Name: דגם Murine של פגיעת המעיים איסכמיה reperfusion (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-05-11T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 7 s
Description: למדו שיטה לאיסכמיה-ריפרפוזיה במעי עכברים באמצעות חסימת עורק מזנטרי עליון. טכניקה זו מאפשרת חקר מנגנוני פגיעה והתחדשות רקמתיים ללא תמותה בניסוי.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

עבודה זו נתמכה על ידי הקרן הלאומית למדע רוסי, להעניק אין. 14-50-00060 ו LLC RUSCHEMBIO. עבודה זו נתמכה גם על ידי Crohn`s ו קוליטיס קרן של אמריקה להעניק 294,083 (כדי AVT), ועל ידי NIH מענק RO1 DK47700 (כדי CJ).

מחקרים בבעלי חיים בוצעו בהתאם המכון הלאומי הנחיות בריאות אושרו על ידי טיפול בבעלי חיים מוסדיים ועדת שימוש של המכון טרודו. 8-12 בן שבוע C57BL / 6 עכברים שימשו במחקר. 1. הכנה לקראת ניתוח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן לעקר מכשירי ניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כן מערכת הרדמה מבוסס isoflurane עם חרטומו, ואת משטח לוהט. ודא משטח מחומם לא יתר על המידה (&lt;39 ºC). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא כי מכל הדחת גז isoflurane ממוקם כראוי על מנת להבטיח את יציאות פליטה בתחתית המכל אינם חסומים או מאפיל בכל דרך. לשקול מיכל הדחה גז לפני הליך ומשקל מסמך על המכל. בטל מכל כאשר משקל מכל עולה על 50 גרם של משקל שנצבר (~ 12 שעות). </li></ol> 2. הרדמה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים עכבר עם 3% isoflurane בתא אינדוקציה (1 ליטר / דקהO 2). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הערכת עומק ההרדמה על ידי חוסר יכולת להישאר זקוף, אובדן תנועה רצונית תכליתית, אובדן רפלקס מצמוץ, הרפיית שרירים, ואובדן בתגובה רפלקס גירוי (הבוהן או קמצוץ הזנב עם לחץ חזק). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הערכת קצב הנשימה ואת דפוס ידי התבוננות דופן בית החזה ותנועות בטן. בהרדמה אופטימלית, קצב הנשימה צריך להיות ~ 55-65 נשימות לדקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סר עכבר מאולם האינדוקציה ובמהירות לגלח את אזור הבטן של העכבר. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי למנוע התייבשות קרנית, למקם משחת עיניים תפל בעיני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש לשים את הסמן על המשטח הלוהט ולחבר אותו באמצעות חרטומו למערכת הרדמה. הפוך קרום חרטומו לטקס בטוח מתאים בחוזקה על הראש של העכבר ואין דליפה של isoflurane. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקטינים את שיעור isoflurane ל -1.5%, ולהזריק עצירות (0.1 מ&quot;ג / ק&quot;ג) ו קטמין (10 מ&quot;ג / ק&quot;ג) תת עורי כדי למנוע את הרוח של מפל-כאב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נגב העור דואר של אזור הפעולה עם מקלון צמר גפן סטרילי ספוג פתרון כירורגי בבטאדין ואחריו אתנול 70%. </li></ol> 3. כירורגיה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך פיום בטן סנטימטר באמצע קו 3-5 במספרי הפעלה. כסה את איזור פעולה עם הכרית לא חסיד סטרילי טבול מלוח. לבודד cecum ואת המעי ולחשוף את עורק mesenteric המעולה שימוש צמר גפן טבולה מלוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להקל קליפ החלים, לבצע חתכים קטנים לפדר סביב עורק mesenteric המעולה שימוש איריס בסדר scissors.To לעשות זאת, בעדינות להרים את המעי עם מלקחי הלבשה וחותך לפדר משני צידי עורק mesenteric המעולה במיקום קליפ הרצוי (איור 1A). לאחר מכן, להוסיף כמה טיפות של תמיסת מלח סטרילית לאזור על מצב קליפ רצוי לפני היישום קליפים. הערה: כדי לבצע את ניתוח הדמה, בצע את הליך כירורגי עד שלב 3.2. אין ליישם קליפים. במקום זאת, לשמור על רקמות לחות על ידי ים חמים הוסיףאלין כמתואר 3.6 עבור שעה 1. לאחר מכן, המשך לשלב 4.1, </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחסום את סניפי ממדרגה ראשונה של העורק mesenteric מעולה עם קליפים כלי הדם (כוח 70 גרם) באמצעות applier קליפ כדי ליצור אזור ס&quot;מ 5-7 של מעי איסכמי סמוך cecum (איור 1B). למרות המיקום של הכלי הוא שמרני, ייתכן שיש שינויים קלים בין עכברים (ראה דוגמאות על איור 1). לכן, 2 או 3 קליפים בדרך כלל נדרשים (לראות את המיקום של קליפים על איור 1 א, ד, ה, חיצים שחורים). הערה: השתמש קליפים כלי באיכות גבוהה. קליפים לחץ גבוה יכול לפגוע בכלי ולמנוע התחדשות ואילו קליפים בלחץ נמוך (&lt;30 גרם) לא יכול לחסום את זרימת הדם לחלוטין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חסום זרימת דם בטחונות דרך המעי באמצעות שני קליפים כלי דם על פני כלי (40 כוח ג&#39;י), demarking באזור מעי איסכמי (איור 1). ספיגה של כלי בטחונות נדרשהלמנוע אספקת דם מכלי דם סמוכים (לראות את המיקום של קליפים על איור 1 א, ד, ה, חצים ירוקים). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אופציונלי: הוסף פתרון הפרין (6 יחידות USP / מ&quot;ל), כדי למנוע קרישת דם. Dropwise להוסיף 0.5 מיליליטר של תמיסת הפרין אל המעי המבודד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סטרילי כרית לא חסיד לחים עדינים עם מי מלח מחומם מראש ל 37 מעלות צלזיוס, החלימו על תחום כירורגים. ודא כי מגבונים נשארים רטובים במהלך ההליך כולו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשמור על איסכמיה במשך 60 דקות באמצעות 1-1.5% הרדמה isoflurane לאורך כל הדרך. אם הליך איסכמיה מבוצע כהלכה, באזור איסכמי ישתנה לאדום יין בצבע ב כ 30 דקות. שים לב כלי דם דיסטלי לתפקיד קליפ מוגדל במהלך איסכמיה (איור 1, לוחות מימין) המציין חסימה מוצלחת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעקוב מקרוב אחר העכבר בשלב איסכמיה. תמשיך לחול תמיסת מלח כדי לרפד לא חסיד המכסה את אתר הניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סימן<html> את הקצוות של האזור איסכמי ידי pipetting 20 μl של hematoxylin Gill`s 3 על הרקמה כדי להקל קצירת רקמה איסכמית רקמה בריאה סמוכים מאותו עכבר להשוואה (איור 1E, פאנל מימין). </li></ol> 4. שלב reperfusion <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בסוף של איסכמיה להוסיף כמה טיפות של תמיסת מלח על האזור קליפ בעדינות להסיר קליפים כלי הדם עם applier קליפ. ואז, בעדינות לדחוף את המעי חזרה אל חלל הבטן באמצעות עצות צמר גפן טבולה מלוחות. הסר כרית לא חסיד ולסגור את דופן הבטן ואת העור באמצעות קליפים הפצע נירוסטה 9 מ&quot;מ. אם reperfusion מבוצע יותר מ -3 שעות, השתמש תפר vicryl נספגים לסגור את דופן הבטן לפני יישום קליפים פצע על העור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשמור על עכברים בכלוב נקי מחומם עבור פרק הזמן הרצוי (30 דק &#39;, 60 דק&#39;, 120 דק &#39;, או 180 דקות) עבור השלב reperfusion. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדוק חיות לפחות כל 30 דקות כדי להבטיח יציבות. </li></ol>class = &quot;jove_title&quot;&gt; 5. Necropsy והקציר של המעי הדק <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים עכברים על ידי ה- CO 2 ממנת יתר ואחריו נקע בצוואר הרחם בזמן הרצוי הבאים reperfusion. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתח חלל הבטן לאסוף את רקמת המעי איסכמי לניתוח נוסף. קציר נורמלי בריאות רקמות סמוכות הרקמות הפגועות בקרתי פנימי לחשבון לכל תגובה מערכתית בכל נוגע לפגיעה. הערה: בקרה זה מתאימה יותר מאשר אחיזת העיניים המופעלות עכברים שליטים כי עכברי דמה מופעל אינם עוברים תגובה מערכתית בכל הנוגע לפגיעה נגרמת IR. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש לשטוף היטב את תוכן המעי באמצעות מזרק 30 מ&quot;ל עם מחט gavage מצורף מלא מלוחים ואז לחתוך את המעי longitudinally. אם מדגם של מעי נדרש עבור ניתוח ביטוי גנים, לחתוך שבר 1.5 מ&quot;מ אורכים, ולהשתמש חתיכת נותרים לניתוח היסטולוגית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לניתוח היסטולוגית, להכין רולדה בעזרת זוג מלקחיים כדי לגלגל את intestine. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לשמור על הצורה התגלגלה, למקם את החלקים של מעי בין כריות קצף ביופסית קלטות רקמה (איור 2). מניח את הקלטות בפורמלין 10% שנאגרה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תקן רקמה בפורמלין hr 24 לפחות. חלף פורמלין עם אתנול 70% עבור 24 שעות נוספות. רקמות חנות באתנול 70% ללא הגבלת זמן בטמפרטורת החדר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להטביע פרפין, לחתוך 5 סעיפים מיקרומטר ואת הכתם עם באמצעות hematoxylin ו eosin פרוטוקול סטנדרטי (איור 3). </li></ol> 6. ניקוד <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ציון הפגיעה בעכברים איסכמיה-רה-פרפוזיה כפי שמסוכם בטבלה 2. בחר שיטת הניקוד המתאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אופציונלי: מחלקים את שדה הראייה לארבעה חלקים מאז חומרת הפגיעה משתנה לאורך כל הקטע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חשב את ממוצע הציונים של כל קטע מתוך דפי תווים שהושגו בצורה עיוורת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השווה את הכיתה של הרקמה הפגועה בין מקרים ובקרה וכן thדואר ללא פגע רקמות באמצעות מבחן Kruskal-Wallis, ואחריו מבחן ההשוואות המרובה של דאן. </li></ol>

<ol><li>Eltzschig, H. K., Eckle, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ischemia+and+reperfusion--from+mechanism+to+translation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Ischemia and reperfusion--from mechanism to translation.</a> Nat Med. 17, 1391-1401 (2011).</li>
<li>Lenaerts, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+insights+in+intestinal+ischemia-reperfusion+injury%3A+implications+for+intestinal+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Organ+Transplant%22%5BJournal%5D)">New insights in intestinal ischemia-reperfusion injury: implications for intestinal transplantation.</a> Curr Opin Organ Transplant. 18, 298-303 (2013).</li>
<li>Yasuhara, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+mesenteric+ischemia%3A+the+challenge+of+gastroenterology%5BTitle%5D)+AND+%22Surg+Today%22%5BJournal%5D)">Acute mesenteric ischemia: the challenge of gastroenterology.</a> Surg Today. 35, 185-195 (2005).</li>
<li>Perez-Chanona, E., Muhlbauer, M., Jobin, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+microbiota+protects+against+ischemia%2Freperfusion-induced+intestinal+injury+through+nucleotide-binding+oligomerization+domain-containing+protein+2+%28NOD2%29+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">The microbiota protects against ischemia/reperfusion-induced intestinal injury through nucleotide-binding oligomerization domain-containing protein 2 (NOD2) signaling.</a> Am J Pathol. 184, 2965-2975 (2014).</li>
<li>Lee, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Delineating+the+relationships+among+the+formation+of+reactive+oxygen+species%2C+cell+membrane+instability+and+innate+autoimmunity+in+intestinal+reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Immunol%22%5BJournal%5D)">Delineating the relationships among the formation of reactive oxygen species, cell membrane instability and innate autoimmunity in intestinal reperfusion injury.</a> Mol Immunol. 58, 151-159 (2014).</li>
<li>Yoshiya, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Depletion+of+gut+commensal+bacteria+attenuates+intestinal+ischemia%2Freperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Depletion of gut commensal bacteria attenuates intestinal ischemia/reperfusion injury.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 301, G1020-G1030 (2011).</li>
<li>Wu, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+receptor+for+complement+component+C3a+mediates+protection+from+intestinal+ischemia-reperfusion+injuries+by+inhibiting+neutrophil+mobilization%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">The receptor for complement component C3a mediates protection from intestinal ischemia-reperfusion injuries by inhibiting neutrophil mobilization.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 110, 9439-9444 (2013).</li>
<li>Muhlbauer, M., Perez-Chanona, E., Jobin, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+cell-specific+MyD88+signaling+mediates+ischemia%2Freperfusion-induced+intestinal+injury+independent+of+microbial+status%5BTitle%5D)+AND+%22Inflamm+Bowel+Dis%22%5BJournal%5D)">Epithelial cell-specific MyD88 signaling mediates ischemia/reperfusion-induced intestinal injury independent of microbial status.</a> Inflamm Bowel Dis. 19, 2857-2866 (2013).</li>
<li>Gonzalez, L. M., Moeser, A. J., Blikslager, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+ischemia-reperfusion-induced+intestinal+injury%3A+progress+and+promise+for+translational+research%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Animal models of ischemia-reperfusion-induced intestinal injury: progress and promise for translational research.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 308, G63-G75 (2015).</li>
<li>Megison, S. M., Horton, J. W., Chao, H., Walker, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+model+for+intestinal+ischemia+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">A new model for intestinal ischemia in the rat.</a> J Surg Res. 49, 168-173 (1990).</li>
<li>Goldsmith, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+epithelial+cell-derived+mu-opioid+signaling+protects+against+ischemia+reperfusion+injury+through+PI3K+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Intestinal epithelial cell-derived mu-opioid signaling protects against ischemia reperfusion injury through PI3K signaling.</a> Am J Pathol. 182, 776-785 (2013).</li>
<li>Cuzzocrea, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycogen+synthase+kinase-3beta+inhibition+attenuates+the+development+of+ischaemia%2Freperfusion+injury+of+the+gut%5BTitle%5D)+AND+%22Intensive+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Glycogen synthase kinase-3beta inhibition attenuates the development of ischaemia/reperfusion injury of the gut.</a> Intensive Care Med. 33, 880-893 (2007).</li>
<li>Farber, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+specific+inhibitor+of+apoptosis+decreases+tissue+injury+after+intestinal+ischemia-reperfusion+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Surg%22%5BJournal%5D)">A specific inhibitor of apoptosis decreases tissue injury after intestinal ischemia-reperfusion in mice.</a> J Vasc Surg. 30, 752-760 (1999).</li>
<li>Ben, D. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TLR4+mediates+lung+injury+and+inflammation+in+intestinal+ischemia-reperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">TLR4 mediates lung injury and inflammation in intestinal ischemia-reperfusion.</a> J Surg Res. 174, 326-333 (2012).</li>
<li>Watson, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+ischemia%2Freperfusion+injury+triggers+activation+of+innate+toll-like+receptor+4+and+adaptive+chemokine+programs%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">Intestinal ischemia/reperfusion injury triggers activation of innate toll-like receptor 4 and adaptive chemokine programs.</a> Transplant Proc. 40, 3339-3341 (2008).</li>
<li>Watanabe, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+the+MyD88+signaling+pathway+inhibits+ischemia-reperfusion+injury+in+the+small+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Activation of the MyD88 signaling pathway inhibits ischemia-reperfusion injury in the small intestine.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 303, G324-G334 (2012).</li>
<li>Murayama, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((JNK+%28c-Jun+NH2+terminal+kinase%29+and+p38+during+ischemia+reperfusion+injury+in+the+small+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">JNK (c-Jun NH2 terminal kinase) and p38 during ischemia reperfusion injury in the small intestine.</a> Transplantation. 81, 1325-1330 (2006).</li>
<li>Park, P. O., Haglund, U., Bulkley, G. B., Falt, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+sequence+of+development+of+intestinal+tissue+injury+after+strangulation+ischemia+and+reperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Surgery%22%5BJournal%5D)">The sequence of development of intestinal tissue injury after strangulation ischemia and reperfusion.</a> Surgery. 107, 574-580 (1990).</li>
<li>Jilling, T., Lu, J., Jackson, M., Caplan, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+epithelial+apoptosis+initiates+gross+bowel+necrosis+in+an+experimental+rat+model+of+neonatal+necrotizing+enterocolitis%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Res%22%5BJournal%5D)">Intestinal epithelial apoptosis initiates gross bowel necrosis in an experimental rat model of neonatal necrotizing enterocolitis.</a> Pediatr Res. 55, 622-629 (2004).</li>
<li>Aprahamian, C. J., Lorenz, R. G., Harmon, C. M., Dimmit, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toll-like+receptor+2+is+protective+of+ischemia-reperfusion-mediated+small-bowel+injury+in+a+murine+model%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Toll-like receptor 2 is protective of ischemia-reperfusion-mediated small-bowel injury in a murine model.</a> Pediatr Crit Care Med. 9, 105-109 (2008).</li>
<li>Tatum, P. M., Harmon, C. M., Lorenz, R. G., Dimmitt, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toll-like+receptor+4+is+protective+against+neonatal+murine+ischemia-reperfusion+intestinal+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pediatr+Surg%22%5BJournal%5D)">Toll-like receptor 4 is protective against neonatal murine ischemia-reperfusion intestinal injury.</a> J Pediatr Surg. 45, 1246-1255 (2010).</li>
<li>Fleming, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-phospholipid+antibodies+restore+mesenteric+ischemia%2Freperfusion-induced+injury+in+complement+receptor+2%2Fcomplement+receptor+1-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Anti-phospholipid antibodies restore mesenteric ischemia/reperfusion-induced injury in complement receptor 2/complement receptor 1-deficient mice.</a> J. Immunol. 173, 7055-7061 (2004).</li>
<li>Fleming, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mice+deficient+in+complement+receptors+1+and+2+lack+a+tissue+injury-inducing+subset+of+the+natural+antibody+repertoire%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Mice deficient in complement receptors 1 and 2 lack a tissue injury-inducing subset of the natural antibody repertoire.</a> J. Immunol. 169, 2126-2133 (2002).</li>
<li>Lapchak, P. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelets+orchestrate+remote+tissue+damage+after+mesenteric+ischemia-reperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Platelets orchestrate remote tissue damage after mesenteric ischemia-reperfusion.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 302, G888-G897 (2012).</li>
<li>Rehrig, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complement+inhibitor%2C+complement+receptor+1-related+gene%2Fprotein+y-Ig+attenuates+intestinal+damage+after+the+onset+of+mesenteric+ischemia%2Freperfusion+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Complement inhibitor, complement receptor 1-related gene/protein y-Ig attenuates intestinal damage after the onset of mesenteric ischemia/reperfusion injury in mice.</a> J. Immunol. 167, 5921-5927 (2001).</li>
<li>Hoffman, S. M., Wang, H., Pope, M. R., Fleming, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Helicobacter+infection+alters+MyD88+and+Trif+signalling+in+response+to+intestinal+ischaemia-reperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Physiol%22%5BJournal%5D)">Helicobacter infection alters MyD88 and Trif signalling in response to intestinal ischaemia-reperfusion.</a> Exp Physiol. 96, 104-113 (2011).</li>
<li>Moses, T., Wagner, L., Fleming, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TLR4-mediated+Cox-2+expression+increases+intestinal+ischemia%2Freperfusion-induced+damage%5BTitle%5D)+AND+%22J+Leukoc+Biol%22%5BJournal%5D)">TLR4-mediated Cox-2 expression increases intestinal ischemia/reperfusion-induced damage.</a> J Leukoc Biol. 86, 971-980 (2009).</li>
<li>Feinman, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HIF-1+mediates+pathogenic+inflammatory+responses+to+intestinal+ischemia-reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">HIF-1 mediates pathogenic inflammatory responses to intestinal ischemia-reperfusion injury.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 299, G833-G843 (2010).</li>
<li>Lapchak, P. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+platelet+factor+4+in+local+and+remote+tissue+damage+in+a+mouse+model+of+mesenteric+ischemia%2Freperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">The role of platelet factor 4 in local and remote tissue damage in a mouse model of mesenteric ischemia/reperfusion injury.</a> PloS one. 7, e39934(2012).</li>
<li>Wen, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ischemic+postconditioning+during+reperfusion+attenuates+intestinal+injury+and+mucosal+cell+apoptosis+by+inhibiting+JAK%2FSTAT+signaling+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Shock%22%5BJournal%5D)">Ischemic postconditioning during reperfusion attenuates intestinal injury and mucosal cell apoptosis by inhibiting JAK/STAT signaling activation.</a> Shock. 38, 411-419 (2012).</li>
<li>Wang, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal+variations+of+the+ileal+microbiota+in+intestinal+ischemia+and+reperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Shock%22%5BJournal%5D)">Temporal variations of the ileal microbiota in intestinal ischemia and reperfusion.</a> Shock. 39, 96-103 (2013).</li>
<li>Zou, L., Attuwaybi, B., Kone, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+NF-kappa+B+inhibition+on+mesenteric+ischemia-reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Effects of NF-kappa B inhibition on mesenteric ischemia-reperfusion injury.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 284, G713-G721 (2003).</li>
<li>Hassoun, H. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alpha-melanocyte-stimulating+hormone+protects+against+mesenteric+ischemia-reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Alpha-melanocyte-stimulating hormone protects against mesenteric ischemia-reperfusion injury.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 282, G1059-G1068 (2002).</li>
<li>Stallion, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ischemia%2Freperfusion%3A+a+clinically+relevant+model+of+intestinal+injury+yielding+systemic+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pediatr+Surg%22%5BJournal%5D)">Ischemia/reperfusion: a clinically relevant model of intestinal injury yielding systemic inflammation.</a> J Pediatr Surg. 40, 470-477 (2005).</li>
<li>Blikslager, A. T., Roberts, M. C., Rhoads, J. M., Argenzio, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Is+reperfusion+injury+an+important+cause+of+mucosal+damage+after+porcine+intestinal+ischemia%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Surgery%22%5BJournal%5D)">Is reperfusion injury an important cause of mucosal damage after porcine intestinal ischemia?</a> Surgery. 121, 526-534 (1997).</li>
<li>Barker, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+stem+cells+in+small+intestine+and+colon+by+marker+gene+Lgr5%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Identification of stem cells in small intestine and colon by marker gene Lgr5.</a> Nature. 449, 1003-1007 (2007).</li>
<li>Victoni, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+and+remote+tissue+injury+upon+intestinal+ischemia+and+reperfusion+depends+on+the+TLR%2FMyD88+signaling+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Med+Microbiol+Immunol%22%5BJournal%5D)">Local and remote tissue injury upon intestinal ischemia and reperfusion depends on the TLR/MyD88 signaling pathway.</a> Med Microbiol Immunol. 199, 35-42 (2010).</li>
<li>Watanabe, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toll-like+receptor+2+mediates+ischemia-reperfusion+injury+of+the+small+intestine+in+adult+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Toll-like receptor 2 mediates ischemia-reperfusion injury of the small intestine in adult mice.</a> PloS one. 9, e110441(2014).</li>
<li>Pope, M. R., Fleming, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TLR2+modulates+antibodies+required+for+intestinal+ischemia%2Freperfusion-induced+damage+and+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">TLR2 modulates antibodies required for intestinal ischemia/reperfusion-induced damage and inflammation.</a> J. Immunol. 194, 1190-1198 (2015).</li>
<li>Leung, F. W., Su, K. C., Passaro, E. Jr, Guth, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regional+differences+in+gut+blood+flow+and+mucosal+damage+in+response+to+ischemia+and+reperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Regional differences in gut blood flow and mucosal damage in response to ischemia and reperfusion.</a> Am J Physiol. 263, G301-G305 (1992).</li>
<li>Chiu, C. J., McArdle, A. H., Brown, R., Scott, H. J., Gurd, F. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+mucosal+lesion+in+low-flow+states.+I.+A+morphological%2C+hemodynamic%2C+and+metabolic+reappraisal%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Surg%22%5BJournal%5D)">Intestinal mucosal lesion in low-flow states. I. A morphological, hemodynamic, and metabolic reappraisal.</a> Arch Surg. 101, 478-483 (1970).</li>
<li>Quaedackers, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+evaluation+of+methods+for+grading+histologic+injury+following+ischemia%2Freperfusion+of+the+small+bowel%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">An evaluation of methods for grading histologic injury following ischemia/reperfusion of the small bowel.</a> Transplant Proc. 32, 1307-1310 (2000).</li>
<li>Bianciardi, P., Scorza, R., Ghilardi, G., Samaja, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Xanthine+oxido-reductase+activity+in+ischemic+human+and+rat+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22Free+Radic+Res%22%5BJournal%5D)">Xanthine oxido-reductase activity in ischemic human and rat intestine.</a> Free Radic Res. 38, 919-925 (2004).</li>
<li>Yandza, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pig+as+a+preclinical+model+for+intestinal+ischemia-reperfusion+and+transplantation+studies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">The pig as a preclinical model for intestinal ischemia-reperfusion and transplantation studies.</a> J Surg Res. 178, 807-819 (2012).</li>
</ol>

המחברים מצהירים שאין ניגוד עניינים

פיתוח מודלים העכבר של פציעה IR מעיים השתפרו מאוד להבנת המנגנונים של פגיעה ברקמות וסייע בפיתוח אסטרטגיות טיפוליות פוטנציאל למזער נזק לרקמות 7,9,11,34. השלבים הקריטיים של פרוטוקול זה הם מיצוב נכון של קליפים כלי הדם, עיתוי נכון של הערכה היסטולוגית איסכמיה והתקינה של פציעת IR. משך איסכמיה הוא קריטי עבור ניזק אפיתל שלאחר מכן. השעה טיפוסי נדרש כדי לגרום פגיעה IR לשחזור ללא תחלואה ותמותה של עכברי הניסוי הוא ד...

המעי רגיש מאוד הפרעה של זרימת הדם הגורמת לנזק איסכמיה ו אפיתל. Reperfusion לאחר איסכמיה מספק מחדש חמצון של רקמות, והוא יכול לקדם פתולוגיה. לכן, פגיעה איסכמיה ו reperfusion מעיים מזוהה עם מגוון רחב של פתולוגיות, כולל דלקת מעי נמקית, דחייה של השתל בהשתלות מעי דק, סיבוכי ניתוח מפרצת אבי העורקים בבטן, מכונת לב-ריאה, ו 1,2 מחלת מעי דלקתית. פגיעה במעיים IR, במיוחד איסכמיה mesenteric חריפה, הוא מצב מסכן חיים וכתוצאה מכך תחלואה ותמותה 3. למרות לא ידוע ולא מובן,-reperfusion איסכמיה של המעי (IR) פציעה הוא חשב להיות קשורה לשינויים החיידקים במעיים כמו גם את הייצור של מינים החמצן מגיב וציטוקינים דלקתיים וכמוקינים 1,4-6. זה מוביל הפעלה של שניהםנייט ומנגנוני החיסון אדפטיבית אשר לקדם 1,7,8 פגיעה דלקת רקמות. במודלים של בעלי חיים הם קריטיים להבנת המנגנונים של פגיעה IR, מאחר שהם מאפשרים gain- קל ניסויים גנטיים הפסד של פונקציה. במודלים של בעלי חיים כמה IR פותחו הכוללים חסימה של כלי דם מלא, איסכמיה זרימה נמוכה, ו מפולח חסימה של כלי דם (שהעיקריים בם פורטו סקירה מקיפה אחרונה 9). איסכמיה מעיים הנגרמת על ידי חסימה של כלי דם מלא של עורק mesenteric המעולה (SMA) היא מודל קל נפוץ של IR בחיות גדולות ומכרסמים 9-11. עם זאת, באזורים שונים של המעי יש רגישות שונה על פשע. בנוסף, המגוון הרחב של חומרי הרדמה, משככי כאבים, טכניקות חסימה בעורק, כמו גם חוסר עקביות משך פגיעת איסכמית תוצאת התאוששות מעלות משתנות של פציעת בלבול הבנתנו את הביולוגיה של IR ברחבי studie המרובהים. טבלה 1 מדגים סתירות אלה במחקרים IR בעכברים. החסרון הגדול ביותר מהשימוש פעמים איסכמי קצרות (30-45 דקות) הוא מיקוד החלון של התאוששות שעליו הבדלים להבחין בין מקרים ובקרות ניתן לצפות. פציעה קלה עד האפיתל עשויה להיפתר שעה לאחר רה-פרפוזיה, ולכן התמחתה מדדי פתולוגיים שיידרשו כדי למצוא הבדלי שבת אפיתל. לעומת זאת, נזק מוגזם, כפי שניתן לראות על ידי 100 דקות של פגיעה איסכמית עלול לגרום denudement שלם של האפיתל, שם השבת כבר אי אפשר, להגדיל את שיעור התמותה, וזמן ההתאוששות. לכן, כאן אנו מתארים את ההליך המפורט של IR מעיים בעכברים שתוצאתה הפגיעה לשחזור ללא תמותה לעודד סטנדרטיזציה של טכניקה זו על פני השדה שלנו. מודל זה של פציעת IR במעי יכול להיות מנוצל כדי לחקור את המנגנונים התאיים ומולקולריים של פציעה והתחדשות.

<table><tbody><tr><td>כרית מחוממת</td><td>Sunbeam</td><td>E12107-819</td><td>אלטרנטיבה: Braintree Scientific כרית מחוממת</td></tr><tr><td>מכונת הרדמה למחקר שולחני</td><td>Vasco</td><td>UCAP 0001-0000171</td><td>אלטרנטיבה: Parkland Scientific, חרוט אף</td></tr><tr><td></td><td>V3000PS Parkland Scientific</td><td>ARES500</td><td></td></tr><tr><td>מיכל נבלות ומחסנית חלופית</td><td>Parkland Scientific</td><td>80000, 80120</td><td></td></tr><tr><td>ניתוח תא אינדוקציה</td><td></td><td>V711802</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Piramal Healthcare</td><td>NDC 66794-013-10</td><td>חומר מבוקר, צור קשר עם</td></tr><tr><td>קוצץ בעלי חיים IACUC&nbsp;</td><td>אוסטר&nbsp;</td><td>אוסטר גולדן A5 078005-050-003</td><td></td></tr><tr><td>משחת עיניים</td><td>וובסטר</td><td>8804604</td><td></td></tr><tr><td>בופרנורפין</td><td>מק'קסון</td><td>562766</td><td>חומר מבוקר, צור קשר עם IACUC</td></tr><tr><td>Ketaset (קטמין הידרוכלוריד)</td><td>פייזר</td><td>NADA 45-290</td><td>חומר מבוקר, צור קשר עם IACUC</td></tr><tr><td>טיפים לכותנה</td><td>מוצרים רפואיים פוריטניים</td><td>806-WC</td><td>חיטוי לפני השימוש</td></tr><tr><td></td><td>Betadine Purdue Products</td><td>67618-150-17</td> תמיסת מלח סטרילית <td>10% פובידון-יוד</td></tr><tr><td></td><td>אספן</td><td>46066-807-60</td><td>התאם לטמפרטורת החדר לפני השימוש</td></tr><tr><td>מדחום מכרסמים IR</td><td>BIOSEB</td><td>BIO-IRB153</td><td></td></tr><tr><td>קליפסים מיקרו וסקולריים, 70 גרם</td><td>Roboz Surgical&nbsp;</td><td>אלטרנטיבה RS5424, RS5435</td><td>: WPI 14121, לחסימת SMA</td></tr><tr><td>קליפסים מיקרו וסקולריים, 40 גרם</td><td>Roboz Surgical&nbsp;</td><td>RS6472</td><td>חלופה: WPI 14120, לחסימת כלי דם צדדיים</td></tr><tr><td>קליפ המריח מלקחיים</td><td>World Precision Instruments</td><td>14189</td><td>חלופה: Roboz #RS-5410 או&nbsp; #RS-5440</td></tr><tr><td>Gill's 3 hematoxylin</td><td>Thermo Scientific</td><td>14-390-17</td><td></td></tr><tr><td>סיכות כירורגיות, רפלקס 9 מ"מ</td><td>Cell Point Scientific</td><td>201-1000</td><td></td></tr><tr><td>אפליקציית Autoclip</td><td>Beckton Dickinson</td><td>427630</td><td></td></tr><tr><td>כרית קצף Byopsy</td><td>Simport</td><td>M476-1</td><td></td></tr><tr><td>קלטת רקמות</td><td>Fisher Healthcare</td><td>15182701A</td><td>מכסה משולב Histosette II ובסיס</td></tr><tr><td>10% פורמלין חוצץ Fisher</td><td>Scientific</td><td>245-684</td><td></td></tr><tr><td>מספריים לקשתית כירורגית</td><td>World Precision Instruments</td><td>501263-G SC</td><td>אלטרנטיבה: Roboz RS6816</td></tr><tr><td>מספריים הפעלה</td><td>מכשירי דיוק עולמיים</td><td>501219-G</td><td>אלטרנטיבה: Roboz RS6814</td></tr><tr><td>מלקחיים חבישה</td><td>Roboz כירורגי&nbsp;</td><td>RS-5228, RS-8122</td><td>אלטרנטיבה: World Precision Instruments 1519-G</td></tr><tr><td>Heparin, ללא אנדוטוקסין, 300 יחידות USP / בקבוקון, 50 מ"ג</td><td>Sigma</td><td>2106</td><td></td></tr><tr><td>קליפ פצע רפלקס להסרת מלקחיים</td><td>Roboz Surgical&nbsp;</td><td>אלטרנטיבה RS-9263</td><td>: מכשירי דיוק עולמיים: עכברי 500347</td></tr><tr><td>C57BL/6J&nbsp;</td><td>Jackson Laboratory</td><td>Stock No 0664</td><td></td></tr><tr><td>Telfa חבישות לא דביקות, 3 x 4, סטריליות</td><td>Coviden</td><td>1050</td><td></td></tr><tr><td>פישרברנד העברת פישר</td><td>סיינטיפיק</td><td>13-711-5AM</td><td>השתמש בצנרת כדי להוסיף מי מלח</td></tr></tbody></table>

דגם murine של פגיעת המעיים איסכמיה reperfusion

Murine Model of Intestinal Ischemia-reperfusion Injury

איסכמיה מעיים הוא מצב מסכן חיים הקשורים מגוון רחב של מצבים רפואיים, כולל טרשת עורקים, פקקת, תת לחץ דם, דלקת מעי נמקית, השתלת מעי, טראומה ודלקת כרונית. פציעה איסכמיה-רה-פרפוזיה מעיים (IR) היא תוצאה של איסכמיה mesenteric חריפה, הנגרמת על ידי זרימת דם מספקת דרך כלי mesenteric, וגרמו נזק מעיים. Reperfusion איסכמיה הבאים יכולים להחמיר נזק של המעי. המנגנונים של פגיעת IR הם מורכבים לא ידועים ולא מובנים. לכן, במודלים של בעלי חיים קטנים ניסיוניים הם קריטיים להבנת הפתופיזיולוגיה של פציעת IR לבין ההתפתחות של טיפולים חדשניים. כאן אנו מתארים במודל עכבר של פגיעה IR חריפה במעי המספק פגיעה לשחזור של המעי הדק ללא תמותה. זו מושגת על ידי איסכמיה התרמה באזור של מעי דיסטלי ידי זמנית occluding ענפים בטחונות הפריפריה הטרמינל של עורק mesenteric המעולה במשך 60 דקות באמצעות קטעי כלי דם. Reperfusion עבור שעה 1, או 2 שעות לאחר תוצאות פגיעות פגיע לשחזור של המעי נבדק על ידי ניתוח היסטולוגית. עמדה הנכונה של קליפים כלי הדם היא קריטית עבור ההליך. לכן את הסרטון ממחיש באופן חזותי מפורט צעד אחר צעד תיאור של הטכניקה הזו. מודל זה של פציעת IR במעי יכול להיות מנוצל כדי לחקור את המנגנונים התאיים ומולקולריים של פציעה והתחדשות.

אנחנו מותאמים פרוטוקול הניסוי של ניתוח IR להשיג פגיעה לשחזור IR מושרה של המעי בעכברים. נציג תוצאות מודגמות בסעיף זה. איור 1 מציג דוגמאות של עמדת קליפים כלי דם כדי לגרום איסכמיה של המעי העקום. חיצים שחורים להראות עמדת קליפים העיקרי הגורם לחסימה סניפים ממדרגה ראשונה של העורק mesenteric מעולה. חצים ירוקים להציג את המיקום של קליפים נוס...

כאן אנו מתארים את ההליך המפורט של reperfusion איסכמיה מעיים בעכברים שתוצאתה הפגיעה לשחזור ללא תמותה לעודד סטנדרטיזציה של טכניקה זו על פני השדה. מודל זה של פגיעת איסכמיה-רה-פרפוזיה במעי יכול להיות מנוצל כדי לחקור את המנגנונים התאיים ומולקולריים של פציעה והתחדשות.

דגם Murine של פגיעת המעיים איסכמיה reperfusion

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, ...

המטרה הכללית של פרוצדורה זו היא להוביל פגיעה הניתנת לשחזור שנגרמה מרפרפוזיה של איסכמיה במעי (Intestinal Ischemia Reperfusion Induced Injury) באזור ה-distal ileum של העכבר, על ידי חסימה זמנית של הענפים הקולטרליים הפריפריים והטרמינליים של העורק המזנטרי העליון (superior mesenteric artery). שיטה זו יכולה לסייע בהבנת שיטות בסיסיות בתחומי הגסטרואנטרולוגיה והאימונולוגיה, כגון הבנת המנגנונים של פגיעה והתחדשות. יתרונה של טכניקה זו הוא שניתן לבצעה על ידי כל אדם מיומן במעבדה.יתרון נוסף הוא שההליך עצמו אינו גורם לתמותה של העכברים. הכינו את אזור הניתוח כפי שפורט בפרוטוקול הכתוב. לאחר מכן, השתמשו במספריים כירורגיים כדי לבצע לפרוטומיה בקו האמצע באורך של שלושה עד חמישה סנטימטרים.לאחר מכן, כסו את אזור הניתוח בפד סטרילי שאינו נדבק, שהורטב בתמיסת סלין. בדלו את המעי העיוור (cecum) ואת המעי העקום (ilium), והשתמשו במקלונים מכותנה טבולים בסלין כדי לחשוף את העורק המזנטרי העליון (superior mesenteric artery). לאחר מכן, כדי להקל על הנחת התפסן, השתמשו בפינצטת מתיחה כדי להרים בעדינות את המעי, והשתמשו במספרי איריס כדי לחתוך את המזנטרי משני צדי העורק המזנטרי העליון במיקום הרצוי להנחת התפסן.תוך החזקת המעי בעמדה מורמת, לחצו בעדינות עם היד השנייה על ידית מפעיל קליפסים כדי לפתוח את הלסנאות של קליפס כלי דם מיקרו-וסקו

murine-model-of-intestinal-ischemia-reperfusion-injury

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

טראומה ניתוחית גורם לתגובה דלקתית. ציטוקינים ligands אנדוגניים ידועים לווסת את גודל האוטם בשריר הלב בעקבות איסכמיה ו reperfusion. אנו מציגים שונה סגור החזה מודל של איסכמיה reperfusion Murine באמצעות משקולות תלויות כדי למזער את ההשפעות של פתיחת בית החזה.

דגם Murine סגור החזה של איסכמיה של שריר הלב reperfusion

אנחנו מציגים את שיטה כירורגית כדי לגרום לאיסכמיה / reperfusion הניסיוני (I / R) פציעה כדי לדמות אוטם שריר הלב (MI) בעכברי מודל, המאפשר ליותר בהירות במיצוב של קשירה בעורק השמאלי הקדמי יורד (LAD) כדי להגדיל את שחזור ניסויים MI בעכברים.

דגם של שריר הלב איסכמיה reperfusion הפגיעה Murine באמצעות קשירת של העורק השמאלי קדמי יורד

פרוטוקול זה יאפשר לקוראים בהצלחה לבסס מודל חזירי של איסכמיה מעיים סגמנטלי, לאחר מכן לבודד, תרבות מעיים בתאי גזע לצורך המחקר של אפיתל תיקון בעקבות פגיעה.

בידוד תאי המעי ותרבות במודל של חזירי של סגמנטלי איסכמיה במעיים קטן

דגם העכבר של איסכמיה מוחית-פגיעה reperfusion הוקמה כדי לחקור הפתופיזיולוגיה של שבץ. אנו יש מאתרים ומפסיקים את עורק המוח התיכון נכון ולא נכון עורק תרדמני, להחזיר את זרימת הדם לאחר 10 או 40 דקות של איסכמיה.

שתיים, כלי סגר דגם העכבר של איסכמיה מוחית-פגיעה reperfusion

כאן אנו מתארים הליך כירורגי המראה כיצד להשיג הארכה קבועה של עורק שמאלי הקדמי כלילית בעכברים. מודל זה הוא בעל רלוונטיות גבוהה לחקור את הפתופסולוגיה של אוטם שריר הלב ואת התהליכים הביולוגיים המקביל.

מודל אוטם שריר הלב באמצעות הארכה קבועה של עורק שמאלי קדמי כלילי יורד

אנו מתארים בפירוט קלינית המעי הגס הרלבנטי סרטן הכבד גרורות (CRLM) הגידול מודל ההשפעה של איסכמיה של הכבד reperfusion (I/R) גידול גרורות. מודל זה יכול לעזור להבין טוב יותר את המנגנונים בבסיס קידום הניתוח המושרה של צמיחה גרורתית הכבד.

מודל מורנה של גידולים גרורות בכבד בהגדרה של איסכמיה Reperfusion פציעה

פגיעה באיסכמיה-רפרפוזיה כלייתית קשורה לתחלואה ותמותה גבוהה בחולים מאושפזים. כאן אנו מציגים מודל עכבר פשוט ויעיל של פגיעה חד-צדדית באיסכמיה-רפרפוזיה של הכליה ומספקים סקירה רציפה של שינויים פתולוגיים מייצגים שנצפו בכליה.

מודל עכבר יעיל של פגיעה חד-צדדית באיסכמיה-רפרפוזיה של הכליה

כאן אנו מתארים שיטה פשוטה וניתנת לשחזור שיכולה לגרום לאוטם שריר הלב או לפגיעה באיסכמיה של שריר הלב בעכברים על ידי קשירה מדויקת של העורק הכלילי היורד הקדמי השמאלי באמצעות מיקרומניפולציה.

השראת אוטם שריר הלב ופגיעה באיסכמיה של שריר הלב בעכברים

אנו מתארים כיצד ליצור מודל כירורגי נפוץ של פגיעה איסכמיה רפרפוזיה במעיים (IRI) במכרסמים. ההליך כרוך חסימה של העורק mesenteric העליון ואחריו שחזור זרימת הדם. מודל זה שימושי למחקרים הבוחנים גורמים חוסמים של IRI במעיים הן ברפואה וטרינרית והן ברפואה אנושית.

מודל מכרסם של פגיעה איסכמיה-רפרפוזיה במעי באמצעות חסימה של העורק המזנטרי העליון

הפרוטוקול מתווה שיטה ישימה, אמינה וניתנת לשחזור של הידוק הילארי ריאתי שמאלי, שניתן להשתמש בו כדי לחקור פגיעה איסכמיה-רפרפוזיה ריאתית במודלים של עכברים.

מודל מהדק הילארי ריאתי שמאלי של פגיעה באיסכמיה ריאתית

פרוטוקול זה מציג שיטה לגרימת פגיעה באיסכמיה-רפרפוזיה מזנטרית ולהדמיית מלכודות נויטרופילים חוץ-תאיות (NETs) בוורידים מזנטריים באמצעות מיקרוסקופ תוך-חיוני. זרימת הדם בעורק המזנטרי העליון הוגבלה למשך שעה אחת, ואחריה רפרפוזיה, המאפשרת כימות ישיר של הידבקות לויקוציטים ו- NETosis.

הדמיה של מלכודות חוץ-תאיות נויטרופילים בוורידים מזנטריים לאחר פגיעה באיסכמיה-רפרפוזיה מזנטרית באמצעות מיקרוסקופ תוך חיוני

למדו שיטה לאיסכמיה-ריפרפוזיה במעי עכברים באמצעות חסימת עורק מזנטרי עליון. טכניקה זו מאפשרת חקר מנגנוני פגיעה והתחדשות רקמתיים ללא תמותה בניסוי.

דגם Murine של פגיעת המעיים איסכמיה reperfusion

גלה סרטונים נוספים