Name: Assay תפוקה גבוהה לבחינת העדפות הטלה של פרט תסיסנית (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-03-24T13:00:00.000+00:00
Duration: 3 min 58 s
Description: למדו שיטת סקרינינג בתפוקה גבוהה לבחינת העדפות הטלה ב-Drosophila melanogaster ברזולוציית פרט בודד. שיטה זו מאפשרת זיהוי גנים ורכיבי מעגלים עצביים המשתתפים בתהליכי קבלת החלטות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו מודים לחנות הפיזיקה של דיוק, במיוחד לפיל לואיס, שעזר לנו לבנות את המנגנון ההתנהגותי וההחזקות ויצר את הציור. עבודה זו ממומנת על ידי המכונים הלאומיים לבריאות תחת פרס מספר R01GM100027.

1. הכנת זבובים להיות assayed <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תרבות עפה על מולסה הסטנדרטי / מדיה קמח תירס בבית החממה נקבעה על 25 מעלות צלזיוס ו -65% לחות. תשמור על עצמך כדי לא לגדוש הצלוחיות. לדוגמא, לשים 8 נקבות ו 6 זכרים לתוך בקבוקון מזון צר. הערה: &quot;בקבוקון מזון צר&quot; משמש כאן יש בקוטר פנימי של 2.3 ס&quot;מ. אנחנו בדרך כלל לוותר על 10 מ&quot;ל של אוכל לטוס לתוך בקבוקון אחד. המתכון אוכל לטוס השתמשנו מתואר כאן: http://flystocks.bio.indiana.edu/Fly_Work/media-recipes/molassesfood.html. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 2 - 3 ימים לאחר eclosion הנקבות, להכין צלוחיות עם רסק שמרים טריים כפי שמוצג באיור 1E. הפוך רסק שמרים טריים ידי ערבוב 6 גרם של שמרים פעילים עם 10 מ&quot;ל של חומצה proprionic 0.5%. להשתמש במרית להחיל את הרסק שמרים על הדפנות של צלוחיות המזון. אסוף 30 - 35 נקבות eclosed יחד עם 20 - 25 זכרים לתוך צלוחיות. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באופן כללי, לאסוף זכרים מאותו הבקבוקונים שבו הנקבות נאספות(כדי לחסוך זמן ומאמץ). עם זאת, אם קיים חשש לגבי הפוריות של גברים, להשתמש זכרי WT במקום. כמו כן, רסק שמרים חשוב מגרה ייצור ביצים ולכן להכין אותו טרי מדי יום. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשמור על נקבות / זכרים שנאספו על 25 מעלות צלזיוס, 65% לחות, אלא אם הזבובים הם טמפרטורה רגישה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר ~ 4 - 5 ימים, לבדוק את הבקבוקונים כדי לראות אם נקבות מוכנות לניסויי הטלה. הם מוכנים כאשר השטח של המדיום מזון רטוב מן הזחלים נבירה פעיל בתחום המזון (ראה איור 1E - F). הערה: נקבות בדרך כלל לעכב ביצים שתחזינה השטח האוכל הופך להיות רטוב בהם זחלים. צעד זה מבטיח כי נקבות תהיינה מוכנות להטיל ביצים רבות כאשר הם נתקלים מצעים עם מרקם רצוי (למשל., ~ 1% agarose). </li></ol> 2. בנייה קאמרית, הרכבה, התקנת Assay <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש חנות מכונית לבנות תאי אקריליק הטלה (אלחוטיאיור 1 א - ד). ציור ההנדסה של חלקים שונים הוצג משלים איור 1 -. 3 תמונות באיכות גבוהה ניתן למצוא גם כאן (http://www.rebeccayang.org/pdf/chamber%20design.pdf). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס יריעות פלסטיק לתוך טעינה (למעלה) חתיכה של החדר כפי שמוצג באיור 1C. זה משמש את המשטח התחתון בזמן טעינת זבובים לתוך זירות ההטלה הפרט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים נקבות על כרית CO 2 ומעלה אותם בנפרד לתוך אחד ממרכיבי הטלה. אפשר ~ 30 דקות לזבובים להתאושש CO 2 ולהפוך הסתגלו לסביבה החדשה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את מצעי agarose. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנוחיותכם, להחזיק בקבוק התערובת של העוגיות של agarose 1% נמס בתוך אמבט מים 55 מעלות צלזיוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מוסיפים את הכמות הרצויה של תמיסת סוכרוז המניות (2 מ &#39;) לתוך צינור חרוטי 50 מ&quot;ל ו לערבב אותו עם כמות מתאימה של agarose. לדוגמה, כדי להכין את המצע סוכרוז 150 מ&quot;מ, PLAce 750 μl של 2 M תמיסת סוכרוז לתוך הצינור ואז למלא את הצינור עם agarose אל 10 מ&quot;ל סימן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מכין את המצע הרגיל באותו אופן, אלא להוסיף מים מזוקקים במקום תמיסת סוכרוז. הערה: הריכוז הסופי של agarose בפרוטוקול זה הוא מעט פחות מ -1%. מניסיוננו, הריכוז המדויק של agarose לא משנה כל עוד היא נשלטת להיות בתוך ~ 0.9 - 1.1%, וכי שני המצעים הם מאותו הריכוז agarose. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קח את המצע (למטה) חתיכה של החדר ואת פיפטה 1,000 μl של המצע agarose לתוך כל שוקת כפי שניתן לראות באיור 1D. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אפשר agarose כדי לחזק עבור ~ 30 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר המצעים וזבובי agarose מוכנים, להרכיב את כל שלוש החתיכות של חדר ההטלה ולאחר מכן להוציא את יריעות הפלסטיק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניח את התאים באינקובטורים זבוב. הערה: אורך של ניסויי הטלה יכול להשתנות בהתאם expeהצרכים rimental. אנחנו בדרך כלל להפעיל את הניסוי O / N (14 - 16 שעות). כמו כן, אין השפעה משמעותית של עיתוי יממה על העדפות הטלה נצפתה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים נשים על ידי הזרקת CO 2 לתוך התא. לפרק את התא, לבטל את הזבובים הרדימו לתוך מתי זבוב (כלומר., מקפה ריק יכול מלא מעט שמן תירס). צלמו תמונות של התוצאות עבור ניהול ספרים (ראה איור 2). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספירת הביצים ידנית ולחשב מדדי העדפה לניתוח. חישוב מדד העדפה לגבי (N א - N ב) / (N א ב + N) שבו N ו- B N לייצג מספר הביצים באתר א ב האתר לעומת, בהתאמה. </li></ol>

<ol><li>Perisse, E., Burke, C., Huetteroth, W., Waddell, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Shocking+revelations+and+saccharin+sweetness+in+the+study+of+Drosophila+olfactory+memory%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Shocking revelations and saccharin sweetness in the study of Drosophila olfactory memory.</a> Curr. Biol. 23 (17), 752-763 (2013).</li>
<li>Yamamoto, N. C., Koganezawa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genes+and+circuits+of+courtship+behaviour+in+Drosophila+males%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Genes and circuits of courtship behaviour in Drosophila males.</a> Nat. Rev. Neurosci. 14 (10), 681-692 (2013).</li>
<li>Zwarts, L., Versteven, M., Callaerts, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetics+and+neurobiology+of+aggression+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Fly%22%5BJournal%5D)">Genetics and neurobiology of aggression in Drosophila.</a> Fly. 6 (1), 35-48 (2012).</li>
<li>Joseph, R. M., Devineni, A. V., King, I. F., Heberlein, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oviposition+preference+for+and+positional+avoidance+of+acetic+acid+provide+a+model+for+competing+behavioral+drives+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci%22%5BJournal%5D)">Oviposition preference for and positional avoidance of acetic acid provide a model for competing behavioral drives in Drosophila.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 106 (27), 11352-11357 (2009).</li>
<li>Miller, P. M., Saltz, J. B., Cochrane, V. A., Marcinkowski, C. M., Mobin, R., Turner, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Natural+variation+in+decision-making+behavior+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Natural variation in decision-making behavior in Drosophila melanogaster.</a> PLoS One. 6 (1), 16436(2011).</li>
<li>Schwartz, N. U., Zhong, L., Bellemer, A., Tracey, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Egg-laying+decisions+in+Drosophila+are+consistent+with+foraging+costs+of+larval+progeny%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Egg-laying decisions in Drosophila are consistent with foraging costs of larval progeny.</a> PloS One. 7 (5), 37910(2012).</li>
<li>Yang, C. H., Belawat, P., Hafen, E., Jan, L. Y., Jan, Y. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+egg-laying+site+selection+a+system+to+study+simple+decision-making+processes%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Drosophila egg-laying site selection a system to study simple decision-making processes.</a> Science. 319 (5870), 1679-1683 (2008).</li>
<li>Kacsoh, B. Z., Lynch, Z. R., Mortimer, N. T., Schlenke, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fruit+flies+medicate+offspring+after+seeing+parasites%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Fruit flies medicate offspring after seeing parasites.</a> Science. 339 (6122), 947-950 (2013).</li>
<li>Wu, C. -L., Fu, T. -F., Chou, Y. -Y., Yeh, S. -R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Single+Pair+of+Neurons+Modulates+Egg-Laying+Decisions+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">A Single Pair of Neurons Modulates Egg-Laying Decisions in Drosophila.</a> PloS one. 10 (3), e0121335(2015).</li>
<li>Yang, C. H., He, R., Stern, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+and+circuit+basis+of+sucrose+rejection+by+Drosophila+females+in+a+simple+decision-making+task%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Behavioral and circuit basis of sucrose rejection by Drosophila females in a simple decision-making task.</a> J. Neurosci. 35 (4), 1396-1410 (2015).</li>
<li>Gou, B., Liu, Y., Guntur, A. R., Stern, U., Yang, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanosensitive+neurons+on+the+internal+reproductive+tract+contribute+to+egg-laying+induced+acetic+acid+attraction+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Mechanosensitive neurons on the internal reproductive tract contribute to egg-laying induced acetic acid attraction in Drosophila.</a> Cell Rep. 9 (2), 522-530 (2014).</li>
<li>Stern, U., Zhu, E. Y., He, R., Yang, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-duration+animal+tracking+in+difficult+lighting+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Sci.+Rep%22%5BJournal%5D)">Long-duration animal tracking in difficult lighting conditions.</a> Sci. Rep. 5, 10432(2015).</li>
<li>Zhu, E. Y., Guntur, A. R., He, R., Stern, U., Yang, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Egg-laying+demand+induces+aversion+of+UV+light+in+Drosophila+females%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Egg-laying demand induces aversion of UV light in Drosophila females.</a> Curr. Biol. 24 (23), (2014).</li>
<li>Branson, K., Robie, A. A., Bender, J., Perona, P., Dickinson, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+ethomics+in+large+groups+of+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Methods%22%5BJournal%5D)">High-throughput ethomics in large groups of Drosophila.</a> Nat. Methods. 6, 451-457 (2009).</li>
<li>Klatpoetke, N. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Independent+Optical+Excitation+of+Distinct+Neural+Populations%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Methods%22%5BJournal%5D)">Independent Optical Excitation of Distinct Neural Populations.</a> Nat. Methods. 11 (3), 338-346 (2014).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

לתאים ולפרוטוקולים המתוארים כאן יש מספר שיפורים לעומת בדיקות הטלת ביצים קודמות. ראשית, הם מגדילים את התפוקה של העדפות הבדיקה של בעלי חיים בודדים באופן משמעותי. כל תא יכול לבחון 30 נקבות בודדות ולוקח פחות משעה להקים. שנית, הם מגבירים את העקביות של העדפות הטלת הביצים על פני שיטות קודמות. הסטנדרטיזציה של מידות הזירה, גודל המצעים המטילים והמרחק בין המצעים מקלה על השוואת התוצאות בין ימי ניסוי שונים ומקבוצות מחקר שונות. שלישית, ניתן לצייד את התאים בקבצים מצורפים כדי להתאים לניתוח נוסף שרוצים להמשיך בו (איור משלים 4</st...

Drosophila melanogaster הוא אורגניזם מודל גנטי רב עוצמה לחקר הבסיס העצבי של התנהגויות. ההתפתחות המהירה של כלים גנטיים למניפולציה של נוירונים באופן ממוקד והופעתם של כלי ניתוח התנהגות מתוחכמים שיפרו משמעותית את יכולתנו לנתח את מנגנוני המעגלים העומדים בבסיס תהליכי הטרנספורמציה החושית-מוטורית של מספר התנהגויות מולדות ונלמדות1-3.
הטלת ביצים של דרוזופילה היא מודל מתאים לחקר הבסיס העצבי של תהליכי קבלת החלטות פשוטים. בפרט, הוכח כי לנקבות דרוזופילה יש את היכולת להשוות ולדרג את האפשרויות שלהן לפני שהן "מתחייבות" להפקיד ביצית באפשרותנתונה 4-8. לדוגמה, כאשר ניתנים רק מצע רגיל (ללא סוכרוז) או רק מצע המכיל סוכרוז, הנקבות מקבלות בקלות כל אחת מהאפשרויות להטלת ביצים. עם זאת, כאשר מוצגות בפני שתי האפשרויות, נקבות חזקות דוחות את מצע הסוכרוז בהקשרים מסוימים7,9,10. עם זאת, מעט יחסית ידוע על המנגנונים העצביים המאפשרים לנקבות "לבחור את הגדול מבין השניים". מכשול מרכזי היה היעדר שיטה יעילה לבדיקת העדפות הטלת ביצים כך שניתן להשתמש בגישת סריקה גנטית שיטתית כדי לחקור בעיה זו.
בדוח זה, אנו מתארים את הפרוטוקול שפיתחנו המאפשר לבחון את העדפות הטלת הביצים של נקבות ברזולוציה של חיה בודדת ועם תפוקה ועקביות משופרים משמעותית בהשוואה לשיטות קודמות. באופן ספציפי, אנו מספקים את השרטוטים לבניית התאים שתכננו, את הפרוטוקול להכנת הנקבות כך שכל אחת מהן מוכנה להטיל ביצים רבות, ואת פרוטוקול השימוש בתאים.

<table><tbody><tr><td>אגרוז אולטרה-טהור&nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td>16500-500</td><td></td></tr><tr><td>סוכרוז</td><td>סיגמא</td><td>S0389</td><td></td></tr><tr><td>אמבט מים&nbsp;</td><td>Fisher</td><td>15-462-6Q</td><td></td></tr><tr><td>LifeCam Cinema מצלמת רשת</td><td>Microsoft</td><td>H5D-00013</td><td></td></tr><tr><td>נוריות LED אדומות</td><td>Cree</td><td>C503B-RAN-CA0B0AA1</td><td></td></tr><tr><td>תאי הטלת ביצים</td> מחזיקי מצלמה <td>בהתאמה</td><td></td><td></td>אישית</tr><tr><td>מחזיקי</td> LED <td>בהתאמה</td><td></td><td></td>אישית</tr> בקבוקוני זבוב <tr><td></td><td>בהתאמה</td><td></td><td></td>אישית</tr><tr><td>(צר)</td><td>ג'נסי</td><td>32-116 לפנה"ס</td><td></td></tr></tbody></table>

assay תפוקה גבוהה לבחינת העדפות הטלה של פרט<em&gt; תסיסנית</em

High Throughput Assay to Examine Egg-Laying Preferences of Individual Drosophila melanogaster

לאחרונה, העדפת הטלה של תסיסנית התפתחה כמודל צייתן גנטי ללמוד את הבסיס העצבי של תהליכי קבלת החלטות פשוטים. בעת בחירת אתרים מטילים את ביציהן, נקבות זבוב מסוגל בדירוג האטרקטיביות היחסית של האופציות שלהם ובחירת &quot;יותר משני מוצרים.&quot; עם זאת, מבחני ההעדפה ביותר ההטלה אינם מעשיים אם רוצה לנקוט בגישת סריקה גנטית שיטתית לחיפוש הבסיס המעגל שבבסיס תהליך קבלת החלטות פשוט זו, כפי שהן מבוססות על אוכלוסייה ומייגעת להקים. כדי להגדיל את התפוקה של הלימוד של העדפות הטלה של נקבות אחת, פתחנו תאי מנהג שכל יכול העדפות assay בו זמנית הטלה של עד שלושים פרט עפו כמו גם פרוטוקול המבטיח לכל נקבה יש שיעור גבוה הטלה (כך העדפתם היא להבחין בקלות ועוד משכנע). הגישה שלנו היא פשוטה לביצועומייצר תוצאות מאוד עקביות. בנוסף, החדרים האלה יכולים להיות מצוידים עם קבצים מצורפים שונים כדי לאפשר ווידאו הקלטת חי ההטלה, וכדי לספק אור ללימודי optogenetics. מאמר זה מספק את השרטוטים בודים תאים אלה ואת הליך הכנת הזבובים להיות assayed בתאים אלה.

תאי ההטלה מורכבים מכמה חתיכות: חתיכת מצע (למטה), מחיצה (באמצע) חתיכה, חתיכת טעינה (למעלה), ו -2 דלתות זזות (איור 1 א - ד). יצירות אלה משמשות זבובי התקנה באופן עצמאיים מצעים לפני ניסויי הטלה. איור 1F מראה כיצד בקבוקונים צריכים להיראות כאשר נקבות זבוב מוכנים-הטלה. כאשר זבובים מקבלים בחירה בין מצע פשוטו מצע המכיל סוכרוז, נקבות וחסונות עדיף המצע הרגיל עבור הטלה כפי שמוצג באיור 2. <p class="jove_con...

פרוטוקול זה מתאר בדיקת תפוקה גבוהה לבדיקת העדפות הטלת ביצים של Drosophila melanogaster ברזולוציה של בעל חיים יחיד. בדיקה זו מספקת פלטפורמה פשוטה, יעילה וניתנת להרחבה לזיהוי גנים ורכיבי מעגלים השולטים בתהליך קבלת החלטות פשוט.

Assay תפוקה גבוהה לבחינת העדפות הטלה של פרט<em&gt; תסיסנית</em

Recently, egg-laying preference of Drosophila has emerged as a genetically tractable model to study the neural basis of simple decision-making processes. ...

המטרה הכללית של בדיקה זו בעלת התפוקה הגבוהה היא לספק פלטפורמה פשוטה, יעילה וניתנת להרחבה לזיהוי גנים ונוירונים השולטים בהתנהגות בחירה פשוטה ב-Drosophila. היתרון המרכזי של שיטה זו הוא למעשה היכולת לבצע הדבקה כבחירה של ביצים, ושל בעל חיים בודד באופן המתאים ביותר. כדי להתחיל את הניסוי, העבירו שמונה נקבות וששה זכרים לתוך מבחנה מזון צרה המלאה במצע גידול סטנדרטי לזבובים.לאחר מכן, השתמשו בצאצאים הנקבות שגדלו מבקבוקון זה עבור ניסויי הטלת הביצים. יומיים עד שלושה ימים לאחר בקיעת הנקבות, הכינו משחת שמרים טרייה על ידי ערבוב של 6 g שמרים פעילים עם 10 mL של 0.5% propionic acid. השתמשו בשפחול כדי למרוח את משחת השמרים על הדופן הפנימית של בקבוקוני המזון.לאחר מכן, העבירו למבחנות 30 נקבות שביצעו בקיעה (eclosed) ו-20 זכרים שנאספו מראש. לאחר ארבעה ימים, בדקו את פני מצע המזון. אם הפני השטח רטובים כתוצאה מהחפירה הפעילה של הזחלים במזון, הרי שהזבובים הנקבות מוכנים לניסויי הנחת ביצים.המשך את הניסוי באמצעות השגת תאי הטלת ביצים מאקריליק שנבנו מראש. הכנס דפי פלסטיק לחלק העליון, כאשר חלק מהתא ישמש כמשטח התחתון. לאחר מכן, הרדם את הנקבות על פד פחמן דו-חמצני והעבר אותן באופן אינדיבידואלי לכל זירת הטלת ביצים.אפשרו לזבובים להתאושש במשך 30 דקות מפחמן השני (carbon dioxide) ולהסתגל לסביבה החדשה. בזמן שהזבובים מסתגלים, מלאו מבנה עם agarose עד לסימון של 10 milliliter, ולאחר מכן הכינו מצע סוכרוז של 150 milliliter על ידי העברה של 750 microliters של תמיסת סוכרוז בריכוז שני molar למבנה. שמרו בקבוק של 1%agrose מומס בבן-מרי.הכינו את התשתית הפשוטה באותו אופן, אך החליפו את תמיסת הסוכרוז במים מזוקקים. לאחר מכן, קחו את חלק התשתית של התא והעבירו בעזרת פיפט 1,000 µL של תשתית האגרוז לכל תעלה. הניחו לאגרוז להת굳ד למשך 30 דקות.לאחר שהמצעי האגרוז והזבובים מוכנים, הרכיבו את שלושת חלקי תא השמירת הביצים והוציאו את גילי ההגנה מפלסטיק. הניחו את התאים באינקובטורים לזבובים למשך לילה. הרדימו את הנקבות על ידי הזרקת פחמן דו-חמצני אל תוך התא.פרקו את התא, והשליכו את הזבובים המורדמים. לבסוף, צלמו את הביצים לצורך תיעוד. מדד ההעדפה, או PI, חושב כמספר הביצים שהטילו זבובים נקבות כאשר ניתנה להם הבחירה בין מצע פשוט למצע המכיל סוכרוז.הנקבות העדיפו באופן מובהק את המצע הפשוט להטלת ביצים. בעקבות הליך זה, שיטות אחרות כגון הקלטה רדיואקטיבית מהוות הזדמנויות לביצוע מחקרים גנטיים במטרה לענות על שאלות אחרות, כגון התנהגות הזבובים לפני הטלת כל ביצה.

high-throughput-assay-to-examine-egg-laying-preferences-individual

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

תסיסנית melanogaster היא מערכת גנטית התנהגותית מודל צייתן, שבו נעשה שימוש כדי להבין את הבסיס המולקולרי התאי של תהליכים ביולוגיים רבים חשובים יותר ממאה שנים 1. תסיסנית נוצלה היטב כדי לקבל תובנות לתוך הבסיס הגנטי של ההתנהגות במהירות הבזק.

שיטות Assay תסיסנית התנהגות

סרטון זה מתאר שיטה פשוטה לכימות תנועת הזבובים ומציג את בדיקת הטיפוס שבוצעה. מבחן טיפוס הזבובים הוא מבחן כללי של תפקוד מוטורי המסתמך על תגובת גיאוטקסיס שלילית.

בדיקת טיפוס זבובים: שיטה לבדיקת תנועה כללית בדרוזופילה מלנוגסטר

סרטון זה מתאר את בדיקת האי, שיטה התנהגותית המשמשת לחקר תנועת דרוזופילה. הפרוטוקול לדוגמה כולל הגדרה עבור הבדיקה התואמת לניתוח תמונה אוטומטי למחצה.

בדיקת אי: שיטה בעלת תפוקה גבוהה להערכת התנהגות לוקומוטורית של דרוזופילה

נקבות דרוזופילה בוחרות בין מצעים ובוחרות אתרים אטרקטיביים להטלת ביצים. סרטון זה מתאר בדיקה התנהגותית שבוחנת את קבלת ההחלטות שלהם, הנקראת בדיקת העדפת הטלת ביצים. הסרטון המוצג מדגים את ההליך עם מערך שנבנה בהתאמה אישית, המאפשר לחוקרים לא רק לבחון את התנהגותן של נקבות רבות בו זמנית, אלא גם תואם להקלטת וידאו והגדרות אופטוגנטיות.

דרוזופילה בדיקת העדפת הטלת ביצים: שיטה לבדיקת קבלת החלטות בזבובים

C. התנהגות הטלת ביצים של elegans יכולה לספק מידע חשוב במחקרים התפתחותיים, פוריותיים ואנטומיים. סרטון זה מציג את השלבים החשובים של בדיקת הטלת ביצים ומציג ניסוי לדוגמה שבו תרופה נבדקת לרעילות רבייה.

בדיקת הטלת ביצים: שיטה לכימות התנהגות הטלת הביצים של C. elegans

במאמר זה וידאו, אנו מתארים assay אוטומטי כדי למדוד את ההשפעה של רעב או שובע על התנהגות חיפוש מזון תלויה בריח הפירות המבוגרים לעוף melanogaster דרוזופילה.

יחיד לטוס Assay עבור התנהגות שיחור מזון ב דרוזופילה

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לכימות ההימנעות של אנשים לחוצים. פרדיגמה זו היא עוצמתית אך ידידותית למשתמש וניתן להשתמש בה כדי להעריך את ההשפעה של גנים וסביבה על סוג אחד של אינטראקציה חברתית ב-Drosophila melanogaster.

Assay הפשוט לכימות חברתיות הימנעות ב Melanogaster דרוזופילה

על מנת לזהות מוטציות חדשות המשפיעות על תחושה מכנית, תכננו בדיקה המודדת את התגובה ההתנהגותית לגירוי מישוש של זיפי זבובים בשיבוטים מוטנטיים שנוצרו בשיטת MARCM. שילוב הטכניקות מאפשר לזהות מוטציות רגישות למכניקה שאחרת היו קטלניות.

התנהגות Assay עבור Mechanosensation של MARCM מבוסס משובט ב<em&gt; תסיסנית melanogaster</em

מאמר זה מתאר assay התנהגותיים המשתמש כונן הזדווגות זכר תסיסנית melanogaste r ללמוד מוטיבציה. באמצעות שיטה זו, חוקרים יכולים לנצל טכניקות neurogenetic זבוב מתקדם לחשוף את המנגנונים הגנטיים, מולקולריים והמכשירים סלולריים העומדים בבסיס המוטיבציה הזו.

מדידת כונן מזווג סירוס ועיקור במאלה<em&gt; תסיסנית</em

פרוטוקול זה נועד להעריך את הכדאיות של דרוסופילה בכל שלב התפתחותי, מעובר למבוגר. ניתן להשתמש בשיטה כדי לקבוע ולהשוות בין הכדאיות של גנוסוגים שונים או תנאי גדילה.

שיטה ישירה ופשוטה להערכת דרוזופילה מלאנוגסטרהכדאיות מעובר למבוגר

שלמות מכשול הדם במוח. היא קריטית לתפקוד מערכת העצבים בדרוזופילה מלאנוסטר, מכשול המוח בדם נוצר על ידי תאי גלאל במהלך הembryogenesis המאוחרות. פרוטוקול זה מתאר שיטות לטיפול בתפקוד ותחזוקה של מחסומי מוח בדם בד. מלאנוגסטר עוברים והזחלים השלישי.

שיטת שלמות המוח בדם בדרוזופילה מלאנוסטר

למדו שיטת סקרינינג בתפוקה גבוהה לבחינת העדפות הטלה ב-Drosophila melanogaster ברזולוציית פרט בודד. שיטה זו מאפשרת זיהוי גנים ורכיבי מעגלים עצביים המשתתפים בתהליכי קבלת החלטות.

Assay תפוקה גבוהה לבחינת העדפות הטלה של פרט

גלה סרטונים נוספים