Name: Murine הערמונית מיקרו לנתיחה סירוס כירורגי (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-05-11T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 49 s
Description: למד ניתוח מיקרו של הערמונית וסירוס כירורגי בעכברים לחקר סרטן הערמונית ותנאים הורמונליים. שיטה זו מאפשרת לחקור השפעות של חסר הורמונים על קרצינוגנזה בבלוטות ערמונית בודדות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

חלק מהדמויות בכתב היד הזה סופק בנדיבות על ידי המעבדה של בארט O. וויליאמס. המחברים נתמכים על ידי המכון הלאומי לסרטן מעניקה U54CA143803, CA163124, CA093900, AND CA143055.

פרוטוקול זה תואם והוא פועל בהתאם להנחיות שנקבעו על ידי טיפול בבעלי חיים מוסדיים באוניברסיטת ג&#39;ונס הופקינס ועדת שימוש. 1. מיקרו לנתח עכבר הערמונית <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את העכבר על ידי מחנק פחמן דו חמצני או שיטה שאושרה חלופית בהתאם להנחיות לטיפול ולשימוש חיה מוסדיות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הצמד את העכבר במצב שכיבה על קרש החיתוך על ידי הצבת סיכה דרך כל אחד מארבעת הכפות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רסס את הבטן עם אתנול 70%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מתח את העור של הבטן התחתונה עם מלקחיים, ולהשתמש מספריים לחתוך את העור הצפק כ 1 סנטימטר קדמי פתיחת הפין, לא זהירה לחתוך כל איברים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחתוך את העור הצפק מן הבטן התחתונה, את שני הצדדים של הבטן אל כלוב הצלעות, חושף חלל הצפק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זהה את שלפוחית ​​השתן בדרכי השתן ואברי המין, ולחשוף אותם על ידי הזזת איברים שומן בעדינות אחרים הצידה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Usiמלקחי ng, לאחוז את זרע הזרע בבסיס ליד השופכה, ולקרוע אותו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור עם זרע זרע ההפך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת מלקחיים, בזהירות אחיזה שלפוחית ​​השתן למשוך אותו למעלה, תוך שימוש במספריים זמנית לחתוך דרך השופכה מתחת לשלפוחית ​​השתן והערמונית הגחון (כ 1 ס&quot;מ מתחת לבסיס של שלפוחית ​​השתן). הערה: כפי השלפוחית ​​עצרה, בדרכי השתן ואברי המין כולו (שלפוחית ​​המכילה, קטע של השופכה, כל האונות הערמונית, שלפוחית ​​הזרע) יגיע עם זה. ייתכנו כמה התנגדות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את מערכת ואברי המין (UGT) לתוך צלחת 60-100 מ&quot;מ פטרי המכילה כ מלוחים 5-10 מ&quot;ל פוספט שנאגרו (PBS). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע את החלק הנותר של הפרוטוקול תחת מיקרוסקופ לנתיחה. השתמש בשני מלקחיים בסדר, אחד בכל יד. החזק מלקחיים &quot;כמו עיפרון&quot; ולנוח אמות הידיים על גבי ספסל כדי לייצב אותן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש במלקחיים בסדר למקם את UGT כך השלפוחיתעל גבי, השופכה הוא הצביע למטה, ואת שלפוחית ​​הזרע ממוקמת משני צדי השלפוחית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> גריפ השופכה עם מלקחיים ובזהירות למשוך משם שומן עם המלקחיים האחרים מבלי לקרוע את כל רקמת ערמונית. הערה: השומן יופיע קרוב &quot;מבריקים&quot; אל הרקמה שמסביב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר שומן מוסר, להשתמש במלקחיים כדי לקרוע את רקמת חיבור בין שתי אונות הגחון של הערמונית ולהפריד אותם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להסיר אחת אונות הגחון, השתמש באחת מלקחי אחיזת אונת גחון אחת ליד הקצה, ולהשתמש המלקחיים האחרים לאחוז שאונה בבסיס קרוב השופכה ככל האפשר. ועדיין לופת את הבסיס של האונה, להשתמש במלקחיים אחרים לאחוז את השופכה. משוך את האונה מן השופכה עם חברה, תנועה חלקה. ודא שאין רקמות הערמונית נשארת מחוברת השופכה. מניחים את האונה לתוך המדיום המתאים, בהתאם לשלב הניסוי הבא. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לתקן פרפין להטביע את היםמספיק לניתוח היסטולוגית, למקם את האונה ב 10% פורמלין נייטרלי שנאגרו (NBF) 8. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את האונה מקפיא בינוני, כגון אוקטובר, עבור cryopreservation ו חתך 8. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את האונה ב PBS קר בידוד תא יחיד לתרבות או cytometry זרימה 9. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלב 1.15 עם אונת הגחון האחרת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להסיר אחת האונות הקדמיות, להשתמש במלקחיים כדי למשוך את האונה בעדינות מן שלפוחית ​​הזרע, כדי לוודא שלא לנקב את שלפוחית ​​הזרע. לאחר באונה היא עצמאית של שלפוחית ​​הזרע, להסיר אותו באותה צורה כמו האונה הגחון בשלב 1.15. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלב 1.17 עם האונה הקדמית האחרת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תהפוך בדרכי השתן ואברי המין הנותר לאורך כך ערמונית הגב גלויה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להסיר אחת האונות דורסולטרלי, להשתמש במלקחיים כדי לקרוע את רקמת החיבור בין שתי האונות דורסולטרלי וגם רקמת החיבור בין האונות tהוא אחורי באזור של שלפוחית ​​הזרע. הסר את האונה באופן דומה כמו אונת הגחון בשלב 1.15. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלב 1.20 עם האונה דורסולטרלי האחרת. </li></ol> 2. סירוס כירורגי הערה: זהו ניתוח הישרדות, כך asepsis, הרדמה, וניהול כאב חשוב להשלמה האתית המוצלחת של פרוטוקול זה. מלאו אחר כל הנחיות לטיפול ולשימוש חיה המוסדיות. השתמש במקור חום חיצוני, כגון שמיכת מים הסירקולציה מחודשת, במהלך ההליך הכירורגי כדי למנוע היפותרמיה. אל תשאירו חיה ללא השגחה עד שהוא שב להכרתו מספיק כדי לשמור שכיבה sternal. אל תחזרו בעל חיים אשר עבר ניתוח לחברה של בעלי חיים אחרים עד התאושש לחלוטין. חיטוי את כל מכשירי הניתוח לפני השימוש בניתוח. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> על משטח נקי, סטרילי להרדים את העכבר באמצעות אמצעים מתאימים (למשל 2% isoflurane בשאיפה) ומקם את מ &#39;Ouse בעמדה פרקדן. הערה: שיטות הרדמה חלופיות, כגון קטמין, עשויות לשמש גם, בהתאם לפרוטוקול שאושר החיה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדוק את הרפלקסים של העכבר על ידי צובט את הבהונות. אם העכבר אינו מגיב, המשך לשלב הבא. אם זה מגיב, לחכות 1-3 דקות ולבדוק שוב. לגלח את אזור הניתוח עם סכין גילוח חשמלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בסביבה נקיה מחיידקים, להכין את הבטן של העכבר באמצעות סקראבס לסירוגין של 70% אתנול ו יוד או נהלים מומלצים על ידי צוות הווטרינרים המוסדי או IACUC. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות אזמל סטרילי, לעשות חתך אנכי 1 ס&quot;מ דרך העור קו האמצע של הבטן התחתונה, כ -1.5 ס&quot;מ קדמית הפין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעשות חתך קטן (&lt;1 ס&quot;מ) דרך הצפק, נזהרים שלא לחתוך כל האיברים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת מלקחיים סטריליות, אחיזה קצה חתך של הצפק והרם אותו בעדינות כדי להיות מסוגל לראות את חלל הצפק מתחת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש אחר מלקחיים סטריליות, להגיע אל הדואר הצפק חלל אחיזה או כרית שמאלה או ימינה שומן האשכים, לרוחב לשלפוחית ​​השתן. משוך את כרית השומן דרך הפתח הצפק והעור עד testis יוצא גם כן. היזהר שלא לפגוע בכל רקמות אחרות או איברים במהלך שלב זה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות עט כווייה, בקע את כרית השומן כי הוא מחזיק לאשכים. חותך לאט דרך עורק האשכים עם ההערה עט כווייה: אם עורק האשכים הוא חתך מהר מדי, ייתכנו מדי דימום והעכבר עשוי להיות מורדם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר פנקס העורק שומן נחתכים, להסיר את כרית testis ושומן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלבי 2.6-2.9 עם האשך האחר. הערה: שיטה חלופית להסרת האשכים היא בניתוח ולקשור את העורק האשכים, ואחריו חיתוך כלי במספריים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לתפור את הצפק סגור עם תפר נספג. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העור סיכות סגור עם קליפים הפצע כירורגית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נהל משכך כאבים לטיפול בכאב, ומקוםהעכבר בכלוב נקי על כלוב חם למשך 5-10 דקות. צג את העכבר על סימנים של כאב או דימום. </li></ol>

<ol><li>Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+statistics%5BTitle%5D)+AND+%22CA+Cancer+J+Clin%22%5BJournal%5D)">Cancer statistics.</a> CA Cancer J Clin. 65 (1), 5-29 (2015).</li>
<li>Roehrborn, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathology+of+benign+prostatic+hyperplasia%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Impot+Res%22%5BJournal%5D)">Pathology of benign prostatic hyperplasia.</a> Int J Impot Res. 20 (suppl 3), 11-18 (2008).</li>
<li>Valkenburg, K. C., Williams, B. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Prostate+Cancer%22%5BJournal%5D)">Mouse models of prostate cancer.</a> Prostate Cancer. , 895238(2011).</li>
<li>Shappell, S. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prostate+pathology+of+genetically+engineered+mice%3A+definitions+and+classification.+The+consensus+report+from+the+Bar+Harbor+meeting+of+the+Mouse+Models+of+Human+Cancer+Consortium+Prostate+Pathology+Committee%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Prostate pathology of genetically engineered mice: definitions and classification. The consensus report from the Bar Harbor meeting of the Mouse Models of Human Cancer Consortium Prostate Pathology Committee.</a> Cancer Res. 64 (6), 2270-2305 (2004).</li>
<li>Valkenburg, K. C., Pienta, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug+discovery+in+prostate+cancer+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opin+Drug+Discov%22%5BJournal%5D)">Drug discovery in prostate cancer mouse models.</a> Expert Opin Drug Discov. , 1-14 (2015).</li>
<li>El-Alfy, M., Pelletier, G., Hermo, L. S., Labrie, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unique+features+of+the+basal+cells+of+human+prostate+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Microsc+Res+Tech%22%5BJournal%5D)">Unique features of the basal cells of human prostate epithelium.</a> Microsc Res Tech. 51 (5), 436-446 (2000).</li>
<li>Prins, G. S., Huang, L., Birch, L., Pu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+estrogens+in+normal+and+abnormal+development+of+the+prostate+gland%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+N+Y+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">The role of estrogens in normal and abnormal development of the prostate gland.</a> Ann N Y Acad Sci. 1089, 1-13 (2006).</li>
<li>Valkenburg, K. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+Wnt%2Fbeta-catenin+signaling+in+a+subpopulation+of+murine+prostate+luminal+epithelial+cells+induces+high+grade+prostate+intraepithelial+neoplasia%5BTitle%5D)+AND+%22Prostate%22%5BJournal%5D)">Activation of Wnt/beta-catenin signaling in a subpopulation of murine prostate luminal epithelial cells induces high grade prostate intraepithelial neoplasia.</a> Prostate. 74 (15), 1506-1520 (2014).</li>
<li>Lukacs, R. U., Goldstein, A. S., Lawson, D. A., Cheng, D., Witte, O. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation%2C+cultivation+and+characterization+of+adult+murine+prostate+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Isolation, cultivation and characterization of adult murine prostate stem cells.</a> Nat Protoc. 5 (4), 702-713 (2010).</li>
<li>Michiel Sedelaar, J. P., Dalrymple, S. S., Isaacs, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Of+mice+and+men--warning%3A+intact+versus+castrated+adult+male+mice+as+xenograft+hosts+are+equivalent+to+hypogonadal+versus+abiraterone+treated+aging+human+males%2C+respectively%5BTitle%5D)+AND+%22Prostate%22%5BJournal%5D)">Of mice and men--warning: intact versus castrated adult male mice as xenograft hosts are equivalent to hypogonadal versus abiraterone treated aging human males, respectively.</a> Prostate. 73 (12), 1316-1325 (2013).</li>
<li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+luminal+epithelial+stem+cell+that+is+a+cell+of+origin+for+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A luminal epithelial stem cell that is a cell of origin for prostate cancer.</a> Nature. 461 (7263), 495-500 (2009).</li>
<li>Pascal, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((5alpha-Reductase+inhibition+coupled+with+short+off+cycles+increases+survival+in+the+LNCaP+xenograft+prostate+tumor+model+on+intermittent+androgen+deprivation+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Urol%22%5BJournal%5D)">5alpha-Reductase inhibition coupled with short off cycles increases survival in the LNCaP xenograft prostate tumor model on intermittent androgen deprivation therapy.</a> J Urol. 193 (4), 1388-1393 (2015).</li>
<li>Shen, M. M., Abate-Shen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+genetics+of+prostate+cancer%3A+new+prospects+for+old+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">Molecular genetics of prostate cancer: new prospects for old challenges.</a> Genes Dev. 24 (18), 1967-2000 (2010).</li>
</ol>

החוקרים מצהירים כי אין להם אינטרסים כלכליים מתחרים.

ערמונית דיסקציה מיקרו מאפשרת לניסויים ספציפיים באונה וניתוח של ערמונית העכבר (איור 1). במודלים של עכברים מהונדסים גנטית, פנוטיפים ניתן לראות אונה אחת כי לא ראיתי אצל אחרים. כמו כן, לניתוח היסטולוגית, פרוטוקול זה מבטיח כי הסכום המקסימאלי של רקמת ערמונית טהורה יכול להיות מחולק ומוכתם, ללא בדרכי שתן ואברי המין שנייה רקמות קיימו את החלק. לבסוף, עבור ניסויי תא בודד, פרוטוקול זה מאפשר בידוד של תאי ערמונית כמעט טהורים. ערכות העשרת תא אפיתל נוספות יכולות לטהר תאי ערמונית ...

הערמונית היא האתר השכיח ביותר של סרטן אצל גברים בארה&quot;ב. כמעט 220,000 גברים מדי שנה תאובחן עם סרטן הערמונית, וכ -27,000 גברים יחלו במחלה שלהם 1. לגברים יש סיכון 1 ב -7 שלמים של אבחנה של סרטן הערמונית בארה&quot;ב 1. היפרפלזיה הערמונית (BPH), הגדלה סרטני כתוצאה מהזדקנות של הערמונית, הוא גם מצב נפוץ, המשפיע יותר מ -80% מהגברים מעל גיל 80 2. ככזה, הערמונית היא מוקד למחקר רב. מודלים עכבר כבר בשימוש נרחב כדי לחקור מחלות של הערמונית 3. בסך הכל, ערמונית העכבר הוא נציג מעולה של בלוטת האדם 4, אבל יש קווי דמיון ושוני בין העכבר ואנטומיה ערמונית אדם והפיסיולוגיה 5. בשני המינים, הערמונית ממוקמת בבסיס שלפוחית ​​השתן, המקיפה את השופכה. בלוטת הערמונית האנושית היא lo יחידלהיות, התפצל לארבעה אזורים: stroma fibromuscular, היקפי מרכזי, מעבר, ואת הקדמי. לעומת זאת, ערמונית העכבר מורכבת משלוש אונות לזווג בנקודות שונות סביב השופכה: קדמי, גחון, ואת דורסולטרלי. ברמה התאית, ההבדל העיקרי הוא כי התאים הבזליים יחס תא לומינל ב האדם הוא כ 1: 1, אבל זה 1: 4 בעכברים 6. את stroma בעכברים הוא גם שונה בעכברים ביחס לבני אדם - יש בני אדם נרחב יותר שריר חלק, בעוד שכבת השריר היא הרבה מדלל ערמונית בעכברים. זיהוי הנכון, לנתיחה, והטיפול של ערמונית העכבר חיוני מחקר ערמונית עכבר. רמות הורמון דרסטי להשפיע על התפתחות הומאוסטזיס של בלוטת הערמונית בשני בני אדם ועכברים. בעוד אסטרוגן נראה לשחק תפקיד ערמונית פיתוח 7, ההורמון החשוב ביותר הערמונית הוא טסטוסטרון. טסטוסטרון הוא חיוני עבור פיתוח בלוטותתחזוקת ד. בעקבות או סירוס פיזי או כימי, כ 90% מכלל התאים לומינל ב apoptose הערמונית המבוגרת, ואת הבלוטה מתכווצים. אם טסטוסטרון הוא מחדש ליחיד בתנאי סירוס, הערמונית היא מסוגלת לחדש את עצמו עד אפס מקום מלא. טסטוסטרון גם נראה לנהוג סרטן ערמונית, ולכן טיפול להפחתת אנדרוגן הוא אסטרטגיה טיפולית נפוצה. עם זאת, סרטן הערמונית רב פתח עמידים להפחתה אנדרוגן. בנוסף, גברים שעברו טיפול להפחתת אנדרוגן לטיפול בסרטן הערמונית לעבור מחזורים של תנאים סורסו מחדש. בשנת העכבר, סירוס כירורגי, יחד עם התחדשות הורמונלית של הערמונית על ידי reintroducing טסטוסטרון, הוא כלי חשוב שבה ללמוד התנגדות סירוס ואת ההשפעות של אופניים טסטוסטרון על הערמונית. במאמר זה, נדונו ולהדגים את השיטות הנכונות שבאמצעותו locatדואר ומיקרו לנתח ערמונית העכבר, כמו גם כמנתח לסרס עכבר.

<table><tbody><tr><td>כלים כירורגיים</td><td>Roboz</td><td>שונים</td><td></td></tr><tr><td>פורמלדהיד</td><td>סיגמא</td><td>F8775</td><td></td></tr><tr><td>OCT בינוני</td><td>VWR</td><td>25608-930</td><td>יש להניח על קרח יבש להקפאה, ולאחסן בטמפרטורה של -80 מעלות; C</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Life Technologies</td><td>10010</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Johns Hopkins</td><td></td><td>זמין גם אצל ספקים מקוונים</td></tr><tr><td>עט Cautery</td><td>Medline</td><td>ESCT002</td><td></td></tr><tr><td>תפר משי</td><td>AD כירורגי</td><td>M-S330R19</td><td></td></tr><tr><td>קליפס פצע כירורגי</td><td>Roboz</td><td>RS-9265</td><td></td></tr></tbody></table>

murine הערמונית מיקרו לנתיחה סירוס כירורגי

Murine Prostate Micro-dissection and Surgical Castration

מודלים של עכברים נמצאים בשימוש נרחב לחקר סרטן הערמונית ומחלות אחרות. העכבר הוא מודל מצוין לחקר הערמונית ושימש כתחליף לתגליות בהתפתחות ומחלות הערמונית האנושית. מיקרו-דיסקציה של הערמונית מאפשרת מחקר עקבי של אנטומיה של הערמונית הספציפית לאונה, היסטולוגיה ומאפיינים תאיים בהיעדר זיהום של רקמות אחרות. טסטוסטרון משפיע על התפתחות הערמונית ומחלות. טיפול במניעת אנדרוגנים הוא טיפול נפוץ לחולי סרטן הערמונית, אך גידולי ערמונית רבים הופכים עמידים לסירוס. סירוס כירורגי של מודלים של עכברים מאפשר לחקור עמידות לסירוס והיבטים אחרים של הביולוגיה ההורמונלית על הערמונית. הליך זה יכול להיות משולב עם החדרה מחדש של טסטוסטרון, או התחדשות הורמונלית של הערמונית, שיטה רבת עוצמה לחקר שושלות תאי גזע בערמונית. יחד, מיקרו-דיסקציה של הערמונית וסירוס כירורגי פותחים שפע של הזדמנויות למחקר חזק ועקבי של התפתחות ומחלות הערמונית. כתב יד זה מתאר את הפרוטוקולים למיקרו-דיסקציה של הערמונית ולסירוס כירורגי בעכבר המעבדה.

כל שש אונות הערמונית הוסרו בעכבר באמצעות ערמונית מייקרו לנתיחה (איור 1). בדרכי השתן ואברי המין המלא (UGT) מורכב מכל האונות הערמונית, שלפוחית ​​השתן, שלפוחית ​​הזרע, ואת השופכה (איור 1 א). זרע הזרע מצרף את השופכה, אבל הוא מיותר עבור לנתיחת מייקרו ערמונית, ולכן יכול להיות מנותק לפני ההסרה של UGT ידי חיתוך השופכה (-1c איור 1b). בדרכי השתן ואברי המין תישארנה יחד פעם יוסרו (1D האיור) הב...

כתב יד זה מתאר את פרוטוקולי ערמונית מייקרו לנתיחה וסירוס כירורגית עכבר המעבדה. כמו כן, אנו מתארים תוצאות נציג המיוצר על ידי הפרוטוקולים הללו. לבסוף, אנו דנים ביתרונות וסילוק הפרוטוקולים הללו.

Murine הערמונית מיקרו לנתיחה סירוס כירורגי

Mouse models are used extensively to study prostate cancer and other diseases. The mouse is an excellent model with which to study the prostate and has ...

המטרה הכללית של פרוצדורות אלו היא לאפשר את חקר ערמונית הפרוסטטה, כמו גם תנאים הורמונליים משתנים בתוך העכבר. שיטה זו יכולה לסייע במתן מענה לשאלות מפתח בתחום של סרטן הפרוסטטה, כגון, מהן ההשפעות של מחסור הורמונלי על קרצינוגנזה של הפרוסטטה. היתרון המרכזי של טכניקה זו הוא שניתן לחקור את ההשפעות של תהליכים פתולוגיים ושינויים הורמונליים שונים בבלוטות פרוסטטה בודדות.התחילו בהצמדת עכבר ללוח נתיחה בעמדה גבנית (supine) באמצעות סיכות דרך כריות הרגליים של כל כף רגל, ורססו את הבטן ב-70% ethanol. לאחר מכן, החזיקו את עור הבטן התחתונה בעזרת פינצטה, והשתמשו במספריים כדי לחתוך את העור ואת הפריטונאום כסנטימטר אחד קדמה (anterior) מפתח הפין. המשיכו לחתוך את העור ואת הפריטונאום מהבטן התחתונה כלפי מעלה בשני צדי הבטן עד לכלוב הצלעות, כדי לחשוף את החלל הפריטונאלי.לאחר זיהוי מיקום השלפוחית והמערכת הש뇨-גניטלית, או UGT, הסיטו בעדינות את השומן ואיברים אחרים הצידה כדי לחשוף את רקמות השתן. לאחר מכן, בעזרת פינצטה, תפסו צינור הזרע (vas deferens) בבסיסו סמוך לשופחן וקרעו את הצינור. לאחר הסרת הצינור השני, השתמשו בפינצטה כדי להחזיק ולמשוך בזהירות את השלפוחית כלפי מעלה, ובמקביל השתמשו במספריים כדי לחתוך את השופחן מתחת לערמונית הגחונית (ventral prostate) ובמרחק של כסנטימטר אחד מתחת לבסיס השלפוחית.העבירו את ה-UGT שנאסף לצלוחית פטרי בקוטר 60 עד 100 מילימטר המכילה כ-5 עד 10 מיליליטר של PBS, והניחו את הצלוחית תחת מיקרוסקופ דיסקציה. לאחר מכן, החזיקו זוג פינצטות עדינות בכל יד, באופן שבו מחזיקים עיפרון, והניחו את האמות על גבי השולחן, משני צדי המיקרוסקופ, כדי לשמור על יציבותן. מנקו את ה-UGT בעזרת הפינצטות, כך שהשלפוחית פונה כלפי מעלה, השופכה פונה כלפי מטה, ושלפוחית הזרע ממוקמת משני צדי השלפוחית.אחזו בשופכה באמצעות פינצטה אחת, והשתמשו בפינצטה השנייה כדי להסיר בזהירות את השומן מבלי להסיר רקמה מהערמונית. לאחר הסרת כל השומן, קרעו את רקמת החיבור בין שתי האונות הוונטרליות של הערמונית כדי להפריד ביניהן. לאחר מכן, החזיקו את אחת האונות הוונטרליות קרוב לקצה באמצעות זוג פינצטות, ואחזו בבסיס האונה קרוב ככל האפשר לשופכה.כעת, העבירו את זוג הפינצטות השני כדי לקבע את השופחן תוך משיכת האונה הרחק מהכלי בתנועה חלקה ונחושה. ודאו ששום רקמה של ערמונית אינה נותרת מחוברת לשופחן. לאחר מכן, הניחו את האונה במדיום המתאים, בהתאם לשלב הניסויי הבא.לאחר בידוד האונה הוונטרלית השנייה באותו אופן, השתמשו בפינצטה כדי למשוך בעדינות את אחת האונות האנטרימיות הרחק משקיכי הזרע, תוך הקפדה לא לנקב את שקיקי הזרע. לאחר שהאונה מופרדת משקיקי הזרע, הסירו אותה באותו אופן כפי שהודגם כעת עבור האונה הוונטרלית. לאחר בידוד האונה האנטרימית השנייה, הפכו את ה-UGT שנותר, כך שהפרוסטטה הדורסלית תהיה גלויה, והשתמשו בפינצטה כדי לקרוע את רקמת החיבור בין שתי האונות הדורסליות הצדדיות ובין האונות לאזור האחורי של שקיקי הזרע.לאחר מכן, הסירו את האונות הצדיות-גביות הבודדות, כפי שהודגם כעת. לביצוע הסירוס, התחילו בהנחת עכבר שהורדם על משטח נקי וסטרילי בעמדת שכיבה על הגב (supine), ואשרו את רמת הסדציה המתאימה באמצעות צביטה בבהונות. אם העכבר אינו מגיב, השתמשו במכונת גילוח חשמלית כדי לגלח את אזור הניתוח ועקרו את הבטן.בשלב הבא, השתמשו במספריים כירורגיים סטריליים כדי לבצע חתך אנכי של סנטימטר אחד דרך העור בקו האמצע של הבטן התחתונה, כ-1.5 סנטימטרים קדמית לאיבר הלמין, ולאחריו חתך קטן יותר דרך הפריטונאום, תוך הקפדה שלא לפגוע באיברים פנימיים. באמצעות פינצטה סטרילית, הרימו בעדינות את קצה הפריטונאום החתוך כדי לחשוף את חלל הפריטונאום, והשתמשו בפינצטה סטרילית נוספת כדי למשוך החוצה את אחת מרפידות השומן של האשכים עד להופעת האשכים. לאחר מכן, השתמשו בעט קוּטר (cautery pen) כדי לחתוך באיטיות את רפידת השומן, תוך החזקת האשכים עד לניתוק עורק האשכים.אם העורק נחתך מהר מדי, כלי הדם עלול לדמם רבות, מה שיחייב ביצוע המתת חסקים של העכבר. אני ממליץ לחמם את עט הכוייה בפעימות, ולא לאפשר לו להתחמם יתר על המידה, ואז להזיז את המכשיר באיטיות דרך העורק כדי למנוע דימום מסיבי של בעל החיים. לאחר חיתוך כרית השומן והעורק, השליכו את האשכים וכרית השומן וחזרו על תהליך הסירוס עבור האשך השני.לאחר הסרת האשכים השני, סגרו את הפריתנאום באמצעות תפרי משי סטריליים, ואטמו את העור בעזרת סיכות סגירת פצעים כירורגיות. לאחר מכן, עמדו בטיפול באנלגזיה לניהול הכאב והניחו את העכבר בכלוב נקי, על מחמם כלובים, למשך 5 עד 10 דקות תחת השגחה, עד להחלמאתו המלאה. מערכת השתן והמין השלמה מורכבת מכל ששת אותבכי הפרוסטטה, שלפוחית השתן, מהשלפוחיות הזרעיות ומהשופכה.צינור הזרע (vas deferens) מחובר לשופחן, אך הוא אינו נחוץ למיקרו-דיסקציה של הערמונית ולכן ניתן להפרידו לפני הסרת ה-UGT. דרכי השתן והמין יישמרו שלמות לאחר הוצאתן מהבטן; הן מכוסות ברקע שומני שיש להסירה כדי להשיג גישה לאוניה של הערמונית. בניסוי מייצג זה, לאחר הסירוס נערכו שני מחזורים של רגנרציה הורמונלית, ורמות הטסטוסטרון בסרום נוטרו באמצעות ELISA.כפי שניתן היה לצפות, בתנאי סירוס, רמות הטסטוסטרון נעלמו למעשה. בנוכחות טמוקספן, מודולטור סלקטיבי של קולטני אסטרוגן, לא נצפתה הבדל משמעותי לעומת המצב ההורמונלי התקין. עם זאת, לאחר סירוס, ה reintroduced-טסטוסטרון גרם לעלייה חדה ברמות הטסטוסטרון בסרום.לאחר מיקרו-דיסקציה, אונוי הערמונית של עכברים שעברו סירוס קטנים משמעותית, בעוד שאלו של בעלי חיים שטופלו בטסטוסטרון חוזרים לגודלם המקורי. יתרה מכך, צביעת המטוקסילין ואוזין של רקמת הערמונית הקדמית בתנאים נורמליים, לאחר סירוס ובתנאי רגנרציה, חושפת הפחתה דרמטית בצמיחה רקמתית חסונה בחתכים של בעלי החיים שעברו סירוס. לאחר רכישת המיומנות, ניתן להשלים טכניקה זו תוך חמש דקות עבור כל עכבר, במידה והיא מבוצעת כראוי.בעת ביצוע הסירוס, חשוב לזכור לשמור על סטריליות מלאה ולהבטיח את השליטה בכאב המורגש על ידי העכבר. לאחר הסירוס, ניתן לבצע שיטות נוספות, כגון החזרת אנדרוגן, כדי לענות על שאלות נוספות בנוגע להשפעות הטסטוסטרון על גידולי הערמונית. לאחר פיתוחה, סללה טכניקה זו את הדרך עבור חוקרים בתחום סרטן הערמונית לחקור קרצינוגנזה, התפתחות ועמידות לסירוס בעכברים.

murine-prostate-micro-dissection-and-surgical-castration

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

בסרטון זה, אנו מתארים את הליך הנתיחה של מערכת האורגניטל או UGS ממודל עכבר זכר. UGS זה מנותח עוד ex vivo כדי לבודד את בלוטת הערמונית ולחקור את תפקידה בהתפתחות סרטן הערמונית.

חילוץ ערמונית ממערכת השתן של עכבר: טכניקה להפרדת בלוטת הערמונית מאיברי מערכת השתן ואיברי המין האחרים בעכבר זכר

בסרטון זה אנו מדגימים את ההליך למתן הזרקה תוך ערמונית של תאי סרטן הערמונית למודל עכבר. מודלים אורתוטופיים של מורין יכולים לשמש לחקר מקור המחלה והתגובה לטיפולים בסביבה לא פולשנית ורלוונטית קלינית.

הזרקה תוך-ערמונית של תאים סרטניים: טכניקה להעברת תאים סרטניים לביסוס מודל עכבר אורתוטופי לסרטן הערמונית

סרטון זה מתאר שיטה לעריכת גנים ספציפיים בתאי בלוטת הערמונית באמצעות מערכת העברה מבוססת אדנווירוס. הגישה מאפשרת שינוי אורתוטופי ומקומי של ביטוי גנים תוך שימוש בטכנולוגיית CRISPR לפיתוח מודלים עכבריים חדשניים לסרטן הערמונית.

מידול סרטן הערמונית במודלים של עכברים מהונדסים גנטית: טכניקת עריכת גנים מקומית בתיווך CRISPR/Cas9 בתאי האונה הקדמית של הערמונית בעכבר

מודל orthotopic זה של סרטן הערמונית אנושי מאפשר כימות של גודל גידול, תאים סרטניים במחזור, והיווצרות של גרורות שונות לריאות. ככל שתאים חייבים לברוח האיבר העיקרי, להזין את זרם הדם, ולהשתיל לאתר משניים, מודל זה ביעילות משחזר את התרחיש בבני אדם.

מודל Murine orthotopic של אדם סרטן ערמונית גרורה

סרטן הערמונית הוא הגורם השני בשכיחותו למקרי מוות הקשורים לסרטן בארצות הברית. מודל סרטן אורתוטופי מספק גישה שימושית להבנת הביולוגיה של סרטן הערמונית ולהערכת היעילות של משטרי טיפול. פרוטוקול זה מתאר את השלבים המפורטים הדרושים להקמת מודל עכבר אורתוטופי לסרטן הערמונית.

דגם Murine Orthotopic פרה-קליני של סרטן ערמונית האדם

המטרה של פרוטוקול זה היא להפגין אינטרה-הערמונית הזרקה של תאי סרטן הערמונית, עם סירוס עוקבות. Orthotopic מודלים קליניים של סירוס עמידים ו אנדרוגן תלויי סרטן הערמונית הם קריטיים כדי לחקור את המחלה בהקשר של microenvironment של הגידול הרלוונטית קלינית, מארח immunocompetent.

דגם Syngeneic Orthotopic זוהרים, פלורסנט מאתר של סירוס עמידים ו אנדרוגן תלויי סרטן הערמונית

רקמות מהונדסים בונה כליות לספק פתרון מצוקת איברים, השפעות מזיקות של דיאליזה. כאן, אנו מתארים את פרוטוקול מיקרו לנתח הכליות מאתר עבור בידוד של מקטעי מדולרי-cortico. מקטעים אלה מושתלים לתוך המבנים לגרדום ללא הסלולר, ויוצרים organoids כליות.

Microdissection של מקטעי רקמת הכליה העיקרי, התאגדות עם טכנולוגיית הרומן לבנות בפיגומים-חופשית

פרוטוקול זה מתאר שיטה שהוקם למסירה וירוס מאתר הערמונית. באמצעות טכנולוגיית CRISPR/Cas9, ביטוי גנים או Cre recombinase מסירה, הטכניקה מאפשרת שינוי orthotopic של ביטוי גנים, מיישם מודל העכבר חדשניים עבור סרטן הערמונית.

וירוס משלוח של מדריכים CRISPR הערמונית מאתר עבור שינוי גנטי

עכברים מהונדסים גנטית הם מודלים שימושי עבור חוקר סרטן הערמונית מנגנונים. כאן אנו מציגים פרוטוקול לזהות, לנתח אונות הערמונית ממערכת השתן העכבר, להבדיל אותם בהתבסס על היסטולוגיה, לבודד ושל תרבות את תאי הערמונית הראשית in vitro לקשרי כמו spheroids עבור ניתוחים במורד הזרם.

זיהוי ואפיון היסטולוגית, דיסקציה של האונות הערמונית עכבר במודלים תרבות חוץ גופית ספרואיד תלת-ממד

אנו מראים שיטה של נקרופסי וניתוח של מודלים של סרטן הערמונית העכבר, התמקדות בניתוח גידול בערמונית. פרוטוקול צעד אחר צעד עבור דור של גידול בבלוטת הערמונית העכבר מוצג גם.

הדור של אורגנואידים גידול מ מהונדסים גנטית עכבר מודלים של סרטן הערמונית

כתב יד זה מתאר דרך עקבית לבצע במהירות כריתת מכרסמים הישרדותית וכריתת שחלות.

Murine Orchiectomy ו Ovariectomy כדי להפחית את ייצור הורמוני המין

למד ניתוח מיקרו של הערמונית וסירוס כירורגי בעכברים לחקר סרטן הערמונית ותנאים הורמונליים. שיטה זו מאפשרת לחקור השפעות של חסר הורמונים על קרצינוגנזה בבלוטות ערמונית בודדות.

Murine הערמונית מיקרו לנתיחה סירוס כירורגי

גלה סרטונים נוספים