Name: בידוד ובידול של תאי גזע נגזר שומן מרקמות שומן תת עורי בשר חזירים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-03-31T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 20 s
Description: למדו לבודד תאי גזע נגזרי שומן מרקמות תת-עוריות של חזירים ולהבדילם לתאי שומן, עצם וסחוס. שיטה זו מאפשרת חקר מנגנונים מולקולריים בביולוגיית השומן ויישומים ברפואה רגנרטיבית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מבקשים להביע תודה לכל חברי המעבדה לדיון הנרחב וטכניקה תומכת בפרוטוקול זה. מחקרים אשר נערכו במעבדה נתמכו על ידי מענקי משרד מדע והטכנולוגיה (MOST 103-2314-B-002-126 ורוב 102-2313-B-002-026-MY3) ועל ידי מענקים לשאוף תכנית האוניברסיטה למעלה (104R350144) של האוניברסיטה הלאומית, טייוואן.

<ol><li>Farese, R. V., Zechner, R., Newgard, C. B., Walther, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Problem+of+Establishing+Relationships+between+Hepatic+Steatosis+and+Hepatic+Insulin+Resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metab%22%5BJournal%5D)">The Problem of Establishing Relationships between Hepatic Steatosis and Hepatic Insulin Resistance.</a> Cell Metab. 15, 570-573 (2012).</li>
<li>Taubes, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+research.+Unraveling+the+obesity-cancer+connection%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Cancer research. Unraveling the obesity-cancer connection.</a> Science. 335 (28), 30-32 (2012).</li>
<li>Apovian, C. M., Gokce, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Obesity+and+cardiovascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Obesity and cardiovascular disease.</a> Circulation. 125, 1178-1182 (2012).</li>
<li>Glass, C. K., Olefsky, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammation+and+lipid+signaling+in+the+etiology+of+insulin+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metab%22%5BJournal%5D)">Inflammation and lipid signaling in the etiology of insulin resistance.</a> Cell Metab. 15, 635-645 (2012).</li>
<li>Rosen, E. D., Spiegelman, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipocytes+as+regulators+of+energy+balance+and+glucose+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Adipocytes as regulators of energy balance and glucose homeostasis.</a> Nature. 444, 847-853 (2006).</li>
<li>Farmer, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptional+control+of+adipocyte+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Transcriptional control of adipocyte formation.</a> Cell Metabolism. 4, 263-273 (2006).</li>
<li>Aune, U. L., Ruiz, L., Kajimura, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+Differentiation+of+Stromal+Vascular+Cells+to+Beige%2FBrite+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation and Differentiation of Stromal Vascular Cells to Beige/Brite Cells.</a> J Vis Exp. , (2013).</li>
<li>Hsu, J. M., Ding, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+polyunsaturated+fatty+acids+on+the+expression+of+transcription+factor+adipocyte+determination+and+differentiation-dependent+factor+1+and+of+lipogenic+and+fatty+acid+oxidation+enzymes+in+porcine+differentiating+adipocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Brit+J+Nutr%22%5BJournal%5D)">Effect of polyunsaturated fatty acids on the expression of transcription factor adipocyte determination and differentiation-dependent factor 1 and of lipogenic and fatty acid oxidation enzymes in porcine differentiating adipocytes.</a> Brit J Nutr. 90, 507-513 (2003).</li>
<li>Hsu, J. M., Wang, P. H., Liu, B. H., Ding, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+dietary+docosahexaenoic+acid+on+the+expression+of+porcine+lipid+metabolism-related+genes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Anim+Sci%22%5BJournal%5D)">The effect of dietary docosahexaenoic acid on the expression of porcine lipid metabolism-related genes.</a> J Anim Sci. 82, 683-689 (2004).</li>
<li>Liu, B. H., Kuo, C. F., Wang, Y. C., Ding, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+docosahexaenoic+acid+and+arachidonic+acid+on+the+expression+of+adipocyte+determination+and+differentiation-dependent+factor+1+in+differentiating+porcine+adipocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Anim+Sci%22%5BJournal%5D)">Effect of docosahexaenoic acid and arachidonic acid on the expression of adipocyte determination and differentiation-dependent factor 1 in differentiating porcine adipocytes.</a> J Anim Sci. 83, 1516-1525 (2005).</li>
<li>Ou, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unsaturated+fatty+acids+inhibit+transcription+of+the+sterol+regulatory+element-binding+protein-1c+%28SREBP-1c%29+gene+by+antagonizing+ligand-dependent+activation+of+the+LXR%5BTitle%5D)+AND+%22P+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">Unsaturated fatty acids inhibit transcription of the sterol regulatory element-binding protein-1c (SREBP-1c) gene by antagonizing ligand-dependent activation of the LXR.</a> P Natl Acad Sci USA. 98, 6027-6032 (2001).</li>
<li>Sekiya, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polyunsaturated+fatty+acids+ameliorate+hepatic+steatosis+in+obese+mice+by+SREBP-1+suppression%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Polyunsaturated fatty acids ameliorate hepatic steatosis in obese mice by SREBP-1 suppression.</a> Hepatology. 38, 1529-1539 (2003).</li>
<li>Xu, J., Nakamura, M. T., Cho, H. P., Clarke, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sterol+regulatory+element+binding+protein-1+expression+is+suppressed+by+dietary+polyunsaturated+fatty+acids+-+A+mechanism+for+the+coordinate+suppression+of+lipogenic+genes+by+polyunsaturated+fats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Sterol regulatory element binding protein-1 expression is suppressed by dietary polyunsaturated fatty acids - A mechanism for the coordinate suppression of lipogenic genes by polyunsaturated fats.</a> J Biol Chem. 274, 23577-23583 (1999).</li>
<li>Ding, S. T., McNeel, R. L., Mersmann, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conjugated+linoleic+acid+increases+the+differentiation+of+porcine+adipocytes+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Nutr+Res%22%5BJournal%5D)">Conjugated linoleic acid increases the differentiation of porcine adipocytes in vitro.</a> Nutr Res. 20, 1569-1580 (2000).</li>
<li>Ding, S., Mersmann, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fatty+acids+modulate+porcine+adipocyte+differentiation+and+transcripts+for+transcription+factors+and+adipocyte-characteristic+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nutr+Biochem%22%5BJournal%5D)">Fatty acids modulate porcine adipocyte differentiation and transcripts for transcription factors and adipocyte-characteristic proteins.</a> J Nutr Biochem. 12, 101-108 (2001).</li>
<li>Liu, L. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serum+amyloid+A+induces+lipolysis+by+downregulating+perilipin+through+ERK1%2F2+and+PKA+signaling+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Obesity+%28Silver+Spring%22%5BJournal%5D)">Serum amyloid A induces lipolysis by downregulating perilipin through ERK1/2 and PKA signaling pathways.</a> Obesity (Silver Spring. 19, 2301-2309 (2011).</li>
<li>Chen, Y. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Docosahexaenoic+acid+suppresses+the+expression+of+FoxO+and+its+target+genes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nutr+Biochem%22%5BJournal%5D)">Docosahexaenoic acid suppresses the expression of FoxO and its target genes.</a> J Nutr Biochem. 23, 1609-1616 (2012).</li>
<li>Lin, Y. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+glucose+and+lipid+metabolism+by+porcine+adiponectin+receptor+1-transgenic+mesenchymal+stromal+cells+in+diet-induced+obese+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotherapy%22%5BJournal%5D)">Modulation of glucose and lipid metabolism by porcine adiponectin receptor 1-transgenic mesenchymal stromal cells in diet-induced obese mice.</a> Cytotherapy. 15, 971-978 (2013).</li>
<li>Schipper, B. M., Marra, K. G., Zhang, W., Donnenberg, A. D., Rubin, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regional+anatomic+and+age+effects+on+cell+function+of+human+adipose-derived+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Plast+Surg%22%5BJournal%5D)">Regional anatomic and age effects on cell function of human adipose-derived stem cells.</a> Ann Plast Surg. 60, 538-544 (2008).</li>
<li>Efimenko, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose-Derived+Mesenchymal+Stromal+Cells+From+Aged+Patients+With+Coronary+Artery+Disease+Keep+Mesenchymal+Stromal+Cell+Properties+but+Exhibit+Characteristics+of+Aging+and+Have+Impaired+Angiogenic+Potential%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Adipose-Derived Mesenchymal Stromal Cells From Aged Patients With Coronary Artery Disease Keep Mesenchymal Stromal Cell Properties but Exhibit Characteristics of Aging and Have Impaired Angiogenic Potential.</a> Stem Cell Transl Med. 3, 32-41 (2014).</li>
<li>Akanbi, K. A., Brodie, A. E., Suryawan, A., Hu, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+age+on+the+differentiation+of+porcine+adipose+stromal-vascular+cells+in+culture%5BTitle%5D)+AND+%22J+Anim+Sci%22%5BJournal%5D)">Effect of age on the differentiation of porcine adipose stromal-vascular cells in culture.</a> J Anim Sci. 72, 2828-2835 (1994).</li>
<li>Mizuno, H., Tobita, M., Uysal, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Concise+Review%3A+Adipose-Derived+Stem+Cells+as+a+Novel+Tool+for+Future+Regenerative+Medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Concise Review: Adipose-Derived Stem Cells as a Novel Tool for Future Regenerative Medicine.</a> Stem Cells. 30, 804-810 (2012).</li>
<li>Gimble, J. M., Katz, A. J., Bunnell, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose-derived+stem+cells+for+regenerative+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Cir+Res%22%5BJournal%5D)">Adipose-derived stem cells for regenerative medicine.</a> Cir Res. 100, 1249-1260 (2007).</li>
<li>Tobita, M., Orbay, H., Mizuno, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose-derived+Stem+Cells%3A+Current+Findings+and+Future+Perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22Discov+Med%22%5BJournal%5D)">Adipose-derived Stem Cells: Current Findings and Future Perspectives.</a> Discov Med. 57, 160-170 (2011).</li>
<li>Baer, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose-Derived+Stem+Cells+and+Their+Potential+to+Differentiate+into+the+Epithelial+Lineage%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Dev%22%5BJournal%5D)">Adipose-Derived Stem Cells and Their Potential to Differentiate into the Epithelial Lineage.</a> Stem Cell Dev. 20, 1805-1816 (2011).</li>
<li>Kakudo, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose-derived+regenerative+cell+%28ADRC%29enriched+fat+grafting%3A+optimal+cell+concentration+and+effects+on+grafted+fat+characteristics%5BTitle%5D)+AND+%22J+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Adipose-derived regenerative cell (ADRC)enriched fat grafting: optimal cell concentration and effects on grafted fat characteristics.</a> J Transl Med. 11, (2013).</li>
<li>Lunney, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+swine+biomedical+model+genomics%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Biol+Sci%22%5BJournal%5D)">Advances in swine biomedical model genomics.</a> Int J Biol Sci. 3, 179-184 (2007).</li>
<li>Prather, R. S., Lorson, M., Ross, J. W., Whyte, J. J., Walters, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetically+Engineered+Pig+Models+for+Human+Diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Anim+Biosci%22%5BJournal%5D)">Genetically Engineered Pig Models for Human Diseases.</a> Annu Rev Anim Biosci. 1, 203-219 (2013).</li>
<li>Vodicka, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+miniature+pig+as+an+animal+model+in+biomedical+research%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Ny+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">The miniature pig as an animal model in biomedical research.</a> Ann Ny Acad Sci. 1049, 161-171 (2005).</li>
<li>Wolf, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenic+pigs+as+models+for+translational+biomedical+research%5BTitle%5D)+AND+%22Transgenic+Res%22%5BJournal%5D)">Transgenic pigs as models for translational biomedical research.</a> Transgenic Res. 20, 1150-1150 (2011).</li>
<li>Lindroos, B., Suuronen, R., Miettinen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Potential+of+Adipose+Stem+Cells+in+Regenerative+Medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Rev+Rep%22%5BJournal%5D)">The Potential of Adipose Stem Cells in Regenerative Medicine.</a> Stem Cell Rev Rep. 7, 269-291 (2011).</li>
<li>Gimble, J. M., Katz, A. J., Bunnell, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose-derived+stem+cells+for+regenerative+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Adipose-derived stem cells for regenerative medicine.</a> Circ Res. 100, 1249-1260 (2007).</li>
<li>Cignarelli, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+adipose+tissue+stem+cells%3A+relevance+in+the+pathophysiology+of+obesity+and+metabolic+diseases+and+therapeutic+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Rev+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Human adipose tissue stem cells: relevance in the pathophysiology of obesity and metabolic diseases and therapeutic applications.</a> Expert Rev Mol Med. 14, (2012).</li>
<li>Cawthorn, W. P., Scheller, E. L., MacDougald, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose+tissue+stem+cells%3A+the+great+WAT+hope%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Endocrinol+Metab%22%5BJournal%5D)">Adipose tissue stem cells: the great WAT hope.</a> Trends Endocrinol Metab. 23, 270-277 (2012).</li>
<li>Banas, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose+tissue-derived+mesenchymal+stem+cells+as+a+source+of+human+hepatocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Adipose tissue-derived mesenchymal stem cells as a source of human hepatocytes.</a> Hepatology. 46, 219-228 (2007).</li>
<li>Bruckner, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+fat+option+for+the+pig%3A+hepatocytic+differentiated+mesenchymal+stem+cells+for+translational+research%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">A fat option for the pig: hepatocytic differentiated mesenchymal stem cells for translational research.</a> Exp Cell Res. 321, 267-275 (2014).</li>
<li>Anghileri, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuronal+Differentiation+Potential+of+Human+Adipose-Derived+Mesenchymal+Stem+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Dev%22%5BJournal%5D)">Neuronal Differentiation Potential of Human Adipose-Derived Mesenchymal Stem Cells.</a> Stem Cells Dev. 17, 909-916 (2008).</li>
<li>Huang, T. T., He, D. S., Kleiner, G., Kuluz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuron-like+differentiation+of+adipose-derived+stem+cells+from+infant+piglets+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22J+Spinal+Cord+Med%22%5BJournal%5D)">Neuron-like differentiation of adipose-derived stem cells from infant piglets in vitro.</a> J Spinal Cord Med. 30, S35-S40 (2007).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

כאן אנו מציגים מערכת הסלולר אמינה ללמוד פיתוח רקמת שומן בתרבות תא ראשונית של pADSC. לעומת שורות תאים הונצח אחרים, שיטה זו מספקת דרך נוחה לבודד כמויות גדולות של תאי גזע mesenchymal למבוגרים באיכות גבוהה כי ניתן להחיל ללמוד תהליכי התמיינות של adipocytes או שושלות mesenchymal אחרים הקשורים לפיתוח חיה in vivo. הצעד השונה הקריטי פרוטוקול זה הוא כי אנו מפיקים pADSC באמצעות חזרזיר בן 7- 9-יום כי זה קל להתמודד עם החזרזיר הקטן לעומת חזירים מבוגרים דומה למינים אחרים 19,20, תשואת multipotency של pADSC פוחת ככל 21 גילי חזיר. מקורות של תאי גזע אפשריים כוללים תאי גזע עובריים (ESC), תאי גזע מושרים (iPSC), ותאי גזע בוגרים לאחר לידה. האילוץ של ADSC, מסווגים תאי גזע מולטיפוטנטיים בוגרים, היא multipotency של תאי גזע בוגריםלהבדיל שושלות מסתעפות מוגבל בהשוואה יחסית עם ESC או iPSC. עם זאת, סוגיות אתיות לגבי הגזירה של נכסים ESC ו בשעור של iPSC לרסן את היישום של ESC ו iPSC 22,23. לכן, חוקרים רבים התמקדו בתאי גזע בוגרים עם מאמצים לחיזוק pluripotency. המקור הנפוץ ביותר של תאי גזע mesenchymal המבוגרים (MSC), אשר מזה זמן רב למדו, הוא בתאי גזע mesenchymal עצם שמקורם במח 24. עם זאת, מח עצם קציר נחשב הליך כואב יחסית. דאגה נוספת היא שהתשואה של תאי גזע ממח העצם היא סופית. Aspirates מח עצם להניב ממוצע של 6 × 10 6 התאים בעלי הגרעין לכל מ&quot;ל, ו- MSC רק מייצגים 0.001 ל -0.01% מכלל התאים בעלי הגרעין. לאחר ששקל החסרונות הללו, ADSC מוצע כמקור מתבלט פחות להשיג תאי גזע מולטיפוטנטיים 25,26. מגבלות על השימוש ADSC ב regeneraהרפואה המופרזת תלויה, במידה רבה על תשואת תא ואיכות. לכן, המשמעות של העסקת חזירים לבודדים ADSC בפרוטוקול זה היא להניב כמות גדולה של תאי גזע בוגר באיכות גבוהה. החזיר הוא מודל חיה שימושי מייצג בני אדם בגלל גודל האיבר להשוות ודומה פיזיולוגית וביוכימיים רבים בין המינים 27-30. רכישת hADSC מחברות מסחריות היא יקרה ובמקרים רבים התאים נפלו קורבן למניפולציות, passaged או cryopreserved. רכישת דגימות קליניות בבני אדם היא יחסית קשה בגלל בעיות אתיות וייצור של ADSC מוגבל. אנו שואבים כ 6 x 10 5 hADSC לכל גרם שומן לאחר עיכול collagenase. עם 100 גרם של רקמת שומן חזה נשית (דגימה ממוצעת), סך של 6 x 10 -7 תאים ניתן לקצור. באמצעות עכבר פרט, התשואה היא מצומצם אף יותר. סך של 1 x 10 6 תאים ניתן לקצור מ -0.4 גרם של i העכבר תת עוריתרקמת שומן nguinal משתי הרגליים של עכבר FVB המבוגר (גיל 6-8 שבועות). אולם אחד חזיר פרט (7 עד 9 ימים), סך של 2 x 10 8 תאים ניתן לקצור בקלות מ -60 גרם של רקמה שומנית תת עורית המתקבלת דיפו הגב השומן. PADSC נגזר בפרוטוקול זה יש multipotency מלא mesenchymal מסוג וסמנים תאי גזע mesenchymal המתאים. לכן, pADSC הוא מקור נוח להשיג כמויות גדולות של תאי גזע בוגרים מבלי להתפשר על איכות תאי גזע. היישום של pADSC אינו מוגבל לפענוח בידול adipocyte כולל adipogenesis ו lipogenesis. לאחרונה, ADSC הפכו מקור פופולרי של תאי גזע בתחום 22,31,32 רפואה רגנרטיבית. לעומת מקורות אחרים של תאי גזע, ADSC לשמור על יתרון ייחודי של להיות נגיש בקלות בשפע, multipotency החזק שלהם הודגם להיות מקור מבטיח טיפול בתאי גזע ודואר רקמותngineering 22,33,34. הנגישות הקלה של רקמת שומן גורמת ADSC אחת הדרכים פולשניות לפחות לקבל אבות multipotent. לאחרונה, אנו הבדיל pADSC לאשכולות גלוקוז-תגובה מפרישי אינסולין, המציין כי pADSC אינם מוגבלים בידול mesenchymal (נתונים שלא פורסמו). אחרים גם הוכחו כי ADSC יכול להיות מובחן לתוך תאים מסוגים רבים שמקורם שכבות ניבטות אחרות כגון hepatocytes endodermal (מ hADSC 35 או pADSC 36) או נוירונים ectodermal (מ hADSC 37 או pADSC 38). לפיכך, pADSC יוכל לשמש עבור תרופת תפוקה גבוהה או הקרנה ביולוגית על ידי הפניית תאי לתהליכי בידול מסתעפים להניב שושלות רצויות. לכן, pADSC נגזר בפרוטוקול זה יש פוטנציאל היישום בטיפול בתאי גזע והשתלת רקמות למחקר רפואה רגנרטיבית.

השמנה, נוכח כ -30% מהאוכלוסייה בארצות הברית, עם אינדקס מסת גוף מעל 30, התפתחה תופעת 1 בעולם נפוצה. השמנה נוטה להוביל לסיבוכים הקשורים כולל מחלות לב וכלי דם, סוכרת מסוג 2, וסרטן 2-4. לכן, התמודדות עם השמנת יתר מהווה עדיפות חשובה. ההשמנה מתבטאת רחבה מסיבית של רקמות שומן, ומיוחסי צריכת מזון מופרז סגנון חיים בישיבה בחברה מודרנית. לפיכך, פיענוח תקנה תעתיק של adipogenesis ו lipogenesis יכול לקיים הבטחה לטיפול בהשמנת יתר או סוכרת 5. 3T3-L1, 3T3-F442A שורות תאי adipogenic עכבר אחרות יושם ללמוד adipogenesis או lipogenesis במהלך התפתחות רקמת שומן. עם זאת, יש כמה סתירות מנגנוני ויסות בין שורות תאים במבחנה ובבעלי חיים in vivo 6. ראשיים שומן-דרעיתאי גזע ved (ADSC) בשבריר התא וסקולרית-סטרומה ניתן לבודד ישירות שומן לבן מושרה להבדיל. דיפרנציאציה של ADSC לתוך adipocytes ככל הנראה משכפלת את תהליך adipogenesis ו lipogenesis בפיתוח רקמה שומנית in vivo 7. חזירים הם מודל החיה מתאימה ללימוד adipogenesis ו lipogenesis בפיתוח רקמה שומנית. מחקרים חזירי הקודם שלנו 8-10 להוכיח כי הביטוי של 1c גורם שעתוק מחייבים אלמנט מווסת sterol (SREBP1c), גורם שעתוק חשוב הידוע לווסת שעתוק של synthase חומצות שומן lipogenic, מעוכבת על ידי חומצות שומן רב בלתי רווי (PUFA) בכבד חזירי ורקמות שומן. הביטוי של SREBP1c החזירי ירד ב PUFA in vivo ו במבחנה דומה מינים אחרים כגון בני אדם ועכברים 11-13. מחקרי חזיר אלה במבחנה הם בעיקר diffadipocytes erentiated נגזר ADSC חזירי (pADSC). לכן, תרבית תאים ראשונית זו של pADSC יכול לשמש כדי לשמש כמערכת הסלולר אמין ללמוד פיתוח רקמת שומן או יישומים תאי גזע אחרים.

<table><tbody><tr><td><חזק>ריאגנטים</חזקים></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>קולגנאז, סוג II</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>C6885</td><td></td></tr><tr><td>DMEM, גלוקוז גבוה, פירובט</td><td>Life Technologies</td><td>11995-040</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F-12, HEPES</td><td>Life Technologies</td><td>11330-032</td><td></td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי (FBS)&nbsp;</td><td>תעשיות ביולוגיות</td><td>04-001-1&nbsp; &nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת פניצילין-סטרפטומיצין-אמפוטריצין B (P/S/A)</td><td>תעשיות ביולוגיות</td><td>03-033-1</td><td>לשימוש באנטיביוטיקה ואנטי-פטרייה</td></tr><tr><td>&אלפא; MEM, ללא נוקלאוזידים&nbsp;</td><td>Life Technologies</td><td>12561-049</td><td></td></tr><tr><td>מאגר ליזה ACK&nbsp;</td><td>Life Technologies</td><td>A10492-01</td><td></td></tr><tr><td>טריפסין-EDTA (0.25%), פנול אדום</td><td>Life Technologies</td><td>25200072</td><td></td></tr><tr><td>CD4a-PE</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>SAB4700063</td><td></td></tr><tr><td>CD29-PE</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>SAB4700398</td><td></td></tr><tr><td>CD31-PE</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>SAB4700467</td><td></td></tr><tr><td>CD44-PE</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>SAB4700183</td><td></td></tr><tr><td>CD45-PE</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>SAB4700483</td><td></td></tr><tr><td>CD90-PE</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>SAB4700686</td><td></td></tr><tr><td>HLA Class I-PE (MHC I)&nbsp;</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>SAB4700640</td><td></td></tr><tr><td>HLA-DR-PE (MHC II)&nbsp;</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>SAB4700662</td><td></td></tr><tr><td>אינסולין&nbsp;</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>I9278</td><td></td></tr><tr><td>3,3',5-טריודו-L-תירונין (T3)</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>T6397</td><td></td></tr><tr><td>טרנספרין&nbsp;</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>T2036</td><td></td></tr><tr><td>3-איזובוטיל-1-מתילקסנטין (IBMX)</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>I7018</td><td></td></tr><tr><td>דקסמתזון&nbsp;</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>D4902</td><td></td></tr><tr><td>רוזיגליטזון</td><td>קיימן</td><td>71740</td><td></td></tr><tr><td>&בטא;-גליצרופוספט&nbsp;</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>G9422</td><td></td></tr><tr><td>2-פוספו-L-חומצה אסקורבית&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>49752</td><td></td></tr><tr><td>TGFB1 חלבון אנושי רקומביננטי&nbsp;</td><td>מו"פ D מערכות&nbsp;</td><td>240-B-002</td><td></td></tr><tr><td>שמן אדום O&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>O0625</td><td></td></tr><tr><td>Alizarin Red S</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A5533</td><td></td></tr><tr><td>Toluidine Blue O</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>198161</td><td></td></tr><tr><td>Name</strong</td><td>>Company</td><td>Catalog Number</td><td>Comments</strong</td></tr><tr><td>>Equipment</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>להבי פלדת פחמן</td><td>תומאס סיינטיפיק</td><td>6727C18</td><td></td></tr><tr><td>פלקון 100 ומיקרו; מסננת תאים m</td><td>קורנינג&nbsp;</td><td>352360</td><td></td></tr><tr><td>פלקון צלחת 6 בארות</td><td>קורנינג&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>353046 פלקון 100 מ"מ&nbsp; צלחת</td><td>קורנינג&nbsp;</td><td></td><td></td>353003</tr></tbody></table>

בידוד ובידול של תאי גזע נגזר שומן מרקמות שומן תת עורי בשר חזירים

Isolation and Differentiation of Adipose-Derived Stem Cells from Porcine Subcutaneous Adipose Tissues

השמנת יתר היא מגיפה עולמית חסרת מעצורים. חשיפת בקרות מולקולריות בהתפתחות רקמת השומן טומנת בחובה הבטחה לטיפול בהשמנת יתר או סוכרת. למרות שהוקמו קווי תאים אדיפוגניים אימורטליים רבים, תאי גזע שמקורם בשומן מחלק כלי הדם הסטרומלי של רקמות שומן לבנות תת עוריות מספקים מערכת תאית אמינה ex vivo הרבה יותר קרובה להתפתחות שומן in vivo. תאי גזע שמקורם בשומן חזיר (pADSC) מבודדים מחזירונים בני 7 עד 9 ימים. מצבור השומן הלבן הגבי של רקמות שומן תת עוריות חזיריות פרוס, טחון וקולגנאז מתעכל. pADSC אלה מציגים פוטנציאל חזק להתמיין לאדיפוציטים. יתר על כן, ל-pADSC יש גם מולטיפוטנטיות, המוערכת על ידי סמנים סלקטיביים של תאי גזע, להתמיין לסוגי תאים מזנכימליים שונים כולל אדיפוציטים, אוסטאוציטים וכונדרוציטים. ניתן להשתמש ב-pADSC אלה להבהרת מתגים מולקולריים בוויסות התמיינות אדיפוציטים קלאסיים או בכיוון לסוגי תאים מזנכימליים אחרים ממקור מזודרמלי. יתר על כן, שושלות מורחבות לתאים ממוצא אקטודרמלי ואנדודרמלי הושגו לאחרונה. לכן, pADSC הנגזר בפרוטוקול זה מספק מקור שופע וניתן להערכה של תאי גזע מזנכימליים בוגרים עם מולטיפוטנטיות מלאה לחקר התפתחות השומן ויישומו בהנדסת רקמות של רפואה רגנרטיבית.

PADSC נגזר שומן תת עורי מגבה חזיר היה זורע על צלחות התרבות או מנות שמוצג באיור 2. המורפולוגיה של pADSC נגזר שבר סטרומה-וסקולרית דומה עכבר או ADSC אדם. עשרים וארבע שעות לאחר הזריעה, pADSC subconfluent הם דבקו ויש להם מורפולוגיה פיברובלסטים דמוית מורחב (איור 2 א). PADSC יהפוך ומחובר בתוך 72 שעות והם מוכנים adipocyte או בידול mesenchymal-סוג אחר (איור 2 ב). pADSC להפגין פוטנציאל adipogenic חזק לאחר אינדוקציה כימית adipocytes הבוגרת ניתן לראות לאחר 9 ימים של בידול עם מעל 90% של pADSCs מראה בידול adipogenic (איור 2 ג). כדי להתמודד עם המאפיינים של pADSC נגזר בפרוטוקול זה, סמני משטח של pADSC הוערכו על ידי cytometry זרימה אנאלייסיס. כפי שניתן לראות בתרשים 3, סמנים משטח עבור בתאי גזע mesenchymal, כולל CD29, CD44, CD90 ו MHC אני (או HLA I), באו לידי ביטוי ביותר. סמנים משטח שלילי, כגון CD4a, CD31, CD45 ו MHC II (או HLA השנייה) היה ניתן להבחין בהן בקושי pADSC נגזר בפרוטוקול (איור 3). תוצאות אלו מראות כי התערוכה pADSC אלה המאפיינים תאי גזע mesenchymal מסוג בלי אנדותל משמעותי או זיהום תאי גזע haematopoietic, כולל אבות מיאלואידית או הלימפה. כדי להמשיך לאשר pADSC מייצגים בתאי גזע mesenchymal, את multipotency של pADSC נבדק על ידי בידול לתוך adipocytes, osteocytes ו chondrocytes. Osteocytes ו chondrocytes adipocytes, אלו הוכתמו על ידי צבעים ספציפיים, O אדום שמן, S האדום Alizarin, ו toluidine כחול O, בהתאמה (איור 4). נתונים אלו מעידים כי פרוטוקול זה שנוצר pADSC כי שמר multipotency עם מאפיינים מלאים הדומה אבות מסוג mesenchymal. <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/53886/53886fig2.jpg" /> איור 2. מורפולוגיה של pADSC מן חזירי בחזרה באזור שומן. (א) subconfluent pADSC דבק והרחיבה לאחר זריעת 24 שעות על צלחת תרבות 6 היטב. (ב) pADSC הפך ומחובר לאחר זריעת 72-h על צלחת תרבות 6 היטב. (C) adipocytes למבוגרים נצפו לאחר 9 ימים של בידול adipogenic מ pADSC. תמונות צולמו ב -100 הגדלת x באמצעות מיקרוסקופ לעומת שלב. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53886/53886fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 3" src="/files/ftp_upload/53886/53886fig3.jpg" /> זיהוי איור 3. של-תאי גזעמשטח סמנים עבור pADSC. 1 x 10 5 של pADSC היו הגיב עם נוגדנים ספציפיים ונותחו עבור סמנים תא גזע על ידי ניתוח תזרים cytometry. המספרים מציינים את אחוז התאים מוכתם באוכלוסייה (אדום) לעומת שליטה בלא כתם. ציר ה- X מייצג את עוצמת הקרינה היחסית. ציר y מייצג את אוכלוסיית התאים. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53886/53886fig3large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 4" src="/files/ftp_upload/53886/53886fig4.jpg" /> בידול איור 4. מולטיפוטנטיים של pADSC. Multipotency של pADSC נקבע תוך הבחנה pADSC לתוך (א) adipocytes, (B) osteocytes (C) chondrocytes וכתמי צבע נציג, O אדום שמן, Alizarin האדום S, ו toluidine כחול O, בהתאמה . אמאGES צולמו (א) 100 x, (ב) 200 x, ו- (ג) 100 x הגדלה באמצעות מיקרוסקופ לעומת שלב, בהתאמה. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53886/53886fig4large.jpg" target="_blank">לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a>

פרוטוקול זה מתאר בידוד של תאי גזע שמקורם בשומן חזיר (pADSC) מרקמות שומן תת עוריות עם בחינת מולטיפוטנטיות. ה-pADSC הרב-פוטנטי משמש לתיחום תהליכים של התמיינות אדיפוציטים ולחקר טרנסדיפרנציאציה לשושלות תאים מרובות של מזנכימה מזודרמית או שושלות נוספות של אקטודרם ואנדודרם למחקרים רגנרטיביים.

Obesity is an unconstrained worldwide epidemic. Unraveling molecular controls in adipose tissue development holds promise to treat obesity or diabetes. ...

המטרה הכללית של הליך זה היא לבודד תאי גזע ממקור שומני מרקמות שומן לבן תת-עורי של חזיר, וזאת כדי להעריך את יכולתם להתמיין לאדיפוציטים מזנכימליים, אוסטאוציטים וכונדרוציטים. שיטה זו יכולה לסייע במתן מענה לשאלות מפתח במחקר על השמנה. היא מהווה כלי יעיל לחשיפת המנגנונים המולקולריים המעורבים בוויסות התפתחות רקמת השומן.היתרון המרכזי של טכניקה זו הוא שניתן לאסוף מספר רב של תאים סטרוווסקולריים, מה שמאפשר ניתוח מעמיק של ביולוגיה ודיפרנציאציה של אדיפוציטים. חשיבותה של טכניקה זו היא למחקר בתרפיה בתאי גזע, שכן תאי גזע המופקים מרקמת שומן של חזיר מראים מולטיפוטנציה ליכולת טרנס-דיפרנציאציה לקווי תאים מרובים. התחל במיקום הגור חזיר בעמדה הפוכה (prone) על שולחן ניתוחים נקי.גלחו את כל הפרווה לאורך קו האמצע מהצוואר ועד הזנב, וקרצפו את העור הגבי ה-dorsal עם Povidone iodine בריכוז 7.5% שלוש פעמים. לאחר הקרצוף השלישי, השאירו את היוד על פני העור למשך כ-10 דקות. לאחר מכן, רססו את העור ב-70% ethanol.השתמשו ברפידות גזה ספוגות באתנול כדי לנגב את העור בכיוון אחד להסרת החומר המחטא, עד שלא ייראה צבע ניכר. לאחר מכן, בצעו חתך מאזור הצוואר ומטה לכיוון הרגל. לאחר מכן, בעודכם מחזיקים את השומן והעור בעזרת פינצטה, השתמשו בסקלפל כדי להפריד את שכבת השומן הגבית של החזיר מרקמות השומן התת-עוריות ואת שכבת העור הסמוכה מהשרירים.טבול מיד את רקמת העור והשומן בכלי כימי (beaker) סטרילי בנפח 200-milliliter, המכיל DMEM ללא סרום בטמפרטורה של 37-degrees Celsius, ורסס את החלק החיצוני של הכלי ב-70%ethanol. לאחר מכן, הנח את הכלי בתוך מבת תרביות תחת זרימה למינרית והנח לצדו כיסוי רב-שכבתי סטרילי מנייר אלומיניום בגודל 40 על 30-centimeter. העבר את הרקמה אל על נייר האלומיניום, כאשר העור פונה כלפי מטה.השתמשו בפינצטה ובמספריים כדי להסיר את שאריות רקמת השריר מרקמת השומן. חתכו את השומן לחתיכות ריבועיות בגודל 7 על 7 סנטימטרים, ולאחר מכן העבירו את חתיכות השומן לכלי חמד (beaker) סטרילי חדש בנפח 200 מיליליטר המכיל DMEM ללא סרום בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס. כעת, הניחו מחזיק פרוסות מותאם אישית, המצויד בלהב חיתוך מפלדת פחמן, על נייר האלומיניום המכסה, והניחו את אחת מחתיכות השומן עלו המכשיר כאשר שכבת השומן פונה כלפי מטה.חתכו את השומן לפרוסות בעובי של כ-1 מילימטר, קרוב ככל האפשר לעור אך ללא חיתוך שלו. לאחר מכן, השתמשו במספריים כדי לקצוץ את חתיכות הרקמה השומנית לדוגמאות קטנות ככל האפשר, והוסיפו אותן לבקבוק ארלנמאייר של 250 מיליליטר המכיל תוכה לעיכול מסוננת המועשרת בקולגנאז. דגרו את הבקבוק עם ערבול למשך 90 דקות ב-45 RPM, במנער אורביטלי בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס.כאשר תווך העיכול הופך למישחה, ללא גושי רקמה משמעותיים, יש לעצור את העיכול על ידי הוספת נפח שווה של תווך תרבית המכיל DMEM F-12 עם 10%FBS. כדי לאסוף את התאי הגזע המופקים מרקמת שומן של חזיר, סננו את תרחיף רקמת השומן המעובדת דרך שכבה אחת של שיפון אל תוך בקבוק סרולוגי סטרילי בנפח 250 מיליליטר, תוך שימוש בפינצטה ללחיצה על מרכז השיפון כדי להנחות ולסייע למעבר של החומר המעובד. סחטו וסובבו את השיפון באמצעות הפינצטה כדי להשלים את המעבר, והעבירו את התווך לארבעה מבחנות צנטריפוגה קוניות בנפח 50 מיליליטר.אספו את התאים הסטרומליים-וסקולריים באמצעות סרטיפוגציה. לאחר מכן, שפכו את על-המשקע מבלי להפריע למשקעים כדי להסיר את רובה של שכבת השומן העליונה המכילה את האדיפוציטים הבוגרים. לאחר מכן, השעיקו שוב את המשקעים ב-10 milliliters של DMEM באמצעות פיפטור וניעור עדין.סבבו שוב את התאים במערכת צנטריפוגה ותלו את המשקעים מחדש ב-10 milliliters של ACK lysis buffer. לאחר שבע דקות בטמפרטורת החדר, עצרו את ליזיס כדוריות הדם האדומות על ידי הוספה של 10 milliliters של DMEM לכל מבנה, תוך ניעור עדין של המבחנות לערבוב. לאחר מכן, סבבב את התאים שוב במערכת צנטריפוגה.שטוף את התאים פעמיים נוספות עם 10 milliliters של DMEM ולאחר מכן איסוף את העל-נוזלים (supernatants) דרך מסננת של 100-micron לתוך מבחנה קונית אחת של 50-milliliter. בצע פיפטינג עדין של תרחיף התאים מספר פעמים כדי להפיץ את התאים באופן שווה, וספור את התאים בשיטת Trypan Blue exclusion. לבסוף, זרע את התאי הגזע המופקים מרקמת שומן של חזיר בצפיפות של 6 × 10⁴ לסנטימטר רבוע בתוך מכל תרבית בגודל המתאים עם מצע גידול תאים.דגרו את התאים בטמפרטורה של 37 °C וב-5% CO2, כדי להקל על היווצרות שכבה אחת (monolayer). המורפולוגיה של תאי גזע מהרקמה השומנית של חזיר שהופקו מהfrakציה הסטרומלית-וסקולרית דומה לזו של תאי גזע מהרקמה השומנית של עכבר או אדם, עם מורפולוגיה דמוית סיבים המתרחבת וניכרת 24 שעות לאחר הזריעה. תאי הגזע מהרקמה השומנית של החזיר מגיעים למצב של התמזגות (confluency) בתוך 72 שעות, ובנקודה זו הם מוכנים להבחנה לאדיפוציטים או להבחנה אחרת מסוג מזנכימלי.תאים אלו מראים גם פוטנציאל אדיפוגני חזק לאחר השראה כימית, ואדיפוקיטים בוגרים ניתנים לצפייה לאחר תשעת ימי דיפרנציאציה, כאשר למעל 90% מתאי הגזע המופקים מרקמת שומן של חזיר נצפתה דיפרנציאציה אדיפוגנית. סממנים שטח של תאי גזע מזנכימליים, כולל CD 29, CD 44, CD 90 ו-MHC 1, מובעים בריכוז גבוה בתאי הגזע המופקים מרקמת שומן של חזיר, בעוד ש-CD 4a, CD 31, CD 45 ו-MHC II כמעט ואינם ניתנים לגילוי, מה שמוכיח כי תאי גזע אלו המופקים מרקמת שומן של חזיר מראים מאפיינים מסוג מזנכימלי ללא זיהום משמעותי של תאי גזע אנדותליים או המטופויטיים. יתר על כן, ניתן לזהות את תאי הגזע המופקים מרקמת שומן של חזיר לאחר דיפרנציאציה כאדיפוקיטים, אוסטאוקיטים או קונדרוציטים, באמצעות שימוש בצבעים ספציפיים לצביעת רקמות, מה שמוכיח כי תאים אלו המופקים מהfrakציה הסטרומלית-וסקולרית שומרים על מולטיפוטנציאליות האופיינית לפרוגניטורים מסוג מזנכימלי.במהלך ביצוע פרוצדורה זו, חשוב לזכור להקפיד על טכניקה אספטית תקינה לתרביות תאים ולבצע את כל השלבים במהירות המרבית, כדי למקסם את חיוניות התאים. לאחר רכישת מיומנות בשיטה, ניתן לאסוף תאים משני עד שלושה חזירים בתוך שש שעות, במידה והטכניקה מבוצעת כהלכה.טכניקה סטנדרטית זו סללה את הדרך עבור חוקרי השמנה בתחום הסוכרת לבחון את המתגים המולקולריים, כגון גורמי שעתוק השולטים בהבחנה של אדיפוציטים. לאחר צפייה בסרטון זה, תהיה בידיכם הבנה טובה של השלבים לבידוד תאי גזע ממקור שומני של חזירים, ולהערכת יכולתן הרב-גונית של תאים אלה להבחין לאדיפוציטים, אוסטאוציטים וכונדרוציטים.

isolation-differentiation-adipose-derived-stem-cells-from-porcine

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

ביולוגיה התפתחותית

סרטון זה מדגים טכניקה לבידוד וטיפוח תאי גזע שמקורם בשומן (ADSCs) המסומנים באופן פלואורסצנטי מרקמת השומן של קשת פריאורטית. לאחר הבידוד, NCADSCs מזוהים, ממוינים באמצעות מיון תאים המופעלים על ידי פלואורסצנטיות, ולאחר מכן תרבית על צלחת, קידום התפשטות תאים.

בידוד תאי גזע שמקורם בשומן מרקמת שומן פריאורטית מורין

ב2001, חוקרים באוניברסיטת UCLA תאר את בידודה של אוכלוסייה של תאי גזע בוגרים, המכונה תאי גזע שמקורם בשומן או ASCs, מרקמת שומן. מאמר זה מתאר את הבידוד של ASCs מlipoaspirates באמצעות פרוטוקול עיכול ידני, האנזימטית באמצעות collagenase.

בידוד ידני של תאי גזע שמקורם בשומן מLipoaspirates האדם

פרוטוקול זה מתאר את הגישה הטכנית לבידוד תת-אוכלוסיות תאי סטרומה אדיפוגניים ופיברו-דלקתיים ממחסני רקמת שומן לבן תוך בטני (WAT) על ידי מיון תאים המופעלים על ידי פלואורסצנטיות או הפרדת חרוזים אימונומגנטית.

בידוד תת-אוכלוסיות תאי סטרומה אדיפוגניים ופיברו-דלקתיים ממחסני שומן תוך-בטניים של מורין

אנו מציגים שיטה פשוטה לבודד תאי אב שומן קיימא מאוד מרפידות שומן אפידיליות עכבר באמצעות מיון תאים המופעלים פלואורסצנטיות.

הכנת תאי אדיפוס אבות מרקמות שומן אפידימליות עכבר

במאמר זה נתאר בידוד של תאי גזע שמקורם במקוק רזוס (ADSCs) באמצעות פרוטוקול עיכול רקמות אנזימטי. לאחר מכן, אנו מתארים התפשטות ADSC הכוללת ניתוק תאים, ספירה וציפוי. לבסוף, התמיינות ADSC מתוארת באמצעות סוכני גרימה אדיפוגניים ספציפיים. בנוסף, אנו מתארים טכניקות צביעה כדי לאשר את ההבחנה.

בידוד, שגשוג והתמיינות של תאי גזע שמקורם בשומן מקוק רזוס

אנו מציגים שיטה להזרקת תאים באמצעות טכנולוגיית הזרקת מים ללא מחט יחד עם המשך של חקירות לאחר הלידה במונחים של כדאיות תאית, התפשטות ומדידות גמישות.

הזרקת תאי סטרומה שמקורם ברקמת שומן חזירית באמצעות טכנולוגיית Waterjet

תאי גזע מזנכימליים שמקורם ברקמת השומן (Ad-MSCs) יכולים להיות מקור פוטנציאלי של MSCs המתמיינים לתאים המייצרים אינסולין (IPCs). בפרוטוקול זה, אנו מספקים שלבים מפורטים לבידוד ואפיון של Ad-MSCs אפידידימליים של חולדות, ולאחר מכן פרוטוקול פשוט וקצר ליצירת IPCs מאותם Ad-MSCs של חולדה.

בידוד של תאי גזע מזנכימליים של רקמת שומן חולדה לצורך התמיינות לתאים המייצרים אינסולין

פרוטוקול זה מתאר מתודולוגיה לבידוד וזיהוי תאי גזע מזנכימליים (MSC) שמקורם ברקמת שומן מחולדות Sprague Dawley.

בידוד וזיהוי תאי גזע מזנכימליים שמקורם ברקמת שומן של חולדות Sprague Dawley

פרוטוקול זה מתאר את הבידוד החצי-אוטומטי של מקטע כלי הדם סטרומה (SVF) מרקמת השומן של מורין כדי להשיג קדם-אדיפוציטים ולהשיג התמיינות אדיפוציט במבחנה. שימוש בדיסוציאטור רקמות לעיכול קולגנאז מפחית את השונות הניסיונית ומגביר את יכולת הרבייה.

בידוד חצי אוטומטי של מקטע כלי הדם הסטרומלי מרקמת השומן הלבנה באמצעות דיסוציאטור רקמות

במאמר זה אנו מתארים את הבידוד, התרבית והאינדוקציה האידיפוגנית של קדם-אדיפוציטים שמקורם בשברי כלי דם סטרומה מרקמת השומן הפריאו-אורטית של עכבר, מה שמאפשר לחקור את תפקוד רקמת השומן הפריווסקולרית ואת הקשר שלה עם תאי כלי הדם.

בידוד, תרבית ואינדוקציה אדיפוגנית של פרדיפוציטים שמקורם בשבר כלי דם סטרומה מרקמת שומן פריאורטית של עכבר

כאן אנו מציגים שיטה סטנדרטית לבידוד יעיל של תאי גזע ומגדלי שומן שמקורם בשומן, המאופיינת בהפחתה של &gt;90% בזמן העיבוד, חיוניות תאית גבוהה ותאימות רחבה.

בידוד יעיל של תאי גזע ושומנים שמקורם בשומן מרקמת שומן חזיר

למדו לבודד תאי גזע נגזרי שומן מרקמות תת-עוריות של חזירים ולהבדילם לתאי שומן, עצם וסחוס. שיטה זו מאפשרת חקר מנגנונים מולקולריים בביולוגיית השומן ויישומים ברפואה רגנרטיבית.

בידוד ובידול של תאי גזע נגזר שומן מרקמות שומן תת עורי בשר חזירים

גלה סרטונים נוספים