Name: עור 2D and 3D שיפור במבחנה מודלים שימוש להצטופפות מולקולארית (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-08-22T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 14 s
Description: למד שיפור מודלי עור דו-ממדיים ותלת-ממדיים באמצעות הצטופפות מולקולארית. שיטה זו מאיצה יצירת מטריצות תאיות ותרביות אורגנוטיפיות בשלות להנדסת רקמות וטיפולי פצעים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי מועצת המחקר הביו-רפואי, סינגפור באמצעות תמיכה מרכזית במכון לביולוגיה רפואית ומענק SPF2013/005. M.R. נתמך על ידי מענק ועדת המחקר של הפקולטה של NUS (הנדסה ברפואה) (M.R.) R-397-000-081-112, והתוכנית להנדסת רקמות של NUS (NUSTEP). המחברים רוצים להודות לפרופסור איירין לי על אספקת נוגדן הקולגן VII. עבודת מיקרוסקופ אלקטרונים בוצעה ביחידה למיקרוסקופיה אלקטרונית של האוניברסיטה הלאומית של סינגפור.

<ol><li>Breitkreutz, D., Mirancea, N., Nischt, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Basement+membranes+in+skin%3A+unique+structures+with+diverse+functions%5BTitle%5D)+AND+%22Histochem+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Basement membranes in skin: unique structures with diverse functions.</a> Histochem Cell Biol. 132 (1), 1-10 (2009).</li>
<li>Lane, E. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((mutation+in+the+conserved+helix+termination+peptide+of+keratin+5+in+hereditary+skin+blistering%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">mutation in the conserved helix termination peptide of keratin 5 in hereditary skin blistering.</a> Nature. 356 (6366), 244-246 (1992).</li>
<li>Fuchs, E., Raghavan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Getting+under+the+skin+of+epidermal+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Genet%22%5BJournal%5D)">Getting under the skin of epidermal morphogenesis.</a> Nat Rev Genet. 3 (3), 199-209 (2002).</li>
<li>Niessen, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tight+junctions%2Fadherens+junctions%3A+basic+structure+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22J+Invest+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Tight junctions/adherens junctions: basic structure and function.</a> J Invest Dermatol. 127 (11), 2525-2532 (2007).</li>
<li>Jarvelainen, H., Sainio, A., Koulu, M., Wight, T. N., Penttinen, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+matrix+molecules%3A+potential+targets+in+pharmacotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol+Rev%22%5BJournal%5D)">Extracellular matrix molecules: potential targets in pharmacotherapy.</a> Pharmacol Rev. 61 (2), 198-223 (2009).</li>
<li>Schaefer, L., Schaefer, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteoglycans%3A+from+structural+compounds+to+signaling+molecules%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tissue+Res%22%5BJournal%5D)">Proteoglycans: from structural compounds to signaling molecules.</a> Cell Tissue Res. 339 (1), 237-246 (2010).</li>
<li>Frantz, C., Stewart, K. M., Weaver, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+extracellular+matrix+at+a+glance%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">The extracellular matrix at a glance.</a> J Cell Sci. 123 (Pt 24), 4195-4200 (2010).</li>
<li>Ghalbzouri, A., Jonkman, M., Dijkman, R., Ponec, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Basement+membrane+reconstruction+in+human+skin+equivalents+is+regulated+by+fibroblasts+and%2For+exogenously+activated+keratinocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Invest+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Basement membrane reconstruction in human skin equivalents is regulated by fibroblasts and/or exogenously activated keratinocytes.</a> J Invest Dermatol. 124 (1), 79-86 (2005).</li>
<li>Lareu, R. R., Arsianti, I., Harve, K. S., Peng, Y. X., Raghunath, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+Vitro+Enhancement+of+Collagen+Matrix+Formation+and+Crosslinking+for+Applications+in+Tissue+Engineering--a+Preliminary+Study%5BTitle%5D)+AND+%22Tiss+Eng%22%5BJournal%5D)">In Vitro Enhancement of Collagen Matrix Formation and Crosslinking for Applications in Tissue Engineering--a Preliminary Study.</a> Tiss Eng. 13 (2), 385-391 (2007).</li>
<li>Lareu, R. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collagen+matrix+deposition+is+dramatically+enhanced+in+vitro+when+crowded+with+charged+macromolecules%3A+the+biological+relevance+of+the+excluded+volume+effect%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+Lett%22%5BJournal%5D)">Collagen matrix deposition is dramatically enhanced in vitro when crowded with charged macromolecules: the biological relevance of the excluded volume effect.</a> FEBS Lett. 581 (14), 2709-2714 (2007).</li>
<li>Lareu, R. R., Harve, K. S., Raghunath, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emulating+a+crowded+intracellular+environment+in+vitro.+dramatically+improves+RT-PCR+performance%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys+Biochem+Res+Comm%22%5BJournal%5D)">Emulating a crowded intracellular environment in vitro. dramatically improves RT-PCR performance.</a> Biophys Biochem Res Comm. 363 (1), 171-177 (2007).</li>
<li>Harve, K. S., Ramakrishnan, V., Rajagopalan, R., Raghunath, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macromolecular+crowding+in+vitro+as+means+of+emulating+cellular+interiors%3A+when+less+might+be+more%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+USA+Sci%22%5BJournal%5D)">Macromolecular crowding in vitro as means of emulating cellular interiors: when less might be more.</a> Proc Natl Acad USA Sci. 105 (51), E119(2008).</li>
<li>Chen, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Scar-in-a-Jar%3A+Studying+antifibrotic+lead+compounds+from+the+epigenetic+to+extracellular+level+in+a+single+well%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">The Scar-in-a-Jar: Studying antifibrotic lead compounds from the epigenetic to extracellular level in a single well.</a> Br J Pharmacol. 158 (5), 1196-1209 (2009).</li>
<li>Harve, K. S., Lareu, R., Rajagopalan, R., Raghunath, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+how+the+crowded+interior+of+cells+stabilizes+DNA%2FDNA+and+DNA%2FRNA+hybrids-in+silico+predictions+and+in+vitro+evidence%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">Understanding how the crowded interior of cells stabilizes DNA/DNA and DNA/RNA hybrids-in silico predictions and in vitro evidence.</a> Nucleic Acids Res. 38 (1), 172-181 (2009).</li>
<li>Satyam, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macromolecular+crowding+meets+tissue+engineering+by+self-assembly%3A+A+paradigm+shift+in+regenerative+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Mat%22%5BJournal%5D)">Macromolecular crowding meets tissue engineering by self-assembly: A paradigm shift in regenerative medicine.</a> Adv Mat. 26 (19), 3024-3034 (2014).</li>
<li>Chen, C. Z. C., Loe, F., Blocki, A., Peng, Y., Raghunath, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Applying+macromolecular+crowding+to+enhance+extracellular+matrix+deposition+and+its+remodeling+in+vitro+for+tissue+engineering+and+cell-based+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Drug+Deliv+Rev%22%5BJournal%5D)">Applying macromolecular crowding to enhance extracellular matrix deposition and its remodeling in vitro for tissue engineering and cell-based therapies.</a> Adv Drug Deliv Rev. 63 (4-5), 277-290 (2011).</li>
<li>Rashid, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+use+for+Polyvinylpyrrolidone+as+a+Macromolecular+Crowder+for+Enhanced+Extracellular+Matrix+Deposition+and+Cell+Proliferation%5BTitle%5D)+AND+%22Tiss+Eng+C%22%5BJournal%5D)">Novel use for Polyvinylpyrrolidone as a Macromolecular Crowder for Enhanced Extracellular Matrix Deposition and Cell Proliferation.</a> Tiss Eng C. , (2014).</li>
<li>Dewavrin, J. Y., Hamzavi, N., Shim, V. P. W., Raghunath, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tuning+the+Architecture+of+3D+Collagen+Hydrogels+by+Physiological+Macromolecular+Crowding%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomaterialia%22%5BJournal%5D)">Tuning the Architecture of 3D Collagen Hydrogels by Physiological Macromolecular Crowding.</a> Acta Biomaterialia. 10 (10), 4351-4359 (2014).</li>
<li>Dewavrin, J. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synergistic+Rate+Boosting+of+Collagen+Fibrillogenesis+in+Heterogeneous+Mixtures+of+Crowding+Agents%5BTitle%5D)+AND+%22J+Phys+Chem+B%22%5BJournal%5D)">Synergistic Rate Boosting of Collagen Fibrillogenesis in Heterogeneous Mixtures of Crowding Agents.</a> J Phys Chem B. 119 (12), 4350-4358 (2015).</li>
<li>Auger, F. A., Berthod, F., Moulin, V., Pouliot, R., Germain, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+engineered+skin+substitutes%3A+from+in+vitro+constructs+to+in+vivo+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol+Appl+Biochem%22%5BJournal%5D)">Tissue engineered skin substitutes: from in vitro constructs to in vivo applications.</a> Biotechnol Appl Biochem. 39, 263(2004).</li>
<li>Chen, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macromolecular+crowding+effect+on+cartilaginous+matrix+production%3A+a+comparison+of+two-dimensional+and+three-dimensional+models%5BTitle%5D)+AND+%22Tiss+Eng+Part+C+Methods%22%5BJournal%5D)">Macromolecular crowding effect on cartilaginous matrix production: a comparison of two-dimensional and three-dimensional models.</a> Tiss Eng Part C Methods. 19 (8), 586-595 (2013).</li>
<li>Zeiger, A. S., Loe, F. C., Li, R., Raghunath, M., van Vliet, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macromolecular+crowding+directs+extracellular+matrix+organization+and+mesenchymal+stem+cell+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+One%22%5BJournal%5D)">Macromolecular crowding directs extracellular matrix organization and mesenchymal stem cell behavior.</a> PLOS One. 7 (5), e37904(2012).</li>
<li>Kumar, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macromolecularly+crowded+in+vitro+microenvironments+accelerate+the+production+of+extracellular+matrix-rich+supramolecular+assemblies%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Macromolecularly crowded in vitro microenvironments accelerate the production of extracellular matrix-rich supramolecular assemblies.</a> Scientific Reports. 5, 8729(2015).</li>
<li>Ang, X. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macromolecular+crowding+amplifies+adipogenesis+of+human+bone+marrow-derived+MSCs+by+enhancing+the+pro-adipogenic+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Tiss+Eng+Part+A%22%5BJournal%5D)">Macromolecular crowding amplifies adipogenesis of human bone marrow-derived MSCs by enhancing the pro-adipogenic microenvironment.</a> Tiss Eng Part A. 20 (5-6), 966-981 (2014).</li>
<li>Peng, Y. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+Fibroblast+Matrices+Bioassembled+Under+Macromolecular+Crowding+Support+Stable+Propagation+Of+Human+Embryonic+Stem+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Tiss+Eng+Regen+Med%22%5BJournal%5D)">Human Fibroblast Matrices Bioassembled Under Macromolecular Crowding Support Stable Propagation Of Human Embryonic Stem Cells.</a> J Tiss Eng Regen Med. 6 (10), e74-e84 (2012).</li>
<li>Benny, P., Badowski, C., Lane, E. B., Raghunath, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Making+More+Matrix%3A+Enhancing+the+deposition+of+dermal-epidermal+junction+components+in+vitro+and+accelerating+organotypic+skin+culture+development%2C+using+macromolecular+crowding%5BTitle%5D)+AND+%22Tiss+Eng+A%22%5BJournal%5D)">Making More Matrix: Enhancing the deposition of dermal-epidermal junction components in vitro and accelerating organotypic skin culture development, using macromolecular crowding.</a> Tiss Eng A. 21 (1-2), 182-192 (2015).</li>
</ol>

למחברים אין אינטרסים סותרים לחשוף.

מטריצה חוץ-תאית משופרת מתקבלת עם הכנסת צפיפות מקרומולקולרית לתרבית תאים, בשל אפקט הנפח הנכלל המגביר את מחשוף הפרופפטיד על ידי פרוטאינאזות. התוצאה היא מטריצה חוץ-תאית, במיוחד קולגן, לעיבוד מהיר יותר והפקדה על פני התרבית. בעוד שקבוצות אחרות השיגו שכבות תאי פיברובלסטים עבות, זה היה כרוך בזמן תרבית של מספר שבועות20. לעומת זאת, MMC המתואר בפרוטוקול זה, מקצר באופן דרמטי את זמן התרבית תוך הגדלת כמות ה-ECM. העלייה בשיעורי התגובה בתרביות תאים צפופות דווחה גם בתצהיר מטריצת כונדרוציטים21, ארגון מטריצה חוץ-תאית...

העור מהווה מחסום הגנה באמצעות מניעת אובדן מים וכניסה הפתוגן. הוא מורכב משלושה חלקים עיקריים; הדרמיס העשיר סטרומה 1, האפידרמיס מרובדת 2,3,4 על גבי זה, לבין צומת דרמו-אפידרמיס בין 5,6. הדרמיס מורכב ברובו קולגן וסיבים אלסטיים מאוכלס בדלילות עם 7 פיברובלסטים. לעומת זאת, האפידרמיס עשיר התא מורכב משכבות מרובות של קרטינוציטים. קרטינוציטים של השכבה הפנימית-ביותר הם שגשוג ולספק תאי הבזליים חדשים אשר לחדש ולהחליף סופני הבחנה קרטינוציטים כי כל זמן לנוע על השכבה הכי החיצונית של העור ואבדו הגרעינים שלהם וחומר cytoplasmic, וכתוצאה מכך שכבת cornified אשר עוברת קלוף. צומת עורי-אפידרמיס, סוג מסוים של קרום במרתף, הוא מבנה מורכב מורכב ממולקולות מטריקס מקשרות, אשר tetheRS האפידרמיס אל הדרמיס. סיבי קולגן I של הדרמיס לשזור עם VII קולגן עיגון סיבים מעוגנים אל Densa lamina העשיר קולגן IV. חוטים עיגון (laminin 5, י&quot;ז קולגן integrins) בתורו לחבר את Densa lamina עם hemidesmosomes של קרטינוציטים הבזליים. קרטינוציטים בסל (basale שכבה) יש את היכולת להתרבות ולחדש, כמו גם להבדיל לרבד כדי ליצור את שכבות suprabasal; השכבה spinosum, שכבת granulosum, ולבסוף השכבה קרנית, אשר מייצג את שטח המגע של העור עם הסביבה. מסלול צמוד משכבת ​​הבסיס לשכבת cornified, קרטינוציטים לעבור דפוסי ביטוי של cytokeratins ולבסוף עוברים אפופטוזיס ו לשים בארגז עצמם cornified מעטפות, קליפות של חלבונים ספציפיים crosslinked קוולנטית ידי פעילות transglutaminase. יצירה מחדש עור שכבותיו במבחנה, לרבות המבנים המורכבים של<html> עורי-אפידרמיס צומת מטריקס עורי, וכדי לחקות את תהליך cornification, יש ארוך מסוקרן מדענים ביו-מהנדסים כמו משימה מאתגרת. הייתה התקדמות משמעותית הנדסת רקמות עור, למשל, החילוץ המוצלח של תאי עור מפני ביופסיות חולות לבין הדור של תרבויות העור organotypic באמצעות תאי עור נגזרות חולים 8. עם זאת, בעיות לא פתורות להישאר הנוגעים הפרשת העניים של חלבונים תאי מטריקס ידי תאי העור עצמם וכתוצאה מכך מודלים העור תת אופטימלית. יתר על כן, את הזמן דרוש כדי ליצור עור 3D organotypic שיתוף תרבות תוך שימוש בפרוטוקולים נוכחיים נע בין ארבעה עד שמונה שבועות, פרק זמן אשר עלול להתקצר עם השילוב של crowders macromolecular. הפחתת זמן תרבות חוסך עלויות מגיב, מפחית את שכיחות הזדקנות התא ומפחית את זמן ההמתנה של החולה צריך המוצר לשמש במרפאה. t &quot;&gt; Macromolecular מצטופפים (MMC) כרוך החדרת מקרומולקולות ספציפי עד בינוני התרבות כדי ליצור אפקטים נפח נשלל. אלה להשפיע על שיעורי התגובה האנזימטית כולל מחשוף פרוטאוליטים של procollagen שהוא מפגר בתנאים תרבות מימית תקן 9-13. תחת MMC, תגובות אנזימטיות הם מהרו מבלי להגדיל את כמות ריאגנטים 14,15 וכתוצאה מכך, במקרה של מחשוף procollagen, בסכום של קולגן גדל לי מולקולות בתרבויות צפופות בהשוואה לקבוצת ביקורת צפופה 10. כפי ההמרה של procollagen לקולגן מאפשר ההיווצרות של קולגן מכלולים, פיברובלסטים תרבותיים עם MMC במשך 48 שעות ניב משמעותי יותר קולגן אני לעומת תרבויות פיברובלסטים צפופות במעקב במשך עד ארבעה שבועות 11,16,17. מלבד השפעות על פעילות אנזימטית המשפיעה על ההיווצרות, ייצוב ועיצוב מחדש של ECM, MMC גם הוכח כדי לשפר ולווסת ישירות קולגןהיווצרות סיבים 18,19. אנו מציגים כאן שיטה כדי לשפר את תאי מטריקס (ECM) הייצור על ידי תאי העור, בפרט, פיברובלסטים עורי קרטינוציטים אפידרמיס. בנוסף, אנו מראים כי ECM מועשר מיוצר תחת MMC בתרבויות בשכבה ניתן decellularized ושימש מטריקס תאים שמקורם טהור (CDM). אנו משתמשים בגישה בלתי קונבנציונלית כדי לחזות להעריך במלואה את ECM שהופקד על ידי תאי עור תרבותיים עם MMC. השתקפות מיקרוסקופיה הפרעות בדרך כלל משמשת ללימוד אינטראקציות מטריקס תא או תא אל זכוכית נקודות מגע. טכניקה זו נוצלה במערכת שלנו כדי להציג את הסכום הכולל של מטריקס שהופקד על משטח הזכוכית. השתקפות מיקרוסקופיה הפרעות לוותה immunostaining ניאון כדי להשיג תוצאות מקסימאליות כמות המידע מבחינת הרכב תאי מטריקס דפוס, בנוכחות והיעדר MMC. Organotypiג העור שיתוף תרבויות היא שיטה קלאסית מודל העור במבחנה בהקשר תלת ממדי. בעוד דו ממדי שיתוף תרבויות עשויות לספק מידע משמעותי, היא מוגבלת כאשר תרגום הנתונים הללו וליישם אותו בחזרה לסביבה in vivo, שמטבעו אינו מבנה תלת-ממדי. קרטינוציטים עור, בפרט, הם מקוטבים ומכילים קטעי apical ואת הבסיס שחיוניים הומאוסטזיס ודבקות תא. בנוסף, ביטוי של חלבונים suprabasal טיפוסי קרטינוציטים מעל שכבת הבסיס, כגון קרטין 1, קרטין 10 ו filaggrin קיים רק במהלך ריבוד והבחנה הטרמינל של קרטינוציטים. כמו בידול הטרמינל כמעט בהווה בתרבויות בשכבה טיפוסית, ביטוי חלבון suprabasal הוא בדרך כלל לא מושג במערכת התרבות הזאת. לכן, תרבויות organotypic מתחילות שקועות בינוני תרבות, אבל אז הם הרימו על ידי יצירת ממשק אוויר נוזלי לנהוג keratinocytבידול דואר. התוצאה היא ביטוי של סמנים ריבוד, אפילו cornification ו השתקפות בדרך כלל גבוהה יותר של הפיזיולוגיה אפידרמיס. בעוד קבוצות אחרות בעבר יצרו שיתוף תרבויות עור organotypic בהצלחה, הקמת אזור צומת דרמו-אפידרמיס תפקודית כבר בעיה. כאן, אנו מציגים שיטה חדשה culturing עור organotypic שיתוף תרבויות עם קרום במרתף משופר, בתוך מסגרת זמן מרוכזת ללא התפשרות על הבגרות בין שני המושגים הללו. זה יספק mimetics העור עבור מודלים במבחנה, בחקר הביולוגיה העור וכן מבחר של מבחני המיון.

<table><tbody><tr><td>חומצה אסקורבית</td><td>Wako</td><td>013-12061</td><td>תוסף מדיה לתרבית תאים</td></tr><tr><td>מוסיף תרבית תאים&nbsp; (פורמט 6 בארות)</td><td>Greiner Bio-One</td><td>657610</td><td>תרביות אורגנוטיפיות</td></tr><tr><td>תמיסת ציטראט</td><td>Dako</td><td>S2369</td><td>DakoCytomation תמיסת אחזור יעד ציטראט, pH 6 (x10)</td></tr> <tr><td>קולגן (זנב עכברוש)</td> <td>קורנינג</td><td>354236</td><td>תרביות אורגנוטיפיות</td></tr><tr><td>CnT-57</td><td>CELLnTEC</td><td>CnT-57</td><td>מדיה לתרבית תאים</td></tr><tr><td>DAB מצע + ערכת כרומוג'ן</td><td>Dako</td><td>K3468</td><td>היסטולוגיה</td></tr><tr><td>צלחת באר עמוקה (פורמט 6 בארות)</td><td>קורנינג</td><td>355467</td><td>תרביות אורגנוטיפיות מגיב</td></tr><tr><td>זיהוי ECL</td><td>GE Healthcare Life Sciences</td><td>RPN2106</td><td>Amersham ECL Western Blotting Detection Reagent</td></tr><tr><td>מיקרוסקופ אלקטרונים (TEM)</td><td>&nbsp; ג'אול&nbsp;</td><td>&nbsp; JEM-1010 (100kV)</td> <td>מיקרוסקופ אלקטרונים שידור</td></tr><tr><td>מדיה פיברובלסטים (FM)</td><td></td><td></td> <td>גלוקוז-DMEM גבוה + 10% סרום בקר עוברי + 1% פניצילין סטרפטומיצין</td></tr><tr><td>Ficoll PM70</td><td>GE Healthcare מדעי החיים</td><td>17-0310-05</td><td>Macromolecular Crowder</td></tr><tr><td>Ficoll PM400</td><td>GE Healthcare מדעי החיים</td><td>17-0300-05</td><td>Macromolecular Crowder</td></tr><tr><td>Keratinocyte serum מדיה נטולת סרום (KSFM)</td><td>Life Technologies</td><td>17005-042</td><td>מדיה לתרבית תאים</td></tr><tr><td>מאגר ליזה</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>89900</td><td>מאגר ליזה למיצוי חלבון. מעכב פרוטאז (Roche, #11836170001) נוסף למאגר הליזיס הזה.&nbsp;</td></tr><tr><td>מיקרוסקופ</td><td>Zeiss</td><td>LSM510</td><td>ערוצים אדומים, ירוקים וכחולים להמחשת צביעות חיסוניות פלואורסצנטיות AF594, AF488 ו-DAPI (40X mag).</td></tr><tr><td>אמצעי הרכבה (Hydromount)</td><td>National Diagnostics</td><td>HS-106</td><td>מכתים פלואורסצנטיים</td></tr><tr><td>אמצעי הרכבה (Cytoseal)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>8310-16</td><td>היסטולוגיה (HRP)</td></tr><tr><td>תרכובת OCT (Tissue Tek)</td><td>Sakura</td><td>4583</td><td>הטמעה לקריותומיה</td></tr><tr><td>אנטיביוטיקה פניצילין-סטרפטומיצין</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A5955</td><td>תוסף מדיה לתרבית תאים</td></tr><tr><td colspan="4"><נוגדנים חזקים>ראשוניים</נוגדן חזק></td></tr><tr><td>אנטי-קולגן I</td><td>Abcam</td><td>#ab6308</td><td></td></tr><tr><td>אנטי-קולגן מסוג IV</td><td>Novocastra</td><td>#NCL-COLL-IV</td><td></td></tr><tr><td>אנטי-קולגן VII</td><td></td><td></td><td>LH7.2 (בבית)&nbsp;</td></tr><tr><td>נוגדן נגד פיברונקטין</td><td>Abcam</td><td>#ab2413</td><td></td></tr><tr><td>חומר מפחית&nbsp;</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>NP0009</td> מאגר דגימה <td>של כתם מערבי</td></tr><tr><td></td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>NP0008</td><td>Western blot</td></tr><tr><td colspan="4"><חזק>נוגדנים משניים (צביעה חיסונית)</חזק></td></tr><tr><td>4&prime;,6-דיאמידינו-2-פנילינדול דיהידרוכלוריד (DAPI)</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>#D9542</td><td></td></tr><tr><td>AlexaFluor 594 עז-אנטי-ארנב</td><td>ThermoFisher מדעי</td><td>#A-11037&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>AlexaFluor 594 עז-אנטי-עכבר</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>&nbsp;#A-11005</td><td></td></tr><tr><td>AlexaFluor 488 עוף-אנטי-ארנב</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>#A-21441</td><td></td></tr><tr><td>AlexaFluor 488 עז-אנטי-עכבר</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>#A-11001</td><td></td></tr><tr><td>נוגדנים משניים (HRP)</td><td>Dako</td><td>Envision + System - HRP תווית פולימר אנטי-ארנב ואנטי-עכבר</td> נתרן <td>דאוקסיכולאט לא מדולל</td></tr><tr><td></td><td>Prodotti Chimicie Alimentari</td><td></td><td>Decellularization</td></tr><tr><td colspan="4"><חזק>מדיית ריבוד </חזק</td></tr><tr><td>>מדיום הנשר השונה של Dulbecco&nbsp;</td><td></td><td></td><td>משמש במהלך ממשק אוויר-נוזל של תרביות אורגנוטיפיות. מדיה זו מתווספת לחלק החיצוני של תוספת תרבית התא.</td></tr><tr><td>בשר חזיר s F12&nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td></td><td></td><td>משמש במהלך ממשק אוויר-נוזל של תרביות אורגנוטיפיות. מדיה זו מתווספת לחלק החיצוני של תוספת תרבית התא.</td></tr><tr><td>10% סרום בקר עוברי&nbsp;</td><td></td><td></td><td>משמש במהלך ממשק אוויר-נוזל של תרביות אורגנוטיפיות. מדיה זו מתווספת לחלק החיצוני של תוספת תרבית התא.</td></tr><tr><td>100 U/ml פניצילין ו-100 U/ml סטרפטומיצין</td><td></td><td></td><td>בשימוש במהלך ממשק האוויר-נוזל של תרביות אורגנוטיפיות. מדיה זו מתווספת לחלק החיצוני של תוספת תרבית התא.</td></tr><tr><td>0.4 מ"ג/מ"ל הידרוקורטיזון</td><td></td><td></td><td>משמש במהלך ממשק אוויר-נוזל של תרביות אורגנוטיפיות. מדיה זו מתווספת לחלק החיצוני של תוספת תרבית התא.</td></tr><tr>אינסולין <td></td><td></td><td>5 מ"ג/מ"ל</td><td>משמש במהלך ממשק אוויר-נוזל של תרביות אורגנוטיפיות. מדיה זו מתווספת לחלק החיצוני של תוספת תרבית התא.</td></tr><tr><td>1.8&middot; 10-4 מ 'אדנין&nbsp; &nbsp;</td><td></td><td></td><td>משמש במהלך ממשק אוויר-נוזל של תרביות אורגנוטיפיות. מדיה זו מתווספת לחלק החיצוני של תוספת תרבית התא.</td></tr><tr>טרנספרין <td></td><td></td><td>5 מ"ג/מ"ל</td><td>משמש במהלך ממשק אוויר-נוזל של תרביות אורגנוטיפיות. מדיה זו מתווספת לחלק החיצוני של תוספת תרבית התא.</td></tr><tr><td>2&middot; 10- 11 מ 'טריודוטירונין&nbsp;</td><td></td><td></td><td>משמש במהלך ממשק אוויר-נוזל של תרביות אורגנוטיפיות. מדיה זו מתווספת לחלק החיצוני של תוספת תרבית התא.</td></tr><tr><td>Trypsin</td><td>Biopolis מתקנים משותפים</td><td>0.125% טריפסין/וורסן&nbsp; &nbsp; pH 7.0 + 0.3&nbsp;</td><td>משמש לטריפסיניזציה של תאים</td></tr></tbody></table>

עור 2d and 3d שיפור<em&gt; במבחנה</em&gt; מודלים שימוש להצטופפות מולקולארית

Improving 2D and 3D Skin In Vitro Models Using Macromolecular Crowding

משפחת גליקופרוטאין של collagens מייצג את חלבונים מבניים העיקרי בגוף האדם, והם מרכיבים מרכזיים של חומרים ביולוגיים בשימוש בהנדסת רקמות המודרנית. צוואר בקבוק טכני הוא בתצהיר של קולגן במבחנה, כפי שהוא איטי לשמצה, וכתוצאה מכך ההיווצרות תת אופטימלי של רקמות חיבור ולכידות רקמות שלאחר מכן, במיוחד במודלי עור. כאן, אנו מתארים שיטה אשר תהיה כרוכה בתוספת-פולימרים שיתוף סוכרוז דיפרנציאלי בגודל לתרבויות העור לייצר macromolecular מצטופפים (MMC), שתוצאתה לשדרוג דרמטי של בתצהיר קולגן. במיוחד, פיברובלסטים העור שהופקדו כמות משמעותית של קולגן I / IV / VII ו- פיברונקטין תחת MMC בהשוואה לקבוצת ביקורת. הפרוטוקול גם מתואר שיטה decellularize שכבות תאים צפופות, חשיפת כמויות משמעותיות של תאי מטריקס (ECM) אשר נשמרו על פני שטח התרבות כפי שמעיד immunocytochemistry. דפוס המוני והפצת מטריקס סה&quot;כ נחקר באמצעות מיקרוסקופ הפרעת השתקפות. מעניין, פיברובלסטים, קרטינוציטים ושיתוף תרבויות המיוצר מטריצות תאים שמקורם (CDM) של משתנים הרכב ומורפולוגיה. CDM יכול לשמש &quot;ביו-פיגומים&quot; עבור זריעת תאים משנית, שבהם השימוש הנוכחי של ציפוי או פיגומים, בדרך כלל מן חי xenogenic, ניתן להימנע, ובכך לנוע לעבר יישומים קליניים רלוונטי יותר. בנוסף, פרוטוקול זה מתאר את היישום של MMC בשלב השקוע של מודל התרבות שיתוף עור 3D-organotypic שהיה מספיק כדי לשפר בתצהיר ECM בצומת דרמו-אפידרמיס (DEJ), בפרט, קולגן VII, המרכיב העיקרי עיגון סיבים. במיקרוסקופ אלקטרונים אישר את נוכחותו של עיגון הסיבים בתרבויות פותח עם MMC, בהשוואה לקבוצת הביקורת. זה משמעותי כמו סיבי עיגון לקשור הדרמיס לאפידרמיס, ומכאן,בעל DEJ הבוגר מראש יצר עשויה להועיל מקבלי שתל עור מבחינת יציבות שתל וריפוי פצע כולל. יתר על כן, זמן התרבות היה מרוכז מ -5 שבועות עד 3 שבועות כדי לקבל מבנה בוגר, בעת שימוש MMC, הפחתת עלויות.

הצפיפות Macromolecular הצליח לשפר בתצהיר ECM, בפרט, פיברובלסטים שהופקדו ככל שאני קולגן, IV ו- פיברונקטין לעומת לשלוט תרבויות (איור 1, שכבת התאים; 1A, קולגן אני; 1B, קולגן IV; 1C, פיברונקטין). עם decellularization, היה ברור כי פיברובלסטים היו המפקידים העיקריים של לי קולגן, IV ו- פיברונקטין לעומת קרטינוציטים (איור 1, מטריקס). <p class="jove_content" fo:keep-toget...

אנו מציגים פרוטוקול להשיג מטריצות תאים שמקורם עשירות בחלבונים תאים מטריקס, באמצעות crowders macromolecular (MMC). בנוסף, אנו מציגים פרוטוקול אשר משלב MMC בדור העור 3D organotypic שיתוף התרבות, אשר מקטין את זמן תרבות תוך שמירה לפדיון של מבנה.

עור 2D and 3D שיפור<em&gt; במבחנה</em&gt; מודלים שימוש להצטופפות מולקולארית

The glycoprotein family of collagens represents the main structural proteins in the human body, and are key components of biomaterials used in modern ...

המטרה הכללית של פרוצדורה זו היא להגביר את השקיעה של המטריקס החוץ-תאי ולשפר את מודלי העור הדו-ממדיים (2D) והתלת-ממדיים (3D) הנוכחיים באמצעות צפיפות מקרו-מולקולרית (macromolecular crowding). צפיפות זו משפרת את יצירת מטריצות ממקור תאי, וכן תרביות אורגנוטיפיות בשלבי בשילה בפרק זמן מקוצר. שיטה זו יכולה לספק תשובות לשאלות מפתח בתחום הנדסת הרקמות, כיוון שהיא מציעה דרכים משופרות ליצירת מטריצות חוץ-תאיות ממקור תאי עבור הנדסה ביו-טכנולוגית של העור ורקמות אחרות.היתרון המרכזי של טכניקה זו הוא שניתן להפיק מטריצות ממקור תאי ומבני עור אורגנוטיפיים בלוח זמנים מקוצר משמעותית כאשר מיישמים דחיקה מקרו-מולקולרית (macromolecular crowding) על תרביות אלה. טכניקה של מיקרוסקופיית השתקפות הפרעה (interference reflection microscopy) מאפשרת להדמיות ויזואליות של סך שיקע המטריצה החוץ-תאית ללא צורך בצביעה בנוגדנים. יישומים של טכניקות אלו יתרחבו ממחקרי שיקע של המטריצה החוץ-תאית על ידי תאי עור ועד לטיפולים משופרים בפצעים, במיוחד באמצעות יצירה של תחליפי עור טובים יותר ותרביות רקמה להשתלה.כדי להתחיל, זרעו 50,000 פיברובלסטים ראשוניים, קרטינוציטים ראשוניים, או תרבית משותפת של שניהם, במיליליטר אחד של מצע לכל באר, אל תוך בארות של פלטה בעלת 24 בארות. אפשרו לתאים להיצמד באינקובטור בטמפרטורה של 37 °C ו-5% carbon dioxide למשך הלילה. לאחר מכן, השליכו את המצע הישן והחליפו אותו במיליליטר אחד של מצע טרי המכיל macromolecular crowders ו-100-micromolar ascorbic acid.דגרו את התרביות למשך שישה ימים, והחליפו את המצע בכל יומיים. בצעו אימונופלואורסצנציה ו-Western blotting בהתאם לפרוטוקול הכתוב. כדי להכין ולהשתמש במטריצה נגזרת תאים, לאחר גידול התאים למשך שישה ימים עם molecular crowders וחומצה אסקורבית כפי שהודגם כעת, בצעו דה-צלולריזציה (decellularize) לשכבות התאים כדי לקבל מטריצה נגזרת תאים, על ידי שטיפת שכבות התאים פעמיים באמצעות 1X PBS.שאבו את ה-PBS, ולאחר מכן הוסיפו 250 microliter של 0.5%sodium deoxycholate והדגירו על קרח למשך 10 דקות. שאבו את הליזט התאי, הוסיפו 250 microliter נוספים של 0.5%sodium deoxycholate וחזרו על הדגירה למשך 10 דקות ועל השאיבה פעמיים נוספות. השתמשו במים מזוקקים כדי לשטוף את המטריצה הנגזרת מהתאים פעמיים.שאבו את המים, ולאחר מכן הוסיפו 1X PBS. שמרו את המטריקס בטמפרטורה של ארבע מעלות צלסיוס למשך עד שבוע. כדי להכין תרחיף תאים משני, שאבו את ה-PBS מהמטריקס, וזריעו למשל 50,000 קרטינוציטים על גבי ה-F mat.אפשרו לתאים להיקשר למשך הלילה. כדי לבצע מיקרוסקופיית השתקפות התאבכות, או RIM, על מטריצה מוצאת-תאים, בצעו רכישת תמונות באמצעות מיקרוסקופ קונפוקאלי בהתאם לפרוטוקול הכתוב. כדי להכין ג'ל קולגן עם פיברובלסטים encapsulated בתוך תבנית תרבית תאים, העבירו מנה של 10 milliliters של קולגן מסוג 1 מזנב חולדה לכלי ביקר קר.הוסף 1 ml של DMEM קר ו-0.5 ml של נתרן הידרוקסיד בריכוז 1 M כדי לנטרל את הקולגן החומצי. לאחר מכן, הוסף 0.5 ml של תרחיף פיברובלסטים. בעזרת פיפטה קרה, חלק באופן שווה את 12 ml של התמיסה לתוך תבתי תרבית תאים (inserts) בצלחת תרבית בעלת שישה בארות.דגרו את הג'ל בטמפרטורה של 37 °C וב-5% carbon dioxide למשך שעה אחת. לאחר שהג'ל התגבש, טבלו אותו במצע פיברובלסטים (fibroblast medium או FM). לאחר דגירה של 24 שעות, שאבו את ה-FM. השתמשו בארבעה מיליליטרים של מצע טרי המכיל macromolecular crowders כדי להחליף את ה-FM הישן, על ידי הוספה של שני מיליליטרים לחלק הפנימי של תא הכשרת התרבית (cell culture insert) ושני מיליליטרים לחלק החיצוני של תא הכשרת התרבית. לאחר דגירה של 24 שעות, השתמשו בסוכן trypsin 0.125% כדי לבצע trypsinization לתאי הקרטינוציטים.הקישו בעדינות על דפנות הבקבוק כדי לשחרר את התאים והוסיפו מצע המכיל סרום כדי לנטרל את הטריפסין. לאחר ספירת התאים, הכינו תרחיף קרטינוציטים. לאחר מכן, שאבו את המצע מההכנסות (inserts) של תרבית התאים, והוסיפו את הקרטינוציטים לחלק העליון של הג'ל.דגרו את הג'ל למשך שעה אחת. לאחר שהקרטינוציטים נצמדו לפני השטח של הג'ל, השתמשו בשני מיליליטר של KSFM, או מצע ללא סרום CTN-57, כדי להטביע את התאים בתוך התאב המיועד לתרבית תאים בג'ל, והוסיפו שני מיליליטר של FM לצד החיצוני של התאב. לאחר דגירה של 24 שעות, השליכו את המצע הישן והחליפו אותו במצע טרי המכיל Macromolecular crowders.לאחר שבעה ימים בתרבית טבולה, כדי להעביר את התרבית לממשק אוויר-נוזל, העבירו את התא המכיל את התרבית (culture insert) ללוחית בארי בארי (deep-well plate). הוסיפו 10 milliliters של מצע השכבה (stratification medium) לחלק החיצוני של התא, תוך שמירה על החלק הפנימי של התא יבש. לבסוף, דגרו את התרביות והחליפו את המצע מדי שלושה ימים למשך 14 ימים.קצרו ועבדו אותם בהתאם לפרוטוקול הכתוב. כפי שמוצג כאן, דחיסות מקרו-מולקולרית (macromolecular crowding) אפשרה לפיברובלסטים להפריש יותר מטריצה חוץ-תאית או ECM בהשוואה לתרביות ביקורת. לאחר ביצוע צביעה, עלה כי הפיברובלסטים היו המפרישים העיקריים של collagen one, collagen four ו-fibronectin.איור זה מדגים כי פיברובלסטים, ולא קרטינוציטים, היו המפקידים העיקריים של קולגן שבעה, וזהו הדיווח הראשון על הפקדה מוצלחת של קולגן שבעה in vitro. באמצעות RIM, נלכדה התפשטותה המלאה של המטריקס שמקורה בתאים. חפיפה של תמונת ה-RIM עם צביעה בנוגדנים מראה את הכמות היחסית של רכיב ה-ECM הזה ביחס לכמות הכוללת של ה-ECM.במודל עור תלת-ממדי (3D) in vitro, צפיפות מקרו-מולקולרית (macromolecular crowding או MMC) קיצרה את זמן התרבית מחמישה שבועות לשלושה, כדי להשיג תרבית מקבילה (co-culture) של עור אורגנוטיפית בשלה. כפי שניתן לראות כאן, בצביעת H and E, לאחר שלושה שבועות, התרבית עם MMC כללה אפידרמיס רב-שכבתי ודרמיס עם רכסי סטורמה (stromol ridge). בנוסף, נצפתה צביעה אימונוהיסטוכימית אינטנסיבית ורציפה של collagen seven בצומת הדרמיס-אפידרמיס בתרביות תאים דחוסות, בהשוואה לצביעה אימונוהיסטוכימית חלשה ומנוקדת של collagen seven בתרביות ביקורת.מיקרוסקופיה אלקטרונית חודרת (Transmission electron microscopy) מראה גם נוכחות של סיבי עיגון בתרביות אורגנוטיפיות שנוצרו באמצעות MMC, מה שמעיד על קולגן שבעה תפקודי. מטריצות שמקורן בתאים עשויות לשמש למטרות זריעה משנית של תאים כפיגום חלופי, מכיוון שהמורכבות של המטריצה החוץ-תאית נשמרת והיא מיוצרת על ידי התאים עצמם. תרבויות עור אורגנוטיפיות, המיוצרות תחת דחיסות מקרו-מולקולרית (macromolecular crowding), עשויות לשמש כמודל עור תלת-ממדי משופר, שכן הן מכילות דרמיס בעל רכסי סטורמה, צומת דרמיס-אפידרמיס משמעותי ואפידרמיס רב-שכבתי.תרביות אורגנוטיפיות, או תרביות מקבילות לעור שנוצרו עם חומרי דחיסה מקרו-מולקולריים (macromolecular crowders), יכולות לשמש גם להשתלת עור מכיוון שיש להן צומת דרמאל-אפידרמלי מפותח יותר, דבר שצפוי לשפר את הצלחת ההשתלה. בנוסף להגברת השקעת המטריצה החוץ-תאית, ניתן להחיל דחיסה מקרו-מולקולרית על מערכות in vitro אחרות כדי להגביר תגובות המוגבלות בקצב התגובה, מבלי להגדיל את כמות الريאגנטים. לדוגמה, תגובות שרשרת פולימראז (PCR).

improving-2d-and-3d-skin-in-vitro-models-using-macromolecular-crowding

Research

JoVE Journal

Bioengineering

הנדסה ביולוגית

פרוטוקול זה מתאר את השימוש בmacromolecular הצפיפות כדי ליצור מודל מחוץ לגוף האדם יפרטרופית רקמת צלקת הדומה בתנאים vivo. כאשר מעובדים בסביבה macromolecular צפופה, העור האנושי לגידולים התערוכה פנוטיפים, ביוכימיה, פיזיולוגיה, ופונקציונלי מאפיינים דומים רקמת צלקת.

במודל חוץ גופית של עורית האדם יפרטרופית צלקות באמצעות הצפיפות Macromolecular

פרוטוקול זה מתאר שיטה פשוטה לטיפוח אפידרמיס אנושי תלת מימדי מחדש באופן ניתן לשחזור וחזק. בנוסף, הוא מאפיין את הקשר המבני-פונקציה של מודל מחסום האפידרמיס. התגובות הביולוגיות של האפידרמיס האנושי המחודש על גירויים proinflammatory מוצגים גם.

טיפוח אפידרמיס אנושי תלת מימדי משוחזר בקנה מידה גדול

מטרת פרוטוקול זה היא לתאר את הדור ואת הניתוח הנפחי של שווה ערך לעור אנושי וסקולרי באמצעות טכניקות נגישות ופשוטות לתרבות ארוכת טווח. ככל האפשר, הרציונל לצעדים מתואר כדי לאפשר לחוקרים את היכולת להתאים אישית בהתבסס על צרכי המחקר שלהם.

דור של שווה ערך לעור אנושי בהרכבה עצמית

כאן, אנו מציגים פרוטוקול ליצירת מודל עור תלת מימדי פשוט ובלתי מופרע באמצעות פלטפורמה מיקרופלואידית מיקרו-מכונות. גישת זרימה מקבילה מאפשרת תצהיר במקום של תא עורי לזרוע של תאי אפיתל על גבי, כל נשלט על ידי משאבות מזרק.

יצירת דגם תלת מימדי תלת מימדי של עור על שבב בפלטפורמה מיקרופלואידית מיקרו-מכונות

כאן, אנו מציגים הליכים זולים ופשוטים להצגת מודלים שונים של עור תלת ממדי למחקר שגרתי במעבדה לתרביות תאים. חוקרים יכולים ליצור מודלים המותאמים לצרכיהם מבלי להסתמך על מודלים זמינים מסחרית.

בניית מודלים לעור עבור יישומים רבים - החל ממונוקולטורה דו-ממדית (2D) ועד רב-תרבותיות תלת-ממדית (3D)

דגימות חלבון חזותי על ידי מיקרוסקופית אלקטרונים שלילי כתם (EM) הפך פופולרי שיטת ניתוח מבניות. זה שימושי עבור ניתוח מבניות כמותיים, כגון חישוב שחזור 3D של מולקולות הנלמד, וגם לבחינה איכותית של איכות ההכנות חלבון. במאמר זה אנו מציגים פרוטוקולים מפורטים להכנת רשתות EM, מכתים את המדגם באופן חזותי את המדגם אלקטרון במיקרוסקופ. משתמשי המחשב השני יכול לעקוב אחר הפרוטוקולים הללו בקלות לנצל שלילי כתם EM כמו assay שגרתי, בנוסף מבחני ביוכימיים אחרים, להערכת דגימות חלבון שלהם.

לדמיין חלבונים מכלולים Macromolecular על ידי א.מ. כתמים שליליות: החל הכנה רשת הרכישה תמונה

פרוטוקול זה מדגים שיטות להקים סביבות 2 ד ו 3D ב אישית מעוצבת חדרי electrotactic, אשר יכולים לעקוב אחר...

שדה חשמלי מבוקר בימוי הגירה של ובתאים עצביות בסביבות 2 ד ו 3D

מערכות מימיות שני שלבים שמשו בו זמנית לאוכלוסיות רבות הדפוס של תאים. השיטה מהירה וקלה זה עבור דפוסי תא מנצלת את הפרדת פאזות של תמיסות מימיות של גליקול dextran ופוליאתילן ומתח interfacial שקיים בין שני פתרוני הפולימרים.

דפוסי שיתוף תרבות נייד באמצעות מערכות מימיות שני שלבים

microrheology מעקב חלקיק יכול להיות בשימוש למי שאינו הרסני לכמת ומרחבית מפת שינויים בתכונות מכאניות מטריצה ​​תאית במודלי גידול 3D.

מדידת אורך של תאי מטריקס קשיחות במודלי גידול 3D באמצעות Microrheology מעקב חלקיקים

פיתחנו מבחן גירוי בעיניים אשר מנצל מודל רקמת האפיתל שלושה כמו קרנית-ממדי משוחזר אנושי (RHCE). המבחן הוא מסוגל להבחין בין גירוי העיני וחומרים מאכלים (קטגוריות GHS 1 ו -2 משולבים) ואלה שאינם דורשים תיוג (GHS אין קטגוריה).

גירוי מבחן העין (EIT) לסיכוני זיהוי כימיקלים עיניים מעצבנים באמצעות אפיתל דגם רקמות כמו-קרנית משוחזר אדם (RHCE)

למד שיפור מודלי עור דו-ממדיים ותלת-ממדיים באמצעות הצטופפות מולקולארית. שיטה זו מאיצה יצירת מטריצות תאיות ותרביות אורגנוטיפיות בשלות להנדסת רקמות וטיפולי פצעים.

עור 2D and 3D שיפור

גלה סרטונים נוספים