Name: הקמת סרטן גזע תא תרבויות מן האדם הקונבנציונלי אוסטאוסרקומה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-10-14T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 25 s
Description: למדו שיטה להפרדת תאי גזע סרטניים מאוסטאוסרקומה אנושית באמצעות מבחן יצירת הספירות. הטכניקה מאפשרת חקר תרפיות ממוקדות נגד גידולים מוצקים ומסייעת להבנת ביולוגיית הגזע הסרטני.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

מחקר זה נתמך על ידי הצעת מענק ITT (Istituto Toscano Tumori) 2010.

<ol><li>Reddick, R. L., Michelitch, H. J., Levine, A. M., Triche, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteogenic+sarcoma%3A+a+study+of+the+ultrastructure%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer%22%5BJournal%5D)">Osteogenic sarcoma: a study of the ultrastructure.</a> Cancer. 45 (1), 64-71 (1980).</li>
<li>Gatta, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Childhood+cancer+survival+trends+in+Europe%3A+a+EUROCARE+Working+Group+study%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Oncol%22%5BJournal%5D)">Childhood cancer survival trends in Europe: a EUROCARE Working Group study.</a> J. Clin. Oncol. 23 (16), 3742-3751 (2005).</li>
<li>Olstad, O. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+heterogeneity+in+human+osteosarcoma+demonstrated+by+enriched+mRNAs+isolated+by+directional+tag+PCR+subtraction+cloning%5BTitle%5D)+AND+%22Anticancer.+Res%22%5BJournal%5D)">Molecular heterogeneity in human osteosarcoma demonstrated by enriched mRNAs isolated by directional tag PCR subtraction cloning.</a> Anticancer. Res. 23 (3B), 2201-2216 (2003).</li>
<li>Geller, D. S., Gorlick, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteosarcoma%3A+a+review+of+diagnosis%2C+management%2C+and+treatment+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Adv+Hematol+Oncol%22%5BJournal%5D)">Osteosarcoma: a review of diagnosis, management, and treatment strategies.</a> Clin Adv Hematol Oncol. 8 (10), 705-718 (2010).</li>
<li>Tang, N., Song, W. X., Luo, J., Haydon, R. C., He, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteosarcoma+development+and+stem+cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Orthop.+Relat.+Res%22%5BJournal%5D)">Osteosarcoma development and stem cell differentiation.</a> Clin. Orthop. Relat. Res. 466 (9), 2114-2130 (2008).</li>
<li>Kempf-Bielack, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteosarcoma+relapse+after+combined+modality+therapy%3A+an+analysis+of+unselected+patients+in+the+Cooperative+Osteosarcoma+Study+Group+%28COSS%29%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Oncol%22%5BJournal%5D)">Osteosarcoma relapse after combined modality therapy: an analysis of unselected patients in the Cooperative Osteosarcoma Study Group (COSS).</a> J. Clin. Oncol. 23 (3), 559-568 (2005).</li>
<li>Meyers, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteosarcoma%3A+a+randomized%2C+prospective+trial+of+the+addition+of+ifosfamide+and%2For+muramyl+tripeptide+to+cisplatin%2C+doxorubicin%2C+and+high-dose+methotrexate%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Oncol%22%5BJournal%5D)">Osteosarcoma: a randomized, prospective trial of the addition of ifosfamide and/or muramyl tripeptide to cisplatin, doxorubicin, and high-dose methotrexate.</a> J. Clin. Oncol. 23 (9), 2004-2011 (2005).</li>
<li>Gorlick, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biology+of+childhood+osteogenic+sarcoma+and+potential+targets+for+therapeutic+development%3A+meeting+summary%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Biology of childhood osteogenic sarcoma and potential targets for therapeutic development: meeting summary.</a> Clin. Cancer Res. 9 (15), 5442-5453 (2003).</li>
<li>Hayden, J. B., Hoang, B. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteosarcoma%3A+basic+science+and+clinical+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Orthop.+Clin.+North+Am%22%5BJournal%5D)">Osteosarcoma: basic science and clinical implications.</a> Orthop. Clin. North Am. 37 (1), 1-7 (2006).</li>
<li>Thomas, D., Kansara, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epigenetic+modifications+in+osteogenic+differentiation+and+transformation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell.+Biochem%22%5BJournal%5D)">Epigenetic modifications in osteogenic differentiation and transformation.</a> J. Cell. Biochem. 98 (4), 757-769 (2006).</li>
<li>Araki, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Involvement+of+the+retinoblastoma+gene+in+primary+osteosarcomas+and+other+bone+and+soft-tissue+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Orthop.+Relat.+Res%22%5BJournal%5D)">Involvement of the retinoblastoma gene in primary osteosarcomas and other bone and soft-tissue tumors.</a> Clin. Orthop. Relat. Res. 270 (270), 271-277 (1991).</li>
<li>Chou, A. J., Gorlick, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemotherapy+resistance+in+osteosarcoma%3A+current+challenges+and+future+directions%5BTitle%5D)+AND+%22Expert.+Rev.+Anticancer+Ther%22%5BJournal%5D)">Chemotherapy resistance in osteosarcoma: current challenges and future directions.</a> Expert. Rev. Anticancer Ther. 6 (7), 1075-1085 (2006).</li>
<li>Arndt, C. A. S., Crist, W. M. Common musculoskeletal tumorsof childhood and adolescence. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aArndt%2C+CAS+%22N.+Engl.+J.+Med%22">N. Engl. J. Med</a>. 341 (5), 342-352 (1999).</li>
<li>Longhi, A., Errani, C., De Paolis, M., Mercuri, M., Bacci, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+bone+osteosarcoma+in+the+pediatric+age%3A+state+of+the+art%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer.+Treat.+Rev%22%5BJournal%5D)">Primary bone osteosarcoma in the pediatric age: state of the art.</a> Cancer. Treat. Rev. 32 (6), 423-436 (2006).</li>
<li>Bacci, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+outcome+for+patients+with+nonmetastatic+osteosarcoma+of+the+extremity+treated+at+the+istituto+ortopedico+rizzoli+according+to+the+istituto+ortopedico+rizzoli%2Fosteosarcoma-2+protocol%3A+an+updated+report%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Oncol%22%5BJournal%5D)">Long-term outcome for patients with nonmetastatic osteosarcoma of the extremity treated at the istituto ortopedico rizzoli according to the istituto ortopedico rizzoli/osteosarcoma-2 protocol: an updated report.</a> J. Clin. Oncol. 18 (24), 4016-4027 (2000).</li>
<li>Clarke, M. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+stem+cells-perspectives+on+current+status+and+future+directions%3A+AACR+workshop+on+cancer+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer.+Res%22%5BJournal%5D)">Cancer stem cells-perspectives on current status and future directions: AACR workshop on cancer stem cells.</a> Cancer. Res. 66 (19), 9339-9344 (2006).</li>
<li>Lapidot, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+cell+initiating+human+acute+myeloid+leukaemia+after+transplantation+into+SCID+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A cell initiating human acute myeloid leukaemia after transplantation into SCID mice.</a> Nature. 367 (6464), 645-648 (1994).</li>
<li>Bonnet, D., Dick, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+acute+myeloid+leukemia+is+organized+as+a+hierarchy+that+originates+from+a+primitive+hematopoietic+cell%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">Human acute myeloid leukemia is organized as a hierarchy that originates from a primitive hematopoietic cell.</a> Nat. Med. 3 (7), 730-737 (1997).</li>
<li>Visvader, J. E., Lindeman, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+stem+cells+in+solid+tumors%3A+accumulating+evidence+and+unresolved+questions%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Cancer stem cells in solid tumors: accumulating evidence and unresolved questions.</a> Nat. Rev. Cancer. 8 (10), 755-768 (2008).</li>
<li>Bapat, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+of+cancer+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Semin.+Cancer+Biol%22%5BJournal%5D)">Evolution of cancer stem cells.</a> Semin. Cancer Biol. 17 (3), 204-213 (2007).</li>
<li>Rubio, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spontaneous+human+adult+stem+cell+transformation%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer.+Res%22%5BJournal%5D)">Spontaneous human adult stem cell transformation.</a> Cancer. Res. 65 (8), 3035-3039 (2005).</li>
<li>Burns, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumorigenic+heterogeneity+in+cancer+stem+cells+evolved+from+long-term+cultures+of+telomerase-immortalized+human+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer.+Res%22%5BJournal%5D)">Tumorigenic heterogeneity in cancer stem cells evolved from long-term cultures of telomerase-immortalized human mesenchymal stem cells.</a> Cancer. Res. 65 (8), 3126-3135 (2005).</li>
<li>Zhang, M., Rosen, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cells+in+the+etiology+and+treatment+of+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Genet.+Dev%22%5BJournal%5D)">Stem cells in the etiology and treatment of cancer.</a> Curr. Opin. Genet. Dev. 16 (1), 60-64 (2006).</li>
<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+that+transgenes+encoding+components+of+the+Wnt+signaling+pathway+preferentially+induce+mammary+cancers+from+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl+Acad.+Sci.+USA%22%5BJournal%5D)">Evidence that transgenes encoding components of the Wnt signaling pathway preferentially induce mammary cancers from progenitor cells.</a> Proc. Natl Acad. Sci. USA. 100 (26), 15853-15858 (2003).</li>
<li>Sell, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+origin+of+cancer%3A+dedifferentiation+or+stem+cell+maturation+arrest%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Health+Perspect%22%5BJournal%5D)">Cellular origin of cancer: dedifferentiation or stem cell maturation arrest?</a> Environ Health Perspect. 101 (Suppl 5), 15-26 (1993).</li>
<li>Wernig, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+reprogramming+of+fibroblasts+into+a+pluripotent+ES-cell-like+state%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">In vitro reprogramming of fibroblasts into a pluripotent ES-cell-like state.</a> Nature. 448 (7151), 318-324 (2007).</li>
<li>Niwa, H., Miyazaki, J., Smith, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+expression+of+oct-3%2F4+defines+differentiation%2C+dedifferentiation+or+self-renewal+of+ES+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Genet%22%5BJournal%5D)">Quantitative expression of oct-3/4 defines differentiation, dedifferentiation or self-renewal of ES cells.</a> Nat. Genet. 24 (4), 372-376 (2000).</li>
<li>Hochedlinger, K., Jaenisch, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nuclear+reprogramming+and+pluripotency%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Nuclear reprogramming and pluripotency.</a> Nature. 441 (7097), 1061-1067 (2006).</li>
<li>Dean, M., Fojo, T., Bates, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+stem+cells+and+drug+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Tumor stem cells and drug resistance.</a> Nat. Rev. Cancer. 5 (4), 275-284 (2005).</li>
<li>Ma, S., Lee, T. K., Zheng, B. J., Chan, K. W., Guan, X. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD133%2B+HCC+cancer+stem+cells+confer+chemoresistance+by+preferential+expression+of+the+Akt%2FPKB+survival+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">CD133+ HCC cancer stem cells confer chemoresistance by preferential expression of the Akt/PKB survival pathway.</a> Oncogene. 27 (12), 1749-1758 (2008).</li>
<li>Wu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Side+population+cells+isolated+from+mesenchymal+neoplasms+have+tumor+initiating+potential%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer.+Res%22%5BJournal%5D)">Side population cells isolated from mesenchymal neoplasms have tumor initiating potential.</a> Cancer. Res. 67 (17), 8216-8222 (2007).</li>
<li>Ma, I., Allan, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+human+aldehyde+dehydrogenase+in+normal+and+cancer+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem.+Cell.+Rev%22%5BJournal%5D)">The role of human aldehyde dehydrogenase in normal and cancer stem cells.</a> Stem. Cell. Rev. 7 (2), 292-306 (2011).</li>
<li>Awad, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+ALDH+activity+identifies+chemotherapy-resistant+Ewing%27s+sarcoma+stem+cells+that+retain+sensitivity+to+EWS-FLI1+inhibition%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">High ALDH activity identifies chemotherapy-resistant Ewing's sarcoma stem cells that retain sensitivity to EWS-FLI1 inhibition.</a> PLoS One. 5 (11), e13943(2010).</li>
<li>Fujii, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sphere-forming+stem-like+cell+populations+with+drug+resistance+in+human+sarcoma+cell+lines%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Oncol%22%5BJournal%5D)">Sphere-forming stem-like cell populations with drug resistance in human sarcoma cell lines.</a> Int. J. Oncol. 34 (5), 1381-1386 (2009).</li>
<li>Di Fiore, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+and+molecular+characterization+of+the+human+osteosarcoma+3AB-OS+cancer+stem+cell+line%3A+a+possible+model+for+studying+osteosarcoma+origin+and+stemness%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Genetic and molecular characterization of the human osteosarcoma 3AB-OS cancer stem cell line: a possible model for studying osteosarcoma origin and stemness.</a> J. Cell. Physiol. 228 (6), 1189-1201 (2013).</li>
<li>Reynolds, B. A., Tetzlaff, W., Weiss, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+multipotent+EGF-responsive+striatal+embryonicprogenitor+cell+produces+neurons+and+astrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">A multipotent EGF-responsive striatal embryonicprogenitor cell produces neurons and astrocytes.</a> J. Neurosci. 12 (11), 4565-4574 (1992).</li>
<li>Reynolds, B. A., Weiss, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+neurons+and+astrocytes+from+isolated+cells+of+the+adult+mammalian+central+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Generation of neurons and astrocytes from isolated cells of the adult mammalian central nervous system.</a> Science. 255 (5052), 1707-1710 (1992).</li>
<li>Gibbs, C. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem-like+cells+in+bone+sarcomas%3A+implications+for+tumorigenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Neoplasia%22%5BJournal%5D)">Stem-like cells in bone sarcomas: implications for tumorigenesis.</a> Neoplasia. 7 (11), 967-976 (2005).</li>
<li>Beccari, N., Mazzi, V. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBeccari%2C+N+%22Manuale+di+tecnica+microscopic.+Casa+Editrice+Dr.+Francesco+Vallardi+Societ%C3%A0+Editrice+Libraria%22">Manuale di tecnica microscopic. Casa Editrice Dr. Francesco Vallardi Società Editrice Libraria</a>. , 99-100 (1966).</li>
<li>Majumdar, M. K., Thiede, M. A., Mosca, J. D., Moorman, M., Gerson, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenotypic+and+functional+comparison+of+cultures+of+marrow-derived+mesenchymal+stem+cells+%28MSCs%29+and+stromal+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Phenotypic and functional comparison of cultures of marrow-derived mesenchymal stem cells (MSCs) and stromal cells.</a> J. Cell. Physiol. 176 (1), 57-66 (1998).</li>
<li>Tirino, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+primary+bone+sarcomas+contain+CD133%2B+cancer+stem+cells+displaying+high+tumorigenicity+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Human primary bone sarcomas contain CD133+ cancer stem cells displaying high tumorigenicity in vivo.</a> FASEB J. 25 (6), 2022-2030 (2011).</li>
<li>Tirino, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+stem+cells+in+solid+tumors%3A+an+overview+and+new+approaches+for+their+isolation+and+characterization%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Cancer stem cells in solid tumors: an overview and new approaches for their isolation and characterization.</a> FASEB J. 27 (1), 13-24 (2013).</li>
<li>Martins-Neves, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+implications+of+an+enriched+cancer+stem-like+cell+population+in+a+human+osteosarcoma+cell+line%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Cancer%22%5BJournal%5D)">Therapeutic implications of an enriched cancer stem-like cell population in a human osteosarcoma cell line.</a> BMC Cancer. 12 (1), 139(2012).</li>
<li>Tang, Q. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enrichment+of+osteosarcoma+stem+cells+by+chemotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Chin.+J.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Enrichment of osteosarcoma stem cells by chemotherapy.</a> Chin. J. Cancer. 30 (6), 426-432 (2011).</li>
</ol>

המחברים מצהירים שאין להם אינטרס כלכלי מתחרה.

יש CSCS מספר מאפיינים המאפשרים זיהוי של קבוצת משנה הסלולר המסוים הזה את עיקר הגידול. על סמך מאפיינים אלה, כגון עמידות נרכשת ציטוטוקסיות תרופות כימותרפיות עבור ביטוי יתר של מובילי בזרימת multidrug קלטת מחייב ATP 28, 32, 33, או על הגברת הביטוי של הביטוי של אנזימים לסילוק רעלים כמו 32 ALDH, על מנת לתת ביטוי של סמן משטח מסוים, כגון CD133, CD44, CD34, CD90, ואחרים 30, 34, 35, 41, שיטות שונות כדי לבודד CSCS פותח 42-44. אחת מן הטכניקות הללו היא assay היווצרות הכדור, אשר מבוססת על היכולת של CSCS לגדול בתנאים שאינם חסידים. היכולת של תאי גזע רקמות CSCS לגבש התחומים תוארה לראשונה במחקרים על זיהוי של בתאי גזע עצביים ידי ריינולדס et al. 37. בהמשך לכך, גיבס et al. 38 אותנועורך מחקרים אלה כדי להתחיל לבודד CSCS מגידולים מוצקים, בפרט, מן סרקומות עצם. החלטנו להשתמש בשיטת assay היווצרות כדור המאוירת על ידי גבסתי et al. לבודד CSCS שורות תאי OSA המתקבלות ביופסיות OS קונבנציונליות. מתאמנים בשיטה המקורית כדי לשפר את התוצאות של assay זה ולהקל השחזור שלה עבור שורות תאי סרטן אחרות. בהתייחס להקמת assay היווצרות כדור, אנו מאשרים כי ציפוי 40,000 תאים / גם הוא תרגול טוב לשמירה על תאים בבידוד בתחילת assay. הטריק הזה הוא מאוד חשוב כדי למנוע את האפשרות כי המושבות הכדוריות מקורן צבירה הסלולר ולא מן הקיבולת המסוימת ובלעדית של יחיד CSC לגדול בתנאים שאינם חסידים ויוצרת מושבה כדורית. יכולת זו היא נקודה קריטית במיוחד של assay זה. אנחנו גם אשרנו כי כדי לקבל שיעור טוב של היווצרות כדור, זה מספיק כדי לרענן aliquots של גורמי גדילה כל 3 ד ולא כל יום כמתואר השיטה המקורית. במחקר זה, אנו גם הקמנו בהרחבה תארנו שיטה טובה לבידוד המושבות כדור שנוצרו כאשר בתרבית בתנאים שאינם חסידים. שלב זה הוא קריטי assay זה, כי זה חשוב מאוד לנסות לבודד כמה שיותר כדורים ככל האפשר כי נוצרות בכל טוב מבלי לפגוע בהם. כמו כן, חשוב לבודד רק ספירות ולא התאים הבודדים, אשר יכול לרחף למשך assay. כדי להתגבר על נקודות קריטיות אלה, פתחנו שיטת בידוד מסוימת, אשר, כפי שפורט לעיל, נתנה תוצאות טובות עבור בידוד CSC. כמובן, יש את האפשרות כי לא כל התחומים שהיוו ניתן לשחזר, אך אחוז ההפסד הוא נמוך מאוד. אכן, יש לנו גם את האפשרות להשתמש במסנן עם 40 מיקרומטר הנקבוביות לבודד תחומי לאחר שהן הופכות גדולות (טופסאד כ 100 - 200 תאים). בידוד זה מפסיק היווצרות כדור אך מאפשר תאים בודדים, חלק שאריות methylcellulose, והן במישור הקטן להיות מסוננים. חיסול זו מבוצע על ידי סינון יסודי כמתואר בפרוטוקול. יתר על כן, הבחירה של המושבות כדוריות הגדולות דרך 40 מיקרומטר הרשת עם לאובדן המושבות הכדוריות הקטנות מאפשרת לבחור את CSCS עם הקיבולת הגבוהה ביותר ליצור מושבות כדור עם stemness יותר. כל השינויים הללו בוצעו כדי לשפר את assay וכדי לסייע לחוקרים ללמוד CSCS להבין ולהתרבות השלב הקריטי ביותר של השיטה המקורית של assay היווצרות כדור. בין המחקרים לגבי בשיטות במבחנה CSCS לבודד, המחקר הנוכחי הייתה להראות כיצד מותאם זה assay היווצרות כדור יכול להיות שיטה טובה לבידוד CSCS משורות תאים OSA. העיבודים לשיטה המקורית ואת טכניקת הבידוד המפורטת תארו לשפר את יעילותו. תוך זמן קצר, מספר לא מבוטל של CSCS ניתן להשיג ומשמש מספר ניסויים. לכן, אפשר לאשר את פנוטיפים הגבעולי במהירות, בפרט, כדי ללמוד את הפנוטיפ הגבעולי הכפול מאפיינת OS-CSCS. לפיכך, assay שונה זה יכול להיות טכניקה טובה לבידוד CSCS ולומד ביולוגיה שלהם. בעתיד, בשיטה זו, עם עיבודים נוספים, עשויה לשמש גם כדי לבודד CSCS מתוך שורות תאי סרטן סופי אחרות שהושגו באמצעות ביופסיות של גידולים מוצקים נדירים. האפשרות לבודד CSCS מגידולים מוצקים נדירים, כגון OS, לא מתיר שיפור של מחקרים על סרטן הספציפי הזה, אבל גם מרחיב מחקרים של סוגים שונים של סרטן לפתח שיטות טובות יותר עבור הבידוד שלהם מחקרים עתידיים של הביולוגיה של משנה הסלולר החשובה הזו. לכן, כפי שאנועשו במחקר זה, חשוב לשפר את השיטות של בידוד CSC באמצעות לימוד ביולוגית CSC, עם המטרה הסופית של מציאת מטרות מולקולריות ופיתוח טיפול נגד סרטן ספציפי מאוד מכוון נגד משנה הסלולר המסוים הזה, שהוא כנראה אחראי התחזוקה של הגידול הראשוני, התפתחות הישנותו, ואת המקור של גרורות בכמה איברים. המחקר של הביולוגיה CSC חשוב גם למציאת טיפולים שיכולים להיות נוקב בריפוי סרטן, כגון OS, אשר שיעור ההישרדות לאחר טיפול neoadjuvant נשאר עני מאוד.

סרקומות הן קבוצה הטרוגנית של גידולים ממאירים רקמת חיבור נדירים שמקורם בעיקר מן mesoderm העוברי 1. הסוגים השונים כוללים סרקומות עצם סרקומות של רקמות רכות. סרקומות עצם, קבוצה של גידולים ראשוניים נדירים יחסית, מורכבות תת שונים, וביניהם אוסטאוסרקומה (OS). OS, אחד הגידולים הראשוניים הנפוצים ביותר של העצם, היא סרטן mesenchymal שמספק היסטולוגית, קלינית נרחבת, ו heterogeneities המולקולרית 2, 3. למרבה הצער, מערכת הפעלה מתרחשת בעיקר אצל ילדים וגם אצל מבוגרים צעירים 4, 5 ו מייצגת 60% תת-הסוגים היסטולוגיים המשותפים של סרקומה עצם בילדות 6, 7. OS בדרך כלל משפיעים על אזורי השלד, המאופיינים צמיחת עצם מהיר (למשל, metaphysis של עצמות ארוכות). בין תת-הסוגים שונים היסטולוגית של OS, מערכת הפעלה קונבנציונלית, המכונית גם מדולרי או OS המרכזי, יש ציון גבוה של ממאירות וכן sha מכסהמחדש של 80% 8. 80% זה מורכב של מערכת ההפעלה osteoblastic קונבנציונאלי 60%, 10% OS chondroblastic, ו -10% 6 fibroblastic OS, 8-10. תת OS אחרות כוללות אנפלסטית, telangiectatic, תא עשירי ענק OS תאים קטנים. למרות התקדמות בניתוחים בשילוב וכימותרפיה בניהול OS, התוצאה נשארת עניה, עם שיעור הישרדות לטווח ארוך של 65-70% בחולים ללא גרורות 11, 12. הישנויות רחוקות להתרחש בתדירות גבוהה ככל גרורות ריאתי או, לעתים רחוקות יותר, כמו גרורות לעצמות רחוקות חזרות מקומיות 13. גרורות הן בדרך כלל עמידות לטיפולים קונבנציונליים. התנגדות זו הסיבה מדוע ההישרדות של 10 שנים ללא מחלה הוא כ 30% בחולים עם מחלה גרורתית בעת האבחנה 14, 15. כמו רקמות בריאות, רקמת הסרטן היא מורכבת מאוסף הטרוגנית של סוגי תאים. תאים בתוך הגידול נראים מתאימים בשלבים שונים של פיתוח. בתוך כל nרקמת ormal מתגורר subpopulation של תאים עם היכולת selfrenew, ובכך לספק אבות ותאי בוגרת הומאוסטזיס רקמות. באופן דומה, הסרטן מורכב אוכלוסייה הטרוגנית דומה של תאים בשלבים שונים של פיתוח, עם דרגות שונות של התפשטות פוטנציאל tumorigenic. לתת-קבוצה של תאים סרטניים אלה, המכונים תאי גזע סרטניים (CSCS), מהווה מאגר של selfsustaining תאים עם היכולת הבלעדית selfrenew ולשמור על פוטנציאל ממאיר של גידולים, ובכך יצירת שושלות תאים שונים המהווים את עיקר הגידול 16. בשנת 1990, מחקרים על לוקמיה מיאלואידית חריפה ספקו את הראיות המשכנעות הראשונות לקיומה של תת-אוכלוסיות CSC 17, 18. CSCS מאז בודד ממספר רב של גידולים מוצקים 19, ובכך הופך לאחד הנושאים הנחקרים ביותר בחקר הסרטן. CSCS שעלולות להתעורר אכן מתאי גזע נורמליים ידי מוטציות בגנים שהופכים את נורמליתתאי גזע 20-23 סרטניים. מוטציות ואינטראקציות הפיכה מרובות עם microenvironment יוכל לתרום גם אבות בריאים ותאים בוגרים רכישת הקיבולת וחיי הנצח selfrenewal מאפייני CSCS. ישנן מספר השערות לגבי השינוי הזה. אבות בריאים, תאי בוגרים בריאים, תאים סרטניים, יכולים dedifferentiate לתאי גזע, קבלת פנוטיפ הגבעולי על ידי הפעלת הגנים הקשורים selfrenewal 24-28. למרות מספר מחקרים חדשים, את מקורותיה של CSCS טרם גילו. מאפיין מסוים של CSCS הוא כי יכל להתנגד גישת רב-טיפול, אשר מורכבת של ניתוח משולב וכימותרפיה עם תרופות שונות. מחקרים שנעשו לאחרונה הראו כי CSCS רשאי לרכוש עמידות ציטוטוקסיות תרופות כימותרפיות. הסברים אפשריים התנגדות זו כוללים את ביטוי יתר של קלטת ATP מחייב (ABC) טרנספורטר multidrug (כלומר,MDR1 ו BCRP1), ביטוי יתר של אנזימים חילוף חומרים כימותרפיה כגון dehydrogenase אלדהיד 1 (ALDH1), ו / או שינויים קינטיקה מחזור התא 30-33. התוצאה הישירה של כל המושגים האלה כי תוארו עד כה היא כי טיפול בסרטן יהיה יעיל רק אם תת-אוכלוסיית CSC בוטלו לחלוטין, בעוד הישנות מקומית או גרורות מרוחקות עשויה להתרחש אם אפילו יחיד CSC שרד. התגלית של CSCS ב סרקומות אדם 34, במיוחד OS 35, או בכל עצם אחר וסוגי סרטן של הרקמות רכות, יש חשיבות קלינית רבה כי הוא מציע הסבר אפשרי מדוע טיפולים רבים נראים יעיל בתחילה, אך החולים מאוחר להרע. לכן, בתקווה לקרב בעתיד נגד OS המקובלת היא למצוא טיפולים ממוקדים חדשים וספציפיים מבוססים על הפיתוח של תרופות חדשניות מכוונות הודות OS-CSCS לאפיון המולקולרי של משנה זוהאוכלוסייה לחקר הביולוגיה CSC. בשנת 1992, ריינולדס ועמיתיו, שהיו חוקרת האם משנה של תאי גזע נכח במוח של יונקים בוגרים, פיתחו שיטה לבודד תאים חשודים להיות תאים דמויי גזע 36, 37. שיטה זו מבוססת על יכולת מסוימת של תאים אלה ליצור מושבות כדוריות כאשר גדלו בתנאי nonadherent. טכניקות דומות הועסקו על ידי גיבס ועמיתיו בשנת 2005 ללמוד subpopulation של תאים דמויי גזע עצם סרקומות 38. כדי לבודד ולאפיין OS-CSCS מתרבויות תא ראשוניות של סוגים שונים של מערכת הפעלה קונבנציונלית, החלטנו להתאים את הטכניקה הזו עבור שורות תאי OS. כאן אנו מתארים שיטה המותאמת זה של assay היווצרות כדור, כינה &quot;assay sarcosphere&quot;, אשר ניתן להשתמש בהם כדי לבודד OS-CSCS מקווי תא ראשוני סופי נגזר ביופסיות האדם של OS קונבנציונאלי. כמו כן, אנו מתארים את כל הטכניקות used כדי לאמת את הפנוטיפ CSC דמוי גזע של שורות תאים מבודדים על ידי assay זה: 1) הערכת הביטוי של גנים המאפיינות תאי גזע עובריים פלוריפוטנטיים (ESCs) ושל הגן CD133, אשר מהווה סמן של CSCS; 2) יחידת מושבת יוצרים (CFU) assay; 3) הערכת היכולת של תאים אלה להתמיין אוסטאובלסטים ו adipocytes בתנאי בידול מתאימים; 4) מחקר של סמנים משטח של בתאי גזע mesenchymal (MSCs) (כלומר, CD44, CD105 ו Stro-1) על ידי מכתים immunofluorescence ועל ידי ניתוח תזרים cytometric; 5) והערכה של פעילות ALDH של תאים אלה.

<table><tbody><tr><td>תמיסת מלח פוספט חוצץ של Dulbecco עם Ca2+ ו-Mg2+ (DPBS)</td><td>LONZA</td><td>BE17-513F</td><td>_</td></tr><tr><td>Dulbecco's Phosphate Buffered Saline&nbsp; ללא Ca2+ ו-Mg2+ (DPBS)</td><td>LONZA</td><td>BE17-512F</td><td>_</td></tr><tr><td>Porcine Trypsin 1:250</td><td>BD Difco</td><td>215310</td><td>ממס: DPBS. ריכוז מלאי: אבקת</td></tr><tr><td>חומצה אתילנדיאמין טטראצטית מלח דיסודיום דיהידרט (EDTA)</td> <td>ממס Sigma-Aldrich</td><td>E4884</td>: <td>DPBS. ריכוז מלאי: אבקת</td></tr><tr><td>קולגנאז מ-Clostridium histolyticum</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C0130</td><td>ממס: תמיסת חיץ, pH 7.4. ריכוז מלאי: אבקת</td></tr><tr><td>דימתיל סולפוקסיד (DMSO)</td> <td>BDH Chemicals-VWR</td><td>10323</td><td>_</td></tr><tr><td>Nutrient Blend F-12 Ham</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F6636</td><td>ממס: Ultrapure dH2O. ריכוז מלאי: אבקה</td></tr><tr><td>2-פוספו-L-חומצה אסקורבית מלח טריסודיום</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>49752</td><td>ממס: DPBS. ריכוז מלאי: 5 מ"ג/מ"ל</td></tr><tr><td>&בטא;-גליצרול פוספט דיסודיום מלח פנטהידראט</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>50020</td><td>ממס: DPBS. ריכוז מלאי: 1 מיליון</td></tr><tr><td>אינסולין. סיגמא-אולדריץ</td><td>'</td><td>91077</td> רקומביננטי אנושי <td>ממס: NaOH 0.1 M. ריכוז מלאי: 10 מ"מ</td></tr><tr><td>3-איזובוטיל-1-מתילקסנטין</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>I5879</td><td>ממס: DMSO. ריכוז מלאי: 500 מ"מ</td></tr><tr><td>אינדומתצין</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>I7378</td><td>ממס: DMSO. ריכוז מלאי: 200 מ"מ</td></tr><tr><td>דקסמתזון</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>D4902</td><td>ממס: DMSO. ריכוז מלאי:&nbsp; 1 מ"מ / 100 &M. יש לאחסן בחנקן נוזלי כדי לשמור על הפעילות הביולוגית</td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי (FBS)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F7524</td><td>_</td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי דרום אמריקה&nbsp;</td><td>EUROCLONE</td><td>ECS0180L</td><td>_</td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin (PEN-STREP) 10,000 U/mL</td><td>LONZA</td><td>DE17-602E</td><td>_</td></tr><tr><td>Methyl cellulose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>274429</td><td>ממס: Ultrapure dH2O. ריכוז מלאי: 2%</td></tr> <tr><td>Putresceine dihydrochloride</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P5780</td><td>ממס: Ultrapure dH2O. ריכוז מלאי: אבקה</td></tr><tr><td>apo-טרנספרין&nbsp;</td><td>ממס סיגמא-אולדריץ'</td><td>T-1147</td>: <td>DPBS. ריכוז מלאי: 25 מ"ג/מ"ל</td></tr><tr><td>גורם גדילה אפידרמלי אנושי (EFGF)</td><td>ממס Sigma-Aldrich</td><td>E5036</td>: <td>DPBS pH 7.4. ריכוז מלאי: 10 ומיקרו; g/mL</td></tr><tr><td>גורם גדילה פיברובלסטי-ממס בסיסי</td><td>של סיגמא אנושי-אולדריץ'</td><td>F0291</td>: <td>DPBS + 0.2% BSA. ריכוז מלאי: 25 ומיקרו; גרם/מ"ל</td></tr><tr><td>חומצה סלנית</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>211176</td><td>ממס: DPBS. ריכוז מלאי: 30 מ"מ</td></tr><tr><td>פרוגסטרון</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>P8783</td><td>ממס: ETOH. ריכוז מלאי: 10 מ"מ</td></tr><tr><td>טולואידין כחול O</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>198161</td><td>ממס: Ultrapure dH2O. ריכוז מלאי: שמן אבקה</td></tr><tr><td>אדום O</td><td>ICN ביוכימיקלים</td><td>155984</td><td>ממס: 2-פרופנול. ריכוז מלאי: אבקת</td></tr><tr><td>נפטול AS-MX פוספט מלח דיסודיום</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>N5000</td><td>ממס: DMSO. ריכוז מלאי: אבקה</td></tr><tr><td>כחולה מהירה מלח BB</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>F3378</td><td>ממס: Tris HCL, pH 9.0. ריכוז מלאי: אבקה</td></tr><tr><td>מהירה סגול אדום LB מלח</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>F3381</td><td>ממס: Tris HCL, pH 9.1. ריכוז מלאי:</td></tr><tr><td>אלבומין סרום בקר אבקה, שבר V (BSA)</td> <td>ממס Sigma-Aldrich</td><td>A-4503</td>: <td>DPBS. ריכוז מלאי: 2%</td></tr> <tr><td>אליזרין אדום S</td><td>ICN ביוכימיקלים</td><td>100375</td><td>ממס: Ultrapure dH2O. ריכוז מלאי: אבקת</td></tr><tr><td>פורמלדהיד תמיסת</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>533998</td><td>4%</td></tr> <tr><td>טריטון-100X</td><td>MERCK</td><td>11869</td><td>ממס: DPBS. ריכוז המלאי: 0.2%. סכנה - השתמש רק מתחת למכסה המנוע הכימי</td></tr><tr><td>Calcein</td><td>MERCK</td><td>2315</td><td>ממס: DPBS. ריכוז מלאי: 200 ומיקרו; גרם/מ"ל</td></tr><tr><td>2-פרופנול</td><td>MERCK</td><td>109634</td><td>סכנה - יש להשתמש רק מתחת למכסה המנוע הכימי</td></tr><tr><td>Ab-CD105&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; (עכבר חד-שבטי [SN6] ל-CD105 (FITC)</td><td>Abcam</td><td>ab11415</td><td>נוזל. יישום:&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; ציטומטריית זרימה (Flow Cyt)</td></tr><tr><td>Ab-CD44&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; (עכבר חד שבטי&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; [F10-44-2] ל-CD44 (PE/Cy7&reg;) )</td><td>Abcam</td><td>ab46793</td><td>נוזל. יישום:&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; ציטומטריית זרימה (Flow Cyt)</td></tr><tr><td>Ab-CD45&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; (עכבר חד שבטי&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; [MEM-28] ל-CD45 (PerCP))&nbsp;</td><td>Abcam</td><td>ab65952</td><td>נוזל. יישום:&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; ציטומטריית זרימה (Flow Cyt)</td></tr><tr><td>Ab-CD105&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; (נוגדן מטוהר CD105 אנושי)&nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td>MHCD10500</td><td>ממס: DPBS. ריכוז מלאי: ליופיליזציה. יישום: צביעה אימונופלואורסצנטית (IF)</td></tr><tr><td>Ab-CD44&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; (נוגדן נגד CD44)&nbsp;</td><td>Abcam</td><td>EPR1013Y(ab51037)</td><td>ממס: DPBS. ריכוז מלאי: ליופיליזציה. יישום: צביעה אימונופלואורסצנטית (IF)</td></tr><tr><td>Ab-Stro-1&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; (עכבר נגד STRO-1)&nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td>398401</td><td>ממס: DPBS. ריכוז מלאי: ליופיליזציה. יישום:&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; ציטומטריית זרימה (ציט זרימה)&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; צביעה אימונופלואורסצנטית (IF)</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; (IgG נגד ארנב (Alexa Fluor 488 Donkey Anti-Rabbit IgG (H+L))</td><td>ממס Invitrogen</td><td>A-21206</td>: <td>DPBS. ריכוז מלאי: ליופיליזציה. יישום: צביעה אימונופלואורסצנטית (IF)</td></tr><tr><td>FITC אנטי-עכבר IG (FITC-Rabbit Anti Mouse IgG (H+L))</td><td>Invitrogen</td><td>61-6511</td><td>ממס: DPBS. ריכוז מלאי: ליופיליזציה. יישום:&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; ציטומטריית זרימה (ציט זרימה)&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; צביעה אימונופלואורסצנטית (IF)</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 635 Phalloidin&nbsp;</td><td>ממס Invitrogen</td><td>A34054</td>: <td>DPBS. ריכוז מלאי: ליופיליזציה. יישום: צביעה אימונופלואורסצנטית (IF)</td></tr> <tr><td>AutoMACS ומסחר; מאגר ריצה MACS מאגר הפרדה</td><td>Miltenyi</td><td>130,091,221</td><td>נוזל. יש לאחסן בטמפרטורה של 4 מעלות; C</td></tr><tr><td>QIAzol&reg; מגיב ליזה</td><td>QIAGEN</td><td>79306</td><td>סכנה - השתמש רק מתחת למכסה המנוע הכימי</td></tr><tr><td>QUANTITECT&reg; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; ערכת תמלול הפוך</td><td>QIAGEN</td><td>205314</td><td>_&nbsp;</td></tr><tr><td>נוזל כלורופורם</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>C2432</td><td>. סכנה - השתמש רק מתחת לקולט</td></tr><tr><td>אדים כימי GELAIRE</td><td></td><td>BSB6A</td><td>_&nbsp;</td></tr><tr><td>קולט אדים כימי</td><td>ARREDI TECNICI&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; וילה</td><td>Modello&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; דינמיקה</td><td>_&nbsp;</td></tr><tr><td>צנטריפוגה</td><td>EPPENDORF</td><td>5415R</td><td>_&nbsp;</td></tr><tr><td>סריקת לייזר מיקרוסקופיה קונפוקלית LSM 5109 Meta&nbsp;</td><td>צייס_</td><td>&nbsp;</td><td>_&nbsp;</td></tr><tr><td>iCycler PCR Thermalcycler&nbsp;</td><td>ביורד</td><td>_&nbsp;</td><td>_&nbsp;</td></tr><tr><td>CyFlow&reg; חלל&nbsp;</td><td>(PARTEC)</td><td>_&nbsp;</td><td>_&nbsp;</td></tr><tr><td>מיקרוסקופ הפוך Axiovert 200M&nbsp;</td><td>צייס_</td><td>&nbsp;</td><td>_&nbsp;</td></tr><tr><td>מיכל הקפאה,</td> <td>Nalgene</td><td>_&nbsp;</td><td>_&nbsp;</td></tr><tr><td>Pipet-Aid מקורי</td><td>pbiBrand</td><td>_&nbsp;</td><td>_&nbsp;</td></tr><tr><td>מיקרופיפטות</td><td>EPPENDORF_</td><td>&nbsp;</td><td>_&nbsp;</td></tr><tr><td>פיפטת פסטר זכוכית</td><td>SIGMA</td><td>_&nbsp;</td><td>_&nbsp;</td></tr><tr><td>VICTOR3 ומסחר; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>פרקין אלמר_</td><td>&nbsp;</td><td>_&nbsp;</td></tr><tr><td>צינורות חרוטיים&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; (15 ו-50 מ"ל)&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>352096 BD FALCON</td><td>(עבור 15 מ"ל)&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 352070 (עבור 50 מ"ל)</td><td>_&nbsp;</td></tr><tr><td>24-Well שקוף שטוח תחתון TC-מטופל מרובה תאים-תרבית-צלחת</td><td>BD FALCON</td><td>353047</td><td>_&nbsp;</td></tr><tr><td>6-באר ברור שטוח תחתון נמוך במיוחד חיבור מרובה בארות צלחות</td><td>CORNING</td><td>3471</td><td>_&nbsp;</td></tr><tr><td>פיפטות סרולוגיות&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; (5 ו-10 מ"ל)&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>357543 BD FALCON</td><td>(עבור 5 מ"ל)&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 357551 (עבור 10 מ"ל)</td><td>_&nbsp;</td></tr><tr><td>מזרק (5 מ"ל)&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>ב|בראון</td><td>4617053V</td><td>_&nbsp;</td></tr><tr><td>צלחת פטרי 100X20 מ"מ&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>ב.ד. פלקון</td><td>353003</td><td>_&nbsp;</td></tr><tr><td>R&ouml; צינורות הרן&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; (3.5 מ"ל, 55x12 מ"מ, PS)&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>סרשטדט</td><td>55,484</td><td>_&nbsp;</td></tr><tr><td>צלחת פטרי 60X15 מ"מ&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>ב.ד. פלקון</td><td>353004</td><td>_&nbsp;</td></tr><tr><td>Cryovials 1.5 מ"ל&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>נלג'ין</td><td>5000-1020</td><td>_&nbsp;</td></tr><tr><td>צלוחיות תרבית תאים 25 ס"מ&סופ2; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>ב.ד. פלקון</td><td>353014</td><td>_&nbsp;</td></tr><tr><td>מסנן ניילון נטו, הידרופילי</td><td>MERCK</td><td>NY4104700</td><td>_&nbsp;</td></tr><tr><td>מחזיק מסנן Swinnex</td><td>MERCK</td><td>SX0002500</td><td>_&nbsp;</td></tr><tr><td>פינצטה פרי&nbsp;</td><td>_&nbsp;</td><td>_&nbsp;</td><td>_&nbsp;</td></tr><tr><td>לנצט</td><td>_&nbsp;</td><td>_&nbsp;</td><td>_&nbsp;</td></tr><tr><td>התפכחות</td><td>_</td><td>_</td><td></td></tr></tbody></table>_

הקמת סרטן גזע תא תרבויות מן האדם הקונבנציונלי אוסטאוסרקומה

Establishment of Cancer Stem Cell Cultures from Human Conventional Osteosarcoma

השיפורים הנוכחיים בטיפול נגד אוסטאוסרקומה (OS) הדבר מאריכים את חייהם של חולי סרטן, אך שיעור ההישרדות של חמש שנים נשאר עני כאשר גרורות התרחשו. לתאי גזע סרטן (CSC) התיאוריה גורסת כי יש תת של תאים סרטניים בתוך הגידול בעלות מאפיינים הגבעולי, הכולל יכולת לשמור על הגידול להתנגד כימותרפיה multidrug. לכן, הבנה טובה יותר של הביולוגיה בפתוגנזה OS נחוצה כדי לקדם את הפיתוח של טיפולים ממוקדים למגר משנה המסוים הזה כדי להפחית תחלואה ותמותה בקרב חולים. בידוד CSCS, הקמה בתרביות תאים של CSCS, ולומד הביולוגיה שלהם הם צעדים חשובים כדי לשפר את ההבנה שלנו של ביולוגית OS בפתוגנזה. הקמת CSCS-OS נגזרות אנושי ביופסיות של מערכת הפעלה כבר מתאפשרת באמצעות מספר שיטות, כולל את היכולת ליצור תרביות תאי גזע 3 ממדים תחת nonadhereתנאי NT. בתנאים אלה, CSCS מסוגל ליצור מושבות צפות כדוריות נוצרו על ידי תאי גזע בת; מושבות אלה מכונים &quot;תחומי הסלולר&quot;. כאן, אנו מתארים שיטה להקים תרבויות CSC מתרבויות תא ראשוניות של מערכת הפעלה קונבנציונלית המתקבלת ביופסיות OS. אנו בבירור לתאר את כמה קטעים נדרש לבודד ולאפיין CSCS.

הנוכחות של תאי גזע סרטניים (CSCS) ב סרקומות עצם נקשר לאחרונה בפתוגנזה שלהם. במאמר זה, אנו מציגים את הבידוד של CSCS מתרבויות תא ראשוניים המתקבלות ביופסיות אדם של אוסטאוסרקומה קונבנציונלי (OS) באמצעות היכולת של CSCS לגדול בתנאי nonadherent.

The current improvements in therapy against osteosarcoma (OS) have prolonged the lives of cancer patients, but the survival rate of five years remains ...

המטרה הכללית של מאמר זה היא לבודד תאי גזע סרטניים משורת תאים סופית שהושגה מאוסטאוסרקומה אנושית. היתרון המרכזי של עבודה זו הוא להדגים בבירור לחוקרים אחרים בתחום האונקולוגיה כיצד לבודד תאי גזע סרטניים באופן in vitro. תאים אלו יכולים לשמש לאחר מכן למחקר של טיפולים נגד אוסטאוסרקומה וגידולים מוצקים אחרים.באופן כללי, אנשים שאינם בקיאים בנושא יתקשו אם לא ידעו כיצד לבודד את מושבות הסרקומה. הדגמה ויזואלית של שלב זה היא קריטית, שכן שלב הבידוד קשה לביצוע ולהבנה. הרעיון לטכניקה זו עלה לנו לראשונה כאשר קראנו על בדיקת יצירת ספירות (sphere formation assay).תיאור על ידי Gypsum ועמיתיו. את הפרוצדורה ידגימו ד"ר Gaia Palmini, סטודנטית לדוקטורט, וד"ר Roberto Zonefrati, טכנאי מהמעבדה שלי. לתחילת העבודה, הכינו את כל מצעי התרבית הדרושים.בופרי עיכול ותמיסות אחרות שיידרשו לפרוצדורה. לאחר מכן, הכינו שורת תאים סופית (finite cell line) של אוסטאוסרקומה, על ידי בידוד אוסטאוסרקומה מביופסיה מאושרת של מחט או בביופסיה כירורגית, וביצוע תרבית משנית (sub-culturing) לתאים שהתקבלו כפי שמתואר במאמר המלווה.לאחר הקמת תרבית תאי האוסטאוסרקומה, וכאשר הפיתה קרובה למצב של התמסגנות (confluence), יש להסיר את המצע באמצעות שאיבה ולבצע טריפסינציה לתאים כדי לשחררם מהפיתה. העבירו את התאים למבחנה נקייה ובצעו פיפטינג עדין של תרחיף התאים למעלה ולמטה כדי לפרק גושי תאים.בשלב הבא, אסוף 10 µL מתלי התאים והעבר אותם לתא של המוציטומטר. הנח את תא ההמוציטומטר תחת מיקרוסקופ ניגודיות פאזה (phase contrast) וחשב את ריכוז התאים בתלי. לאחר מכן, הוסף 280,000 תאים ל-35 mL של מצע גידול לסרקוספירה (sarcosphere), המכיל methocellulose, וערבב את התמיסה בעדינות באמצעות פיפט כדי לפזר גושים.העבירו חמישה milliliters של תערובת התאים לכל באר בלוחות עם שש באערים בעלי הידבקות נמוכה במיוחד (ultra low attachment). לאחר הזריעה, השתמשו במיקרוסקופ הפוך כדי לבחון את מראה התאים ואת מידת בידודם. דגרו את התאים באינקובטור בטמפרטורה של 37 degree celsius ובריכוז של five percent carbon dioxide.בכל שלושה ימים, הוסיפו תמיסות אלכוהוליות טריות של beta FGF ו-EGF לכל באר כדי לחדש את ריכוז גורמי הגדילה. בחנו את התקדמות בדיקת הסרקוספירות על ידי התבוננות בתאים תחת המיקרוסקופ בימים 7, 14, 20, 21 ו-28. כאשר תבחינו בנוכחות של סרקוספירות שחורות גדולות, המרוכזות כולן במרכז הבאר, הפסיקו את התירבוע והתחילו בתהליך הפירוק.כאשר מגיע הזמן לבודד את הסרקוספירות (sarcospheres), השתמש בפיפטה סטרילית של 1,000 microliter כדי להעביר את המצע המכיל את הסרקוספירות למזרק עם מחזיק מסנן ממברנה סטרילי. לאחר הסרה מלאה של המצע המכיל את הסרקוספירות, הוסף חמישה milliliters של מצע גידול לבאר, ושטוף אותה כדי לוודא איסוף של כל הספירות שנותרו.לאחר מכן, השתמש במיקרוסקופ כדי לאשר אם כל הסרקוספרות (sarcospheres) הוחזרו. אם לא, שטוף את הבאר שוב עד להשלמת איסוף הספירות. לאחר מכן, סנן את התמיה דרך מחזיק מסנן ממברנה באמצעות כבידה כדי לא לפגוע בספירות, וודא ששום סרקוספירה אינה עוברת דרך המסנן.במהלך תהליך זה, יש להסיר בועות אוויר כלשהן באמצעות שימוש עדין בפיפט זכוכית סטרילי. לאחר סינון כל הסרקוספירות, יש לשטוף את יחידת הסינון על ידי הוספת ten milliliters של מצע גידול ישירות למזרק והשארתו לסנן ללא לחץ, כדי להבטיח את סילוקם של תאים בודדים. לאחר סינון תרחיף הסרקוספירות, יש להשליך את מסנן הנוזל ולהקדיש תשומת לב רבה לשחזור הסרקוספירות השזורות ברשת המסנן.בשלב זה, נתקו את יחידת הסינון מהמזרק. הניחו אותה בתוך צלחת פטרי בקוטר 100 מילימטר. הוציאו את מסנן הרשת מתוך מחזיק מסנן הממברנה באמצעות פינצטה סטרילית.העבירו את המסנן לצלקת פטרי חדשה בקוטר 60 מילימטר. לאחר מכן, שטפו את מסנן הרשת על ידי ניעור עדין, תוך הוספה של 5 ml של מצע גידול, וזאת כדי לשחרר את הסרקוספירות (sarcospheres) מסבך הממברנה.בשלב הבא, מקם את הממברנה בתוך באר ואשש באמצעות תצפית מיקרוסקופית שאין ספירות נוספות השזורות בממברנה. שטוף את הממברנה שוב, ולאחר מכן בדוק אותה שוב תחת המיקרוסקופ אם עדיין קיימות ספירות השזורות בממברנה. כאשר לא נותרו ספירות בממברנה, דגור אותן במצע גידול כדי לגדל את הסרקו-ספירות (sarcospheres) לשכבה אחת (mono-layer).יש לעקוב אחר צמיחת תאי הגזע של סרטן האוסטאוסרקומה, המתקבלים מהסרקוספירות, עד שהתאים יגיעו לכ-90% confluence, בצלחת פטרי בקוטר 60 מילימטר. בנוסף לפרוטוקולים הקבועים הרבים המופיעים במאמר זה, שיטות להערכת יכולת ההבחנה, פעילות ALDH, פלוו ציטומטריה, אימונופלורסנציה ואנליזת RTPCR, מפורטות בטקסט המלווה לפרוטוקול.דגימות של אוסטאוסרקומה (Osteosarcoma) משיגים באמצעות שאיבה במחט או חיתוך כירורגי של רקמה עודפת. בטיפול נשאי, התרביות הראשוניות דורשות כחודש כדי להגיע לקונפלואנציה בצלחת פטרי בקוטר 100 מילימטר. לאחר ההתרחבות, התאים נזרעים בלוחיות בעלות שש בארות עם הידבקות נמוכה מאוד (ultra low attachment), כדי להתחיל את בדיקת הסרכוספירה (sarcosphere assay).לוח זה שומר על התאים במצב תלוי, ומונע היצמדות לתשתית. לאחר שבעה ימים, נצפות מספר מושבות כדוריות קטנות המוקפות בתאים בודדים. ולאחר 28 ימים, נצפות מספר סארקוספרות (sarcospheres) גדולות.לאחר בידוד המושבות הכדוריות, ניתן להרחיב תאי סרטן דמויי תאי גזע מהסרכוספירות הבודדות על ידי העברתן לצלחות הדבקה רגילות. צביעות אימונופלורסצנטיות הראו פנוטיפ דמוי תאי גזע מזנכימליים, כאשר התאים שהורחבו היו חיוביים ל-CD44 ול-CD105, וחיוביים במידה מתונה ל-Stro-1. בדיקת RTPCR הדגימה אף היא באופן חיובי פנוטיפ של תאי גזע עובריים, באמצעות ביטוי של שלושה גנים המסמנים תאי גזע עובריים.Nanog, Oct 3/4, ו-Sox2. וכן הגן CD133, סמן לתאי גזע של סרטן אוסטאוסרקומה. טכניקת הבידוד המפורטת שהצגנו בסרטון זה תסלול את הדרך לחוקרים אחרים ללמוד על תאי גזע סרטניים, על ידי הדגמה של האופן שבו ניתן להבין ולשחזר את השלבים הקריטיים ביותר של בדיקת יצירת הספירות (sphere formation assay).בדיקה שונה זו היא טכניקה יעילה לבידוד תאי גזע סרטניים וללימוד הביולוגיה שלהם. שיטה זו, עם התאמות נוספות, עשויה לשמש גם לבידוד תאי גזע סרטניים מקווי תאי סרטן מוגבלים אחרים, שהושגו באמצעות ביופסיות של גידולים מוצקים.לסיכום, בידוד של תאי גזע סרטניים ממספר סוגי גידולים יאפשר את חקר הביולוגיה שלהם. זאת במטרה סופית למצוא מטרות מולקולריות ולפתח טיפולים אנטי-סרטניים ספציפיים מאוד המכוונים נגד תתי-אוכלוסיות תאיות מסוימות.

establishment-cancer-stem-cell-cultures-from-human-conventional

Research

JoVE Journal

Cancer Research

מחקר סרטן

מאמר זה מתאר את ההכנה של רקמה המתקבלת מלנומה טרי לתרבויות העיקריות של תאים, וכיצד להסיר זיהומים של אריתרוציטים ופיברובלסטים מתאי הגידול. לבסוף, אנו מתארים כיצד...

תרבות מטופל נגזר סלולרי ובידוד של CD133<sup&gt; +</sup&gt; תאי גזע סרטני משוערים מלנומה

הבידוד של תאי גזע סרטני (CSCs) ישירות מרקמות אנושיות הוא הנדרש לאפיון הביולוגי שלהם. כתב יד זה מתאר מתודולוגיה לבידודה של CSCs ערמונית מרקמות אנושיות, תוך מתן טיפים על פתרון בעיות בצעדים קשים גם.

בידוד של תאי גזע סרטני מדגימות אדם סרטן הערמונית

תאי גזע סרטני (CSCS) הם מעורבים בהישנות גידול עקב chemoresistance. יש לנו אופטימיזציה פרוטוקול לבחירה והרחבת CSCS משורות תאי סרטן השחלות. על ידי טיפול בתאים עם ציספלטין כימותרפיות וculturing בתאי גזע קידום תקשורת אנו מעשירים לתרבויות CSC לא חסידות.

העשרה לתאי גזע Chemoresistant סרטן השחלות משורות תאים אנושיות

מבחני מבחנה משמשים בדרך כלל לזיהוי תאי גזע סרטניים. כאן אנו משווים מבחני כדורים בודדים עם רב-תאים מבוססי תאים. הבדיקות המבוססות על תאים בודדים או תוספי מתיל צלולוז נותנים תוצאות מדויקות יותר בעוד שבדיקות מבוססות תאים מרובות תאים המבוצעות במדיום נוזלי יכולות להיות מושפעות מאוד מצפיפות התאים.

הערכה של מאפייני תא גזע בקרצינומה של תאי השחלות אדם באמצעות Multi ומבחני Spheres מבוסס תא בודדים

פרוטוקול הבאים מתמקד הקמת תרבות העיקרי של סרקומה של רקמות רכות, נגזר החולה (STS). מודל זה יכול לעזור לנו להבין טוב יותר את רקע מולקולרי ופרופיל תרופתי של ממאירות נדירים אלה, שעשוי לייצג נקודת התחלה עבור מחקרי המשך שמטרתם לשפר את ניהול STS.

הקמתה של תרבות העיקרי של סרקומה של רקמות רכות, נגזר החולה

אנו מתארים פרוטוקול מפורט לבידוד של תאים מתחילים הגידול מחולה סרקומה האדם נגזר xenografts תלי על ידי מיון מופעל על ידי קרינה פלואורסצנטית, באמצעות אנטיגן לוקיציט אנושי-1 (HLA-1) כסמן שלילי, ועל אימות נוסף האפיון של התאים האלה HLA-1-שלילי גידול מתחיל.

בידוד ואפיון של הגידול-ליזום תאים מחולה סרקומה-Xenografts נגזרים

סרטן רדום ופעיל תא פנוטיפים מאופיינים באמצעות הדמיה שלב כמותית. מבחני התפשטות ההעברה, מורפולוגיה תאים משולבים, מנותח בשיטה פשוטה אחת.

שלב בצילום מואץ, ללא תווית, כמותיים הדמיה המחקר של תאים סרטניים אנושיים רדום ופעיל

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לדור של pluripotent המושרה בתאי גזע (iPSCs) מ תסמונת לי-פראומני, היא תורשתית (הסימולטור) החולה נגזר fibroblasts, הבידול של iPSCs באמצעות גזע mesenchymal (MSCs) תאי העצם, מידול vivo tumorigenesis באמצעות תאי העצם של החולה-derived הסימולטור.

מידול אוסטאוסרקומה באמצעות תאי גזע Pluripotent נגזר החולה המושרה תסמונת לי-פראומני, היא תורשתית

מטרת מתודולוגיה זו היא לזהות את תאי גזע הסרטן (csc) בקווי התאים של סרטן ודגימות הגידול האנושי הראשוני עם הפרוטוקול ליצירת כדור, בצורה איתנה, באמצעות בחני פונקציונלי ואפיון פנוטימית עם זרימה cy, try ומערבי מחוק.

קבלת סרטן גזע כדורים מגינקולוגית סרטן השד גידולים

הפרוטוקול הנוכחי מתאר את השיטה לביסוס מודל עכבר קסנוגרפט (PDX) הנגזר ממטופל באמצעות רקמת אוסטאוסרקומה אנושית.

הקמת מודל עכבר Xenograft שמקורו במטופל עם רקמות אוסטאוסרקומה אנושיות

למדו שיטה להפרדת תאי גזע סרטניים מאוסטאוסרקומה אנושית באמצעות מבחן יצירת הספירות. הטכניקה מאפשרת חקר תרפיות ממוקדות נגד גידולים מוצקים ומסייעת להבנת ביולוגיית הגזע הסרטני.

הקמת סרטן גזע תא תרבויות מן האדם הקונבנציונלי אוסטאוסרקומה

גלה סרטונים נוספים