Name: בידוד ואפיון של ראש וצוואר קשקש Cell Carcinoma-אוכלוסיית מאפייני תאי גזע לאחר (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-05-11T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 28 s
Description: למד בידוד ואפיון של תאי גזע סרטניים מקווי תאים של קרצינומה סקוואמוסית בראש ובצוואר. השיטה משתמשת בזרימה ציטומטרית ובסמנים CD44/ALDH לזיהוי אוכלוסיות ספציפיות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו מודים ל-Thibault Andrieu ו-Sebastien Dussurgey מפלטפורמת Flow Cytometry של UFR BioSciences Gerland-Lyon-Sud (UMS3444/US8) על עצתם ועזרתם במהלך המיון שלנו. עבודה זו הושגה במסגרת המדעית של ETOILE ו-Labex-PRIMES (ANR-11LABX-0063).

<ol><li>Baumann, M., Krause, M., Hill, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exploring+the+role+of+cancer+stem+cells+in+radioresistance%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Exploring the role of cancer stem cells in radioresistance.</a> Nat Rev Cancer. 8 (7), 545-554 (2008).</li>
<li>Al-Hajj, M., Wicha, M. S., Benito-Hernandez, A., Morrison, S. J., Clarke, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prospective+identification+of+tumorigenic+breast+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">Prospective identification of tumorigenic breast cancer cells.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 100 (7), 3983-3988 (2003).</li>
<li>Singh, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+human+brain+tumour+initiating+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Identification of human brain tumour initiating cells.</a> Nature. 432 (7015), 396-401 (2004).</li>
<li>Collins, A. T., Berry, P. A., Hyde, C., Stower, M. J., Maitland, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prospective+identification+of+tumorigenic+prostate+cancer+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Prospective identification of tumorigenic prostate cancer stem cells.</a> Cancer Res. 65 (23), 10946-10951 (2005).</li>
<li>Eramo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+expansion+of+the+tumorigenic+lung+cancer+stem+cell+population%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Differ%22%5BJournal%5D)">Identification and expansion of the tumorigenic lung cancer stem cell population.</a> Cell Death Differ. 15 (3), 504-514 (2008).</li>
<li>Dalerba, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenotypic+characterization+of+human+colorectal+cancer+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">Phenotypic characterization of human colorectal cancer stem cells.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 104 (24), 10158-10163 (2007).</li>
<li>Hermann, P. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+populations+of+cancer+stem+cells+determine+tumor+growth+and+metastatic+activity+in+human+pancreatic+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Distinct populations of cancer stem cells determine tumor growth and metastatic activity in human pancreatic cancer.</a> Cell Stem Cell. 1 (3), 313-323 (2007).</li>
<li>Yang, Z. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Significance+of+CD90+cancer+stem+cells+in+human+liver+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Significance of CD90 cancer stem cells in human liver cancer.</a> Cancer Cell. 13 (2), 153-166 (2008).</li>
<li>Fang, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+tumorigenic+subpopulation+with+stem+cell+properties+in+melanomas%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">A tumorigenic subpopulation with stem cell properties in melanomas.</a> Cancer Res. 65 (20), 9328-9337 (2005).</li>
<li>Prince, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+a+subpopulation+of+cells+with+cancer+stem+cell+properties+in+head+and+neck+squamous+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">Identification of a subpopulation of cells with cancer stem cell properties in head and neck squamous cell carcinoma.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 104 (3), 973-978 (2007).</li>
<li>Clarke, M. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+stem+cells+--+Perspectives+on+current+status+and+future+directions%3A+AACR+Workshop+on+cancer+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Cancer stem cells -- Perspectives on current status and future directions: AACR Workshop on cancer stem cells.</a> Cancer Res. 66 (19), 9339-9344 (2006).</li>
<li>Soltanian, S., Matin, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+stem+cells+and+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Tumor+Biol%22%5BJournal%5D)">Cancer stem cells and cancer therapy.</a> Tumor Biol. 32 (3), 425-440 (2011).</li>
<li>Molyneux, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((BRCA1+basal-like+breast+cancers+originate+from+luminal+epithelial+progenitors+and+not+from+basal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">BRCA1 basal-like breast cancers originate from luminal epithelial progenitors and not from basal stem cells.</a> Cell Stem Cell. 7 (3), 403-417 (2010).</li>
<li>Vermeulen, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+cloning+of+colon+cancer+stem+cells+reveals+a+multi-lineage+differentiation+capacity%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">Single-cell cloning of colon cancer stem cells reveals a multi-lineage differentiation capacity.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 105 (36), 13427-13432 (2008).</li>
<li>Ratajczak, M. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+stem+cells+--+Normal+stem+cells+%27Jedi%27+that+went+over+to+the+%27dark+side.%27%5BTitle%5D)+AND+%22Folia+Histochem+Cytobiol%22%5BJournal%5D)">Cancer stem cells -- Normal stem cells 'Jedi' that went over to the 'dark side.'.</a> Folia Histochem Cytobiol. 43 (4), 175-181 (2005).</li>
<li>Bao, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glioma+stem+cells+promote+radioresistance+by+preferential+activation+of+the+DNA+damage+response%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Glioma stem cells promote radioresistance by preferential activation of the DNA damage response.</a> Nature. 444 (7120), 756-760 (2006).</li>
<li>Liu, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+gene+expression+and+chemoresistance+of+CD133%2B+cancer+stem+cells+in+glioblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cancer%22%5BJournal%5D)">Analysis of gene expression and chemoresistance of CD133+ cancer stem cells in glioblastoma.</a> Mol Cancer. 5, 67(2006).</li>
<li>Moncharmont, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+a+cornerstone+of+radiation+resistance%3A+Cancer+stem+cell%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Lett%22%5BJournal%5D)">Targeting a cornerstone of radiation resistance: Cancer stem cell.</a> Cancer Lett. 322 (2), 139-147 (2012).</li>
<li>Bertrand, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+Head+and+Neck+Cancer+Stem+Cells+to+Overcome+Resistance+to+Photon+and+Carbon+Ion+Radiation%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Rev%22%5BJournal%5D)">Targeting Head and Neck Cancer Stem Cells to Overcome Resistance to Photon and Carbon Ion Radiation.</a> Stem Cell Rev. 10 (1), 114-126 (2013).</li>
<li>Das, B., Tsuchida, R., Malkin, D., Koren, G., Baruchel, S., Yeger, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoxia+enhances+tumor+stemness+by+increasing+the+invasive+and+tumorigenic+side+population+fraction%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Hypoxia enhances tumor stemness by increasing the invasive and tumorigenic side population fraction.</a> Stem Cells. 26 (7), 1818-1830 (2008).</li>
<li>Diehn, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Association+of+reactive+oxygen+species+levels+and+radioresistance+in+cancer+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Association of reactive oxygen species levels and radioresistance in cancer stem cells.</a> Nature. 458 (7239), 780-783 (2009).</li>
<li>Chen, Z. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cancer+stem+cell+concept+in+progression+of+head+and+neck+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Oncol%22%5BJournal%5D)">The cancer stem cell concept in progression of head and neck cancer.</a> J Oncol. 2009, 894064(2009).</li>
<li>Zhang, P., Zhang, Y., Mao, L., Zhang, Z., Chen, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Side+population+in+oral+squamous+cell+carcinoma+possesses+tumor+stem+cell+phenotypes%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Lett%22%5BJournal%5D)">Side population in oral squamous cell carcinoma possesses tumor stem cell phenotypes.</a> Cancer Lett. 277 (2), 227-234 (2009).</li>
<li>Zhang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+subpopulation+of+CD133%28%2B%29+cancer+stem-like+cells+characterized+in+human+oral+squamous+cell+carcinoma+confer+resistance+to+chemotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Lett%22%5BJournal%5D)">A subpopulation of CD133(+) cancer stem-like cells characterized in human oral squamous cell carcinoma confer resistance to chemotherapy.</a> Cancer Lett. 289 (2), 151-160 (2010).</li>
<li>Sun, S., Wang, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Head+neck+squamous+cell+carcinoma+c-Met%E2%81%BA+cells+display+cancer+stem+cell+properties+and+are+responsible+for+cisplatin-resistance+and+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Cancer%22%5BJournal%5D)">Head neck squamous cell carcinoma c-Met⁺ cells display cancer stem cell properties and are responsible for cisplatin-resistance and metastasis.</a> Int J Cancer. 129 (10), 2337-2348 (2011).</li>
<li>Chen, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aldehyde+dehydrogenase+1+is+a+putative+marker+for+cancer+stem+cells+in+head+and+neck+squamous+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">Aldehyde dehydrogenase 1 is a putative marker for cancer stem cells in head and neck squamous cancer.</a> Biochem Biophys Res Commun. 385 (3), 307-313 (2009).</li>
<li>Lim, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+stem+cell+traits+in+squamospheres+derived+from+primary+head+and+neck+squamous+cell+carcinomas%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+Oncol%22%5BJournal%5D)">Cancer stem cell traits in squamospheres derived from primary head and neck squamous cell carcinomas.</a> Oral Oncol. 47 (2), 83-91 (2011).</li>
<li>Yu, Q., Stamenkovic, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+surface-localized+matrix+metalloproteinase-9+proteolytically+activates+TGF-beta+and+promotes+tumor+invasion+and+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">Cell surface-localized matrix metalloproteinase-9 proteolytically activates TGF-beta and promotes tumor invasion and angiogenesis.</a> Genes Dev. 14 (2), 163-176 (2000).</li>
<li>Krishnamurthy, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+cell-initiated+signaling+promotes+the+survival+and+self-renewal+of+cancer+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Endothelial cell-initiated signaling promotes the survival and self-renewal of cancer stem cells.</a> Cancer Res. 70 (23), 9969-9978 (2010).</li>
<li>Chikamatsu, K., Takahashi, G., Sakakura, K., Ferrone, S., Masuyama, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunoregulatory+properties+of+CD44%2B+cancer+stem-like+cells+in+squamous+cell+carcinoma+of+the+head+and+neck%5BTitle%5D)+AND+%22Head+Neck%22%5BJournal%5D)">Immunoregulatory properties of CD44+ cancer stem-like cells in squamous cell carcinoma of the head and neck.</a> Head Neck. 33 (2), 208-215 (2011).</li>
<li>Chen, Y. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cucurbitacin+I+suppressed+stem-like+property+and+enhanced+radiation-induced+apoptosis+in+head+and+neck+squamous+carcinoma--derived+CD44%28%2B%29ALDH1%28%2B%29+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cancer+Ther%22%5BJournal%5D)">Cucurbitacin I suppressed stem-like property and enhanced radiation-induced apoptosis in head and neck squamous carcinoma--derived CD44(+)ALDH1(+) cells.</a> Mol Cancer Ther. 9 (11), 2879-2892 (2010).</li>
<li>Clay, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-marker+identification+of+head+and+neck+squamous+cell+carcinoma+cancer+stem+cells+with+aldehyde+dehydrogenase%5BTitle%5D)+AND+%22Head+Neck%22%5BJournal%5D)">Single-marker identification of head and neck squamous cell carcinoma cancer stem cells with aldehyde dehydrogenase.</a> Head Neck. 32 (9), 1195-1201 (2010).</li>
<li>Meinelt, E., et al. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMeinelt%2C+E+%22Technical+Bulletin%3A+Standardizing+Application+Setup+Across+Multiple+Flow+Cytometers+Using+BD+FACSDiva+Version+6+Software%22">Technical Bulletin: Standardizing Application Setup Across Multiple Flow Cytometers Using BD FACSDiva Version 6 Software</a>. , BD Biosciences. (2012).</li>
<li>Zhou, L., Wei, X., Cheng, L., Tian, J., Jiang, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD133%2C+one+of+the+markers+of+cancer+stem+cells+in+Hep-2+cell+line%5BTitle%5D)+AND+%22Laryngoscope%22%5BJournal%5D)">CD133, one of the markers of cancer stem cells in Hep-2 cell line.</a> Laryngoscope. 117 (3), 455-460 (2007).</li>
<li>Fukusumi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD10+as+a+novel+marker+of+therapeutic+resistance+and+cancer+stem+cells+in+head+and+neck+squamous+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Cancer%22%5BJournal%5D)">CD10 as a novel marker of therapeutic resistance and cancer stem cells in head and neck squamous cell carcinoma.</a> Br J Cancer. 111 (3), 506-514 (2014).</li>
<li>Shen, C., Xiang, M., Nie, C., Hu, H., Ma, Y., Wu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD44+as+a+molecular+marker+to+screen+cancer+stem+cells+in+hypopharyngeal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Otolaryngol%22%5BJournal%5D)">CD44 as a molecular marker to screen cancer stem cells in hypopharyngeal cancer.</a> Acta Otolaryngol. 133 (11), 1219-1226 (2013).</li>
<li>Kanojia, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteomic+profiling+of+cancer+stem+cells+derived+from+primary+tumors+of+HER2%2FNeu+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Proteomics%22%5BJournal%5D)">Proteomic profiling of cancer stem cells derived from primary tumors of HER2/Neu transgenic mice.</a> Proteomics. 12 (22), 3407-3415 (2012).</li>
<li>Higgins, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+tumor+stem+cell+multipotency+correlates+with+nanog+expression+and+extent+of+passaging+in+human+glioblastoma+xenografts%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Brain tumor stem cell multipotency correlates with nanog expression and extent of passaging in human glioblastoma xenografts.</a> Oncotarget. 4 (5), 792-801 (2013).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

פרוטוקול זה מתאר שיטה אמינה עבור הבידוד המוצלח של CSCS משורת תאים ספציפית כי הוא ישים שורות תאי HNSCC אחרות. CSCS הראש והצוואר מבודד אז הם מתאימים לאפיון מולקולרי נוסף במבחנה ואימות פונקציונלית ידי השתלה בעכברי immunodeficient 19. עם זאת, כמה שינויים יכול להיבדק בהתאם האוכלוסייה בצד או באחוזים גבוהים גבוה / ALDH CD44 נוכח שורת תאים ההורית. לדוגמא, אם אחוז התאים באוכלוסיית הצד נמוך מדי בקו תא מסוים, מיון CD44 הגבוה / ALDH הג...

ראש תא צוואר קשקש קרצינומה (HNSCC) היא סרטן נפוץ ברחבי העולם ולמרות התקדמות טיפולים שוטפים, חולים עם מחלה מתקדמת בעלות פרוגנוזה נמוכה. שיעור ההישרדות של 5 שנים הכוללת של המטופל הוא סביב 30% למרות השילוב של גישות טיפוליות כוללים ניתוחים, כימותרפיה והקרנות-וממוקדים-טיפולים. מחקרים שנעשה לאחרונה מייחסים הישנות מקומיים גרורות מרוחקות להישרדות של תאי גזע דמוי סרטן (CSCS) בעקבות טיפולים נגד סרטן 1. יש עדויות מצטברות התומכים בקיומה של תאים מציגי המאפיינים תאי גזע (מעמד מובחן, יכולות התחדשות עצמית והבחנה, ופעילות טלומרז) בגידולים מוצקים שונים כולל סרטן השד, המוח, הערמונית, הריאות, המעי הגס, לבלב, כבד ועור 2- 10. עם זאת, המקור של CSCS עדיין לא ברור 11,12. הם עשויים לנבוע שינוי ממאיר של תאי גזע נורמליים 3,13 או dedifferentiation של תאים סרטניים כי לרכוש תכונות CSCS דמוי 14,15. לכן, הבנת מסלולים ייחודיים הנוגעים CSCS תספק תובנה אבחון מוקדם וטיפול של HNSCC עמיד. הוצע כי CSCS גם בעלי פנוטיפים עמיד כי להתחמק כימותרפיה והקרנות סטנדרטיות, וכתוצאה מכך ישנות גידול לעומת חלק הארי של תאים סרטניים 16-19 והם מקומיים לתוך היפוקסי נישות 20. גורמים רבים הוצעו על מנת להסביר התנגדויות אלה של CSCS, כגון נטיית קפאון, תיקון DNA משופר, מנגנוני בקרת מחזור התא למעלה מוסדר, ו רדיקלים חופשיים הדחה 21. יתר על כן, מספר מסלולים מולקולריים בשעור ניתן להפעיל באופן ספציפי CSCS 17. על מנת לשפר את הידע של CSCS עבור טיפולים במיקוד, אנו זקוקים שיטות אמינות לזיהוי והבידוד של CSCS, בשל ההטרוגניות של סמני תא הקשורות גזעסוגים שונים של סרטן 22. בשנת HNSCC, גזע דמוי תאי ייזום גידולים בודדו מגידולים מטופלים העיקרי ידי מיון תאי מבטאי סמני CSC שונים (כגון ביטוי מובילים בזרימת תרופת 23, גבוה CD44, CD133 הנמוך CD24 גבוה, c-Met + פנוטיפ 10,24, 25, או ALDH גבוהה פעילות 26) או לטפח גידול מטופל עיקרי ליצירת squamospheres בעלי תכונות CSC. אף על פי כן, מספר squamospheres פוחתת באופן דרמטי לאחר שני קטעים, ובכך לתת גודל מדגם קטן עבור אפיון נוסף שלומד 27. לכן, מבחני חוץ גופייה החל שורות תאים ומבוססות הוא פתרון קל יותר לתכנן את ניסויים על מנת לשפר את הידע של CSCS. מטרת מאמר זה היא להציע שיטה לבודד CSCS שורות תאים HNSCC באמצעות ניתוח תזרים cytometric multiparametricnd מיון התא. הביטוי של CD44 בקורלציה עם מספר מאפיינים CSCS כולל פעילות ALDH, אוכלוסייה סייד (SP) פנוטיפ, יכולת גיבוש אליפטית ו tumorigenicity משמשים לבודד ולאפיין תת-אוכלוסייה זו של CSCS. CD44, גליקופרוטאין על פני קרום התא, הוא מעורב הידבקות נדידת תאים. CD44 מבוטא בכמות גבוהה בגידולים רבים מוצק 28 CSCS, כולל במודלים סרטן הראש והצוואר 29-31. יתר על כן, תאים גבוהים CD44 יכולים ליצור in vivo גידול הטרוגנית בעוד תאים נמוכים CD44 יכול לא 10. את assay SP מבוסס על פוטנציאל ההפרש של תאים בזרימה לצבוע Hoechst 22 דרך קלטת מחייב ATP (ABC) המשפחה של חלבוני טרנספורטר overexpressed בתוך הממברנה CSC. assay זה כולל את השימוש של מעכבי טרנספורטר ABC כגון verapamil בדגימות שליטה. dehydrogenase אלדהיד (ALDH) הוא אנזים תאי כי הוא מעורב המרת רטינול RETחומצת inoic במהלך התמיינות תאי גזע מוקדם 25,26. תאים להפגין התנהגות תאי גזע דמוי ניכרת פעילות ALDH הגבוה HNSCC 26 ומספר מעט מאוד של תאים גבוהים ALDH מסוגלים ליצור גידולי in vivo 26,32. השילוב של סמנים ומאפיינים אלה שימש בהצלחה על ידי אל e t ברטרנד. ללמוד את ההתנגדות במבחנה ובחי של CSCS אלה פוטון יון פחמן קרינה 19. התוצאות שלהם הראו בבירור כי השילוב של סמנים ומאפייני תאים שונים הם בררני יותר ללימודים שימושיים על אוכלוסיות HNSCC CSCS מאשר גישות חד סמן.

<table><tbody><tr><td>סרום עגל עוברי Gold</td><td>GE Healthcare</td><td>A15-151</td><td></td></tr><tr><td>הידרוקורטיזון מסיס במים</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>H0396-100MG</td><td></td></tr><tr><td>פניצילין/סטרפטומיצין 100x</td><td>דומיניק דוטשר</td><td>L0022-100</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>גיבקו</td><td>61965-026</td><td></td></tr><tr><td>F12 תערובת אגוזים (1x) + GlutaMAX-I</td><td>Gibco</td><td>31765-027</td><td></td></tr><tr><td>EGF</td><td>Promega</td><td>G5021</td><td>יש להכין את התמיסה ממש לפני השימוש מכיוון שהיא מאוד לא יציבה</td></tr><tr><td>Heparin</td><td>StemcellTM Technologies</td><td>7980</td><td></td></tr><tr><td>B-27 תוסף (50x), מינוס ויטמין A</td><td>Gibco</td><td>12587-010</td><td></td></tr><tr><td>Hoechst 33342</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>14533</td><td>רעילות קורוזיבית וחריפה (דרך הפה, עור, שאיפה) קטגוריה 4</td></tr><tr><td>Verapamil hydrochloride</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>V-4629</td><td>רעילות חריפה (דרך הפה, העור, אינהלציה) קטגוריה 3</td></tr><tr><td>Propidium Iodide</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4170</td><td>רעילות חריפה (דרך הפה, העור, אינהלציה) קטגוריה 4</td></tr><tr><td>ALDEFLUOR Kit</td><td>תאי גזע</td><td>1700</td><td></td></tr><tr><td>CD44-APC, נוגדן אנושי</td><td>Miltenyi Biotech</td><td>130-095-177</td><td></td></tr><tr><td>IgG1-APC, נוגדן אנושי</td><td>Miltenyi Biotech</td><td>130-093-189</td><td></td></tr><tr><td>חלקיק קולטר Z1</td><td>בקמן קולטר</td><td>6605698</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ אופטי</td><td>אולימפוס&nbsp;</td>קו תאים <td>CKX31</td><td></td></tr><tr><td>SQ20B</td><td>מתנה מג'ון ליטל' s Laboratory-FaDu</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>קו תאים</td><td>ATCC</td><td>HTB-43</td><td></td></tr><tr><td>לוחות עיגון נמוכים</td><td>Thermo Fischer Scientific</td><td>145383</td><td></td></tr><tr><td>BD FACSDiva software v8.0.1</td><td>BD Biosciences</td><td>-</td><td></td></tr></tbody></table>

בידוד ואפיון של ראש וצוואר קשקש cell carcinoma-אוכלוסיית מאפייני תאי גזע לאחר

Isolation and Characterization of a Head and Neck Squamous Cell Carcinoma Subpopulation Having Stem Cell Characteristics

למרות ההתקדמות בהבנת הראש קרצינומה תאים קשקשיים הצוואר (HNSCC) התקדמות, שיעור הישרדות של חמש שנים נותרה נמוכה בשל הישנות מקומית גרורות מרוחקות. השערה אחת להסביר הישנות זה היא הנוכחות של תאי גזע דמוי סרטן (CSCS) שמציגים chemo- מובנה וסיכון-התנגדות רדיו. על מנת לפתח אסטרטגיות טיפוליות חדשות, יש צורך יש דגמים ניסיוניים המאמתים את היעילות של טיפולים ממוקדים ולכן יש שיטות אמינות לזיהוי והבידוד של CSCS. לשם כך, אנו מציגים פרוטוקול לבידוד של CSCS שורות תאי HNSCC אדם מסתמך על השילוב של שני sortings תא הרצוף מבוצע על ידי תא מופעל קרינת מיון (FACS). האחת מבוססת על הנכס של CSCS כדי overexpress ATP-כריכה קלטת (ABC) חלבונים טרנספורטר ובכך לכלול, בין היתר, צבעים DNA חיוניים כגון Hoechst 33342. התאים מסודרים עם השיטה מזוהית בתור &quot;אוכלוסייה בצד&quot; (SP). כאשר תאי SP מהווים אחוז נמוך (&lt;5%) של תאים הוריים, שלב הולך וגדל הוא הכרחי על מנת להגדיל את מספרם לפני מיון התא השני. השלב הבא מאפשר את הבחירה של תאים שיש להם שני מאפיינים של תאי גזע HNSCC אחרים כלומר רמת ביטוי גבוהה של הסמן על פני קרום התא CD44 (CD44 גבוה) ואת יתר ביטוי של דהידרוגנז אלדהיד (ALDH גבוהה). מאז שימוש סמן יחיד יש מגבלות רבות ואת חסרונות עבור הבידוד של CSCS, השילוב של SP, CD44 וסמני ALDH יספקו כלי שימושי כדי לבודד CSCS עבור מבחני אנליטית נוספים ופונקציונליים הדורשים תאי קיימא. המאפיינים דמוי גזע של CSCS שקיבל תוקף ולבסוף במבחנה כתוצאה מהיווצרותם של tumorispheres ואת הבעת-קטנין β.

בידודו של CSCS שורות תאי HNSCC היה כרוך בשני מיון רצוף בגלל האחוז הנמוך מאוד של CSCS בקו התא ההורי. המיון הראשון התבסס על היכולת של CSCS להוציא לצבוע Hoechst בשל מובילים בזרימת תרופה. זה הביא רכישת 1-5% מכלל האוכלוסייה תא הכולל מסודרים (איור 1). במהלך מיון תא Hoechst לצבוע שלילי, לבדוק את גודל פרור של תאים ממוינים מלהסתכל-A FSC מול SSC-עלילת נקודה (איור 1 א). לאחר מכן, להפלות כפילויות ושברי תאים באמצעות SSC-W לעומת...

הבנת תפקידם של תאים דמויי גזע סרטניים בהישנות גידול ועמידות לטיפולים הפכה לנושא בעל עניין רב בעשור האחרון. מאמר זה מתאר את הבידוד והאפיון של תת-אוכלוסייה של תאים דמויי גזע סרטניים מקווי תאי קרצינומה קשקשית בראש ובצוואר (HNSCC).

בידוד ואפיון של ראש וצוואר קשקש Cell Carcinoma-אוכלוסיית מאפייני תאי גזע לאחר

Despite advances in the understanding of head and neck squamous cell carcinomas (HNSCC) progression, the five-year survival rate remains low due to local ...

המטרה הכוללת של הליך זה היא לבודד תאי גזע סרטניים מקווי תאים של קרצינומה של תאי קשקשת של הראש והצוואר (HNSCC). שיטה זו עשויה לסייע במענה על שאלות מפתח בתחום הטיפול בסרטן בנוגע לאופן השימוש בכימותרפיה כדי להתגבר על עמידות רדיולוגית של הגידול. היתרון המרכזי של טכניקה זו הוא השימוש בשילוב של סמנים להשגת ספציפיות גבוהה של תאי גזע סרטניים מקווי תאים של HNSCC.את הפרוצדורה ידגימו פרסיליה בטיסטון-מונטני, הטכנאית שלנו, ומריון גילורמיני, דוקטורטורית מהמעבדה שלי. כדי לבחור אוכלוסייה צדדית של תאי סרטן דמויי תאי גבעול באמצעות בדיקת פליטת צבע Hoechst, סמנו תחילה מבחנה קונית אחת כ-Hoechst ומבחנה אחת כ-Hoechst ו-Verapamil. לאחר מכן, שטפו תרבית תאי HNSCC באמצעות PBS סטרילי, ולאחר מכן הוסיפו מיליליטר אחד של Trypsin EDTA.לאחר שלוש דקות ב-37 °C עצור את התגובה באמצעות מצע גידול תאים טרי וספור את התאים. דלל את התרבית ל-1 × 10⁷ תאים למילליטר והשלם עם מצע של שורת התאים ההורית. לאחר מכן, הוסף 100 µL למבחנה עם Hoechst ו-Verapamil ו-4 mL של תאים למבחנה עם Hoechst.בשלב הבא, ערבבבו בעדינות 10 µL של תמיסת Verapamil hydrochloride בריכוז 5 mM לתוך דגימת ה-Hoechst וה-Verapamil, ולאחר מכן הוסיפו 5 µL של Hoechst לכל 1×10⁶ תאים לשתי הַבּוּבּוֹת. לאחר מכן, כסו את הדגימות בנייר אלומיניום והניחו אותן בטמפרטורה של 37 °C. לאחר 90 דקות, עם ערבוב עדין בכל 15 דקות, סובבו את הבובות בצנטריפוגה והשעיקו מחדש את המשקעים ב-2 mL של PBS.לאחר סרכזפוגה, השביה מחדש את משקע ה-Hoechst וה-Verapamil ב-500 microliters של propidium iodide ב-PBS, ואת משקע ה-Hoechst ב-four milliliters מאותו תמיסה. כעת, סנן את הדגימות דרך מסנני תאים של 70-micron לתוך מבחנות FACS כדי להסיר צברים, והנח את הדגימות על קרח במיגון מאור. לאחר מכן, טען את דגימת ה-Hoechst לתוך הציטומטר הזורם ופתח את חלון ה-Global Worksheet בתוכנת הציטומטר הזורם.לחצו על Dot Plot כדי ליצור גרף ב-Global Worksheet ולחצו קליק ימני כדי לבחור את פרמטרי ה-forward scatter וה-side scatter. צרו Dot Plot של side scatter wide מול side scatter height באותו אופן, ולאחר מכן לחצו על polygon gate כדי ליצור אזור P1 בגרף השני לבחירת התאים הבודדים ולהבחנה בין הדובלטים. לאחר מכן, צרו Dot Plot של red Hoechst area מול blue Hoechst area ולחצו קליק ימני על התאים כדי להדגיש את אוכלוסיית P1.לאחר מכן, צור אזור P2 כדי לבחור את אוכלוסיית התאים הצדדית השלילית לצבע Hoechst, המופיעה כזרוע צדדית משמאל לאוכלוסיית התאים הראשית, ואסוף 10,000 אירועים מדגימת ה-Hoechst. כדי לאשר ששער P2 המייצג את האוכלוסייה הצדדית ממוקם נכון, אסוף גם 10,000 אירועים מדגימות ה-Hoechst וה-Verapamil. האוכלוסייה הצדדית אמורה להיעלם.לאחר מכן, מיין את אוכלוסיית הצד (side population) של תאים שליליים לצבע Hoechst לתוך מבחנה קונית של 15 מיליליטר המכילה מיליליטר אחד של מצע מלא לתאי דמויי תאי גזע סרטניים. בסיום המיון, סבב את התאים בצנטריפוגה והשב את משקע אוכלוסיית הצד במיליליטר אחד של מצע מלא רענן לתאי דמויי תאי גזע סרטניים. לאחר מכן, ספור את התאים והזרק אותם במספר המתאים לתוך בקבוק תרבית תאים חדש.כדי לבחור את תת-האוכלוסייה של CD44-high/ALDH-high מתוך תאי אוכלוסיית הצד (side population) הממוינים, סמנו תחילה שבעה מבחנות קוניות סטריליות בנפח 15 מיליליטר כפי שצוין. לאחר מכן, דללו את התאים הממוינים לריכוז של 1x10⁷ תאים למיליליטר במצע לתרבית תאי גזע, והעבירו מניות (aliquots) של 100 מיקרוליטר תאים למבחנות של CD44-APC ללא צבע ו-IGG1-APC, ו-4 מיליליטר תאים למבחנה של ALDH ו-CD44-APC, כאשר הכל מבוצע על קרח. סנטריפוגו את התאים ושחזרו (resuspend) את המשקעים של CD44-APC ללא צבע ו-IGG1-APC ב-100 מיקרוליטר של buffer 1 מתוך ערכת ALDEFLUOR.לאחר מכן, הוסיפו חמישה מיקרוליטרים של מעכב ה-ALDH, DEAB, למבחנות ALDH, ALDH and DEAB, ALDH DEAB and CD44-APC. השביו את התאים במבחנה ALDH and CD44-APC בארבעה מיליליטרים של reagent C המכיל ארבעה מיליליטרים של buffer one ו-20 מיקרוליטרים מהריאגנט מהערכה, והעבירו מיד 100 מיקרוליטרים מתאים אלה למבחנות ALDH, ALDH and DEAB, ו-ALDH DEAB and CD44-APC. לאחר מכן, הניחו את כל המבחנות במקלח מים בטמפרטורה של 37-degrees Celsius למשך 30 דקות תוך הגנה מאור, וערבבו את הדגימות לאחר 15 דקות באמצעות vortexing עדין.בסיום הדגירה, סובבו במערבל נפח (centrifuge) את כל הדגימות והשליכו את העל-מצנח (supernatants). לאחר מכן, הניחו את כל המבחנות על קרח והשביו (resuspend) את משקע ה-ALDH ו-CD44-APC בארבעה מיליליטרים של buffer A, ואת משקעי ה-CD44-APC, ה-ALDH DEAB וה-CD44-APC ב-100 microliters מאותו תמיסה. השביו את משקע ה-IGG1-APC ב-100 microliters של buffer B ואת מבחנות ה-ALDH ללא צביעה וה-ALDH and DEAB ב-100 microliters של buffer one.לאחר 10 דקות, סבבו שוב את כל הדגימות לצנטריפוגציה, ולאחר מכן בצעו שטיפה ב-1 milliliter של buffer one עבור כל הדגימות, למעט דגימת ה-ALDH ו-CD44-APC, אותה שוטפים ב-4 milliliters של buffer one. לאחר הצנטריפוגציה השנייה, השביו את כל המשקעים ב-1 milliliter של buffer one טרי, למעט דגימת ה-ALDH ו-CD44-APC, אותה משבים ב-4 milliliters של buffer one. כעת, העמיסו את מבחנת ה-ALDH ו-CD44-APC על הציטומטר הזרימתי וצרו תרשים פיזור (dot plot) של APC מול FITC כדי להדגים את האוכלוסייה שצבעה כפול.בשלב הבא, טענו את מבחנת ה-ALDH כדי ליצור שער (gate) עבור תאים בעלי ביטוי ALDH גבוה. התאים החיוביים אמורים להיעלם כאשר נטענת מבחנת ה-ALDH וה-DEAB. באותו גרף, צרו שער שני באמצעות מבחנות ה-CD44-APC וה-IGG1-APC כדי לבחור את התאים בעלי ביטוי CD44 גבוה.התאים החיוביים ייעלמו כאשר מבחנה ה-IGG1-APC תוטען. לאחר מכן, טענו את מבחנות ה-ALDH and CD44-APC ואת מבחנות ה-ALDH DEAB and CD44-APC כדי ליצור שער שלישי הכולל את התאים בעלי ביטוי גבוה של CD44 ו-ALDH (CD44-high/ALDH-high). השתמשו במבחנה עם צביעה כפולה של ALDH-CD44 כדי למקם את השער האחרון על התאים הכפוליים-חיוביים.לאחר מכן, מיין את התאים בעלי ביטוי גבוה של CD44/ALDH (CD44-high/ALDH-high) לתוך מבחנה קונית של 15 מיליליטר המכילה מיליליטר אחד של מצע גידול מלא לתאי סרטן דמויי תאי גזע, תוך איסוף התאים בעלי ביטוי נמוך של CD44/ALDH (CD44-low/ALDH-low) לתוך מיליליטר אחד של מצע גידול תאים מלא לפי הצורך. לאחר המיון השני, זרע את התאים בעלי ביטוי גבוה של CD44/ALDH (CD44-high/ALDH-high) לתוך בקבוק תרבית תאים מתאים עם מצע גידול מלא לתאי סרטן דמויי תאי גזע, והנח בתוך אינקובטור לתרבית תאים למשך 18 עד 24 שעות. כאשר התאים נצמדים לתחתית הבקבוק, החלף את מצע הגידול והחזר את הבקבוק לאינקובטור.כדי לאשש את הפוטנציאל הגידולי של תאי CD44-high/ALDH-high, בצעו טריפסינזציה לשכבה החד-שכבתית של תאי דמויי גזע סרטניים כפי שהודגם, כדי לקבל סספנזיה של תאים בודדים, והעבירו 1×10⁶ תאים למבחנה קונית של 15 מיליליטר. לאחר סבב של התאים במ centriuge, השעיו את המשקע במצע דל בסרום בתוספת recombinant human epidermal growth factor heparin ו-B27, והדגרימו את התאים בצלחת פטרי עם היצמדות נמוכה (low-anchorage) בתוך אינקובטור לתרביות תאים עד להופעת ספירות גידול (tumor spheres) שייראו במיקרוסקופיה אופטית. כאשר המיון מבוצע לראשונה על קו תאים חדש, יש לאשש את הפוטנציאל הגידולי של קו התאים, כפי שבא לידי ביטוי ביכולתו להגבש ספירות גידול במצע נטול סרום in vitro.יתרה מכך, בדיקת QPCR צריכה להראות ביטוי גבוה של beta-catenin ושל סמנים אחרים של תאים דמויי תאי גזע על ידי תאי CD44-high/ALDH-high. תאי CD44-high/ALDH-high צריכים להיות מסוגלים להוות גידולים in situ כאשר הם מוזרקים בכמויות נמוכות בהשוואה לתאי CD44-low/ALDH-low. לאחר רכישת מיומנות, כל תהליך מיון תאים צריך להסתיים תוך חמש שעות אם הם מבוצעים כראוי.בעת ביצוע פרוצדורה זו, חשוב לזכור להגן על הדגימות המסומנות בפלואורוכרום מחשיפה לאור ישיר. לאחר ביצוע פרוצדורה זו, ניתן לבצע שיטות אחרות, כגון בדיקות פלישה ונדידה (invasion migration assays), כדי לענות על שאלות נוספות בנוגע למעורבותם של תאי גזע סרטניים בתהליך הגריעות (metastatic process). לאחר פיתוחה, סללה טכניקה זו את הדרך עבור חוקרים בתחום הסרטן לחקור את מנגנוני הבריחה של הגידול בסרטן HNSCC.לאחר צפייה בסרטון זה, תהיה לכם הבנה טובה לגבי האופן שבו ניתן לבודד תאי גזע סרטניים מקווי תאים של HNSCC באמצעות אנליזה ציטומטרית זרימתית מרובת פרמטרים ומיון תאים. זכרו כי עבודה עם תאי גידול וחומרי DNA אינטרקלטיים עלולה להיות מסוכנת ביותר, ויש לנקוט תמיד באמצעי זהירות כגון לבישת חלוק לבנה וכפפות בעת ביצוע פרוצדורה זו.

isolation-characterization-head-neck-squamous-cell-carcinoma

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

מכשיר microfluidic מידור לחקר נדידת תאי גזע סרטני מתואר. פלטפורמה חדשנית זו יוצרת microenvironment סלולרי קיימא ומאפשרת הדמיה מיקרוסקופית של תנועת תאים חייה. מאוד ניעתי תאים סרטניים מבודדים ללמוד מנגנונים מולקולריים של חדירה אגרסיבית, שעלולים לגרום לטיפולים יעילים יותר בעתיד.

הערכה של נדידת תאי גזע סרטני באמצעות מכשירי microfluidic מידור והדמית תא חייה

בסרטון זה, אנו מתארים את הבידוד של תת-אוכלוסייה של תאים דמויי גזע סרטניים משורות תאי קרצינומה קשקשיים בראש ובצוואר באמצעות ממיין תאים המופעל על ידי פלואורסצנטיות או FACS. אוכלוסיית הצד המבודדת של תאים יכולה לשמש לניתוח נוסף במורד הזרם.

Cancer Side Population Discrimination Assay: שיטה לבידוד תאים סרטניים דמויי גזע באמצעות Hoechst Dye Efflux Assay

מאמר זה מתאר את ההכנה של רקמה המתקבלת מלנומה טרי לתרבויות העיקריות של תאים, וכיצד להסיר זיהומים של אריתרוציטים ופיברובלסטים מתאי הגידול. לבסוף, אנו מתארים כיצד...

תרבות מטופל נגזר סלולרי ובידוד של CD133<sup&gt; +</sup&gt; תאי גזע סרטני משוערים מלנומה

הבידוד של תאי גזע סרטני (CSCs) ישירות מרקמות אנושיות הוא הנדרש לאפיון הביולוגי שלהם. כתב יד זה מתאר מתודולוגיה לבידודה של CSCs ערמונית מרקמות אנושיות, תוך מתן טיפים על פתרון בעיות בצעדים קשים גם.

בידוד של תאי גזע סרטני מדגימות אדם סרטן הערמונית

מבחני מבחנה משמשים בדרך כלל לזיהוי תאי גזע סרטניים. כאן אנו משווים מבחני כדורים בודדים עם רב-תאים מבוססי תאים. הבדיקות המבוססות על תאים בודדים או תוספי מתיל צלולוז נותנים תוצאות מדויקות יותר בעוד שבדיקות מבוססות תאים מרובות תאים המבוצעות במדיום נוזלי יכולות להיות מושפעות מאוד מצפיפות התאים.

הערכה של מאפייני תא גזע בקרצינומה של תאי השחלות אדם באמצעות Multi ומבחני Spheres מבוסס תא בודדים

ניתן להרחיב תאי גזע של סרטן הלבלב (CSCs) במבחנה באמצעות טכניקת תרבית כדור בלתי תלויה בעיגון, המייצגת כלי רב עוצמה לחקר הביולוגיה של CSC ויכולה לשמש כצעד ראשון לפיתוח טיפולים חדשניים ממוקדי CSC. כאן ניתנת המתודולוגיה להרחבה, ניתוח ומיקוד של CSCs בלבלב.

לומד סרטן לבלב גזע מאפייני תא לפיתוח טיפול חדש אסטרטגיות

הנוכחות של תאי גזע סרטניים (CSCS) ב סרקומות עצם נקשר לאחרונה בפתוגנזה שלהם. במאמר זה, אנו מציגים את הבידוד של CSCS מתרבויות תא ראשוניים המתקבלות ביופסיות אדם של אוסטאוסרקומה קונבנציונלי (OS) באמצעות היכולת של CSCS לגדול בתנאי nonadherent.

הקמת סרטן גזע תא תרבויות מן האדם הקונבנציונלי אוסטאוסרקומה

אנו מתארים פרוטוקול מפורט לבידוד של תאים מתחילים הגידול מחולה סרקומה האדם נגזר xenografts תלי על ידי מיון מופעל על ידי קרינה פלואורסצנטית, באמצעות אנטיגן לוקיציט אנושי-1 (HLA-1) כסמן שלילי, ועל אימות נוסף האפיון של התאים האלה HLA-1-שלילי גידול מתחיל.

בידוד ואפיון של הגידול-ליזום תאים מחולה סרקומה-Xenografts נגזרים

כאן אנו מציגים שיטה ישימה לפיתוח מודל מאתר orthotopic של הראש והצוואר קרצינומה של תאים קשקשיים. גידולים מדגימים הרלוונטית קלינית תכונות histopathological של המחלה, לרבות נמק, בידול המסכן, גרורות קטרי הסתננות המערכת החיסונית. עכברים נושאות לפתח תסמינים הרלוונטית קלינית כולל בבליעה, הלסת הזחה של ירידה במשקל.

חיסון intramucosal של תאי קרצינומה של תאים קשקשיים עכברים עבור פרופיל החיסונית הגידול והערכת התגובה לטיפול

שימוש בתאי אפיתל הערמונית העיקרי האנושי, אנו מדווחים על שיטה ביוארינקר הרומן החופשי של אפיון פונקציונלי של תאים גזע דמוי על ידי שמירת תווית מבוסס ספרואיד מבוססי. פרוטוקול צעד אחר צעד מתואר עבור BrdU, CFSE, או הרחוק האדום תיוג תא 2D; היווצרות ספרואיד תלת מימדי; זיהוי תאים מתמך בתוויות באמצעות כימיה חיסונית מדומה; ובידוד על ידי FACS.

בידוד של תאים כמו גזע מתרבויות תלת ממדיות ספרואיד

פרוטוקול ניסיוני זה מתאר את הבידוד של BCSCs מדגימות תאים ורקמות של סרטן השד, כמו גם את מבחני in vitro ו - in vivo שניתן להשתמש בהם כדי להעריך את הפנוטיפ והתפקוד של BCSC.

בידוד והערכה תפקודית של תאי גזע מסרטן השד האנושי מדגימות תאים ורקמות

למד בידוד ואפיון של תאי גזע סרטניים מקווי תאים של קרצינומה סקוואמוסית בראש ובצוואר. השיטה משתמשת בזרימה ציטומטרית ובסמנים CD44/ALDH לזיהוי אוכלוסיות ספציפיות.

בידוד ואפיון של ראש וצוואר קשקש Cell Carcinoma-אוכלוסיית מאפייני תאי גזע לאחר

גלה סרטונים נוספים