Assay תפוקה גבוהה לבחינת העדפות הטלה של פרט תסיסנית

המטרה הכוללת של בדיקת תפוקה גבוהה זו היא לספק פלטפורמה פשוטה, יעילה וניתנת להרחבה לזיהוי גנים ונוירונים השולטים בהתנהגות בחירה פשוטה בדרוזופילה. היתרון העיקרי של שיטה זו הוא למעשה אתה יכול להדביק כבחירה ביצית, וחיה בודדת בצורה מתאימה ביותר. כדי להתחיל בניסוי, הניחו שמונה נקבות ושישה זכרים בבקבוקון מזון צר מלא במצע זבובים סטנדרטי.

לאחר מכן השתמש בצאצאים הנקביים שגדלו מהבקבוקון הזה לניסויי הטלת הביצים. יומיים-שלושה לאחר האקלוזיה הנשית, הכינו משחת שמרים טריים על ידי ערבוב שישה גרם שמרים פעילים עם 10 מיליליטר של 0.5% חומצה פרופיונית. השתמש במרית כדי למרוח את משחת השמרים על הדופן הצדדית של בקבוקוני המזון.

לאחר מכן, הכניסו 30 נקבות סגורות ו-20 זכרים שנאספו בעבר לתוך הבקבוקונים. לאחר ארבעה ימים, בדוק את פני השטח של מדיום המזון. אם המשטח רטוב מהזחלים המתחפרים באופן פעיל במזון, אז הזבובים הנקבות מוכנות לניסויים בהטלת ביצים.

המשך בניסוי על ידי השגת תאי הטלת ביצים אקריליים שנבנו בעבר. הכנס יריעות פלסטיק לחלק העליון, טען חתיכה מהתא שתשמש כמשטח התחתון. לאחר מכן, הרדימו את הנקבות על כרית פחמן דו חמצני והעמיסו אותן בנפרד לכל זירת הטלת ביצים.

תנו לזבובים 30 דקות להתאושש מהפחמן הדו חמצני ולהתאקלם בסביבה החדשה. בזמן שהזבובים מסתגלים, מלאו צינור באגרוז עד לסימן 10 מיליליטר, ולאחר מכן הכינו מצע סוכרוז של 150 מיליליטר על ידי הנחת 750 מיקרוליטר של תמיסת סוכרוז טוחנת לתוך הצינור. יש לאחסן בקבוק של אגרוז 1% מומס באמבט מים.

הכן את המצע הרגיל באותו אופן, אך החלף את תמיסת הסוכרוז במים מזוקקים. לאחר מכן, השג את חתיכת המצע של החדר ופיפטה 1, 000 מיקרוליטר של מצע האגרוז לכל שוקת. מניחים את האגרוז בצד להתמצקות למשך 30 דקות.

לאחר שמצעי האגרוז והזבובים מוכנים, הרכיבו את כל שלושת החלקים של תא הטלת הביצים ולאחר מכן הוציאו את יריעות הפלסטיק. הנח את התאים בחממות זבובים למשך הלילה. להרדים נקבות על ידי הזרקת פחמן דו חמצני לתא.

לפרק את החדר ולהשליך את הזבובים המורדמים. לבסוף, צלם תמונות של הביצים לשמירת תיעוד. מדד ההעדפה, או PI, חושב כמספר הביצים שהטילו נקבות זבובים כאשר ניתנה להם הבחירה בין מצע רגיל למצע המכיל סוכרוז.

הנקבות העדיפו בתוקף את המצע הפשוט להטלת ביצים. בעקבות הליך זה, שיטות אחרות כמו הקלטת רדיו הן הזדמנויות שניתן לבצע גנטיקה על מנת לענות על שאלות אחרות כמו כיצד הזבובים מתנהגים לפני הטלת כל ביצית.