שיטה משופרת עבור אינטובציה מהירה של קנה הנשימה של עכברים

המטרה הכוללת של הליך זה, היא לספק מתן מהיר, קל ואמין של ריאגנטים לריאות העכברים באמצעות אינטובציה. השיטה גם מגבילה את הסיכון לנזק שיורי לרקמות הסובבות והיא זולה. שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בביולוגיה הבסיסית של הריאות ובמנגנונים של תחומי מחלות.

כגון פגיעה ריאתית חריפה ופיברוגנזה. היתרונות העיקריים של טכניקה זו הם שהיא ניתנת לשחזור מאוד, קלה לשליטה, אינה דורשת ציוד מיוחד או זמני התאוששות ארוכים. יש לבצע את ההליך באמצעות כלים מעוקרים.

אז חיטוי גם את מלקחיים הקצה הקהה וגם את המדכא. במכסה מנוע מעוקר, הכינו מלאי עבודה של ריאגנט למתן באמצעות האינטובציה. מומלץ נפח בולוס בין 30 ל -45 מיקרוליטר.

סוניקציה של התמיסה למשך 10 דקות ב-35 קילו-הרץ כדי להבטיח ערבוב אחיד. כעת, הכינו את סביבת העבודה. הקצה לפחות מטר מרובע של שטח לסביבת העבודה עצמה.

כמו גם מיקומים מובהקים לבעלי החיים לפני ואחרי ההליך. כעת, הכינו לוח נהלים. דגם מותאם אישית זה נחתך מגיליון אלומיניום ומחוזק על ידי תושבת T.

לוחות מסחריים דומים זמינים גם כן. בעזרת כמה רצועות סרט, קבע את בסיס לוח ההליכים לספסל, כך שהוא יהיה ישירות מול הנסיין. לאחר מכן קשרו תפר באורך של 4.0 בין שני ברגי המיקום של לוח ההליכים.

לאחר מכן, בנה ספירומטר. הסר את הבוכנות משלושה מזרקים של מיליליטר. לאחר מכן טען עד 60 מיקרוליטר PBS לחלק העליון של כל חבית מזרק.

אבטח באופן רופף אחד משלושת המזרקים הללו לרכזת של קטטר. בעת השימוש, אוויר הנובע מקנה הנשימה, יגרום ל-PBS בקנה לעלות ולרדת. הנח את זה ליד לוח ההליכים.

הנח את שני המזרקים הנוספים האחרים בהישג יד כדי לשמש כגיבוי. לאחר מכן, למזרק רביעי, שאבו 300 מיקרוליטר אוויר והניחו אותו בצד אחד של הלוח. הכינו גם כמה סרטים באורך של שישה סנטימטרים כדי להדק את החיה ללוח.

לאחר מכן הגדר תא איזופלורן במידת הצורך. חבר את קווי החמצן, האיזופלורן והוואקום ליציאות המתאימות בתא ולשואב המרווח. התחל בהרדמת העכבר.

חשוב לציין, מכיוון שגורמים כמו גיל, משקל ובריאות החיה יכולים לשנות את תגובת חומרי ההרדמה, כל מעבדה צריכה לייעל את החשיפה לאיזופלורן כדי לענות על הצרכים שלה. בזמן ההמתנה, טען את בולוס המגיב לקצה פיפטה, והניח אותו בצד. כאשר העכבר מורדם, תלו אותו בחותכות העליונות שלו מהחוט על פלטפורמת ההליך, כאשר גב בעלי החיים שוכב שטוח על משטח הפלטפורמה.

כעת, היזהרו לא להגביל את האוורור, הדביקו באופן רופף את החלק התחתון של חלל בית החזה, ממש מעל הסרעפת, לפלטפורמה, כדי לשמור על החיה מיושרת במהלך ההליך. לאחר מכן, הגדר את תאורת צוואר האווז ל-80 עד 100%מקם את האור סנטימטר עד שני סנטימטרים מפני העור ליד מקלעת השמש ובדוק באופן קבוע שהוא לא מחמם את העור יתר על המידה. מאחורי הפלטפורמה השתמש במלקחיים הקהים כדי לאתר את הלשון.

לאחר מכן היזהר להימנע מהחותכות התחתונות, אחוז בעדינות ומשוך את הלשון החוצה מחלל הפה. תוך כדי אבטחת הלשון, משטחים אותה עם המדכא ביד הלא דומיננטית, ומאפשרים למלקחיים להשתחרר. כעת, הנח את צוואר האווז בערך ממקלעת השמש לסמפונות הגבעול הראשי כדי להאיר את קנה הנשימה.

ניתן להבחין בקלות בקנה הנשימה גם על ידי פעולת הנשימה, שתגרום לאור להשתנות בעוצמתו כשהוא עוזב את קנה הנשימה. כאשר הוא ממוקם נכון, ניתן לראות את קנה הנשימה כפין אור מרכזי, עם אור סביבתי מינימלי בחלל הפה עצמו. הקטטר לא אמור להיכנס לחלל הפה עד שהנוף של קנה הנשימה יהיה אידיאלי.

לא ניתן להראות את קנה הנשימה באמצעות מניפולציה של מקור האור או המדכא. על החוקרים לשחרר את הלשון ולנסות שוב את ההליך. לאחר מכן, זווית המזרק כדי לעקוב אחר הנתיב הטבעי של קנה הנשימה.

והורד את קצה הצנתר בגודל 22, כשהמזרק המצורף המכיל את ה-PBS, ישר לתוך הלומן. כעת, הזינו את הקטטר בחמישה מילימטרים נוספים והסירו את מדכא הלשון. אם תמקם נכון את בועת ה-PBS בחבית תתחיל לעלות ולרדת עם כל נשימה.

התאזר בסבלנות כשאתה מחפש אינדיקטור זה מכיוון שגם טשטוש כבד וגם קל יכול לשנות את תדירות הנשימה. לאחר מכן העבירו את המזרק ליד הלא דומיננטית. תוך כדי אחיזה ברכזת, הסר בעדינות את המזרק והשאיר את הקטטר במקומו.

מהיד הדומיננטית, הפקידו את הבולוס המוכן של המגיב ישירות למרכז רכזת הצנתר. לאחר מכן חבר את המזרק השני עם 300 מיקרוליטר אוויר והוציא את האוויר לרכזת. זה יעזור להבטיח שהבולוס יתפזר היטב בריאות.

כעת, הסר את המזרק והחלף אותו במזרק המכיל את בועת ה- PBS. הבועה תמשיך לעלות ולרדת אם ההליך בוצע בהצלחה. כעת, הסר את הקטטר והסרט.

והניחו את החיה במקום חם ויבש עד שהיא חוזרת להכרה. בדרך כלל תוך מספר דקות. עכברים שעברו אינטובציה היו במעקב יומיומי לירידה במשקל.

עכברים נאספו לאחר ארבעה, 10 ו-17 ימים לאחר אינטובציה תוך-קנה עם בלאומיצין. שטיפת הסימפונות נאספה מהריאות הללו ונותחה. רמות גבוהות של IgM הדגימו עלייה משמעותית תלוית זמן בחדירות הריאות המעידה על תפקוד לקוי של מחסום האפיתל ו/או האנדותל.

הריאות הימניות היו מקובעות ומוכתמות בטריכרום של מאסון. התגובה הפיברוגנית, סמן מבוסס היטב לתכולת הקולגן הכוללת, כומתה. החלקים ההיסטולוגיים העידו על עיבוי תלוי טיפול של האינטרסטיציום הריאתי, ועלייה בנגעים פיברוטיים.

לאחר שליטה, ניתן לבצע טכניקה זו תוך פחות מדקה אם היא מבוצעת כראוי. בעת ניסיון הליך זה חשוב לזכור כי מניפולציה של הרקמות הרכות המקיפות את קנה הנשימה אינה הכרחית או מומלצת. וזה יכול לסכן גם את בריאות החיה, וגם את שלמות הניסוי.