צעד אחר פרוטוקול שלב לכירורגיה subretinal בארנבונים

המטרה הכוללת של התערבות כירורגית זו היא להחליף אפיתל פיגמנט רשתית לא מתפקד, או RPE, כדי למצוא תרופה אפשרית למחלות הקשורות ל-RPE, כגון ניוון מקולרי הקשור לגיל. שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום האופטומטרי לגבי טיפול מבוסס תאים וניוון מקולרי הקשור לגיל. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא עשויה לספק שיטת הובלה למצע החלפת תאים או התקני העברת תרופות לחלל התת-רשתית.

למרות ששיטה זו עשויה לספק תובנה לגבי כריתת זגוגית וניתוחים תת-רשתית בארנבים, היא עשויה לשמש גם על אורגניזמים מודלים אחרים, כגון חזירים, קופים או בני אדם. בדרך כלל, אנשים חדשים בשיטה זו יתקשו, מכיוון שלא רק ניתוח תוך עיני הוא מורכב, אלא גם כוח האדם, הארגון והטכנולוגיה להליך זה חייבים להיות מסונכרנים היטב. מי שידגים את הליך העמסת המכשירים יהיו פביאן תילטגס, פוסט-דוקטורנט, וראלף ברינקן, אח קרצוף כירורגי, שניהם מהמעבדה שלי.

לפני תחילת הניתוח, יש לוודא את רמת ההרדמה המתאימה ולמרוח משחת עיניים על העין האחרת של בעל החיים שלא נותח. לאחר מכן, הניחו את הארנב מתחת למיקרוסקופ כירורגי בצדו השמאלי, כשעין ימין פונה כלפי מעלה והאף מורם מעט על ידי קפל שמיכה. חיטוי העין למשך דקה אחת עם כמה טיפות יוד פובידון.

לאחר מכן, שטפו את העין עם BSS סטרילי, וכסו את ראש החיה בווילון סטרילי עם פתח עיניים חתוך מראש. הניחו חתיכה של וילון חתך כירורגי דביק בגודל 12 על 17 ס"מ מעל העין והשתמשו במספריים כדי לחשוף את העין עם חתך אופקי בקו האמצע. בעזרת קליפרים הפוכים, העבירו את העין למצב מחוזק ואבטחו את הרקמה בתפר משי 3-0.

לאחר מכן, השתמש בזוג מספריים של Vannas כדי לחתוך את הלחמית קרוב ללימבוס, כמילימטר אחד מכלי הדם הסמוכים, ולהגדיל את הצפק במקביל ללימבוס. הפרד בצורה בוטה את הלחמית, ואחריו חתך אנכי מאונך של שישה עד שבעה מילימטרים כדי ליצור T" בלחמית. בצע פריטומיה קטנה נוספת סביב מצב השעה 2.

לאחר מכן, הכנס בזהירות את קצה הלהב של מיקרו-ויטראורטינל בקוטר 23 דרך הסקלרה, כשהוא מצביע לכיוון הקוטב האחורי של העין במרחק של 3.5 מילימטרים מהלימבוס במצב השעה 8. כדי למנוע הגדלת החתך, משוך לאט את הלהב לאותו כיוון והנח מראש תפר ויקריל 7-0. לאחר מכן, הכנס צינורית עירוי צד מותאמת אישית לפתח הסקלרלי, והשתמש בתפר שהוצב מראש כדי לאבטח את הצינורית.

הגדר את הלחץ התוך עיני על 20 עד 24 מילימטרים של כספית. לאחר מכן, השתמש בטרוקר ראש שטוח בגודל 25 כדי לנקב את הסקלרה במיקום השעה 2, והכנס אור נברשת בגודל 25 לתוך היציאה. אבטח את האור עם סרט, והתאם אותו לכ-30% הספק, ולאחר מכן כוונן בנפרד.

השתמש באזמל 20 כדי להסיר את אפיתל הקרנית הבצקתי כדי להקל על הדמיה תוך עינית טובה יותר. כעת, בצעו סקלרוטומיה נוספת עם להב המיקרו-ויטראורטינלי בגודל 23 בשעה 10 והניחו תפר ויקריל 7-0 בצורת U סביב הסקלרה החתוכה מבלי לקשור את הקשר לחלוטין. הכנס את קצה הויטרקטור המהיר לתוך החתך והתחל את כריתת הזגוגית סביב פתח הכניסה.

חותכים את הזגוגית לחתיכות קטנות במקסימום של 2,000 עד 3,000 חתכים לדקה, ממשיכים את כריתת הזגוגית מעל הדיסקה האופטית ומדולריות הפיברה, ושואבים במקסימום של 200 מילימטר כספית. כדי להפריד בעדינות את הזגוגית מהרשתית, החזיקו את הזגוגית מעל הקוטב האחורי והתחתון של הדיסק והמשיכו לשאוב מבלי לחתוך. כאשר ניתוק הזגוגית האחורית הושלם, הזריק תוך זגוגית כ-50 מיקרוליטר מהתרכובת המעניינת כדי לדמיין את הזגוגית הצפה במהלך הסרתו הכמעט מוחלטת.

לאחר הכנת העין, יש לשטוף את תרבית תאי ההשתלה שלוש פעמים עם BSS בדרגת עיניים ללא תוסף. לאחר מכן, מלאו צלחת תרבית תאים בגודל 100 על 20 מילימטר ב-10 מיליליטר BSS בדרגת עיניים והוסיפו את תוספת תרבית התאים למנה. מרכז את המנה מתחת למיקרוסקופ אור, והשתמש במחט חלולה אליפסה חדה בהתאמה אישית כדי לנקב מצע שטוח בצורת שעועית בגודל 2.4 על 1.1 מילימטר עם שני קצוות ארוכים ושני קצוות עגולים מחוץ לתרבית התא.

הציפו בעדינות את המחט דרך היציאה השנייה ב-BSS כדי לשטוף את השתל לתוך צלחת תרבית התאים המלאה ב-BSS. כדי להשיג קצה שלישי, בצע חתך של 0.5 מיליליטר באחד הקצוות העגולים של השתל והשתמש במלקחיים לקילוף ממברנה בגודל 23 כדי להעביר את השתל לתחנת ההעמסה המותאמת אישית. ודא שהשתל נמצא במצב זקוף, ולאחר מכן השתמש במלקחיים כדי לדחוף בעדינות את השתל לחלוטין לתוך מכשיר היורה עד שכל הרקמה מאובטחת בתוך הקצה והנח את קצה היורה בתחנת הטעינה מתחת ל-BSS עד להשתלת התאים.

כדי לאפשר השתלה של התאים מתחת לרשתית, התקרב לרשתית העצבית עם מחט הזרקה תת-רשתית הניתנת להרחבה בגודל 41 המחוברת למזרק אטום לגז והזריק BSS תת-רשתית ליצירת היפרדות רשתית בלב. כאשר קוטר הדיסק הוא כ-2 עד 3 דיסקים, השתמש במספריים VR אנכיים בגודל 23 כדי להגדיל את הרטינוטומיה ל-1.5 מילימטר והשתמש בסכין חתך של 1.4 מילימטר כדי להאריך במדויק את הטרשת של השעה 10 לגישה של 20 מד. לאחר מכן, נסה להעביר בובת יורה בגודל 20 דרך הטרשת, והגדל את החתך לפי הצורך כדי להבטיח מעבר חלק אך צמוד של היורה הטעון.

לאחר מכן, העבירו את היורה הטעון דרך החתך הסקלרלי בעומק של 20 עד 24 מילימטרים של כספית לקצה הרטינוטומיה והזריקו את השתל תת-רשתית ממצב אפירטינלי. היורה צריך לעבור דרך הסקלרה במהירות בניסיון הראשון, אז הקפידו על כריתת סקלרוטומיה בגודל אופטימלי. לאחר מכן יש להשתיל את תאי ה-RPE תת-רשתית בזווית רדודה כדי למנוע לכידה של הקצה המוביל של השתל בקרום של ברוך.

כוונן את השתל כך שהוא יונח מתחת לרשתית הרחק באופן סביר מהרטינוטומיה. לאחר מכן, הסר את היציאה מהסקלרוטומיה והזריק 25 מיקרוליטר טריאמצינולון דרך יציאת הנברשת. בעזרת תפרים 7-0, סגור את הטרשת בשעה 2 ו-10 ובדוק אם יש דליפה.

הסר את צינורית העירוי וסגור מיד את הטרשת האחרונה עם תפר הוויקריל 7-0 שהונח מראש. בעזרת מחט בגודל 30, הזריק BSS כדי להתאים את הלחץ התוך עיני לפי הצורך, תוך כדי מישוש. לבסוף, תפר את הלחמית עם 7-0 ויקריל והסר את המשי הפרופטוזי, תוך הקפדה על הימנעות ממקלעת הוורידים העמוקה.

להשתלה מתחת לרשתית יש שיעור הצלחה כירורגי של כ-60% כאשר מבוצעת כריתת זגוגית ליבה, העולה ליותר מ-75% כאשר מושרה היפרדות זגוגית אחורית. כאן, מוצגת תמונת השתקפות אינפרא אדום של אופטלמוסקופ לייזר סורק של אפיתל פיגמנט רשתית מתורבת על קרום פוליאסטר לאחר הליך לא מסובך, כאשר ניוון קולטני האור הנובע מהתגובה החיסונית מופיע כהילה סביב השתל. בתמונת טומוגרפיה קוהרנטית אופטית בתחום הספקטרלי המקביל, ניתן להבחין בדילול השכבה הגרעינית החיצונית כתגובה להשתלת ה-RPE, בעיקר ברשתית עם פס היפר-רפלקטיבי גלוי מעל השתל.

הרשתית העצבית הסמוכה לשתל, לעומת זאת, מציגה רצועות השתקפות כמעט נורמליות, מה שמרמז על מסירה א-טראומטית של השתל. כפי שנצפה על ידי צביעת H/E, הצטלקות תת-רשתית וניוון שכבת הגרעין החיצונית מתרחשים בארנבים מושתלים שאינם מדוכאי חיסון. נראה כי קרום הברוך מתחת לשתל נראה גם הוא רציף, כאשר הכוריוקפילריס מכיל כמה אריתרוציטים מפוזרים, מה שמאשר עוד יותר את היעדר הטראומה שנגרמה במהלך מתן השתל.

לאחר שליטה, ניתן להשלים טכניקה זו תוך שעה אחת אם לא נתקלים בסיבוכים. בזמן ניסיון הליך זה, חשוב לזכור ליצור בלבום רשתית ורטינוטומיה גדולים מספיק כדי להתאים לשתל. כמו כן, התערבות כירורגית מהירה יותר תניב בדרך כלל תוצאות טובות יותר.

לאחר הליך זה, ניתן להשתמש בשיטות אחרות כגון טומוגרפיה קוהרנטית אופטית או היסטולוגיה כדי לענות על שאלות נוספות, כגון הצלחת ההשתלה, תאימות ביולוגית תת-רשתית והישרדות התאים המושתלים. לאחר פיתוחה, טכניקה זו סללה את הדרך לחוקרים בתחומי הביולוגיה של תאי גזע וביו-חומרים לחקור אספקה תת-רשתית של נגזרות תאי גזע ו/או מצעי נשאים ביו-פונקציונליים למחלות רשתית, במיוחד RPE. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להיות בעל הבנה טובה כיצד לבצע ניתוח כריתת זגוגית והשתלת רשתית בארנבים.

אל תשכח שעבודה עם העדשה, הזגוגית והממשק התת-רשתית עלולה להיות מסוכנת ביותר וכי תמיד יש לנקוט באמצעי זהירות, כגון מיקום נכון של היד, הדמיה טובה, לחץ תוך עיני יציב בעת ביצוע הליך זה.