Name: הקלטת עכבר Ultrasonic קולות של להערכת תקשורת חברתית (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-06-05T15:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 28 s
Description: למד הקלטת קולות אולטרה-סאונד בעכברים להערכת תקשורת חברתית במודלים נוירופסיכיאטריים. שיטה זו מאפשרת ניתוח השפעת מוטציות גנטיות על התנהגות חברתית ושיתוף נתונים במאגר mouseTube.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי הקרן הצרפתית; על ידי ANR FLEXNEURIM [ANR09BLAN034003]; על ידי ANR [ANR-08-MNPS-037-01-SynGen]; על ידי Neuron-ERANET (EUHF-AUTISM); על ידי Fondation Orange; על ידי Fondation FondaMentale; על ידי Fondation de France; על ידי Fondation Bettencourt-Schueller. המחקר שהוביל למאמר זה זכה גם לתמיכה מההתחייבות המשותפת של יוזמת הרפואה החדשנית במסגרת הסכם מענק מס' 115300, אשר משאביו מורכבים מתרומה כספית מתוכנית המסגרת השביעית של האיחוד האירופי (FP7/2007-2013) ותרומה בעין של חברות EFPIA. אנו מודים לג'ולי לוי-שטראוס על הערותיהם המועילות על כתב היד ולשישה סוקרים אנונימיים שהערותיהם שיפרו באופן ניכר את כתב היד.

<ol><li>American Psychiatric Association. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Diagnostic+and+Statistical+Manual+of+Mental+Disorders%2C%0A++Fifth+Edition+%28DSM-V%29%22">Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders,
 Fifth Edition (DSM-V)</a>. , (2013).</li>
<li>Ey, E., Leblond, C. S., Bourgeron, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+Profiles+of+Mouse+Models+for+Autism+Spectrum+Disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Autism+Res%22%5BJournal%5D)">Behavioral Profiles of Mouse Models for Autism Spectrum Disorders.</a> Autism Res. 4 (1), 5-16 (2011).</li>
<li>Bourgeron, T., Jamain, S., Granon, S. Animal Models of Autism - Proposed Behavioral Paradigms and Biological Studies. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBourgeron%2C+T+%22Contemporary+Clinical+Neuroscience%3A+Transgenic+and+Knockout+Models+of+Neuropsychiatric+Disorders%22">Contemporary Clinical Neuroscience: Transgenic and Knockout Models of Neuropsychiatric Disorders</a>. , 151-174 (2006).</li>
<li>Scattoni, M. L., Crawley, J., Ricceri, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasonic+vocalizations%3A+A+tool+for+behavioural+phenotyping+of+mouse+models+of+neurodevelopmental+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci.+Biobehav.+Rev%22%5BJournal%5D)">Ultrasonic vocalizations: A tool for behavioural phenotyping of mouse models of neurodevelopmental disorders.</a> Neurosci. Biobehav. Rev. 33 (4), 508-515 (2009).</li>
<li>Portfors, C. V., Perkel, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+ultrasonic+vocalizations+in+mouse+communication%5BTitle%5D)+AND+%22Cur.+Opin.+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">The role of ultrasonic vocalizations in mouse communication.</a> Cur. Opin. Neurobiol. 28, 115-120 (2014).</li>
<li>Arriaga, G., Zhou, E. P., Jarvis, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Of+mice%2C+birds%2C+and+men%3A+the+mouse+ultrasonic+song+system+has+some+features+similar+to+humans+and+song-learning+birds%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+ONE%22%5BJournal%5D)">Of mice, birds, and men: the mouse ultrasonic song system has some features similar to humans and song-learning birds.</a> PLOS ONE. 7, e46610(2012).</li>
<li>Hammerschmidt, K., Schreiweis, C., Minge, C., Pääbo, S., Fischer, J., Enard, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+humanized+version+of+Foxp2+does+not+affect+ultrasonic+vocalization+in+adult+mice%3A+Ultrasonic+vocalization+of+%26%2334%3Bhumanized%26%2334%3B+FoxP2+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Brain+Behav%22%5BJournal%5D)">A humanized version of Foxp2 does not affect ultrasonic vocalization in adult mice: Ultrasonic vocalization of &#34;humanized&#34; FoxP2 mice.</a> Genes Brain Behav. , (2015).</li>
<li>Portfors, C. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Types+and+functions+of+ultrasonic+vocalizations+in+laboratory+rats+and+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Assoc.+Lab.+Anim.+Sci%22%5BJournal%5D)">Types and functions of ultrasonic vocalizations in laboratory rats and mice.</a> J. Am. Assoc. Lab. Anim. Sci. 46, 28-34 (2007).</li>
<li>Panksepp, J. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Affiliative+Behavior%2C+Ultrasonic+Communication+and+Social+Reward+Are+Influenced+by+Genetic+Variation+in+Adolescent+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+ONE%22%5BJournal%5D)">Affiliative Behavior, Ultrasonic Communication and Social Reward Are Influenced by Genetic Variation in Adolescent Mice.</a> PLOS ONE. 2, (2007).</li>
<li>Zippelius, H. -M., Schleidt, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultraschall-Laute+bei+jungen+M%C3%A4usen%5BTitle%5D)+AND+%22Naturwissenschaften%22%5BJournal%5D)">Ultraschall-Laute bei jungen Mäusen.</a> Naturwissenschaften. 43, 502(1956).</li>
<li>Whitney, G., Coble, J. R., Stockton, M. D., Tilson, E. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasonic+emissions%3A+do+they+facilitate+courtship+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Physiol.+Psychol%22%5BJournal%5D)">Ultrasonic emissions: do they facilitate courtship of mice.</a> J. Comp. Physiol. Psychol. 84, 445-452 (1973).</li>
<li>Holy, T. E., Guo, Z. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasonic+songs+of+male+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+Biol%22%5BJournal%5D)">Ultrasonic songs of male mice.</a> PLOS Biol. 3, 2177-2186 (2005).</li>
<li>Maggio, J. C., Whitney, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasonic+vocalizing+by+adult+female+mice+%28Mus+musculus%29%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Psychol%22%5BJournal%5D)">Ultrasonic vocalizing by adult female mice (Mus musculus).</a> J. Comp. Psychol. 99, 420-436 (1985).</li>
<li>Chabout, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+Male+Mice+Emit+Context-Specific+Ultrasonic+Vocalizations+That+Are+Modulated+by+Prior+Isolation+or+Group+Rearing+Environment%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+ONE%22%5BJournal%5D)">Adult Male Mice Emit Context-Specific Ultrasonic Vocalizations That Are Modulated by Prior Isolation or Group Rearing Environment.</a> PLOS ONE. 7 (1), e29401(2012).</li>
<li>Hammerschmidt, K., Radyushkin, K., Ehrenreich, H., Fischer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Female+mice+respond+to+male+ultrasonic+%22songs%22+with+approach+behaviour%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Lett%22%5BJournal%5D)">Female mice respond to male ultrasonic "songs" with approach behaviour.</a> Biol. Lett. 5, 589-592 (2009).</li>
<li>Wöhr, M., Moles, A., Schwarting, R. K. W., D'Amato, F. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lack+of+social+exploratory+activation+in+male+-opioid+receptor+KO+mice+in+response+to+playback+of+female+ultrasonic+vocalizations%5BTitle%5D)+AND+%22Soc.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Lack of social exploratory activation in male -opioid receptor KO mice in response to playback of female ultrasonic vocalizations.</a> Soc. Neurosci. 6, 76-87 (2011).</li>
<li>Granon, S., Faure, P., Changeux, J. -P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Executive+and+social+behaviors+under+nicotinic+receptor+regulation%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Nat.+Acad.+Sci%22%5BJournal%5D)">Executive and social behaviors under nicotinic receptor regulation.</a> Proc. Nat. Acad. Sci. 100 (16), 9596-9601 (2003).</li>
<li>Schmeisser, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autistic-like+behaviours+and+hyperactivity+in+mice+lacking+ProSAP1%2FShank2%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Autistic-like behaviours and hyperactivity in mice lacking ProSAP1/Shank2.</a> Nature. 486 (7402), 256-260 (2012).</li>
<li>Ey, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Absence+of+Deficits+in+Social+Behaviors+and+Ultrasonic+Vocalizations+in+Later+Generations+of+Mice+Lacking+Neuroligin4%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Brain+Behav%22%5BJournal%5D)">Absence of Deficits in Social Behaviors and Ultrasonic Vocalizations in Later Generations of Mice Lacking Neuroligin4.</a> Genes Brain Behav. 11, 928-941 (2012).</li>
<li>Chadman, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minimal+Aberrant+Behavioral+Phenotypes+of+Neuroligin-3+R451C+Knockin+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Autism+Res%22%5BJournal%5D)">Minimal Aberrant Behavioral Phenotypes of Neuroligin-3 R451C Knockin Mice.</a> Autism Res. 1, 147-158 (2008).</li>
<li>Scattoni, M. L., Gandhy, S. U., Ricceri, L., Crawley, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unusual+Repertoire+of+Vocalizations+in+the+BTBR+T+plus+tf%2FJ+Mouse+Model+of+Autism%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+ONE%22%5BJournal%5D)">Unusual Repertoire of Vocalizations in the BTBR T plus tf/J Mouse Model of Autism.</a> PLOS ONE. 3, (2008).</li>
<li>De Chaumont, F., Coura, R. D. -S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Computerized+video+analysis+of+social+interactions+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Methods%22%5BJournal%5D)">Computerized video analysis of social interactions in mice.</a> Nat. Methods. 9, 410-417 (2012).</li>
<li>Leblond, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+and+Functional+Analyses+of+SHANK2+Mutations+Suggest+a+Multiple+Hit+Model+of+Autism+Spectrum+Disorders%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+Genet%22%5BJournal%5D)">Genetic and Functional Analyses of SHANK2 Mutations Suggest a Multiple Hit Model of Autism Spectrum Disorders.</a> PLOS Genet. 8 (2), e1002521(2012).</li>
<li>Berkel, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mutations+in+the+SHANK2+synaptic+scaffolding+gene+in+autism+spectrum+disorder+and+mental+retardation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Genet%22%5BJournal%5D)">Mutations in the SHANK2 synaptic scaffolding gene in autism spectrum disorder and mental retardation.</a> Nat. Genet. 42, 489-491 (2010).</li>
<li>Pinto, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+impact+of+global+rare+copy+number+variation+in+autism+spectrum+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Functional impact of global rare copy number variation in autism spectrum disorders.</a> Nature. 466, 368-372 (2010).</li>
<li>Ey, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+autism+ProSAP1%2FShank2+mouse+model+displays+quantitative+and+structural+abnormalities+in+ultrasonic+vocalisations%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">The autism ProSAP1/Shank2 mouse model displays quantitative and structural abnormalities in ultrasonic vocalisations.</a> Behav. Brain Res. 256, 677-689 (2013).</li>
<li>Scattoni, M. L., Ricceri, L., Crawley, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unusual+repertoire+of+vocalizations+in+adult+BTBR+T+plus+tf%2FJ+mice+during+three+types+of+social+encounters%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Brain+Behav%22%5BJournal%5D)">Unusual repertoire of vocalizations in adult BTBR T plus tf/J mice during three types of social encounters.</a> Genes Brain Behav. 10, 44-56 (2010).</li>
<li>Zorrilla, E. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiparous+species+present+problems+%28and+possibilities%29+to+developmentalists%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Psychobiol%22%5BJournal%5D)">Multiparous species present problems (and possibilities) to developmentalists.</a> Dev. Psychobiol. 30 (2), 141-150 (1997).</li>
<li>Lazic, S. E., Essioux, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+basic+and+translational+science+by+accounting+for+litter-to-litter+variation+in+animal+models%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Improving basic and translational science by accounting for litter-to-litter variation in animal models.</a> BMC Neurosci. 14 (1), 37(2013).</li>
<li>Hoffmann, F., Musolf, K., Penn, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Freezing+urine+reduces+its+efficacy+for+eliciting+ultrasonic+vocalizations+from+male+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol.+Behav%22%5BJournal%5D)">Freezing urine reduces its efficacy for eliciting ultrasonic vocalizations from male mice.</a> Physiol. Behav. 96, 602-605 (2009).</li>
<li>Neunuebel, J. P., Taylor, A. L., Arthur, B. J., Egnor, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Female+mice+ultrasonically+interact+with+males+during+courtship+displays%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Female mice ultrasonically interact with males during courtship displays.</a> eLife. 4, (2015).</li>
<li>Burkett, Z. D., Day, N. F., Peñagarikano, O., Geschwind, D. H., White, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((VoICE%3A+A+semi-automated+pipeline+for+standardizing+vocal+analysis+across+models%5BTitle%5D)+AND+%22Sci.+Rep%22%5BJournal%5D)">VoICE: A semi-automated pipeline for standardizing vocal analysis across models.</a> Sci. Rep. 5, 10237(2015).</li>
<li>Weissgerber, T. L., Milic, N. M., Winham, S. J., Garovic, V. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beyond+Bar+and+Line+Graphs%3A+Time+for+a+New+Data+Presentation+Paradigm%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+Biol%22%5BJournal%5D)">Beyond Bar and Line Graphs: Time for a New Data Presentation Paradigm.</a> PLOS Biol. 13 (4), e1002128(2015).</li>
<li>Jamain, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduced+social+interaction+and+ultrasonic+communication+in+a+mouse+model+of+monogenic+heritable+autism%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Nat.+Acad.+Sci.+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">Reduced social interaction and ultrasonic communication in a mouse model of monogenic heritable autism.</a> Proc. Nat. Acad. Sci. U. S. A. 105, 1710-1715 (2008).</li>
<li>Won, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autistic-like+social+behaviour+in+Shank2-mutant+mice+improved+by+restoring+NMDA+receptor+function%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Autistic-like social behaviour in Shank2-mutant mice improved by restoring NMDA receptor function.</a> Nature. 486, 261-265 (2012).</li>
<li>Ferhat, A. -T., Le Sourd, A. -M., de Chaumont, F., Olivo-Marin, J. -C., Bourgeron, T., Ey, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Social+Communication+in+Mice+-+Are+There+Optimal+Cage+Conditions%3F%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+ONE%22%5BJournal%5D)">Social Communication in Mice - Are There Optimal Cage Conditions?</a> PLOS ONE. 10 (3), e0121802(2015).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

הפרוטוקול המובא כאן מספק דרכים סטנדרטיות ואמינות לאסוף קולות קולי עכבר במעבדה. במצבים מאוד מוגבלים אלה מרחיבים את היתרון של סטנדרטיזציה. הם משמשים בהצלחה להשוות זנים או גנוטיפים בתוך זני 18,19,26,27. כמוצג בתוצאות נציג, שיטות אלה מאפשרים זיהוי של תקשורת חברתית טיפוסיות בעכברים מוטציה עבור Shank2, גן הקשור הפרעות הספקטרום האוטיסטי. השוואות בין זני עכבר, בין הקשרים שונים או אפילו בין מעבדות תהיינה להיות מופעלות על ידי הזמינות של מערכי נתונים גדולים על מסד נתוני mouseTube. כלי זה אמור להגביר מחקרים על קולות קולי עכבר בכך שהוא מאפשר ניתוחים רבים משתנים. הפרוטוקולים המתוארים כאן מותאמים לבדוק עכברים של גנוטיפים שונים בתוך זן, כפי שהדבר נעשה ברוב מחקרי דוגמנות ג הגנטיתontribution להפרעות נוירו-פסיכיאטריות. מומלץ באופן ניסיוני לעצב כל מחקר יש הבקרות הטובות ביותר האפשריות. ואכן, תופעות המלטה עלולות להסוות או לנפח באופן מלאכותי את השפעות גנטיות 28,29. לכן מומלץ לכלול שולטת להמלטה עבור כל גנוטיפ. רביית הורים הטרוזיגוטיים ולכן צריכים להיות מועדפים, שכן הוא יאפשר את ההתאמה הנכונה של עכברים שעברו מוטציה ושליטה בתוך חול. זה מצדיק את הקעקוע כפה סימון של כל הגורים (מסונוורים גנוטיפ) כדי לעקוב אחר אנשים ברחבי הקלטות כל יומיים. Genotyping נעשית גמילה, על ידי לקיחת דגימות זנב. במהלך הקלטת שיחות בידוד גור מ P2, אנחנו לא היינו ממליצים לקחת דגימות זנב כבר גורים, מאז המבצע הזה כולל מניפולציה משלימה ומתח קרוב מאוד בזמן הקלטות. הפרוטוקולים הציעו כאן כדי לעורר קולות קוליים במבוגרים אינו מאפשרים זיהוי ברור של EMItter של קולות. זה מסביר מדוע אנו לתפעל את המוטיבציה של חית הבדיקה. אכן, עכברי המבחן מבודדים ולא-הפינה החדשה וחי המבחן להרגיל במשך זמן רב לכלוב הבדיקה במהלך אינטראקציות בין בני אותו מין. באינטראקציות בין גברים לנשים, הנקבה הציגה אינה מבודדת וזכר המבחן מתרגל עבור זמן קצר מאז מוטיבציה עשויה להיות גבוהה בהקשר מיני. מניפולציות אלה מוטיבציה צריכות למקסם את ההסתברות של עכבר מבחן פולטות הקולות ולא אחד הציג. כדי להקליט קולות קולים זכרו בהקשר מיני, מקלון צמר גפן פשוט עם טרי (כלומר, לא קפוא) שתן של אשת ייחום ניתן להכניס גם בכלוב 30. שיטה זו מאפשרת ההקצאה של קולות קוליים כדי זכר הבדיקה עם 100% ודאות אך הוא מונע איסוף מידע ספציפי על ההקשר החברתי בפועל של פליטה של ​​קולות אלה. לכן, אנו מעדיפים את protocol המתואר כאן (עם נקבת ייחום בחופשיות-נע). כמו כן, אנו ממליצים תמיד להשתמש בעכברים הציגו מאותו הזן כאשר בודקים עכברים מן זן מוטנטי ולנתח את הנתונים כמו זוג עכברים וקולות ברובם. אחד המחקרים האחרונים מקדם את השימוש טריאנגולציה למקם את פולט 31. במחקר זה, נמצאו נקבות לפלוט גם קולות קוליים במהלך מפגשים עם זכר. זה עשוי להיות מוסבר על ידי העובדה כי הם בודדו במשך שבועיים לפחות לפני ההקלטות. ההכללה של שימוש הטריאנגולציה מוצעת במחקר זה יש בכל זאת לאפשר זיהוי של הפולט של הקולות במקרים ביותר אם הקלטות וידאו מסונכרנות כראוי. הקריאות במנותק מן הגורים שנרשמו במהלך פיתוח לא מופרעות ע&quot;י רעש רקע מן המצעים. בדרך כלל ניתוח אוטומטי עובד טוב מאוד כדי לחלץ את המשתנים העיקריים. לעומת זאת, קולות רשמו ממבוגרים הם דisturbed ידי רעשי רקע מבעלי החיים נעים המצעים. ניתוח אוטומטי עשוי להיכשל, ולכן יש להשתמש ניתוח הוראות. אף על פי כן, הוספת מצעים בכלוב המבחן צריכה לספק תנאים שהם פחות מלחיצים עבור בעלי החיים מאשר קרקע חשופה (שעכברים לא אוהבים). מאמצים נוספים בקהילה מרוכזות על שיפור זיהוי האוטומטי של קולות קוליים בתנאים שונים, גם אלה רעשי רקע רומזים. לדוגמה, התוכנה Voice מאפשרת לנתח קולות כי נבחרו באופן ידני על היעדרו של רעשי רקע 32. תוכנה זו, החילוץ של משתני אקוסטית הוא אוטומטית אבל צריך הבחירה הידנית הראשונית. יצוין כי ההשתנות בין הפרט חשובה מאוד בהתנהגות הקול של עכברים. למשל, קצב השיחה של זכרים בוגרים בנוכחות נקבת ייחום מופץ מאוד (איור 1). אנחנו suggest פרוטוקולים הסטנדרטיים אלה כדי לעורר קולות קוליים כבר להגביל את ההשתנות הקשורות בהקשר הניסיון. עם זאת, ברצוננו להצביע על החשיבות של הצגה לא רק את הממוצע ואת SEM עבור הנתונים, אבל הכי חשוב נקודות הפרט בדגימות של גודל קטן 33. זה גם מאוד רלוונטי - אם לא הכרחי - לרשום לפחות 12 אנשים של כל קבוצה / גנוטיפ לאסוף נתונים נציג. במקרים רבים, ההשתנות הבינה-האדם לא צריכה להיות מוסתרת (בדרך כלל זה לא יכול להיות), וזה עלול להיות בעל חשיבות גבוהה לזהות אנשים הנושאים את המוטציה הגנטית למדה אבל לא הציג שום פנוטיפ טיפוסית. אנשים כאלה יכולים לספק רמזים לגבי פיצויים, אשר עשוי לפתוח נתיבים חדשים עבור טיפולים של הפרעות גנטיות. ברוב האפיונים התנהגותיים של מודלי עכבר להפרעות נוירו-פסיכיאטריות, התנהגות קול וקשרים חברתיים הם רואיםאד זה מזה (למשל, 19,27,34,35). שיטות מחקר שבוצע לאחרונה החברה לספק אפיון מפורט חצי אוטומטי של אירועים חברתיים רצפים של אירועים במהלך אינטראקציה (באמצעות MiceProfiler למשל) 36, כמו גם את האפשרות לשלב ניתוח זה עם נתוני הקלטות שמע. היתרון העיקרי של שיטה זו הוא לספק תמונה מקיפה של התקשורת החברתית בעכברי מודל של ASD, כדי לייתר דיוק לזהות אילו היבטים של תקשורת החברתית מושפעים. בפרוטוקול הנוכחי הסנכרון עדיין ידני אבל זה יכול להיות משופר על ידי מפעיל את הקלטת וידאו באמצעות תוכנת הקלטת שמע. סוג זה של ניתוחים צריך להיות הסטנדרט לספק תמונה מקיפה יותר של גירעונות תקשורת חברתית בעכברי מודל של הפרעות נוירופסיכיאטריות. בנוסף, עד עכשיו, אותות קול מנותחים בעיקר מהצד הפולט (כלומר, בדיקות בנויות להעדיף פליטת voאותות קאל על ידי העכבר נבדק, כמו בפרוטוקולים הנוכחיים). ההתמקדות צריכה עכשיו גם להיות מוגדר על מקבל אותות אלה, כדי לזהות טוב יותר את הפונקציות של אותות אקוסטיים אלה. זה צריך להיעשות על ידי ההערכה גם את ההתנהגות של העכברים-הפינה החדשה בפרוטוקולים הנוכחיים במבוגרים (באמצעות MiceProfiler למשל) 36, באמצעות ניסויי השמעה 16, או על ידי הגדרת פרוטוקולים חדשים. אכן, הפרוטוקולים הנוכחיים לספק מצבים מוגבלים מאוד כי אולי לא משקפים את תנאי האתולוגי המדויקים של פליטת ניקוד בעכברים. הפליטה הספונטנית של קולות קוליים תצטרך להיות מאופיינת יותר באמצעות הקלטות וידאו ושמע רציפות לשפוך אור נוסף על ההתנהגות ווקאלית הספונטנית של עכברים.

מטופלים עם הפרעות נוירו-פסיכיאטריות בדרך כלל להציג גירעונות בתקשורת חברתית (למשל, חולים עם הפרעות בספקטרום האוטיזם, סכיזופרניה, או מחלת אלצהיימר) 1. מהונדסים גנטיים עכברים הם לעתים קרובות יותר ויותר לשמש מודל גורמים גנטיים של הפרעות אלה 2. לימוד תקשורת חברתית במודלים של עכברים אלה הוא של ריבית גבוהה עבור להבנת המנגנונים של מוטציות גנטיות ההוביל תפקוד חברתי לא טיפוסי לבדיקת טיפולים חדשים. מאז עכברים הם חיות חברתיות ולתקשר עם כל האחרים באמצעות חוש ריח, מישוש, אותות חזותיים ואקוסטי, הם מודלים מתאימים להעריך תקשורת חברתית. קולות קולי עכבר נמצאים כיום בשימוש כיום כמו פרוקסי למידול הבסיסים הגנטיים של גירעונות תקשורת קוליים 3,4 (אבל קיומה של למידה ווקאלית מין זה עדיין במחלוקת 5,6, גם אם רוב המחקרים האחרונים arguדואר עבור בהעדר למידה ווקאלית 7). עכברי מעבדה נמצאו לפלוט קולות קוליים במערכות יחסים אם-תינוק, באינטראקציות חברתיות-מיניות בין גברים לנשים, באינטראקציות חברתיות חד-מיניות (הנסקרת תוך התייחסות 8) ו באינטראקציות חברתיות-לנוער לנוער 9. עכבר גורים פולטים שיחות בידוד במהלך השבועות הראשונים לחייהם כאשר מבודד סכר להמלטה 10. זכרים פולטים קולות קוליים כאשר בנוכחות נקבת ייחום (או רמזי שתן ממנה) 11,12. זכרים ונקבות לפלוט ניקוד קולי בעת אינטראקציה עם conspecific ידוע מאותו המין 13,14. הארגון והפונקציות של קולות אלה אינם ברורים לחלוטין וזקוקים חקירות נוספות. ידע נוכחי על ההיבט התפקודי מוגבל ההתמחרות של התנהגות תחזור אמהות לשמוע שיחות בידוד גור, ההנחיה של קרבה של נשים בוגרות כלפי vocalizat זכר הבוגריוני 15 ואת התנהגות גישוש המוגברת זכרים בוגרים לשמוע קולות נקבה בוגר 16. אפיון חריגויות תקשורת קולית בעכברי מודל של הפרעות נוירופסיכיאטריות צריכה להתנהל בתנאים סטנדרטיים כדי לשלול תרומה משמעותית של תנאי הניסוי. אפיונים כאלה, בשילוב עם ההערכה של אינטראקציות חברתיות סימולטני ומחקרי נוירו-ביולוגיים, במודלים גנטיים שונים צריכים לשפר את הידע שלנו על התרומה הגנטית להיבטים השונים של תקשורת העכבר קולית. במהלך לטווח ארוך, הוא אמור לתת אור נוסף על בסיסים הנוירוביולוגי כלשהי של תקשורת חברתית בבני אדם. אנחנו כיום שואפים לספק פרוטוקולים פשוטים לעורר קולות קוליים אמין בעת ​​פיתוח בבגרות הוא עכברי הזכרים ונקבה במעבדה. פרוטוקולים כאלה צריכים להקל על סטנדרטיזציה של הקלטות כדי להשוות באופן מהימן יותר ultrפליטת ניקוד asonic בין זנים ומעבדות. ראוי גם להקל על הקמת הקלטות כאמורות במעבדות שיש ללא ניסיון קודם עם הקלטות קולות קולי עכבר. כמו כן, אנו מדגישים את האפשרות הנוכחית לשלב נתונים קולות קוליים עם נתונים התנהגותיים מפורטים שנאספו בו זמנית במהלך האינטראקציות חברתיות בעכברים בוגרים, כדי להשיג מידע חיוני על ליקויים חברתיים וכן על ההקשר של פליטה של ​​קולות קוליים. ניתוחים כאלה שישפכו אור חדש על הארגון והפונקציות של קולות קולי עכבר. לבסוף, אנו גם לפרסם את האפשרות לשתף קלטות ניקוד קוליות עם הקהילה המדעית כולה על מסד נתוני mouseTube (http://mousetube.pasteur.fr). גישה פתוחה נתוני הקלטת שמע צריכה להרחיב את הידע על תקשורת עכבר קולית בכך שהוא מאפשר למדענים להשוות נתונים משלהם עם קולות קוליים נרשמים labo האחרratories (עם זנים דומים או שונים / פרוטוקולים), ו / או לקרוא תיגר על שיטות הניתוח שלהם עם קבצים המוקלטים בתנאים שונים.

<table><tbody><tr><td>מחטים 0.3 מ"מ x 13 מ"מ [30&nbsp; G 1/2 אינץ']</td><td>BD Microlance</td><td>304000-משחת</td><td></td></tr> <tr><td>קעקועים ירוקה</td><td>Ketchum Manufacturing Inc., אוטווה, קנדה</td><td>329AA-מדחום</td><td></td></tr> <tr><td></td><td>פישרברנד, וולת'אם, ארה"ב</td><td>4126 (W255NA)</td><td></td></tr><tr><td>-תא אטום לרעש מתוצרת עצמית (גורים)מכון</td> <td>פסטר,</td><td></td> <td>פריז-קצף אקוסטי + פרספקס; מידות פנימיות (רוחב x גובה x עומק): 32 ס"מ x 33 ס"מ x 32 ס"מ</td></tr><tr><td>תרמיסטר משטח קטן + צמד תרמי בדיקה יחיד</td><td>מכשיר הרווארד</td><td>599814 +</td><td></td></tr> <tr><td>601956 עט ללא ריח</td><td>למשל: דיו ג'וטו</td><td></td> <td>עשוי מים, רחיץ: עטים אלה מיועדים לתינוקות</td></tr><tr><td>אתנול מוחלט (100%)</td><td>סיגמא אולדריץ', &nbsp; Saint-Quentin Fallavier, צרפת</td><td>24103</td><td>מדולל 1/10</td></tr><tr><td>מיקרופון אולטרסאונד מעבה Avisoft-Bioacoustics CM16 / CMPA</td><td>Avisoft Bioacoustics, ברלין, גרמניה</td> <td># 40011</td><td>מרוהט בכבלים מאריכים של חברת Avisoft</td></tr><tr><td>שער אולטרסאונד 416H</td><td>Avisoft Bioacoustics, ברלין, גרמניה</td> <td># 34163</td><td>כרטיס קול</td></tr><tr><td>מקליט Avisoft USGH</td><td>Avisoft Bioacoustics, ברלין, גרמניה</td><td>#10301; #10302</td><td>תוכנת הקלטה עבור Windows Vista, 7 ו-8</td></tr><tr><td>Avisoft SASLab Pro</td><td>Avisoft Bioacoustics, ברלין, גרמניה</td><td>#10101, 10111; #10102, 10112; &nbsp;</td><td>Windows 10, 8.1, 8, 7 או Vista, כולל Apple Macintosh מבוסס אינטל עם Boot Camp, Parallels או תוכנות וירטואליזציה דומות.</td></tr><tr><td>מחשב נייד או Apple Macintosh עם Boot Camp</td> <td>-</td><td></td> <td>מריץ Windows 10, 8.1, 8, 7 או Vista; עבור Apple Macintosh, Boot Camp עדיף על פני תוכנות וירטואליזציה כגון Parallels עקב אילוצי זיכרון</td></tr><tr><td>נמען פלסטיק (הקלטות pup)</td><td>Lock & Lock, Chatswood, ארצות הברית</td><td>HPL932D</td><td>Lock & נעילת מיכל אטום לערמה עגול 700&nbsp; מ"ל; שימוש ללא כיסוי; מידות: 9&nbsp; קוטר ס"מ, גובה 10 ס"מ</td></tr><tr><td>PBS 1x (pH = 7.4)</td><td>Gibco (Life Technologies)</td><td>10010-023-slides</td><td></td></tr> <tr><td></td><td>Menzel-Gl&auml; ser, Thermo Scientific</td><td>J1800AMNZ</td><td>Superfrost Plus</td></tr><tr><td>May-Gr&uuml; תמיסת nwald 500 מ"ל</td><td>RAL R&eacute; actifs, Martillac, צרפת</td><td>320070-0500-Giemsa</td><td></td></tr> <tr><td>R 500 מ"ל</td><td>RAL R&eacute; actifs, Martillac, France</td><td>720-1107</td><td>מדולל 1/20 בתמיסת חיץ פוספט</td></tr><tr><td>תמיסת חיץ פוספט תמיסת חיץ פוספט (תוצרת עצמית)</td> <td>-</td><td>-</td><td>pH = 7, 0.1 M: 39 מ"ל NaH2PO4 0.2 M + 61 ml Na2HPO4 0.2 M + 100&nbsp; מ"ל H2O (נפח סופי: 200&nbsp; ml)</td></tr> <tr><td>כלוב בדיקה</td><td>מכון פסטר,</td> <td>פריז-50</td><td>&nbsp; x&nbsp; 25&nbsp; ס"מ, 30&nbsp; גובה ס"מ; </td></tr><tr><td>פרספקס תא אטום לרעש מתוצרת עצמית (הקלטות למבוגרים)</td><td>מכון פסטר,</td> <td>פריז-קצף אקוסטי + PVC; מידות פנימיות (רוחב x גובה x עומק): 66 ס"מ x 90 ס"מ x 46 ס"מ</td><td></td></tr> <tr><td>מצלמת וידאו</td><td>מבית Noldus Information Technologies, Wageningen, הולנד</td><td></td> <td>- מצלמת וידאו CamTech Super-Hi-Res ברזולוציה גבוהה; 25 fps&nbsp;</td></tr><tr><td>EthoVision XT</td><td>Noldus Information Technology, Wageningen, הולנד</td><td>תוכנת</td><td>רכישת וידאו</td></tr><tr><td>http://www.noldus.com/animal-behavior-research/products/ethovision-xt תוסף Mice Profiler Tracker מפלטפורמת ICY</td> Bio <td>Image Analysis, Institut Pasteur, Paris</td><td>http://icy.bioimageanalysis.org/plugin/Mice_Profiler_Tracker</td><td>תוכנת מעקב לניתוח אירועים התנהגותיים במהלך אינטראקציות חברתיות</td></tr></tbody></table>

הקלטת עכבר ultrasonic קולות של להערכת תקשורת חברתית

Recording Mouse Ultrasonic Vocalizations to Evaluate Social Communication

עכברים פולטים קולות על-קוליים בהקשרים שונים במהלך ההתפתחות ובבגרות. אותות קוליים אלה משמשים כיום כפרוקסי למידול הבסיסים הגנטיים של ליקויים בתקשורת קולית. אפיון ההתנהגות הקולית של מודלים של עכברים הנושאים מוטציות בגנים הקשורים להפרעות נוירו-פסיכיאטריות כגון הפרעות על הספקטרום האוטיסטי יעזור להבין את המנגנונים המובילים לליקויים בתקשורת חברתית. אנו מספקים כאן פרוטוקולים לעורר קולות קוליים באופן אמין בגורים ובעכברים בוגרים. סטנדרטיזציה זו תעזור להפחית את השונות בין המחקר עקב הגדרות הניסוי. קריאות לבידוד גורים נרשמות לאורך כל ההתפתחות מגורים בודדים שבודדו מהסכרים ומחברי ההמלטה. בבגרות, קולות נרשמים במהלך אינטראקציות חד מיניות (ללא מרכיב מיני) על ידי חשיפת זכרים או נקבות בעלי מוטיבציה חברתית לפרט חד מיני לא ידוע. אנו מספקים גם פרוטוקול להקלטת קולות של זכרים בוגרים שנחשפו לנקבת ייחום. בהקשר זה, יש מרכיב מיני באינטראקציה. פרוטוקולים אלה נקבעו כדי לעורר כמות גדולה של קולות קוליים בעכברי מעבדה. עם זאת, אנו מצביעים על השונות הבין-אישית החשובה בהתנהגות הקולית של עכברים, אותה יש לקחת בחשבון על ידי רישום מספר מינימלי של פרטים (לפחות 12 בכל מצב). הקלטות אלו של קולות קוליים משמשות להערכת קצב השיחה, הרפרטואר הקולי והמבנה האקוסטי של השיחות. הנתונים משולבים עם ניתוח הקלטות וידאו סינכרוניות כדי לספק מבט מלא יותר על תקשורת חברתית בעכברים. פרוטוקולים אלה משמשים לאפיון ליקויי התקשורת הקולית בעכברים חסרי ProSAP1/Shank2, גן הקשור להפרעות בספקטרום האוטיזם. ניתן למצוא הקלטות קולות אולטרסאונד נוספות גם במסד הנתונים של mouseTube, שפותח כדי להעדיף חילופי נתונים כאלה.

עם הפרוטוקולים הנוכחיים, אנו שאפיינו את התנהגות הקול של עכברים שחסרו ProSAP1 / Shank2, גן הקשור פרעות ספקטרום האוטיסטי (ASD) 23-25. ASD מאופיין גירעונות בתקשורת חברתית והתנהגויות סטריאוטיפיות 1. Shank2 שלנו - / - העכברים מוצגים היפראקטיביות, חרדה מוגברת ו 18,26 תקשורת קולית טיפוסית. ואכן, שציינו כי Shank2 - / - עכברים מוצגים פרופיל התפתחותי טיפוסי קצב הפליטה שלהם של שיחות בידוד גור בהשוואה העקומה בצורה ההפוכה הטיפוסית להמלטת wild-type שלהם Shank2 -. / - עכברים מוצגים שיעור שיחה משופר ב P4 וירידה בשיעור שיחות ב P6 בהשוואה לעכברי wild-type שלהם (איור 2). אנו הבחנו גם מתאפיינים בשיעור שיחות ירד באינטראקציות נקבה מעורב Shank2 - / נקבה - ב comparison עם אינטראקציות מעורבות להמלטת wild-type (איור 2). בדקנו את הרפרטואר של קטגוריות 5 שיחה שונות. זה שנראה שונה בין הגורים (למשל כאן P2, P6 ו P10) ומבוגרים (איור 3). הבדלים הקשורים גנוטיפ היו משמעותיים בעיקר בבגרות. במהלך אינטראקציות חברתיות מעורבים מבוגרים Shank2 - / - זכרים או נקבות עם נקבה C57BL / 6N, שיחות קצרות יותר ושיחות בלתי מובנה נרשמו בהשוואה אינטראקציות מעורבים להמלטה wild-type שלהם (איור 3D ו- E). פחות מורכבות שיחות ותדירות קופצות שיחות גם נרשמו במהלך אינטראקציות עם נקבת C57BL / 6N המעורב Shank2 המבוגר - / - נקבות בהשוואת האינטראקציות המעורבות Shank2 + / + נקבות (איור 3E). לבסוף, אנו גם למדוד משתנים אקוסטי ידני. לא היה קשור גנוטיפ משמעותי הבדל duפיתוח טבעת. לעומת זאת, משך השיחות שנרשמו במהלך האינטראקציות המעורבות Shank2 המבוגר - / - הנקבות היו קצרות מאלה שנרשמו במהלך האינטראקציות המעורבות להמלטת wild-type שלהם (איור 4 א). הגשנו גם כי תדירות השיא של קולות קוליים מוגברת במהלך ההתפתחות גור בלי הבדל לפי גנוטיפ משמעותי 26. במהלך האינטראקציות המעורבות Shank2 - / - זכרים או נקבות עם נקבת C57BL / 6N, קולות קוליים היו בתדירות שיא נמוכה בהשוואת שיחות שנרשמו במהלך האינטראקציות המעורבות להמלטת wild-type שלהם (איור 4). בנוסף, הפרוטוקול הנוכחי מותר גם ללמוד בהקשר של פליטה של קולות קוליים על ידי שילוב של הנתונים מתוך הקלטות שמעו על הנתונים התנהגותיים מופקים MiceProfiler (תוכנה קפוא, עבר Institut<html> eur, פריז). למשל, באינטראקציות נקבה-נקבה, רוב הקולות קוליים נפלטו כשבעלי חיים היו במגע או לייתר דיוק הכובש מרחרח באזור ano באיברי המין של-הפינה החדשה, או לפחות כובש להיות מאחורי-הפינה החדשה. גם הנפלטים עכברים רבים קולות קוליים כאשר הדייר התקרב-הפינה החדשה (איור 5, פנל עליון). פחות קולות נרשמו כאשר דייר Shank2 - / - העכברים היו במגע פיזי עם-הפינה החדשה (למשל, מרחרח באזור ano באיברי המין של-הפינה החדשה) מאשר כאשר היה כובש עכבר wild-type. פחות קולות היו מופעלים כאשר הדייר מאחורי-הפינה החדשה היה Shank2 - / - עכבר מאשר כאשר הוא עכבר wild-type. קולות נוספים נרשמו גם כאשר-הפינה החדשה הייתה בשדה הראייה של העכבר הכובש, ועל אחת כמה וכמה סוגי הפרוע מאשר המוטציות (איור 5, פנל תחתון). <html> s = &quot;jove_content&quot; FO: keep-together.within-page = &quot;1&quot;&gt; <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/53871/53871fig2.jpg" /> איור 2:. שיעור פליטת קולות קולי במהלך הפיתוח ב זכר בוגר ו Shank2 נקבה - / - עכברים להמלטה wild-type התקשר שיעור גורים (כל יומיים מ P2 ל P12, n = 18-19 Shank2 + / +, n = 15-16 Shank2 - / -) ומבוגרים במהלך אינטראקציות בין הזכר לנקבה-ייחום (n = 15 Shank2 + / +, n = 16 Shank2 - / -) ואינטראקציות נקבה-נקבה (n = 15 Shank2 + / +, n = 13 Shank2 - / -) ב עכברי-בר (פאנל משמאל) Shank2 - / - עכברים (פאנל מימין). הנתונים מוצגים כממוצע +/- SEM ו נקודות בודדות (לא לזווג ווילקוקסון בדיקות: * p &lt;0.05, ** p &lt;0.01, *** p &lt;0.001).ge.jpg &quot;target =&quot; _ blank &quot;&gt; לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו. <img alt="איור 3" src="/files/ftp_upload/53871/53871fig3.jpg" /> איור 3:. רפרטואר קולי של Shank2 - / - עכברים להמלטת wild-type הפרופורציות של חמשת סוגי השיחות השונים הנפלטים על ידי גורי P2 (א &#39;; n = 20 Shank2 + / +, n = 18 Shank2 - / -), גורי P6 (B, n = 19 Shank2 + / +, n = 18 Shank2 - / -), גורים P10 (C; n = 20 Shank2 + / +, n = 18 Shank2 - / -), זכרים בוגרים עם נקבה ייחום (D הנקבות) ומבוגרים עם נקבה אחרת (E n = 16 Shank2 + / +, n = 16 Shank2 - - /; n = 15 Shank2 + / +, n = 13 Shank2; </em&gt; - / -) ב עכברי-בר (פאנלים משמאל) Shank2 - / - עכברים (לוחות מימין). הנתונים מוצגים כממוצע +/- SEM ו נקודות בודדות (בדיקות בריבוע צ&#39;י: * p &lt;0.05, ** p &lt;0.01, *** p &lt;0.001). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53871/53871fig3large.jpg" target="_blank">נא ללחוץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 4" src="/files/ftp_upload/53871/53871fig4.jpg" /> איור 4:. משתנה אקוסטיות מופקים קולות קולי Shank2 - / - עכברים להמלטת wild-type (א) משך כל סוגי השיחות נבוכים הנפלטת גורי P2 (n = 20 Shank2 + / +, n = 18 Shank2 - / - ), גורי P6 (n = 19 Shank2 + / +, n = 18 Shank2 - / -), גורי P10 (n = 20 Shank2 + / + </sעד&gt;, n = 18 Shank2 - / -), זכרים בוגרים עם נקבה ייחום (n = 16 Shank2 + / +, n = 16 Shank2 - / -) ו נשים בוגרות עם נקבה אחרת (n = 15 Shank2 + / +, n = 13 Shank2 - / -) ב עכברי-בר (פאנל משמאל) Shank2 - / - עכברים (פאנל מימין). (ב) תדירות שיא מרבית נמדדה על כל סוגי השיחות מבולבלות גורי P2, גורי P6, גורי P10, זכרים בוגרים עם נקבת ייחום ונקבה בוגרת עם נקבה אחרת (באותו Ns כנ&quot;ל). הנתונים מוצגים כממוצע +/- SEM ו נקודות בודדות (לא לזווג ווילקוקסון בדיקות: * p &lt;0.05, ** p &lt;0.01, *** p &lt;0.001). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53871/53871fig4large.jpg" target="_blank">נא ללחוץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 5" src="/files/ftp_upload/53871/53871fig5.jpg" /> איור 5: קשר. הים של פליטה של קולות קולי עכבר באינטראקציות מבוגר חברתי נשי-נקבת שיעור של קולות קוליים הנפלט זוגות המעורבים Shank2 + / + עם עכבר C57BL / 6N (n = 16, א) ו זוגות המעורבים Shank2 - / - עם עכבר C57BL / 6N (n = 13, B) במהלך מהסוגים הבאים של אירועים התנהגותיים (אדום: הכובש, ירוק: חדש-פינה): קשרים חברתיים, oro-אוראלי קשר, ano באיברי המין וריחרחח העכבר הכובש, ano- איברי המין וריחרחח בעכבר החדש-הפינה, כובש מאחורי פינה חדשה, חדשה-פינה מאחורי הכובש, חוסר תנועה של כובש, חוסר תנועה של-פינה חדשה, גישה מן הכובש &amp; לברוח מן-הפינה החדשה, גישה מהזווית-החדשה &amp; להימלט מן הכובש, הגישה &amp; לברוח מן הכובש, הגישה &amp; לברוח מן-הפינה החדשה, כובש בעקבות-הפינה החדשה החדשה-הפינה, בתחום החזון של דייר, דייר בתחום החזון-הפינה חדשה. נתונים הם pכמו התרעם ממוצע +/- SEM ו נקודות בודדות (לזווג הלא בדיקות ווילקוקסון: * p &lt;0.05, ** p &lt;0.01). נתונים שלא פורסמו. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53871/53871fig5large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> סוגי שיחות </td><td> תיאור </td></tr><tr><td> קצר </td><td> משך ≤5 msec ותדירות טווח ≤6.25 kHz </td></tr><tr><td> פָּשׁוּט </td><td> משך&gt; 5 msec ו kHz תדר בתחום ≤6.25 (שטוח), או אפנון תדר בכיוון אחד בלבד (כלפי מעלה או כלפי מטה) עם&gt; טווח התדרים 6.25 קילוהרץ </td></tr><tr><td> מורכב </td><td> מודולציות תדירות בלמעלה מ&gt; טווח כיוון תדר אחד 6.25 קילוהרץ (מווסת), או הכללת ג תדר אחד או יותר נוסףomponent (תופעות הרמוניות או שאינו ליניארי, אך לא רווי) אבל שום מגבלה על תווך (מורכב) </td></tr><tr><td> קפיצות תדר </td><td> הכללת קפיצה אחת (קפיצת תדר אחד) או קפיצות יותר (תדר קופץ, ואחרים) בתדירות ללא פער זמן בין רכיבי תדר ברציפות, עם (מעורב) או ללא כל חלק רועש בתוך שיחת הצליל הטהורה </td></tr><tr><td> לא מובן </td><td> לא ניתן לזיהוי מרכיב טהור טון; &quot;רועשות&quot; שיחות </td></tr></tbody></table> טבלה 1:. מאפייני חמישה סוגים של קולות קולי עכבר דוגמאות הקריטריונים של משך, עוצמת תדרים, מודולציות תדירות קפיצות תדרים שבשימוש כדי לקבוע 5 סוגי שיחות שונים בתוך קולות קולי עכבר.

קולות קוליים של עכברים משמשים כפרוקסי למודל הבסיסים הגנטיים של ליקויים בתקשורת קולית במודלים של עכברים להפרעות נוירו-פסיכיאטריות. הפרוטוקול הנוכחי מתאר שלושה הקשרים ניסיוניים המעוררים באופן מהימן קולות קוליים מגורים (לאורך כל ההתפתחות) ועכברים בוגרים (אינטראקציות חד מיניות, אינטראקציות זכר-ייחום).

הקלטת עכבר Ultrasonic קולות של להערכת תקשורת חברתית

Mice emit ultrasonic vocalizations in different contexts throughout development and in adulthood. These vocal signals are now currently used as proxies ...

המטרה הכוללת של פרוטוקול זה היא להקליט ולנתח קולות קוליים של גורי עכברים או בוגרים, ולאחר מכן להפוך את הנתונים לזמינים לציבור במסד הנתונים של mouseTube. אז זיהינו בעבר מוטציות באוטיזם, אז עכשיו אנחנו רוצים להבין את התפקיד של הגנים האלה. אנו משתמשים במודלים של עכברים, ובמיוחד, אנו מסתכלים על הקול האולטראסוני של עכברים.מודל זה יכול לסייע בהבנת שאלות מפתח בתחום מדעי המוח. למשל, כיצד מוטציות גנטיות משפיעות על תקשורת חברתית במודל עכבר להפרעות נוירופסיכוטיות כמו אוטיזם. היתרון העיקרי של פרוטוקול זה הוא שקולות הפנייה לעכבר נלקחים באופן מהימן.זה צריך להעדיף סטנדרטיזציה של מידע הקשר כדי לשפר בין השוואת המחקר. שיטה זו גם תגביר את הידע על תקשורת תוך-קולית של עכבר באמצעות מסד הנתונים mouseTube. לאחר הכנת העכברים והשגת גורים שזה עתה נולדו, הקימו כלוב כדי להקליט את השיחות שלהם.השתמש בקופסה אטומה לרעש או בקופסת קלקר. ראשית, הגדר מדחום לניטור הטמפרטורה הפנימית. לאחר מכן, דרך חור בחלק העליון של הקופסה, הורד מיקרופון אולטרסאונד מעבה כך שקרום המיקרופון יהיה כ -12 עד 15 סנטימטרים מעל הרצפה.כעת, חבר את המיקרופון לכרטיס קול של מחשב. הכניסו את הגור הלא ניסיוני למחזיק גור פלסטיק נקי בתוך קופסת ההקלטה וסגרו אותו. הפוך את צליל ההקלטה לשיא השתמש במשרעת המלאה הזמינה ללא עיוות.אל תשנה הגדרה זו במהלך הניסוי. כעת, למדידות ניסיוניות, הניחו את הגור בעדינות ובמהירות האפשרית בכוס פלסטיק נקייה. לאחר מכן, הניחו את הגור מתחת למיקרופון וסגרו את הקופסה בעדינות ובשקט ככל האפשר.לאחר מכן, בצע הקלטה של 16 סיביות ו-300 קילו-הרץ לקבלת מערך נתונים באיכות גבוהה. לאחר עד חמש דקות של הקלטה, הסר את הגור. שימו לב לקעקוע הכפות שלו ולאחר מכן מדדו את טמפרטורת העור שלו עם מדחום דיגיטלי.כעת, סמנו סימן קטן על הגור באמצעות דיו על בסיס מים והחזירו אותו לקן שלו. בין הבדיקות, שטפי את הגביעונית עם 10% אתנול ותני לה להתייבש לחלוטין. עבור כלוב בדיקה למבוגרים, השתמש בכלוב פרספקס המתאים לקופסה אטומה לרעש המוארת באור לבן בעוצמה נמוכה.נקו את הכלוב במי סבון, יבשו אותו ומלאו אותו בשני סנטימטרים של מצעים טריים. קבע את המיקרופון בפינה אחת של הכלוב, והתאם את זווית המיקרופון כדי ללכוד צלילים מכל הכלוב. לאחר מכן, מקם מצלמת וידאו מעל התא האטום לרעש כך שהיא תראה את פני כלוב הבדיקה מבלי שהמיקרופון יסתיר פינה.באמצעות זוג בעלי חיים לא ניסיוניים, הגדר את הרווח של ההקלטה כמו קודם. לצורך הניסוי, הכניסו תחילה חיה אחת לכלוב כדי למלא את תפקיד הדייר. הניחו לו להתרגל למשך 20 דקות.ניתן לבצע הקלטה בסיסית במהלך תקופה זו. לאחר מכן, התחילו את הקלטות הווידאו והשמע, והציגו את החיה השנייה מאותו המין שתמלא את תפקיד המצטרף החדש. סנכרן את ההקלטות על ידי הפעלת צליל צפצוף כשהשני נוגע בכלוב.הקליטו את האינטראקציות של בעלי החיים למשך זמן רב ככל שנדרש, כגון ארבע דקות. כדי להתכונן לבדיקה זו, מוקדם בבוקר יום הבדיקה, קח מריחות נרתיקיות מכל נקבה כדי לקבוע את מצבה במחזור הייחום. החזיקו את הנקבה בזנב ותנו לה לאחוז ברשת הכלוב.בעזרת פיפטה, שטפו את הנרתיק שלה מספר פעמים על ידי הזרקה ואיסוף של 20 מיקרוליטר PBS. שימו לב ל-PBS כשהוא נשטף מהנרתיק. כאשר הוא מעט מעונן, הוא מכיל מספיק תאים.עשו זאת בזהירות כדי להימנע מיצירת ריר. מורחים את הדגימה על שקופית. ניתן לבחון עד ארבעה בבת אחת.תן לדגימות להתייבש לפני שתמשיך. מתחת למכסה אדים, דגרו את המגלשות באמבט של תמיסת מאי-גרונוולד 0.1 טוחנת ב-PBS למשך שלוש דקות. לאחר מכן, העבירו את השקופיות לאמבט PBS למשך דקה.לאחר מכן, העבירו את השקופיות לאמבטיה של 5% משקל לפי נפח Giemsa R ב-PBS. לאחר 10 דקות יש לשטוף את השקופיות ב- PBS טרי למשך דקה נוספת. לאחר מכן, בדוק את השקופיות המוכתמות.אם הדגימה מראה רק תאי אפיתל גדולים ומעוטרים שאין להם גרעינים, וצבועים בכחול, הנקבה נמצאת בייחום מלא. ניתן להשתמש רק בנקבות כאלה לבדיקה. כעת, הקימו את כלוב הבדיקה עם הזכר כדייר.אפשרו לו להתרגל למשך 10 דקות וצלמו הקלטת אודיו בסיסית במידת הצורך. לאחר מכן, התחל את הקלטות הווידאו והשמע והצג את הנקבה בייחום מלא. סנכרן את הרשומות כמו לפני באמצעות צפצוף.לאחר מכן, תנו לבעלי החיים לתקשר כמה זמן שצריך, כמו למשל פרק זמן של ארבע דקות. בסיום ההקלטה, החזר את העכברים לכלובים שלהם. כדי להעלות נתונים לאתר mouseTube במכון פסטר, היכנס תחילה.בדוק אם מתח העכבר שנרשם קיים במסד הנתונים של mouseTube על ידי לחיצה על כפתור הזנים. אם לא, בקש מהמנהלים ליצור אותו. לאחר מכן, צרו נושאים של בעלי חיים.הזן את קודי הזיהוי של בעלי החיים שנרשמו. אסוף אותם בקבוצות כדי להקל על אחזור נתונים מאוחר יותר. לאחר מכן, ספק תיאור של הפרוטוקול בו נעשה שימוש.כעת, צור ניסוי עבור כל סשן הקלטה. ציין את הפרוטוקול, קבוצת האנשים שהוקלטו, החומרה והתוכנה שבהם נעשה שימוש והספציפיות שלהם. הניסוי אוסף את כל המטא נתונים המתאימים לקבצי הקול.לאחר מכן, צור את הקישור לקבצי הקול. ראשית, בחר את הניסוי בתוך הרשימה. לאחר מכן, העתק והדבק את כתובת האתר של קובץ הווקאליזציה בשדה המתאים של העמודה קבצים לקישור.ייתכן שהקישור שאתה מכניס למסד הנתונים הזה לא ממש טוב. ודא שהשרת המארח את קבצי הווקאליזציה שלך נגיש מחוץ למוסד שלך עבור חברי הקהילה. בפרטים, במקטע הערות, כדי לספק לפי הצורך.לדוגמה, ציין שהוזן קישור לקובץ וידאו הנלווה לקובץ שמע. לבסוף, לאחר ביצוע הערכים, תקף אותם. אין צורך למלא כל תיבה עבור כל קובץ.בהתאם לצורך, שנה את הקישורים שהוזנו. אופיינו עכברים חסרי ביטוי של Shank2, גן הקשור להפרעות על הספקטרום האוטיסטי. עכברים אלה הראו תקשורת קולית לא טיפוסית שנצפתה לראשונה כירידה בשיעור השיחות באינטראקציות נקביות.לאחר מכן, הוערך הרפרטואר הסטנדרטי של חמש קריאות שמשתנות מגורות לבגרות. המדידות נעשו לראשונה עם גורי P2. הרפרטואר הקולי לא השתנה בגורי P6.ב-P10, הרפרטואר הווקאלי נשאר זהה. עד לנקודה זו, לא היה הרבה גירעון שהראו עכברי האפס של Shank2. עם זאת, בבגרות, הבדלים הקשורים לגנוטיפ התגלו.כאשר זכרים קיימו אינטראקציה עם נקבות בייחום, הייתה עלייה ניכרת בשיעור הקריאות הקצרות והלא מובנות שבוצעו על ידי זכרים מוטאנטים. בדפוסי קריאה שנשמעו בין נקבות, נקבות Shank2 אפסות פלטו יותר שיחות קצרות ולא מובנות, כמו גם שיחות פחות מורכבות ופחות קריאות קפיצה בתדירות כאשר הן מזווגות עם נקבות רגילות. עכברי Shank2 null מזווגים, זכר או נקבה, השמיעו קול בתדירות שיא נמוכה יותר בהשוואה לזוגות של בני זוג מסוג בר.סנכרון ניתוח אירועים התנהגותיים ופליטת קולות איפשר זיהוי ליקויים בהקשר של פליטת קולות קוליים בעכברים מוטנטיים. עכברי Shank2 null השמיעו קולות בתדירות נמוכה יותר כאשר היו במגע פיזי עם מצטרפים חדשים, ובאופן ספציפי יותר כאשר רחרחו את האזור האנוגניטלי. קולות נוספים נשמעו כאשר המצטרפים החדשים היו בשדה הראייה של עכברי האפס Shank2.לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד להקליט קולות קוליים של עכבר, ולהעלות נתונים למסד הנתונים של mouseTube. בזמן ניסיון הליך זה, חשוב לזכור להקליט מספיק מותנה מראש אינדיבידואלי בהתחשב בגובה ובכדאיות הפנימית במחסום הקול של העכבר.

recording-mouse-ultrasonic-vocalizations-to-evaluate-social

Research

JoVE Journal

Behavior

התנהגות

קולות אולטראסוניים (USVs) בעכברים משתנים בהתאם לגיל, מין, מצב ורקע גנטי. באמצעות שני פולטי אולטרסאונד המשדרים בו זמנית במקומות שונים, בדיקה דו-ברירה זו יכולה להעריך את זיהוי העכברים ואת תגובות ההעדפה למאפיינים שונים של USV.

קביעת העדפות Ultrasonic ניקוד בעכברים באמצעות מבחן השמעה דו בחירה

עכברים לייצר רפרטואר multisyllabic מורכבים של vocalizations קולי (USVs). אלה USVs נמצאים בשימוש נרחב כמו readouts עבור הפרעות נוירופסיכיאטריות. פרוטוקול זה מתאר כמה מהנוהלים שלמדנו ופיתחנו כדי לעקב באופן עקבי, לאסוף ולנתח את התכונות האקוסטיות והתחביר של שירי העכבר.

Eliciting וניתוח זכר העכבר Ultrasonic ווקאליזציה (USV) שירים

מחקרים קודמים על הממד החברתי של לחץ התמקדו בשני משתנים חשובים: זהות חברתית ותמיכה חברתית. פרוטוקול זה מציג מניפולציה ניסויית יעילה של שני משתנים חברתיים אלה ומתאר את יישומם בפרדיגמת אינדוקציה סטנדרטית של מתח (Trier Social Stress Test).

הממד החברתי של מתח: ניסיון מניפולציות של תמיכה החברתית וזהות חברתית בחברת טרייר מתח מבחן

עד כה המחקר התמקד באסטרטגיות קוגניטיביות שאנשים מאמצים כדי להתמודד עם אי ודאות. מחקר זה בוחן במקום זאת דרך חווייתית להתמודדות עם אי ודאות ומציג סט של שיטות ניסיוניות המראות כיצד חווית הרכות ההפטית יכולה לשמש ככלי להתמודדות עם אי ודאות.

ניסוי מחקר בוחן כיצד אנשים יכולים להתמודד עם אי ודאות באמצעות תחושות לתחושה רכות

זיכרון עבודה מנבא כמות משמעותית של שונות עבור מגוון משימות קוגניטיביות, כולל דיבור, קריאה וכתיבה. עם זאת, כלים מעטים זמינים להעריך זיכרון עבודה אצל ילדים. אנו מציגים סוללה חדשנית המבוססת על מחשב, אשר מעריכה באופן מקיף מרכיבים שונים של זיכרון עבודה בקרב ילדים בגיל בית הספר.

הערכת זיכרון עבודה לילדים: הערכה מקיפה סוללה לילדים - זיכרון עבודה (CABC-WM)

חיבור אלחוטי, מערכת דו-כיווני הקלטות עצבית רב ערוצית גירוי ב להתנהג בחופשיות חולדות הוא הציג. המערכת היא קל וקומפקטי, וכך יש השפעה מינימלית על הרפרטואר ההתנהגותי animal´s. יתר על כן, מערכת דו-כיוונית זו מספקת כלי מתוחכם כדי להעריך את קשרי הגומלין סיבתי בין תבניות ההפעלה מוח והתנהגות.

חיבור אלחוטי, ממשק דו-כיווני ההקלטה In Vivo גירוי של פעילות עצבית להתנהג בחופשיות חולדות

כאן אנו מציגים פרוטוקול עבור ניהול של וידאו-הפניה לדירוג של התנהגות חברתית הדדיים (vrRSB) באמצעות נייר או גירסה מקוונת. סקר זה מכמת RSB, תנאי כשירות חברתית, ב פעוטות באמצעות פריטי "וידאו-הפניה" לפיה נושא לעומת ילד הפניה שמוצג בסרטון שלוש דקות.

השימוש וידאו הבקיע עוגן להערכת טורי מהירה של תקשורת חברתית ב פעוטות

מאמר זה מתאר משימה ERP לקרקע סמנטי באמצעות בתוך-מודאליות זוגות של תמונות ומילים לחקור עיבוד סמנטי אצל אנשים עם הפרעת ספקטרום האוטיזם (ASD).

לקרקע סמנטי הקשור לאירוע פוטנציאליים (ERP) פעילות ללמוד עיבוד סמנטי-Lexico Visuo-סמנטי הפרעת ספקטרום האוטיזם

הפרדיגמה העולם הויזואלי עוקב אחר תנועות עיניים של המשתתפים בסביבת העבודה חזותיים כפי שהם מאזינים או מדבר שפה מדוברת. פרדיגמה זו יכול לשמש כדי לחקור את עיבוד מקוון של מגוון רחב של שאלות psycholinguistic, כולל הצהרות סמנטי מורכבים, כגון מאמר משפטי.

באמצעות תנועות עיניים טלקוה הפרדיגמה העולם הויזואלי לחקור את עיבוד מקוון של השפה המדוברת

אנו מציגים כמדריך חזותי כדי מחלת ההגנה התנהגויות חיתוך עלה נמלים, עם קליפים בודדים והגדרות הנלווה, מאויר בתרחיש של זיהום ניסיוני. המטרה העיקרית שלנו היא כדי לסייע לחוקרים אחרים לזהות התנהגויות הגנתית מפתח וכדי לספק הבנה משותפת למחקר עתידי בתחום זה.

מדריך חזותי ללמוד ההגנות התנהגותית כדי הפתוגן בפיגועי חיתוך עלה נמלים

למד הקלטת קולות אולטרה-סאונד בעכברים להערכת תקשורת חברתית במודלים נוירופסיכיאטריים. שיטה זו מאפשרת ניתוח השפעת מוטציות גנטיות על התנהגות חברתית ושיתוף נתונים במאגר mouseTube.

הקלטת עכבר Ultrasonic קולות של להערכת תקשורת חברתית

גלה סרטונים נוספים