Name: Transarterial מינהל oncolytic וירוסים לטיפול Locoregional של Orthotopic HCC אצל חולדות (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-04-15T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 55 s
Description: למד טיפול וירוסים אונקוליטיים דרך עורק הכבד לטיפול מקומי בסרטן הכבד (HCC) בעכברים. שיטה זו מאפשרת מתן ריכוזים גבוהים ישירות לגידולים ומשפרת את יעילות הטיפול בהשוואה למתן מערכתי.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכת על ידי תת-הפרויקטים SFB 824 C6 ו-C7 (DFG Sonderforschungsbereich 824), קרן המחקר הגרמנית, בון, גרמניה.

הערה: השלבים הבאים בוצעו בהתאם להנחיות של המוסד שלנו ואת השלטון המקומי בוואריה, גרמניה. כל הניסיונות לשחזר פרוטוקול זה חייבים להיעשות תוך הקפדה להנחיות המקומיות לטיפול האנושי של חיות, כפי שמכתיבים טיפול בבעלי חי ועדה מקומי שימוש. לדוגמא, מוסדות רבים דורשים כי כפפות סטריליות שחוקות במהלך הניתוח מכרסם. יתר על כן, עבודה עם וירוסים חייבת להתבצע בהתאם לתקנות מקומיות, מטפל לבטיחות אישית וסביבתית. יש להקפיד בנוגע להשלכה נכונה של פסולת מזוהמת לנקות מכשירים וסביבת עבודה (כלומר, על ידי מעוקר וניקוי עם חומר חיטוי אנטי המתאימה בהתאם להוראות היצרן). 1. הכנות לפני ניתוח החל <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעקר מכשירי ניתוח (כלומר, על ידי מעוקר). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לדלל את הנגיף approprריכוז iate, אשר ישתנה בהתאם הרעילות של הנגיף הספציפי שבשימוש ואת הרגישות של זן העכברים. הערה: לדוגמה, בעת שימוש וירוס שלפוחי stomatitis ב חולדות זכרים באפלו, אנחנו בדרך כלל להזריק 10 7 pfu בנפח 1 מ&quot;ל, המהווה את מינון נסבל מקסימום במודל זה. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מלא מראש את הנגיף (באמצעות טכניקה מזוהם) ב 1 מ&quot;ל מזרקים, ולצרף 30 מחטים G, מקפיד לחסל האוויר מן מזרק ומחט. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מכין את השטח כירורגי עם כל החומרים והציוד הנדרשים, ולרסס את האזור עם אתנול לחיטוי. מלאו כלי קיבול קטן עם תמיסת מלח סטרילית (0.9% NaCl) עבור הרטבת מטליות גזת אוזניים. </li></ol> 2. הכנת העכברוש <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נהל משכך כאבים (כפי שצוין על ידי הוועדה לטיפול ולשימוש המקומית בעלי חיים), על דק המתאים 30 מנה לפני תחילת ההליך הכירורגי. לדוגמה,לנהל מינון גבוה של דיפירון (100-200 מ&quot;ג / ק&quot;ג). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים חולדה באמצעות אינהלציה (isoflurane) או בזריקות (כלומר, תערובת של medetomidine (0.15 מ&quot;ג / ק&quot;ג), Midazolam (2 מ&quot;ג / ק&quot;ג), ו פנטניל (0.005 מ&quot;ג / ק&quot;ג), הידוע גם בשם MMF) הרדמה. נהל isolflurane דרך מאדה ב 1-3% ולהתאים לפי צורך כדי לשמור על נשימה נורמלית וקצב לב. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני שאתה ממשיך, להבטיח כי החולדה היא מסוממת לגמרי ולא מסוגל לחוש כאב על ידי צובט את כרית כף הרגל וההתבוננות לתגובה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למרוח משחת עיניים וטרינרית כדי למנוע יובש במהלך ההרדמה. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגלח את אזור הבטן מעצם החזה עד מעל איברי המין באמצעות גוזז שיער וטרינרים קטן. תשמור על עצמך כדי להשיג גילוח קרוב מבלי לפצוע את העור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תקן החולדה המיטה כירורגית באמצעות קלטת על הקדמי ו hindlimbs, ואם באמצעות הרדמה משאיפת, למקם את חוטמו לתוך חרטומו כראוי בגודל. הניחו כרית חימוםמלמטה העכברוש כדי לשמור על טמפרטורת הגוף. לחטא את אזור הבטן באמצעות חיטוי כיתה כירורגית, ואחריו שטיפת אלכוהול ויישום של צבע חיטוי. </li></ol> 3. laparotomy <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות אזמל מעוקל קטן, כגון 15 #, לעשות חתך אנכי קטן בשכבת העור ישירות לאורך קו האמצע. הרחב את החתך עד תהליך xyphoid. בשלב הבא, לחתוך את שכבת השריר על ידי הרמת בעדינות עם זוג מלקחיים Adson לעשות חתך אזמל, ולאחר מכן להרחיב את החתך עד תהליך xyphoid עם מספריים כירורגיות. תשמור על עצמך לא לנקב את האיברים של חלל הבטן או לפגוע כלי הקטן משני צדי תהליך xyphoid. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים מפשק פני הבטן כדי להפיץ את השרירים והעור ולחשוף את אזור הבטן כולו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרטיב שתי מטליות גזה 7.5 x 7.5 ס&quot;מ 2 עם תמיסת מלח פיזיולוגית סטרילית להפיץ אחד לרוחב החלק העליון של כירורגיתפתיחה ואחד בחלקו התחתון, כפי שמוצג באיור 2 א. </li></ol> בידוד 4. של עורק הכבד <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש בשתי מטליות מוליך כותנה לחלחו טבולת תמיסת מלח פיסיולוגי סטרילית, בעדינות להרים את המעיים cecum מתוך חלל הבטן, ומניח אותם על ספוגית הגזה הנמוכה. מקפל את הגזה על מנת לשמור על האיברים לחים להחזיק אותם מהדרך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השימוש בשתי מטליות המוליך צמר גפן טבולה, בעדינות להרים את האונה הכבדה לרוחב שמאל, אשר תהיה באונה הדומיננטית ביותר להציג בשלב זה. תהפוך את האונה כלפי מעלה, ו, באמצעות מספריים קטנים באביב, לחתוך דרך הממברנה הסיבי על החלק התחתון של האונה, המאפשר באונה להיות התהפכה לחלוטין כלפי מעלה ולנוח על גבי מקלון הגזה להציב בעבר. מקפלים את ספוגית גזה על האונה כדי להחזיקו במקום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המשך עם האונה הקרובה (caudate הקדמי), הנמצא כעת באונה הקדמית ביותר לאור. עם הסיוע דואר של מיקרוסקופ לנתח מלקחיים בסדר, לנתח את הקרום הדק המקיף את האונה כדי לשחרר אותו ולאפשר לו להיות התהפך בחופשיות כלפי מעלה. מניחים את האונה מתחת ספוגית גזה יחד עם האונה לרוחב שמאל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימו באונה caudate האחורי, אשר כעת יהיה גלוי. חזור על שלב 4.3 לנתח את אונת caudate האחורית לחלוטין להעיף אותו כלפי מעלה בתוך הגזה יחד עם האונה של הכבד להציב בעבר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רק מתחת למיקום המקורי של אונת caudate, למצוא את עורק הכבד הנפוץ, אשר יהיה גלוי כעת ומוכר בקלות על ידי הפעימה החזקה שלה. בעקבות עורק ימינה אנטומיים, להתבונן בחומר קרומי העבה מסתיר העורקים הכבדים gastroduodenal ונכונים מהעין. בעזרת מלקחיים בסדר, להרים את החומר הזה בעדינות לקרוע אותו, מקפיד להימנע מכל כלי קטן בתחום הזה. השתמש מטליות מוליך כותנה לעצור דימום שעלול להתרחש. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אתר אסניפי rterial, אשר יהיו נראות בבירור בעזרת מיקרוסקופ לנתח כאשר הקרומים הם גזורים כמו שצריכים. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש בשני מלקחיים בסדר, atraumatic, בזהירות לנתח את עורק הכבד הנפוץ, עורק gastroduodenal, ואת עורק הכבד הראוי כזה שהם משתחררים מן הקרומים המקיפים (איור 2 ב). </li></ol> 5. הכנה של העורק עבור הזרקה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעבור תפר 7-0 Prolene מתחת עורק gastroduodenal, ולהשתמש מיקרו-מחט בעל לקשור ליגטורה קבעה בקצה הדיסטלי, רק מעל ההסתעפות (ראה איור 1 עבור מיקום נכון). יש להמתין לפחות 2 אינץ &#39;של חומר תפר הנותר על הקצוות, ו לצבוט אותם עם בעל מחט למשוך את העורק למד, כמו באיור 2C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים מהדק קטן על עורק הכבד הנפוצה לחסום זמנית של זרימת הדם (איור 2 ג). הערה: זהו שדortant למנוע דימום מסיבי פעם המחט יוסרה העורק. יתר על כן, מחסימת זרימת דם בעורקים תאפשר למנהל וירוס איטי ויעילות התמרה טובה יותר. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חשוב: לעבוד במהירות כדי לצמצם את כמות הזמן כי זרימת דם נעצרת - לבצע את זריקת הקשירה הבאה של העורק תוך 5 דקות של מהדק את עורק הכבד הנפוץ. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במידת האפשר, להגדיל את ההגדלה על מיקרוסקופ לנתח, כך העורק gastroduodenal בפוקוס חד ומופיע גדול מספיק כדי להכניס את המחט 30 G במדויק. מניחים את המחט של המזרק זריקה לתוך לומן של עורק gastroduodenal ולאט לאט לדחוף את הבוכנה. הערה: מיקום נכון של המחט תגרום הפתרון המוזרק זורם ישירות דרך עורק הכבד הראוי ולקראת הכבד. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע את הזריקה מאוד לאט כדי למקסם את היעילות התמר. </li></ol></li> &lt;li&gt; לאחר עוצמת הזריקה כולו כבר מנוהל, לאט לחזור בו מחט מהעורק. הערה: לא צריך להיות שום דימום מאתר ההזרקה. במקרה כי הדימום מתרחש, הוא מציין כי המהדק לא ממוקם כראוי צריך להיות מותאם במהירות. </li></ol> סגירה 6. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעבור תפר שני 7-0 Prolene מתחת עורק gastroduodenal, ולקשור ליגטורה קבעה שנייה מעל הזריקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את מהדק מעורק הכבד הנפוץ. ודא זרימת הדם דרך עורק הכבד הראוי כלפי הכבד שוחזר. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותכים את הקצוות החופשיים של ליגטורה. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא שאין דימום לפני החזרת במעיים ובכבד אל חלל הבטן. תשמור על עצמך כי נספח מוחזר הכיוון המקורי שלה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לתפור את השריר והעור בשכבות נפרדות באמצעות חומר תפר 4-0 vicryl עם מחט מעוקל. מקום continuouהתפרים של כ בנפרד 1 מ&quot;מ ולמשוך בחוזקה. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במהלך שלב התפירה, לנהל משכך כאבים כגון עצירות (0.05 מ&quot;ג / קילו). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר חולדה מן ההרדמה. אם isoflurane נוצל בעבר, החולדה צריכה להכרתו בתוך מספר דקות. אם MMF כבר משמש הרדמה בזריקות, להרגיז אותו עם הזרקה תת עורית של Atipamezole (0.75 מ&quot;ג / ק&quot;ג), פלומאזניל (0.2 מ&quot;ג / ק&quot;ג), ו הנלוקסון (9.12 מ&quot;ג / ק&quot;ג), אשר יהיה להפוך את ההשפעות של ההרדמה ולאפשר החיות להכרתו בתוך 20 דקות. שמור חולדות חמות עם מנורת התחממות אינפרא אדומה במהלך שלב ההתעוררות הראשוני. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אל תשאירו חיה ללא השגחה עד שהוא שב להכרתו מספיק כדי לשמור שכיבה sternal. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אל תחזרו בעל חיים אשר עבר ניתוח לחברה של בעלי חיים אחרים עד התאושש לחלוטין. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צג חולדות שלאחר ניתוח סימנים פתולוגיים של מצוקה, עקבועם משככי כאבים כנדרש על ידי ועדת טיפול בבעלי חיים ושימוש המקומית. לדוגמה, עצירות יכולה להינתן 0.05 מ&quot;ג / ק&quot;ג כל 12 שעות. </li></ol>

<ol><li>Murray, C. J., Lopez, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence-based+health+policy+-+lessons+from+the+Global+Burden+of+Disease+Study%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Evidence-based health policy - lessons from the Global Burden of Disease Study.</a> Science. 274, 740-743 (1996).</li>
<li>Parkin, D. M., Bray, F., Ferlay, J., Pisani, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estimating+the+world+cancer+burden%3A+Globocan+2000%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Cancer%22%5BJournal%5D)">Estimating the world cancer burden: Globocan 2000.</a> Int J Cancer. 94, 153-156 (2001).</li>
<li>Bruix, J., Sala, M., Llovet, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemoembolization+for+hepatocellular+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Chemoembolization for hepatocellular carcinoma.</a> Gastroenterology. 127, 179-188 (2004).</li>
<li>Miraglia, R., Pietrosi, G., Maruzzelli, L., Petridis, I., Caruso, S., Marrone, G., Mamone, G., Vizzini, G., Luca, A., Gridelli, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+of+transcatheter+embolization%2Fchemoembolization+%28TAE%2FTACE%29+for+the+treatment+of+single+hepatocellular+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Efficacy of transcatheter embolization/chemoembolization (TAE/TACE) for the treatment of single hepatocellular carcinoma.</a> World J Gastroenterol. 13, 2952-2955 (2007).</li>
<li>Breedis, C., Young, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+blood+supply+of+neoplasms+in+the+liver%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">The blood supply of neoplasms in the liver.</a> Am J Pathol. 30, 969-977 (1954).</li>
<li>Nakashima, T., Kojiro, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathologic+characteristics+of+hepatocellular+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Liver+Dis%22%5BJournal%5D)">Pathologic characteristics of hepatocellular carcinoma.</a> Semin Liver Dis. 6, 259-266 (1986).</li>
<li>Heo, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Randomized+dose-finding+clinical+trial+of+oncolytic+immunotherapeutic+vaccinia+JX-594+in+liver+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Randomized dose-finding clinical trial of oncolytic immunotherapeutic vaccinia JX-594 in liver cancer.</a> Nat Med. 19, 329-336 (2013).</li>
<li>Altomonte, J., Marozin, S., Schmid, R. M., Ebert, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineered+newcastle+disease+virus+as+an+improved+oncolytic+agent+against+hepatocellular+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Engineered newcastle disease virus as an improved oncolytic agent against hepatocellular carcinoma.</a> Mol Ther. 18, 275-284 (2010).</li>
<li>Shinozaki, K., Ebert, O., Kournioti, C., Tai, Y. S., Woo, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oncolysis+of+multifocal+hepatocellular+carcinoma+in+the+rat+liver+by+hepatic+artery+infusion+of+vesicular+stomatitis+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Oncolysis of multifocal hepatocellular carcinoma in the rat liver by hepatic artery infusion of vesicular stomatitis virus.</a> Mol Ther. 9, 368-376 (2004).</li>
<li>Shinozaki, K., Ebert, O., Woo, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Eradication+of+advanced+hepatocellular+carcinoma+in+rats+via+repeated+hepatic+arterial+infusions+of+recombinant+VSV%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Eradication of advanced hepatocellular carcinoma in rats via repeated hepatic arterial infusions of recombinant VSV.</a> Hepatology. 41, 196-203 (2005).</li>
<li>Altomonte, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synergistic+antitumor+effects+of+transarterial+viroembolization+for+multifocal+hepatocellular+carcinoma+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Synergistic antitumor effects of transarterial viroembolization for multifocal hepatocellular carcinoma in rats.</a> Hepatology. 48, 1864-1873 (2008).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

למרות שהזרקה תוך-גידולית ישירה היא ללא ספק השיטה הפשוטה ביותר להביא להעברת גידול יעילה של גוש גידול יחיד, עירוי עורקי בכבד מייצג נתיב מתן אידיאלי להתמקדות ב-HCC מולטיפוקלי, אורתוטופי. שיטה זו הוכחה כבטוחה ויעילה לטיפול ב-HCC בחולדות בעלות יכולת חיסונית עם נגיפים אונקוליטיים. יתר על כן, מכיוון שחולי HCC מטופלים באופן שגרתי על ידי יישום טרנס-עורקי של כימואמבוליזציה, השיטה המתוארת כאן ניתנת לתרגום בקלות לסביבה קלינית.
חסרון ברור של מתן טיפולים בגידולים בעורקי הכבד במודלים פרה-קליניים של מכרסמים...

Hepatocellular carcinoma (HCC) הוא הסרטן החמישי הנפוץ בעולם, ואת הסיבה השלישית למוות מסרטן, מה שהופך אותו דאגה בריאותית משמעותי 1,2. עבור חולים אשר אינם זכאים כריתה של הגידול, או אלה השתלת כבד ממתינה, טיפול locoregional מעורבים אמבוליזציה transarterial (TAE) או כימואמבוליזציה transarterial (TACE) מוחלים כמו טיפול פליאטיבי תקן 3,4. טיפולים אלה לנצל את התכונה הייחודית של אספקת דם כפולה בכבד לפיה גידולים ניזונים כמעט אך ורק על ידי זרימת דם בעורקים כבדה ואילו הכבד סביב מקבל את רוב אספקת הדם שלה מעורק הפורטל 5,6. בשל efficacies המצומצם מאוד של טיפולים הוקמו עבור HCC, וירוסי oncolytic צמחו כמו רפוי אלטרנטיבה מבטיחה. JX-594, לאחרונה את השם Pexa-Vec, הוא וקטור vaccinia thymidine-deleted קינאז, חמוש-מ גרנולוציטacrophage גורם מגרה המושבה (GM-CSF), אשר השלימה ניסוי קליני שלב II עבור HCC 7. לאחרונה, וקטור וירוס stomatitis שלפוחי רקומביננטי (VSV) להביע אינטרפרון-בטא האדם נכנס לשלב הראשון של הניסוי הקליני עבור HCC sorafenib-עקשן (NCT01628640). כמו וירוסי oncolytic להתקרב קבלת אישור עבור יישומים קליניים עבור HCC בחולים, הצורך בחיפוש אחר דרך ניהול יעיל למקד מחל מולטיפוקליות ניכרת. בעוד משלוח מערכתי אינו יעיל בדרך כלל עקב תמרת גידול יעילה, יישומי intratumoral יכולים להגביל את היעילות של הטיפול אל הגידול המוזרק, עוזבים נגעים מיקרוסקופים uninjectable רגישים התקדמות מחלה. הקמנו שיטה לבודד את עורק הכבד בחולדות לנהל טיפול וירוס oncolytic באופן locoregional למקד HCC orthotopic. אנחנו הוכחנו כי תוצאות תוואי הממשל הזה ב לבטוח ויעילve תמרה של גושי HCC מולטיפוקליות, וכתוצאה מכך הארכת הישרדות משמעותית בחולדות מוסמכות חיסוניות 8-10. כאן אנו מתארים את השיטה של ​​גישה, לנתח, והזרקה לעורק הכבד בחולדות. סכימה של ההליך מוצגת באיור 1 (שפורסם בעבר 9)

<table><tbody><tr><td>קוצץ וטרינרי</td><td>Aesculap</td><td>GT415</td><td>גוזם קטן ואלחוטי אידיאלי להסרת פרווה מאזור הניתוח</td></tr><tr><td>סטריאומיקרוסקופ</td><td>Zeiss</td><td>Stemi SV6</td><td></td></tr><tr><td>30 G מחטים</td><td>בראון</td><td>4656300</td><td>30 G x &frac12; "</td></tr><tr><td>1 מ"ל מזרקים</td><td>בראון</td><td>9161406V</td><td>מזרק טוברקולין</td></tr><tr><td>חד פעמי אזמל</td><td>נוצה</td><td>2975#</td><td>15#15 להב&nbsp;</td></tr><tr><td>מספריים כירורגיים</td><td>סטנדרטיים כלי מדע עדינים</td><td>14001-13&nbsp;</td><td>חד/קהה, לפתיחת עור ושרירים</td></tr><tr><td>מלקחיים של אדסון</td><td>Fine Science</td><td>Tools 1101-12</td><td>עם שיניים, לאחיזת עור ושרירים</td></tr><tr><td>מפסק Alm</td><td>Fine Science Tools</td><td>17008-07</td><td>עם שיניים קהות, לפיזור חלל הבטן פתוח במהלך הניתוח</td></tr><tr><td>ספוגיות גזה</td><td>Lohmann & Rauscher</td><td>18504</td><td>7.5 ס"מ x 7.5 ס"מ, יש לבצע חיטוי לפני השימוש</td></tr><tr><td>במקלוני אפליקטור עם קצה כותנה</td><td>Lohmann & Rauscher</td><td>11970</td><td>סטרילי</td></tr><tr><td>עדין קצה foreceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11063-07</td><td>0.4 מ"מ, קצה זוויתי, לניתוח עורק הכבד</td></tr><tr><td>Vannas מספריים קפיציים</td><td>Fine Science</td><td>Tools 91500-09</td><td>לחיתוך עדין</td></tr><tr><td>מחזיק מיקרו-מחט</td><td>Fine Science Tools</td><td>12076-12</td><td>לקשירת עורק תריסריון</td></tr><tr><td>מחזיק מחט</td><td>Fine Science Tools</td><td>12005-15</td><td>לסתות טונגסטן קרביד</td></tr><tr><td>7-0 תפרי פרולן</td><td>Ethicon</td><td>8648H</td><td>תפר פוליפרופילן עם מחט מעוקלת, לקשירת עורק התריסריון</td></tr><tr><td>4-0 תפרי ויקריל</td><td>Ethicon</td><td>V3040H</td><td>עם מחט מעוקלת מחוברת</td></tr><tr><td>מנורת התחממות אינפרא אדום</td><td>Beurer</td><td>IL11</td><td>לשמירה על טמפרטורת הגוף לאחר הניתוח</td></tr></tbody></table>

transarterial מינהל oncolytic וירוסים לטיפול locoregional של orthotopic hcc אצל חולדות

Transarterial Administration of Oncolytic Viruses for Locoregional Therapy of Orthotopic HCC in Rats

קרצינומה הפטו-תאית (HCC) היא מחלה עם אפשרויות טיפול מוגבלות ופרוגנוזה גרועה. בשנים האחרונות, וירותרפיה אונקוליטית הוכיחה את עצמה ככלי פוטנציאלי רב עוצמה להילחם בממאירות. בשל אספקת הדם הכפולה הייחודית בכבד, ניתן ליישם טיפולים מקומיים לגידולי כבד אורתוטופיים, הניזונים בעיקר מזרימת דם עורקית. הראינו בעבר כי העברה עורקית בכבד של נגיפים אונקוליטיים מביאה ליעילות התמרה בטוחה ויעילה של נגעי HCC מולטיפוקליים, וכתוצאה מכך הארכה משמעותית של ההישרדות בחולדות בעלות יכולת חיסונית. הליך זה מחקה מקרוב את היישום של אמבוליזציה טרנס-עורקית בחולים, שהוא הטיפול הפליאטיבי הסטנדרטי הניתן לחולי HCC רבים. היכולת לתת טיפולים בגידול דרך עורק הכבד בחולדות מאפשרת מודל פרה-קליני מתוחכם ביותר להערכת וקטורים נגיפיים חדשים בפיתוח. כאן אנו מתארים את הפרוטוקול המפורט למיקרו-דיסקציה של עורק הכבד לעירוי של וקטורים של וירוסים אונקוליטיים לטיפול ב-HCC אורתוטופי.

עם ניסיון, שיעור הצלחה של כמעט 100% (כלומר העורק היה גזור בהצלחה והזריק, וחית שרד ניתוח) יכול להיות מושגת. עם זאת, מצבו הבריאותי של החולדה לפני הניתוח (מידת נטל הגידול, תפקודי כבד הבסיסית, וכו &#39;) ללא ספק ישחק תפקיד בתוצאה של התערבות כירורגית. לאחר ניתוח, ניתן לצפות חולדות לחוות הרזיה חולפת מעלה קל, חולף של אנזימי כבד, גם אם חיץ לבד, בלי וירוס, הוזרק. <p class="jove_content" fo:keep-together.within-page="1" style=";text-align:right;...

וירותרפיה אונקוליטית נמצאת בפיתוח כתרופות חדשניות לטיפול בקרצינומה של הכבד (HCC). כאן אנו מתארים שיטה לטיפול מקומי ב-HCC באמצעות מתן עורקי כבד של נגיף אונקוליטי.

Transarterial מינהל oncolytic וירוסים לטיפול Locoregional של Orthotopic HCC אצל חולדות

Hepatocellular carcinoma (HCC) is a disease with limited treatment options and poor prognosis.  In recent years, oncolytic virotherapies have proven ...

המטרה הכוללת של התערבות כירורגית זו היא להביא טיפול בנגיף אונקוליטי באופן לוקורגיונלי באמצעות מתן בעורק הכבדי לנגעי קרצינומה של התאי הכבדיים (HCC) אורתוטופיים. שיטה זו יכולה לסייע במתן מענה לשאלות מפתח בתחום הנגיפים האונקוליטיים, כגון מהי היעילות של טיפול המיושם באופן לוקורגיונלי לטיפול ב-HCC אורתוטופי? היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא מאפשרת הזרקה של טיטרים גבוהים של נגיף אונקוליטי למספר נגעי HCC.מגבלה של מתן תוך-גידולי או מערכתי. טכניקה זו מחקה את היישום של כימואמבוליזציה ת동안ריאלית. הטיפול הסטנדרטי עבור חולים רבים עם HCC, המאפשר תרגום מצוין של נתונים פרה-קליניים.לפני תחילת הניתוח, יש ללבוש את ציוד המיגון האישי המתאים ולחטא את אזור הניתוח ואת הציוד ב-70% ethanol. יש לדלל את הנגיף לריכוז המתאים, בהתאם לרעילות הנגיף ולרגישות של זן החולדה שבו נעשה שימוש. לאחר מכן, יש למלא מזרקים של מיליליטר אחד בנגיף המדולל, ולצייד את המזרקים במחטים בכיול 30 Gauge, תוך הקפדה על הסרת בועות אוויר.יש לוודא שהחולדה נמצאת תחת הרדמה מלאה על ידי בדיקת חוסר תגובה לצביטה בכרית כף הרגל. באמצעות סכין מנתחים קטנה ומעוקלת, בצעו חתך אנכי קטן בעור, ישירות לאורך קו האמצע, והרחיבו את הפתח עד לתהליך החרב (xiphoid process). לאחר מכן, חתכו את שכבת השריר באופן דומה, תוך הקפדה לא לנקב את איברי חלל הבטן.הנח רטראקטור (מרחיב) לרוחב הבטן כדי להפריד את השרירים והעור ולחשוף את כל אזור הבטן. לאחר מכן, הרטב שתי רפידות גזה בגודל 7.5 על 7.5 סנטימטר בתמיסת סליין פיזיולוגית והנח רפידה אחת בחלקו העליון של הפתח הכירורגי ואת השנייה בחלקו התחתון. כדי לבודד את העורק הכבדי, השתמש תחילה בשני מקלוני צמרגב לחים כדי להעביר בעדינות את המעיים ואת המעי העיוור אל מחוץ לחלל הבטן אל על רפידת הגזה התחתונה, וקפל את הגזה מעל האיברים כדי לשמור על לחותם.בשלב הבא, הרימו בעדינות והפכו את האונה הצדדית השמאלית של הכבד כלפי מעלה על גבי הגזה העליונה, והשתמשו במספרי קפיץ קטנים כדי לחתוך את הממברנה הסיבית בצדה התחתון של האונה. קפלו את הגזה מעל האונה כדי להחזיקה במקומה. לאחר מכן, באמצעות מיקרוסקופ דיסקציה ופינצטה עדינה, בצעו דיסקציה של הממברנה הדקה המקיפה את האונה הגבייתית (caudate lobe) הפנימית, והפכו את האונה על גבי הגזה העליונה.הנח את האונה הזנבית הפנימית תחת קיפול הגזה יחד עם האונה הצדית השמאלית, ולאחר מכן בצע דיסקציה של האונה הזנבית האחורית באותו אופן. לאחר הנחת האונה הזנבית האחורית תחת הגזה, אתר את העורק הכבדי המשותף לפי הדופק החזק שלו. עקב אחר העורק לכיוון ימין אנטומי, והשתמש בפינצטה עדינה כדי להסיר את הרקמה הקרומית העבה המסתירה את העורקים הגסטרו-דואודנלי והכבדי העצמי.עצרו כל דימום באמצעות מקלוני צמר. לאחר מכן, השתמשו בשני פינצטות עדינות לאטראומטיות כדי להפריד בזהירות את העורקים הכבדיים המשותפים, הגסטרו-דודנליים והכבדיים הפרופרי מהממברנות שסביבם. כדי להזריק לעורק הכבדי, השחילו תחילה תפר prolene 7-0 מתחת לעורק הגסטרו-דודנלי, והשתמשו במחזיק מחטים מיקרוסקופי כדי לקשור ליגטורה קבועה בקצה הדיסטלי של העורק, ממש מעל הפיצול, תוך השארת כחמישה סנטימטרים של חומר תפירה בכל קצה.בשלב הבא, הצב תפס קטן על העורק הכבדי המשותף (common hepatic artery) כדי לחסום זמנית את זרימת הדם. בתוך חמש דקות מהנחת התפס, הגדל את ההגדלה עד שהעורק הגסטרודואודנלי (gastroduodenal artery) יהיה בפוקוס חד וייראה גדול מספיק להחדרה מדויקת של המחט. לאחר מכן, הכנס את מחט מזרק ההזרקה לתוך הלומן של העורק הגסטרודואודנלי, ולחץ באיטיות על הבוכנה כדי למקסם את יעילות הטרנסדוקציה.לאחר שהוזרק כל נפח ההזרקה, משוך לאט את המחט מהעורק, והעבר תפר prolene שני במידה 7-0 מתחת לעורק הגסטרודואודנלי. קשור ליגטורה קבועה שנייה מעל אתר ההזרקה והסר את התפסן מהעורק הצביתי המשותף. ודא שזרימת הדם דרך העורק הצביתי העצמי לכיוון הכבד חודשה, וגזור את הקצוות החופשיים של הליגטורות.יש לוודא שאין דימום פנימי. לאחר מכן, החזירו את הרקמות שהוצאו אל חלל הבטן. באמצעות חוטי vicryl 4-0 ומחט מעוקלת, תפרו את השריר ואת העור בשכבות נפרדות בתפרים רציפים במרווחים של כ-1 millimeter זה מזה.לאחר מכן, יש לעקוב אחר בעל החיים עד להחלמתו המלאה. קינטיקת השכפול של הנגיף בתוך הגידול תלויה בסוג הנגיף. לדוגמה, שיא השכפול של נגיף הסטומטיס הוסיקולרי (vesicular stomatitis virus) מתרחש בתוך יום אחד מההזרקה.עם מוקדים נגיפיים רבים, הורה נמצא באופן בלעדי בתוך קשרי ה-hepatocellular carcinoma של בעלי החיים המוזרקים. בניגוד לכך, נגיף מחלת ניוקאסל (Newcastle disease virus) מראה קינטיקה ממושכת של רבייה נגיפית, כאשר שיאי הטיטרים של הנגיף מופיעים ביום החמישי לאחר ההזרקה. בשל הספציפיות התומה המובנית של הנגיפים, הפתוגן מפונה במהירות מרקמת הכבד הנורמלית שמסביב.בנוסף, ניתוח מורפומטרי של קשרי גידול שנבחרו באופן אקראי וטופלו באמצעות וקטור של וירוס הסטומטיס וסיקולרי (vesicular stomatitis virus) מדגים כי יעילות הטרנסדוקציה של הגידול אינה נמצאת במתאם עם גודל הגידול. מתן תת-עורקי של מיקרוספירות עמילן הניתנות לפירוק, במקביל לתמיסה הוויראלית, גורם לאמבוליזציה כמעט מלאה של קשרי הגידול, תוך השפעה מינימלית על הפרפוזיה של רקמת הכבד התקינה. כפי שמוצג עוד יותר בתמונות MRI עם הגברת ניגודיות דינמית באמצעות חומר ניגודיות המבוסס על גדוליניום.במידה ושולטים בטכניקה זו, ניתן להשלימה תוך 20 דקות, אם היא מבוצעת כראוי. בעת ביצוע הליך זה, חשוב לזכור להכין את כל הציוד מראש לפני מתן ההרדמה, כדי לצמצם את הזמן הנדרש להתערבות. לאחר צפייה בסרטון זה, תרכשו הבנה טובה כיצד לבצע דיסקציה של העורק הכבדי ולהכינו להזרקה של תמיסות וירוס אונקוליטי לטיפול לוקורגיונלי ב-HCC.זכרו כי עבודה עם וירוסים עלולה להיות מסוכנת ביותר, ויש לנקוט תמיד באמצעי זהירות, כגון לבישת ביגוד מגן אישי וחיטוי נאות של אזור העבודה והמכשירים, בעת ביצוע פרוצדורה זו.

transarterial-administration-oncolytic-viruses-for-locoregional

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

במאמר זה, אנו מתארים את הזיהוי של adeno הקשורים וירוס סרוטיפ 3 (AAV3) כווקטור היעילה ביותר להכוונת האדם תאים סרטניים בכבד.

יעילות גבוהה התמרה של תאים סרטניים בכבד על ידי סרוטיפ Adeno-Associated וירוס רקומביננטי 3 וקטורים

אנו מציגים גרסה לא קל ליצור בטכניקה של שתי השרוול קלאסית השתלת כבד orthotopic בחולדה.

השתלת כבד Orthotopic בחולדות

הסרטון מדגים העברה לוקואזורית של וירוסים אונקוליטיים באמצעות הזרקת עורקי כבד כגישה טיפולית לקרצינומה הפטוצלולרית. נגיפים אלה משתכפלים באופן סלקטיבי בתאי הגידול, גורמים לליזה של תאים ומשחררים אנטיגנים הקשורים לתאי גידול. תהליך זה גורם למוות תאי אימונוגני, וגורם לתגובה אנטי-סרטנית.

התמקדות בגידולי כבד עם וירוסים אונקוליטיים דרך עורק הכבד

השתלה כבד עזר מספקת תמיכה זמנית בכשל כבד אקוטי, עד התחדשות של הכבד הכושל. השתלת heterotopic עזר הכבד (אלט) עם arterialization וריד שער (PVA) הופכת את תפקוד כבד מספיק. פיתחנו טכניקה דומה בעכברים, כדי לבחון את ההשפעה של arterialization וריד שער על המורפולוגיה והתפקוד של השתל.

Heterotopic עזר עכברוש כבד השתלה עם זרימה מוסדר פורטל וריד Arterialization בכישלון חריף כבדית

השחזור של הווריד הנבוב suprahepatic (SHVC) נשאר צעד קשה בהשתלת הכבד orthotopic חולדה. במאמר זה אנו מראים פרוטוקול צעד אחר צעד עבור שחזור SHVC בחולדות בטכניקה השקה מגנטיים חדשניים.

מודל עכברוש של Orthotopic השתלת כבד בטכניקה השקה מגנטיים חדשניים עבור שחזור הנבוב Suprahepatic

מטרת מאמר זה היא לספק פריימר עבור פיתוח והשתמש בדגם ארנב קרצינומה VX2 של סרטן הכבד.

פיתוח ושימוש Angiographic של המודל VX2 הארנב של סרטן הכבד

כאן, אנו מתארים את ההתפתחות של מודל מורטין רלוונטי קלינית של סרטן הכבד לכידה של תכונות החיסונית אופייני של סרטן hepatocellular (HCC).

מודל העכבר המושרה של הפאציט הנגרמת על ידי מדגם של סרטן הפטאותאי העולה בקביעת דלקת הכבד פיברוזיס

הזרקת וריד פורטל של אורגנואידים מסרטן המעי הגס (CRC) יוצרת גרורות כבד עשירות בסטרומה. מודל עכבר זה של גרורות כבד CRC מייצג כלי שימושי לחקר אינטראקציות בין גידול לסטרומה ולפיתוח טיפולים חדשניים המכוונים לסטרומה כגון טיפולים גנטיים בתיווך וירוסים הקשורים לאדנו.

הזרקת וריד פורטל של אורגנואידים לסרטן המעי הגס לחקר סטרומה גרורות בכבד

כאן, אנו מציגים פרוטוקול ליצירת קסנושתרים אורתוטופיים של קרצינומה הפטוצלולרית עם ובלי קשירת עורק הכבד ומבצעים הדמיית טומוגרפיה לא פולשנית של פליטת פוזיטרונים (PET) של היפוקסיה גידולית באמצעות [18 F]Fluoromisonidazole ([18 F]FMISO) ו- [18 F]Fluorodeoxyglucose ([18F]FDG).

הדמיית PET/MR לא פולשנית במודל עכבר אורתוטופי של קרצינומה הפטוצלולרית

וירוסים oncolytic הם מבטיחים סרטן ותרופות. היכולת לוודא את infectability של דגימות רקמה חיה המתקבל חולים לפני הטיפול הוא יתרון ייחודי של גישה זו הטיפולי. פרוטוקול זה מתאר כיצד תהליך רקמות...

Ex Vivo זיהום של רקמה חיה עם וירוסים oncolytic

למד טיפול וירוסים אונקוליטיים דרך עורק הכבד לטיפול מקומי בסרטן הכבד (HCC) בעכברים. שיטה זו מאפשרת מתן ריכוזים גבוהים ישירות לגידולים ומשפרת את יעילות הטיפול בהשוואה למתן מערכתי.

Transarterial מינהל oncolytic וירוסים לטיפול Locoregional של Orthotopic HCC אצל חולדות

גלה סרטונים נוספים