Name: שיטה משופרת עבור אינטובציה מהירה של קנה הנשימה של עכברים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-02-22T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 46 s
Description: למדו שיטה משופרת לאינטובציה מהירה של קנה הנשימה בעכברים לחקר ביולוגיית הריאה ופציעות ריאה חריפות. השיטה מבטיחה ניהול חומרים ישירות לריאות עם נזק מינימלי לרקמות מסביב.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מודים בריאן ג&#39;ונסון של היסטולוגיה והדמיה Core באוניברסיטת וושינגטון לעזרה עם מכתים trichrome וניתוח. עבודה זו נתמכה על ידי HL098067 ו HL089455 מענקים NIH.

הטיפול בבעלי החיים המוסדי השתמש הוועדה (IACUC) באונ&#39; וושינגטון Cedars-Sinai Medical Center אשרה את עבודת החיה הכרחית ללימודים אלה. 1. הכנה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעקר הן מלקחי הסוף הבוטים החיטוי באמצעות depressor. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש ארון בטיחות ביולוגית, להכין מלאי העבודה של BLM ב PBS מן אבקת lyophilized. Sonicate הפתרון במשך 10 דקות ב 35 Khz כדי להבטיח ערבוב אפילו. הערה: נפח כולל של בין 30 ל 45 μl מומלץ למנוע וריאצית pipetting בקצה נמוך, וחנק עם נפחים גדולים יותר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכינו סביבת עבודה נקייה הכוללת כ 1 מ &#39;2 עבור ההליך עצמו, כמו גם במקומות המיועדים כלובים הן לפני ואחרי הניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תקן את הבסיס של לוח ההליך לספסל מייד מול החוקר על ידי נחת 2 או 3 רצועות של סרט מעבדה ברחבי הבסיס underlיינג הספסל. ראה איור 1 עבור מפרטים נוספים על יצירת לוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עניבת אורך יחיד של חוט תפירת גודל 4.0 בין שני ברגי המיצוב של לוח ההליך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צור spirometer מאולתר על ידי הסרת ולהשאיר את הבוכנה משלושה 1 מ&quot;ל מזרקים, והפקדת 60 μl של PBS לתוך החלק העליון של כל חבית כדי ליצור חותם אטום. אבטח את הרכזת של הקטטר רופף לאחד מזרקים ולמקם אותו לצד אחד של הלוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשאוב 300 μl של אוויר לתוך מזרק 1 מ&quot;ל ומניחים אותו בצד אחד של הלוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחתוך חתיכה נוספת של סרט כ 6 ס&quot;מ באורך ומקום לצד אחד. זה ישמש כדי לאבטח את החיה ללוח בשלב 2.4. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדרת תא isoflurane. צרף O 2, isoflurane, ואקום אל היציאות המתאימות משני תא החשיפה ואקום אישור. לחלופין, לנהל הרדמה בבית isoflurane תואם ביולוגיבארון בטיחות. </li></ol> אינטובציה 2. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את העכבר עם isoflurane בתא עד שהוא מאבד את ההכרה והנשימה מאט לקצב המתאים. חשיפה טיפוסית כולל 4 isoflurane% ו -2% O 2 במשך 3 עד 4 דקות, ואת התוצאה האידיאלית היא 2 עד 2.5 דקות של הרגעה. זה מתאים קצב נשימה של 1 נשימה כל 2 שניות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בזמן ההמתנה הרגעה כדי להגדיר, לשאוב בין 30 ל -45 μl של BLM לתוך פיפטור ומקום לצד אחד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר מוכן, להשעות את העכבר מסומם על ידי החותכות העליונות שלה מן החוט מחובר ברגי המיצוב של פלטפורמת ההליך. ודא כי dorsum של חיה שוכב על משטח הפלטפורמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נזהר שלא להגביל אוורור, במקום חתיכת סרט רופף ברחבי הנמוך (הזנב) החלק של חלל בית החזה, ממש מעל הסרעפת. מיקום צריך להיות חזק מספיק כדי לשמור על יישור נכון במהלך procedure, אבל לא כל כך חזק, כי זה מגביל נשימה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפעל את הפנס כדי בין 80% ל- 100% עוצמת ו לכוון את מתכווננת כך שזה 1 עד 2 ס&quot;מ מפני השטח של העור, ליד מקלעת השמש. לבדוק מדי פעם את הקצה מתכווננת עבור חום כדי לוודא שהוא אינו פוגע העכבר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עומד מאחורי הפלטפורמה, השתמש מלקחי סוף סטרילי, קהים כדי לאתר את הלשון. להיות זהירים, כדי למנוע חותכות התחתונות, בעדינות האחיזה לצייר את הלשון מתוך חלל הפה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש ביד נותרת, הכנס במלחוץ ולהשתמש בו כדי לשטח את הלשון כנגד הרצפה של חלל הפה. שחרר את המלקחיים, אבל להשאיר את במלחוץ מקום על שני השלבים הבאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אוריינט האור, כך קנה הנשימה גלוי על ידי המנחה את מתכווננת proximally מרמת מקלעת השמש עד שהוא מגיע לרמה של הסמפונות mainstem. הערה: קנה הנשימה ניתן להבחין בקלות על ידי פעולה של הנשימה, WHIch גורם האור הנפלט להשתנות בעצמה. כאשר בצורה נכונה, מבנה זה יהיה להבחין במישור צירית כמו סיכה במיקום מרכזי של אור עם אור הסביבה מינימלי של חלל הפה עצמו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זווית המזרק כך שהוא עוקב אחר נתיב טבעי של קנה הנשימה, ולהפחית את קצה הצנתר 22-G, עם המזרק המצורף המכיל את אגל, ישר לתוך לומן. בועת PBS תתחיל לעלות ולרדת עם כל נשימה על שמה מוצלחת. הערה: פעולה זו עשויה להתעכב על ידי כמה שניות כתוצאת סדציה עמוקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להאכיל את הקטטר בתוך מ&quot;מ 5 נוסף. הסר את depressor לשון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Shift את המזרק ביד השנייה, מרתק הרכזת, להסיר בעדינות את המזרק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפקדה בין 30 ל 45 μl של BLM למרכז הפנים של רכזת קטטר, לצרף את המזרק השני ולחלק 300 μl של אוויר לרכזת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החזר את השנימזרק עם המכיל את הבועה הראשונה של PBS. הבועה תמשיך לעלות ולרדת אם ההליך בוצע בהצלחה. </li></ol> טיפוח 3. פוסט-פרוצדורליים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את הקטטר ואת הקלטת, והמקום חי במקום חמים ויבש עד להכרתו - בדרך כלל בתוך כמה דקות. </li></ol>

<ol><li>Hyde, D. M., Hamid, Q., Irvin, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anatomy%2C+pathology%2C+and+physiology+of+the+tracheobronchial+tree%3A+emphasis+on+the+distal+airways%5BTitle%5D)+AND+%22J+Allergy+Clin+Immunol%22%5BJournal%5D)">Anatomy, pathology, and physiology of the tracheobronchial tree: emphasis on the distal airways.</a> J Allergy Clin Immunol. 124, S72-S77 (2009).</li>
<li>Rosenthal, N., Brown, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mouse+ascending%3A+perspectives+for+human-disease+models%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">The mouse ascending: perspectives for human-disease models.</a> Nat Cell Biol. 9, 993-999 (2007).</li>
<li>Peters, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mouse+as+a+model+for+human+biology%3A+a+resource+guide+for+complex+trait+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Genet%22%5BJournal%5D)">The mouse as a model for human biology: a resource guide for complex trait analysis.</a> Nat Rev Genet. 8, 58-69 (2007).</li>
<li>Baron, R. M., Choi, A. J., Owen, C. A., Choi, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetically+manipulated+mouse+models+of+lung+disease%3A+potential+and+pitfalls%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Lung+Cell+Mol+Physiol%22%5BJournal%5D)">Genetically manipulated mouse models of lung disease: potential and pitfalls.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 302, 485-497 (2012).</li>
<li>Sharma, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+respiratory+distress+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22BMJ+Clin+Evid%22%5BJournal%5D)">Acute respiratory distress syndrome.</a> BMJ Clin Evid. 2010, (2010).</li>
<li>Saguil, A., Fargo, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+respiratory+distress+syndrome%3A+diagnosis+and+management%5BTitle%5D)+AND+%22Am+Fam+Physician%22%5BJournal%5D)">Acute respiratory distress syndrome: diagnosis and management.</a> Am Fam Physician. 85, 352-358 (2012).</li>
<li>Wilson, M. S., Wynn, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulmonary+fibrosis%3A+pathogenesis%2C+etiology+and+regulation%5BTitle%5D)+AND+%22Mucosal+Immunol%22%5BJournal%5D)">Pulmonary fibrosis: pathogenesis, etiology and regulation.</a> Mucosal Immunol. 2, 103-121 (2009).</li>
<li>Wuyts, W. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pathogenesis+of+pulmonary+fibrosis%3A+a+moving+target%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Respir+J%22%5BJournal%5D)">The pathogenesis of pulmonary fibrosis: a moving target.</a> Eur Respir J. 41, 1207-1218 (2013).</li>
<li>Mouratis, M. A., Aidinis, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+pulmonary+fibrosis+with+bleomycin%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Pulm+Med%22%5BJournal%5D)">Modeling pulmonary fibrosis with bleomycin.</a> Curr Opin Pulm Med. 17, 355-361 (2011).</li>
<li>Moeller, A., Ask, K., Warburton, D., Gauldie, J., Kolb, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+bleomycin+animal+model%3A+a+useful+tool+to+investigate+treatment+options+for+idiopathic+pulmonary+fibrosis%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Biochem+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">The bleomycin animal model: a useful tool to investigate treatment options for idiopathic pulmonary fibrosis?</a> Int J Biochem Cell Biol. 40, 362-382 (2008).</li>
<li>Myllärniemi, M., Kaarteenaho, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacological+treatment+of+idiopathic+pulmonary+fibrosis+-+preclinical+and+clinical+studies+of+pirfenidone%2C+nintedanib%2C+and+N-acetylcysteine%5BTitle%5D)+AND+%22European+Clinical+Respiratory+Journal%22%5BJournal%5D)">Pharmacological treatment of idiopathic pulmonary fibrosis - preclinical and clinical studies of pirfenidone, nintedanib, and N-acetylcysteine.</a> European Clinical Respiratory Journal. 2, (2015).</li>
<li>Reinert, T., Baldotto, C. S. dR., Nunes, F. A. P., Scheliga, A. A. dS. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bleomycin-Induced+Lung+Injury%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Bleomycin-Induced Lung Injury.</a> Journal of Cancer Research. 2013, 1-9 (2013).</li>
<li>Lakatos, H. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oropharyngeal+aspiration+of+a+silica+suspension+produces+a+superior+model+of+silicosis+in+the+mouse+when+compared+to+intratracheal+instillation%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Lung+Res%22%5BJournal%5D)">Oropharyngeal aspiration of a silica suspension produces a superior model of silicosis in the mouse when compared to intratracheal instillation.</a> Exp Lung Res. 32, 181-199 (2006).</li>
<li>Helms, M. N., Torres-Gonzalez, E., Goodson, P., Rojas, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+tracheal+instillation+of+solutes+into+mouse+lung%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Direct tracheal instillation of solutes into mouse lung.</a> J Vis Exp. , (2010).</li>
<li>Osier, M., Oberdorster, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intratracheal+inhalation+vs+intratracheal+instillation%3A+differences+in+particle+effects%5BTitle%5D)+AND+%22Fundam+Appl+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Intratracheal inhalation vs intratracheal instillation: differences in particle effects.</a> Fundam Appl Toxicol. 40, 220-227 (1997).</li>
<li>Driscoll, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intratracheal+instillation+as+an+exposure+technique+for+the+evaluation+of+respiratory+tract+toxicity%3A+Uses+and+Limitations%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol+Sci%22%5BJournal%5D)">Intratracheal instillation as an exposure technique for the evaluation of respiratory tract toxicity: Uses and Limitations.</a> Toxicol Sci. 55, 24-35 (2000).</li>
<li>MacDonald, K. D., Chang, H. Y., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+simple+method+of+mouse+lung+intubation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol+%281985%29%22%5BJournal%5D)">An improved simple method of mouse lung intubation.</a> J Appl Physiol (1985). 106, 984-987 (1985).</li>
<li>Spoelstra, E. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+and+simple+method+for+endotracheal+intubation+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">A novel and simple method for endotracheal intubation of mice.</a> Lab Anim. 41, 128-135 (2007).</li>
<li>Cai, Y., Kimura, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+intratracheal+intubation+to+study+the+pathology+and+physiology+of+mouse+lung%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Noninvasive intratracheal intubation to study the pathology and physiology of mouse lung.</a> J Vis Exp. , e50601(2013).</li>
<li>Starcher, B., WIlliams, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+intratracheal+instillation+of+endotoxin+into+the+lungs+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">A method for intratracheal instillation of endotoxin into the lungs of mice.</a> Lab Anim. 23, 234-240 (1989).</li>
<li>Daubeuf, F., Frossard, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Performing+bronchoalveolar+lavage+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Mouse+Biol%22%5BJournal%5D)">Performing bronchoalveolar lavage in the mouse.</a> Curr Protoc Mouse Biol. 2, 167-175 (2012).</li>
<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Severe+lung+fibrosis+requires+an+invasive+fibroblast+phenotype+regulated+by+hyaluronan+and+CD44%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Severe lung fibrosis requires an invasive fibroblast phenotype regulated by hyaluronan and CD44.</a> J Exp Med. 208, 1459-1471 (2011).</li>
<li>Grazioli, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CYR61+%28CCN1%29+overexpression+induces+lung+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Lung+Cell+Mol+Physiol%22%5BJournal%5D)">CYR61 (CCN1) overexpression induces lung injury in mice.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 308, L759-L765 (2015).</li>
<li>Redente, E. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+necrosis+factor-alpha+accelerates+the+resolution+of+established+pulmonary+fibrosis+in+mice+by+targeting+profibrotic+lung+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Cell+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Tumor necrosis factor-alpha accelerates the resolution of established pulmonary fibrosis in mice by targeting profibrotic lung macrophages.</a> Am J Respir Cell Mol Biol. 50, 825-837 (2014).</li>
<li>Lawrenz, M. B., Fodah, R. A., Gutierrez, M. G., Warawa, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intubation-mediated+intratracheal+%28IMIT%29+instillation%3A+a+noninvasive%2C+lung-specific+delivery+system%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Intubation-mediated intratracheal (IMIT) instillation: a noninvasive, lung-specific delivery system.</a> J Vis Exp. , e52261(2014).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

במקרים שבהם aerosolization אינו מעשי בשל זמינות מגיב מוגבלת, בטיחות, או עלות, ממשל קנה נשימה ישירה הוא השיטה מעולה למסירה של סוכני אקסוגניים לריאות 16 החדרת Transtracheal כבר בשימוש נרחב כדי להשיג את זה.; עם זאת, כמו עם כל התערבות כירורגית, הוא גם נושא עמו פוטנציאל מסיבוכים שנגרמו בשל ההליך עצמו, ולאו דווקא הסוכן להיות החדירו. 13 מסיבות אלה, זה הפך להיות נפוץ יותר ויותר לניהול חומר ישירות לתוך קנה הנשימה באמצעות אינטובציה 16,17,18,19,2...

למרות כמה הבדלים אנטומיים ופיסיולוגיים, 1 מודלים בעכברים להמשיך להיות יקר למידול ביולוגיה אנושית בהיווצרות מחלה. 2 מבחינה בעלי, עכברים קלים לטפל, יש זמן רבייה נמוך, אורך חיים מואץ, והם זולים יחסית לבית. עם התפתחות זנים ואסטרטגיות גנטיים שונים (למשל., ביטולי דפיקה על תנאי, עכברי כתב, גישות התחקות שושלת, וכו &#39;), כמו גם המגוון הרחב של חומרים כימיים זמין (למשל., נוגדנים, חלבונים רקומביננטיים, מעכבים, וכו &#39;), עכברים הפכו אורגניזם חוליות מודל חיוני לחשוף תהליכים הומאוסטזיס ומחלות של בני אדם. 3 עכברים כבר בעל ערך במיוחד עבור לחקור את תנאי ריאתי, כולל פגיעה ריאות חריפה (ALI) ופיברוזיס ריאתי. 4 עלי בבני אדם יכול להיגרם על ידי טראומה, פציעה, או אלח דם ומאופיין אפיתלדליפת האנדותל (כלומר., בצקת), דלקת, סיסטיק המתהווה. בחולים רבים, עליי מתקדם הצורה החמורה שלה, תסמונת מצוקה נשימתית החריפה (ARDS), עלולה לגרום סיסטיק ותמותה עקב אי ספיקה נשימתית. 5,6 פיברוזיס ריאתי הוא פתולוגיה פרוגרסיבי, קטלנית המאופיינת בתצהיר העודף של תאי מטריקס , בעיקר סוג I קולגן, שמוביל את תפקוד ריאות לקויות. 7,8 מנהל בליאומיצין (BLM) הוא מודל הנפוץ ביותר והטוב ביותר מאופיין גרימת ALI סיסטיק בחיות מעבדה. 9 למרות פיברוזיס ריאתי נגרמת BLM במכרסמים עושה לא לשחזר באופן מלא פנוטיפים fibrotic האדם, 10 מחקרי עכבר עם המודל הזה הובילו לגילוי של גורמים רבים חשובים המשפיע על ההופעה וההתקדמות של המחלה. 11 בעוד המנגנון המדויק (ים) מאחורי fibrogenesis הנגרמת BLM אינם ידועים, הפגיעה ייזוםהוא חשב לנבוע הפסקות גדיל DNA קשר תלויי לתאי האפיתל המצפים את דרכי הנשימה alveoli ניצוח, ובפרט, סוג 1 pneumocytes. 12 הצורך במגע ישיר בין BLM ואת אפיתל ריאתי מדגיש את החשיבות של מסלול משלוח חזקים גם, וחששות אלה רלוונטיים למגוון רחב של טיפולים הממוקדים אל דרך נשימת דיסטלי, כולל חלבונים רקומביננטיים, נוגדנים, siRNA, וירוס, חיידקים, חלקיקים, ועוד. שאיפת לוע תחתונה (OPA) כבר בשימוש נרחב למטרה זו 13, אבל רב סרן חסרון של OPA הוא אותו חלק חלק הסוכן נמסר עלול להיבלע לתוך מערכת העיכול, ולכן היא מובילה חוסר דיוק במינון המנוהל. גישה נוספת נפוצה היא החדרת transtracheal, שכרוכה הנשמה בהרדמה חזקה כדי לחשוף את הקנה הנשימה ההחדרה של סוכן ישירות לדרכי נשימה. 14 עם זאת, לא רק רשאית כזההליך להיות רצוי בשל invasivity שלה, אבל זה גם גוזל זמן דורש קצת הוגן של אימונים, וגורם לפגיעה חזקה אל דרך הנשימה. 15,16 פרוטוקולים פותחו מספר שקשור לניהול הישיר של הסוכנים לתוך קנה נשימה ללא צורך בהתערבות כירורגית, 16,17,18,19,20 אך שיטות אלו כוללות זמני התאוששות מורחבות הנגרמת על ידי הרדמה חזקה, השימוש בציוד יקר (כלומר., otoscope / לרינגוסקופ, לוחות הליך זמינים מסחרי, סיבים אופטיים חוטים, וכו &#39;), עודף של מניפולציה של חלל הפה, ואי ודאות לגבי המינון. מאמר זה מתאר שיטה קלה יחסית של הממשל באמצעות אינטובציה המאפשר חוקר במהירות, ובזול, ולטעת מגיב באופן מהימן לתוך הריאות בעכברים עם סיכון מוגבל של נזק שיורי אל הרקמות הסובבות.

<table><tbody><tr><td>בלאומיצין להזרקה, 30 יחידות/בקבוקון</td><td>APP Pharmaceuticals, LLC</td><td>103720</td><td>לקבלת התוצאות הטובות ביותר, יש להשהות את BLM ב-PBS, להצטט ולאחסן כ-aliquots לשימוש חד פעמי</td></tr> מדכא לשון <tr><td>מלקחיים</td><td></td><td></td><td></td>בקצה קהה</tr><tr><td>(כלומר אלקטרודת להב Valleylab כפופה, 2.4 אינץ')&nbsp;</td><td>Covidien</td><td>E1551G</td><td>לפני השימוש, צור כיפוף של 45 מעלות 1.5 ס"מ&nbsp; מקצה הלהב. ניתן ליצור מדכא מתאים גם מכל כלי מתכת במידות דומות.</td></tr><tr><td>קטטר אקסל סופת 22 גרם X 1 אינץ'</td> <td>Exel International</td><td>26746</td><td></td></tr><tr><td>1 מ"ל מזרק טוברקולין חד פעמי עם קצה החלקה (200/sp, 1600/ca)</td> <td>BD</td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td>0.2 מ"ל פיפטור וקצות</td><td></td><td></td><td></td>מסנן</tr><tr><td>Fiber-Lite Illuminator. דגם 181-1: דגם 180 משודך לתאורת צוואר אווז כפולה סטנדרטית</td><td>של דולן ג'נר תעשיות, בע"מ.</td><td>181-1</td><td>תאורת LED עם תפוקה נמוכה יותר אינה מומלצת מכיוון שהם לא מצליחים להאיר את קנה הנשימה בצורה מספקת.</td></tr><tr>לוח <td></td><td></td><td>אינטובציה</td><td>ראה תרשים 1.</td></tr><tr><td>סרט תווית צבעוני: 0.5&nbsp; ב. </td><td>פישרברנד</td> רחב <td>15-901-15A</td><td></td></tr><tr><td>חמצן&nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr> מי <tr><td>מלח עם חוצץ פוספט, 1X</td><td>Corning</td><td>21-040-CV</td><td>המוצר צריך להיות סטרילי</td></tr><tr><td>סליל תפר קלוע שחור משי לא סטרילי, 91.4 מ ', גודל 4-0</td><td>מכשיר הרווארד</td><td>517698</td><td></td></tr><tr><td>מכונת הרדמה שולחנית ציוד רפואי איזופלורן</td><td>היילנד http://www.highlandmedical.net/</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>שקופית עליונה אינדוקציה עכבר איזופלורן תא</td> <td>איזופלורןMIP / טכנולוגיות הרדמה</td><td>AS-01-0530-SM</td><td></td></tr><tr><td>פוראן (איזופלורן, USP) נוזל לשאיפה 100 מ"ל&nbsp;</td><td>בקסטר</td><td>1001936040</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; מערכת פתולוגיה דיגיטלית של ננו-זומר</td><td>ערכת כימות Hamamatsu</td><td></td><td></td></tr><tr><td>IgM ELISA&nbsp;</td><td>מעבדות בתיל</td><td>E90-101</td><td></td></tr></tbody></table>

שיטה משופרת עבור אינטובציה מהירה של קנה הנשימה של עכברים

An Improved Method for Rapid Intubation of the Trachea in Mice

למרות כמה הבדלים אנטומיים ופיזיולוגיים, מודלים של עכברים ממשיכים להיות כלי חיוני לחקר מחלות ריאה אנושיות. רעילות בלאומיצין היא מודל נפוץ לחקר פגיעה ריאתית חריפה ופיברוזיס, ופותחו שיטות רבות למתן בלאומיצין (וחומרים רעילים אחרים) לריאות. עם זאת, לרבות מהגישות הללו, כגון החדרה דרך קנה הנשימה, יש חסרונות מובנים, כולל הצורך בהרדמה חזקה וניתוחי הישרדות. מאמר זה מדווח על שיטה מהירה וניתנת לשחזור של אינטובציה תוך-קנה הכוללת הרדמה בשאיפה קלה, הדמיה של קנה הנשימה ושימוש בספירומטר חלופי כדי לאשר את החשיפה. כהוכחת רעיון, עכברי C57BL/6 בני 8-12 שבועות קיבלו 2.0 יחידות לק"ג של בלאומיצין או נפח שווה ערך של PBS, וגם נקודות הקצה הפיברוטיות נמדדו לאחר החשיפה. הליך זה מאפשר לחוקרים לטפל בקבוצה גדולה של עכברים בתקופה קצרה יחסית עם הוצאות מועטות וטיפול מינימלי לאחר ההליך.

<html> עכברים מחוברים לצינור נוטר יומיים לירידה במשקל ומצוקה, והקריבו 4, 10 או 17 ימים לאחר מכן באמצעות זריקת intraperitoneal של 2.5% 2,2,2- tribromoethanol. ברונכואלוואולרית שטיפה (BAL) נאספה שלוש שוטף של PBS כמתואר במקום אחר 21 , ואת הריאה הימנית נקבע בפורמלין 10%, פרפין מוטבע, מוכתם Trichrome של מייסון ידי אוניברסיטת היסטולוגיה וושינגטון והדמיה Core 22. <p class="jove_content" fo:keep-together.within-pa...

מאמר זה מציג שיטה מהירה ופשוטה לניהול בליאומיצין ישירות לתוך קנה הנשימה העכבר באמצעות אינטובציה. יתרונות עיקריים של שיטה זו הם כי הוא מאוד לשחזור, קל לשלוט, ואינו דורשים ציוד מיוחד או פעמי החלמה ממושכות.

Despite some anatomical and physiological differences, mouse models continue to be an essential tool for studying human lung disease. Bleomycin toxicity ...

המטרה הכוללת של פרוצדורה זו היא לספק הזרקה מהירה, קלה ואמינה של ריאגנטים לריאות עכברים באמצעות אינטובציה. השיטה גם מגבילה את הסיכון לנזק שירי לרקמות הסובבות והיא אינה יקרה. שיטה זו יכולה לסייע במתן מענה לשאלות מפתח בתחומי הביולוגיה הבסיסית של הריאות ומנגנוני המחלה.כגון פגיעה ריאתית חריפה ופיברוגנזה. היתרונות העיקריים של טכניקה זו הם שהיא בעלת הדירות גבוהה, קלה ללמידה, ואינה דורשת ציוד מיוחד או זמני התאוששות ממושכים. יש לבצע את הפרוצדורה באמצעות כלים סטריליים.בצעו עיקור באוטוקלאב הן לפינצטה בעלת הקצה הבלתי חד והן לדיפרסור. תחת מנדף סטרילי, הכינו תמיסת עבודה של הרכיב למתן באמצעות האינטובציה. נפח בולוס מומלץ שבין 30 ל-45 µL.בצע סוניקציה לתמיסה למשך 10 דקות בתדר של 35 kilohertz כדי להבטיח ערבוב אחיד. כעת, הכן את מרחב העבודה. הקצה שטח של מטר רבוע אחד לפחות עבור מרחב העבודה עצמו.בנוסף, יש להכין מיקומים נפרדים עבור בעלי החיים הן לפני הפרוצדורה והן אחריה. כעת, הכינו לוח פרוצדורה. דגם מותאם אישית זה גזור מגיליון אלומיניום ומחוזק באמצעות תומך בצורת T.לוחות מסחריים דומים זמינים אף הם. בעזרת מספר רצועות דבק, קבעו את בסיס לוח הפרוצדורה לספסון המעבדה, כך שיהיה ישירות מול המנסה. לאחר מכן, קשרו חוט תפר באורך 4.0 בין שני ברגי המיקום של לוח הפרוצדורה.בשלב הבא, נבנה ספירומטר. הסר את הבוכנות משלוש מזרקים של 1ml. לאחר מכן, טען עד 60 µL של PBS לתוך החלק העליון של גוף כל מזרק.חברו באופן רופף את אחת משלוש המזרקים הללו למחבר של קטטר. בעת השימוש, אוויר הנושף מקנה הנשימה יגרום ל-PBS שבגוף המזרק לעלות ולרדת. הניחו זאת לצד לוח הפרוצדורה.הניחו את שתי המזרקים הנוספים בטווח הגעה כדי שישמשו כגיבוי. לאחר מכן, שאבו למזרק רביעי 300 microliters של אוויר, והניחו אותו בצד הלוח. הכינו גם מספר קטעים של סרט דביק באורך שישה אינץ' כדי לקבע את בעל החיים ללוח.לאחר מכן, הכינו תא איזופלורן במידת הצורך. חברו את קווי החמצן, האיזופלורן והוואקום לפתחים המתאימים בתא ולשואב הריק הראשי. התחילו בהרדמת העכבר.חשוב לציין כי מכיוון שגורמים כגון גיל, משקל ומצב בריאותי של בעל החיים עשויים להשפיע על התגובה לחומרי ההרדמה, על כל מעבדה לבצע אופטימיזציה של החשיפה לאיזופלורן בהתאם לצרכיה. בזמן ההמתנה, טענו את מנת הבולוס של הריאגנט לטיפ פיפטה, והניחו אותה בצד. כאשר העכבר מרודם, תלו אותו באמצעות שיניו החותכות העליונות מהחוט שעל פלטפורמת הפעולה, כך שגבו של בעל החיים יונח שט על פני שטח הפלטפורמה.כעת, תוך הקפדה על אי-הגבלת האוורור, הדביקו בסרט דביק באופן רפוי את החלק התחתון של חלל בית החזה, מעט מעל הסרעפת, לפלטפורמה, כדי לשמור על יישור בעל החיים במהלך הפרוצדורה. לאחר מכן, כוון את תאורת ה-gooseneck ל-80 עד 100%. מקמו את האור במרחק של סנטימטר אחד עד שניים מפני העור ליד המקלעת הסולרית (solar plexus), ובדקו באופן שוטף שהאור אינו גורם לחימום יתר של העור. מאחורי הפלטפורמה, השתמשו בפינצטה קהה כדי לאתר את הלשון.לאחר מכן, תוך הקפדה להימנע מהשיניים החותכות התחתונות, אחזו בעדינות בלשון ומשכו אותה החוצה מחלל הפה. בעודכם מקבעים את הלשון, השטיחו אותה בעזרת הלשון (depressor) המוחזק ביד הלא-דומיננטית, ובכך אפשרו למלקחיים להשתחרר. כעת, הכוונו את תאורת ה-gooseneck בקירוב מאזור המקלעת הסולארית (solar plexus) אל הברונכיים הראשיים כדי להאיר את הקנה.ניתן להבחין בקנה הנשימה בקלות גם באמצעות פעולת הנשימה, הגורמת לתנודות בעוצמת האור היוצא מקנה הנשימה. כאשר המיקום נכון, קנה הנשימה ייראה כנקודת אור מרכזית, עם מינימום של אור סביבתי בתוך חלל הפה עצמו. אין להחדיר את הקתטר לחלל הפה עד שהמבט על קנה הנשימה הוא אידיאלי.לא ניתן להביא את הקנה לשדה הראייה באמצעות מניפולציה של מקור האור או של המדפרסור (depressor). על החוקרים לשחרר את הלשון ולנסות שוב את הפרוצדורה. לאחר מכן, יש להטות את המזרק כך שיעקוב אחר הנתיב הטבעי של הקנה.הנמיקו את קצה הקתטר בגודל 22 gauge, כאשר המזרק המחובר אליו המכיל PBS, ישירות לתוך הלומן. כעת, החדירו את הקתטר חמישה מילימטרים נוספים והסירו את מדכא הלשון. אם המיקום נכון, בועת ה-PBS בתוך גוף המזרק תתחיל לעלות ולרדת עם כל נשימה.היו סבלניים בחיפוש אחר אינדיקטור זה, שכן טשטוש עמוק או קל עשויים לשנות את תדירות הנשימה. לאחר מכן, העבירו את המזרק ליד הלא-דומיננטית. תוך כדי אחיזה בבסיס המזרק, הוציאו אותו בעדינות והשאירו את הקטטר במקומו.בעזרת היד הדומיננטית, העבירו את בולוס הרכיב שהוכן ישירות למרכז חיבור הקטטר. לאחר מכן, חברו מזרק שני המכיל 300 microliters של אוויר והזרימו את האוויר אל תוך החיבור. פעולה זו תסייע בהבטחת פיזור יעיל של הבולוס בריאות.כעת, הסר את המזרק והחלף אותו במזרק המכיל בועת PBS. הבועה תמשיך לעלות ולרדת אם הפרוצדורה בוצעה בהצלחה. כעת, הסר את הקטטר ואת הסרט הדביק.הניחו את בעל החיים במקום יבש וחמים עד שיחזור להכרה. בדרך כלל הדבר קורה בתוך מספר דקות. עכברים שעברו אינטובציה נוטרו מדי יום לבדיקת ירידה במשקל.עכברים נאספו ארבעה, 10 ו-17 ימים לאחר אינטובציה תוך-קשייתית עם bleomycin. נדגמי שטיפת ברונכואלוולארית נאספו מריאות אלו ונבדקו. רמות מוגברות של IgM הדגימו עלייה משמעותית תלוית-זמן בחדירות הריאה, המעידה על תפקוד לקוי של המחסום האפיתלי ו/או האנדותליאלי.הריאות הימניות קובעו ונצבעו ב-Masson's trichrome. התגובה הפיברוגנית, סמן מוכר לתכולת קולגן כוללת, נמדדה כמותית. נתחי ההיסטולוגיה הראו עיבוי של האינטרסטיציום הריאתי התלוי בטיפול, ועלייה בנגעים פיברוטיים.ברגע שהטכניקה נשלטת, ניתן לבצעה בפחות מדקה אם היא מבוצעת כראוי. בעת ניסיונות לביצוע הליך זה, חשוב לזכור כי מניפולציה של הרקמות הרכות המקיפות את הקנה אינה נחוצה ואינה מומלצת. פעולה זו עלולה לפגוע הן בבריאות בעל החיים והן בתקינות הניסוי.

an-improved-method-for-rapid-intubation-of-the-trachea-in-mice

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

מדידות חוזרות של הפיזיולוגיה מכרסם הנשימה דגימה של תאים דלקתיים בדרכי האוויר רצויות, אבל בדרך כלל לא ריאלי. כאן אנו מתארים את שיטת הדיר עבור בעל פה intubating עכברים המאפשר מדידות חוזרות של דרכי הנשימה ואת hyperreactivity דגימה של תאים דלקתיים בדרכי האוויר.

הפיך, לא פולשני שיטת ההתנגדות מדידות דרכי הנשימה ואת נוזל שטיפה ברונכואלוואולרית דגימה של עכברים

אנחנו פיתחנו שיטה פשוטה, אמינה, וזולה יחסית לאינטובציה endotracheal בעכברים באמצעות laryngoscopy הישיר באמצעות אוטוסקופ עם ספקולום 2.0 מ"מ. טכניקה זו היא atraumatic ויכולה לשמש למדידות חוזרות בניסויים כרוניים. אנחנו מוצאים את זה מעולה להנשמה או בעבר דיווח טכניקות נזקקה לניתוח.

Endotracheal אינטובציה בעכברים<em&gt; דרך</em&gt; ישיר laryngoscopy באמצעות אוטוסקופ

מאמר זה מתאר שיטת striaghforward ויעילה של intubating עכברים למדידת תפקוד הריאתי או החדרה ריאתי, שמאפשרת לעכברים להתאושש ולהיחקר בתקופות מאוחרות יותר. ההליך כרוך מקור אור סיב אופטי יקר שמאיר ישירות לקנה נשימה.

שיטה פשוטה של ​​אינטובציה ריאות המאוסות

השימוש במודל המחקה את המצב של מחלות ריאה בבני האדם הוא קריטי ללימוד הפתופיזיולוגיה ו / או אטיולוגיה של מחלה מסוימת ולפתח התערבות טיפולית. הנה שיטת אינטובציה intratracheal לא פולשנית שיכול ישירות לספק חומרים אקסוגניים לריאות עכבר מוצגת.

פולשנית Intratracheal אינטובציה ללמוד פתולוגיה והפיזיולוגיה של עכבר ריאות

כאן, אנו מציגים פרוטוקול של אבי העורקים רוחבי הכיווץ (טק) באמצעות ניקור לרוחב. טכניקה זו היא הליך ניתוחי החזה פולשנית, סגור במטרה לדמות עומס ואי ספיקת לב בעכברים ניצול ההגדרות הרגילות של מעבדה טק.

דגם סגור-החזה לזירוז רוחבי. התרחבות אבי העורקים בעכברים

המטרה של מאמר זה היא לתאר שיטה מעודנת של צנרור העכבר המעבדה. השיטה אינה פולשנית, ולכן אידיאלית למחקרים הדורשים ניטור סדרתי של תפקודי הנשימה ו/או הערכת טיפולים בריאה.

וחזר אורוקנה אל בעכברים

אנו מציגים פרוטוקול לחשוף את גזע המוח של עכבר בוגר מהצד הגחוני. באמצעות עדשת מדד שבירה הדרגתית עם מיקרוסקופ מיניאטורי, ניתן להשתמש בהדמיית סידן כדי לבחון את הפעילות של סומטה עצבית זית נחותה ב- vivo.

אין ויוו הדמיית סידן בעכבר זית נחות

מודל ניתוחי בעכבר ליצירת פגיעה באיסכמיה של הריאה השמאלית (IR) תוך שמירה על אוורור והימנעות מהיפוקסיה.

מודל עכברי של אינטובציה אורוטרכאלית וניתוח איסכמיה ריאה מונשמת

כאן, אנו מציעים פרוטוקול להעברת ליפופוליסכריד תוך טרכאלי (LPS) באמצעות אינטובציה אנדוטרכאלית אורופרכאלית לא פולשנית. שיטה זו ממזערת את הטראומה של ההליך הכירורגי עבור החיה ומעבירה LPS מדויק לקנה הנשימה ולאחר מכן לריאות.

החדרת ליפופוליסכריד תוך טרכאלי לא פולשני בעכברים

כאן אנו מציגים הליך סטנדרטי לאינטובציה אנדוטרכאלית באמצעות טרכאוטומיה ואחריה בית החזה בחולדות, שמטרתו לשפר את הדיוק והשחזור של יישומים שאינם הישרדותיים הדורשים הנשמה פולשנית וחשיפה של איברי בית החזה במודלים של חולדות in vivo .

אינטובציה אנדוטרכאלית באמצעות טרכאוטומיה ולאחר מכן ניתוחי בית החזה בחולדות ליישומים שאינם הישרדותיים

פרוטוקול זה מציג כיצד מיקום אופטימלי של עכבר והחדרת אוטוסקופ מבוסס מצלמה באופן טרנסאורלי מאפשר הדמיה של הגלוטיס, אינטובציה מהירה עם טראומה מינימלית לרקמות ואספקת נוזלים עקבית לריאות.

מתודולוגיה משופרת לאספקת נוזלים לריאת העכבר: אינטובציה באמצעות אוטוסקופ צרכני

למדו שיטה משופרת לאינטובציה מהירה של קנה הנשימה בעכברים לחקר ביולוגיית הריאה ופציעות ריאה חריפות. השיטה מבטיחה ניהול חומרים ישירות לריאות עם נזק מינימלי לרקמות מסביב.

שיטה משופרת עבור אינטובציה מהירה של קנה הנשימה של עכברים

גלה סרטונים נוספים