Name: לחסימה Microbead מגנטי דגם כדי לגרום Ocular Hypertension-Dependent גלאוקומה עכברים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-03-23T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 26 s
Description: למד כיצד לגרום ליתר לחץ תוך-עיני בעכברים באמצעות הזרקת מיקרו-חלקיקים מגנטיים לחדר הקדמי של העין. שיטה זו מאפשרת חקר שינויים פתולוגיים מוקדמים בגלאוקומה לפני מוות של תאי גנגליון רשתית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מבקשים להודות לד"ר דיוויד קלקינס (אוניברסיטת ונדרבילט) ולג'יימס מורגן (אוניברסיטת קרדיף) על שיתוף המומחיות שלהם ועל עצות מועילות לפיתוח הליך זה. מחקר זה נתמך על ידי מענקים מהמכונים הקנדיים לחקר הבריאות (A.D.P). Y.A.I. ו-N.B. הם מקבלי מלגות פוסט-דוקטורט מ-Fonds de recherche du Québec-Santé (FRQS). נ.ב. זכה במלגת ה.ה. ג'ספר מקבוצת המחקר של מערכת העצבים המרכזית (GRSNC). A.D.P. היא FRQS לאומית של Chercheur Boursier.

<ol><li>Quigley, H. A., Broman, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+number+of+people+with+glaucoma+worldwide+in+2010+and+2020%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">The number of people with glaucoma worldwide in 2010 and 2020.</a> Br J Ophthalmol. 90, 262-267 (2006).</li>
<li>Bouhenni, R. A., Dunmire, J., Sewell, A., Edward, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+glaucoma%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Animal models of glaucoma.</a> J Biomed Biotechnol. 2012, 692609(2012).</li>
<li>Morrison, J. C., Cepurna Ying Guo, W. O., Johnson, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathophysiology+of+human+glaucomatous+optic+nerve+damage%3A+insights+from+rodent+models+of+glaucoma%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Pathophysiology of human glaucomatous optic nerve damage: insights from rodent models of glaucoma.</a> Exp Eye Res. 93, 156-164 (2011).</li>
<li>Bunker, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+glaucoma+induced+by+ocular+injection+of+magnetic+microspheres%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Experimental glaucoma induced by ocular injection of magnetic microspheres.</a> J Vis Exp. , (2015).</li>
<li>Cone, F. E., Gelman, S. E., Son, J. L., Pease, M. E., Quigley, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+susceptibility+to+experimental+glaucoma+among+3+mouse+strains+using+bead+and+viscoelastic+injection%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Differential susceptibility to experimental glaucoma among 3 mouse strains using bead and viscoelastic injection.</a> Exp Eye Res. 91, 415-424 (2010).</li>
<li>Cone, F. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+anesthesia%2C+mouse+strain+and+age+on+intraocular+pressure+and+an+improved+murine+model+of+experimental+glaucoma%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">The effects of anesthesia, mouse strain and age on intraocular pressure and an improved murine model of experimental glaucoma.</a> Exp Eye Res. 99, 27-35 (2012).</li>
<li>El-Danaf, R. N., Huberman, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characteristic+patterns+of+dendritic+remodeling+in+early-stage+glaucoma%3A+evidence+from+genetically+identified+retinal+ganglion+cell+types%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Characteristic patterns of dendritic remodeling in early-stage glaucoma: evidence from genetically identified retinal ganglion cell types.</a> Neuroscience. 35, 2329-2343 (2015).</li>
<li>Ngumah, Q. C., Buchthal, S. D., Dacheux, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Longitudinal+non-invasive+proton+NMR+spectroscopy+measurement+of+vitreous+lactate+in+a+rabbit+model+of+ocular+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Longitudinal non-invasive proton NMR spectroscopy measurement of vitreous lactate in a rabbit model of ocular hypertension.</a> Exp Eye Res. 83, 390-400 (2006).</li>
<li>Samsel, P. A., Kisiswa, L., Erichsen, J. T., Cross, S. D., Morgan, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+method+for+the+induction+of+experimental+glaucoma+using+magnetic+microspheres%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">A novel method for the induction of experimental glaucoma using magnetic microspheres.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 52, 1671-1675 (2011).</li>
<li>Sappington, R. M., Carlson, B. J., Crish, S. D., Calkins, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+microbead+occlusion+model%3A+a+paradigm+for+induced+ocular+hypertension+in+rats+and+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">The microbead occlusion model: a paradigm for induced ocular hypertension in rats and mice.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 51, 207-216 (2010).</li>
<li>Urcola, J. H., Hernandez, M., Vecino, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three+experimental+glaucoma+models+in+rats%3A+comparison+of+the+effects+of+intraocular+pressure+elevation+on+retinal+ganglion+cell+size+and+death%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Three experimental glaucoma models in rats: comparison of the effects of intraocular pressure elevation on retinal ganglion cell size and death.</a> Exp Eye Res. 83, 429-437 (2006).</li>
<li>Weber, A. J., Zelenak, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+glaucoma+in+the+primate+induced+by+latex+microspheres%5BTitle%5D)+AND+%22J+neuroscience+meth%22%5BJournal%5D)">Experimental glaucoma in the primate induced by latex microspheres.</a> J neuroscience meth. 111, 39-48 (2001).</li>
<li>Ho, L. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+assessment+of+aqueous+humor+dynamics+upon+chronic+ocular+hypertension+and+hypotensive+drug+treatment+using+gadolinium-enhanced+MRI%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">In vivo assessment of aqueous humor dynamics upon chronic ocular hypertension and hypotensive drug treatment using gadolinium-enhanced MRI.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 55, 3747-3757 (2014).</li>
<li>Yang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbead-induced+ocular+hypertensive+mouse+model+for+screening+and+testing+of+aqueous+production+suppressants+for+glaucoma%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Microbead-induced ocular hypertensive mouse model for screening and testing of aqueous production suppressants for glaucoma.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 53, 3733-3741 (2012).</li>
<li>Gallego, B. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IOP+induces+upregulation+of+GFAP+and+MHC-II+and+microglia+reactivity+in+mice+retina+contralateral+to+experimental+glaucoma%5BTitle%5D)+AND+%22J+neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">IOP induces upregulation of GFAP and MHC-II and microglia reactivity in mice retina contralateral to experimental glaucoma.</a> J neuroinflammation. 9, 92(2012).</li>
<li>Rojas, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+in+mouse+retina+contralateral+to+experimental+glaucoma+exhibit+multiple+signs+of+activation+in+all+retinal+layers%5BTitle%5D)+AND+%22J+neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Microglia in mouse retina contralateral to experimental glaucoma exhibit multiple signs of activation in all retinal layers.</a> J neuroinflammation. 11, 133(2014).</li>
<li>Nadal-Nicolas, F. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brn3a+as+a+marker+of+retinal+ganglion+cells%3A+qualitative+and+quantitative+time+course+studies+in+naive+and+optic+nerve-injured+retinas%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Brn3a as a marker of retinal ganglion cells: qualitative and quantitative time course studies in naive and optic nerve-injured retinas.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 50, 3860-3868 (2009).</li>
<li>Morquette, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((REDD2-mediated+inhibition+of+mTOR+promotes+dendrite+retraction+induced+by+axonal+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Differ%22%5BJournal%5D)">REDD2-mediated inhibition of mTOR promotes dendrite retraction induced by axonal injury.</a> Cell Death Differ. 22, 612-625 (2015).</li>
<li>Almasieh, M., Zhou, Y., Kelly, M. E., Casanova, C., Di Polo, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+and+functional+neuroprotection+in+glaucoma%3A+role+of+galantamine-mediated+activation+of+muscarinic+acetylcholine+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Dis%22%5BJournal%5D)">Structural and functional neuroprotection in glaucoma: role of galantamine-mediated activation of muscarinic acetylcholine receptors.</a> Cell Death Dis. 1, 27(2010).</li>
</ol>

המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים פיננסיים מתחרים.

טכניקת הווידאו המובאת כאן מספקת מפורטות צעד אחר צעד הוראות כיצד לבצע הזרקת intracameral של microbeads המגנטי ביעילות reproducibly לגרום העלאת IOP בעכברים. תוצאות הליך זה ב עלייה מתמשכת IOP שאינה דורשת זריקות נוספות ומקדם soma RGC לגילוי ואובדן האקסון בתוך 3 השבועות הראשונים של יתר לחץ דם עינית induction.Elevated IOP הוא גורם סיכון עיקרי לפיתוח גלאוקומה בבני אדם. לכן, זהו מודל גלאוקומת יתר לחץ דם תלוי עינית murine ערך כי יש פוטנציאל עבור מגוון רחב של יישומים. חסרון נפוץ הקשורות הזרקת microbeads לתוך החדר הקדמי מתייחס חרוז ריפלוקס באמצעות זריקת כשהמחט היא נסוגה, עלולה לגרום לחסימה חלקית בלבד של יצוא מהימי ולהבדלים מוגברים. כדי לטפל בבעיה זו, כמה משינויים מהותיים יושמו. firs<html> t, ההכנה הקפדנית של microneedle זכוכית נקיה, חד עם שפוע facetted חיוני הזריקה המוצלחת של microbeads. Microneedle הוכן כראוי מאפשר חדירה מבוקרת וחלקה של הקרנית עם יישום מינימאלי של לחץ על פני השטח של עין העדינה. לנקב קרנית הקטנה מונע זרימה חוזרת של microbeads. בנוסף, microneedle המיקרוסקופי מפחית את הסיכון של מבנים סמוכים תהליכים מזיקים כגון קשתית ואת העדשה, אשר עלול לגרום דלקת שאינה קשור למחלה. שנית, הבקשה של מגנט כף יד לאזורים עיניים אסטראטגי במהלך ואחרי ההזרקה עוד היבט קריטי של הטכניקה הזו. במהלך ההזרקה, המגנט משמש כדי למשוך את microbeads המגנטי ריפלוקס מניעת הלשכה הקדמי של microbeads כאשר microneedle היא נסוגה. לאחר הזריקה, המגנט מכן נעשה שימוש כדי לכוון את microbeads לזווית iridocorneal לחסום יצוא הומור מימי. אוהל &quot;&gt; בעיה נוספת נתקל לעתים קרובות במודלים חסימה microbead הוא כי זריקות חרוז חוזרות לעתים קרובות יש צורך להשיג מתמשכת IOP העלאת 10,11. זו עשויה להיות התוצאה של microbeads dislodging מהזווית iridocorneal עם הזמן. השילוב של מגנט כף יד, כמתואר לעיל, ואת המיקום של העכבר שלאחר ניתוח משפר באופן משמעותי את התוצאה. שימוש הרדמה בזריקות, המאפשרים גמיש כדי להזיז את הראש במהלך ההליך ודורש תקופת החלמה שלאחר ניתוח ארוך יותר, הוא מועדף. מיקום של עכבר בעין המופעלת כלפי מעלה במשך כמה שעות לאחר הניתוח תורם ליישוב microbeads בזווית iridocorneal ומפחית את הסיכון של פירוק בחזרה לתוך החדר הקדמי. הבטחה כי מספר החרוזים המוזרקים הוא יחסית עקבי היא עוד שלב קריטי כדי למזער וריאציות בין-חיה. מאז microbeads להתיישב בבית בottom של הצינור, יש צורך homogenize פתרון microbead המלא ולסגת הנפח המתאים לתוך microneedle מבעוד מועד. הזרקה של חרוזים פחות לתוך החדר הקדמי עלולה לגרום לחסימה החלקית של מבני ניקוז הומור המימיים, אשר צפוי לגרום העלאת IOP עניה או משתנית. מן הראוי לציין כי, למרות המטרה הסופית של הזרקת microbead היא לרומם IOP, יש לנקוט זהירות כאשר מדידות לחץ תוך עיני מעכברים ער גבוהים יותר מאשר ערכי השיא שדווח במחקר זה (~ 25 מ&quot;מ כספית). IOPS גבוהה מאוד להגדיל את הסיכון לנזק איסכמי עלולים גם הם לגרום כאב לחיה. את העלאתו של IOP צריכה להיחשב כאחד גורמים רבים להעריך את ההצלחה של הניתוח. ככזה, התוצאה של ההליך צריך תעיד מבוסס על מספר פרמטרים ובכלל זה העלאת IOP, מוות soma RGC, ואובדן האקסון. אף על פי הפרוטוקול המתואר כאן תוצאות ברוב microbeads מוצלחly ליישוב בזווית, מגבלת פוטנציאל של מודל זה היא כי חרוזים אלה שנותרו צף החדר הקדמי עלולים להפריע הדמית רשתית חייה דרך הקרנית, כמו גם מבחני אלקטרו או התנהגותיים הדורשים מעבר של אור יעיל. היבט חשוב נוסף שיש לקחת בחשבון בעת ​​ניצול מודל חסימה microbead זו היא כי מידת הגובה IOP וניוון RGC עוקבות משתנה עם גיל ורקע הגנטי של העכבר פעל [4]. לכן, במידה של העלאת IOP ואת ציר הזמן של ניוון RGC יהיה צורך שנקבע לכל קו עכבר מהונדס ספציפיים ו / או טווח הגילאים. אחד מאפיינים של מודל זה הוא שתוצאות IOP גבוהות לאובדן ההדרגתי של מות RGC במהלך שלושת השבועות הראשונים לאחר הזרקת microbead, ומות RGC משמעותי מזוהות ב 3 שבועות לאחר ההליך. לפיכך, מודל זה מאפשר בחינת שינויים מוקדמים ו / או עדינים המתרחשים ד זהisease, לפני גלויים soma RGC ואובדן האקסון. עלייה משמעותית למות RGC לא נצפתה בין 3 ו -6 שבועות לאחר הגיוס של יתר לחץ דם עיניים. למעשה, אובדן סומה האקסון RGC נותר יציב ברמה של ~ 22 - 25% בין 3 ל -6 שבועות למרות מוצלח ומתמשך העלאת IOP בנקודות זמן אלה. משכו זמן ארוך יותר של IOP המתמשכת עשוי להידרש אובדן RGC נוסף להתרחש C57BL / 6 עכברים, שכפי הנראה להיות עמיד יותר בפני ניזקי RGC לעומת זני עכבר אחרים. 5 שינויים נוספים הפרוטוקול המובא כאן, לרבות התאמת גודל חרוז וזריקות נוספות, ייתכן שתידרש כדי ללמוד אובדן RGC בנקודות מאוחר יותר זמן. לכן, הפרוטוקול שלנו הוא אידיאלי עבור מחקרים התמקדו בשינויי pathophysiological מוקדם מתואמים עם ניוון מוחיה צנוע RGC אשר רלוונטיים התפרצות והתקדמות מוקדם גלאוקומת אדם.

גלאוקומה היא מחלה מסנוורת מתקדמת ובלתי הפיכה שתשפיע כ -80 מיליון אנשים ברחבי עולם עד שנת 2020 1. בחולי גלאוקומה, אובדן ראייה נגרם על ידי מותו סלקטיבית של תאי הגנגליון ברשתית (RGCs), הנוירונים פלט המעבירים מידע חזותי מן מהרשתית אל המוח. גלאוקומה היא מחלה ניוונית של מערכת עצבים הקשורות לגיל עם גורמי סיכון רבים אשר הנפוץ ביותר היא לחץ תוך עיני מוגבר (IOP). ואכן, IOP הוא גורם הסיכון הניתנים לשינוי רק גלאוקומה טיפולים שוטפים להתמקד אך ורק בניהול הלחץ בעין. עם זאת, גורמים גנטיים, הסלולר, וסביבתיים מרובים המשפיעים על ההופעה והתקדמות של המחלה הזאת. לכן, הבנת המנגנונים השונים שבסופו של דבר לתרום ומוות עצבי חיוני לפתח טיפולים יעילים גלאוקומה. במודלים של בעלי חיים של גלאוקומה חיוניים ללמוד פתופיזיולוגיה מחלות לזהות ולבדוקרפוי הבטיח. הזמינות הגוברת של קווי עכבר מהונדס כולל זנים בנוקאאוט מותנה עכברים שנשאו קליעים נותבים ניאון גנטית בקידוד הזניקה את הצורך מודלים גלאוקומה murine מושרה. במודלים של מכרסמים כמה גלאוקומה פותחו לאורך השנים (הנסקרת ב 2,3). ברבים מן המודלים האלה, גלאוקומה מושרה ע&quot;י שיבוש דינמיקת הומור מימי, וכתוצאה מכך העלאת IOP. מודלים ספיגים, שבו microbeads או חומרים אחרים מוזרקים לתוך החדר הקדמי של העין לחסום ניקוז מימי, צברו פופולריות בשנים האחרונות בין היתר בשל הקלות היחסית שלהם להגדיל IOP 4-14. מודל חסימת microbead של גלאוקומה, בצע לראשונה פרימטים 12, ארנבות 8, וחולדות 4,9,11, הותאם לאחרונה לשימוש בעכברים 5,6,10. במחקרים אלה, זריקת intracameral של microbeads פוליסטירן, לבד אובשילוב עם חומר viscoelastic, הביא העלאת IOP מוביל 6,10 למות RGC שלאחר מכן. עם זאת, ריפלוקס כשהמחט היא נסוגה מן העין ומן הפירוק של microbeads מזווית iridocorneal הן בעיות נפוצות המתעוררות במהלך ההליך. כדי למזער את החסרונות האלה, מגנטים שימשו כדי למשוך את microbeads מגנטי לזווית iridocorneal של העין 4,9. הפרוטוקול המתואר כאן הוא הליך שונה בהתבסס על מחקרים קודמים 9,10 המשתמש microbeads מגנטי מגנט כף יד מותאמי עין העכבר (איור 1). כמה משינויים מהותיים הוכנסו בפרוטוקול שלנו על מנת להבטיח עליית IOP יעילה לשחזור בעכברים. ראשית, הזרקה של microbeads נעשה באמצעות microneedle זכוכית שהוכן בקפידה עם שפוע facetted. משטחי החלקים וכתוצאה מכך של microneedle וכן הקצה המחודד שלה מבטיח כי ניזק מינימאלי הואשנגרם כפי שהוא מנפץ את הקרנית. השימוש microneedle זכוכית פעולה זו גורמת גם שליטה מוגברת כאשר קצה microneedle נכנס לתא הקדמי, ובכך להפחית את הסיכון של מבנים סמוכים תהליכים מזיקים כגון הקשתית ואת העדשה. בנוסף, נגע ההזרקה הזעיר הופך לפשוט תיקון עצמי קרני ומפחית תופעות הקשורות פגיעה בלתי רצויות. שנית, ההזרקה של microbeads המגנטי ושימוש מגנט כף יד מאפשרים שליטה מדויקת כדי למשוך את החרוזים לזווית iridocorneal בעיני העכבר הקטנות. microbeads מגנטי כי הם 4.5 מיקרומטר בקוטר היו בשימוש בגלל גודל microbead זה לא לסתום את פתח microneedle המוכן חשוב, פעם מוזרקת, microbeads אלה ביעילות חסם את ניקוז הומור מימי. גישה זו לא רק מפחיתה ריפלוקס של microbeads המוזרק, אלא גם מבטיחה כי מספר מרבי של microbeads מצטבר באזור היעד לחסום ניקוז הומור מימי ביעילות. Furthermore, אסטרטגיה זו גם מפחיתה את מספר החרוזים צפים בלשכה הקדמית הימנעות ממגע עם מבנים אחרים, כמו אירוס ואת העדשה, ומעבר מניעה לתא האחורי. ביחד, שינויים אלה להבטיח כי ניתוח הזרקת microbead מתבצע בקלות יחסית במועד וכתוצאה מכך אינדוקציה לשחזור, יעילה מאוד, ומתמשכת של יתר לחץ דם עינית בעכברים.

<table><tbody><tr><td>Puller</td><td>Narishige</td><td>PC-10</td><td></td></tr><tr><td>נימי זכוכית עם קיר דק</td> World <td>Precision Instruments</td><td>TW150F-4</td><td>נימי קוטר חיצוני של 1.5 מ"מ וקוטר פנימי של 1.12 מ"מ</td></tr><tr><td>מיקרוסקופ סטריאו</td><td>Zeiss</td><td>MZ9.5</td><td>טווח גורמי זום של 2.5 עד 6.0. מיקרוסקופ המשמש לייצור מחטים ולניתוח הזרקת מיקרו-חרוזים.</td></tr><tr><td>מתג רגליים</td><td></td><td>Linemaster T-91-SE</td><td></td></tr><tr><td>להב נירוסטה</td><td>נוצה</td><td>מס' 11</td><td></td></tr><tr><td>מיקרואלקטרודה Beveler</td><td>Science Products</td><td>BV-10</td><td></td></tr><tr><td>תרסיס דאסטר</td><td>פישר</td><td>23-022-523</td><td></td></tr><tr><td>נתרן הידרוקסיד</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>BP359-500</td><td></td></tr><tr><td>טריס בסיס</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>BP152-1</td><td></td></tr><tr><td>Vortex</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-812</td><td></td></tr><tr><td>Dynabeads M-450 Epoxy</td><td>Life Technologies</td><td>14011</td><td>חרוזים מגנטיים הם 4.5 ומיקרו; קוטר מ '. תמיסת המלאי היא בריכוז של 4 x 108 חרוזים/מ"ל. יש לאחסן בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס.</td></tr><tr><td>מיני צינורות מסובבים</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>05-450-127</td><td></td></tr><tr><td>3 מגנטים כף יד</td><td>Geomag</td><td></td><td>0.45 טסלה. מגנט המשמש להכנת מיקרו-חרוזים וניתוח הזרקת מיקרו-חרוזים.</td></tr><tr><td>25 מ"ל פיפט סרולוגי</td><td>Costar</td><td>4489</td><td></td></tr><tr><td>Pipet</td><td>Drummond</td><td>4-000-101</td><td></td></tr><tr><td>קולט אדים</td><td>ביולוגי Biostad</td><td>377355</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת מלח מאוזנת (BSS)</td><td>Alcon</td><td>0065-0800-25</td><td></td></tr><tr><td>P1,000 Micropipet</td><td>Gilson</td><td>F123602</td><td></td></tr><tr><td>Microtube 1.5 מ"ל</td><td>Sarstedt</td><td>72.690</td><td></td></tr><tr><td>P200 Micropipet</td><td>Gilson</td><td>F123601</td><td></td></tr><tr><td>0.2 מ"ל צינור PCR</td><td>Sarstedt</td><td>72737.002</td><td></td></tr><tr>חומר <td>מבוקר</td><td>קטמין</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>Bayer Healthcare</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Acepromazine</td><td>Vetoquinol</td><td></td><td></td></tr><tr><td>U-100 מזרק אינסולין</td><td>Becton Dickinson and Company</td><td>329461</td><td></td></tr><tr><td>Balance</td><td>Ohaus</td><td>CS 200</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorphine</td><td></td><td></td><td>חומר מבוקר</td></tr><tr><td>Tropicamide תמיסת עיניים</td><td>Alcon</td><td>0998-0355-15</td><td>1% Mydriacyl</td></tr><tr><td>משאבת מיקרו-מזרקים ידנית עם תצוגה דיגיטלית</td><td>World Precision Instruments DMP</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ידני מיקרומניפולטור</td><td>World Precision Instruments</td><td>M3301R</td><td></td></tr><tr><td>פלטפורמה</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>14-673-52</td><td>8 x 8 אינץ'</td></tr><tr><td>ספוגיות סופגות</td><td>Kettenbach</td><td>30601</td><td></td></tr><tr><td>P20 Micropipet</td><td>Gilson</td><td>F123600</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים מפלסטיק</td><td>Euroband</td><td>1001</td><td>ודא שהמלקחיים הם מפלסטיק ובעל משטח ישר כדי למנוע נזק לעין</td></tr><tr><td>תמיסת עיניים פלואורוקווינולון</td><td>אלקון</td><td></td><td>כרית חימום Vigamox</td></tr><tr><td></td><td>Sunbeam</td><td>E12107-834</td><td></td></tr><tr><td>טונומטר</td><td>iCare</td><td>TV02</td><td>TONOLAB טונומטר ריבאונד&nbsp;</td></tr><tr><td>Paraformaldehyde, Para</td><td>Fisher Scientific</td><td>T353-500</td><td></td></tr><tr><td>כלי</td><td></td><td></td><td></td>חיתוך</tr><tr><td>מברשת</td><td></td><td></td><td></td>קטנה</tr><tr><td>תמיסת גלוטראלדהיד</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G7651</td><td></td></tr><tr><td>נתרן קקודילאט, טריהידראט</td><td>קנמקו ומריבק</td><td>124-65-2</td><td></td></tr><tr><td>נוגדן Brn-3a (C-20)</td><td>סנטה קרוז ביוטכנולוגיה</td><td>sc-31984</td><td></td></tr><tr><td>צלחת תרבית רקמות, 48 בארות</td><td>Falcon</td><td>353078</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP151-500</td><td></td></tr><tr><td>סרום חמור</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D9663</td><td></td></tr><tr><td>חמור נגד עזים IgG (H+L) נוגדן משני, Alexa Fluor 594 מצומד</td><td>Life Technologies</td><td>A-11058</td><td></td></tr><tr><td>רדיד</td><td></td><td></td> אלומיניום<td></td></tr><tr><td>שקופיות מיקרוסקופ</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>12-550-15</td><td></td></tr><tr><td>דהייה איטית מגיב זהב אנטי-דהייה</td><td>Life Technologies</td><td>S36936</td><td></td></tr><tr><td>כיסוי זכוכית</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>12-548-5E</td><td></td></tr><tr><td>אוסמיום טטרוקסיד 2% תמיסה מימית</td><td>מדעי מיקרוסקופיה אלקטרונית</td><td>3294949</td><td></td></tr><tr><td>Embed-812</td><td>מדעי מיקרוסקופיה אלקטרונית</td><td>14900</td><td></td></tr><tr><td>Dodecenyl succinic anhydride</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>13710</td><td></td></tr><tr><td>Nadic methyl anhydride</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>19000</td><td></td></tr><tr><td>DMP-30</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>13600</td><td></td></tr><tr><td>Propylene oxide</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>110205-1L</td><td></td></tr><tr><td>הטמעת עובש-Dykstra</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>70907</td><td></td></tr><tr><td>פורטר-בלום אולטרה-מיקרוטום</td><td>סורוול</td><td>MT-2</td><td></td></tr><tr><td>כחול טולואידין O (כתם ביולוגי מאושר)</td><td>פישר-סיינטיפיק</td><td>T161-25</td><td></td></tr></tbody></table>

לחסימה microbead מגנטי דגם כדי לגרום ocular hypertension-dependent גלאוקומה עכברים

A Magnetic Microbead Occlusion Model to Induce Ocular Hypertension-Dependent Glaucoma in Mice

השימוש במודלים של מכרסמים של גלאוקומה כבר חיוני כדי להבין את המנגנונים המולקולריים העומדים בבסיס הפתופיזיולוגיה של מחלות ניווניות multifactorial זה. עם כניסתו של קווי עכבר מהונדסים רבים, יש עניין גובר במודלי Murine מושרים של יתר לחץ דם עיניים. כאן, אנו מציגים מודל חסימה של גלאוקומה מבוסס על הזרקה של microbeads המגנטי לתוך החדר הקדמי של העין באמצעות microneedle שונה עם שיפוע facetted. Microbeads המגנטי נמשך לזווית iridocorneal באמצעות מגנט כף יד כדי לחסום את ניקוז הומור מימי מן החדר הקדמי. הפרעה זו בתוצאות דינמיקה מימיות בתוך התעלות מתמדת של לחץ תוך עיניים, אשר לאחר מכן מוביל לאובדן של תאי גנגליון רשתית, כפי שנצפה בחולי גלאוקומת אדם. מודל חסימת microbead שהוצג בכתב היד הזה הוא פשוט בהשוואה לדגמים מושרים אחרים של גלאוקומה גם מאודיעיל לשחזור. חשוב לציין, השינויים המוצגים כאן למזער בעיות נפוצות לעתים קרובות עולות במודלי חסימה. ראשית, השימוש microneedle מזכוכית משופעת מונע זרימה חוזרת של microbeads ומבטיח כי נזק מינימלי מתרחשת לקרנית במהלך ההזרקה, ובכך להקטין תופעות הקשורות לפציעה. שנית, השימוש של microbeads המגנטי מבטיח את היכולת למשוך החרוזים ביותר לזווית iridocorneal, ובכך מפחית ביעילות את מספר החרוזים צפים בלשכה הקדמית הימנעות ממגע עם מבנים אחרים (למשל., איריס, עדשה). לבסוף, שימוש מגנט כף יד מאפשר גמישות בעת טיפול בעין העכבר הקטנה לכוון את microbeads המגנטי ביעילות להבטיח שיש ריפלוקס הקטן של microbeads מהעין כאשר microneedle היא נסוגה. לסיכום, מודל עכבר חסימת microbead המוצג כאן הוא כלי מחקר רב עצמה כדי לחקור שינויים ניווניות המתרחשים במהלך ההתפרצות וההתקדמות של גלאותִרדֶמֶת.

ההזרקה של microbeads המגנטי לתוך החדר הקדמי של עכברים בוגרים המתואר בפרוטוקול זה הביאה העלאה חזקה לשחזור של IOP. שבוע לאחר ההליך, IOP עלה מ 10 ± 0.6 מ&quot;מ הכספי (ממוצע ± SEM), את IOP הבסיס הממוצע בעיניים נגדיות, עד 19 ± 0.5 מ&quot;מ כספית בעיני יתר לחץ דם (t של הסטודנט -test; *** p &lt;0.001, n = 12, טבלה 1, איור 2). IOP התייצב ואילך ונשאר גבוה בקצב ממוצע של 20 מ&quot;מ כספית במשך לפחות 6 שבועות, בחנו זמן הנקודות הארוכות במחקר זה. IOP השיא הממוצע בעיניים מוזרקות microbead ב 2, 3, ו -6 שבועות לאחר הניתוח היה 25 מ&quot;מ כספי. הרוב המכריע של עכברים שטופלו שפותח IOP הגבוה מתמשך, ולכן פרוטוקול זה אינו מחייב זריקה שנייה של microbeads. כדי להעריך את מהלך הזמן של אובדן RGC במודל זה, סומה RGC היוראשון לכמת ידי immunostaining עם Brn3a, סמן ספציפי RGC 17. מספר התאים Brn3a החיובי היה לכמת על רשתיות שטוחות רכוב על 1, 2, 3 ו -6 שבועות לאחר הגיוס של יתר לחץ דם עיניים. למרות העלאת IOP משמעותית זוהתה מוקדם ככל 1 שבוע לאחר הזרקת microbead, ללא אובדן משמעותי של סומה RGC נצפה בתוך 2 השבועות הראשונים של ההליך (איור 3). RGC מוות משמעותי (22%), לעומת זאת, בא לידי ביטוי גם 3 שבועות (2,430 ± 67 RGCs / מ&quot;מ 2, ממוצע ± SEM, n = 12) ו -6 שבועות (2,350 ± 74 RGCs / מ&quot;מ 2, n = 10) פוסט אינדוקציה של יתר לחץ דם עינית, לעומת עיניים מלאות שלמים מעכברי un מופעל (3,141 ± 49 RGCs / מ&quot;מ 2, n = 23) (ANOVA, p &lt;0.001). חוסר תפקוד וניוון של אקסונים RGC הוא תכונת קרדינל של גלאוקומה. לכן, אובדן axonal נבדק ב 3 ו 6 שבועות לאחר הזרקת microbead ידיכימות של אקסונים RGC בחיתוכי עצב ראייה מוכתמים toluidine הכחול (איור 4). הפסד משמעותי של אקסונים RGC (25%) נצפתה ב 3 שבועות (28,401 ± 702 אקסונים / עצב, ממוצע ± SEM, n = 5) ו -6 שבועות (29,426 ± 948 אקסונים / עצב, n = 6) לאחר ההזרקה של microbeads לעומת עצבים שלא ניזוקו אופטיים מעיני מופעלי האו&quot;ם (39,467 ± 137 אקסונים / עצב, n = 4) (ANOVA, p &lt;0.001). ביחד, נתונים אלו מראים כי הזרקה של microbeads המגנטי לתוך תא עכבר הקדמי מוביל לשחזור מתמשך גובה IOP שתוצאתו soma RGC וניוון האקסון. <table style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td colspan="2"> זמן לאחר ניתוח OHT </td><td> N </td><td colspan="3"> לחץ תוך עיני ממוצע (מ&quot;מ כספית) ± SEM </td><td colspan="2"> שיא IOP (מ&quot;מ כספית) </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> נגדי </td><td> בַּרקִית </td><td> difference </td><td> נגדי </td><td> בַּרקִית </td></tr><tr><td colspan="2"> שבוע 1 </td><td> 12 </td><td> 10 ± 0.4 </td><td> 19 ± 0.5 </td><td> 9 ± 0.6 </td><td> 12 ± 0.4 </td><td> 22 ± 0.6 </td></tr><tr><td colspan="2"> 2 שבועות </td><td> 13 </td><td> 11 ± 0.5 </td><td> 20 ± 0.8 </td><td> 9 ± 0.5 </td><td> 12 ± 0.9 </td><td> 25 ± 0.7 </td></tr><tr><td colspan="2"> 3 שבועות </td><td> 10 </td><td> 11 ± 0.8 </td><td> 20 ± 0.7 </td><td> 10 ± 0.9 </td><td> 13 ± 0.2 </td><td> 25 ± 0.9 </td></tr><tr><td colspan="2"> 6 שבועות </td><td> 12 </td><td> 12 ± 0.5 </td><td> 20 ± 0.6 </td><td> 9 ± 0.7 </td><td> 13 ± 0.5 </td><td> 24 ± 0.6 </td></tr></tbody></table> העלאת טבלה 1. הלחץ התוך עיני בבית Occlusi Microbead מגנטי Murineעל דגם. בשנת נקבה ערה C57 BL / 6 עכברים, IOP נמדדו באמצעות tonometer ריבאונד מכויל. עיניים מופעלות מוצגות עלייה בלחץ תוך עיניים זוהתה שלאחר ניתוח שבוע שנותרה גבוה במשך שישה שבועות לפחות לאחר ההליך. <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/53731/53731fig1.jpg" /> באיור 1. Workflow של השלבים הכרוכים במודל של גלאוקומה ספיגה Microbead מגנטי Murine. צעד אחר צעד המתאר של כל ההליכים שבוצעו לפני, במהלך, ואחרי הניתוח. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53731/53731fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/53731/53731fig2.jpg" /> הגדל איור 2. לחץ תוך עיני במודל ספיגה Microbead מגנטי Murine. ב ערC57 BL / 6 נקבות עכברים, IOP נמדדה באמצעות tonometer ריבאונד מכויל. IOPS עיניים מוזרק microbead היה גבוה משמעותי שלאחר ניתוח שבוע (ANOVA, p &lt;0.001). IOPS נותר גבוה יחסית משמעותי לעין הנגדית של עכברים שהוזרקו במשך לפחות 6 שבועות (ANOVA, p &lt;0.001). (שלמים: n = 12; 1 בשבוע: n = 12, 2 שבועות: n = 13, 3 שבועות: n = 10, 6 שבועות: n = 12). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53731/53731fig2large.jpg" target="_blank">נא ללחוץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 3" src="/files/ftp_upload/53731/53731fig3.jpg" /> איור 3. רשתית גנגליון תא מות הדגם הספיג Microbead מגנט Murine. RGCs היה דמיין ידי immunostaining של רשתית שטוחה רכוב באמצעות Brn3a רשתיות שליטות ללא פגע (א) רשתיות גלאוקומה קשות ב 3 ו 6 שבועות לאחר הזרקת microbead להשרותיתר לחץ דם עינית (OHT) (B, C). ברי סולם: 20 מיקרומטר. (ד) ניתוח כמותי אישר כי הזרקת microbead הביא לאובדן soma משמעותי RGC ב 3 ו 6 שבועות לאחר ההליך לעומת שליטה העיניים. הצפיפות של סומה RGC פנימה בשלמותו, הלא גלאוקומת C57 / עכברי BL6 מוצגת כנקודת התייחסות (פסים לבנים, 100% הישרדות). ערכים באים לידי ביטוי כממוצע ± SEM (Intact: n = 23; 1 בשבוע: n = 6, 2 שבועות: n = 6, 3 שבועות: n = 12, 6 שבועות: n = 10, ANOVA, *** p &lt; 0.001). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53731/53731fig3large.jpg" target="_blank">נא ללחוץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 4" src="/files/ftp_upload/53731/53731fig4.jpg" /> איור 4. אקסונלית ניוון במודל ספיגה Microbead מגנטי Murine. אקסונים RGC היו דמיינו ידי מכתים של חתכים עצב הראייה עם toluidine כחול בשליטה ללא פגע (א) רשתיות גלאוקומה קשות ב 3 ו 6 שבועות לאחר הזרקת microbead לגרום ליתר לחץ דם עינית (OHT) (B, C). ברי סולם: 10 מיקרומטר. (ד) ניתוח כמותי אישר כי הזרקת microbead הביא לאובדן האקסון RGC משמעותי בשבועות 3 ו -6 לאחר ההליך לעומת שליטה העיניים. הצפיפות של אקסונים RGC פנימה בשלמותו, הלא גלאוקומת C57 / עכברי BL6 מוצגת כנקודת התייחסות (פסים לבנים, 100% הישרדות). ערכים באים לידי ביטוי כממוצע ± SEM (Intact: n = 4; 3 שבועות: n = 5, 6 שבועות: n = 6, ANOVA, *** p &lt;0.001). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53731/53731fig4large.jpg" target="_blank">נא ללחוץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו .</a>

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לגרום ליתר לחץ דם עינית בעין murine שתוצאתו אובדן תאי הגנגליון ברשתית כפי שנצפה גלאוקומה. microbeads המגנטי מוזרק לתוך החדר הקדמי ומשך לזווית iridocorneal שימוש במגנט כדי לחסום את היצוא של הומור מימי.

לחסימה Microbead מגנטי דגם כדי לגרום Ocular Hypertension-Dependent גלאוקומה עכברים

The use of rodent models of glaucoma has been essential to understand the molecular mechanisms that underlie the pathophysiology of this multifactorial ...

המטרה הכללית של הליך כירורגי זה היא להשראת גלאוקומה התלויה בהיתר לחץ תוכי על ידי הזרקת מיקרו-חרוזים מגנטיים לתוך התא הקדמי של עין העכבר. שיטה זו יכולה לסייע במתן תשובות לשאלות מפתח בתחום הגלאוקומה, כגון אילו שינויים פתולוגיים מוקדמים מתרחשים בעין לפני מות גלובלי של תאי העצבים ברשתית. היתרון המרכזי של טכניקה זו הוא שניתן להעלות את הלחץ התוכי באופן מהימן לרמה הגורמת לנזק מינימלי לעין במהלך הפרוצדורה.אנשים שאינם מנוסים בשיטה זו יתקשו בביצוע דקירה של הקרנית במהלך ההזרקה, ובגרימה לנזק למבנים סמוכים, כגון העדשה, עקב הכנה לקויה של המיקרו-מחט או מיקום שגוי של המיקרו-מחט. לשלב הפתיחה, השתמשו במושך קפילרות (capillary puller) כדי למשוך מיקרו-מחט מקפילרת זכוכית בורוסיליקט. תחת מיקרוסקופ, השתמשו בלהב חד כדי ליצור בזהירות פתח בקצה המיקרו-מחט, כך שלקצה יהיה צורה אליפטית עם קוטר ציר ראשי וציר משני של בערך 190 micrometers ו-70 micrometers, בהתאמה.במערכת להשחזת מיקרו-פיפט, מקמו את המיקרו-מחט בזווית של 20 מעלות ביחס ללוח ההשחזה, כך שפתח המיקרו-מחט נוגע בלוח. השחיזו במשך כ-10 דקות תוך שימוש בטיפות מים עד שהקצוות יהיו שטוחים וחלקים. לאחר מכן, סובבו את המחט כדי להשחיז את שני הקצוות המקיפים את הפתח עד שקצה המיקרו-מחט יהיה חד.לאחר מכן, בעזרת ספריי דחסת אוויר, נקו את כל השאריות והמים מפתיח קצה המיקרו-מחט. בחנו בקפידה את המיקרו-מחט המוכנה תחת מיקרוסקופ. השליכו מיקרו-מחטים עם שברים.הנוהל הבא דורש שני אנשים לביצועו. כאשר פעולה מסוימת צריכה להתבצע על ידי אדם ספציפי, האדם שיבצע את הפעולה יסומן כ-"person 1" או "person 2". הכינו את תמיסת המיקרו-ביד המגנטית בהתאם לפרוטוקול הכתוב. כדי למדוד לחץ תוך-עיני בסיסי, או IOP, בעכבר ער, רסנו בעדינות את העכבר על ידי החזקת העור בין האוזניים.הניחו את העכבר על משטח העבודה כך שהחיה תהיה בנוחה וניתן יהיה להגיע לעיניים. טפטפו טיפה אחת של proparacaine hydrochloride על הקרנית, לאחר מכן החזיקו את הטונומטר בניצב לפני השטח של הקרנית, ובצעו לפחות שלושה סטים של 10 קריאות רצופות לכל עין כדי לקבל ממוצע של ה-IOP. לאחר מכן, לאחר הרדמת העכבר בהתאם לפרוטוקול הכתוב, ניתן 0.05 milligrams per kilogram ממשקל הגוף של buprenorphine בהזרקה תת-עורית.לאחר מכן, טפלו בעין בטיפת עיניים של tropicamide כדי להשריות הרחבת אישונים, שתסייע בהדמיה של מיקום המחט המיקרוסקופית במהלך ההזרקה. מרחו משחה מקומית על העין הנגדית כדי למנוע התייבשות של הקרנית במהלך הפרוצדורה. כעת, חברו מחט מיקרוסקופית סטרילית למכלול ההזרקה של משאבת המיקרו-מזרק.לאחר מכן, העבירו את העכבר המורדם למספחת הניתוח. תחת המיקרוסקופ, על אדם 1 לוודא שהאישון מורחב לחלוטין וששרירי העין רפויים, כך שלא תהיה תנועה של העין כדי להבטיח יציבות במהלך הפרוצדורה. השתמשו בספיגות סופגות כדי לנגב בעדינות את טיפות ה-tropicamide מהעין.הנחה את אדם 2 לערבב את תמיסת המיקרו-חרו지를 המגנטיים על ידי פיפטאג (pipetting) למעלה ולמטה. לאחר מכן, באמצעות משאבת מיקרו-מזרק, טען את המיקרו-מחט עם 1.5 µL של תמיסת המיקרו-חרוזים המגנטיים ההומוגנית. ודא שאין בועות אוויר בקצה המיקרו-מחט.במהירות האפשרית, מקמו את המחט בזווית של 45 מעלות קדמה, ביחס ללימבוס (limbus). הנחו את אדם 1 להשתמש בפינצטה מפלסטיק כדי לתמוך בעין, תוך שמירה על זווית של כ-90 מעלות בין המיקרו-מחט לפינצטה מפלסטיק. בעזרת משאבת מיקרו-מזרק, הנחו את אדם 2 לנקב בעדינות את הקרנית באמצעות המיקרו-מחט הטעונה, כך שקצה המיקרו-מחט יחדור לתא הקדמי תוך הימנעות מפגיעה בעדשה, בקשתית ובתא האחורי.מבלי להזיז את ראש העכבר, יש לבקש מאדם 1 להניח את המגנט לצד העין מול קצה המחט. זאת כדי למשוך את המיקרו-חרוזים המגנטיים אל תוך התא הקדמי, ולמזער את מגע החרוזים עם פני השטח הפנימיים של הקרניית. בזמן שאדם 1 ממשיך להחזיק את המגנט, יש לבקש מאדם 2 להשתמש במשאבת מיקרו-מזרק כדי להזריק 1.5 µL של תמיסת החרוזים המגנטים אל התא הקדמי לאורך פרק זמן של 15 עד 30 שניות.לאחר שכל נפח החרוזים הוזרק, משוך לאט את המחט המיקרוסקופית מהעין. כדי למנוע רפלקס (נסיגה) של המיקרו-חרוזים, על אדם 1 להמשיך להחזיק את המגנט לצד העין למשך 30 עד 60 שניות נוספות כדי למשוך את החרוזים אל תוך התא הקדמי. לאחר מכן, השתמש במגנט כדי למשוך את החרוזים אל הזווית האירידו-קרנאלית, תוך הימנעות ממשיכת החרוזים אל פני השטח הפנימיים של הקרנית, שם הם עלולים להידבק.ודאו שהחרוזים יוצרים טבעת המפוזרת באופן שווה מסביב להיקף התא הקדמי. לאחר מכן, טפלו בעין המנותחת בטיפה אנטיביוטית לעין כדי למזער את הסיכון לזיהום. אפשרו לעכבר להתאושש על פד חימום עד שיתעורר לחלוטין, כאשר העין המנותחת פונה כלפי מעלה כדי למנוע זיהום והצטברות של חרוזים על פני השטח הפנימיים של הקרנית.לאחר יומיים לפחות של התאוששות, מדדו את ה-IOP כפי שהודגם קודם לכן בסרטון, ועקבו אחריו לפחות פעם בשבוע או יותר לפי הצורך, באותה שעה של היום. נתחו את התוצאות בהתאם לפרוטוקול הכתוב. ההזרקה של מיקרו-חרוזים מגנטיים לתא anterior chamber של עכברים בוגרים, כפי שמתואר בפרוטוקול זה, הובילה לעלייה חזקה וניתנת לשחזור של ה-IOP.כפי שניתן לראות כאן, שבוע לאחר הפרוצדורה, ה-IOP עלה מממוצע בסיס של 10, פלוס או מינוס 0.6 millimeters of mercury, ל-19, פלוס או מינוס 0.5 millimeters of mercury בעיניים עם יתר לחץ דם. טבלה זו מראה כי ה-IOP התייצב לאחר מכן, ונותר מוגבר בממוצע של 20 millimeters of mercury למשך ששה שבועות לפחות, נקודת הזמן המאוחרת ביותר שנבדקה במחקר זה. ה-IOP השיא הממוצע, בעיניים שהוזרקו להן micro-beads בשבועיים, שלושה שבועות ושישה שבועות לאחר הניתוח, היה 25 millimeters of mercury.כדי להעריך את אובדן תאי הגנגליון ברשתית, או RGC, נמדד מספר התאים החיוביים ל-BRN-3A בדגימות שטוחות (flat mounts) של רשתית שבוע, שבועיים, שלושה שבועות ושישה שבועות לאחר השראת יתר לחץ תוך-עיני. למרות שזוהתה עלייה משמעותית ב-IOP כבר לאחר שבוע אחד, לא נצפה אובדן משמעותי של גופי התא (soma) של ה-RGC במהלך השבועיים הראשונים. עם זאת, נצפה מוות תאי משמעותי שלושה וששה שבועות לאחר הניתוח.באיור זה, חתכים רוחביים של עצב ראייה שצבעו toluidine blue מראים אובדן משמעותי של אקסוני RGC בשבועיים שלושה ושישה בהשוואה לעצבי ראייה שלמים, מה שמעיד על כך שניתוח זה מוביל לאובדן אקסוני כפי שנצפה בגלאוקומה. לאחר רכישת מיומנות, ניתן לבצע את ההזרקה לעכבר אחד תוך 15 דקות. בעת ביצוע פרוצדורה זו, חשוב לנקוט באמצעים המתאימים כדי להבטיח שייהזרק אותו מספר של מיקרו-חרוזים (micro-beads) אל התא anterior chamber.פעולה זו תפחית את השונות שעלולה להתרחש בין החיות. לאחר צפייה בסרטון, תהיה לך הבנה טובה לגבי האופן שבו ניתן להשרות היתמטרופיה עינית (ocular hypertension) באמצעות הזרקת מיקרו-חרוזים מגנטיים לתא anterior chamber של עיני העכבר.

a-magnetic-microbead-occlusion-model-to-induce-ocular-hypertension

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

בסרטון זה, חולדה מורדמת עוברת הליך עיניים שבו מוזרקים חרוזים מגנטיים לתוך החדר הקדמי תחת שדה מגנטי כדי לחסום את הזווית האירידו-קרנית. חסימה זו חוסמת את הרשת הטרבקולרית, מונעת ניקוז הומור מימי ומובילה ללחץ תוך עיני מוגבר, הפוגע בתאי הגנגליון ברשתית ובעצב הראייה. זה מפתח מצב דמוי גלאוקומה.

אינדוקציה ניסיונית של גלאוקומה באמצעות חסימת זווית אירידו-קרנית במודל עכבר

לחץ תוך עיני מוגבר כרוני הנגרם באמצעות טיפול לייזר של meshwork trabecular בעיני עכבר. לחץ התוך עיני (IOP) הוא גבוה למשך מספר חודשים לאחר טיפול לייזר. הירידה של חדות ראייה ורגישות לקונטרסט של חיות ניסוי מנוטרת באמצעות בדיקת optomotor.

מודל עכבר לייזר המושרה של לחץ תוך עיני מוגבר כרוני לאפיון פגמים חזותיים

אנו מציגים שיטה להשראת לחץ תוך עיני מוגבר (IOP), על ידי הזרקת מיקרוספירות מגנטיות לעין העכברוש, כדי ליצור מודל של גלאוקומה. זה מוביל לעליית לחץ חזקה, ולמוות עצבי נרחב. פרוטוקול זה קל לביצוע, אינו דורש זריקות חוזרות ומייצר עליות IOP יציבות לאורך זמן.

ניסוי הגלאוקומה נגרמת על ידי הזרקת Ocular של מיקרוסכמות מגנטית

גלאוקומה מאופיינת בפגיעה בתאי גנגליון ברשתית. גרימת גלאוקומה במודלים של בעלי חיים יכולה לספק תובנה לגבי חקר מחלה זו. כאן, אנו מתארים הליך הגורם לאובדן RGCs במודל חולדה in vivo ומדגים את הכנת הרשתית השלמה לניתוח.

גלאוקומה וישכנע נוהל בבית<em&gt; In vivo</em&gt; מודל עכברוש ואת כל הר רשתית הכנה

יתר לחץ דם כרוני עינית הנגרמת על-ידי החלת בתפר circumlimbal אצל חולדות ועכברים, שמוביל התדרדרות תפקודית ומבניים של תאי גנגליון עקבית עם גלאוקומה.

דגם של גלאוקומה המושרה על ידי תפרים Circumlimbal אצל חולדות ועכברים

כאן, אנו מציגים פרוטוקול כדי לגרום לחץ דם עינית וglaucomatous ניוון בעיני העכבר על ידי הזרקה תאיים של שמן סיליקון ואת ההליך להסרת שמן סיליקון מן החדר הקדמי כדי להחזיר את הלחץ התוך בעינית מוגבה ל נורמלי.

סיליקון הפיך שמן המושרה מודל יתר לחץ דם בעכברים

מטרת פרוטוקול זה היא לאפיין מודל חדשני של ניוון עצבי גלאוקומטי המבוסס על צריבה תרמית של 360° של מקלעת כלי הדם הלימבלית, הגורמת ליתר לחץ דם עיני תת-חריף.

צריבה במעגל מלא של מקלעת כלי הדם הלימבלית לגלאוקומה הנגרמת בניתוח במכרסמים

פילמנטיות חסימה של עורק המוח התיכון הוא מודל משותף לחקר שבץ איסכמי בעכברים.

דוגמנות שבץ בעכברים - העורקים התיכון ספיגה מוחין עם דגם נימה

מודל Murine לפגיעה ריאות הנגרמת ההנשמה הוא כלי חשוב ללמוד פציעה ריאות...

לחץ אוורור מבוקר כדי לגרום פגיעה ריאות חריפה על עכברים

מודל Murine עבור איסכמיה בשריר הלב נפשית מראש איסכמי הוא כלי מחקר חשוב מנגנוני...

השימוש במערכת משקל תליה על חסימת העורקים הכליליים של עכברים

למד כיצד לגרום ליתר לחץ תוך-עיני בעכברים באמצעות הזרקת מיקרו-חלקיקים מגנטיים לחדר הקדמי של העין. שיטה זו מאפשרת חקר שינויים פתולוגיים מוקדמים בגלאוקומה לפני מוות של תאי גנגליון רשתית.

לחסימה Microbead מגנטי דגם כדי לגרום Ocular Hypertension-Dependent גלאוקומה עכברים

גלה סרטונים נוספים