ניסויים נגמרים בגיל 120 hpf, להרדים את הזחלים. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את חוצץ E3 עם העברת pipet. לאחר מכן להוסיף 50 מ&quot;ל של 0.2% MS-222 (שנאגרו ל- pH 7) ולחכות 10 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את MS-222 עם העברת pipet. הוסף 50 מ&quot;ל של חיץ מערבולת E3 לשטוף את MS-222. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את חוצץ E3 עם pipet העברת ולהוסיף 20 מ&quot;ל של 4% paraformaldehyde (PFA) כדי לתקן את הזחלים. מערבולת פעמים צלחת מספר. השתמש העברת pipet להעביר את הזחלים לתוך בקבוקון זכוכית יחד עם מספיק PFA למלא את הבקבוקון. אחסן את הבקבוקונים במקרר למשך הלילה (O / N). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צלם תמונות של זחלים קבועים באמצעות סטריאוסקופ עם מצלמה דיגיטלית. השתמש בהגדלה 30X, ISO 200, ו -200 זמן החשיפה msec. אוריינט הזחלים כך קדמי leרגל ו הגבי הוא לחלק העליון של השדה. </li></ol>

<ol><li>Gilbert-Barness, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Teratogenic+causes+of+malformations%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Clin+Lab+Sci%22%5BJournal%5D)">Teratogenic causes of malformations.</a> Ann Clin Lab Sci. 40 (2), 99-114 (2010).</li>
<li>Brent, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cause+and+prevention+of+human+birth+defects%3A+What+have+we+learned+in+the+past+50+years%5BTitle%5D)+AND+%22Con+Anom%22%5BJournal%5D)">The cause and prevention of human birth defects: What have we learned in the past 50 years.</a> Con Anom. 41 (1), 3-21 (2001).</li>
<li>Lin, S., Zhao, Y., Nel, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish%3A+an+in+vivo+model+for+nano+EHS+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Small%22%5BJournal%5D)">Zebrafish: an in vivo model for nano EHS studies.</a> Small. 9 (9-10), 1608-1618 (2013).</li>
<li>Pamanji, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toxicity+effects+of+profenofos+on+embryonic+and+larval+development+of+zebrafish+%28Danio+rerio%29%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Toxicol+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Toxicity effects of profenofos on embryonic and larval development of zebrafish (Danio rerio).</a> Environ Toxicol Pharmacol. 39 (2), 887-897 (2015).</li>
<li>Simmons, A. E., Karimi, I., Talwar, M., Simmons, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+nitrite+on+development+of+embryos+and+early+larval+stages+of+the+zebrafish+%28Danio+rerio%29%5BTitle%5D)+AND+%22Zebrafish%22%5BJournal%5D)">Effects of nitrite on development of embryos and early larval stages of the zebrafish (Danio rerio).</a> Zebrafish. 9 (4), 200-206 (2012).</li>
<li>Mantecca, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toxicity+Evaluation+of+a+New+Zn-Doped+CuO+Nanocomposite+With+Highly+Effective+Antibacterial+Properties%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol+Sci%22%5BJournal%5D)">Toxicity Evaluation of a New Zn-Doped CuO Nanocomposite With Highly Effective Antibacterial Properties.</a> Toxicol Sci. , (2015).</li>
<li>Jensen, F. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nitric+oxide+formation+from+nitrite+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Biol%22%5BJournal%5D)">Nitric oxide formation from nitrite in zebrafish.</a> J Exp Biol. 210, 3387-3394 (2007).</li>
<li>Scholz, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+zebrafish+embryo+model+in+environmental+risk+assessment--applications+beyond+acute+toxicity+testing%29%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Sci+Pollut+Res+Int%22%5BJournal%5D)">The zebrafish embryo model in environmental risk assessment--applications beyond acute toxicity testing).</a> Environ Sci Pollut Res Int. 15 (5), 394-404 (2008).</li>
<li>Howe, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+zebrafish+reference+genome+sequence+and+its+relationship+to+the+human+genome%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The zebrafish reference genome sequence and its relationship to the human genome.</a> Nature. 496 (7446), 498-503 (2013).</li>
<li>CDC. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spontaneous+abortions+possibly+related+to+ingestion+of+nitrate-contaminated+well+water--LaGrange+County%2C+Indiana%2C+1991-1994%5BTitle%5D)+AND+%22MMWR+Morb+Mortal+Wkly+Rep%22%5BJournal%5D)">Spontaneous abortions possibly related to ingestion of nitrate-contaminated well water--LaGrange County, Indiana, 1991-1994.</a> MMWR Morb Mortal Wkly Rep. 45 (26), 569-572 (1996).</li>
<li>Brender, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prenatal+nitrate+intake+from+drinking+water+and+selected+birth+defects+in+offspring+of+participants+in+the+national+birth+defects+prevention+study%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Health+Perspect%22%5BJournal%5D)">Prenatal nitrate intake from drinking water and selected birth defects in offspring of participants in the national birth defects prevention study.</a> Environ Health Perspect. 121 (9), 1083-1089 (2013).</li>
<li>Huber, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maternal+dietary+intake+of+nitrates%2C+nitrites+and+nitrosamines+and+selected+birth+defects+in+offspring%3A+a+case-control+study%5BTitle%5D)+AND+%22Nutr+J%22%5BJournal%5D)">Maternal dietary intake of nitrates, nitrites and nitrosamines and selected birth defects in offspring: a case-control study.</a> Nutr J. 12, 34(2013).</li>
<li>Phillips, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Naturally+occurring+nitrate+and+nitrite+in+foods+in+relation+to+infant+methaemoglobinaemia%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Cosmet+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Naturally occurring nitrate and nitrite in foods in relation to infant methaemoglobinaemia.</a> Food Cosmet Toxicol. 9 (2), 219-228 (1971).</li>
<li>Moncada, S., Palmer, R. M., Higgs, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nitric+oxide%3A+physiology%2C+pathophysiology%2C+and+pharmacology%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol+Rev%22%5BJournal%5D)">Nitric oxide: physiology, pathophysiology, and pharmacology.</a> Pharmacol Rev. 43 (2), 109-142 (1991).</li>
<li>Gladwin, M. T., Crawford, J. H., Patel, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+biochemistry+of+nitric+oxide%2C+nitrite%2C+and+hemoglobin%3A+role+in+blood+flow+regulation%5BTitle%5D)+AND+%22Free+Radic+Biol+Med%22%5BJournal%5D)">The biochemistry of nitric oxide, nitrite, and hemoglobin: role in blood flow regulation.</a> Free Radic Biol Med. 36 (6), 707-717 (2004).</li>
<li>Gupta, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recurrent+acute+respiratory+tract+infections+in+areas+with+high+nitrate+concentrations+in+drinking+water%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Health+Perspect%22%5BJournal%5D)">Recurrent acute respiratory tract infections in areas with high nitrate concentrations in drinking water.</a> Environ Health Perspect. 108 (4), 363-366 (2000).</li>
<li>Kross, B. C., Ayebo, A. D., Fuortes, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methemoglobinemia%3A+nitrate+toxicity+in+rural+America%5BTitle%5D)+AND+%22Am+Fam+Physician%22%5BJournal%5D)">Methemoglobinemia: nitrate toxicity in rural America.</a> Am Fam Physician. 46 (1), 183-188 (1992).</li>
<li>Greer, F. R., Shannon, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Infant+methemoglobinemia%3A+the+role+of+dietary+nitrate+in+food+and+water%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Infant methemoglobinemia: the role of dietary nitrate in food and water.</a> Pediatrics. 116 (3), 784-786 (2005).</li>
<li>Sanchez-Echaniz, J., Benito-Fernandez, J., Mintegui-Raso, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methemoglobinemia+and+consumption+of+vegetables+in+infants%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Methemoglobinemia and consumption of vegetables in infants.</a> Pediatrics. 107 (5), 1024-1028 (2001).</li>
<li>Reregistration Eligibility Decision: Inorganic Nitrate/Nitrite (Sodium and Potassium Nitrates). , U.S. Environmental Protection Agency. Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.epa.gov/oppsrrd1/REDs/old_reds/4052red.pdf">http://www.epa.gov/oppsrrd1/REDs/old_reds/4052red.pdf</a> (1991).</li>
<li>Virtanen, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nitrate+and+nitrite+intake+and+the+risk+for+type+1+diabetes+in+Finnish+children.+Childhood+Diabetes+in+Finland+Study+Group%5BTitle%5D)+AND+%22Diabet+Med%22%5BJournal%5D)">Nitrate and nitrite intake and the risk for type 1 diabetes in Finnish children. Childhood Diabetes in Finland Study Group.</a> Diabet Med. 11 (7), 656-662 (1994).</li>
<li>Case Studies in Environmental Medicine: Nitrate/Nitrite Toxicity. , U.S. Agency for Toxic Substances and Diseases Registry. Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.atsdr.cdc.gov/HEC/CSEM/nitrate/docs/nitrate_nitrite.pdf">http://www.atsdr.cdc.gov/HEC/CSEM/nitrate/docs/nitrate_nitrite.pdf</a> (2001).</li>
<li>Reimers, M. J., Flockton, A. R., Tanguay, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ethanol-+and+acetaldehyde-mediated+developmental+toxicity+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Neurotoxicol+Teratol%22%5BJournal%5D)">Ethanol- and acetaldehyde-mediated developmental toxicity in zebrafish.</a> Neurotoxicol Teratol. 26 (6), 769-781 (2004).</li>
<li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWesterfield%2C+M+%22The+zebrafish+book%3A+A+guide+for+the+laboratory+use+of+zebrafish+%28Danio+rerio%29%22">The zebrafish book: A guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio)</a>. , 5th edn, University of Oregon Press. (2007).</li>
<li>Loucks, E., Carvan, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strain-dependent+effects+of+developmental+ethanol+exposure+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Neurotoxicol+Teratol%22%5BJournal%5D)">Strain-dependent effects of developmental ethanol exposure in zebrafish.</a> Neurotoxicol Teratol. 26 (6), 745-755 (2004).</li>
<li>Bilotta, J., Barnett, J. A., Hancock, L., Saszik, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ethanol+exposure+alters+zebrafish+development%3A+a+novel+model+of+fetal+alcohol+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Neurotoxicol+Teratol%22%5BJournal%5D)">Ethanol exposure alters zebrafish development: a novel model of fetal alcohol syndrome.</a> Neurotoxicol Teratol. 26 (2), 737-743 (2004).</li>
<li>Li, J., Jia, W., Zhao, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Excessive+nitrite+affects+zebrafish+valvulogenesis+through+yielding+too+much+NO+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Excessive nitrite affects zebrafish valvulogenesis through yielding too much NO signaling.</a> PLoS One. 9 (3), e92728(2014).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Methods+for+chemical+analysis+of+water+and+wastes%22">Methods for chemical analysis of water and wastes</a>. , United States Environmental Protection Agency. Cincinnati, OH. Environmental Monitoring and Support Laboratory, Office of Research and Development (1983).</li>
<li>Loucks, E., Ahlgren, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+teratogenic+changes+in+a+zebrafish+model+of+fetal+alcohol+exposure%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Assessing teratogenic changes in a zebrafish model of fetal alcohol exposure.</a> J Vis Exp. (61), (2012).</li>
<li>Addiscott, T. M. Fertilizers and nitrate leaching. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAddiscott%2C+TM+%22Agricultural+Chemicals+and+the+Environment%2C+Issues+in+Environmental+Science+and+Technology%22">Agricultural Chemicals and the Environment, Issues in Environmental Science and Technology</a>. , book 5 1-26 (1996).</li>
<li>Su, Y. F., Lu, L. H., Hsu, T. H., Chang, S. L., Lin, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Successful+treatment+of+methemoglobinemia+in+an+elderly+couple+with+severe+cyanosis%3A+two+case+reports%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Medical+Case+Reports%22%5BJournal%5D)">Successful treatment of methemoglobinemia in an elderly couple with severe cyanosis: two case reports.</a> Journal of Medical Case Reports. 6 (290), (2012).</li>
<li>Harvey, M., Cave, G., Chanwai, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fatal+methaemoglobinaemia+induced+by+self-poisoning+with+sodium+nitrite%5BTitle%5D)+AND+%22Emergency+Medicine+Australasia%22%5BJournal%5D)">Fatal methaemoglobinaemia induced by self-poisoning with sodium nitrite.</a> Emergency Medicine Australasia. 22, 463-465 (2010).</li>
<li>Nishiguchi, M., Nushida, H., Okudaira, N., Nishio, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+autopsy+case+of+fatal+methemoglobinemia+due+to+ingestion+of+sodium%5BTitle%5D)+AND+%22Forensic+Research%22%5BJournal%5D)">An autopsy case of fatal methemoglobinemia due to ingestion of sodium.</a> Forensic Research. 6, (2015).</li>
<li>Avdesh, A., Chen, M., Martin-Iverson, M. T., Mondal, A., Ong, D., Rainey-Smith, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regular+Care+and+Maintenance+of+a+Zebrafish+%28Danio+rerio%29+Laboratory%3A+An+Introduction%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Regular Care and Maintenance of a Zebrafish (Danio rerio) Laboratory: An Introduction.</a> J. Vis. Exp. (69), (2012).</li>
<li>Kimmel, C. B., Ballard, W. W., Kimmel, S. R., Ullmann, B., Schilling, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stages+of+embryonic+development+of+the+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">Stages of embryonic development of the zebrafish.</a> Dev Dyn. 203 (3), 253-310 (1995).</li>
<li>White, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transparent+adult+zebrafish+as+a+tool+for+in+vivo+transplantation+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Transparent adult zebrafish as a tool for in vivo transplantation analysis.</a> Cell Stem Cell. 2 (2), 183-189 (2008).</li>
<li>Tsang, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish%3A+A+tool+for+chemical+screens%5BTitle%5D)+AND+%22Birth+Defects+Res+C+Embryo+Today%22%5BJournal%5D)">Zebrafish: A tool for chemical screens.</a> Birth Defects Res C Embryo Today. 90 (3), 185-192 (2010).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

השיטה המתוארת כאן ממחיש את התועלת של דג הזברה בהערכת הפוטנציאל טרטוגניות של הניטריט ו חנקתי. בהשוואת חוליות אחרות, יש דג זברה יתרונות הכוללים פוריות גבוהה, הפריה חיצונית, שקיפות אופטית, ואת התפתחות מהירה. מוטציות זמינות חסרות פיגמנטציה (כגון דג זברת קספר 36) גם לעזור כדי לשפר את הראות של איברים פנימיים. זה גם קל לייצר דג זברה מהונדסת עם גני כתב כדי להקל על הניתוח ב דגי חי 37. מכיוון הגנום דג הזברה נשמר עם בני אדם, מידע שנצבר לימודיהם יכול להוביל לתוצאות trans...

Teratogenesis הוא תהליך המשבש את ההתפתחות הנורמלית של העובר או העובר על ידי גרימת מומים מבניים ותפקודיים קבע, פיגור בגדילה, או הפלה במקרים חמורים 1. זה יכול להיגרם על ידי סוכנים טבעיים מסוימים (teratogens), אשר מפריעים להתפתחות עוברית מספר דרכי 2. במהלך התפתחות עובר אנושית, teratogens הנפוצה כגון קרינה, חומרים מזהמים, מתכות רעילות, וכימיקלים אורגניים דווחה לגרום למומים בקפלים מלוכסנים (לקפל עור מכסה העין העליון) ו clinodactyly (אצבע מעוקלת או בוהן) דרך שגיאות המוךפו&quot;גנטי שהולכות 1. הבנת המנגנון המולקולרי של teratogenesis היא הצעד הראשון לקראת פיתוח טיפול ומניעה. מודלים חוליות כמה כגון אפריקה שרט צפרדע (laevis Xenopus) ו דג הזברה (Danio rerio) שימשו לקביעת מסלולים מולקולריים מושפע teratogens. מחקרים קודמים השתמשו דג הזברה כמודל אפידמיולוגיה, טוקסיקולוגיה teratogenesis 3-7. שולץ et al. דג זברה נחשב &quot;תקן זהב&quot; להערכת רעילות סביבתית. הדבר נובע, בין השאר, על השקיפות של העובר דג הזברה, אשר מאפשר לחוקרים לחזות את פגם התפתחותי כפי שהוא מתרחש 8. כ -70% מן הגנים באדם יש orthologues דג הזברה, מה שהופך דג הזברה כמודל החולייתנים רצוי ללימוד פגמים אנושיים 9. כמה מחקרים אפידמיולוגיים הראו כי ניטראט ניטריט, נפוץ במזונות החווה ומים, קשורים עם מומים מולדים או הפלות ספונטניות 10,11, בעוד מחקרים אחרים אינם תומכים קשר זה 12. ניטראט (NO 3 -) ו ניטריט (NO 2 -) נוכחים באופן טבעי באדמה ובמים. הם מהווים מקור של חנקן לצמחים והם חלק nitrogen מחזור 13. מזונות כגון שעועית ירוקה, גזר, דלעת, תרד, סלק מחוות המשתמשות דשנים גבוה חנקתי חיזקו באופן משמעותי רמות ניטראט ניטריט 7. חלב פרות ניזונים עם מזונות חנקות גבוה ודגים במים חנקות גבוה (בעיקר נגר אדמה 30) יכול להוביל בני אדם לצרוך כמויות גדולות של ניטראט 14 ניטריט. ניטרט ניטריט גם משמשות לשימור מזון, אשר מגדיל באופן דרמטי את כמות מעובדים על ידי בני אדם 12. רמות אופטימליות של ניטראט ניטריט ממלאות תפקידים יסודיים תהליכים פיסיולוגיים כמו הומאוסטזיס וסקולרית ותפקוד, עצבי ומנגנוני הגנה מארחים אימונולוגיים 13-15. עם זאת, חשיפה לרמות גבוהות של ניטראט ניטריט עלול להוביל לתופעות לוואי, במיוחד אצל תינוקות וילדים 16. חנקתי נבלעו הוא עוד המרה ניטריט בחלל הפה על ידי מיקרואורגניזמים וב הדואר מערכת העיכול על ידי מיקרופלורת המעי 17. ניטראט מכניס תינוקות בסיכון גבוה לתסמונת התינוק הכחולה על ידי חמצון של המוגלובין כדי methemoglobin, וכתוצאה מכך נפגעת המוגלובין מהחמצן שלה נושאת יכולת 18. זו התוצאה של הצבע הכחול של עור המשתרע לרקמות היקפיות במקרים חמורים יותר. חמצון עכבות של תוצאות רקמות בתסמינים אחרים, בצורה החמורה ביותר שמוביל תרדמת ומוות 19,20. סימפטומים דומים נצפו אצל תינוקות ומבוגרים בריכוזים גבוהים של ניטראט 21. רמות גבוהות של methemoglobin במבוגרים בשל התוצאות הרעלת ניטריט ב כיחלון, כאבי ראש, הפרעות נשימה 31, ומוות אם אינו מטופל בשל סיבוכים הקשורים היפוקסיה רקמות חיוניות 32,33. ניטרט בליעה ברמות גבוהות יותר גם יכול לגרום לסיבוכים בריאותיים שונים. סוכרת ילדות, שלשולים חוזרים, וזיהומים בדרכי הנשימה חוזרתאצל ילדים נקשרו עם 11,17,22 צריכת חנקות הגבוהה. חשיפה כרונית לרמה של חנקות גבוהה קשורה במתן שתן ודימום טחול. חשיפה במינון גבוה אקוטית חנקות יכול להוביל למגוון רחב של בעיות רפואיות כמו כאבי בטן, חולשת שרירים, דם בצואה ושתן, התעלפות, ומוות 11. חשיפה טרום לידתית חנק ברמות גבוהות כבר משויכת בצינור העצבי פגם שרירים ושלד 11. דו&quot;ח שנערך לאחרונה הראה כי טיפול עוברי דג זברה עם ניטריט הוביל חלמון בצק צק, מומי craniofacial ו ציריים, ולשחות שלפוחית ​​noninflation 5. במחקר זה, אנחנו מדגימים שיטה לטיפול עוברי דג הזברה עם ניטראט ניטריט לקבוע פוטנציאל טרטוגניות שלהם. עוברים שנחשפו ניטריט בריכוזים שונים ואורך זמן שונה. אתנול שמש כביקורת חיובית, שכן הוא teratogen הוקם 23. Oשיטת ur הראו כי הן ריכוזים גבוהים וזמני חשיפה ארוכה ניטריט היו מזיק הישרדות הביאה פנוטיפים שונים, החל (בצקת) מתון עד חמור (פגמים התפתחותיים ברוטו). לכן, דג הזברה הוא מודל יעיל לבדיקה ישירות השפעות טרטוגניות הפוטנציאל של ניטראט ניטריט בעוברים כדי להשלים מחקרים אפידמיולוגיים.

<table><tbody><tr><td>מכשיר DREL/2010</td><td>Hach</td><td>26700-03</td><td></td></tr><tr><td>אתנול</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>E7023</td><td></td></tr><tr><td>KIMAX זכוכית צלחת פטרי</td><td>VWR</td><td>89001-244</td><td></td></tr><tr><td>MS-222</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>E10521</td><td></td></tr><tr><td>NitraVer 5 מגיב חנקתי</td><td>Hach</td><td>14034-46</td><td></td></tr><tr><td>NitriVer 3 מגיב ניטריט</td><td>Hach</td><td>14065-99</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Fisher Scientific</td><td>3-374-10</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyde</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>158127</td><td></td></tr><tr><td>S6E סטריאומיקרוסקופ</td><td>Leica</td><td>10446294</td><td></td></tr><tr><td>נתרן חנקתי</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>S343</td><td></td></tr><tr><td>נתרן ניטריט</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>S347</td><td></td></tr><tr><td>העברת צנרת</td><td>מעבדה מכירת מוצרים</td><td>L320072</td><td></td></tr><tr><td>בקבוקוני זכוכית</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>03-338B</td><td></td></tr></tbody></table>

דג הזברה כמודל להעריך את הפוטנציאל טרטוגניות של ניטריט

Zebrafish as a Model to Assess the Teratogenic Potential of Nitrite

רמות ניטראט גבוהות בסביבה עלולות לגרום למומים מולדים או הפלות אצל בני אדם. יש להניח, זה נובע מהמרת ניטראט ניטריט ידי חיידקים במעי רוק. עם זאת, במחקרים יונקים אחרים, רמות ניטריט גבוהה לא לגרום למומים מולדים, אם כי הם יכולים להוביל לתוצאות רבייה עניה. לפיכך, פוטנציאל טרטוגניות של ניטריט לא ברור. זה יהיה שימושי יש מערכת מודל חוליות בקלות להעריך השפעות טרטוגניות של ניטריט או כל חומר כימי אחר שיש בו עניין. כאן אנו להדגים את התועלת של דג הזברה (Danio rerio) כדי לסרוק תרכובות המצויות לרעילות ופגמים עובריים. עוברי דג זברה הם מופרים חיצוניים ויש התפתחות מהירה, מה שהופכים אותם מודל טוב מחקרים טרטוגניות. אנחנו מראים כי הגדלת זמן חשיפה ניטריט משפיע הישרדות שלילית. הגדלת ריכוז של ניטריט גם משפיעה לרעה על הישרדות, ואילו חנק לא. עבור עוברי that לשרוד חשיפה ניטריט, פגמים שונים יכולים להתרחש, כוללים קרום לב ואת החלמון בצק צק, לשחות שלפוחית ​​noninflation, ו מום craniofacial. התוצאות שלנו מעיד כי דג הזברה היא מערכת נוחה ללימוד הפוטנציאל טרטוגניות של ניטריט. גישה זו יכולה בקלות להיות מותאמת כדי לבדוק כימיקלים אחרים והשפיע על התפתחות החולייתנים הראשונה.

החשיפה אתנול 300 מ&quot;מ במשך 22 שעות לא הייתה השפעה על הישרדות (מידע לא מוצג), עולה בקנה אחד עם דיווחים קודמים 5,23,26. זה צפוי, כמו אתנול הוא teratogen ידוע ושימש כביקורת חיובית. פנוטיפים שנצפו כללו בצקת קרום לב, noninflation בשלפוחית ​​שחייה (איור 1), פגמי craniofacial, ועיכוב התפתחותי (מידע לא מוצג). טיפול עם ניטריט...

חשיפת teratogens עלולה לגרום למומים מולדים. דג זברה היא שימושי לקביעת פוטנציאל טרטוגניות של כימיקלים. אנו להדגים את התועלת של דג זברה על ידי חשיפה עוברת לרמות שונות של ניטריט וגם בזמנים שונים של חשיפה. אנו מראים כי ניטריט יכול להיות רעיל ולגרום ליקויים התפתחותיים חמורים.

High nitrate levels in the environment may&#160;result in congenital defects or miscarriages in humans. Presumably, this is due to the conversion of ...

המטרה הכללית של הליך זה היא לטפל בעוברים של דגי זברה בניטריט ולקבוע את השפעתו הטרטוגנית. שיטה זו יכולה לסייע במתן מענה לכמה מהשאלות המרכזיות בתחום הרעלנות ההתפתחותית, כגון הערכת ההשפעות הטרטוגניות של כימיקלים על ההתפתחות העוברית. היתרון העיקרי של הליך זה הוא השימוש בעוברי דגי זברה, המתפתחים חיצונית וניתן לצפות בהם תחת מיקרוסקופ.עבור הניסויים המוצגים כאן, יש להחזיק זני דגי זברה מסוג wild-type, כגון זן Tuebingen, בטמפרטורה של 28.5 degrees Celsius ובמחזור אור-חושך של 14 שעות ו-10 שעות, בהתאמה. בלילה שלפני איסוף הביצים, יש להוסיף מי דגים ומפרידים למכלי ההזדווגות ולהניח את הדגים הזכרים והנקבות בצדדים נפרדים של המפריד. כדי להבטיח ייצור של מספיק ביצים, יש להכין 30 זוגות של דגים.למחרת בבוקר, לאחר הדלקת האורות, הסירו את המחיצות כדי להתחיל את ההזדווגות. בדקו את מיכלי ההזדווגות לאיתור ביצים מדי 15 דקות. ברגע שהדגים מטילים ביצים, השתמשו במסננת תה כדי לאסוף את העוברים ורכזו את כולם במיכל גדול המכיל E3 buffer.דגרו את הביצים בטמפרטורה של 28.5 °C. לאחר 1.5 שעות מההפריה (HPF), תחת מיקרוסקופ סטריאוסקופי (dissecting microscope), השתמשו בפיפטת העברה מפלסטיק כדי להסיר ביצים שלא הופרו, אשר ייראו עכורות. העבירו 50 עוברים לכל צלחת פטרי מזכוכית בגודל 100 על 15 מילימטר, המכילה 50 milliliters של E3 buffer, ב

zebrafish-as-a-model-to-assess-the-teratogenic-potential-of-nitrite

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

כדי להבין את המנגנונים המולקולריים של אתנול הנזק הנגרמת התפתחותית, פיתחנו מודל של דג הזברה חשיפה אתנול בוחנים את פיזיים, שינויים הסלולר, וגנטיים המתרחשות לאחר החשיפה...

הערכת שינויים teratogenic במודל דג הזברה של חשיפה אלכוהול עוברית

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לבחון פעילויות זחל דג זברה, פאטהד מינו גינקולוגיות ותגובות photomotor (PMR) באמצעות תוכנת מעקב אוטומטי אנטי. כאשר שולבו במשותף הרעלים bioassays, ניתוחים של התנהגויות אלו מספקים כלי אבחון לבחון אתריים כימי. פרוטוקול זה מתואר באמצעות קפאין, neurostimulant מודל.

נסיוני לבחינת תגובה התנהגותית פרופילים בדגים זחל: ליישום הקפאין נוירו-ממריץ

המטרה של פרוטוקול זה היא למדוד את זמן העברה של fluorescently עם תוויות מזון דרך המעי של הזחל דג זברה אופנה תפוקה גבוהה.

מדידת תפוקה גבוהה הבטן מעבר הזמן באמצעות זחל דג זברה

עוברי דג משמשים להערכת הרעילות של תרכובות כימיות. הם מפתחים מבחוץ ורגישים לכימיקלים, ומאפשרים זיהוי של שינויי פנופאיות עדינים. הניסוי דורש רק כמות קטנה של תרכובת, אשר מתווסף ישירות לצלחת המכילה עוברים, מה שהופך את מערכת הבדיקה יעילה וחסכונית.

הערכה מהירה של רעילות של תרכובות כימיות באמצעות עוברי הדגים Zebrafish

פרוטוקול ניסיוני מפורט מוצג במאמר זה להערכת רעילות נוירוהתנהגותית של מזהמים סביבתיים באמצעות מודל הזחלים דג זברה, כולל תהליך החשיפה ובדיקות אינדיקטורים נוירוהתנהגותית.

לימוד השפעות נוירוהתנהגותית של מזהמים סביבתיים על הזחלים של דגי הזאב

פרוטוקול זה מתאר את ההליכים כדי לגרום לפגיעה בכליות חריפה (AKI) ב זברה-דג מבוגר באמצעות ציספלטין כסוכן נטרוקסי. פירטנו את השלבים כדי להעריך את הרבייה של הטכניקה ושתי טכניקות לניתוח דלקת ומוות תאים ברקמת הכליה, ציטומטריית זרימה ו- TUNEL, בהתאמה.

מודל פגיעה בכליות חריפה המושרה על ידי ציספלטין בדג זברה למבוגרים

הקצב המוגבר של ניתוחים פרמקו וטוקסיקוקינטיים של מתכות ותרכובות מבוססות מתכת בדגי זברה יכול להוות יתרון למחקרי תרגום סביבתיים וקליניים. ההגבלה של ספיגת חשיפה לא ידועה הנישאת במים התגברה על ידי ביצוע ניתוח עקבות של מתכות על רקמת דגי זברה מעוכלים באמצעות ספקטרומטריית מסת פלזמה מצומדת אינדוקטיבית.

קליטת מינון של חשיפת תרכובות מבוססות פלטינה ורותניום בדגי זברה על ידי ספקטרומטריית מסת פלזמה מצומדת אינדוקטיבית עם יישומים רחבים יותר

דג הזברה נוצל לאחרונה כמודל לאימות משנים פוטנציאליים של קרינה. הפרוטוקול הנוכחי מתאר את השלבים המפורטים לשימוש בעוברים של דגי זברה לניסויי סינון מבוססי קרינה וכמה גישות תצפיתיות להערכת ההשפעה של טיפולים וקרינה שונים.

זחלי דגי זברה כמודל להערכת רדיוסנסיטיזרים או מגינים פוטנציאליים

כאן, אנו מציגים סוללת בדיקות התנהגותית מקיפה, כולל מיכל חדשני, Shoaling ומבחני העדפה חברתית, כדי לקבוע ביעילות את ההשפעות הנוירוטוקסיות האפשריות של כימיקלים (למשל, מתאמפטמין וגלייפוסט) על דגי זברה בוגרים באמצעות מכל יחיד. שיטה זו רלוונטית לנוירוטוקסיות ולמחקר סביבתי.

הערכת רעילות עצבית אצל מבוגרים Danio rerio באמצעות סוללה של מבחנים התנהגותיים במיכל יחיד

אנו מתארים את זרימת העבודה וניתוח הנתונים של מערכת סינון להערכת רעילות של תרכובות כימיות בהתבסס על תגובת הבהלה של רטט עובר דג הזברה. המערכת מתעדת את תנועותיהם של עוברי דגי זברה בחשיפה לגירוי רטט ומאפשרת הערכה משולבת של רעילות/קטלניות כללית ורעילות עצבית-שרירית.

הערכת רעילות של כימיקלים באמצעות מערכת סינון תגובת בהלה לרטט של דגי זברה

פרוטוקול זה מתאר הליך סינון תרופות בזחלי זברה 3-7 ימים לאחר ההפריה ואחריו הערכה מורפולוגית.

בדיקת מולקולות קטנות ובדיקת רעילות בזחלי דגי זברה בשלב מוקדם

למדו להעריך השפעות טרטוגניות של ניטריט על עוברי דג הזברה באמצעות חשיפה בזמנים וריכוזים שונים. שיטה זו מאפשרת לחקור פגמים התפתחותיים ולהבין את הסיכון הכימי לעוברים.

דג הזברה כמודל להעריך את הפוטנציאל טרטוגניות של ניטריט

גלה סרטונים נוספים