הקלטת עכבר Ultrasonic קולות של להערכת תקשורת חברתית

המטרה הכוללת של פרוטוקול זה היא להקליט ולנתח קולות קוליים של גורי עכברים או בוגרים, ולאחר מכן להפוך את הנתונים לזמינים לציבור במסד הנתונים של mouseTube. אז זיהינו בעבר מוטציות באוטיזם, אז עכשיו אנחנו רוצים להבין את התפקיד של הגנים האלה. אנו משתמשים במודלים של עכברים, ובמיוחד, אנו מסתכלים על הקול האולטראסוני של עכברים.

מודל זה יכול לסייע בהבנת שאלות מפתח בתחום מדעי המוח. למשל, כיצד מוטציות גנטיות משפיעות על תקשורת חברתית במודל עכבר להפרעות נוירופסיכוטיות כמו אוטיזם. היתרון העיקרי של פרוטוקול זה הוא שקולות הפנייה לעכבר נלקחים באופן מהימן.

זה צריך להעדיף סטנדרטיזציה של מידע הקשר כדי לשפר בין השוואת המחקר. שיטה זו גם תגביר את הידע על תקשורת תוך-קולית של עכבר באמצעות מסד הנתונים mouseTube. לאחר הכנת העכברים והשגת גורים שזה עתה נולדו, הקימו כלוב כדי להקליט את השיחות שלהם.

השתמש בקופסה אטומה לרעש או בקופסת קלקר. ראשית, הגדר מדחום לניטור הטמפרטורה הפנימית. לאחר מכן, דרך חור בחלק העליון של הקופסה, הורד מיקרופון אולטרסאונד מעבה כך שקרום המיקרופון יהיה כ -12 עד 15 סנטימטרים מעל הרצפה.

כעת, חבר את המיקרופון לכרטיס קול של מחשב. הכניסו את הגור הלא ניסיוני למחזיק גור פלסטיק נקי בתוך קופסת ההקלטה וסגרו אותו. הפוך את צליל ההקלטה לשיא השתמש במשרעת המלאה הזמינה ללא עיוות.

אל תשנה הגדרה זו במהלך הניסוי. כעת, למדידות ניסיוניות, הניחו את הגור בעדינות ובמהירות האפשרית בכוס פלסטיק נקייה. לאחר מכן, הניחו את הגור מתחת למיקרופון וסגרו את הקופסה בעדינות ובשקט ככל האפשר.

לאחר מכן, בצע הקלטה של 16 סיביות ו-300 קילו-הרץ לקבלת מערך נתונים באיכות גבוהה. לאחר עד חמש דקות של הקלטה, הסר את הגור. שימו לב לקעקוע הכפות שלו ולאחר מכן מדדו את טמפרטורת העור שלו עם מדחום דיגיטלי.

כעת, סמנו סימן קטן על הגור באמצעות דיו על בסיס מים והחזירו אותו לקן שלו. בין הבדיקות, שטפי את הגביעונית עם 10% אתנול ותני לה להתייבש לחלוטין. עבור כלוב בדיקה למבוגרים, השתמש בכלוב פרספקס המתאים לקופסה אטומה לרעש המוארת באור לבן בעוצמה נמוכה.

נקו את הכלוב במי סבון, יבשו אותו ומלאו אותו בשני סנטימטרים של מצעים טריים. קבע את המיקרופון בפינה אחת של הכלוב, והתאם את זווית המיקרופון כדי ללכוד צלילים מכל הכלוב. לאחר מכן, מקם מצלמת וידאו מעל התא האטום לרעש כך שהיא תראה את פני כלוב הבדיקה מבלי שהמיקרופון יסתיר פינה.

באמצעות זוג בעלי חיים לא ניסיוניים, הגדר את הרווח של ההקלטה כמו קודם. לצורך הניסוי, הכניסו תחילה חיה אחת לכלוב כדי למלא את תפקיד הדייר. הניחו לו להתרגל למשך 20 דקות.

ניתן לבצע הקלטה בסיסית במהלך תקופה זו. לאחר מכן, התחילו את הקלטות הווידאו והשמע, והציגו את החיה השנייה מאותו המין שתמלא את תפקיד המצטרף החדש. סנכרן את ההקלטות על ידי הפעלת צליל צפצוף כשהשני נוגע בכלוב.

הקליטו את האינטראקציות של בעלי החיים למשך זמן רב ככל שנדרש, כגון ארבע דקות. כדי להתכונן לבדיקה זו, מוקדם בבוקר יום הבדיקה, קח מריחות נרתיקיות מכל נקבה כדי לקבוע את מצבה במחזור הייחום. החזיקו את הנקבה בזנב ותנו לה לאחוז ברשת הכלוב.

בעזרת פיפטה, שטפו את הנרתיק שלה מספר פעמים על ידי הזרקה ואיסוף של 20 מיקרוליטר PBS. שימו לב ל-PBS כשהוא נשטף מהנרתיק. כאשר הוא מעט מעונן, הוא מכיל מספיק תאים.

עשו זאת בזהירות כדי להימנע מיצירת ריר. מורחים את הדגימה על שקופית. ניתן לבחון עד ארבעה בבת אחת.

תן לדגימות להתייבש לפני שתמשיך. מתחת למכסה אדים, דגרו את המגלשות באמבט של תמיסת מאי-גרונוולד 0.1 טוחנת ב-PBS למשך שלוש דקות. לאחר מכן, העבירו את השקופיות לאמבט PBS למשך דקה.

לאחר מכן, העבירו את השקופיות לאמבטיה של 5% משקל לפי נפח Giemsa R ב-PBS. לאחר 10 דקות יש לשטוף את השקופיות ב- PBS טרי למשך דקה נוספת. לאחר מכן, בדוק את השקופיות המוכתמות.

אם הדגימה מראה רק תאי אפיתל גדולים ומעוטרים שאין להם גרעינים, וצבועים בכחול, הנקבה נמצאת בייחום מלא. ניתן להשתמש רק בנקבות כאלה לבדיקה. כעת, הקימו את כלוב הבדיקה עם הזכר כדייר.

אפשרו לו להתרגל למשך 10 דקות וצלמו הקלטת אודיו בסיסית במידת הצורך. לאחר מכן, התחל את הקלטות הווידאו והשמע והצג את הנקבה בייחום מלא. סנכרן את הרשומות כמו לפני באמצעות צפצוף.

לאחר מכן, תנו לבעלי החיים לתקשר כמה זמן שצריך, כמו למשל פרק זמן של ארבע דקות. בסיום ההקלטה, החזר את העכברים לכלובים שלהם. כדי להעלות נתונים לאתר mouseTube במכון פסטר, היכנס תחילה.

בדוק אם מתח העכבר שנרשם קיים במסד הנתונים של mouseTube על ידי לחיצה על כפתור הזנים. אם לא, בקש מהמנהלים ליצור אותו. לאחר מכן, צרו נושאים של בעלי חיים.

הזן את קודי הזיהוי של בעלי החיים שנרשמו. אסוף אותם בקבוצות כדי להקל על אחזור נתונים מאוחר יותר. לאחר מכן, ספק תיאור של הפרוטוקול בו נעשה שימוש.

כעת, צור ניסוי עבור כל סשן הקלטה. ציין את הפרוטוקול, קבוצת האנשים שהוקלטו, החומרה והתוכנה שבהם נעשה שימוש והספציפיות שלהם. הניסוי אוסף את כל המטא נתונים המתאימים לקבצי הקול.

לאחר מכן, צור את הקישור לקבצי הקול. ראשית, בחר את הניסוי בתוך הרשימה. לאחר מכן, העתק והדבק את כתובת האתר של קובץ הווקאליזציה בשדה המתאים של העמודה קבצים לקישור.

ייתכן שהקישור שאתה מכניס למסד הנתונים הזה לא ממש טוב. ודא שהשרת המארח את קבצי הווקאליזציה שלך נגיש מחוץ למוסד שלך עבור חברי הקהילה. בפרטים, במקטע הערות, כדי לספק לפי הצורך.

לדוגמה, ציין שהוזן קישור לקובץ וידאו הנלווה לקובץ שמע. לבסוף, לאחר ביצוע הערכים, תקף אותם. אין צורך למלא כל תיבה עבור כל קובץ.

בהתאם לצורך, שנה את הקישורים שהוזנו. אופיינו עכברים חסרי ביטוי של Shank2, גן הקשור להפרעות על הספקטרום האוטיסטי. עכברים אלה הראו תקשורת קולית לא טיפוסית שנצפתה לראשונה כירידה בשיעור השיחות באינטראקציות נקביות.

לאחר מכן, הוערך הרפרטואר הסטנדרטי של חמש קריאות שמשתנות מגורות לבגרות. המדידות נעשו לראשונה עם גורי P2. הרפרטואר הקולי לא השתנה בגורי P6.

ב-P10, הרפרטואר הווקאלי נשאר זהה. עד לנקודה זו, לא היה הרבה גירעון שהראו עכברי האפס של Shank2. עם זאת, בבגרות, הבדלים הקשורים לגנוטיפ התגלו.

כאשר זכרים קיימו אינטראקציה עם נקבות בייחום, הייתה עלייה ניכרת בשיעור הקריאות הקצרות והלא מובנות שבוצעו על ידי זכרים מוטאנטים. בדפוסי קריאה שנשמעו בין נקבות, נקבות Shank2 אפסות פלטו יותר שיחות קצרות ולא מובנות, כמו גם שיחות פחות מורכבות ופחות קריאות קפיצה בתדירות כאשר הן מזווגות עם נקבות רגילות. עכברי Shank2 null מזווגים, זכר או נקבה, השמיעו קול בתדירות שיא נמוכה יותר בהשוואה לזוגות של בני זוג מסוג בר.

סנכרון ניתוח אירועים התנהגותיים ופליטת קולות איפשר זיהוי ליקויים בהקשר של פליטת קולות קוליים בעכברים מוטנטיים. עכברי Shank2 null השמיעו קולות בתדירות נמוכה יותר כאשר היו במגע פיזי עם מצטרפים חדשים, ובאופן ספציפי יותר כאשר רחרחו את האזור האנוגניטלי. קולות נוספים נשמעו כאשר המצטרפים החדשים היו בשדה הראייה של עכברי האפס Shank2.

לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד להקליט קולות קוליים של עכבר, ולהעלות נתונים למסד הנתונים של mouseTube. בזמן ניסיון הליך זה, חשוב לזכור להקליט מספיק מותנה מראש אינדיבידואלי בהתחשב בגובה ובכדאיות הפנימית במחסום הקול של העכבר.