Name: ייזום בידול בתאי multipotent otic אב הונצחו (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-01-02T13:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 17 s
Description: חקור בידול תאי iMOP לתאי שיער קוכליאריים ונוירונים שמיעתיים במערכת תרבית in-vitro. שיטה זו תורמת להבנת התחדשות השמיעה ופיתוח יישומים טיפוליים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

העבודה נתמכה בחלקה על ידי קרן התרומות של יו"ר פיתוח הפקולטה של דאנקן וננסי מקמילן (K.Y.K.), מענק המחקר הביו-רפואי של בוש (K.Y.K.) ומענק פיתוח הפקולטה של ראטגרס (K.Y.K).

1. שמירה עצמית התחדשות בתאי IMOP <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן iMOP תקשורת ותרבות: DMEM / F12, תוספת 1X B27, 25 מיקרוגרם / מיליליטר וcarbenecillin 20 ng / ml bFGF. לעשות 50 מיליליטר של תקשורת בתרבות iMOP באמצעות ריאגנטים סטרילי. לחמם 49 מיליליטר של DMEM / F12 בחרוטי 50 מיליליטר באמבט מים 37 מעלות צלזיוס. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תוספת ההפשרה 50X B27 ו- 100 מ&quot;ג / מיליליטר carbenecillin aliquots-מעוקר מסנן במשך 5 דקות באמבט מים 37 מעלות צלזיוס. להפשיר 100 מיקרוגרם aliquot / ml bFGF ב RT. הוסף 1 מיליליטר 50X B27, 10 μl של 100 מיקרוגרם / ml bFGF ו12.5 μl של 100 מ&quot;ג / מיליליטר carbenecillin לDMEM / F12. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש 3 מיליליטר של תקשורת בצלחת תרבית רקמת 60 מ&quot;מ לתאי iMOP culturing. הוסף מדיה טרי לתרבויות בכל יום אחר על ידי הכפלת הנפח של תקשורת. ודא כי הריכוז של bFGF לא לרדת מתחת 5 ng / ml. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תאי iMOP תרבות במעלות צלזיוס 37 עם CO 2. תאי מעבר של 5% לאחר 5-7 ימים בתרבות כמפורט בשלבים הבאים. העברת תרבות ל15חרוטי מיליליטר באמצעות קצה פיפטה 10 מיליליטר. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך 1 mM EDTA בHBSS על ידי דילול 0.1 מיליליטר של 0.5 M EDTA pH 8.0 ל50 מיליליטר של HBSS. טרום החם mM EDTA 1 עשה בHBSS באמבט מים 37 מעלות צלזיוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קציר תאים על ידי שיקוע כובד או צנטריפוגה XG 200 במשך 5 דקות. ב RT. לשקיעה הכבידה, למקם את חרוטי 15 מיליליטר המכילים תרבויות בחממת 37 ° C 5 - 10 דקות. לאחר הזמן, להתבונן otospheres לאסוף בתחתית חרוטי 15 מיליליטר. הערה: כוח הצנטריפוגלי מוגזם יכולה לגרום נזק לתאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זהירות לשאוב בילה מדיה באמצעות 2 מיליליטר aspirating פיפטה מבלי להפריע תא גלולה. הוסף 0.5 מיליליטר של תמיסת 1 mM EDTA HBSS מראש חימם לתא גלולה. בעזרת פיפטה P1000, בעדינות pipet למעלה ולמטה 2 - 3 פעמים. הנח חרוטי על 37 מעלות צלזיוס ודגירה של &lt;5 דקות כדי להקל על ניתוק לתוך תאים בודדים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מערבולת בעדינות את פתרון התא כדי לקבוע אם otospheres הם ניתקו. אם לא Otoתחומים משקעים לתחתית חרוטי, התאים הם ניתקו. זמן דגירה עשוי להשתנות. הערה: דגירה ממושכת עם EDTA תגרום למות תא מוגזם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסרת תאים מ -37 מעלות צלזיוס, להוסיף 2 מיליליטר של תקשורת לנטרל ולדלל את EDTA. לאסוף את התאים על ידי צנטריפוגה XG 200 במשך 5 דקות על RT. לשאוב את דילול EDTA בעזרת פיפטה aspirating 2 מ&quot;ל ולהוסיף 5 מיליליטר של 1X PBS לשטוף את התאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספין תאים למטה ב XG 200 במשך 5 דקות על RT ולשאוב את 1X PBS באמצעות פיפטה aspirating 2 מיליליטר. Resuspend התאים בעזרת פיפטה P1000 ב0.5 מיליליטר של תקשורת בתרבות iMOP ידי pipetting בעדינות מעלה ומטה 2 - 3 פעמים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספירת תאים באמצעות מונה חלקיקי microfluidic עם הקלטות המתאימות 28. צלחת ומחוברות של תאי iMOP תכיל ~ 6 X10 6 תאים. לדלל תאי 1: 100 בתקשורת ולהוסיף 75 ul של פתרון נייד לתוך הקלטת לספירה. צלחת 1 x 10 6 תאים בצלחת 6 סנטימטר בcultu iMOPמחדש תקשורת (~ 1: 10 דילול). iMOPs מעבר כל 5 - 7 ימים. הערה: תאים היוצרים otospheres הגדול או לצרף לתחתית צלחת תרבית הרקמה יבדיל. תאים גם ימותו אם התרבויות הן מעל ומחוברות. </li></ol> 2. תאי IMOP הקפאה להפשרה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן בינוני הקפאה סינתטית על ידי הפשרה וequilibrating הפתרון ל4 מעלות צלזיוס לפני תאי הקפאה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> איסוף תאים מצלחת סנטימטר ומחוברות 6 תאי iMOP. השתמש פיפטה 10 מיליליטר ותאי העברה (~ 6 - 8 x 10 6 תאים) לחרוטים 15 מיליליטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קציר תאים על ידי שיקוע כובד או צנטריפוגה XG 200 במשך 5 דקות על RT. אם otospheres קטן, תאים לא יסתפקו בשקיעה הכבידה. אופציונאלי: ספירת תאים באמצעות צעד 1.9 כדי לקבוע כולל מספרים סלולריים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשאוב בילה מדיה באמצעות 2ml aspirating פיפטה תוך השארת התא גלולה הרופפת מאחורי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף 0.25 מיליליטר של תקשורת הקפאה סינתטית לresuspend לסה&quot;נLLS בצפיפות של ~ 5 x 10 x 5 3 10 6 תאים / מיליליטר. בעדינות פיפטה תאים עם טפטפת P1000. מעבירים את ההשעיה התא לבקבוקוני קריוגני בעזרת פיפטה P1000 עם 1 מיליליטר מסונן קצה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את הבקבוקונים במכל הקפאה נטולת אלכוהול ולמקם את מיכל ההקפאה ב -80 ° C כדי להפחית את מעלות צלזיוס בטמפרטורת 1 לדקה עד לטמפרטורה מגיעה -80 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחסון לטווח הארוך של תאים, להעביר את הבקבוקונים לשלב האדים של טנק נוזל אחסון חנקן. להפשיר את תאים לתרבות, לאזן בקבוקון המכיל תאי קירור קפוא ב -80 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תקשורת ותרבות iMOP טרום חמה באמבט מים 37 מעלות צלזיוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להפשיר את הבקבוקון הקפוא במהירות על ידי מתערבל תחתית הבקבוקון באמבט מים 37 מעלות צלזיוס. הוסף 1 מיליליטר של תקשורת בתרבות iMOP מראש חימם לתאים מופשרים פעם גביש הקרח האחרון נעלם. העברת תאים לתוך חרוטי 15 מיליליטר ולהוסיף 4 מיליליטר נוסף של תקשורת בתרבות iMOP </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספין שיתוף 15 מיליליטרnical במשך 5 דקות. ב XG 200 ולשאוב התקשורת בילתה. Resuspend התאים 2 מיליליטר של תקשורת בתרבות iMOP ותאי צלחת בצלחת 6 סנטימטר. דגירה תרבויות על 37 מעלות צלזיוס עם 5% CO 2 להרחבה. </li></ol> 3. ההתמיינות תאי IMOP לחושית epithelia <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן 50 מיליליטר של תקשורת בידול epithelia החושית iMOP: DMEM / F12, תוספת 1X B27, 25 מיקרוגרם / מיליליטר carbenecillin. לעשות 50 מיליליטר של תקשורת בידול epithelia החושית iMOP. לחמם 49 מיליליטר של DMEM / F12 בחרוטי 50 מיליליטר באמבט מים 37 מעלות צלזיוס. תוספת ההפשרה 50X B27 ו- 100 מ&quot;ג / מיליליטר carbenecillin aliquots במשך 5 דקות. באמבט מים 37 מעלות צלזיוס. הוסף 1 מיליליטר 50X B27 ו12.5 μl של 100 מ&quot;ג / מיליליטר carbenecillin לDMEM / F12. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תאים למסוק, לנתק, גלול ולספור חזרו על שלבים 1.4-1.9 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 1 x 10 6 תאי צלחת בצלחת 6 סנטימטר ביום -3 באמצעות iMOP תקשורת ותרבות. ביום 0, תרבויות העברה באמצעות פיפטה 10 מיליליטר לחרוטי 15 מיליליטר. לאסוף את Otoתחומים על ידי שקיעה הכבידה כאמור בשלב 1.6. לשאוב בילה מדיה באמצעות 2 מיליליטר aspirating פיפטה ולהשאיר otospheres בתחתית חרוטי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעדינות להוסיף 2 מיליליטר של תקשורת בידול epithelia החושית. העברת otospheres לצלחת 6 סנטימטר בעזרת פיפטה מיליליטר גדולה נשא 10. הערה: גז מכאני מpipetting הקשה יכול לנתק תאים מotospheres. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 2 מיליליטר של תקשורת בידול אפיתל החושית הטרי לתרבויות בכל יום אחר. במידת צורך, ניתן לאסוף תאים על ידי שיקוע כובד ותקשורת הוחלף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאסוף otospheres ביום 10 על ידי העברה לחרוטי 15 מ&quot;ל ומאפשר לotospheres משקע כאמור בשלב 1.6.Aspirate התקשורת בילתה באמצעות 2 מיליליטר aspirating פיפטה ולהשאיר otospheres באין מפריע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תקן otospheres ידי דוגרים בפורמלין 4% ב1X PBS במשך 15 דקות ב RT. הסר פתרון פורמלדהיד, לשטוף otospheres עם חיץ לשטוף (1X PBS המכיל 0.1% TritonX-100) לפני דוגרים בחסימת חיץ (1X PBS המכיל 10% עזים בסרום נורמלי ושל 0.1% Triton X-100) במשך שעה 1. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החלף חיץ דגירה דגימות בחסימת חיץ עם נוגדן מדולל. דגירה על 4 מעלות צלזיוס. לשטוף דגימות עם 1X PBS המכיל 0.1% בכפוף Triton X-100 otosphere לimmunostaining 27. העברת otospheres ל1X PBS וotospheres מקום לתליית תקשורת בשקופית זכוכית בעזרת פיפטה P1000. שים coverslip על המדגם ולאפשר תקשורת הרכבה לייבוש על 4 מעלות צלזיוס. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לרכוש תמונות epifluorescence באמצעות התקנת מיקרוסקופ הפוכה מצוידות במצלמת 16 ביט CCD וגם אוויר 20X 0.75 או אובייקטיבי טבילת שמן NA 40X 1.3. לאסוף הקרינה מערוצי צבע שונים באמצעות רשום (העירור ופליטה) אורכי גל: כחולה (377 ± 25 ננומטר / 447 ± 30 ננומטר), ירוק (475 ± 25 ננומטר / 540 ± 25 ננומטר), אדום (562 ± 20nm / ו625 20nm ±) ואינפרא-אדום (628 ± 20nm / ו692 ± 20ננומטר). </li></ol> 4. Assaying edu התאגדות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביום -3, צלחת 1 x 10 6 תאי iMOP בצלחת 6 סנטימטר. שלושה ימים לאחר מכן ביום 0, קציר, לנתק, גלול ולספור תאים על ידי חזרה על שלבי 1.4-1.9. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צלחת 2.5 x 10 5 תאים בתקשורת ותרבות iMOP ו -5 5 תאים x10 בתקשורת בידול epithelia החושית בבארות שונות של צלחת 6 היטב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקבוע את אחוז התאים בשלב S ידי התאגדות edu ביום 3 באמצעות assay התאגדות edu <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף מניית edu ישירות לתרבויות iMOP להשיג ריכוז סופי של 1 מיקרומטר edu בתקשורת והתרבות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה edu בתרבויות iMOP לשעה 2 ולדגור על 37 מעלות צלזיוס עם 5% CO 2. קציר, תאים לנתק ולאסוף לחזור על שלבים 1.4-1.9. להוסיף בפורמלדהיד 4% ב1X PBS במשך 15 דקות. ב RT לתקן תאים. קציר תאים על ידי צנטריפוגה XG 200 במשך 5 דקות על RT. הסר פתרון פורמלדהיד וproperly להיפטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> גרעיני תווית של תאים עם Hoechst ושולבו edu עם צבע-אזיד הקרינה ירוקה על פי הפרוטוקול של היצרן. הערה: כל שטיפות נעשות עם 1X PBS, תאי Tween 20. לשטוף 3 BSA% ו -0.1% עם 1X PBS פעמיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תאי הר בשקופית באמצעות antifade מגיב ולמקם את זכוכית 1.5 כיסוי על המדגם. לרכוש תמונות ניאון של תאים שכותרתו באמצעות מיקרוסקופ epifluorescence. </li></ol></li></ol> 5. ההתמיינות נוירונים הנגזר IMOP <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעשות 50 מיליליטר של תקשורת בידול העצבית: תקשורת Neurobasal, תוסף B27 1X, 2 מ&quot;מ L- גלוטמין. בקבוק הפשרה של 50X B27 ו -200 המ&quot;מ L- גלוטמין 37 ° C אמבט מים במשך 5 דקות. הוסף 1ml 50X B27 ו 0.5 מיליליטר 200 המ&quot;מ L- גלוטמין ל48.5 מיליליטר של תקשורת Neurobasal. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> coverglass מעיל על ידי הצבת 12 מ&quot;מ עגול 1.5 coverslips זכוכית בצלחת 10 סנטימטר סטרילי ולהוסיף 70% EtOH לצלחת לעיקור ולנקות את coverslips. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעדינות להתסיס את המפרץrslips כדי להבטיח שהם מכוסים באתנול. השאר את הצלחת במשך 10 דקות ב RT. יש לשטוף את coverslips 3 פעמים עם סטרילי 1X PBS לשטוף את אתנול נותר. יש לשטוף את coverslip פעם עם סטרילי H 2 0 לשטוף את שנותר 1X PBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשאוב H 2 0 באמצעות 2 מיליליטר aspirating פיפטה ולתת את coverslips יבש. לחשוף את coverslips לאור UV בברדס בתרבית רקמה במשך 15 דקות. חנות coverslips בסביבת סטרילית, אם לא נעשה שימוש באופן מיידי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים coverslip אחד 12 מ&quot;מ עגול בכל טוב של צלחת 24 היטב. לנער את צלחת בעדינות כדי להבטיח שcoverslips לשכב על תחתית הבאר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפשרת 2 מ&quot;ג / מיליליטר poly-D- ליזין פתרון מניות ב RT ולדלל את ריכוז פולי-D ליזין / מיליליטר 10 מיקרוגרם ב1X PBS. להוסיף 0.25 מיליליטר של 10 פולי-D ליזין UG / מיליליטר לבארות. השאר את הצלחת בחממת 37 ° C עבור שעה 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף את הבארות 3 פעמים עם סטרילי 1X PBS. הפשרת 10 מ&quot;ג / מיליליטר פתרון מניות laminin ב RT ולדלל עד 10 מיקרוגרם / מ &#39;l ב1X PBS. להוסיף 0.25 מיליליטר של 10 מיקרוגרם laminin מיליליטר / עובד פתרון לטוב יחידה של מנה 24 רב גם. דגירה את הצלחת על 37 מעלות צלזיוס חממה. לשאוב את פתרון laminin בעזרת פיפטה aspirating 2 מיליליטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף את coverslip 3 פעמים עם 1X PBS על ידי הוספת 1 מיליליטר של 1X PBS עם פיפטה P1000 והסרת PBS 1X ידי aspirating עם 2 מיליליטר aspirating פיפטה. השאר 1X PBS מלשטוף אחרון בבאר עד תאים מוכנים להיות מצופה. ליזום בידול עצבי על ידי קציר, מתנער וספירת תאים בשלבים 1 x 10 6 תאי 1.4-1.9.Plate בצלחת 6 סנטימטר ביום -3. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביום 0, קציר, לנתק ולספור תאים על ידי חזרה על 1.4-1.9. זרעים 1 x 10 5-1.5 x 10 5 תאי iMOP ל0.5 מיליליטר תקשורת עצבית בידול מחומם מראש לכל גם בצלחת רב גם 24. לשאוב ולהוסיף מדיה בידול עצבית מחוממת מראש לתרבויות בכל יום אחר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תקן נוירונים נגזר iMOP בפורמלין 4% במשך 15 דקות. אלא RT על פתרון פורמלדהיד 7. הסר יום, לשטוף נוירונים נגזר iMOP עם חיץ לשטוף (1X PBS המכיל 0.1% TritonX-100) לפני דוגרים בחסימת חיץ (1X PBS המכיל 10% עזים בסרום נורמלי ושל 0.1% Triton X-100) במשך שעה 1. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החלף חיץ דגירה דגימות בחסימת חיץ עם נוגדן מדולל. דגירה על 4 מעלות צלזיוס. לשטוף דגימות עם 1X PBS המכיל טריטון X-100 תאים כפופים 0.1% לimmunostaining 27. שטוף את coverglass עם 1X PBS לפני הצבה על גבי מדיה הרכבה. לאפשר תקשורת ההרכבה לייבוש על 4 מעלות צלזיוס לפני רכישת תמונות epifluorescence כפי שמופיע בשלב 3.8. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Petit, C., Richardson, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Linking+genes+underlying+deafness+to+hair-bundle+development+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Linking genes underlying deafness to hair-bundle development and function.</a> Nat Neurosci. 12 (6), 703-710 (2009).</li>
<li>Kujawa, S. G., Liberman, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adding+insult+to+injury%3A+cochlear+nerve+degeneration+after+%27temporary%27+noise-induced+hearing+loss%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Adding insult to injury: cochlear nerve degeneration after 'temporary' noise-induced hearing loss.</a> J Neurosci. 29 (45), 14077-14085 (2009).</li>
<li>Kujawa, S. G., Liberman, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acceleration+of+age-related+hearing+loss+by+early+noise+exposure%3A+evidence+of+a+misspent+youth%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Acceleration of age-related hearing loss by early noise exposure: evidence of a misspent youth.</a> J Neurosci. 26 (7), 2115-2123 (2006).</li>
<li>Huth, M. E., Ricci, A. J., Cheng, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+aminoglycoside+ototoxicity+and+targets+of+hair+cell+protection%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Otolaryngol%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of aminoglycoside ototoxicity and targets of hair cell protection.</a> Int J Otolaryngol. 2011, 937861-93 (2011).</li>
<li>Brigande, J. V., Heller, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quo+vadis%2C+hair+cell+regeneration%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Quo vadis, hair cell regeneration?</a> Nat Neurosci. 12 (6), 679-685 (2009).</li>
<li>Groves, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+challenge+of+hair+cell+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Biol+Med+%28Maywood%29%22%5BJournal%5D)">The challenge of hair cell regeneration.</a> Exp Biol Med (Maywood). 235 (4), 434-446 (2010).</li>
<li>Okano, T., Kelley, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cell+therapy+for+the+inner+ear%3A+recent+advances+and+future+directions%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Amplif%22%5BJournal%5D)">Stem cell therapy for the inner ear: recent advances and future directions.</a> Trends Amplif. 16 (1), 4-18 (2012).</li>
<li>Ronaghi, M., Nasr, M., Heller, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Concise+review%3A+Inner+ear+stem+cells--an+oxymoron%2C+but+why%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Concise review: Inner ear stem cells--an oxymoron, but why?</a> Stem Cells. 30 (1), 69-74 (2012).</li>
<li>Chen, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Restoration+of+auditory+evoked+responses+by+human+ES-cell-derived+otic+progenitors%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Restoration of auditory evoked responses by human ES-cell-derived otic progenitors.</a> Nature. 490 (7419), 278-282 (2012).</li>
<li>Koehler, K. R., Mikosz, A. M., Molosh, A. I., Patel, D., Hashino, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+inner+ear+sensory+epithelia+from+pluripotent+stem+cells+in+3D+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Generation of inner ear sensory epithelia from pluripotent stem cells in 3D culture.</a> Nature. , (2013).</li>
<li>Oshima, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanosensitive+hair+cell-like+cells+from+embryonic+and+induced+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Mechanosensitive hair cell-like cells from embryonic and induced pluripotent stem cells.</a> Cell. 141 (4), 704-716 (2010).</li>
<li>Diensthuber, M., Oshima, K., Heller, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem%2Fprogenitor+cells+derived+from+the+cochlear+sensory+epithelium+give+rise+to+spheres+with+distinct+morphologies+and+features%5BTitle%5D)+AND+%22J+Assoc+Res+Otolaryngol%22%5BJournal%5D)">Stem/progenitor cells derived from the cochlear sensory epithelium give rise to spheres with distinct morphologies and features.</a> J Assoc Res Otolaryngol. 10 (2), 173-190 (2009).</li>
<li>Doetzlhofer, A., White, P., Lee, Y. S., Groves, A., Segil, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prospective+identification+and+purification+of+hair+cell+and+supporting+cell+progenitors+from+the+embryonic+cochlea%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Prospective identification and purification of hair cell and supporting cell progenitors from the embryonic cochlea.</a> Brain Res. 1091 (1), 282-288 (2006).</li>
<li>Doetzlhofer, A., White, P. M., Johnson, J. E., Segil, N., Groves, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+growth+and+differentiation+of+mammalian+sensory+hair+cell+progenitors%3A+a+requirement+for+EGF+and+periotic+mesenchyme%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">In vitro growth and differentiation of mammalian sensory hair cell progenitors: a requirement for EGF and periotic mesenchyme.</a> Dev Biol. 272 (2), 432-447 (2004).</li>
<li>Martinez-Monedero, R., Yi, E., Oshima, K., Glowatzki, E., Edge, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differentiation+of+inner+ear+stem+cells+to+functional+sensory+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Differentiation of inner ear stem cells to functional sensory neurons.</a> Dev Neurobiol. 68 (5), 669-684 (2008).</li>
<li>Oshima, K., Senn, P., Heller, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+sphere-forming+stem+cells+from+the+mouse+inner+ear%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Isolation of sphere-forming stem cells from the mouse inner ear.</a> Methods Mol Biol. 493, 141-162 (2009).</li>
<li>Nishimura, K., Nakagawa, T., Sakamoto, T., Ito, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fates+of+murine+pluripotent+stem+cell-derived+neural+progenitors+following+transplantation+into+mouse+cochleae%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplant%22%5BJournal%5D)">Fates of murine pluripotent stem cell-derived neural progenitors following transplantation into mouse cochleae.</a> Cell Transplant. 21 (4), 763-771 (2012).</li>
<li>Wu, D. K., Kelley, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+mechanisms+of+inner+ear+development%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Perspect+Biol%22%5BJournal%5D)">Molecular mechanisms of inner ear development.</a> Cold Spring Harb Perspect Biol. 4 (8), a008409(2012).</li>
<li>Jiang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lineage+analysis+of+the+late+otocyst+stage+mouse+inner+ear+by+transuterine+microinjection+of+a+retroviral+vector+encoding+alkaline+phosphatase+and+an+oligonucleotide+library%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Lineage analysis of the late otocyst stage mouse inner ear by transuterine microinjection of a retroviral vector encoding alkaline phosphatase and an oligonucleotide library.</a> PLoS One. 8 (7), e69314(2013).</li>
<li>Sapede, D., Dyballa, S., Pujades, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+lineage+analysis+reveals+three+different+progenitor+pools+for+neurosensory+elements+in+the+otic+vesicle%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Cell lineage analysis reveals three different progenitor pools for neurosensory elements in the otic vesicle.</a> J Neurosci. 32 (46), 16424-16434 (2012).</li>
<li>Satoh, T., Fekete, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clonal+analysis+of+the+relationships+between+mechanosensory+cells+and+the+neurons+that+innervate+them+in+the+chicken+ear%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Clonal analysis of the relationships between mechanosensory cells and the neurons that innervate them in the chicken ear.</a> Development. 132 (7), 1687-1697 (2005).</li>
<li>Raft, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cross-regulation+of+Ngn1+and+Math1+coordinates+the+production+of+neurons+and+sensory+hair+cells+during+inner+ear+development%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Cross-regulation of Ngn1 and Math1 coordinates the production of neurons and sensory hair cells during inner ear development.</a> Development. 134 (24), 4405-4415 (2007).</li>
<li>Neves, J., Parada, C., Chamizo, M., Giraldez, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Jagged+1+regulates+the+restriction+of+Sox2+expression+in+the+developing+chicken+inner+ear%3A+a+mechanism+for+sensory+organ+specification%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Jagged 1 regulates the restriction of Sox2 expression in the developing chicken inner ear: a mechanism for sensory organ specification.</a> Development. 138 (4), 735-744 (2011).</li>
<li>Mak, A. C., Szeto, I. Y., Fritzsch, B., Cheah, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+and+overlapping+expression+pattern+of+SOX2+and+SOX9+in+inner+ear+development%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Expr+Patterns%22%5BJournal%5D)">Differential and overlapping expression pattern of SOX2 and SOX9 in inner ear development.</a> Gene Expr Patterns. 9 (6), 444-453 (2009).</li>
<li>Kiernan, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sox2+is+required+for+sensory+organ+development+in+the+mammalian+inner+ear%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Sox2 is required for sensory organ development in the mammalian inner ear.</a> Nature. 434 (7036), 1031-1035 (2005).</li>
<li>Puligilla, C., Dabdoub, A., Brenowitz, S. D., Kelley, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sox2+induces+neuronal+formation+in+the+developing+mammalian+cochlea%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Sox2 induces neuronal formation in the developing mammalian cochlea.</a> J Neurosci. 30 (2), 714-722 (2010).</li>
<li>Kwan, K. Y., Shen, J., Corey, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((C-MYC+transcriptionally+amplifies+SOX2+target+genes+to+regulate+self-renewal+in+multipotent+otic+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">C-MYC transcriptionally amplifies SOX2 target genes to regulate self-renewal in multipotent otic progenitor cells.</a> Stem Cell Reports. 4 (1), 47-60 (2015).</li>
<li>Dittami, G. M., Sethi, M., Rabbitt, R. D., Ayliffe, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+mammalian+cell+counts%2C+cell+size+and+cell+health+using+the+Moxi+Z+mini+automated+cell+counter%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Determination of mammalian cell counts, cell size and cell health using the Moxi Z mini automated cell counter.</a> J Vis Exp. (64), (2012).</li>
<li>Levenstein, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Basic+fibroblast+growth+factor+support+of+human+embryonic+stem+cell+self-renewal%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Basic fibroblast growth factor support of human embryonic stem cell self-renewal.</a> Stem Cells. 24 (3), 568-574 (2006).</li>
<li>Furue, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heparin+promotes+the+growth+of+human+embryonic+stem+cells+in+a+defined+serum-free+medium%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Heparin promotes the growth of human embryonic stem cells in a defined serum-free medium.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 105 (36), 13409-13414 (2008).</li>
<li>Lotz, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sustained+levels+of+FGF2+maintain+undifferentiated+stem+cell+cultures+with+biweekly+feeding%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Sustained levels of FGF2 maintain undifferentiated stem cell cultures with biweekly feeding.</a> PLoS One. 8 (2), e56289(2013).</li>
<li>Brewer, G. J., Torricelli, J. R., Evege, E. K., Price, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimized+survival+of+hippocampal+neurons+in+B27-supplemented+Neurobasal%2C+a+new+serum-free+medium+combination%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Res%22%5BJournal%5D)">Optimized survival of hippocampal neurons in B27-supplemented Neurobasal, a new serum-free medium combination.</a> J Neurosci Res. 35 (5), 567-576 (1993).</li>
<li>Watanabe, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+ROCK+inhibitor+permits+survival+of+dissociated+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">A ROCK inhibitor permits survival of dissociated human embryonic stem cells.</a> Nat Biotechnol. 25 (6), 681-686 (2007).</li>
<li>Ruben, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+the+inner+ear+of+the+mouse%3A+a+radioautographic+study+of+terminal+mitoses%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Otolaryngol%22%5BJournal%5D)">Development of the inner ear of the mouse: a radioautographic study of terminal mitoses.</a> Acta Otolaryngol. , Suppl 220. 1-44 (1967).</li>
<li>Matei, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Smaller+inner+ear+sensory+epithelia+in+Neurog+1+null+mice+are+related+to+earlier+hair+cell+cycle+exit%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">Smaller inner ear sensory epithelia in Neurog 1 null mice are related to earlier hair cell cycle exit.</a> Dev Dyn. 234 (3), 633-650 (2005).</li>
<li>Lee, Y. S., Liu, F., Segil, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+morphogenetic+wave+of+p27Kip1+transcription+directs+cell+cycle+exit+during+organ+of+Corti+development%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">A morphogenetic wave of p27Kip1 transcription directs cell cycle exit during organ of Corti development.</a> Development. 133 (15), 2817-2826 (2006).</li>
<li>Chen, P., Segil, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((p27%28Kip1%29+links+cell+proliferation+to+morphogenesis+in+the+developing+organ+of+Corti%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">p27(Kip1) links cell proliferation to morphogenesis in the developing organ of Corti.</a> Development. 126 (8), 1581-1590 (1999).</li>
<li>Hasson, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unconventional+myosins+in+inner-ear+sensory+epithelia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Unconventional myosins in inner-ear sensory epithelia.</a> J Cell Biol. 137 (6), 1287-1307 (1997).</li>
<li>Barclay, M., Ryan, A. F., Housley, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Type+I+vs+type+II+spiral+ganglion+neurons+exhibit+differential+survival+and+neuritogenesis+during+cochlear+development%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Dev%22%5BJournal%5D)">Type I vs type II spiral ganglion neurons exhibit differential survival and neuritogenesis during cochlear development.</a> Neural Dev. 6, 33(2011).</li>
<li>Bermingham, N. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Math1%3A+an+essential+gene+for+the+generation+of+inner+ear+hair+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Math1: an essential gene for the generation of inner ear hair cells.</a> Science. 284 (5421), 1837-1841 (1999).</li>
<li>Izumikawa, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auditory+hair+cell+replacement+and+hearing+improvement+by+Atoh1+gene+therapy+in+deaf+mammals%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Auditory hair cell replacement and hearing improvement by Atoh1 gene therapy in deaf mammals.</a> Nat Med. 11 (3), 271-276 (2005).</li>
<li>Kim, W. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NeuroD-null+mice+are+deaf+due+to+a+severe+loss+of+the+inner+ear+sensory+neurons+during+development%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">NeuroD-null mice are deaf due to a severe loss of the inner ear sensory neurons during development.</a> Development. 128 (3), 417-426 (2001).</li>
<li>Liu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Essential+role+of+BETA2%2FNeuroD1+in+development+of+the+vestibular+and+auditory+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">Essential role of BETA2/NeuroD1 in development of the vestibular and auditory systems.</a> Genes Dev. 14 (22), 2839-2854 (2000).</li>
<li>Ma, Q., Anderson, D. J., Fritzsch, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurogenin+1+null+mutant+ears+develop+fewer%2C+morphologically+normal+hair+cells+in+smaller+sensory+epithelia+devoid+of+innervation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Assoc+Res+Otolaryngol%22%5BJournal%5D)">Neurogenin 1 null mutant ears develop fewer, morphologically normal hair cells in smaller sensory epithelia devoid of innervation.</a> J Assoc Res Otolaryngol. 1 (2), 129-143 (2000).</li>
<li>Pang, Z. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+human+neuronal+cells+by+defined+transcription+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Induction of human neuronal cells by defined transcription factors.</a> Nature. 476 (7359), 220-223 (2011).</li>
<li>Vierbuchen, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+conversion+of+fibroblasts+to+functional+neurons+by+defined+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Direct conversion of fibroblasts to functional neurons by defined factors.</a> Nature. 463 (7284), 1035-1041 (2010).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+single-step+induction+of+functional+neurons+from+human+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Rapid single-step induction of functional neurons from human pluripotent stem cells.</a> Neuron. 78 (5), 785-798 (2013).</li>
<li>Blanchard, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+conversion+of+fibroblasts+into+peripheral+sensory+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Selective conversion of fibroblasts into peripheral sensory neurons.</a> Nat Neurosci. 18 (1), 25-35 (2015).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

ניטור תרבויות IMOP פרוטוקול לשמירה על התחדשות עצמית וקידום הבידול של שורת תאי iMOP רומן מתואר ופורמטי ציפוי נוספים כלולים (טבלה 1). כמה שלבים קריטיים המסייעים בהרחבה והתמיינות של תאי iMOP שגרה הם ציינו. בדומה לתרביות תאי גזע pluripotent, יש תאי iMOP תיאורטי תוחלת חיים בלתי מוגדרת. כדי להבטיח שנשמרות שורות תאים כראוי, תרבויות iMOP מנוטרות באופן שיגרתי לכדאיויות תא, התחדשות עצמית ו...

A correction was made to the Authors section in: <a href="http://www.jove.com/video/53692">Initiating Differentiation in Immortalized Multipotent Otic Progenitor Cells</a>.
One of the authors' names was corrected from:
Jadali Azadeh
to:
Azadeh Jadali

A correction was made to the Authors section in: <a href="http://www.jove.com/video/53692">Initiating Differentiation in Immortalized Multipotent Otic Progenitor Cells</a>.

Erratum: Initiating Differentiation in Immortalized Multipotent Otic Progenitor Cells

איברי האוזן הפנימית, השבלול, הרחם, השק ושלוש תעלות חצי עגולות, מתווכים את יכולת השמיעה ושיווי המשקל. בתוך השבלול, תאי שיער ממירים צלילים לאותות חשמליים המועברים לתאי העצב של הגנגליון הספירלי (SGN). ה-SGNs יורים פוטנציאל פעולה כדי להפיץ אותות עצביים דרך מעגל השמיעה. מוטציות גנטיות, תרופות אוטוטוקסיות וחשיפה לצלילים חזקים תורמים למוות של תאי שיער ו-SGN הגורמים לאובדן שמיעה1-4. לאחר שאבדו, תאים אלה אינם מוחלפים. השימוש ב-iPSC ו-ESC ליצירת תאי שיער מתפתחים או SGNs טומן בחובו הבטחה גדולה לטיפולים להחלפת תאי אוזן פנימית5-8. גל של התקדמות הראה שתאי גזע פלוריפוטנטיים ואבות אבות שמקורם באוזן הפנימית יכולים להתמיין לתאי שיער ו-SGNs בשלבים שונים של בגרות. ניתן להשתמש בתאי גזע עובריים של יונקים (ESC) ותאי גזע פלוריפוטנטיים מושרים (iPSC) ליצירת תאי שיער פונקציונליים ו-SGNs9-11. תאי גזע ותאי אב שמקורם באוזן הפנימית של היונקים הוכחו גם כיוצרים תאי שיער ונוירונים בעלי תכונות של עמיתיהם התאיים in vivo 12-16. 
שימוש באבות אוזניים שמקורם ב-iPSC או ESC כדי להחליף תאי שיער שאבדו ו-SGNs דורש התמיינות יעילה. התמיינות לא נכונה או המשך התפשטות של אבות מושתלים שמקורם בגבעול באוזן הפנימית עלולים להחמיר את תפקוד האוזן הפנימית ולהוות סיכון גידולי כגון היווצרות טרטומות באוזן הפנימית17. יש צורך ברור בפיתוח תנאי תרבות והבנת הבידול של אבות אוטיים. אסטרטגיה אחת בפיתוח שיטות אלה היא לסכם החלטות גורל תאים שהתקבלו על ידי אבות נוירו-חושיים במהלך התפתחות האוזן הפנימית. פרוטוקולים המונעים התפשטות ומכוונים אבות אוזניים לתאי שיער או SGNs יעזרו לשפר את הבטיחות כמו גם את היעילות של טיפולים חלופיים. 
במהלך ההתפתחות, האוזן הפנימית מתחילה בעיבוי של אקטודרם פני השטח באזור מוגבל בין מעוינים 5 ו-6 כדי להפוך לפלאקוד האוטי. כאשר הפלאקוד האוטי פולש ליצירת אוטית, אוסף תאים באזור הקדמי של הכוס האוטית מוליד את התחום העצבי-חושי המוכשר (NSD), המכיל קודמים של תאי שיער ונוירונים של האוזן הפנימית18. מחקרי מיפוי גורל מעכברים, תרנגולות ודגי זברה המפתחים אוזן פנימית מצביעים על אוכלוסיות מרובות של אבות נוירו-חושיים המולידים את תאי השיער החושיים, המקיפים את התאים התומכים ונוירונים אוטיים19-22. גורם השעתוק של קבוצת הניידות הגבוהה, Sox2, היה מעורב במפרט תאי החישה ושימש כסמן לאבות האוזן הפנימית23,24. מוטציות היפומורפיות המפחיתות את רמות הביטוי של Sox2 באוזן הפנימית גורמות לאובדן תאי השיער, התאים התומכים ו-SGNs בשבלול25,26. 
כדי לחקור תאי אב אוטיים העוברים החלטות גורל תאים, הוקם בעבר קו תאי אב אוטי רב-פוטנטי (iMOP) מוגבל גורל מ-Sox2 המבטא אבות שבלול. תאי iMOP הופקו במקור משבלול E12.5-13.5 עוברי ונדבקו ברטרו-וירוס c-Myc27. תאי iMOP יכולים להתרבות ללא הרף כתאים יוצרי מושבה המכונים אוטוספירות ויש להם את היכולת להתמיין לתאי שיער, תאים תומכים ו-SGNs27. הבנת היכולת של תאי iMOP להתמיין לשושלות אוזניות נפרדות מאפשרת יישום של ממצאים אלה ליצירת תאי שיער ו-SGNs שמקורם ב-iPSC או ESC. פרוטוקולי התמיינות יעילים יפתחו אפיקים חדשים לטיפולים בהחלפת תאים במחלות אוזן פנימית שאינן מתאימות לטיפולים קונבנציונליים. נושא מכריע ביצירת תאים אוטיים על ידי תרבית תאים במבחנה הוא סמני התמיינות המסייעים לקבוע אם תאים עוברים התמיינות. Cdkn1b (p27KIP) שימש באופן נרחב כסמן מוקדם להתמיינות בהתפתחות האוזן הפנימית, עם זאת, ביטוי של Cdkn1b בתאי iMOP וכיצד הוא מתאם להתמיינות לא טופל. במחקר זה מתוארים תנאי התרבות הנוכחיים וכיצד ביטוי Cdkn1b מתאם לסמנים אחרים של התמיינות iMOP.

<table><tbody><tr><td>CoolCell LX מיכלי הקפאת תאים ללא אלכוהול</td><td>BioCision</td><td>BCS-405</td><td></td></tr><tr><td>בקבוקונים קריוגניים (2 מ"ל)&nbsp;</td><td>קורנינג</td><td>430654</td><td></td></tr><tr><td>כיסוי זכוכית בעובי 1.5 (עגול 12 מ"מ)</td> <td>מדעי מיקרוסקופיה אלקטרונית</td><td>72230-01</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F12</td><td>Life Technologies</td><td>11320-082</td><td></td></tr><tr><td>Neurobasal Medium</td><td>Life Technologies</td><td>21103</td><td></td></tr><tr><td>פוספט חוצץ מלח (PBS) pH 7.4</td><td>Life Technologies</td><td>10010-023</td><td></td></tr><tr><td>האנק תמיסת מלח מאוזנת (HBSS)</td><td>Life Technologies</td><td>14025-092</td><td></td></tr><tr><td>תוסף B27 (50X) Serum Free</td><td>Life Technologies</td><td>17504-044</td><td>מאוחסן כ-1 מ"ל כמוסות</td></tr><tr><td>L-גלוטמין (200 מ"מ)&nbsp;</td><td>Life Technologies</td><td>25030-081</td><td>מאוחסן כ-5 מ"ל כמוסות</td></tr><tr><td>Natural Mouse Laminin</td><td>Life Technologies</td><td>23017-015</td><td>מאוחסן כ-1 מ"ג/מ"ל כמוסות</td></tr><tr><td>Click-iT EdU Alexa Fluor 488&nbsp;</td><td>Life Technologies</td><td>C10337</td><td></td></tr><tr><td>Synth-A-Freeze Cryopreservation Media</td><td>Life Technologies</td><td>A12542-01</td><td></td></tr><tr><td>Prolong Gold Antifade Mountant</td><td>Life Technologies</td><td>47743-736</td><td>מאוחסן כ-10 מ"ג/מ"ל 100 ומיקרו; l aliquots</td></tr><tr><td>Moxi Z מיני מונה תאים אוטומטי</td><td>Orflo&nbsp;</td><td>MXZ001</td><td></td></tr><tr><td>Moxi Z קלטת מסוג S</td><td>Orflo&nbsp;</td><td>MXC002</td><td></td></tr><tr><td>גורם גדילה פיברובלסטים עכבריים רקומביננטי, בסיסי (bFGF)</td> <td>Peprotech</td><td>450-33</td><td>מושעה ב-0.1% BSA ב-H20 ומאוחסן כ-20 מ"ג/מ"ל בכמות</td></tr><tr><td>פולי-D-ליזין</td><td>סיגמא</td><td>P7886</td><td>מושעה ב-1X PBS ומאוחסן כ-10 מ"ג/מ"ל 100 ומיקרו; l aliquots</td></tr><tr><td>קרבניצילין, מלח דיסודיום</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>BP2648-1</td><td>מושעה ב 10 מ"מ Hepes pH 7.4 ומאוחסן כ 100 מ"ג / מ"ל aliquots</td></tr><tr><td>5 מ"ל פיפט עטוף בנפרד כריכה רכה (200 / מארז)</td> <td>Thermo Fisher Scientific</td><td>1367811D</td><td></td></tr><tr><td>10 מ"ל פיפט עטוף בנפרד כריכה רכה (200 / מארז)</td> <td>Thermo Fisher Scientific</td><td>1367811E</td><td></td></tr><tr><td>תרבית רקמות מטופלת ביוליט 24 בארות צלחת</td><td>תרמו פישר תרבית רקמות מדעית</td><td>130188</td><td></td></tr><tr><td>טיפול בביוליט 6 בארות</td><td>צלחת תרמו פישר מדעי</td><td>130184&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>תרבית רקמות מטופלת 6 ס"מ צלחת</td><td>תרמו פישר מדעי</td><td>130181&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>EMD Millipore Millex מזרק סטרילי PVDF מסנן גודל נקבוביות: 0.22 &mu; m</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>SLGV033RS</td><td></td></tr><tr><td>TipOne טיפ פילטר טיפ 0.1 - 10 &mu; l קצה מסנן מוארך</td><td>ארה"ב סיינטיפיק</td><td>1120-3810</td><td></td></tr><tr><td>טיפ טיפ מסנן אחד 1 - 20 &mu; l קצה מסנן</td><td>ארה"ב סיינטיפיק</td><td>1120-1810</td><td></td></tr><tr><td>טיפטיפ פילטר מסנן אחד 1 - 200 &mu; l&nbsp; טיפ מסנן</td><td>USA Scientific</td><td>1120-8810</td><td></td></tr><tr><td>טיפ טיפ פיפט מסנן 101 - 1000 &mu; l טיפ מסנן</td><td>USA Scientific</td><td>1126-7810</td><td></td></tr><tr><td>15 מ"ל צינורות חרוטיים סטריליים 20 שקיות של 25 צינורות (500 צינורות)</td> <td>USA Scientific</td><td>1475-0511</td><td></td></tr><tr><td>50 מ"ל צינורות חרוטיים סטריליים 20 שקיות של 25 צינורות (500 צינורות)</td> <td>USA Scientific</td><td>1500-1211</td><td></td></tr></tbody></table>

ייזום בידול בתאי multipotent otic אב הונצחו

Initiating Differentiation in Immortalized Multipotent Otic Progenitor Cells

השימוש בתאי גזע פלוריפוטנטיים מושרים אנושיים (iPSC) או תאי גזע עובריים (ESC) לטיפולים בהחלפת תאים טומן בחובו הבטחה גדולה. מספר מגבלות, כולל תפוקות נמוכות ואוכלוסיות הטרוגניות של תאים ממוינים מעכבות את התקדמות הטיפולים בתאי גזע. קו תאי אב אוטי (iMOP) מוגבל גורל נוצר כדי להקל על התמיינות יעילה של מספר רב של תאי שיער פונקציונליים ונוירוני גנגליון ספירליים (SGN) לטיפולים להחלפת תאי אוזן פנימית. החל מתרביות מנותקות של תאי iMOP בודדים, תוארו פרוטוקולים המקדמים יציאה ממחזור התא והתמיינות על ידי נסיגה של גורם גדילה פיברובלסטים בסיסי (bFGF). ירידה משמעותית בתאים המתרבים לאחר נסיגת bFGF אושרה באמצעות בדיקת התפשטות תאי EdU. במקביל לירידה בשגשוג, התמיינות מוצלחת הביאה לביטוי של סמנים מולקולריים ושינויים מורפולוגיים. צביעה חיסונית של Cdkn1b (p27KIP) ו-Cdh1 (E-cadherin) באוטוספירות שמקורן ב-iMOP שימשה כאינדיקטור להתמיינות לאפיתל תחושתי של האוזן הפנימית בעוד צביעה חיסונית של Cdkn1b ו-Tubb3 (β-טובולין עצבי) שימשה לזיהוי נוירונים שמקורם ב-iMOP. השימוש בתאי iMOP מספק כלי חשוב להבנת החלטות גורל התאים המתקבלות על ידי אבות נוירו-סנסוריים באוזן הפנימית ויסייע בפיתוח פרוטוקולים ליצירת מספר גדול של תאי שיער ו-SGN שמקורם ב-iPSC או ESC. שיטות אלו יאיצו את המאמצים ליצירת תאים אוטיים לטיפולים חלופיים.

bFGF נסיגת ירידות הפצת נשק בתאי IMOP כדי להקטין את יכולת השגשוג של תאי iMOP וליזום התמיינות של תאי iMOP, bFGF הוסר ממדפי התרבויות. כדי לוודא שנסיגת גורם גדילה יורדת התפשטות, התאגדות edu הועסקה כassay התפשטות. אחוז התאים ששולבו edu מotospheres תרבותי עם תקשורת ותרבות iMOP (המכיל bFGF) וotospheres תרבותי בתקשורת epithelia החושית (ללא...

מתוארים הפרוטוקולים הנוכחיים לשמירה על תאי אב אוטיים רב-פוטנטיים (iMOP) אימורטליים והתמיינות אוטית. תנאי תרבית וסמנים מולקולריים המצביעים על התמיינות לאפיתל חושי ונוירונים של גנגליון ספירלי (SGN) מודגשים.

Use of human induced pluripotent stem cells (iPSC) or embryonic stem cells (ESC) for cell replacement therapies holds great promise. Several limitations ...

המטרה הכוללת של הליך זה היא להבדיל בין תאי אב אוטיים רב-פוטנטיים אימורטליים לסוגי תאי אוזן פנימיים. לכן שיטה זו יכולה לעזור לנו לענות על שאלות מפתח בהתחדשות שמיעתית, כגון כיצד אבות אוזניים יכולים להפוך לתאי שיער שבלול או לנוירונים שמיעתיים. חשוב לציין, טכניקה זו מספקת מערכת תאית במבחנה שניתן להשתמש בה במקביל למערכות מודל של יונקים in vivo.ידגימו את ההליך היום אזאדה ג'דאלי, פוסט-דוקטורנטית במעבדה שלי, כמו גם ז'יצ'או סונג, ואלחנדרה לוריאנו, שתי סטודנטיות לתארים מתקדמים במעבדה. לאחר הכנת מדיום התרבית כמתואר בפרוטוקול הטקסט, השתמש בשלושה מיליליטר של נוזל זה לצלחת אחת כפול עשר עד האב המולטיפוטנטי השישי, או תאי IMOP, לתוך צלחת תרבית רקמה של 60 מילימטר. דגרו על התאים במשך חמישה עד שבעה ימים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס עם חמישה אחוזי פחמן דו חמצני.כל יומיים, הכפילו את נפח הנוזל בתרבית על ידי הוספת מדיום טרי. כדי לעבור את התאים, העבירו אותם תחילה מצלחת התרבות לצינור חרוטי של 15 מיליליטר. ואז הניחו את הצינור, בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס, למשך חמש עד עשר דקות.במהלך תקופה זו, צפו לאוטוספירות היוצרות מושבה להצטבר בתחתית החרוט באמצעות משקעי כוח הכבידה. לאחר מכן, שאפו את הסופרנטנט, היזהרו לא להפריע לפלטה. השעו מחדש את האוטוספירות על ידי הוספת 0.5 מיליליטר של תמיסת מלח מאוזנת משופרת של EDTA שהוכנה מראש או HBSS, ולאחר מכן פיפטינג למעלה ולמטה פעמיים עד שלוש.כדי להקל על דיסוציאציה של אוטוספירות לתאים בודדים, הנח את החרוט בחממה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס. סובב מעת לעת את התמיסה וכאשר לא נצפו אוטוספירות כמשקעים בתחתית הצינור, העבר אותה לטמפרטורת החדר. המשך להוסיף שני מיליליטר של מדיום תרבית לתאים כדי לנטרל את ה- EDTA.וצנטריפוגה אותם בטמפרטורת החדר למשך חמש דקות בחום של 200 גרם. לאחר מכן שאפו את תמיסת ה-EDTA המדוללת ושטפו את התאים בחמישה מיליליטר של 1x PBS. לאחר סיבוב התאים באמצעות אותן הגדרות, שאפו את ה-1x PBS.לאחר מכן, הוסף 0.5 מיליליטר מדיום תרבות לחרוט. ולהשעות מחדש את לוח התאים. לספירה, יש לדלל תאי IMOP אחד עד מאה במדיום תרבית.לאחר מכן הוסף 75 מיקרוליטר של תמיסה זו לקלטת הממוקמת במונה חלקיקים מיקרופלואידי וקבע את מספר התא. לאחר מכן, צלחת אחת כפול עשרה עד שישית תאי IMOP בצלחת תרבית רקמה של 60 מילימטר כפי שתואר קודם לכן וחזור על הליך מעבר זה כל חמישה עד שבעה ימים. שלושה ימים לאחר הציפוי, השתמש בשקיעת הכבידה כדי לאסוף אוטוספירות כפי שהוצג קודם לכן.המשך לשאוף את הסופרנטנט. ולהשעות בעדינות את התאים בשני מיליליטר של מדיום התמיינות אפיתל חושי. לאחר מכן השתמש בפיפטה נקבובית גדולה של עשרה מיליליטר כדי להעביר את האוטוספירות לצלחת חדשה של 60 מילימטר.הבדיל בין האוטוספירות למשך עשרה ימים. הוספת שני מיליליטר של מדיום בידול טרי לתרבות כל יומיים. לאחר מכן, קצרו את האוטוספירות שוב באמצעות שקיעת כבידה.ולשאוף את המדיום המושקע. לאחר מכן, תקן את האוטוספירות בארבעה אחוזים פרפורמלדהיד ב-1x PBS למשך 15 דקות בטמפרטורת החדר. לאחר מכן הסר את תמיסת הפורמלדהיד ושטוף את התאים ב-1x PBS המכיל 0.1 אחוז טריטון x100.המשך על ידי חסימת האוטוספירות ב-1x PBS בתוספת עשרה אחוז סרום עיזים ו-0.1 אחוז טריטון x100. לאחר שעה, החלף את המאגר החוסם בזה המכיל את הדילול המתאים של נוגדן Cdkn1b או CDH1. לאחר מכן דגרו את התאים בנוגדנים ראשוניים למשך הלילה בארבע מעלות צלזיוס.ולמחרת המשיכו לצבוע חיסון באמצעות נוגדנים משניים המסומנים פלואורסצנטית, פלואידין והוכסט, כפי שמתואר במקום אחר. כדי להתכונן להדמיה, הנח מדיום הרכבה על שקופית זכוכית. ואז הכניסו את האוטוספירות המוכתמות למדיום.לאחר מכן, הניחו תלוש כיסוי על גבי המדגם. לאחר שנתנו למדיום ההרכבה להתייבש למשך הלילה בארבע מעלות צלזיוס, הנח את השקופית על הבמה של מיקרוסקופ הפוך המצויד במצלמת CCD של 16 סיביות. באמצעות מטרת האוויר 20x 0.75, רכוש תמונות אפיפלואורסצנטיות על ידי איסוף נתונים מהערוצים הכחולים, הירוקים, האדומים והאינפרא אדום.ראשית, נקה את החלקות כיסוי הזכוכית העגולות על ידי הנחתן בצלחת סטרילית של 100 מילימטר וטבילתן ב-70 אחוז אתנול. ערבבו בעדינות את פתקי הכיסוי כדי לוודא שהם מכוסים והשאירו את התבשיל בטמפרטורת החדר למשך עשר דקות. לאחר מכן, שטפו את החלקות הכיסוי שלוש פעמים ב-PBS סטרילי 1x ולאחר מכן פעם אחת במים סטריליים.לאחר מכן הניחו לכיסוי להתייבש על ידי חשיפתם לאור UV בקולט אדים לתרבית רקמות למשך 15 דקות. לשימוש מיידי, הנח החלקת כיסוי סטרילית אחת לכל באר של צלחת 24 בארות. ונער בעדינות את הצלחת כדי להבטיח שכל החלקות הכיסוי מונחות שטוחות.לאחר מכן מצפים את פתקי הכיסוי על ידי הוספת 0.25 מיליליטר של 1x PBS המכיל 10 מיקרוגמים למיליליטר פולי D ליזין לכל באר. לאחר שהצלחת דגרה במשך שעה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס, הסר את תמיסת הפולי D ליזין ושטוף את הבארות שלוש פעמים עם PBS סטרילי 1x. לאחר שאיבת הנוזל מהכביסה האחרונה, הכניסו 0.25 מיליליטר של 1x PBS המכיל 10 מיקרוגרם למיליליטר למינין, לכל אחת מ-24 הבארות.לאחר דגירה של הצלחת למשך הלילה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס, שאפו את תמיסת הלמינין, ואז שטפו כל באר עם מיליליטר אחד של 1x PBS שלוש פעמים, אך השאירו את ה-PBS מהכביסה האחרונה בבארות עד שהתאים מוכנים לציפוי. כדי להתחיל בהתמיינות עצבית, ספור את התאים מאוטוספירות מנותקות כפי שתואר קודם לכן. ואז השעו אותם מחדש במדיום התמיינות עצבי שחומם מראש.המשך על ידי זריעה בין נקודה אחת לנקודה אחת חמש פעמים עשרה לתאי ה-IMOP החמישיים לכל באר של הצלחת המכילה את החלקות הכיסוי המצופה. דגרו את הצלחת ב-37 מעלות צלזיוס, עם חמישה אחוזי פחמן דו חמצני. החלפת מדיום ההתמיינות העצבי כל יומיים.לאחר שבעה ימים, שאפו את המדיום, וקבעו את התאים, אותם יש לחבר להחלקות הכיסוי, על ידי הוספת ארבעה אחוז פורמלדהיד לכל באר. ומשאיר אותם למשך 15 דקות בטמפרטורת החדר. לאחר מכן הסר את הפורמלדהיד ושטוף את התאים פעם אחת ב-1x PBS המכיל 0.1 אחוז טריטון x100.לאחר מכן, הסר את מאגר הכביסה. והוסף מאגר חוסם המורכב מ-1x PBS המכיל עשרה אחוז סרום עיזים רגיל, ו-0.1 אחוז טריטון x100 לכל באר. השאירו את התאים למשך שעה בטמפרטורת החדר.ולאחר מכן הסר את הנוזל והחלף אותו במאגר חוסם המכיל את הדילול המתאים של נוגדן Cdkn1b או Tubb3. לאחר דגירה של לילה בארבע מעלות צלזיוס, שטפו את התאים פעם אחת עם 1x PBS המכיל אחוז אחד טריטון x100. ואז המשך עם צביעה חיסונית כפי שתואר קודם לכן.לאחר השלמת הצביעה, בצע שטיפה אחרונה על ידי הוספת 1x PBS לבארות. כדי להכין אותם לניתוח, הסר את החלקות הכיסוי אליהן מחוברים תאים מוכתמים מצלחת 24 הבארות. והנח אותם על מדיום הרכבה על מגלשת זכוכית.לאחר שנתנו למדיום ההרכבה להתייבש למשך הלילה בארבע מעלות צלזיוס, רכשו תמונות אפיפלואורסצנטיות כפי שתואר קודם לכן. אוטוספירות שגודלו במשך עשרה ימים במדיום התמיינות אפיתל מדגימות ביטוי מוגבר של Cdkn1b, מעכב קינאז תלוי מחזור, וסמן להתמיינות האוזן הפנימית, בהשוואה לתאים לא מובחנים. כאן צביעת הוכסט אכן ציינה גרעיני תאים.תאים אלה מציגים גם שינויים מורפולוגיים בחוטי אקטין ובאזורים של הידבקות תא-תא האופייניים לאפיתליה. מסומן על ידי הופעת Phalloidin, ותיוג Cdh1 בשולי התא. ניתן גם לכוון אוטוספירות ליצירת נוירונים.תמונת שדה בהירה זו מראה כי לאחר שבעה ימים בתווך התמיינות עצבית, תאי IMOP מציגים נויריטים. צביעה חיסונית של תאים אלה עם סמן עצבי Tubb3 מאשרת את התמיינותם. והם גם מבטאים בצורה חזקה את Cdkn1b.זה מצביע על כך שאות כפול Tubb3, Cdkn1b יכול לשמש כאינדיקטור להתמיינות עצבית בתאי IMOP. תאים פלואורסצנטיים מובחנים ולא מובחנים של Cdkn1b נורמלו גם הם על ידי קביעת היחס שלו לאות הוכסט, ומספקים תוצאות כמותיות. היסטוגרמות של נתונים אלה מוצגות כאן.האחוזים של תאי IMOP לא ממוינים ומובחנים מעל סף שנקבע מראש של Cdkn1b מנורמל מוצגים בגרפים אלה. שתי האוכלוסיות המובחנות מדגימות עלייה משמעותית באחוז התאים המבטאים Cdkn1b בהשוואה לבקרות לא ממויינות, מה שמאשר את ההתמיינות המוצעת על ידי אימונופלואורסצנטיות. לאחר השליטה, ניתן לבצע תרבית והתמיינות שגרתית של תאי IMOP תוך 30 דקות, אם היא מבוצעת כראוי.לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד ליזום התמיינות של תאי IMOP. תודה שצפית בסרטון הזה. ובהצלחה בניסויים שלך.

initiating-differentiation-immortalized-multipotent-otic-progenitor

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

ביולוגיה התפתחותית

אנו מתארים בסיס מולקולות קטנות פרוטוקול התמיינות תאים העכבר גזע עובריים לתאי מבשר oligodendrocyte (OPCs). פרוטוקול זה יוצר Olig2 NG2 + + OPCs עם יעילות גבוהה של 30 ימים של בידול. כמו כן, אנו מתארים שיטה להפקת "מתחזקים" בצורה OPCs שיכולים אש הפוטנציאלים לפעולה.

התמיינות של תאים עובריים לתוך מבשרי Oligodendrocyte

ראשוני, תאים אנושיים עובריים מופקים ממוח, multipotential progenitor...

מערכת מוליד-נגזר Oligodendrocyte תרבות ממוח העוברי של אדם

סרטון זה מדגים את ההתמיינות של תאי גזע עובריים אנושיים, או תאי גזע עובריים אנושיים, ישירות לתאי אב עצביים ללא שימוש בתאי הזנה או בשלבי ביניים כלשהם. עיכוב סלקטיבי של חלבון מורפוגנטי עצם או BMP והפיכת גורם גדילה-בטא, או TGF-β, מסלולי איתות מוביל להתמיינות תאי גזע עובריים עובריים עצביים לתאי אב עצביים, או NPCs.

התמיינות תאי גזע עובריים אנושיים לאבות עצביים

סרטון זה מדגים את התהליך של יצירת תאים מקדימים אוליגודנדרוציטים (OPC) מתאי גזע עובריים אנושיים, ואחריו הבשלת OPCs לאוליגודנדרוציטים. תהליך זה של יצירת אוליגודנדרוציטים פותח דרכים רבות לשיפור המחקר והטיפול במחלות נוירודגנרטיביות, כולל אלצהיימר.

התמיינות תאי גזע עובריים אנושיים לאוליגודנדרוציטים

סרטון זה מדגים את הקמתה של תרבית משותפת של תאי עצב המושרים על ידי בני אדם (iNs) ותאים מקדימים של אוליגודנדרוציטים מושרים (iOPCs). iNs מעורבבים עם iOPCs בתרבית משותפת ולאחר מכן מודגרים כדי לתמוך בהבשלה של iNs לנוירונים ו- iOPCs לאוליגודנדרוציטים. תאי עצב יוצרים קשרים סינפטיים עם תאי עצב ואוליגודנדרוציטים אחרים, בעוד שאוליגודנדרוציטים מפתחים מעטה מיאלין סביב אקסוני הנוירונים.

שיטת תרבית משותפת למידול אינטראקציות נוירון-אוליגודנדרוציטים

סרטון זה מדגים את ההתמיינות של תאי אב אופטיים רב-פוטנטיים אימורטליים (iMOP) לתאי אפיתל חושיים. הוא מתאר את השלבים הכרוכים בטיפוח תאי iMOP, יצירת אוטוספירות, גרימת התמיינות והדמיית רכיבים תאיים וסמני התמיינות באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי כדי לאשר התמיינות תאים מוצלחת.

התמיינות תאי אב אוטיים לתאי אפיתל חושיים ואחריה אימונוסטיין

הסרטון מדגים את ההתמיינות של אבות אוטיים מולטיפוטנטיים (iMOPs) אלמותיים לנוירוני גנגליון ספירליים (SGNs) ואישור מבוסס אימונופלואורסנציה להתמיינות. ה-iMOPs מצופים על גבי כיסויים מצופים מצע תרבית במדיום התמיינות עצבי לצורך התמיינות ל-SGNs. התאים המובחנים מסומנים בנוגדנים ספציפיים לסמני התמיינות עצביים ומנותחים תחת מיקרוסקופ כדי לאשר התמיינות.

הבחנה בין אבות אוטיים רב-פוטנטיים אלמותיים לנוירונים של גנגליון ספירלי והערכת ההתמיינות

בשנים האחרונות להיווצרות של תאי הנבט המשתמשים בשיטות תרבות במבחנה הודגמה תוך שימוש בסוגים שונים של תאי גזע סומטיים. מאמר זה יציג חזותי התמיינות של תאי גזע שמקורם יילוד עכבר לתאים דמויי ביצית מוקדמות.

התמיינות של תאי העור של עכבר יילוד נגזר גזע לתאים דמוי נבט<em&gt; במבחנה</em

הפרוטוקול מציג את התיכנות מראש של תאים היקפיים דם מונפקוף כדי לגרום לתאי גזע עצביים על ידי זיהום וירוס סנדאי, הבידול של iNSCs לתוך הנוירונים הפראים, השתלת ה-DA מקדים לתוך מגירסה חד צדדית מחלת פרקינסון מודלים העכבר, והערכה של הבטיחות והיעילות של הקדם-הלאומית של התובע המחוזי עבור טיפול PD.

דור של תאי גזע עצביים מתוך היקפי תאים מונמונומנט ובידול לכיוון תא העצב הפראמינרגיים ללימודי השתלות

האינטראקציות הנוירוניות-גליאליות בניוון עצבי אינן מובנות היטב בשל כלים ושיטות לא מספקים. במאמר זה אנו מתארים פרוטוקולים ממוטבים להשגת תאי עצב מושרים, תאים מבשרי אוליגודנדרוציטים ואוליגודנדרוציטים מתאי גזע פלוריפוטנטיים אנושיים ומספקים דוגמאות לערכים של שיטות אלה בהבנת תרומות ספציפיות לסוג התא במחלת אלצהיימר.

יצירת נוירונים אנושיים ואוליגודנדרוציטים מתאי גזע פלוריפוטנטיים למידול אינטראקציות נוירון-אוליגודנדרוציטים

פרוטוקול זה מציג את ההתמיינות של אוסטאוקלסטים אנושיים מתאי גזע פלוריפוטנטיים מושרים (iPSCs) ומתאר שיטות לאפיון אוסטאוקלסטים ומבשרי אוסטאוקלסט.

התמיינות ואפיון אוסטאוקלסטים מתאי גזע פלוריפוטנטיים המושרים על ידי בני אדם

חקור בידול תאי iMOP לתאי שיער קוכליאריים ונוירונים שמיעתיים במערכת תרבית in-vitro. שיטה זו תורמת להבנת התחדשות השמיעה ופיתוח יישומים טיפוליים.

ייזום בידול בתאי multipotent otic אב הונצחו

גלה סרטונים נוספים