Name: טפח תאי אפיתל באף הראשי מיילד לתכנת מחדש לתאי גזע מושרים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-03-10T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 8 s
Description: למדו שיטה לא פולשנית לגידול תאי אפיתל באף מילדים ולתכנותם מחדש לתאי גזע מושרים (iPSCs). טכניקה זו מאפשרת מחקר מדעי חשוב על אסתמה ומחלות נשימה אצל ילדים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מבקשים להודות במתקן לתאי גזע פלוריפוטנטיים ואת Core הדמיה Confocal בבית החולים סינסינטי ילדים. עבודה זו נתמכה על ידי R21AI119236 (HJ), R21AI101375 (HJ), NIH / NCATS 8UL1TR000077-04 (HJ), U19 AI070412 (HJ) ו 2U19AI70235 (GKKH).

הפרוטוקול הבא אחרי הקווים המנחים של ועדת האתיקה לניסויים בבני אדם מוסדות. 1. דגימת האף הרירי הערה: קבל דגימות נבדקים אשר הינם ללא סימני זיהום ויראלי בדרכי הנשימה. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן טרי חרוטי 15 מ&quot;ל לפני הביקור משתתף ולהוסיף 2 מ&quot;ל BEGM (מדיום הגידול תא אפיתל הסימפונות) בתוספת 20 μl סטרילי פן / סטרפטוקוקוס / Fungizone (P / S / F) (0.01%). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מברשת ציטולוגיה להרחיב רק לפני נטילת המדגם, ואל תשכחו לשמור מברשת סטרילית לא נוגע בו לכל משטחים מלבד משטחי האף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שאל משתתף לשבת בשקט להטות את הראש כלפי מעלה, אל התקרה. יש קטנים או ילדים חסרי מנוחה יותר לשבת על הידיים ו / או בשכיבה כדי למנוע לחבוט המברשת הצדה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כוון מברשת בחלק האחורי של האף שבו המעבר מצמצם (נראה כמו חור שחור קטן). חלק מברשת למטה ולסובב פרקים כמו המברשת תיוסר nostril. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניח מברשת חרוטים לצלול BEGM. חותכי מברשת עודפת ולהחליף כובע על צינור. לא מערבולת. הערה: אם המשתתף הוא מוכן, להשיג מברשת שנייה באותו אופן אבל בנחיר השני. קבלת רפרוף קל על שני הנחיריים תגרום סבירות גבוהה יותר כי הדגימה תהיה מוצלחת. דגימה באותו הנחיר עלולה לגרום לדימום לא ישפר את המדגם סביר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמור דגימות קרובות ל -37 מעלות צלזיוס ככל האפשר במהלך הובלה באמצעות מבחנה עם מים חמים. </li></ol> 2. ספירת תאים ו Cytospin <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעדינות להתסיס את המברשת BEGM ולקחת 10 μl של המדגם עבור ספירת תאים באמצעות hemacytometer. הוסף 10 μl של כתם חי / מת ולספור לחיות תאים רק תחת מיקרוסקופ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קח 50 μl של המדגם לדלל 200 μl עם 1x PBS. הוסף משפך cytospin המצורף שקופית זכוכית ספין ב 300 סל&quot;ד במשך 2 דקות. בואו להחליק שקופית O / N ו- כתם יבש following להוראות היצרן. אפשר להתייבש O / N, רצוי בחושך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שקופיות כתם עם המה 3 Stain <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העבר כל פתרון (מקבע המה, תכלת; המה 3 פתרון אני, ורוד; ו המיתי 3 פתרון שני, כחול עמוק) לתוך צלחת מכתים; שמור מכוסה כשאינו בשימוש. הכנס שקופיות לתוך סירה מכתימה שקופית </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טובלים שקופיות ברציפות מקבע במשך 30 שניות, ולאחר מכן לאפשר עודף לניקוז. טובלי שקופיות ברציפות פתרון אני במשך 30 שניות, ולאחר מכן לאפשר עודף לניקוז. טובלי שקופיות ברציפות הפתרון השני במשך 30 שניות, ולאחר מכן לאפשר עודף לנקז </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף עם מים ללא יונים עד המים זורמים ברורים. אפשר להתייבש O / N, רצוי בחושך </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תראה שקף מתחת תאי מיקרוסקופ וספירה, לקבוע אחוז תאי אפיתל. צריך להיות 90% או יותר אם הדגימה היא טובה. </li></ol> 3. תאים מתזמנים הערה: ביצוע כל הליכי תרבית תאים בתרבות רקמות נכונה מוסמכתמכסה המנוע באמצעות טכניקה סטרילית. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעיל צלחות עם שור Dermal קולגן (BDC), סוג 1. הוסף 0.5 מ&quot;ל של 3 מ&quot;ג / מ&quot;ל ​​BDC מדולל 49.5 מ&quot;ל 1x PBS. כן פחות אם רק כמה צלחות תשמשנה. מעיל בקבוקון T25 עם 2 מ&quot;ל BDC דגירה O בשכונה סטרילי / N או ב 37 מעלות צלזיוס למשך 2 שעות, אם יהיה צורך בכך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר דגירה, לשאוף כל נוזל נותר. לחשוף צלוחיות לאור UV למשך 30 דקות במנדף סטרילית. צלוחיות חנות עד חודש אחד בכל 4 ° C, אבל להביא אותם RT או 37 ° C לפני זריעת התאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמור מברשת ותאי BEGM על 37 מעלות צלזיוס עד מוכן זרע. בעדינות מברשת סוויש בתוך חרוטים, אבל לא מערבולת. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פלייט 7 x 10 5 תאים בבקבוק T25. אם יש פחות, להשתמש במיכל קטן, כגון אחד טוב של צלחת 6 באר. צלחת בגודל זה דורש כ 3 x 10 5 תאים. הערה: אם אין תאים רבים זה, זה לא מומלץ להמשיך. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מתחת למכסה מנוע סטרילית, לקחת מברשת מתוך צינור gently לסובב מברשת על פני השטח של הבקבוק המצופה, נזהר שלא לשרוט את הציפוי. בטל המברשת במיכל Biohazard המתאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאט פיפטה את התאים הנותרים ב BEGM מתוך החרוטים לתוך בקבוק T25. שים את התאים תחת מיקרוסקופ. מספר התאים הצפים יקוים וייתכנו כמה פסולת מהאף, אשר מקובל בשלב זה (איור 3 א). </li></ol> 4. תרבית תאים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר זריעת תאים, ולתת להם להתיישב במשך 48 שעות ללא הפרעה (איור 3). לאחר 48 שעות, לאט ובעדינות להוסיף 2 מ&quot;ל חם BEGM ו -20 μl סטרילי פניצילין / סטרפטומיצין / Fungizone (P / S / F). הערה: אין לשאוב תקשורת 2 מיליליטר של המקורי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביום 4 th לאחר הזריעה, לשאוב את כל הנוזל בזהירות, ולהחליף עם 4 מ&quot;ל טריים, חימם BEGM בתוספת 1x פן / סטרפטוקוקוס (fungizone כבר לא נחוץ). שינוי בתקשורת כל יומיים ולהעריך תאים לצרףment, צמיחה מפגש. כאשר התאים מגיעים ~ 80% המפגש, בדרך כלל בתוך 2-3 שבועות, הם מוכנים להיות passaged. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בקבוק T25 אחת (כ -2.5 x 10 6 תאים כאשר ומחוברות) ניתן passaged לשלוש צלוחיות T25 או בבקבוק T75 אחד. לאחר המעבר הראשון, תאים צריכים להיות חזקים ובריאים, להגיע למפגש על כל שלושה ימים. </li></ol> 5. תאים Passaging <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעדינות לשאוב התקשורת מהצלחת. הוסף 1 מ&quot;ל 0.05% פתרון טריפסין לכל בקבוק T25 לצלחת ומניחים בחממה במשך כ 4min, או עד תאים להתנתק הצלחת. בדוק את רמת הניתוק של תאים כל 2 דקות ואל תשאיר טריפסין על יותר מ 10 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 5 מ&quot;ל טריפסין נטרול פתרון (TNS), או מדיה המכילה סרום לנטרל את האנזים. הסר את כל הנוזל ותאי מהבקבוק ומכניסים צינור חרוטי 15 מ&quot;ל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה ב XG 200 (האצה 0 האטה 0) במשך 5 דקות כדי לקבל תא גלולה. לשאוב supernaתאי tant ו resuspend BEGM + P / S בהיקף הנדרש הצלוחיות החדשות (4 מיליליטר עבור בקבוק T25, 10 מיליליטר עבור בקבוק T75) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצעו ספירת תאים עם כתם חי / מת כפי שתואר לעיל (2.1). הוספת הכמות מתאימה של BEGM ותאי כדי הצלוחיות המצופות ולחזור אל האינקובטור. לשמור כמפורט לעיל או cryopreserve מקפיא בינוני (70% BEGM, 20% FBS ו 10% DMSO) בריכוז של 0.5-2 x 10 6 תאים לכל מיליליטר. </li></ol> 6. תכנות מחדש כדי iPSCs הערה: לפני יצירת iPSCs, לפקח על קיום כל התקנות המוסדיות המסדירות את הדור ושימוש iPSCs אדם. טכניקת סטרילית חשובה במיוחד עבור תרבויות iPSC, כמדיום תרבות אינו מכיל אנטיביוטיקה באופן שגרתי. זה קריטי, כי NECs נראה בריא והם שגשוג וחסון לתכנות מחדש מוצלח. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פלייט 5 x 10 5 NECs לכל גם צלחת בתרבית רקמה 6 היטב. לאחר 24 שעות, להוסיף polybreneכדי BEGM לריכוז סופי של 8 מיקרוגרם / מ&quot;ל ​​ו transduce NECs ידי הוספת חלקיקים lentiviral להביע Oct4, Sox2, Klf4, c-Myc לתקשורת. שואפים להשיג ריבוי של זיהום (משרד הפנים) של ~ 5 27. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי קביעת משרד הפנים, להכין דילולים סידוריים של המניות המרוכזות-lentiviral ו transduce HT1080 תאים עם דילולים אלה. לאחר זיהוי הראשון באופן חד משמע ביטוי dTomato בתאי HT1080, לחשב את המספר &quot;יחידות transducing / מיליליטר&quot; כשקלע את מספר תאי dTomato החיובי / גושים קטנים של תאים כל דילול. הערה: בדרך כלל, תהיה דילולים כי הן גבוהות מדי (הכל dTomato חיובי) ו נמוך מדי (ללא או רק כמה תאים חיוביים). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע ניקוד הדילולים שבו נבדלו תאים חיוביים / גושים קטנים של תאים מזוהים. לקבוע את כייל על ידי תיקון מספר transducing מ&quot;ל / יחידות עם גורם לדילול המתאים. משרד הפנים הוא אזי היחס בין מספרשל transduced תאים למספר חלקיקי הנגיף 27. הערה: כל תא dTomato החיובי / גוש קטן מניחה לנבוע חלקיק וירוס אחד. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כ -3 שעות-שלאחר התמר, להסיר תקשורת ולהחליף עם BEGM הטרי. מחק תקשורת lentivirus המכיל באמצעות נהלים שאושרו מוסדי. חזור NECs transduced אל האינקובטור במשך 3 ימים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביום 3, להחליף תקשורת עם BEGM הטרי, ולאחר מכן דגירה במשך 3 ימים נוספים. לשאוב בילה התקשורת, לשטוף תאים עם 1x PBS ולהוסיף 1 מ&quot;ל 0.05% פתרון טריפסין אל הבאר. תאי מעבר עם טריפסין כפי שנכתב לעיל (סעיף 5). בזהירות לשאוב תאים supernatant ו resuspend ב 4 מ&quot;ל BEGM + P / S. תאים יכולים להיות passaged כדי באר חדשה של צלחת 6 היטב מצופית BDC, או הוסיפו לתרבויות MEF, אם מוכן (ראו השלב הבא). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כן צלחות מצופות MEF. ביום 4 להוסיף פתרון ג&#39;לטין 0.1% (1 מ&quot;ל / טוב) 2 הבארות של 6 היטב (כדי לבצע +/- Thiazovivin (SPT) ראה שלב 6.6). על הבאיום, להפשיר בקבוקון של MEFs מומת 28. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים MEFs לתוך 10 מ&quot;ל של התקשורת MEF (DMEM + 1x NEAA + 10% dFCS). ספין על XG 200 במשך 5 דקות עד גלולה. גלולה בתקשורת MEF. ג&#39;לטין לשאוב מהצלחת 6 היטב ומוסיפים 1.87 x 10 5 MEFs לכל גם צלחת 6 היטב מצופה ג&#39;לטין. דגירה O / N ב 37 מעלות צלזיוס, או למשך תקופה מינימלית של 24 שעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברת 2 מ&quot;ל של BEGM מכילים transduced תאים לכל גם לתוך 2 בארות צלחת 6 מצופה בעבר היטב דגירה O / N. ביום למחרת, להחליף BEGM עם 2.5 מ&quot;ל לכל טוב של התקשורת תקן hESC המכיל 4 ng / גורם גדילה פיברובלסטים בסיסי מ&quot;ל. Feed תאים עם התקשורת hESC טרי +/- SPT יומי במשך 10 ימים הערה: אפשר להוסיף קוקטייל של מולקולות קטנות (SB431542, PD0325901, ו Thiazovivin (SPT) קוקטייל) כדי לשפר את היעילות ואת קינטיקה של תכנות מחדש עבור NECs 23. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר עשרה ימים, להמשיך להאכיל יומי באמצעות התקשורת hESC ללא SPT. Feed תרבויות יומיים עד מושבות hESC הדמוילהופיע (איור 5 א, המושבה P0). זיהוי מושבות מחסה iPSCs המשוערת על ידי הגרעין הגבוה שלהם: יחס cytoplasmic ו nucleoli הבולט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מושבות בלו והעברה ידניות עם מורפולוגיה hESC הדמוי להפריד בארות לתרבות והרחבה כקווים נפרדים במערכת מזין חינם. מושבות ניכרות צריכות להסתגל במהירות לתנאים אלה. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר מושבות ציפוי ניכר קווי iPSC המשוערים הדיסקרטיים אלה נחשבים כיום מעבר 1 (P1). תרבויות עדכונים יומיים עם mTeSR1. מעבר ולהרחיב קווי iPSC באמצעות נהלים סטנדרטיים. זה עלול לקחת מספר ימים עד שבוע עבור מושבות p1 להגיע לגודל שבו הם צריכים להיות passaged. </li></ol></li></ol> 7. שימור iPSCs בתרבות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Feed ולהעריך תרבויות יומיות. ידני באזורי בלו מפגינים בידול גלוי על ידי גירוד עם טפטף זכוכית סטרילית או קצה פיפטה מיקרו. שינוי תקשורת לאחר קטיף יומי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעבר תאים לאחר approximately כל ארבעה ימים: בעדינות התקשורת לשאוב, להוסיף 1 מ&quot;ל Dispase חם (1 מ&quot;ג / מ&quot;ל) לכל היטב צלחת 6-היטב (חצי נפח האכלה), ואז לדגור על 37 מעלות צלזיוס במשך כ -4 דקות. הקצוות של המושבות יתחילו להרים, אשר נראה כמו מתווה לבן ברחבי המושבה. בעדינות לשאוב Dispase ולשטוף 3x עם חימם DMEM / F12. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 2 מ&quot;ל mTeSR1 ולהשתמש מרים תא להרים את מושבות מהצלחת. השתמש פיפטה 5 מ&quot;ל סרולוגית או micropipette P1000 כדי triturate התאים בעדינות עד מושבות מחולקות לאשכולות קטנים. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הימנע לייצר אשכולות קטנים מאוד או תאים בודדים, כמו התפשטות הישרדות עוקבת תהיה תת-אופטימלית. כאשר מחדש ציפוי מושבות, 1: 4 ל -1: 6 פיצול ישמור צפיפות מושבה אופטימלית. הוצא בעדינות מושבות תקשורת מהצלחת ולהוסיף חדשות, בארות מצופות matrigel. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Yamanaka, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induced+pluripotent+stem+cells%3A+past%2C+present%2C+and+future%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+stem+cell%22%5BJournal%5D)">Induced pluripotent stem cells: past, present, and future.</a> Cell stem cell. 10 (6), 678-684 (2012).</li>
<li>Boulting, G. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+functionally+characterized+test+set+of+human+induced+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+biotechnology%22%5BJournal%5D)">A functionally characterized test set of human induced pluripotent stem cells.</a> Nature biotechnology. 29 (3), 279-286 (2011).</li>
<li>Thomson, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic+stem+cell+lines+derived+from+human+blastocysts%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Embryonic stem cell lines derived from human blastocysts.</a> Science. 282 (5391), 1145-1147 (1998).</li>
<li>Guenther, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chromatin+structure+and+gene+expression+programs+of+human+embryonic+and+induced+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+stem+cell%22%5BJournal%5D)">Chromatin structure and gene expression programs of human embryonic and induced pluripotent stem cells.</a> Cell stem cell. 7 (2), 249-257 (2010).</li>
<li>Polo, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+type+of+origin+influences+the+molecular+and+functional+properties+of+mouse+induced+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Cell type of origin influences the molecular and functional properties of mouse induced pluripotent stem cells.</a> Nat Biotechnol. 28 (8), 848-855 (2010).</li>
<li>Ono, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+induced+pluripotent+stem+cells+from+human+nasal+epithelial+cells+using+a+Sendai+virus+vector%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Generation of induced pluripotent stem cells from human nasal epithelial cells using a Sendai virus vector.</a> PloS one. 7 (8), e42855(2012).</li>
<li>Zhou, W., Freed, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adenoviral+gene+delivery+can+reprogram+human+fibroblasts+to+induced+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Adenoviral gene delivery can reprogram human fibroblasts to induced pluripotent stem cells.</a> Stem Cells. 27 (11), 2667-2674 (2009).</li>
<li>Brennand, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modelling+schizophrenia+using+human+induced+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Modelling schizophrenia using human induced pluripotent stem cells.</a> Nature. 473 (7346), 221-225 (2011).</li>
<li>Mou, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+multipotent+lung+and+airway+progenitors+from+mouse+ESCs+and+patient-specific+cystic+fibrosis+iPSCs%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+stem+cell%22%5BJournal%5D)">Generation of multipotent lung and airway progenitors from mouse ESCs and patient-specific cystic fibrosis iPSCs.</a> Cell stem cell. 10 (4), 385-397 (2012).</li>
<li>Stadtfeld, M., Nagaya, M., Utikal, J., Weir, G., Hochedlinger, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induced+pluripotent+stem+cells+generated+without+viral+integration%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Induced pluripotent stem cells generated without viral integration.</a> Science. 322 (5903), 945-949 (2008).</li>
<li>Huangfu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+pluripotent+stem+cells+by+defined+factors+is+greatly+improved+by+small-molecule+compounds%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Induction of pluripotent stem cells by defined factors is greatly improved by small-molecule compounds.</a> Nat Biotechnol. 26 (7), 795-797 (2008).</li>
<li>Kuperman, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+effects+of+interleukin-13+on+epithelial+cells+cause+airway+hyperreactivity+and+mucus+overproduction+in+asthma%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Direct effects of interleukin-13 on epithelial cells cause airway hyperreactivity and mucus overproduction in asthma.</a> Nat Med. 8 (8), 885-889 (2002).</li>
<li>Braunstahl, G. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Segmental+bronchoprovocation+in+allergic+rhinitis+patients+affects+mast+cell+and+basophil+numbers+in+nasal+and+bronchial+mucosa%5BTitle%5D)+AND+%22American+journal+of+respiratory+and+critical+care+medicine%22%5BJournal%5D)">Segmental bronchoprovocation in allergic rhinitis patients affects mast cell and basophil numbers in nasal and bronchial mucosa.</a> American journal of respiratory and critical care medicine. 164 (5), 858-865 (2001).</li>
<li>Compalati, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+link+between+allergic+rhinitis+and+asthma%3A+the+united+airways+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+review+of+clinical+immunology%22%5BJournal%5D)">The link between allergic rhinitis and asthma: the united airways disease.</a> Expert review of clinical immunology. 6 (3), 413-423 (2010).</li>
<li>Crimi, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammatory+and+mechanical+factors+of+allergen-induced+bronchoconstriction+in+mild+asthma+and+rhinitis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+applied+physiology%22%5BJournal%5D)">Inflammatory and mechanical factors of allergen-induced bronchoconstriction in mild asthma and rhinitis.</a> Journal of applied physiology. 91 (3), 1029-1034 (2001).</li>
<li>Djukanovic, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bronchial+mucosal+manifestations+of+atopy%3A+a+comparison+of+markers+of+inflammation+between+atopic+asthmatics%2C+atopic+nonasthmatics+and+healthy+controls%5BTitle%5D)+AND+%22The+European+respiratory+journal+%3A+official+journal+of+the+European+Society+for+Clinical+Respiratory+Physiology%22%5BJournal%5D)">Bronchial mucosal manifestations of atopy: a comparison of markers of inflammation between atopic asthmatics, atopic nonasthmatics and healthy controls.</a> The European respiratory journal : official journal of the European Society for Clinical Respiratory Physiology. 5 (5), 538-544 (1992).</li>
<li>Gaga, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Eosinophils+are+a+feature+of+upper+and+lower+airway+pathology+in+non-atopic+asthma%2C+irrespective+of+the+presence+of+rhinitis%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+and+experimental+allergy+%3A+journal+of+the+British+Society+for+Allergy+and+Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">Eosinophils are a feature of upper and lower airway pathology in non-atopic asthma, irrespective of the presence of rhinitis.</a> Clinical and experimental allergy : journal of the British Society for Allergy and Clinical Immunology. 30 (5), 663-669 (2000).</li>
<li>Hurst, J. R., Wilkinson, T. M., Perera, W. R., Donaldson, G. C., Wedzicha, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relationships+among+bacteria%2C+upper+airway%2C+lower+airway%2C+and+systemic+inflammation+in+COPD%5BTitle%5D)+AND+%22Chest%22%5BJournal%5D)">Relationships among bacteria, upper airway, lower airway, and systemic inflammation in COPD.</a> Chest. 127 (4), 1219-1226 (2005).</li>
<li>Gaga, M., V, A. M., Chanez, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Upper+and+lower+airways%3A+similarities+and+differences%5BTitle%5D)+AND+%22European+respiratory+monograph%22%5BJournal%5D)">Upper and lower airways: similarities and differences.</a> European respiratory monograph. 18, 1-15 (2001).</li>
<li>Lopez-Guisa, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Airway+epithelial+cells+from+asthmatic+children+differentially+express+proremodeling+factors%5BTitle%5D)+AND+%22J+Allergy+Clin+Immunol%22%5BJournal%5D)">Airway epithelial cells from asthmatic children differentially express proremodeling factors.</a> J Allergy Clin Immunol. 129 (4), 990-997 (2012).</li>
<li>Doi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+methylation+of+tissue-+and+cancer-specific+CpG+island+shores+distinguishes+human+induced+pluripotent+stem+cells%2C+embryonic+stem+cells+and+fibroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+genetics%22%5BJournal%5D)">Differential methylation of tissue- and cancer-specific CpG island shores distinguishes human induced pluripotent stem cells, embryonic stem cells and fibroblasts.</a> Nature genetics. 41 (12), 1350-1353 (2009).</li>
<li>Poole, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissecting+childhood+asthma+with+nasal+transcriptomics+distinguishes+subphenotypes+of+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Allergy+Clin+Immunol%22%5BJournal%5D)">Dissecting childhood asthma with nasal transcriptomics distinguishes subphenotypes of disease.</a> J Allergy Clin Immunol. , (2014).</li>
<li>Ji, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+transcriptional+and+epigenomic+reprogramming+from+pediatric+nasal+epithelial+cells+to+induced+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Allergy+Clin+Immunol%22%5BJournal%5D)">Dynamic transcriptional and epigenomic reprogramming from pediatric nasal epithelial cells to induced pluripotent stem cells.</a> J Allergy Clin Immunol. 135 (1), 236-244 (2015).</li>
<li>Guajardo, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+gene+expression+profiles+in+nasal+respiratory+epithelium+reflect+stable+versus+acute+childhood+asthma%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+allergy+and+clinical+immunology%22%5BJournal%5D)">Altered gene expression profiles in nasal respiratory epithelium reflect stable versus acute childhood asthma.</a> The Journal of allergy and clinical immunology. 115 (2), 243-251 (2005).</li>
<li>Yamanaka, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-specific+pluripotent+stem+cells+become+even+more+accessible%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Patient-specific pluripotent stem cells become even more accessible.</a> Cell Stem Cell. 7 (1), 1-2 (2010).</li>
<li>Kim, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Donor+cell+type+can+influence+the+epigenome+and+differentiation+potential+of+human+induced+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Donor cell type can influence the epigenome and differentiation potential of human induced pluripotent stem cells.</a> Nature. 29 (12), 1117-1119 (2011).</li>
<li>Warlich, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lentiviral+vector+design+and+imaging+approaches+to+visualize+the+early+stages+of+cellular+reprogramming%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Lentiviral vector design and imaging approaches to visualize the early stages of cellular reprogramming.</a> Mol Ther. 19 (4), 782-789 (2011).</li>
<li>Wicell. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Wicell+Feeder+Based+%28MEF%29+Pluripotent+Stem+Cell+Protocols%22">Wicell Feeder Based (MEF) Pluripotent Stem Cell Protocols</a>. , (2003).</li>
<li>Harkema, J. R., Carey, S. A., Wagner, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+nose+revisited%3A+a+brief+review+of+the+comparative+structure%2C+function%2C+and+toxicologic+pathology+of+the+nasal+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol+Pathol%22%5BJournal%5D)">The nose revisited: a brief review of the comparative structure, function, and toxicologic pathology of the nasal epithelium.</a> Toxicol Pathol. 34 (3), 252-269 (2006).</li>
<li>Allegrucci, C., Young, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differences+between+human+embryonic+stem+cell+lines%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Reprod+Update%22%5BJournal%5D)">Differences between human embryonic stem cell lines.</a> Hum Reprod Update. 13 (2), 103-120 (2007).</li>
<li>Yoshida, Y., Yamanaka, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+stem+cell+advances%3A+induced+pluripotent+stem+cells+for+disease+modeling+and+stem+cell-based+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Recent stem cell advances: induced pluripotent stem cells for disease modeling and stem cell-based regeneration.</a> Circulation. 122 (1), 80-87 (2010).</li>
<li>Pasca, S. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+iPSC-derived+neurons+to+uncover+cellular+phenotypes+associated+with+Timothy+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+medicine%22%5BJournal%5D)">Using iPSC-derived neurons to uncover cellular phenotypes associated with Timothy syndrome.</a> Nature medicine. 17 (12), 1657-1662 (2011).</li>
<li>Lai, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alternate+methods+of+nasal+epithelial+cell+sampling+for+airway+genomic+studies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Allergy+Clin+Immunol%22%5BJournal%5D)">Alternate methods of nasal epithelial cell sampling for airway genomic studies.</a> J Allergy Clin Immunol. , (2015).</li>
<li>Shi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+combined+chemical+and+genetic+approach+for+the+generation+of+induced+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">A combined chemical and genetic approach for the generation of induced pluripotent stem cells.</a> Cell Stem Cell. 2 (6), 525-528 (2008).</li>
<li>Okita, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+more+efficient+method+to+generate+integration-free+human+iPS+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A more efficient method to generate integration-free human iPS cells.</a> Nature. 8 (5), 409-412 (2011).</li>
<li>Dye, B. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+generation+of+human+pluripotent+stem+cell+derived+lung+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">In vitro generation of human pluripotent stem cell derived lung organoids.</a> Elife. 4, (2015).</li>
<li>Huang, S. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+generation+of+lung+and+airway+epithelial+cells+from+human+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Efficient generation of lung and airway epithelial cells from human pluripotent stem cells.</a> Nat Biotechnol. 32 (1), 84-91 (2014).</li>
<li>Wong, A. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Directed+differentiation+of+human+pluripotent+stem+cells+into+mature+airway+epithelia+expressing+functional+CFTR+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+biotechnology%22%5BJournal%5D)">Directed differentiation of human pluripotent stem cells into mature airway epithelia expressing functional CFTR protein.</a> Nature biotechnology. 30 (9), 876-882 (2012).</li>
<li>Marchetto, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptional+signature+and+memory+retention+of+human-induced+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Transcriptional signature and memory retention of human-induced pluripotent stem cells.</a> PloS one. 4 (9), e7076(2009).</li>
<li>Nukaya, D., Minami, K., Hoshikawa, R., Yokoi, N., Seino, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preferential+gene+expression+and+epigenetic+memory+of+induced+pluripotent+stem+cells+derived+from+mouse+pancreas%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Cells%22%5BJournal%5D)">Preferential gene expression and epigenetic memory of induced pluripotent stem cells derived from mouse pancreas.</a> Genes Cells. 20 (5), 367-381 (2015).</li>
<li>Vaskova, E. A., Stekleneva, A. E., Medvedev, S. P., Zakian, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%27Epigenetic+memory%27+phenomenon+in+induced+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Naturae%22%5BJournal%5D)">'Epigenetic memory' phenomenon in induced pluripotent stem cells.</a> Acta Naturae. 5 (4), 15-21 (2013).</li>
<li>Bar-Nur, O., Russ, H. A., Efrat, S., Benvenisty, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epigenetic+memory+and+preferential+lineage-specific+differentiation+in+induced+pluripotent+stem+cells+derived+from+human+pancreatic+islet+beta+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Epigenetic memory and preferential lineage-specific differentiation in induced pluripotent stem cells derived from human pancreatic islet beta cells.</a> Cell Stem Cell. 9 (1), 17-23 (2011).</li>
<li>Jandial, R., Levy, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+alchemy%3A+induced+pluripotent+stem+cells+retain+epigenetic+memory%5BTitle%5D)+AND+%22World+Neurosurg%22%5BJournal%5D)">Cellular alchemy: induced pluripotent stem cells retain epigenetic memory.</a> World Neurosurg. 75 (1), 5-6 (2011).</li>
<li>Kim, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epigenetic+memory+in+induced+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Epigenetic memory in induced pluripotent stem cells.</a> Nature. 467 (7313), 285-290 (2010).</li>
<li>Ohi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incomplete+DNA+methylation+underlies+a+transcriptional+memory+of+somatic+cells+in+human+iPS+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Incomplete DNA methylation underlies a transcriptional memory of somatic cells in human iPS cells.</a> Nat Cell Biol. 13 (5), 541-549 (2011).</li>
</ol>

למחברים אין ניגודי אינטרסים לחשוף.

תאי אפיתל האף (NECs) מהווים פלטפורמה נגישה ללימוד מחלות דרכי הנשימה, ו- NEC-iPSCs להציע דרך מרגשת לחקור את התפתחות המחלה, טיפול ותרפיה 1,31,32. NECs ניתן להשיג בקלות ללא 6,23 נהלים מלחיצים או מזיקים. מניסיוננו, הדגימה של רירית האף כמתואר בפרוטוקול זה נראה פחות מלחיץ נתפס טוב יותר מאשר איסוף דם לילדים. לכן, שיטה זו עשויה להיות שימושית במיוחד באוכלוסיות מטופלים ילדים ורלוונטי לומד מחלות דרכי הנשימה. היתרון השני של NECs הוא שברגע שהם בתרבות, תאי אפיתל נבחרים עם ...

תאי גזע מושרים ממדגם אדם (hiPSCs) הם טכנולוגיה לפיתוח מהיר של חקר תאי גזע. הם מציעים אלטרנטיבת תאי גזע עובריים (hESC) מחקר עם הרבה פחות 1,2 חסרונות אתיים ומוסריים. למרות שהם אינם זהים epigenetically כדי hESCs 3-5, hiPSCs מציע דרך ייחודית לבנות מודל פנוטיפים התפתחות ומחלות, והם יכולים לנבוע רקמות רלוונטיות למצב המחלה 5-8. שיטות חדשות של hiPSCs יצירת נבדקות ללא הרף כדי לזהות סוגי תאים אופטימלי להתחיל עם, כדרך להכין iPSCs GMP באיכות מתאימה להשתלה, וגם להגדיל את העיתוי ואת היעילות של תהליך תכנות מחדש 6,9-11. תאי אפיתל דרכי נשימה הם קריטיים בהתפתחות דלקת אלרגית 12, ו האפיתל הוא נהג עיקרי של תגובות אלרגיות שיפוץ דרך נשימה באמצעות אינטראקציה עם immunתאי דואר סטרומה. אפיתל דרכי הנשימה ממלאת תפקיד חיוני מהמוצא וההתמדה של מחלות ריאה כגון אסטמה. עם זאת, תאי אפיתל דרכי נשימה תחתונה קשים להשיג במסגרת רפואית, במיוחד מחולים וילדי ביקורת בריאים. נתונים ממחקרים כמה תומכי ההנחה כי תאי אפיתל מן רירית אף הם פרוקסי תקף ומעשי עבור תאי אפיתל דרכי נשימה נמוכה 13-20, במיוחד כאשר לומדים תגובות מזהמי אוויר אלרגנים. רירית האף מורכבת יותר מ -90% דרך נשימה ריסי בתאי אפיתל דגימה לתאי האפיתל אף אלה (NECs) יכולה להתבצע בקלות אצל ילדים צעירים כמו גיל ארבעה או חמש, כפי שהוא פחות פולשנית מאשר טכניקות דגימת תא / רקמה אחרות והוא קשור לסיכון מינימאלי של תופעות לוואי כגון זיהום 20-23. הוא מציע דרך מהירה ופשוטה לדגום שני ילדים בריאים וחולים ללא ארוכה, מיותר, ולעתים קרובות procedu ברונכוסקופיה הכואבמיל מחייבי הרגעה. מחקרים קודמים מצאו כי תת המחלה קשורה חומרת האסתמה ניתן להבחין הן רירית האף, כמו גם דגימות תאים הסימפונות שנלקחו ילדים אסתמטיים, ביטוי גנים בין שני סוגי רקמות היה דומה כ -90% מהגנים הלא בכל מקום 22 , 24. כמקור iPSCs, NECs להציע יתרונות על פני סוגי תאים אחרים מנוצל לעיתים קרובות. פיברובלסטים משמשים לעתים קרובות דור iPSC, אבל למרות תאים אלה יכולים להיות מתורבתים בקלות מתוך ביופסיה של עור, תהליך זה בדרך כלל דורש הרדמה מקומית, חתך, ותפרים, והיא קשורה עם סיכון מסוים של זיהום. לכן השיג הסכמה מדעת מחולים עבור סוג זה של ביופסיה יכולה להיות קשה 25. חלופה אחת כדי פיברובלסטים היא תאי הדם היקפיים mononuclear (PBMCs). עם זאת, זה יכול להיות קשה להשיג דם מספק עבור דור iPSC מחול ילדים. בנוסף, קיימות מגבלות של ap במורד הזרםplications עבור פיברובלסטים iPSCs דם תא נגזר, במיוחד קיבולת הבידול שלהם סוגי תאים מסוימים 5,26. לכן, בהתחשב הנגישות היחסית ואת הסיכון הנמוך של תופעות לוואי בעקבות בגבייתם NECs מהווה מקור תא אידיאלי עבור דור iPSC מאוכלוסיות ילדים. iPSCs קיבלו הרבה תשומת לב לאחרונה כפלטפורמה ללימוד ההתפתחות האנושית, יצירת מודלים המחלה רומן, כמקור פוטנציאלי של תאים עבור טיפולים אישית. לפני את מלוא הפוטנציאל של הטכנולוגיה הזו יכולה להתממש, את הבסיס המולקולרי של תהליך תכנות מחדש צריך להיות הובהר, אך לעת עתה פרוטוקול זה ואת הנהלים המפורטים בתוך יבהיר את המחקרים התמקדו חשיפות דרכי הנשימה, כמו גם לספק פלטפורמה לומד את ההשפעות של טיפול תרופתי אישי המעורב iPSCs. העבודה השיתופית של מספר מעבדות הובילה generation של טכניקה מוצלחת לא רק דגימה של רירית האף, אבל גם culturing NECs, ו תכנות מחדש של תאים אלה iPSCs 23. מאמר זה מספק תיאור של פרוטוקול דגימה אופטימלית, culturing, ותנאי תכנות מחדש.

<table><tbody><tr><td>15 מ"ל</td> פרוטוקול <td>פישר סיינטיפיק</td><td>14-959-49D</td><td>חרוטי שלב 1.1.</td></tr><tr>פרוטוקול <td>BEGM</td><td>Lonza</td><td>CC-3170</td><td>שלב 1.1.</td></tr><tr><td>Penn/Strep/Fungicide</td><td>Life Technologies</td><td>15240-062</td><td>פרוטוקול שלב 1.1.</td></tr><tr><td>פרוטוקול Penn/Strep</td><td>Life Technologies</td><td>15140-122</td><td>שלב 4.א.</td></tr><tr><td>מברשת ציטולוגיה ציטוסופט</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>22-263-357</td><td>פרוטוקול שלב 1.2.</td></tr><tr><td>טריפן כחול</td><td>פישר מדעי</td><td>MT-25-900-CI</td><td>פרוטוקול שלב 2.1.</td></tr><tr><td>המציטומטר</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>02-671-54</td><td>פרוטוקול שלב 2.1.</td></tr><tr><td>פרוטוקול PBS</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP2438-4</td><td>שלב 2.2.</td></tr><tr><td>קליפס משפך ציטולוגיה</td> פרוטוקול <td>פישר סיינטיפיק</td><td>10-357</td><td>שלב 2.2.</td></tr><tr><td>משפך ציטוספין</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>23-640-320</td><td>פרוטוקול שלב 2.2.</td></tr><tr><td>ציטוספין 4</td> פרוטוקול <td>פישר A78300003 מדעי</td><td></td><td>שלב 2.2.</td></tr><tr><td>שקופית ריקה</td><td>פרוטוקול פישר סיינטיפיק</td><td>S95933</td><td>שלב 2.2.</td></tr><tr><td>ערכת כתמים hema 3</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>22-122-911</td><td>פרוטוקול שלב 2.2.</td></tr><tr><td>קולגן עורי בקר, סוג 1</td><td>Life Technologies</td><td>A1064401</td><td>פרוטוקול שלב 3.2.</td></tr><tr><td>בקבוק T25</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>08-772-45</td><td>פרוטוקול שלב 3.3.</td></tr><tr>פרוטוקול <td>טריפסין</td><td>לונזה</td><td>CC-5012</td><td>שלב 5.2.</td></tr><tr><td>תמיסת נטרול טריפסין</td><td>פרוטוקול לונזה</td><td>CC-5002</td><td>שלב 5.2.</td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי (FBS), מעוקר בחום ב-65 מעלות; C למשך 30 דקות</td> פרוטוקול <td>Sigma-Aldrich</td><td>F2442</td><td>שלב 5.5.</td></tr><tr><td>דימתיל סולפוקסיד Hybri-Max&trade;, מסונן סטרילי, BioReagent, מתאים להיברידומה, &ge; 99.7%</td><td>פרוטוקול Sigma-Aldrich</td><td>D2650</td><td>שלב 5.5.</td></tr><tr><td>וירוס פוליציסטוני*</td><td>למשל פרוטוקול Millipore</td><td>SCR511</td><td>שלב 6.4.&nbsp; מופיע מקור מסחרי של וקטור תכנות מחדש. אנו משתמשים באופן שגרתי בפלסמיד 4 ב-1 שדווח על ידי Voelkel et al (PMID: 20385817) כדי ליצור VSV-G-פסאודוטיפ תכנות מחדש של וירוס לנטי בתוך הבית. ניתן להשיג פלסמיד זה על ידי יצירת קשר&nbsp;</td></tr><tr><td>פוליברן,</td><td>סנטה קרוז ביוטכנולוגיה,</td><td>SC-134220</td>, <td>פרוטוקול שלב 6.4.</td></tr><tr><td>CF1 MEFs מוקרן</td><td>GlobalStem&nbsp;</td>פרוטוקול <td>GSC-6301G</td><td>שלב 6.4.</td></tr><tr><td>מדיית hESC</td><td>ראה מתכון הכלול בפרוטוקול</td><td></td><td>שלב 6.11.</td></tr><tr><td>SB431542</td> פרוטוקול <td>Stemgent</td><td>04-0010</td><td>שלב 6.11.</td></tr><tr><td>PD0325901</td> פרוטוקול <td>Stemgent</td><td>04-0006</td><td>שלב 6.11.</td></tr><tr><td>תיאזובין&nbsp;</td><td>פרוטוקול Stemgent</td><td>04-0017</td><td>שלב 6.11.</td></tr><tr>פרוטוקול Matrigel <td>BD Biosciences</td><td>354277</td> <td>מוסמך hESC</td><td>שלב 6.13.</td></tr><tr><td>צלחת קורנינג, 6 בארות</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>08-772-1B</td><td>פרוטוקול שלב 6.13.</td></tr><tr><td>פרוטוקול mTeSR1</td><td>StemCell</td><td>5850</td><td>שלב 6.13.</td></tr><tr><td>בקבוק פילטר חד פעמי 250 מ"ל (0.22 ומיקרו; m)</td><td>פישר</td><td>SCGP-U02-RE&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>פרוטוקול</td><td>StemCell</td><td>7923</td><td>שלב 7.3.</td></tr><tr><td>DMEM/F12</td><td>Life Technologies</td><td>11320-033</td><td>פרוטוקול שלב 7.3.</td></tr><tr><td>מרים תאים</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>08-100-240</td><td>פרוטוקול שלב 7.4.</td></tr><tr><td>hESC Media**</td><td></td><td></td><td>פרוטוקול שלב 6.11. יש לערבב רכיבים ולאחר מכן לעקר את המסנן. ניתן לשמור את המדיה בטמפרטורה של 4 מעלות; C עד שבועיים. בעת חימום מדיה, אל תשאיר ב-37 מעלות; C ארוך מ-15 דקות</td></tr><tr><td>DMEM-F12 50/50 מדיה</td><td>Invitrogen</td><td>&nbsp; 11330-032</td><td>ריכוז סופי</td></tr><tr><td>סרום חלופי KO (KO-SR)</td><td>Invitrogen</td><td>10828-028</td><td>0.2</td></tr><tr><td>200 מ"מ L-גלוטמין</td><td>Invitrogen</td><td>25030-081</td><td>1 מ"מ</td></tr><tr><td>55 מ"מ &szlig;-מרקפטואתנול</td><td>Invitrogen</td><td>21985-023</td><td>0.1 מ"מ</td></tr><tr><td>100x חומצות אמינו לא חיוניות</td><td>Invitrogen</td><td>11140-050</td><td>1x</td></tr><tr><td>2 &micro; גר'/מ"ל גורם גדילה בסיסי פיברובלסטים (b-FGF)</td><td>Invitrogen</td><td>13256-029</td><td>4 ננוגרם/מ"ל</td></tr></tbody></table>

טפח תאי אפיתל באף הראשי מיילד לתכנת מחדש לתאי גזע מושרים

Cultivate Primary Nasal Epithelial Cells from Children and Reprogram into Induced Pluripotent Stem Cells

תאי אפיתל באף (NECs) הם החלק של דרכי הנשימה המגיבים למזהמי אוויר והם התאים הראשונים הנגועים בנגיפי נשימה. הם גם מעורבים במחלות רבות של דרכי הנשימה באמצעות התגובה החיסונית המולדת שלהם והאינטראקציה עם תאי סטרומה של מערכת החיסון ודרכי הנשימה. NECs מעניינים במיוחד למחקרים בילדים בשל נגישותם במהלך ביקורים קליניים. תאי גזע פלוריפוטנטיים מושרים אנושיים (iPSCs) נוצרו מסוגי תאים מרובים ומהווים כלי רב עוצמה למידול התפתחות ומחלות אנושיות, כמו גם ליישומים הפוטנציאליים שלהם ברפואה רגנרטיבית. זהו הפרוטוקול הראשון שפורס שיטות לייצור מוצלח של iPSCs מ-NECs שמקורם במשתתפים ילדים למטרות מחקר. הוא מתאר כיצד להשיג תאי אפיתל באף מילדים, כיצד לייצר תרביות NEC ראשוניות מדגימות אלה, וכיצד לתכנת מחדש NECs ראשוניים ל-iPSCs מאופיינים היטב. דגימות רירית האף שימושיות במחקרים אפידמיולוגיים הקשורים להשפעות זיהום אוויר בילדים, ומספקות כלי חשוב לחקר מחלות דרכי הנשימה. תאי אף ראשוניים ו-iPSCs הנגזרים מהם יכולים להוות כלי לאספקת חומר בלתי מוגבל למחקר ספציפי למטופל בתחומים מגוונים של ביולוגיה אפיתל של דרכי הנשימה, כולל מחקר אסתמה ו-COPD.

החלק הראשוני של האף, שנקרא פרוזדור האף, הוא האזור המוקף סחוס 29. המברשת צריכה ללכת בצורה חלקה בעבר באזור זה של האף, מעבר שסתום האף (ostium internum, או &quot;חור השחור&quot; לראות בחלק האחורי של Nare), ואת המדגם המתקבל חלזוני הנח (איור 1). Turbinates האף הם מבנים גרמיים להגדיל את שטח הפנים של האף 29, מה שהופך אותם במיקום אידיאלי עבור דגימה. האזור הוא מצופה גם על ידי רקמה רירית vascularized, דומות מאוד רפידות ש...

פרסום זה מדגים שיטות לדגימה ותרבית מוצלחת של רירית אפיתל האף מילדים, ותכנות מחדש של תאים אלה לתאי גזע פלוריפוטנטיים מושרים (iPSCs).

Nasal epithelial cells (NECs) are the part of the airways that respond to air pollutants and are the first cells infected with respiratory viruses. They ...

המטרה הכוללת של פרוצדורה זו היא לגדל תאי אפיתל נזאליים שהופקו מילדים ולתכנתם מחדש לתאי גזע פלוריפוטנטיים מושריים. שיטה זו יכולה לסייע במתן מענה לשאלות מפתח בתחום מחלות דרכי הנשימה, כגון האופן שבו מתפתח אסתמה. היתרון המרכזי של טכניקה זו הוא שהיא מאפשרת איסוף של תאי אפיתל מדרכי הנשימה של ילדים ללא צורך בפרוצדורות מלחיצות.בתרבית, אלו נמצאים באוכלוסייה הומוגנית, ומשמשים כמקור מצוין להפקת תאי גזע פלוריפוטנטיים מושריים או iPSCs. הרעיון למחקר זה עלה לראשונה כאשר שוחחנו עם ד"ר Ji וד"ר Hershey על מחקרם לאיסוף תאי מזו-אפיתל מילדים כדי לבחון וריאציה אפיגנטית באסתמה ובזיהום אוויר.הדגמה חזותית של טכניקות אלה היא קריטית, מכיוון שדגימה מהאף ותכנות מחדש של תאי אפיתל נזאליים ל-iPSCs הן טכניקות קשות ללמידה, שכן הן מבוססות על ניסיון אישי ולא על פרוטוקולים מבוססים. לפני ביקור המשתתף, העבירו שני מיליליטר של מצע גידול טרי לאפיתל ברונכיאלי, המכונה BEGM, לשפופרת קונית של 15 מיליליטר. לאחר מכן, הוסיפו למצע זה 20 מיקרוליטר של תערובת של penicillin, streptomycin ו-amphotericin b לריכוז סופי של 0.01%. כאשר המשתתף מגיע, הנחו אותו לשבת על כיסא.לאחר מכן, פתחו מברשת ציטולוגיה מיד לפני לקיחת הדגימה, והימנעו מהנחתה על משטחים כלשהם כדי להבטיח שהיא תישאר סטרילית. המשיכו והנחו את המשתתף לשבת ללא תנועה ולהטות את ראשו כלפי מעלה לכיוון התקרה. אם המשתתף אינו שקט, בקשו ממנו לשבת על ידיו כדי שלא ינסה להדוף את המברשת.בשלב הבא, כוון והכנס את המברשת לחלק האחורי של האף, במקום שבו המעבר נהיה צר. לאחר מכן, הוצא את המברשת מנחיר על ידי החלקה כלפי מטה תוך כדי תנועה סיבובית של שורש כף היד. המשך בהנחת המברשת לתוך המבחנה הקונית שהוכנה מראש, וודא שהיא טבולה ב-BEGM.לאחר מכן, גזרו את החלק העודף של המברשת והדקו את הפקק על המבחנה. לאחר איסוף הדגימה, הניחו אותה מיד בכלי כימי (beaker) מלא במים חמים, כך שתישמר בטמפרטורה הקרובה ככל האפשר ל-37 °C. לאחר מכן, העבירו אותה למעבדה.עם ההגעה למעבדה, נער את המברשת בעדינות בתוך ה-BEGM. לאחר מכן, העבר 10 µL מהדגימה והוסף לה 10 µL של צבע לתאים חיים/מתים. לאחר מכן, העבר תערובת זו להמיציטומטר.ספרו רק את התאים החיים תחת מיקרוסקופ. לאחר ספירת התאים, קחו 50 µL מהדגימה ודללו אותה ל-200 µL באמצעות 1X PBS. העבירו את שארית תערובת התאים שלא דוללה, יחד עם המברשת, למקלח מים בטמפרטורה מבוקרת של 37 °C עד לזריעת התאים.המשיכו בהוספת הדגימה המדוללת ב-PBS למשפך cytospin המחובר לلامקריס (glass slide). סובבו את המערכת כולה במהירות של 400 rpm למשך שתי דקות. לאחר מכן, הסירו את המשפך והניחו לلامקריס להתייבש למשך הלילה בחושך.לאחר צביעת הפיתה ב-Hema 3, כפי שדון בפרוטוקול הטקסט, התבוננו בה תחת מיקרוסקופ וספרו את התאים. זהו את התאי האפיתל לפי מאפייניהם הייחודיים: צורה עמודית, ריסונים וגרעין עגול אחד, וקבעו את אחוזם של תאים אלו בדגימה.כדי להתחיל את הזריעה, סובבו בעדינות את המברשת בתוך המבחנה הקונוית בתוך מנדף תרביות רקמה מאושר, ולאחר מכן הוציאו אותה מהמבחנה. לאחר מכן, סובבו בעדינות את המברשת על פני השטח הפנימיים של בקבוק T25, שצופה מראש ב-bovine dermal collagen, תוך הקפדה לא לשרוט את הציפוי. לאחר מכן, השליכו את המברשת למכל פסולת ביולוגית מתאים.העבירו באיטיות בעזרת פיפט את התאים שנותרו ב-BEGM מהמבחנה הקונית אל בקבוק ה-T25, לפחות 5×10⁵ תאים. המשיכו בצפייה בתאים תחת מיקרוסקופ הפוך. לאחר גידול והעברה (passaging) של התאים, כפי שמתואר בטקסט, העבירו 5×10⁵ תאי אפיתל נזאליים לשתי מיליליטר של BEGM לכל באר בצלחת תרבית רקמות של שש בארות.לאחר מכן, דגרו את התאים למשך 24 שעות ב-37 °C וב-5% carbon dioxide. לאחר הדגירה, ודאו שהתאים מתרבים באופן נמרץ. לאחר מכן, הוסיפו Polybrene לכל באער המכיל BEGM עד לריכוז סופי של 8 µg/mL תחת מנדף כימיים.המשיכו בהדבקה (transduction) של תאי האפיתל הנחירים על ידי הוספת חלקיקי לנטיוירוס, המבטאים את Oct4, Sox2, Klf4 ו-c-Myc, למצע בכל באר כפי שפורט בפרוטוקול הכתוב. לאחר דגירה של התאים המודבקים למשך כשלוש שעות, הסירו את המצע המכיל את הווירוס והשליכו אותו בהתאם לנהלים המאושרים במוסד. לאחר מכן, החליפו את המצע ב-BEGM, והחזירו את תאי האפיתל הנחירים המודבקים לאינקובטור.לאחר שלושה ימים, החליפו את המצע ב-BEGM טרי. לאחר מכן דגרו את התאים שעברו טרנסדוקציה תחת אותם תנאים. למחרת, הוסיפו תמיסת ג'לטין 0.1% לשתי בארות של פלטת שש בארות, כדי להתחיל בהכנת פלטות מצופות בפיברובלסטים עובריים של עכבר.לאחר מכן, כסו את הפלטה במכסה המתאים לה, והדגירו אותה למשך לילה ב-37 °C. ביום החמישי, המשיכו להפשיר מבחנה המכילה כ-5 × 10⁵ תאי פיברובלסטים עובריים של עכבר שעברו אינאקטיבציה, המכונים MEFs. לאחר מכן, העבירו תאים אלו ל-10 milliliters של מצע MEF.המשיכו לסובב אותם ב-200 x g למשך חמש דקות. לאחר מכן, שאבו את העלייה (supernatant) ותלו את ה-MEFs מחדש באותו מצע. לאחר ספירת תאים אלו, שאבו את תמיסת הג'לטין מהפלטה בעלת שש בארות שהוכנה מראש.בשלב הבא, הוסיפו 1.87 × 10⁵ MEFs לכל באער בלוח המצופה בג'לטין, והדגירו בטמפרטורה של 37 °C למשך 24 שעות לפחות. לאחר מכן, ביום השישי של התרבית, שאבו את המצע המשומש מהתאים שעברו טרנסדוקציה ושטפו אותם ב-1X PBS. לאחר מכן, הוסיפו 1 ml של תמיסת trypsin בריכוז 0.05% לכל באער בלוח.לאחר ניתוק התאים, יש לבצע נטרול באמצעות תמיסה לנטרול טריפסין (trypsin neutralizing solution או TNS), ולאחר מכן לאסוף ולסבב את התאים בצנטריפוגה כפי שהוסבר קודם לכן. לאחר הסבוב, יש לשאוב את הנוזל העליון (supernatant) ולתרחף מחדש את התאים בארבעה milliliters של BEGM, בתוספת penicillin ו-streptomycin. לאחר מכן, יש להעביר שני milliliters של תרחיף תאים זה לכל אחת מהבארות בלוח שהוכנו מראש וצופו בג'לטין ו-MEF.לאחר דגירה של התאים למשך לילה, החליפו את ה-BEGM ב-2.5 milliliters של מצע סטנדרטי לתאי גזע עובריים אנושיים (hESC), המכיל 4 nanograms per milliliter של basic fibroblast growth factor. המשיכו לגדל את התאים ולהזין אותם מדי יום במצע hESC טרי, עד להופעת מושבות דמויות hESC בתרביות, המכילות תאי גזע פלוריפוטנטיים מושריים (iPSCs) משוערים. חלצו ידנית את המושבות הללו והעבירו אותן לבארות נפרדות של פלטה בעלת 24 בארות, על מנת לגדל ולהרחיב אותן כשבטים נפרדים במערכת נטולת תאי מאכילה (feeder-free).בתחילה, דגימות מהאף הן תערובת של סוגי תאים ופסולת תאית. עם זאת, בעקבות תרבית והחלפות של המצע, תאים אפיתליאליים הופכים לדומיננטיים בהכנות אלו, כפי שמוצג בתמונה זו שצולמה יום אחד לאחר מעבר של התאים. כאן, תאים אפיתליאליים, הגדלים עד להגעה לקונפלואנסיות, מראים גרעינים גדולים וציטופלזמה מתוחה.בשל התכונות של חלקיקי הלנטי-וירוס ששימשו במחקר זה, כאשר תאי אפיתל נזאליים כאלו עוברים טרנסדוקציה, הם מבטאים את הסמן הפלואורסצנטי tdTomato, כפי שמוצג בתמונה העליונה מימין של התאים, ארבעה ימים לאחר הטרנסדוקציה. השוואה לתמונת השדה הבהיר (bright-field) התואמת מגלה שלא כל תא מראה אות tdTomato, כפי שעולה מהתמונה הממוזגת למטה. לפיכך, לא כל תא עבר טרנסדוקציה.עם זאת, יעילות התעתוק היא כ-90%כאשר תאי אפיתל של הנחיר שעברו תעתוק גודלים בתרבית כפי שמתואר בפרוטוקול, הם מובילים להיווצרות מושבות של iPSC. לאחר קצירת מושבות ה-iPSC וגידולן בתנאים סטנדרטיים ללא תאי מאכלה (feeder-free), תאים בודדים במושבות אלו הראו מורפולוגיה טיפוסית הדומה ל-hESC, כגון צורה עגולה, גרעין גדול ויחס גרעין-ציטופלזמה גבוה, כפי שמוצג בתמונה מוגדלת זו. לאחר רכישת מיומנות, ניתן לבצע טכניקה זו בשעה וחצי, אם היא מבוצעת כראוי.בעת ביצוע פרוצדורה זו, חשוב לזכור לדגום את הדגימה בצורה נכונה, לשמור על התאים בטמפרטורה של 37 °C, ולזרוע אותם במהירות האפשרית בצפיפות הנכונה. לאחר ביצוע פרוצדורה זו, ניתן לבצע שיטות אחרות, כגון הקמת ממשק אוויר-נוזל (air-liquid interface) באמצעות תאי אפיתל נזאליים ראשוניים, וזאת על מנת לענות על שאלות נוספות, כמו האופן שבו אנו מגיבים לאלרגנים ונפתוגנים. לאחר פיתחו, סלל तकनीक זה את הדרך עבור חוקרים למדל מחלות כגון אסטמה, COPD ופיברוזיס קיסטית.טכניקה זו מסייעת גם בחקר השפעות סביבתיות על התפתחות הריאות במערכת אנושית in vitro. לאחר צפייה בסרטון זה, תגבשו הבנה טובה לגבי האופן שבו ניתן לגדל תאי אפיתל נחירים מילדים ולהפיק iPSCs מאוכלוסייה זו. מאחר שאנו עובדים עם תאי גזע עובריים אנושיים ותאי גזע פלוריפוטנטיים מושריים, זכרו להישמע תמיד להנחיות המוסדיות והלאומיות.

cultivate-primary-nasal-epithelial-cells-from-children-reprogram-into

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

ביולוגיה התפתחותית

אנו מתארים כאן שיטה לביופסיה של רירית חוש הריח של העכברים וחללים האף האנושי. ביופסיות אלו יכולים לשמש גם לזיהוי חריגות מולקולרי במחלות מוח או בידוד multipotent גזע בוגרים לתאי כי יכול להיות מנוצל עבור השתלת תאים בבעלי חיים טראומה מוחית / מחלה.

בידוד באף גזע תאים חוש הריח של מכרסמים או בני אדם

תאי אפיתל באף, שהושגו באמצעות ביופסיה לגרד שטחית של מתנדבים אנושיים, הם התרחבו ומועברים על גבי מוסיף בתרבית רקמה. בהגיעם confluency, תאים גדלים בממשק נוזל האוויר, מניב תרביות של תאי ריסי ולא ריסי. תרביות תאי אפיתל באף מובחנות לספק מודלים ניסויים מעשי ללימוד הרירית בדרכי הנשימה.

Culturing של אדם תאי אפיתל באף בממשק האוויר הנוזלי

דור של תאי גזע pluripotent מושרה מספק סיכויים מרתקים לגזירה של השתלות אוטולוגית. עם זאת, ההתקדמות במדינת pluripotent מחדש בידול מייגע עדיין מעכבת תרגום קליני. כאן אנו מתארים את הגזירה של fibroblasts אדם הבוגר וההמרה הישירה שלהם לתאים עצביים מושרה ובידול שלאחר מכן לשושלות עצביות.

גזירה של fibroblasts אדם הבוגר וההמרה ישירה שלהם לתאים להרחבה עצבי אב

הרחבת תאי אפיתל ושט ילדים אנושיים ניצול תכנות מחדש מותנה מספקת חוקרים עם אוכלוסיית חולים ספציפיים של תאים שיכולים להיות מנוצלת עבור הנדסת בונת ושט להשתלה אוטולוגית לטיפול פגמים או פציעה ומגיש כמאגר מבחני מיון טיפוליים.

תכנות מחדש מותנה של תאי אפיתל ושט האדם Pediatric לשימוש בהנדסת רקמות וחקירת מחלות

פרוטוקול זה מתאר את התכנות של ראשי מי השפיר נוזל לבין הממברנה בתאי גזע mesenchymal לתוך תאי גזע pluripotent המושרה באמצעות גישה episomal-שילוב בתנאים מוגדרים לחלוטין מבחינה כימית. תהליכי מיצוי, תרבות, התכנות, ואפיון של תאי גזע pluripotent המושרה הנוצרת על ידי שיטות מחמירים מפורטים.

התכנות ראשי מי שפיר ו ממברנות התאים כדי Pluripotency בתנאים קסנו-חופשית

התכנות עצביים ישיר יוצרת הנוירונים זה לשמור על הגיל לתא ההתחלה סומטיים. כאן, אנו מתארים שיטה המבוססת על וקטורים יחיד לייצר נוירונים המושרה fibroblasts עורי שהושג מתורמים האנושי למבוגרים.

דור פשוטה של תרבות תשואה גבוהה של נוירונים המושרה מ Fibroblasts עור מבוגר

כאן נתאר שיטת הרלוונטית קלינית, יעילות גבוהה, ללא מזין לתכנת fibroblasts העיקרי אנושי לתוך תאי גזע pluripotent המושרה משתמש ששונה mRNAs קידוד גורמים התיכנות, בוגרת microRNA-367/302 מחקה. נכללים גם הם שיטות להערכת יעילות התיכנות, להרחיב iPSC המשובטים מושבות, לאשר את הביטוי של סמן pluripotency טרה-1-60.

מבוסס-RNA תכנות מחדש של האנושי Fibroblasts הראשי לתוך תאי גזע Pluripotent המושרה

מתכנות התא מחייב הקדמה של גנים מרכזיים, אשר לווסת ולתחזק את מצב התאים pluriפוטנטי. הפרוטוקול המתואר מאפשר היווצרות של תאי גזע מושרה pluripotent iPSCs) מושבות של האדם המעטפת הגוף ללא ויראלי/שילוב שיטות אך באמצעות RNAs שאינו משתנה (ננומטר-RNAs) בשילוב עם גורמי התחמקות החיסון הפחתת מנגנוני ההגנה הסלולריים.

בידוד של האדם למבוגרים פיברוכדורים מעור הבטן הדור של המושרה בתאי גזע Pluriפוטנטי באמצעות שיטה שאינה משלבת

כאן אנו מתארים את הבידוד, ההגברה וההתמיינות של תאי אפיתל האף האנושיים העיקריים (HNE) בממשק האוויר-נוזלי ופרוטוקול ביו-בנקאי המאפשר להקפיא בהצלחה ולאחר מכן להפשיר HNE מוגבר. הפרוטוקול מנתח תכונות אלקטרופיזיולוגיות של תאי HNE ממוינים ותיקון הפרשת כלוריד הקשור ל-CFTR בטיפולי אפנון שונים.

תאי אפיתל האף האנושיים העיקריים: ביובנקינג בהקשר של רפואה מדויקת

ההתקדמות האחרונה בפרוטוקולי התמיינות תאי גזע פלוריפוטנטיים המושרים על ידי בני אדם מאפשרת נגזרת מדורגת של סוגי תאים ספציפיים לאיברים. כאן, אנו מספקים שלבים מפורטים לתחזוקה והרחבה של תאי בסיס של דרכי הנשימה שמקורם ב-iPSC והתמיינותם לאפיתל רירית בתרביות ממשק אוויר-נוזל.

יצירת תרביות ממשק אוויר-נוזל של תאי אפיתל דרכי הנשימה מתאי גזע פלוריפוטנטיים אנושיים

למדו שיטה לא פולשנית לגידול תאי אפיתל באף מילדים ולתכנותם מחדש לתאי גזע מושרים (iPSCs). טכניקה זו מאפשרת מחקר מדעי חשוב על אסתמה ומחלות נשימה אצל ילדים.

טפח תאי אפיתל באף הראשי מיילד לתכנת מחדש לתאי גזע מושרים

גלה סרטונים נוספים